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乙型肝炎病毒和丙型肝炎病毒对MDM4信号转导的影响
0 引言Shvarts et al[1]报告了一种与p53蛋白结合蛋白的新基因,命名为MDMX,与MDM2蛋白在一级结构上具有同源性,特别是在p53蛋白结合域更是如此.另外,MDM2羧基末端的金属结合域在MDMX分子中也是高度保守的.MDMX蛋白又称为MDM4,是p53的一种结合蛋白,是p53蛋白的负调节因子.
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乙型肝炎病毒蛋白结合蛋白的研究
0 引言随着基因组测序工作的完成,后面就是研究基因的功能,其中基因表达蛋白质的功能的研究尤为重要,因为基因是通过蛋白质起作用的.蛋白质与蛋白质之间的相互作用揭示了蛋白质功能的物理基础之一,即蛋白质起作用是通过与另一蛋白质进行物理接触而完成.大家知道乙型肝炎病毒(HBV),对人体有着广泛的作用,如引起人免疫紊乱、慢性肝炎、肝硬化、肝肿瘤发生,治疗效果不佳[1-9 ],但是他们是如何作用的目前不是太清楚,但是可以肯定其中具有蛋白质-蛋白质之间的相互作用.1990年代以来一系列遗传、生化方法特别是酵母双杂交技术等进展,为研究HBV与人体蛋白质之间的相互作用打下了基础.HBV有四个结构蛋白开放读码框架,S、C、P、X编码前-S1、前-S2、HBsAg、HBcAg、HBeAg、病毒多聚酶、和HBxAg,其中HBxAg作用复杂有反式激活作用[10].但是其结构中没有DNA结合域,推测可能和蛋白质之间的相互作用有关,研究比较多.其次是前-S1等.目前鉴定的与HBV相互作用的蛋白质有十几种
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转录因子GATA-4在心血管系统中作用的研究进展
转录因子是调控DNA转录过程的反式作用因子,它能识别并结合特定的DNA调节序列,是转录必需的可溶性蛋白质分子.GATA属于锌指蛋白转录因子,含有两个锌指结构,是直接与(T/A)GATA(A/G)序列结合的高保守的DNA结合域.GATA家族有6个成员,其中GATA-1,-2,-3对造血组织发育很重要,而GATA-4,-5,-6对大量心脏基因表达的直接调节非常重要.GATA-4是与心脏发育密切相关的一种特定细胞核转录因子,是目前心血管领域的研究热点.它在心脏前体细胞分化、心脏发育、心肌肥厚和抗凋亡以及基因突变引起先天性心脏病等方面发挥着重要的调节作用,现综述如下.
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ARID1A抑癌基因的研究进展
自2010年Wiegand等[1-2]证实AT丰富结合域1A(AT rich interaction domain 1A,ARID1A)基因突变与卵巢透明细胞癌密切相关以来,陆续有研究发现在多种肿瘤中存在该基因的突变.由于人类肿瘤中绝大多数涉及ARID1A的体细胞突变机制为插入或缺失导致的框移或无义突变,ARID1A被认为是候选的肿瘤抑制基因.ARID1A基因编码BAF250a蛋白,后者是SWI/SNF染色质重塑复合物的一个关键组分[3],不仅对细胞增殖和肿瘤抑制起重要作用,亦与糖皮质激素的敏感性有关.本文就相关研究进展作一综述.
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凋亡素基因对人喉癌细胞Hep-2的抑制效应研究
鸡贫血病病毒(chicken anemia virus,CAV)主要以诱导细胞凋亡方式破坏宿主细胞,VP3基因被认为是CAV的主要功能基因,其具有细胞核定位信号域和DNA结合域,能够以非p53依赖性途径特异性诱导肿瘤细胞凋亡,而对正常细胞无作用,且其凋亡诱导作用不受Bcl-2的抑制,相反Bcl-2还能增强其功能[1].
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血小板源生长因子受体结合域与乙肝核心抗原融合蛋白的分离纯化
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012 多(ADP-核糖)聚合酶DNA结合域的过量表达抑制电离辐射所致DNA双链断裂的再结合
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人脂联素球状结合域蛋白对3T3-L1脂肪细胞葡萄糖摄取能力的影响
脂联素是由脂肪组织分泌的一种内源性生物活性多肽,其在抗动脉粥样硬化、调节糖脂代谢、增加胰岛素的敏感性等方面有重要的作用,并与糖尿病、肥胖、心血管疾病的发生有密切的关系.目前研究表明,脂联素参与调节糖代谢和胰岛素敏感性的作用可能与其增强骨骼肌和肝脏的脂肪酸氧化,促进骨骼肌对葡萄糖的摄取,抑制肝糖输出和糖异生有关 [1],但是,葡萄糖进入脂肪细胞后的代谢去路尚未清楚.gAd是脂联素的活性成分,研究证实其具有脂联素相似的生物活性,在降糖方面较全长脂联素作用更强[2].本研究用不同浓度的人脂联素球状结合域 (gAd)蛋白分别作用于3T3-L1脂肪细胞和已产生IR的3T3-L1脂肪细胞,从细胞水平观察gAd蛋白对其葡萄糖摄取能力的影响.
