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肿瘤表达谱基因芯片筛选胆囊癌肿瘤相关基因的初步研究
我们利用表达谱芯片筛选胆囊癌相关基因组,并将筛选出的部分相关基因进行分类和生物信息学分析,选其外显子区进行PCR扩增、测序明确突变情况.
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青少年特发性脊柱侧凸疾病候选基因SH3GL1外显子序列比对分析研究
目的 确定SH3GL1是否为青少年特发性脊柱侧凸(AIS)致病基因.方法 对2007年11月至2008年12月收治的56例AIS患者进行研究.其中男性15例,女性41例;年龄8～22岁,平均15岁;侧凸Cobb角25°～110°,平均67.5°.采取以家系为基础的"病例.同胞对照,病例-亲属对照"研究方案,根据AIS候选基因SH3GL1核酸序列,以10个外显子为重点设计引物对,进行PCR扩增、克隆和测序,用Vector NTI Advance 10.3进行序列对比分析,确定碱基突变的有无,并进行蛋白质结构预测分析.结果 共发现12处碱基变异,分别位于第2(3处)、4(1处)、5(4处)、6(1处)、8(1处)和10(2处,非编码区)6个外显子上.其中先证者mRNA第515位碱基如果为T,则形成终止密码子,导致蛋白阅读框发生改变,蛋白质序列预测分析显示编码截短蛋白,从而影响蛋白质的结构.结论 SH3GL1可能是AJS的致病基因之一.
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癌基因BRAF突变在黑色素细胞痣与黑色素瘤中的作用
BRAF(v-raf murine sarcoma viral oncogenehomolog B1)是一种癌基因,位于RAS/RAF/MEK/ERK信号传导通路上.2002年以来,学者们相继发现在黑色素瘤中存在高频率的BRAF突变,这种T到A的突变发生在第15号外显子激酶结构域的单个位点,导致第600个密码子编码的氨基酸发生错义突变(BRAF~(V600E)),从而激活RAS/RAF/MEK/ERK通路,揭示可能与肿瘤发生相关~([1]).
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脊髓性肌萎缩症SMN1基因携带者筛查技术研究进展
1 背景介绍脊髓性肌萎缩症(spinal muscular atrophy,SMA)是全球常见的致死性常染色体隐性遗传疾病之一,活婴发生率为1/5000～1/10000,人群携带率为1/35～1/50[1].临床上根据SMA发病年龄和病程的不同,将患者分为Ⅰ型、Ⅱ型、Ⅲ型及Ⅳ型,其中占患者比例约70％的工型临床表型为严重,常于6个月内起病,多数于2岁内夭折[2].1995年,SMA相关基因被定位于5号染色体长臂1区(5ql1.2～13.3),并发现了反向重复的运动神经元生存基因(survival motor neuron,SMN)[3].该基因有2个序列高度相似的拷贝:靠近端粒的决定性基因SMN1及靠近着丝粒的修饰SMN2,两者之间仅存在5个碱基的差异,而在编码区内只存在1个碱基的差异,即第7号外显子上的840C＞T.由于SMN所在的染色体区域存在众多重复和假基因簇等易导致结构不稳定的序列,导致SMN基因发生缺失或转换的频率较高,相应的表现为人群SMN基因拷贝数组合复杂多变.
