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应用表达谱芯片技术对乙型肝炎病毒前-S2抗原结合蛋白S2-29反式调节基因的研究
目的:应用基因表达谱芯片技术,研究未知功能的乙型肝炎病毒(HBV)前-S2(preS2)抗原肝细胞结合蛋白基因S2-29过表达,对HepG2细胞的基因表达的影响.方法:应用酵母双杂交技术筛选并验证HBV前-S2的肝细胞结合蛋白基因.反转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术从HepG2细胞中扩增S2-29蛋白编码基因片段,经测序鉴定后构建表达载体pcDNA3.1(-)-S2-29,应用基因表达谱芯片技术对pcDNA3.1(-)-S2-29转染的人肝母细胞瘤细胞系(HepG2)细胞和转染空载体的相同细胞的差异表达mRNA进行检测和分析.结果:筛选出肝文库中HBV前-S2结合蛋白S2-29的编码基因,构建的表达载体经过限制性内切酶分析和DNA序列测定鉴定正确.提取转染细胞的总mRNA并进行逆转录成为cDNA,进行DNA芯片技术分析.在1152个基因表达谱的筛选中,发现有9个基因表达水平显著下调,包括真核翻译延伸因子2、MAP激酶激活的死亡域、谷胱甘肽过氧化物酶、肌动蛋白、NDRG、Prosaposin、SUMO-1激活酶亚基1、胰岛素受体和1个未知功能蛋白.1个未知蛋白编码基因的表达上调.结论:应用基因表达谱芯片成功筛选了HBV前-S2结合蛋白S2-29蛋白的反式调节基因,为进一步阐明S2-29蛋白对细胞表达调控的影响提供了新的依据.
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酵母双杂交技术筛选鉴定乙型肝炎病毒e抗原结合蛋白E-19的研究
目的:乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg)对HBV的感染和复制都不是必须的,普遍认为其与HBV引起免疫耐受、免疫系统功能障碍有关.筛选并克隆人肝细胞cDNA文库中与HBeAg相互作用蛋白的基因,明确其具体作用机制.方法:应用酵母双杂交系统3,将多聚酶链反应(PCR)法扩增的HBeAg基因连接人酵母表达载体p GBKT7中构建诱饵质粒,转化酵母细胞AH109并在其内表达,然后与转化了人肝cDNA文库质粒pACT2的酵母细胞Y187进行配合,在营养缺陷型培养基和X-α-半乳糖(X-α-gal)上进行双重筛选阳性菌落,提取阳性酵母菌落的质粒转化大肠杆菌氨苄青霉素-LB平板上选择并测序,结果在GenBank中进行生物信息学分析.并根据GenBank中的序列信息设计引物从并克隆到另一酵母表达载体pGADT7中,体外免疫共沉淀方法再次验证二者之间的结合作用.结果:成功克隆出HBeAg基因并在酵母细胞中表达,与肝文库配合后选出既能在四缺(SD/-Trp-Leu-His-Ade)培养基又能使X-α-gal变成蓝色的真阳性菌落39个,其中有5个未知基因,在genbank中未找到同源序列,在HepG2细胞的mRNA中成功扩增出该基因的全序,体外免疫共沉淀方法证明HBeAg与新基因E-19表达的蛋白质在体外也有结合作用.结论:成功克隆出HBeAg的肝细胞结合蛋白,发现与HBeAg有相互作用的未知蛋白新基因,为HBeAg的功能研究提出新线索.
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激活转录因子4协同核因子相关因子-2调控γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶催化亚基的表达对支气管哮喘豚鼠的影响
支气管哮喘(简称哮喘)是一种气道慢性炎症性疾病.氧化应激在诱导气道炎症及其发展中起关键作用.核因子相关因子-2( NF-E2-related factor 2,Nrf2)是一种对氧化还原敏感的转录因子,调节肺部几乎所有相关抗氧化基因,如γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶催化亚基(γ-glutamylcysteine synthetase catalytic subunit,γ-GCSc),发挥重要的抗氧化作用[1].激活转录因子4(activating transcription factor 4,ATF4)属于具有碱性亮氨酸拉链结构(basic leucine zipper,bZIP)的cAMP反应元件结合蛋白(CAMP-responsive element binding protein,CREB)家族中的转录因子.氧化应激时,ATF4能与Nrf2结合形成异二聚体,调控Nrf2及其靶基因γ-GCSc表达[2].本研究中通过观察哮喘急性发作期豚鼠肺组织中ATF4、Nrf2、γ-GCSc的表达变化,探讨其在哮喘发病及防治中的作用.
