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丙型肝炎病毒NS5A蛋白的反式激活作用研究
0引言丙型肝炎病毒(HCV)是一种单股正链RNA病毒,编码一种多蛋白分子,在病毒和宿主细胞蛋白酶的共同裂解作用下,至少裂解为3种结构蛋白(C、E1和E2)和6种非结构蛋白(NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A和NS5B)[1,2].NS5 A是非结构蛋白的一种,哺乳动物细胞表达的NS5A蛋白以两种形式存在,分子量分别为56 kD和58 kD.HCV NS5A是HCV基因组编码的一种为重要的具有多种生物学活性的非结构蛋白质[3-5],是HCV基因组编码的一种具有反式激活作用等多种生物学活性的非结构蛋白质.其基因序列的变异,决定部分HCV病毒株对于IFN-α治疗的疗效应答.HCV NS5A蛋白还具有结合双链RNA激酶(PKR)的生物学活性,对于HCV感染的靶细胞的细胞周期与细胞凋亡的分子生物学调节机制密切相关[6].
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丁型肝炎肝组织Bcl-2/Bax、Bak表达与细胞凋亡表达
目的:探讨Bcl-2,Bax,Bak及肝细胞凋亡在丁型肝炎发病机制中的意义.方法:采用TUNEL技术和免疫组化单、双标记染色,检测77例丁肝患者肝组织中HDAg,Bcl-2,Bax和Bak表达,以及肝细胞凋亡表达.同时以HDV阴性的67例乙型肝炎患者作对照.结果:Bcl-2,Bax和Bak均以肝细胞质表达为主,HDAg以肝细胞核表达为主.HDAg,Bax和Bak与肝细胞凋亡表达及分布有相关性(t=27.89,P<0.0l,P<0.05 t=19.16,P<0.05 t=18.22),四成分在各型肝炎中的表达强度有显著性差别意义(P<0.05).结论:HDAg,Bax,Bak和肝细胞凋亡表达强度及阳性细胞分布均与肝组织炎症和病理损害程度相关,HDV感染可诱导肝细胞表达Bax和Bak,增强肝细胞凋亡.
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长春新碱诱导人胃癌耐药细胞表达P-糖蛋白由核因子-κB活化调控
目的:研究核因子-Kappa B(NF-κB)在胃癌长春新碱耐药细胞中的活化情况,及其对细胞膜P-糖蛋白(P-gp)表达的调控作用.方法:以胃癌细胞SGC7901及其长春新碱(VCR)耐药株SGC7901/VCR为研究对象.采用凝胶电泳迁移率分析检测NF-κB DNA结合活性,细胞-ELISA法检测细胞内IκB-α蛋白和细胞膜P-糖蛋白(P-gp)的表达,免疫细胞化学法观测细胞内P65核转位.结果:SGC7901/VCR耐药细胞中NF-kB的基础活性比敏感细胞高1.4倍.不同浓度VCR(5,10,20,50 μg/L)均可引起耐药细胞NF-κB DNA结合活性增强、Iκ3-α蛋白表达下降和P-gp表达增强,而亲本敏感细胞产生的上述效应均不及耐药细胞明显;SGC7901/VCR耐药细胞中,NF-κB活性与P-gp的表达呈正相关(r=0.977,P<0.01),且NF-κB活化的同时伴有P65核转位.NF-κB抑制剂MG-132可抑制VCR诱导的NF-κB活化及IкB-α降解,同时还能抑制P-gp高表达.结论:胃癌长春新碱耐药细胞中NF-кB活性增强,可能参与调控VCR诱导的细胞膜P-gp高表达.
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大肠腺癌组织leptin受体的表达意义
目的:研究leptin受体在人大肠癌细胞系及大肠腺癌组织中的表达,探讨与肿瘤血管生成、细胞增生之间的关系.方法:免疫组织化学方法+图像分析检测leptin受体,CD34及Ki67的表达,并计算肿瘤微血管密度及细胞增生指数.结果:leptin受体在SW480,HT29细胞以及大肠癌组织均有表达,大肠腺癌组织的平均染色吸光度比正常大肠组织高(0.153±0.011 vs 0.115±0.071,P<0.05),与Ki67指数呈正相关(r=0.388,P<0.05);血管内皮细胞表达leptin受体的大肠腺癌,其MVD较高(45.100±10.000 vs37.400±10.200,P<0.05),二者之间正相关(r=0.569,P<0.05);大肠腺癌MVD、Ki67指数比正常组织高(41.500±10.700 vs 31.300±11.100,P<0.01;0.458±0.108 vs0.312±0.097,P<0.01);leptin受体的表达与大肠腺癌临床病理参数之间未见相关.结论:leptin与大肠腺癌上的leptin受体结合后,在促进肿瘤细胞增生及肿瘤组织的血管增生方面具有一定的作用.