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MLPA技术用于假性肥大型肌营养不良症产前基因诊断的价值
目的 探讨多重连接探针扩增(MLPA)技术用于假性肥大型肌营养不良症(DMD)先证者家系中高风险孕妇产前DMD基因诊断的价值.方法 收集2005年至2012年广州医学院第三附属医院、南方医科大学南方医院等4家医院的155例有DMD先证者家系的高风险孕妇,其中7例孕早期孕妇取绒毛标本,148例孕中期孕妇取羊水样本,对绒毛标本和血性羊水标本排除母体DNA污染后,采用MLPA技术对绒毛和羊水样本行胎儿DMD基因检测；计算155个家系中DMD基因外显子突变发生次数.结果 (1)155例孕妇中共检出DMD胎儿27例、胎儿DMD基因携带者28例、正常胎儿100例.155例胎儿中,男胎72例,其中27例为DMD胎儿(38％)；女胎83例,其中28例胎儿为DMD基因携带者(34％).(2)27例DMD胎儿中,DMD外显子缺失突变22例(14.2％,22/155)；外显子重复突变5例,(3.2％,5/155)；28例DMD基因携带者中,DMD外显子杂合缺失突变25例(16.1％,25/155),外显子杂合重复突变3例(1.9％,3/155).155个家系中,DMD基因突变的发生主要分布在外显子45 ～ 52之间,其中外显子49突变发生次数高,共22次.(3)7例早孕期孕妇的绒毛组织DMD基因诊断结果中,有两例胎儿DMD基因型分别与先证者、孕妇的DMD基因型一致,其中1例为患儿、1例为DMD基因携带者,分别给予终止妊娠和继续妊娠的处理.结论 MLPA技术用于DMD产前基因诊断,能准确区分DMD基因突变是属于缺失型、重复型突变还是杂合性缺失等,对DMD先证者家系的高危孕妇有较高的产前诊断价值,临床结果可靠；绒毛膜活检可用于产前DMD早期基因诊断.
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应用第2代测序技术检测遗传性乳腺癌-卵巢上皮性癌综合征再发子宫浆液性腺癌患者的BRCA1、BRCA2基因突变
卵巢上皮性癌（卵巢癌）是严重危害妇女健康的主要恶性肿瘤之一，病死率高居妇科恶性肿瘤之首。在所有的卵巢癌患者中，高达10%～15%者为遗传性乳腺癌-卵巢癌综合征（hereditary breast/ovarian cancer syndrome ，HBOC）患者[1]。目前已知，HBOC与BRCA1或BRCA2基因的种系突变有关。子宫乳头状浆液性癌（uterine papillary serous carcinoma，UPSC）是1种独特的子宫内膜癌，恶性程度高，生物学行为与卵巢浆液性癌较为相似。UPSC在所有子宫内膜癌中所占比例不到10%，但超过50%的复发及死亡的子宫内膜癌患者为UPSC[2]。已有研究表明，UPSC患者中BRCA1、2基因突变携带率极高[3-4]。本研究中的2例患者为同胞姐妹，姐姐患卵巢浆液性囊腺癌，妹妹先后患乳腺癌、UPSC；本研究应用第2代测序（next generation sequencing， NGS）技术检测患者BRCA1、2基因全外显子突变情况，姐妹的BRCA1基因第20外显子均携带HBOC高风险错义突变p.A1752P；此外，采用常规Sanger测序技术检测到乳腺癌+UPSC患者之女也携带该突变。现将结果报道如下。
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载脂蛋白J基因多态性与妊娠高血压综合征相关性的研究
妊娠高血压综合征(妊高征)的病因仍不十分清楚,众多研究表明,妊高征有较高的遗传倾向,血管内皮细胞损伤、脂质代谢异常及补体异常活化在其发病中起重要的作用.载脂蛋白J具有结合和转运脂质、抑制补体活化及保护细胞膜等功能,因此可能与妊高征的发病有关联.本研究运用PCR-变性梯度凝胶电泳(PCR-DGGE)及测序方法检测载脂蛋白J基因全部9个外显子的多态性,探讨其多态性与妊高征及原发性高血压的关系.
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胰岛素受体基因第17外显子1058位点多态性与多囊卵巢综合征关系的荟萃分析
多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)是生育期妇女常见的内分泌及生殖功能障碍性疾病.PCOS的发生机制至今尚不清楚.近年来,有研究表明,PCOS是以胰岛素抵抗为特征的内分泌代谢性疾病,胰岛素抵抗不仅是PCOS患者的一项重要特征,而且可能是发生PCOS的主要病理基础,在PCOS发病的早期起一定的作用.近年来国内外研究发现,与胰岛素抵抗相关的胰岛素受体基因第17外显子1058位点存在CC、TT和cT 3种基因型,这种基因多态性与PCOS的发病相关.但也有一些研究结果显示,该基因多态性与PCOS的发病风险不相关.解决这些问题的有效方法是应用循证医学的基本原理与方法进行荟萃分析(Meta分析).荟萃分析能够通过科学、系统的方法,将研究目的相同的多个研究结果进行定量合并分析和综合评价,以提高统计检验功效,解决研究结果不一致的问题,使研究结论更全面可靠.目前,荟萃分析已经成为循证医学的主要分析方法之一.为了客观地评价胰岛素受体基因多态性与:PCOS发病的相关性,本研究对国内外有关研究进行了荟萃分析,现报道如下.