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丁苯酞对局灶性缺血预处理诱导脑缺血耐受影响的实验研究
丁苯酞是一种新型抗脑缺血药物,前期的研究已证实丁苯酞能够增强大鼠缺血预处理(ischemicpreconditioning,IP)后神经营养因子家族中的碱性成纤维细胞因子(bFGF)的表达[1].在此基础上,我们于2011年2月采用免疫组织化学方法检测神经营养因子家族中的另一成员——脑源性神经生长因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)及其上游的转录调控因子磷酸化的环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(phosphorylated cyclic AMP responsive element binding protein,p-CREB)在局灶性脑缺血耐受动物模型的脑梗死灶周围的表达,并采用蛋白质印迹(Western blotting)方法检测p-CREB/总cAMP反应元件结合蛋白(cAMP response element binding protein,CREB)表达,探讨丁苯酞局灶性缺血预处理诱导脑缺血耐受中可能的保护机制.
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基本转录元件结合蛋白2反义RNA对大鼠颈动脉新生内膜增生的抑制作用
血管平滑肌细胞(VSMC)增殖导致新生内膜增生是冠状动脉再狭窄(RS)的主要病理机制.近期的研究发现基本转录元件结合蛋白2(basic transcription element binding protein 2,BTEB2)可以调节多个VSMC增殖相关基因的表达.本研究于在体水平探讨BTEB2反义RNA对新生内膜增生的影响.
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白细胞介素-37的免疫效应及其意义
白细胞介素-37(IL-37)属于白细胞介素1家族(IL-1F),新近研究发现,其在炎症的发展和调节中扮演重要角色[1]。Kumar等[2]在2000年首次发现了这个 IL-1家族的新成员;2001年,Dunn 等[3]将其定义为 IL-1家族第7因子(IL-1 F7)。此后研究显示,IL-1 F7可与 IL-18受体α链和 IL-18结合蛋白(IL-18 binding protein,IL-18BP)结合,从而产生有限的抗炎效应[4-5]。成熟的 IL-1F7能够转移进入细胞核并与Smad3结合形成复合物,通过调节基因转录抑制促炎细胞因子的生成[6]。正是基于 IL-1 F7独特的免疫抑制特性,近期将其命名为 IL-37[7]。本文对 IL-37的分类和分布、作用机制、生物学效应、相关疾病意义等方面研究动态进行综述。
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胰岛素样生长因子结合蛋白与胎儿生长发育的关系
胎儿的生长发育与母体营养物质的供应、胎盘功能、激素、细胞因子和生长因子等因素有关.其中胰岛素样生长因子(insulin-like growth factor-1,IGF)被认为与胎儿的生长发育密切相关.循环中的IGF绝大多数与胰岛素样生长因子结合蛋白(insulin-like growth factor binding protein,IGFBP)结合.目前的研究表明,IGFBP不仅仅作为IGF的载体,而且还是IGF的活性调控因子,起抑制或增强IGF的作用[1].本研究旨在探讨足月妊娠妇女血清、羊水和脐血中IGFBP的水平变化与胎儿生长发育的关系.
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母体血和脐带血视黄醇结合蛋白浓度与新生儿体重的关系
人体血液中的视黄醇结合蛋白(retinol binding protein, RBP)由肝脏合成,是视黄醇(维生素A,VitA)的转运蛋白,它不但在肝脏和肾脏疾病的诊断和治疗中有重要意义,而且也是反映机体营养状况的灵敏指标.通过对新生儿脐带血和母体血中的RBP进行检测,观察其水平与新生儿体重之间的关系,以分析RBP在新生儿营养状况评价中的意义.
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p-CREB和c-Fos与新生鼠海马缺氧缺血再灌注后的神经保护机制
新近研究表明,c-AMP反应元件结合蛋白(c-AMP response element binding protein, CREB)磷酸化后所调控的基因转导可能是神经元再生存活的重要因素[1].
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肠型脂肪酸结合蛋白在小儿危重症胃肠功能衰竭早期诊断中的价值
研究表明,肠型脂肪酸结合蛋白(intestinal fatty acid binding protein,IFABP)作为肠缺血早期的诊断指标[1],在小肠缺血的诊断中更优于其他指标[2],但研究主要集中在急性肠绞死、坏死性小肠结肠炎[3]、急性肠系膜血管栓塞[4]等方面.本研究试图通过测定危重症胃肠功能衰竭、非胃肠功能衰竭及正常对照组血液和尿液IFABP值,探讨IFABP是否可作为危重症胃肠功能衰竭的早期预警指标.