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转接蛋白是免疫信号转导中的重要调节子
转接蛋白(Adaptor)通常被定义为具有蛋白-蛋白或蛋白-脂质相互作用结构域,而不具备酶活性的分子,这些结构域通常指Src同源结构域2(SH2)、Src同源结构域3(SH3)和PH(Pleckstrin Homology)等.但许多酶也可被认为是转接蛋白分子,因为它们除具有酶活性外,也含有蛋白或脂质的结合域,如Src家族蛋白酪氨酸激酶(PTK)中的LYN既具有酶活性,也具有一个SH2和SH3结构域.此外,某些辅助受体,如配对的免疫球蛋白样受体B(PIRB)和CD19,也含有胞浆蛋白-蛋白相互作用域,因此也能被认为是转接蛋白.本文仅对几个新近发现的经典定义的转接蛋白分子做一概述.
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KLF3结构及其生理功能研究进展
KLF (Krüppel-like factors)家族是真核生物中一大类基础转录因子(Basic transcription element-binding protein,BTEB),初发现于果蝇胚胎发育调控因子Krüppel,因其与Krüppel 锌指转录因子的 DNA 结合域高度同源而得名[1].KLF3是转录因子KLF家族成员之一.研究发现,KLF3具有参与脂肪和红细胞生成、B细胞发育及对肌肉基因调节和神经系统多种生物学功能,成为目前研究热点之一.
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068重组葡萄球菌株诱生白喉抗毒素
以非致病性菌株表达目的抗原,可望诱导有效的免疫应答,其中以革兰阳性的木糖葡萄球菌、肉质葡萄球菌尤为安全、高效.它们与金黄色葡萄球菌有低水平的DNA同源性,但却不产生有致病力的毒素、溶血素、凝集素、蛋白A等,可作为抗原的活载体,有效表达全部或部分抗原成分,诱导持久的体液免疫反应.本实验旨在研究毒性蛋白上某一定义完整的结构域能否被表达在这两种菌株表面,它们能否在小鼠体内诱生中和抗体.已知,白喉毒素(DT)的382~535氨基酸片段是结构完整的区域,为受体结合域DTR.
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靶向CD151-整合素α6β1结合域的多克隆抗体的制备及初步应用
目的:制备CD151-整合素α6β1结合域的多克隆抗体,探讨其免疫学特性.方法:化学合成CD151-整合素α6β1结合域的多肽CGQRDHASNIYKVEG-KLH,以此多肽免疫BALB/c小鼠,制备多克隆抗体.采用酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)测定该抗体的效价,采用Western blotting、细胞免疫荧光染色、免疫组织化学染色的方法鉴定抗体.结果:成功获得抗CD151-整合素α6β1结合域的多克隆抗体,ELISA试验显示该抗体效价为1∶64000,Western blotting结果显示该抗体有较好的特异性,细胞免疫荧光染色和免疫组织化学染色显示阳性染色定位于肝癌细胞膜和细胞浆.结论:制备的抗CD151-整合素α6β1结合域的多克隆抗体具有较高的效价和特异性,可用于Western blotting、细胞免疫荧光染色和免疫组织化学染色等试验,该多克隆抗体对肝癌抗复发的治疗具有重要意义,值得进一步研究.
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恶性疟原虫EBA-175受体结合域的表达并诱导产生抑制入侵抗体
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食管癌和癌旁组织p63基因mRNA表达
p53基因家族中,p63的基因表达产物种类多,可以根据启动子的不同和剪切的不同,表达至少6种蛋白.其中一个启动子位于第一外显子上游,编码的蛋白具有转录激活结构域(transcription activation domain),称为TA形式.该形式具有和p53相似的功能,可以使特定的目标基因转录,诱导细胞凋亡[1].另外一个启动子位于第三内含子中,编码的蛋白不具有转录激活结构域,称为AN形式.ANp63无诱导细胞凋亡功能,但是可能通过其保留的DNA结合域与DNA位点竞争结合,或者直接与p53及TA形式的p63结合使其失去活性,从而发挥其抑制细胞凋亡的作用[2].
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钾通道GIRK4中G 蛋白βγ亚基结合区的研究
G蛋白激活的内向整流型钾通道(GIRK)在调节心肌房室细胞和神经元的兴奋性中具有重要作用.为了深入阐明G蛋白βγ亚基激活钾通道的分子机制,运用系统缺失突变和重组蛋白体外结合方法,研究GIRK4分子中能够与G蛋白βγ亚基结合的区域.结果表明,GIRK4 N端膜内域中的41~92区和C端膜内域中的253~348区分别是G蛋白βγ亚基的小结合区域.这一研究为进一步确定Gβγ激活GIRK通道的调节位点,明确其中关键氨基酸残基组成奠定了基础.