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妊娠高血压综合征和肾素-血管紧张素系统的基因研究进展
妊娠高血压综合征(妊高征)是一种常见的妊娠并发症，是导致孕产妇和围产儿死亡的主要原因之一。多年来人们对其病因及发病机理进行了大量研究，发现妊高征是一种多因素疾病，环境与遗传因素在其发病中有重要作用。临床研究表明，妊高征具有家族遗传倾向，属于单基因遗传性疾病［1］。 妊高征的基本病理生理改变是全身小动脉痉挛，临床主要表现为高血压、水肿、蛋白尿。肾素-血管紧张素系统 (renin-angiotensin system，RAS)在血压和体液调节中具有重要作用，并且已发现RAS中某些成分，如血管紧张素原 (angiotensinogen，AGT)，血管紧张素转换酶 (angiotensin conver- ting enzyme，ACE)的某些分子变异与妊高征的发病有关。现就妊高征和RAS的基因研究进展作一阐述。 一、肾素基因与妊高征的关系 肾素是RAS中的限速酶，其功能是将AGT转化为血管紧张素I（angiotensin I，AngI）。肾素基因全长12 kb，含9个外显子和8个内含子。动物实验发现，肾素基因限制性片段长度多态性（restriction fragment length polymorphisms，RFLP）与高血压有关［2］。Arngrimsson等［3］调查了9个爱尔兰家庭，每个家庭2～3代中至少有3例妊高征患者，运用内切酶消化及Southern杂交技术检测结果显示，妊高征患者及其配偶间RFLP无统计学差异，由此推测肾素基因RFLP与妊高征的发生无相关性。对人类的原发性高血压与肾素基因RFLP的相关性研究也得出相同结论。 二、AGT基因突变与妊高征的关系 在RAS中，AGT是肾素作用的唯一底物，其浓度变化可限制RAS的转化速度，因此在这一系统中占重要地位［4］。人血管紧张素原基因（angiotensinogen gene，AOG）是单拷贝基因，位于染色体1q4，与肾素基因位于同一区域，二者具有一定的相关性。该基因由12～13 kb组成，含5个外显子及4个内含子［5］。Jeunemaitre等［6］研究发现，AOG第2外显子704位上的碱基T突变为C，导致AGT第235位的蛋氨酸（Met，M）被苏氨酸（Thr，T）替换，即M235T与原发性高血压的发生有关。由此推测，M235T可能与妊高征的发生也存在相关性。 Ward等［7］分别对美国犹他州的白种人群和日本人群进行了调查，测定妊高征患者和正常初孕妇女血中AGT浓度及基因型，研究结果显示，妊高征患者中T235突变频率（0.65）高于正常初孕妇女(0.4)，且差异有统计学意义；同时妊高征患者AGT浓度也高于正常初孕妇女。另外，该研究结果还显示，在不同人种间T235的突变频率也不一样：日本人群（不论妊高征患者还是正常妊娠妇女）中T235出现的频率均明显高于白种人。Kobashi等［8］对日本妇女中M235T和妊高征的相关性进行病例-对照研究，将139例妊高征患者和278例正常妊娠妇女按年龄、产次配对后，用聚合酶链反应（PCR）技术检测血管紧张素原基因型，结果显示，妊高征患者中T235突变频率（0.80）明显高于正常妊娠妇女（0.56）。这就证实了，在日本妇女中T235与妊高征的发生具有一定的相关性。 但是，Morgan等［9］对英国Nottingham地区48例妊高征患者和84例正常妊娠妇女的研究发现，两组T235等位基因的频率均为0.48。Guo等［10］对澳大利亚和中国（广州，武汉地区）两组人群进行妊高征病例-对照研究，结果提示，虽然在两个不同群体中，T235频率差异有极显著性（澳大利亚人群中T235频率为0.38，而中国为0.75，χ2=31.57，P<0.000 1），但均与妊高征的发生无关。这可能是由于样本量太小，不能保证检验效能；也可能是T235初被发现与原发性高血压的发生有关，而原发性高血压和妊高征在发病机理及病理生理上并不一样。