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小鼠胰腺星状细胞TLR-9的表达及意义
近年来研究发现,胰腺纤维化及胰腺癌耐药与胰腺星状细胞(PSCs)有关,具体机制尚不清楚[1-3].有文献报道,肝星状细胞表达TLR-9,并通过TLR-9介导肝纤维化[4].
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SiSo细胞表达的受体结合型癌抗原基因与胰腺癌
SiSo细胞系表达的受体结合型癌抗原(receptor-binding cancer antigen expressed on siso cells,RCAS1)可出现在多种不同类型肿瘤细胞表面,与肿瘤的分化、侵袭和转移有关,并提示预后不良.本文就RCAS1与胰腺癌的关系作一综述.
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高脂血症人群血清瘦素水平与胰岛素敏感性的相关性分析
瘦素(Lep)是由肥胖基因编码、由脂肪细胞表达的蛋白激素,主要生理功能是调节脂肪沉积.有文献报道大多数成年人群中存在胰岛素抵抗(IR).本研究旨在探索Lep是否与和肥胖密切相关的高脂血症和IR相关.
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氯沙坦对转化生长因子β受体在糖尿病鼠血管平滑肌细胞表达的影响
转化生长因子β(TGF-β)不仅促进细胞增殖、肥大,更重要的是促进细胞外基质(ECM)的积聚和成分改变,这些是糖尿病血管病变的主要病理特征.TGF-β的作用由特异性受体(TβR) 介导[1].有研究证实,血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)受体AT1拮抗剂氯沙坦可使糖尿病鼠微血管基膜增厚减轻、间质胶原减少,对其确切的作用机制报道很少[2].为此,我们用糖尿病鼠模型观察了氯沙坦对TβR和纤连蛋白(FN)mRNA表达的影响,以探讨其防治糖尿病血管病变的作用机理.
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急性冠状动脉综合征患者外周血树突状细胞亚型漂移的研究
目的:本研究通过检测急性冠脉综合征(ACS)患者外周血DC亚型髓系DC(MDC)和淋巴系DC(LDC)的细胞表达CD11C和CD123,采用双抗体夹心法测定炎性细胞因子 TNF-a、IL-12、IL-6,探讨ACS患者外周血中DC亚型漂移与疾病的进展关系。
方法:免疫荧光三标记流式细胞术检测急性冠脉综合征(ACS)患者外周血树突状细胞MDC和PDC的细胞表达CD11c和CD123,分析DC亚型比例和数量的变化,采用双抗体夹心法测定炎性细胞因子肿瘤坏死因子(TNF-a)、白介素-12(IL-12)、白介素-6(IL-6),检验血清超敏C-反应蛋白(hs-CRP)、血清同型半胱氨酸(Hcy)、多普勒高频彩超测定颈内膜中层厚度(IMT),并分析DC亚型比例和数量与TNF-a、IL-12、IL-6、hs-CRP、Hcy、IMT的相关性,从而探讨ACS患者外周血中DC亚型漂移与疾病的进展关系。 -
血管紧张素Ⅱ促进升主动脉瘤主动脉平滑肌细胞表达基质金属蛋白酶2增加
目的:一些研究报道证实胸主动脉瘤患者的升主动脉瘤壁中基质金属蛋白酶(MMP-2)表达和活性增高,然而触发MMP-2活性增强的分子和细胞学机制并不清楚。因此,我们将去探讨血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)是否参与主动脉平滑肌细胞(SMCs)MMP-2表达上调及机制,这对胸主动脉瘤发病机制的揭示具有一定的作用。
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乳酸菌表达的白细胞介素12对支气管哮喘小鼠的免疫调节
Th1/Th2细胞比例失衡是哮喘发病机制之一.白细胞介素12(IL-12)通过结合IL-12受体,提高γ干扰素(IFN-γ)含量并成为提高Th1细胞分泌的主要因素[1];Ban等[2]将IL-12和抗IL-4抗体用于哮喘小鼠,降低体内IL-4水平,调低Th2细胞表达.我们的实验通过观察乳酸菌表达的IL-12用于哮喘小鼠,观察IL-4及IFN-γ表达,为其在哮喘治疗中的应用探索新途径.
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烟草烟雾暴露对小鼠肺部CD4+白细胞介素-17+T细胞表达的影响
COPD是一种进行性、不完全可逆性气流受限疾病,而吸烟是重要的危险因素[1].戒烟是目前证明能延缓COPD患者肺功能进行性下降的有效措施之一[ 2],但其作用机制不明.近年来的研究结果表明,COPD可能是一种由吸烟诱发T细胞参与的炎症反应和自身免疫性疾病[3];特异性分泌IL-17的CD4+ Th细胞(Th17细胞)、表达特异性转录因子维甲酸相关孤独受体(retinoid-related orphan nuclear receptor,RORγt)和STAT3转录因子,主要分泌IL-17、IL-21和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)等炎症因子,具有强大的促炎症作用[4-5],RORγt在一定程度上可以反映Th17细胞的水平及功能活性.
