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幽门螺杆菌可塑区的结构及功能研究进展
比较菌株H. pylori J99和26695的基因组序列时发现,约占3~4%基因组的基因片段G+C含量为34~35%,低于H. pylori整体G+C含量(39%),被命名为可塑区。可塑区具有明显的菌株特异性,推测与其致病性关的新基因可能位于该区[5-7]。研究表明可塑区中部分基因已经被确认为H. pylori新的致病标志,流行病学调查发现他们与cagPAl有显著的相关性,并且与临床上的胃溃疡和胃癌的发生及发展有关[8-9]。
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核酸疫苗--未来的疫苗
随着分子免疫学与基因治疗的进一步开展,新一代疫苗也随之涌现.这包括:合成肽疫苗,重组病毒疫苗及核酸疫苗,其中核酸疫苗为引人注目.核酸疫苗是指由编码能引起保护性免疫反应的病原体抗原的基因片段和载体质粒构成的重组质粒,直接导入动物细胞内,从而通过宿主细胞的转录系统合成抗原蛋白,诱导宿主产生对该抗原蛋白的免疫应答,达到免疫的目的.本文对核酸疫苗的构建、作用机制及应用前景作一简要的概述.
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110例乙型肝炎患者外周血单个核细胞中HBV-DNA X基因片段检测分析
近年来,我们应用PCR及Shouthern Blot 技术检测慢性乙型肝炎(CH)、肝硬化(HC)和肝细胞癌(HCC)患者外周血单个核细胞(PBMC)HBV-DNA X基因片段(下称HBVX基因),旨在探讨其与HCC发病的关系.
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转基因食品检测方法
转基因食品(genetically modifiedfoods,GMF),是由细胞DNA中经非生殖方法插入了特定外源基因或基因片段,并获得某种良好性状的动、植物或微生物制成的食品.
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HCMV感染与人神经胶质瘤相关性研究
目的:探讨人巨细胞病毒(HCMV)与胶质瘤的相关性,为 HCMV 感染在胶质瘤发病中所产生的作用提供相关依据。方法使用 HCMV 糖蛋白 B(uL55)基因来设计引物,对68例不同级别的少突胶质细胞瘤、星形细胞瘤组织以及65例外伤脑组织的 DNA 采取巢式 PCR 检测,对结果进行比较分析。结果68例患者中,63例检测出 HCMV 基因,65例正常脑组织中未检测出 HCMV 基因,2组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论少突胶质细胞瘤、星形细胞瘤患者存在 HCMV的感染,其感染的可能在胶质瘤的发生以及发展中起重要作用。
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10例患者HCV不同基因片段与临床指标相关性探讨
丙型肝炎病毒感染后易慢性化,并与肝硬化(LC)和肝细胞癌(HCC)的发生关系密切.笔者利用基因重组表达的丙型肝炎病毒不同区(HCV-C、NS3、NS4、NS5)特异性抗原,以间接ELISA法检测丙型肝炎病毒感染人体血液中不同区特异性抗体,并结合其他生化指标的变化加以分析,旨在更好地判断患者病情发展情况,为临床提供可靠的实验诊断依据.
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B7-1、B7-2联合应用治疗小鼠肝癌的研究
我们应用含小鼠B7-1、B7-2基因片段的真核表达载体PCI-neo-B7-1和PCI-neo-B7-2分别转染H22肝癌细胞,探讨B7-1、B7-2在肿瘤免疫过程中的不同功能与作用.
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血管内皮生长因子探针与磁性纳米粒子的连接与应用
磁性纳米粒子(MNP)是一种新型的纳米磁性材料,具有与大块磁性材料不同的小体积效应与超顺磁性,在其表面偶联上特定的基团或基因片段,用于物质的分离和靶向性定位[1].我们在MNP表面偶联上能与VEGF(血管内皮生长因子)特异结合的寡核苷酸探针,制备成PMNP(探针连接的磁性纳米粒子),用于VEGF质粒的纯化.
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p16基因转染对膀胱癌细胞系BIU-87体外生长的抑制作用
为探讨p16基因在膀胱癌发生、发展过程中的作用及其在膀胱癌基因治疗中的应用前景,我们将野生型p16基因导入缺失p16基因的BIU-87细胞中,观察p16基因的肿瘤抑制功能.一、材料与方法1.p16基因重组表达载体的构建与鉴定:质粒pGRE5-1含全长0.96 kb的人p16cDNA基因片段,用EcoRI和XhoI双酶切pGRE5-1分离出p16cDNA基因片段,将其插入真核表达载体pcDNA3(5.4kb)的EcoRI/XhoI酶切位点间,构建成重组质粒,命名为pcDNA3-p16,酶切、电泳鉴定.
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血管抑素K(1~3)基因片段的克隆与序列测定
我们用自己设计的一对引物,应用PCR法成功获得血管抑素(angiostatin)K(1~3)基因片段,为进一步研究其表达和实体瘤抗血管生成治疗创造条件,现将结果报道如下.