因此认为，T235可能仅与妊高征的一种类型有关，而原发性高血压是这一类型的诱因。 然而M235T在妊高征发病中确切的作用机理并不清楚，他是否对妊高征的发生有直接作用，抑或仅作为其他至今仍未认识的分子变异的标志。通过对人、鼠AGT以及其他血清蛋白酶抑制物如α1-抗胰蛋白酶、血栓素III等的分子序列比较发现，第235位上氨基酸残基的保守性很差，而且该位点远离肾素作用的位点。对体外培养的哺乳动物细胞研究发现，T235突变并不引起RAS反应动力学的改变［11］。因此，人们开始寻找其他的突变位点。Inoue等［12］对48例妊高征患者DNA样本进行检测，发现在1例重度妊高征患者中存在AOG的另一种变异——L10F，即在第二外显子28位上的碱基C突变为T，导致AGT第10位上的亮氨酸(Leu，L)被苯丙氨酸(Phe，F)替代，而这正是肾素作用的位点；并且L10F突变能产生相应的编码蛋白质进入血液，说明有L10F突变的AGT是有功能的。进一步对含L10F突变的RAS动力学研究发现，L10F突变明显提高了肾素和ACE的催化反应效能，故认为L10F与妊高征的发生有直接关系。另外Inoue等［12］又对200例高危产妇及其新生儿进行DNA检测，发现2例新生儿含L10F，其母亲均患有妊高征；而对巴黎245例高血压患者DNA检测，仅发现2例杂合型L10F；日本的研究未发现L10F，估计其发生率不到1%［13］。而且L10F对RAS动力学影响的研究仅限于体外实验，其确切的作用有待于进一步的活体试验来证实。 Inoue等［14］还发现，在AGT近端启动子中，转录起始部位上游第6位上的碱基G被A替代，即A（-6）对基因的基本转录有重要作用，能提高AOG的转录活性。而含G（-6）的启动子与反式作用因子优先结合导致转录活性下降。同时，该突变与T235存在明显的连锁不平衡，即携带T235的基因中97%～99%存在A（-6）。因此，虽然M235T不引起RAS动力学的改变，但由于T235与A（-6）存在紧密连锁，故T235转录活性高于M235。虽不能证实其因果关系，但说明转录水平上的细微差异可能引起生理上的改变，从而导致原发性高血压或妊高征的发生。这从转录水平上分析了T235和A（-6）在妊高征发生中的作用。 AGT的相对分子质量为55×103～60×103，通过凝胶过滤发现的相对分子质量为350×103～500×103的AGT，称为高分子量AGT(high molecular angiotensinogen，HMA），主要存在于羊水和胎盘中，是胎盘中RAS的主要成分。有研究表明，HMA在不同人群中的含量不同（按其占血中总AGT的百分比表示）：男性及生育期妇女为5%，使用雌激素类避孕药妇女为9.6%，正常妊娠妇女为16%，妊高征患者为25%～28%。这说明HMA是妊娠状态下RAS的主要成分，提示它与妊高征的发生有关［15］。HMA可能是由AGT与嗜酸性细胞主要基础蛋白前体（proform of eosinophil major basic protein，proMBP），或二者与补体C3dg以2∶2∶2比例分别通过二硫键共价结合而成。Paule等［16］研究发现，在18、138、232、308位上各含有1个半胱氨酸残基（Cys），其中只有Cys232能与proMBP中的Cys形成二硫键，这是合成HMA所必需的，并且其要受235位上残基的影响。体外实验显示，当232位上的Cys突变为丙氨酸（C232A）时，如果存在M235，则生成的AGT显著下降；如存在T235，则其生成不受影响。而肾素对AGT的水解效能是HMA的1.9倍，说明肾素对HMA的水解效能低。因此可以认为HMA是AGT的贮存形式，尤其是在孕期，可抑制蛋白水解活性，减少AngI的生成。研究还发现，M235T对HMA的产生也有影响，M235生成的HMA［（71.9±3.5）%］比T235高［（57.7±2.8）%］。可以认为M235T在妊高征发生中的作用不是改变肾素反应的动力学参数，而是影响血中HMA的含量从而直接影响AGT的功能。