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矮小儿童的生长激素-胰岛素样生长因子轴功能的检查
生长激素-胰岛素样生长因子(GH-IGF-1)功能轴的异常是引起儿童身材矮小的重要原因.根据病因可将其分为3类:具有生物活性的生长激素(growth hormone,GH)分泌不足;胰岛素样生长因子(insulin-like growth factors,IGFs)产生减少;外周组织对IGFs产生抵抗[1-3].早期明确诊断并应用基因重组人生长激素(rhGH)治疗可以有效地提高终成人期身高.为了在临床上正确使用rhGH,必须对矮小儿童的GH-IGF-1轴功能进行检查.目前主要通过GH浓度测定、GH刺激试验、GH自然分泌量、尿液生长激素测定、IGFs及IGFBP(insulin-like growth factors binding protein)测定等方法进行判断.本文主要介绍有关GH-IGF-1轴功能检测的应用近况.
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Objective: To screen novel genes related to adriamycin (Adr) resistance from human ovarian cancer resistance cell line OC3/Adr. Methods: Multidrug resistant ovarian cancer cell line OC3/Adr was induced by intermittent treatment of the human parent cell line OC3 with high concentration Adr. The difference of gene expression was screened by using different display analysis to the acquired Adr-resistance subline OC3/Adr and its parent cell line OC3. Results: OC3/Adr cell line was obtained which was more resistance to Adr than the parent cell line OC3 with the resistance index (RI) of 15.4. The OC3/Adr cell line also showed cross-resistance to other anti-cancer drugs (VP16, CDDP,5FU ). It grew slowly and exhibited changes of cell cycle. A number of differentially expressed ESTs (Expressed Sequence Tags, ESTs) were identified at mRNA level between the OC3/Adr and OC3. Four of 18 different ESTs were sequenced. The 431/432 base pair S1 was homologous to human sperm zona pellucida binding protein, while the other two ESTs, S3 and S4, were new gene segments, which were registered to GenBank with the number of AF 117656 and AF 126507 respectively. Particularly, the expression of S2 sequence increased in all the drug-resistance cell lines and S3 sequence overexpressed in human ovarian cancer tissues as compared with benign ovarian tumors. Adr in ovarian cancer OC3/Adr is involved with changes of multiple gene expressions.
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表观遗传机制及其在帕金森病中的作用
帕金森病(Parkinson disease, PD)的确切病因及发病机制未明.目前认为该病与老化、遗传和环境因素密切相关.资料表明遗传因素在PD的发病中起重要作用.然而,此方面的研究更多侧重于对DNA本身序列的关注.对基因表达调控的研究,更多着眼于各种调控蛋白分子与DNA序列的结合和对相关基因表达活性的调节.自1996年发现转录调节蛋白(CREB binding protein, CBP)具有内源性组蛋白乙酰转移酶(histone acetylase, HAT)活性以来,人们逐渐认识到有些表型和疾病的发生并非DNA序列的改变,而是表观遗传(epigenetic)改变所导致.因此,表观遗传学成为基因转录调控研究的一个新热点,其在PD发病中的作用也日益受到重视.我们就目前人们对表观遗传机制的认识及其在PD中的可能机制做一简单介绍.
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调控糖酵解代谢的重要因子——碳水化合物反应元件结合蛋白研究进展
碳水化合物反应元件结合蛋白(carbohydrate response element binding protein,ChREBP)是一种能与碳水化合物反应元件(carbohydrate response element,ChRE)结合的蛋白质,其组织分布、结构特性及DNA结合的活性与葡萄糖敏感转录因子的特征一致,能调节葡萄糖的敏感性,从而调节机体内糖和脂肪的代谢[1,2].
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G蛋白、G蛋白偶联受体及信号传导途径研究进展
一、G蛋白的结构和种类1.结构:G蛋白(G-protein/GTP binding protein)是能与鸟嘌呤核苷酸结合,具有水解GTP生成GDP即具有GTP酶(GTPase)活性的蛋白,位于细胞膜胞浆面的外周蛋白,一般是指与膜受体偶联的异源三聚体,由3个亚基组成,它们是α亚基(45kD)、β亚基(35kD)、γ亚基(70kD).总分子质量为100kD左右.G蛋白有两种构象,一种是以αβγ三聚体存在并与GDP结合,为非活化型,另一种构象是α亚基与GTP结合并致βγ亚基脱落,此为活化型.
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细菌感染患者血清中脂多糖结合蛋白的检测及其意义
脂多糖结合蛋白( lipopolysacchoride binding protein,LBP)是一种分子量6×104道尔顿的糖蛋白,主要由肝脏合成[1].在急性细菌感染者血中水平可升高,国内外文献对LBP升高的机制的研究报道很多,但在临床上不同种类细菌感染者血中LBP变化的异同,以及其意义国内外均很少报道.
