世界华人消化杂志
World Chinese Journal of Digestology 세계화인소화잡지
- 主管单位： 华人消化杂志；新消化病学杂志
- 主办单位： 山西省科学技术厅
- 影响因子： 0.00
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 14-1260/R
- 国内刊号： 李军亮
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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人食管癌组织中β1-整合素mRNA的表达及其意义
目的:研究β1-整合素(β1-integrin)在人食管癌组织中的表达及其与食管癌的临床病理关系.方法:采用RT-PCR方法检测30例人食管癌组织及癌旁正常食管组织中β1-integrin的表达.结果:食管癌组织及癌旁正常食管组织中都有不同程度β1-integrin的表达,并且前者明显高于后者(1.205±0.379 vs 0.470±0.166,P=0.003);伴有淋巴结转移者食管癌组织β1-integrin表达量明显高于无转移者(1.534±0.229 vs 0.998±0.160,P=0.023).随食管癌分期增高,β1-integrin mRNA表达量也不断增高.结论:β1-integrin可能在食管癌细胞的恶性生物学行为中具有重要的作用.
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不同Nevin分期原发性胆囊癌的超声诊断
目的:探讨超声影像在不同Nevin分期原发性胆囊癌的诊断价值.方法:对我院近10 a经手术和病理确诊的553例原发性胆囊癌病例进行回顾性超声影像分析.结果:对Nevin分期中的Ⅰ和Ⅱ期原发性胆囊癌超声诊断符合率为零,Ⅲ期、Ⅳ期、Ⅴ期原发性胆囊癌的超声诊断符合率分别为3.61%,50.00%,99.49%.结论:超声对Nevin Ⅰ和Ⅱ期原发性胆囊癌难以做出准确诊断;对Ⅲ期原发性胆囊癌的诊断率较低,但对囊壁局限性增厚伴有囊内结石时需要警惕;对Ⅳ和Ⅴ期原发性胆囊癌具有较高的诊断符合率.
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持续释放人血管抑素的基因修饰化工程细胞hE/293细胞株的建立
目的:在人胚肾HEK293细胞中转染真核表达载体pSNA2/hEndostatin(hEndostatin,人血管抑素),建立能稳定分泌hES的基因工程细胞株.方法:将含有IL-2分泌肽的人endostatin(ES)全长cDNA插入真核表达载体pSNA2,产生重组质粒pSNA2/hEndostatin;利用阳离子脂质体介导将其转染入HEK293细胞中;用G418筛选出阳性克隆细胞,将其命名为hE/293细胞.用Western blot法检测hE/293细胞培养上清中分泌的hES蛋白.血管内皮细胞(ECV304)增殖抑制试验及鸡胚尿囊膜试验观察其分泌的hES蛋白的抗增殖活性.结果:经过双酶切和DNA测序证实构建出了含hES基因的真核表达载体.通过G418抗性筛选筛选出稳定表达hES的细胞株3株,将其命名为hE/293细胞;Western blot检测该细胞株培养上清中存在分子量为20 kDa的ES蛋白;ECV304增殖抑制试验显示,与HEK293细胞组相比,hE/293细胞组分泌的ES蛋白对bFGF刺激的血管内皮细胞增殖有明显的抑制作用(48 h:0.125±0.007 vs 0.159±0.020,P＜0.01;72 h:0.088±0.016 vs 0.249±0.070,P＜0.01);鸡胚尿囊膜试验证实hE/293细胞分泌的ES蛋白可以抑制鸡胚尿囊膜血管生长.结论:所构建的hE/293细胞株可以稳定的分泌hES蛋白,并能抑制ECV304细胞生长及鸡胚尿囊膜血管生长.