与纯合型T235相比，纯合型M235产生的HMA明显增加；由于肾素对其水解效能低，释放AngI少，从而适应妊娠生理变化，减少妊高征发生的可能性［13］。 目前多数学者认为，M235T与妊高征的发生有关，但其作用机理不清。可能是其他分子变异的一个标志，如A（-6）与T235存在明显的连锁不平衡，前者能提高AOG转录活性。T235远离肾素作用的位点，并不改变肾素反应的动力学参数；而另一突变位点L10F正好处于肾素作用点，使肾素、ACE催化效能提高2倍多。由于HMA的发现，认为T235可能通过直接影响AGT的功能而引起妊高征的发生；M235产生的HMA高于T235，而肾素对HMA的水解效能低于AGT，故有关T235的作用机理仍需进一步研究。
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子宫内膜癌组织与张力蛋白同源第10q染色体丢失的磷酸酶基因第5和第7外显子突变的测定
与张力蛋白同源第10q染色体丢失的磷酸酶基因(phosphatase and tensin homology deleted on chromosome ten,PTEN)是近年来被证实的一种抑癌基因,其突变在多种肿瘤的形成和发展中起着重要作用[1],而与子宫内膜癌关系的研究,国外资料尚少.我们采用聚合酶链反应-单链构象多态分析(PCR-SSCP)和序列分析,对34例原发性子宫内膜癌PTEN基因第5和第7外显子的突变进行检测,旨在探讨PTEN基因突变与子宫内膜癌发生的关系.
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反义寡核苷酸治疗Duchenne型肌营养不良的研究进展
Duchenne型肌营养不良（DMD）是由抗肌萎缩蛋白基因 Dystrophin发生移码突变导致的儿童遗传性致死性肌病。反义寡核苷酸（AON ）靶向外显子中的剪接调控序列可以诱导Dystrophin基因的相应外显子跳读，以恢复dystrophin mRNA阅读框，是目前新的DMD治疗方法。该治疗方法的有效性已在患者来源的肌细胞及动物模型中得到证实。目前，AON靶向治疗DMD已经进入药物临床试验阶段。笔者拟对DMD的分子致病机制、AON治疗DMD的作用机制及其临床试验新进展进行综述，为AON在DMD治疗中的临床应用提供理论依据。
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目标外显子捕获技术在胎儿骨骼畸形基因检测中的应用
目的 探讨利用目标外显子捕获结合高通量测序技术检测胎儿骨骼畸形致病基因的效果.方法 2009年7月至2014年7月在解放军总医院进行产前检查的孕妇均于妊娠18～24周和/或30～32周行常规胎儿超声检查,其中10例孕妇超声检查提示胎儿骨骼畸形,纳入研究.超声引导下行羊膜腔穿刺术或脐静脉穿刺术留取羊水或脐带血,行染色体核型分析.取羊水或脐带血,或引产后取胎儿组织,或分娩后留取新生儿血样,同时留取胎儿/新生儿父母的静脉血,提取DNA,利用目标外显子捕获结合高通量测序技术进行248种骨骼畸形相关基因的筛查,对可疑位点进行一代测序验证.结果 10例骨骼畸形胎儿染色体核型分析均未见异常.目标外显子捕获结合高通量测序技术表明其中3例胎儿存在Ⅰ型胶原α1链(collagen,type Ⅰ,alpha-l,COL1A1)基因出现杂合突变,分别为c.3307G＞A、c.1706G＞C及c.2101G＞A.胎儿父母双方均进行了基因组DNA一代测序,未发现突变.3例胎儿检出成纤维细胞生长因子受体3(fibroblast growth factor 3,FGFR3)基因杂合突变,其中2例为c.1138G＞A,另一例为c.1118A＞G.1例胎儿检出埃利伟综合征(Ellis-van Creveld syndrome,EVC)基因c.884C＞G和c.982C＞T复合杂合突变,一代测序证实2个突变位点分别来自于胎儿父母.另外3例胎儿未发现明确致病基因. 结论 利用目标外显子捕获结合高通量测序技术可为部分骨骼异常胎儿明确致病基因.