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轻型甲型H1N1流感6例报告
甲型H1N1流感为一种新型呼吸道传染病,其病原为新甲型H1N1流感病毒株,病毒基因中包含有猪流感、禽流感和人流感3种流感病毒的基因片段.甲型H1N1流感病人为主要传染源,无症状感染者也具有传染性.目前尚无动物传染人类的证据.2009年9月11日,我院收治首例甲型H1N1流感患者,至2009年10月1日共收治甲型H1N1型流感轻型患者6例.具体报告如下.
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常氧及慢性缺氧的肺动脉内皮细胞急性缺氧后血栓素合酶(TXS)基因及PGI2、TXA2代谢产物的变化
目的:前列环素(PGI2)和血栓素A2(TXA2)均是花生四烯酸经环氧合酶(COX)途径生成的代谢产物,分别由前列环素合酶和血栓素合酶催化产生.本实验动态观察了常氧及慢性缺氧的肺动脉内皮细胞血栓素合酶(TXS)基因表达的变化及培养基上清中PGI2及TXA2的代谢产物6-Keto-PGF1α、TXB2随急性缺氧的变化.方法:采用连代常氧和缺氧培养的肺动脉内皮细胞,分别在2、4、6代给予急性缺氧刺激6 h,分为四组:常氧组(N)、急性缺氧6 h组(NH)、慢性缺氧后复氧12 h组(H)、慢性缺氧后复氧12 h再急性缺氧6 h组(HH).提取各组总RNA.将载有大鼠血栓素合酶基因片段的PBR322质粒,转化大肠杆菌HB101,扩增后提取质粒,经酶切、电泳后回收TXS 0.5 kb的cDNA片段作为探针,地高辛随机引物法标记探针作斑点杂交.以β-actin为对照,目的基因与对照的积分光密度比值作半定量分析.用放免法测定培养基上清中PGI2、TXA2代谢产物6-Keto-PGF1α、TXB2的变化.结果:常氧培养的PAEC急性缺氧后TXS mRNA、6-Keto-PGF1α、TXB2均增加,TXA2/PGI2在2、4代减少,第6代基本不变;慢性缺氧培养的PAEC急性缺氧后,6-Keto-PGF1α在2、4代减少,第6代不变;TXS mRNA、TXB2第4代增加,第6代减少,TXA2/PGI2在2、4代增加,第6代减少.结论:慢性缺氧改变了急性缺氧时肺动脉内皮细胞血栓素合酶(TXS)基因表达及TXA2与PGI2的比例,可能影响了肺动脉高压的发展及机体对慢性缺氧的习服过程.
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逆转录病毒介导的反义C-MYC的抗小鼠L6565白血病作用
目的和方法:L6565白血病是我国特有的T-S-Z淋巴瘤/白血病系统中的实验系统的瘤株之一,经检测c-myc基因高表达.本文针对c-myc基因构建一个含有小鼠反义c-myc基因片段的逆转录表达载体pGAM,用磷酸钙沉淀法将pGAM导入表达包装细胞PA317,经筛选获得病毒效价5×105 cfu/mL的病毒包装细胞,利用pGAM病毒成功的感染了L6565细胞,得到了G418抗性细胞L6565-as,经PCR分析病毒载体序列稳定地整合到PA317和L6565-as中,能够长期表达.结果:L6565-as和对照细胞光镜下形态均为圆形或椭圆形,细胞大小不一,但L6565as细胞核浆比例比对照细胞小.生长曲线和MTT法显示,L6565-as生长与对照细胞相比,生长明显受到抑制.流式细胞仪检测细胞周期:L6565as细胞G0-G1为45%,PGNsC对照和空白对照细胞分别为26%和29%.软琼脂克隆发现L6565as细胞形成克隆数量明显减少,为30个克隆/5000个细胞,空载病毒和空白对照分别为103和106个克隆/5000个细胞,二者有显著差异(P<0.001).免疫组化检测L6565as细胞c-myc蛋白表达为弱阳性(+),而对照细胞为强阳性(+++).Northern blot检测发现L6565as细胞c-myc mRNA表达比对照减少.结论:反义c-myc基因抑制了L6565白血病细胞的DNA合成,减缓了细胞的生长速度,并且使细胞恶性程度降低.本研究同时也是对我国T-S-Z系统白血病研究的一种深入.
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反义阻断hREV3基因表达抑制MNNG诱发的非定标性突变的发生率
目的:REV3基因是酵母中发现的具有跨损伤修复活性的DNA聚合酶,参与真菌易误性复制后修复通路.本研究采用反义核酸技术建立hREV3基因表达阻断的人胚肾细胞系,研究它与非定标突变形成的关系.方法:1.hREV3基因片段从pBS-hREV3反向重组入载体pMAMneo-amp 构建真核反义诱导表达质粒.2.重组质粒转染HEK293细胞,G418全培养基筛选建立hREV3基因表达阻断细胞系.