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牛磺酸对大鼠移植胰腺缺血再灌注损伤的保护作用
目的:探讨牛磺酸在大鼠胰腺移植中对移植胰腺缺血再灌注损伤的保护作用及其机制.方法:采用大鼠胰十二指肠移植模型.Wistar大鼠30只随机分为三组(n=10):(1)对照组:CMU-l液保存6 h再移植;(2)实验组A:CMU-1液+牛磺酸(5 mmol/L)保存6 h再移植;(3)实验组B:CMU-1液+牛磺酸(10 mmol/L)保存6 h再移植(CMU-1液是本实验室配制的多器官保存液).于移植术后6 h取静脉血作胰腺外分泌功能即血清淀粉酶测定,取胰腺组织作病理检查.通过免疫组化染色观察炎性细胞因子TNF-α及IL-1β表达情况.应用计算机图像分析系统测定其积分光密度值(IOD).结果:移植胰腺在通血后6 h血清淀粉酶均升高,与对照组相比较,加入牛磺酸后淀粉酶升高较对照组降低(911.2±9.9,959.9±12.5U/L vs 1239.5±68.3 U/L,P＜0.05).随着牛磺酸浓度的增大其作用也显著.免疫组化结果显示,移植后6 h胰腺组织TNF-α(12 346.4±4933.69,16 016.33±4592.06 vs 22 039.71±4782.62,P＜0.05及IL-1β(12 417.4±2222.9,15 047.68±4484.4 vs 19 284.46±3178.19,P＜0.05)在各组均表达,但加入牛磺酸后能明显下调TNF-α及IL-1β的表达,各组内的差异具有显著性(P＜0.05).光镜检查可见试验组的移植胰腺炎性改变明显减轻.结论:牛磺酸作为一种细胞保护剂能够抑制TNF-α和IL-1β的产生、抗细胞水肿,减轻胰腺缺血再灌注损伤,减轻胰腺炎症.
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趋化性细胞因子受体CXCR4基因沉默对大肠癌细胞体外侵袭及增殖能力的影响
目的:研究趋化性细胞因子受体CXCR4短干扰RNA(siRNA)对大肠癌细胞系体外侵袭及增殖能力的影响.方法:利用T7 RNA聚合酶体外合成以CXCR4为靶基因的siRNA,用脂质体转染大肠癌SW480细胞,同时设立空白对照组和无关对照组.于转染后48 h采用RT-PCR方法检测CXCR4 mRNA水平,免疫印迹方法检测CXCR4和MT1-MMP的蛋白质水平,Bovden小室模型检测体外侵袭能力的变化,流式细胞术检测细胞周期的分布情况,MTT法测定细胞增殖状况.结果:SW480细胞转染CXCR4 siRNA 48 h后,与空白对照和无关对照相比,CXCR4mRNA水平明显下调(51.53%±6.1% vs 78.4%±3.3%,P＜0.01;51.53%±6.1% vs 87.4%±5.3%,P＜0.01),CXCR4的蛋白质水平明显降低(47.3%±3.7% vs 107.2%±3.6%,P＜0.01;47.3%±3.7% vs 114.7%±4.8%,P＜0.01),MT1-MMP蛋白表达水平也明显下降(43.8%±2.5% vs 64.4%±4.4%,P＜0.01;43.8%±2.5% vs 67.0%±2.9%,P＜0.01),细胞的体外侵袭能力减弱(26.5%±6.1% vs 73.7%±3.4%,P＜0.01;26.5%±6.1% vs 64.5%±5.7%,P＜0.01),细胞周期的分布无明显差异.在无SDF-1存在的情况下,各组细胞的增殖无明显改变;经SDF-1刺激后,各组细胞增殖增加,但CXCR4 siRNA转染组细胞的增殖显著低于空白对照组和无关对照组(24 h:0.55±0.03 vs 0.68±0.06,0.71±0.04,P＜0.05;48 h:0.67±0.04 vs 0.89±0.03,0.94±0.07,P＜0.05;72 h:0.72±0.06 vs 1.36±0.08,1.53±0.07,P＜0.01).以上各指标在空白对照和无关对照之间无显著性差异(P＞0.05).结论:以CXCR4为靶向的siRNA能够有效下调CXCR4基因,降低SDF-1诱导的大肠癌细胞系体外侵袭能力及增殖活性.