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产前基因诊断白化病携带者一例
患者32岁,孕2产0,宫内妊娠19周,因孕妇本人系白化病患者,要求做产前基因诊断,于2003年11月17日住院.孕妇父母为姨表亲近亲婚配,表型正常,育有男女各一,家族中仅该孕妇为白化病患者,毛发、眉毛、虹膜、皮肤色素均完全缺失,其兄表型正常.考虑孕妇为白化病1型(oculocutaneous albinism type Ⅰ,OCA1)可能性大,故于孕早期提取了孕妇及其母外周血DNA,针对酪氨酸激酶(tyrosinase,TYR)的基因序列,设计了八对引物,扩增该基因的全部(5个)外显子,并对扩增产物进行了基因序列的测定(由中国北方基因中心诺赛基因测序部完成).
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X-连锁脊柱骨骺发育不良家系孕早期产前诊断一例
2007年本实验室对1例X-连锁脊柱骨骺发育不良家系(X-linked spondyloepiphyseal dysplasia tarda,X-SEDL)进行基因诊断[1],确诊该家系的先证者(图1:I:1)为位于染色体Xp22.2的SEDL基因的4号外显子c.209G＞A突变致病,其女儿(图1:Ⅱ:1)为该致病基因突变携带者(c.209G/A杂合突变).2008年,该女性携带者于妊娠19周时曾在本院对胎儿(图1:Ⅲ:1)采集的羊水细胞进行基因诊断,证实为男性胎儿伴遗传突变基因而引产.此次妊娠11周时要求在孕早期对胎儿(图1:Ⅲ:2)进行产前诊断.签署手术知情同意书后,行绒毛膜穿刺术取绒毛组织.部分绒毛组织标本经常规细胞培养、收获制片后G显带染色体核型分析.部分绒毛组织提取基因组DNA,进行Y染色体性别决定基因(sex determining region of Y chromosome,SRY)检测,判断性别,聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)条件参照文献[2].参照相关研究[1]直接PCR扩增SEDL基因4号外显子,PCR产物经琼脂糖凝胶电泳、回收纯化后进行DNA序列分析.同时选择Xp22区域内位于SEDL基因附近的4个短串联重复(shorttandemrepeat,STR)位点(包括DXYS10085、DXYS10092、DXYS10093和DXYS233)进行PCR扩增检测,PCR扩增引物及反应条件见参考文献[3],进行单体型分析.
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妊娠期糖尿病脂联素水平与胰岛素抵抗
脂联素(adiponectin)是近年来发现的新型脂肪激素,由脂肪细胞特异性分泌.脂联素是一种血清含量相对丰富的蛋白,约占血清总蛋白的0.01%,其基因位于染色体3q27,包括分子量从18～4277 bp的三种外显子和大小为0.8 bp和12 bp两个内含子,基因全长17kb.
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目标外显子捕获技术在初级纤毛相关疾病基因检测中的应用
目的 探讨利用目标外显子捕获结合高通量测序技术检测初级纤毛相关疾病的致病基因. 方法 采取2009年7月至2014年12月在解放军总医院收集的6例初级纤毛相关疾病疑似病例(包括婴儿型多囊肾、麦克尔综合征、Joubert综合征等)先证者组织或脐带血及其父母外周肘静脉血样.设计了包含113个基因、针对初级纤毛相关疾病的目标外显子基因捕获试剂盒,组织或血提取DNA后,利用该试剂盒结合高通量测序技术,进行初级纤毛相关疾病致病基因的筛查,对可疑位点进行一代测序验证. 结果 5例先证者检测出致病基因,其中PKHD1基因突变2例(例1突变碱基位点为c.6091delG、c.865delC,例2突变碱基位点为c.l1042T＞G、c.5137G＞T);TCTN2基因突变l例(例3),突变位点为c.343G＞T、c.1540C＞T;CEP290基因突变l例(例5),突变位点为c.7328_7332del、c.4897C＞T.上述基因突变均为复合杂合子.TME M67基因1例(例4),突变位点为c.1645C＞T,为纯合子.一代测序证实这些突变分别来自于其父母.1例先证者(例6)未发现明确致病基因.6例染色体核型分析均未见异常. 结论 利用目标外显子捕获结合高通量测序技术可为5例初级纤毛相关疾病家庭明确致病基因,从而有助于再次妊娠的遗传咨询及产前诊断.