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4聚ADP核糖聚合酶与缺氧缺血性脑损伤
缺氧缺血性脑损伤是多种神经系统疾病的病理学基础,如:新生儿缺氧缺血性脑病,脑梗塞等。近年来,对其发病机制进行了多方面的探讨,4聚ADP核糖聚合酶(poly ADP ribose polymerase,PARP)作为DNA损伤的重要组成部分,在缺氧缺血性脑损伤的分子研究中得到广泛关注,现对有关PARP的研究作一综述。1 PARP概述1.1 PARP分子结构及功能 PARP由三个主要的功能片段组成:46 kDa的DNA结合域(the DNA binding domain,DBD),存在于氨基末端;54 kDa的NAD(nicotinamide adenine dinucleotide,尼克酰胺腺嘌呤二核甘酸)结合域(the NAD binding domain),又称催化域,存在于羧基末端;22 kDa的自我修饰位点(the automodification sites),位于前两者之间。对氨基酸序列的研究揭示,PARP在氨基酸水平具有高度的保守性,尤其在PARP的羧基端,由50个氨基酸组成,在脊椎动物中具有严格的保守性,该区域被认为是PARP的标志[1]。PARP是一种金属酶,需要锌元素参与其活性。利用能量弥散X线萤光技术确定,每一个PARP分子包括两个锌离子,位于PARP分子的氨基端,Southern和Western试验证明,该区域以锌依赖方式与缺口DNA结合[1]。 PARP具有多种功能,正常状态下,参与DNA修复,细胞增殖和转化[2]。单链或双链DNA断裂激活PARP,由DBD识别DNA分子缺口,并将PARP以锌依赖方式连接于缺口处,由催化域利用NAD合成多聚(ADP-核糖)[3],修复受损DNA,保护基因组的完整性。1.2 PARP分布 PARP大量存在于所有真核细胞的细胞核中,新近有资料显示,PARP亦存在于细胞质中,Cookson等[4]用免疫细胞化学法检测了PARP在人类中枢神经系统的分布,除预知的细胞核着色外,一些神经细胞群表现为细胞质着色,在不同的神经细胞群中存在相当大的差异:脊髓的运动神经元表现为大量的细胞质着色,而事实上在另外一些神经细胞却表现为缺失,特别是在海马,这些结果表明PARP与细胞的亚组成部分(非细胞核)有关联,并预示着该酶的其它作用
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核受体结合域蛋白2的研究进展
核受体结合域蛋白2(NSD2)是含有SET结构域的一种组蛋白赖氨酸甲基转移酶,它是NSD蛋白家族(NSD1、NSD2和SD3)的成员之一,与WHSC1(Wolf-Hirschhorn syndrome candidate 1)/MMSET(Multiple Myeloma SET domain)同名.目前,国外有关NSD2的研究较多,而国内较为罕见.阅读相关外文文献可知对于NSD2的具体生理催化活性尚存在争议,比如不同的研究表明NSD2能使不同的组蛋白赖氨酸位点(如H3K4、H3K27、H3 K36和H4K20等[1-4])甲基化.近年来,国外学者研究较多的是NSD2与疾病尤其是肿瘤之间的关系,多项研究结果表明在人类的多种肿瘤中可以检测到NSD2的表达,并且NSD2与大多数肿瘤的进展、转移和预后有关,并提出NSD2可能作为治疗癌症的新靶点.现就NSD2的相关研究进展进行综述.
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胰岛β细胞膜KATP通道的功能和调节
在胰岛β细胞,KATP通道是代谢活动转化为机械活动的重要枢纽.胰岛β细胞膜上的KATP通道(Kir6.2/SUR1)由4个Kir6.2形成的离子孔道与4个SUR1亚基组成的八聚体,SUR1亚基含有NBD1和NBD2核苷结合域(NBFs).当血糖升高时,胰腺β细胞内葡萄糖浓度升高,ATP/ADP比值增加,KATP通道关闭,Ca2+通道开放,胰岛素以出胞的方式分泌;相反,当血糖降低,ATP向ADP的转化减少,ATP/ADP比值降低,使细胞膜KATP通道打开,导致细胞超极化,继而Ca2+通道关闭,阻止Ca2+离子内流,抑制胰岛素分泌.
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P-糖蛋白及其抑制剂研究进展
P-糖蛋白( P- glycoprotein, P- gp)是由约 1 280个氨基酸组成的糖蛋白,其分子量约 170kDa. P- gp由 2个对称的具有 43%同源性的功能区组成,功能区之间由 1个位于细胞内的多肽序列连接而成,每个功能区含 6个跨膜区域与 1个位于胞浆内的核苷( ATP)结合域. 2个功能区协同行使其功能,任何 1个 ATP结合域失活均可使整个蛋白功能丧失.由 P- gp底物的广泛性可推测其可能具有多个药物结合位点,但其作用机制与位置有待深入研究 [1].人 P- gp基因家族包括 MDR1( Multi- drug resistance)与 MDR3,啮齿动物 P- gp基因家族包括 mdr1a、 mdr1b、 mdr2. MDR1与 mdr1a/mdr1b编码的 P- gp可作为药物载体将药物排出细胞;而一般认为 MDR3与 mdr2编码的 P- gp为磷脂的转运载体;另有证据表明,其可能参与了激素的转运与调节过程.