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丙酮酸乙酯对急性坏死性胰腺炎大鼠肺损伤的保护作用
目的:观察丙酮酸乙酯(EP)对急性坏死性胰腺炎(ANP)肺损伤大鼠血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)和肺组织高迁移率族蛋白B1(HMGB1)mRNA表达的影响,探讨丙酮酸乙酯治疗急性坏死性胰腺炎肺损伤的机制.方法:逆行性胰胆管注射50 g/L牛磺胆酸钠制作ANP模型.随机分成3组,对照组、ANP组和EP治疗组(40 mg/kg,每隔6 h静脉注射一次).ELISA法检测血清TNF-α和IL-1β水平;半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测肺组织HMGB1 mRNA表达,并观察血氧变化及肺组织的病理变化.结果:ANP组血清TNF-α和IL-1β水平在建模后6 h达高峰,12 h下降,在此两时点治疗组血清TNF-α和IL-1β水平明显低于ANP组(TNF-α:131.6±29.6ng/L vs 196.3±16.3 ng/L,65.0±16.6 ng/L vs 90.2±20.1 ng/L,P＜0.05;IL-1β:194.9±26.8 ng/L vs 223.0±34.8 ng/L,105.2±24.0 ng/L vs 130.4±23.0 ng/L,P＜0.05).ANP组大鼠肺组织HMGB1 mRNA表达水平在ANP后12 h明显升高,至24 h仍维持在高水平.治疗组肺组织HMGB1 mRNA表达水平在各时间点均明显低于ANP组(0.68±0.11 vs 0.88±0.11,0.81±0.11 vs 1.04±0.10,1.08±0.08 vs 1.33±0.15,P＜0.05),且同期肺损伤比ANP组轻.治疗组PaO2均明显高于ANP组.结论:丙酮酸乙酯能显著抑制TNF-α、IL-1β和HMGB1等早晚期炎症因子,改善低氧血症,对ANP肺损伤有明显保护作用.
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白花蛇舌草总黄酮对肝癌的体内外抑制作用及对小鼠移植性肝癌H22细胞增殖周期、凋亡、免疫环境的影响
目的:研究白花蛇舌草总黄酮(FHD)对人肝癌细胞SMMC-7721,BEL-7402的体外抑制作用,对小鼠移植性肝癌H22的体内抑制作用和对其增殖周期、凋亡、免疫功能的影响.方法:MTT法评价FHD在0,5,10,50,100mg/L浓度下,于24,48,72 h对人肝癌细胞SMMC-7721,BEL-7402的抑制率变化.昆明♂小鼠60只,随机取10只为正常对照组,余接种H22瘤株,随机分为模型对照组、5-FU阳性对照组(30 mg/kg)和高中低剂量FHD给药组(剂量分别为25,50,100 mg/kg),腹腔给药10 d后,比较各组瘤质量抑制率、H22细胞周期分布及凋亡率,比较各组荷瘤小鼠的胸腺指数(×10-3)、脾脏指数(×10-3)、脾淋巴细胞转化率和血清TNF-α、IFN-γ水平(ng/L).结果:FHD对SMMC-7721、BEL-7402细胞具有体外抑制作用,且呈剂量依赖性和时间依赖性(P＜0.05).与模型对照组相比,25,50,100 mg/kg FHD显著抑制小鼠移植性H22肿瘤(P＜0.01),使G0/G1期H22细胞比例逐渐增加(30.36%±5.72%,32.83%±6.67%,39.67%±8.01% vs 25.62%±4.36%,P＜0.05或P＜0.01),G2/M期细胞比例逐渐下降(7.65%±2.32%,6.33%±3.43%,2.22%±0.98% vs 11.13%±2.77%,P＜0.05或P＜0.01),促进肿瘤细胞凋亡(2.41%±0.42%,2.22%±0.33%,2.07%±0.40% vs 1.47%±0.66%,P＜0.01),降低荷瘤小鼠脾脏指数(51.43±8.31,47.43±7.89,48.64±9.35 vs 67.63±7.44,P＜0.01),升高胸腺指数(33.36±4.09,40.35±5.79,34.57±6.56 vs 22.43±4.52,P＜0.01)和脾淋巴细胞转化率(10.83%±3.75%,11.33%±5.04%,13.58%±4.62% vs 9.35%±2.02%,P＜0.05),并提高血清TNF-α(257.56±42.29,386.36±25.97,364.52±23.62 vs 101.43±24.72,P＜0.01)、IFN-γ水平(355.83±35.74,392.31±25.17,357.38±34.82 vs 172.35±29.02,P＜0.01).结论:FHD在体外、体内均具有抑制肝癌细胞的作用,此作用与阻滞肿瘤细胞增殖周期、促进肿瘤细胞凋亡、调节机体免疫环境有关.