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妊娠期糖尿病胎盘中性激素结合球蛋白的表达及其意义
性激素结合球蛋白(sex hormone binding globulin,SHBG)是一种能结合性激素的球蛋白,基因编码区位于第17对染色体的短臂(p12-13),由8个外显子和7个内含子组成,长约3 kb[1],具有多态性,在不同组织中有不同程度的表达,除能特异性的结合并转运性激素外,还具有介导激素信号传导和类激素样作用.近研究表明,SHBG在妊娠期糖尿病(gestational diabetes mellitus,GDM)发病中起重要的调节作用[2-3].SHBG主要由肝脏组织细胞合成和分泌,但有研究表明正常人胎盘组织及体外培养滋养细胞中也存在SHBG的表达和分泌[4-6].本研究采用免疫组织化学方法和逆转录-聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)技术分别检测GDM胎盘组织中SHBG蛋白质和mRNA的表达,以探讨SHBG的变化及其与GDM发病的关系.
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伴呼吸窘迫脊髓性肌萎缩1型
第一次查房入院第1天。住院医师汇报病史：患儿,女,2岁2个月,因“反复出现气促、呼吸困难1年余”收治入院。患儿1岁因“无明显诱因反复出现咳嗽、呈阵发性咳嗽、四肢肌力偏低(双上肢肌力4级、下肢肌力3级),双足内翻至2岁仍不会站立、行走。外院肌电图检查提示骨骼肌神经源性损害,累及上下肢,考虑为脊髓性肌萎缩症,行 SMN1基因检查未检出7、8外显子大片段缺失或重复。在1岁6个月因”肌无力、支气管肺炎、呼吸衰竭,X 线胸片显示左侧及右上肺肺不张、血气分析显示2型呼吸衰竭,进行气管切开连接呼吸机给予呼吸机辅助通气,外院仍不排除脊髓性肌萎缩症,并进行 SMN1基因7、8外显子点突变筛查,结果为阴性。随着患儿呼吸困难加重,出现呼吸窘迫、呼吸衰竭,今为进一步明确病因收治我院重症监护室。
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β珠蛋白基因座控制区缺陷研究进展
人类β珠蛋白基因(简称β基因)位于第11号染色体短臂上,总长度为60Kb,包括ε、Gγ、Aγ、δ和β及两个假基因ψβ2和ψβ1,它们紧密连锁,其边接顺序为5＇-ψβ2-ε-Gγ-Aγ-ψβ1-δ-3＇.每个β基因有两个非编码区(内含子)IVS-1和IVS-2,其长分别为130bp和850bp,它们分别插入到编码区(外显子)的相应于第30与31和104与105密码子的DNA序列之间.编码区编码β珠蛋白的146个氨基酸.
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幼年起病的2例晚发型糖原贮积症Ⅱ型/Pompe病临床和基因分析
目的 对中国大陆地区幼年起病的晚发型糖原贮积症Ⅱ型(GSD Ⅱ,Pompe病)患者进行临床和基因突变分析.方法 对2例幼年起病的Pompe病患儿进行临床分析,提取患儿皮肤成纤维细胞及其父母的外周血DNA,应用聚合酶链反应(PCR)扩增α-1,4-葡萄糖苷酶的19个外显子,测序,进行突变检测.同时对50例健康对照100个等位基因进行15号外显子的PCR扩增,测序,确定突变特征.结果 1例临床表现为进行性近端肌肉无力,肌张力低下;1例表现为肌容积减少,呼吸肌受累;2例均有肌酸磷酸肌酶升高,肌电图提示肌源性损害,肌活检呈空泡性改变,皮肤成纤维细胞α-1,4-葡萄糖苷酶活性测定明显低下.突变检测:测序发现4个杂合错义突变,例1为c796 C＞T,p.266Pro＞Ser;c2105 G＞A,p.702Arg＞His;例2为c2132 C＞G,p.711Thr＞Arg;c2167 G＞A,p.723Val＞Met.其中后3个为新突变,50例健康对照100个等位基因测序未发现同样突变.结论 幼年起病的Pompe病患儿临床表现存在差异,呼吸肌受累情况影响其预后;检测到3个错义新突变,可能为致病突变.