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赖型钩端螺旋体与非致病钩端螺旋体差异基因片段的筛选与鉴定
目的:利用抑制消减杂交技术(suppression subtractive hybridization, SSH),比较致病与非致病钩体之间基因组差异,筛选致病钩体特有的基因片段,以分析钩体毒力相关基因.方法:以赖型钩体017株为tester,非致病性patoc Ⅰ株为driver进行SSH.用3种四碱基内切酶RsaⅠ、HaeⅢ、AluⅠ分别酶切基因组DNA,选择适内切酶消化产物(小于2 kb的片段),连接特殊设计的Adaptor进行消减杂交的PCR,得到消减混合物,与T/A克隆载体连接,转化JM109建立差异消减文库,经PCR和Southern blotting筛选鉴定阳性克隆,进而对部分片段进行测序和相似性分析.结果:AluⅠ适于将钩体酶切成用于SSH技术的小片段;经PCR和Southern blotting筛选鉴定得到25个致病钩体中特异存在的阳性克隆,阳性率达到62.5%;序列测定显示插入片段大小为149-1 506 bp,平均480 bp, GC含量从26.30%到51.98%不等,平均36.63%;相似性分析其中6个片段无任何相似性匹配,18个有一定相似性的序列可分为两类:与外膜蛋白或假想蛋白相关和与生化代谢修饰的酶相关.20个序列已被GeneBank收录,收录号分别为AF300873-AF300877,AF325807-AF325821.结论:SSH是一种有效、灵敏的、高特异的比较分析基因组差异的方法,对钩端螺旋体致病基因的筛选、基因组分化、分子遗传研究等具有重要意义;利用SSH技术筛选得到的致病钩体特有消减片段很可能与致病钩体的分子进化和毒力有关,也为我国特有微生物的基因资源开发和基因工程疫苗的设计提供给了重要信息.
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表皮生长因子与胃肠病临床
表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)初由美国化学家Cohen首先从小鼠颌下腺提取,并于1962年被提纯,于1995年1月12日被基因库注册.人EGF是由53个氨基酸残基组成的小分子多肽,分子量为6045Da,其基因片段是长度为179bp的DNA,现已人工合成并商品化生产.
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中国精神病人外周血博尔纳病病毒RNA的检测
博尔纳病病毒(Borna disease virus,BDV)是一种非分段的、负链、单股的RNA病毒.具有很强的嗜神经性,能感染从鸟到灵长类的广泛动物种类并引起以中枢神经系统功能障碍为特征的博尔纳病(Boma disease,BD).目前我国大陆尚无国人BDV感染的研究报道.我们采用套式(nested)RT-PCR结合荧光定量(FQ)PCR检测精神病人外周血单个核细胞(PBMC)中BDV P24基因片段.
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HIV-1基因限制性显示片段的克隆与序列分析
目的克隆并分析经限制性显示-聚合酶链反应RD-PCR)扩增的HIV-1基因片段.方法将所有HIV-1基因片段分成10组并进行RD-PCR扩增,纯化各组PCR产物后将之克隆至T载体上并快速鉴定.从阳性克隆中提取质粒,扩增靶片段并测序.结果序列分析表明,所扩增的片段均属于HIV基因.结论改良了一种多片段的克隆及鉴定方法并用于限制性显示扩增片段的克隆.
关键词: HIV-1 基因片段 克隆 序列分析 限制性显示-聚合酶链反应 -
核酸杂交检测HBV前C区变异
我国是乙型肝炎病毒(HBV)感染的高发区,大约有50%左右的人群受过HBV的感染.近年来发现,HBV感染后临床产生的不同疾病谱与病毒本身密切相关[1],因此, HBV前C区基因变异被广泛研究.整合在肝细胞染色体中的HBV-DNA拷贝数较少,并且常常出现基因片段的丢失,不易被常规方法检测出来.本文报道核酸杂交法检测HBV前C区基因变异的方法及结果.
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TTV的研究近况
1999年10月日本学者Nishizawa等[1]应用代表性差异分析(representational difference analysis)技术,从1例输血后肝炎患者的血清中克隆出一个500 bp片段(N22) ,并证实了N22与输血后肝炎有高度特异性,于是把该基因片段可能代表的病毒以患者的名字(TT)命名为TTV,同时也具经输血传播的病毒(transfusion transmitted virus)的含义. 1997年底,Okamoto等测定了TTV全基因序列.TTV是一个3.7 kb无包膜的单股DNA病毒,含有ORF1与ORF2两个开放读码框,分别编码770与202个氨基酸.蔗糖浮力密度为1. 26 g/cm3,氯化铯浮力密度为1.31~1.32 g/cm3,TTV全基因为3 739个核苷酸,其中A占31%(1 163),C占26%(954),G占23%(842),T占20%(780),有12个TATA序列,两个多腺苷酸化信号(AATAA),这些均属微小病毒科的病毒学特征.