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β-榄香烯对实验性肝纤维化大鼠TGF-β1、α-SMA、Col-Ⅰ表达的影响
目的:观察β-榄香烯对四氯化碳肝纤维化大鼠TGF-β1、α-SMA、Col-Ⅰ表达的影响.方法:采用CCl4皮下注射诱导Wistar ♂大鼠肝纤维化模型,用β-榄香烯0.1 mL/100 g剂量每天腹腔注射8 wk后,用苏木精-伊红染色(HE)和胶原纤维(Masson)染色观察大鼠肝脏病理变化,酶动力法检测肝功能,SP免疫组化法检测肝组织中α-肌动蛋白(α-SMA)、转化生长因子β1(TGF-β1)、Ⅰ型胶原(Col-Ⅰ)表达的变化,样本碱水解法检测肝组织中羟脯氨酸(HYP)的含量.结果:8 wk后,正常组、模型组、对照组及治疗组肝组织胶原纤维面积百分比分别为1.22%±0.24%,7.47%±0.81%,5.57%±0.78%,4.33%±0.48%,治疗组与模型组、对照组相比均有显著差异(P＜0.01),并且治疗组肝组织纤维化程度分级较模型组逐渐好转,胶原纤维所占面积显著缩小;在肝组织中测得的Col-Ⅰ阳性面积比分别为3.022%±0.553%,9.998%±1.431%,7.554%±0.914%,4.587%±1.008%,治疗组与模型组、对照组相比均有显著差异(P＜0.01).α-SMA和TGF-β1在治疗组和模型组肝组织中的表达也有显著差异(3.172%±0.542% vs 5.605%±1.315%,P＜0.01;2.868%±0.554% vs 5.653%±0.9%,P＜0.01).结论:β-榄香烯对四氯化碳肝纤维化大鼠具有拮抗作用,主要是通过抑制肝星状细胞激活,降低TGF-β1,α-SMA在肝组织中的表达,减少细胞外基质在肝脏中的沉积,从而延缓肝纤维化的进程.
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幽门螺杆菌BALB/c小鼠适应性菌株的驯化及模型建立
目的:通过体内连续传代获得幽门螺杆菌(H pylori)的BALB/c小鼠适应性定植菌株并建立稳定的感染模型.方法:以H pylori蒙古沙鼠适应株GS10连续传代感染BALB/c小鼠,每次感染20只,感染后4wk进行微生物学检查(分离培养、直接涂片染色镜检、快速尿素酶试验、PCR鉴定),观察H pylori的定植情况,计算每批动物的感染率,直至感染率稳定在80%以上,然后对已稳定感染的小鼠胃黏膜组织进行H pylori定量培养及病理学检查.结果:随着H pylori菌株GS10在BALB/c小鼠内的连续传代,感染率逐渐升高.GS10株初次感染率仅为11.1%,传代至第6代(BS6株)以后,感染率稳定在80%以上;BALB/c小鼠适应株BS8感染小鼠后4 wk在胃窦、胃体和胃底的定植密度(CFU/g组织)的常数对数均值分别为5.32±0.88,4.14±1.05和1.05±2.25,与SS1的定植密度相比,相差不显著(P＞0.05).感染鼠病理学检查在胃窦黏膜上皮细胞间及固有层中发现大量炎症细胞浸润;在胃窦及幽门部上皮细胞表层黏液、胃腺窝中见到大量H pylori存在.结论:经过连续传代感染,驯化出一株高定植力和感染率的H pylori BALB/c小鼠适应株,并成功建立稳定的H pylori小鼠感染模型.