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慢性髓细胞白血病患者干扰素同源序列结合蛋白的表达及其临床意义
干扰素同源序列结合蛋白(interferon consensus sequence binding protein, ICSBP)是干扰素调节因子(IRFs)家族成员之一,是一重要转录因子[1],主要表达于造血起源的细胞系[2],在免疫系统和干扰素介导的信号传导中起平衡调节作用[2,3],在造血细胞的生长和分化中起调节作用[4].Schmidt等[5]报道ICSBP mRNA在人类髓系白血病尤其是慢性髓细胞白血病(CML)中多呈低表达,而在慢性淋巴细胞白血病(CLL)中却呈高表达,此与髓系白血病的发病机制是否有关,国内尚未见报道.我们对CML患者ICSBP的表达以及经干扰素或羟基脲治疗的患者ICSBP表达情况进行了研究,并探讨其临床意义.
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Objective: hTe results of a previous study showed that a clear dysregulation was evident in the global gene expression of the BCL11A-suppressed B-lymphoma cells. In this study, the bone morphogenetic protein receptor, type II (BMPR2), E1A binding protein p300 (EP300), transforming growth factor-β2 (TGFβ2), and tumor necrosis factor, and alpha-induced protein 3 (TNFAIP3) gene expression patterns in B-cell malignancies were studied.
Methods:The relative expression levels ofBMPR2,EP300,TGFβ2, andTNFAIP3 mRNA in B-lymphoma cell lines, myeloid cell lines, as well as in cells from healthy volunteers, were determined by real-time quantitative reverse transcript-polymerase chain reaction (qRT-PCR) with SYBR Green Dye. Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase (GAPDH) was used as reference.
Results:hTe expression level ofTGFβ2 mRNA in B-lymphoma cell lines was signiifcantly higher than those in the cells from the healthy control (P<0.05). However, the expression level ofTNFAIP3 mRNA in B-malignant cells was signiifcantly lower than that of the healthy control (P<0.05). hTe expression levels ofBMPR2 andEP300 mRNA showed no signiifcant difference between B-malignant cell lines and the healthy group (P>0.05). In B-lymphoma cell lines, correlation analyses revealed that the expression ofBMPR2 andTNFAIP3 (r=0.882,P=0.04) had signiifcant positive relation. hTe expression levels ofBMPR2,EP300, andTNFAIP3 mRNA in cell lines from myeloid leukemia were significantly lower than those in the cells from the healthy control (P<0.05). hTe expression levels ofTGFβ2 mRNA showed no signiifcant difference between myeloid leukemia cell lines and the healthy control or B-malignant cell lines (P>0.05). hTe expression levels of BMPR2,EP300, andTNFAIP3 mRNA in B-lymphoma cells were signiifcantly higher than those of the myeloid leukemia cells (P<0.05).
Conclusion:Different expression patterns ofBMPR2,EP300,TGFβ2, andTNFAIP3 genes in B-lymphoma cells exist. -
视黄醇结合蛋白4在临床上的应用进展
视黄醇结合蛋白4(retinol binding protein 4,RBP4)是一种新的循环性脂肪源性因子属于视黄醇结合蛋白(RBP)家族中的分泌型RBP, 主要由肝细胞和脂,肪细胞分泌,在协助视黄醇发挥生理功能中起着不可替代的作用.同时RBP4 作为一种循环性脂肪细胞因子,在许多研究中均发现其于肥胖、胰岛素抵抗、代谢综合征、高血压及动脉粥样硬化中均发挥了重要作用,并有望为相关疾病的发病机制及治疗靶点提供新的线索.本文将对RBP4 的结构功能与其在临床上的应用进展进行综述
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尿液GGT测定用于化疗患者的肾功能监测
化疗药物及代谢产物主要由肾脏排出,大部分均有一定肾毒性, 常引起急/慢性间质性肾炎,甚至可引起肾小管坏死造成不可逆转的肾损伤[1].过去常用血清BUN、Cr来检测化疗病人的肾功能,但BUN、Cr只有在肾功能不全失代偿以后才能表现出异常.近年来,随着肾小管标志酶和标志蛋白研究的不断深入,尿中许多肾标志酶和标志蛋白被用于临床肾功能检测[2,3].本文就尿液γ-谷氨酰转移酶(γ-glutamy l transferase;GGT)、尿液N-乙酰基-β-D-氨基葡萄糖苷酶(N-acetyl-β-D-glucosaminida se;NAG)和尿液视黄醇结合蛋白(retinol binding protein;RBP)检测用于化疗病人肾功能监测的可行性作一探讨.