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趋化素样因子1在支气管肺损伤与重建中的作用
近,北京大学医学部马大龙教授及韩文玲博士利用反向生物学途径,创建了一种发现新细胞因子基因的方法:即根据人髓性白血病U937细胞系在有丝分裂原植物血凝素(PHA)刺激下能够产生多种细胞因子以及白细胞介素10(IL-10)能够广泛抑制细胞因子合成的生物学原理,利用抑制性减数杂交(SSH)技术,查找未被报道并受IL-10抑制的U937细胞表达的基因,结果成功地发现并克隆出一个新的细胞因子基因--趋化素样因子1(CKLF-1),获中国及国际专利.
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老年缺血性脑卒中合并急性肺损伤患者外周血辅助性T细胞表达的分析
急性肺损伤(acute lung injury,ALI)是脑卒中后较为常见的并发症,临床表现为程度不同的呼吸窘迫、气促和发绀等.ALI往往加重脑卒中患者病情,甚至成为他们的直接死因.新近研究认为,疾病诱导的细胞免疫功能低下是ALI发病机制,但国内相关文献报道较少[1].我们选择近期发病的93例缺血性脑卒中患者为分析对象,并按住院后7d内有无合并ALI进行分组,同期检测其外周血辅助性T细胞表达水平,分析两者的相关性.
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不稳定性心绞痛患者C反应蛋白和补体激活产物的变化
不稳定性心绞痛(UA)是一种急性冠状动脉综合征,其发生与炎症反应所致的冠状动脉粥样硬化斑块破裂有密切关系[1].C反应蛋白(CRP)是一种反映机体炎症反应的灵敏指标,CRP可刺激单核细胞产生组织因子和内皮细胞表达黏附分子,参与了UA的发生与发展[2],但其与补体激活产物在UA发生与发展中的关系尚不清楚.我们检测了75例UA患者血清CRP和补体激活产物(sC5b-9)浓度的变化,旨在探讨其变化的意义和与心肌缺血的关系.
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良恶性胸腔积液中SiSo细胞表达的受体结合肿瘤抗原的测定及其临床意义
SiSo细胞表达的受体结合肿瘤抗原(RCAS1)是一种新型的肿瘤相关抗原,可在多种肿瘤组织中高表达,且与肿瘤的低分化、恶性程度密切相关[1].以往对RCAS1的研究大多集中在肿瘤组织学方面,本研究通过检测胸腔积液中RCAS1水平,探讨RCAS1对良恶性胸腔积液鉴别诊断的价值.
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脂质体前列腺素E_1对重症肺炎大鼠CD_4~+CD_(25)~+调节性T细胞表达的影响
重症肺炎是由多种细胞因子、炎性介质介导的肺实质炎症.本研究通过观察脂质体前列腺素E_1(PGE_1)对重症肺炎CD_4~+CD_(25)~+去调节性T细胞的影响,探讨脂质体PGE_1治疗重症肺炎的机制,为临床治疗重症肺炎提供参考.
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急性髓性白血病细胞对内皮细胞表达细胞间黏附分子-1的影响
急性髓细胞性白血病(AML)患者可因白细胞过高或白细胞淤滞导致多脏器衰竭,与白血病细胞黏附有关.研究显示白血病细胞表面黏附分子表达异常[1].目前认为细胞间黏附分子(ICAM-1)在正常白细胞外渗过程中起主要作用[2], IL-1β, TNFα和IFNγ等细胞因子直接介导内皮细胞ICAM-1的合成.
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急性髓系白血病患者血浆血管内皮细胞生长因子水平检测
近年来,大量研究明确了血管生成在急性髓系白血病(AML)发生、发展中的作用.血管内皮细胞生长因子(VEGF)是特异性血管内皮细胞促分裂原, AML细胞表达并分泌VEGF, VEGF除在其血管生成中起关键作用外,还可能以自分泌或旁分泌机制刺激白血病细胞生长.
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胰岛素对人血管平滑肌细胞肾素-血管紧张素系统的影响及西拉普利的作用
目前认为胰岛素抵抗及高胰岛素血症与高血压病及冠心病的发生、发展密切相关[1,2],而血管组织局部肾素-血管紧张素系统(RAS)激活产生的血管紧张素Ⅱ可导致血管平滑肌细胞(VSMCs)肥大、增生并分泌细胞外基质而导致管腔狭窄.有研究表明,胰岛素可刺激大鼠血管平滑肌细胞表达血管紧张素原,上调血管紧张素转换酶(ACE)活性[3],但胰岛素对人血管平滑肌细胞RAS的作用却鲜有报道,本研究观察胰岛素对人血管平滑肌细胞RAS的影响及ACE抑制剂西拉普利的作用.