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Toll样受体及其基因多态性与感染性疾病关系的研究进展
Toll样受体是近年来发现的跨膜信号传递受体,他作为一种重要的模式识别受体(PRRs)在先天免疫中通过对病原体相关的分子模式(PAMPs)的识别发挥作用,通过刺激信号的级联反应诱导炎症因子和细胞因子产生,在抗感染中起重要作用.基因多态性影响机体对疾病的遗传易感性,TLRs的位点多态性与炎性应答损伤和感染性疾病的遗传易感性相关.目前多数研究表明TLR4的Asp299Gly和Thr399Ile,TLR2的Arg753Gln和Arg667Trp多态性与感染性疾病的发生相关,其他TLRs的基因多态性也有研究.本文就TLRs家族的功能及其基因多态性与感染性疾病的关系作一综述.
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NF-κB与细胞凋亡
NF-κB家族及其介导的细胞信号转导通路在细胞凋亡中的作用是国内外研究的热点.研究发现,NF-κB信号转导途径可以通过多种途径抑制细胞凋亡,与IAPs家族、Bcl-2家族、TRAF家族、JNK、FLIP、A20、Gadd45β、MnSOD等有很大关系,但其具体机制尚未完全清楚.通过抑制NF-κB信号转导途径的激活,促进细胞凋亡,可能成为治疗免疫、炎症、肿瘤等疾病的新途径.此外,近年的研究证明NF-κB尚具有促细胞凋亡的作用,并发现NF-κB亚单位的种类及数量在细胞凋亡中起着决定性的作用,为疾病的治疗提供了新的策略.本文就NF-κB与细胞凋亡关系的研究进展作一综述.
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炎症性肠病与肠道细菌研究进展
炎症性肠病(inflammatory bowel disease,IBD)包括溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)和克罗恩病(Crohn's disease,CD).其发病机制至今仍不清楚,可能的病因包括由基因决定的宿主易感性、黏膜免疫和肠道微生态环境三者的相互作用.近年来随着微生态学的发展,肠道菌群与IBD发病的关系日益受到关注.关于肠道病原微生物在IBD发病机制及其引起的一系列免疫学、微生态学、病理生理等方面的变化出现了研究和报道,同时微生态制剂在肠道免疫调节、控制炎症反应等方面的优点已有许多动物实验及临床应用证明,其中微生态制剂之一益生菌在IBD应用较普遍,本文就IBD与肠道菌群研究进展及益生菌制剂治疗IBD作一综述.
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肠系膜血管缺血外科诊治进展
肠系膜血管缺血(acute mesenteric ischemia,AMI)是潜在致命的血管性急腹症.死亡率很高,且发病率不断上升.形成AMI的原因是多样的,临床经过和预后取决于基础的病理状态.尽管对肠系膜缺血病理生理研究的深入和现代治疗方法上的改进,存活率没有显著的提高.AMI仍然存在诊断上的挑战,延误诊断会提高死亡率.临床表现在大多数病例没有特征性.当肠缺血迅速的发展为不可逆的肠坏死,随后出现严重的代谢紊乱,后发展成为多器官功能不全以致死亡.及时地诊断和处理,快速有效地恢复肠系膜血流是改善预后的关键.
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转铁蛋白阿霉素脂质体的制备及其对人肝癌细胞系的杀伤活性
目的:利用正常肝细胞和肝癌细胞表面转铁蛋白受体以及亲和力的差异,用转铁蛋白修饰脂质体,使脂质体具有导向肝癌细胞的靶向性,分析其对肝癌细胞系的杀伤作用.方法:超声法制备阿霉素脂质体,暴露脂质体上的巯基,然后用双功能交联剂N-琥珀酰亚胺-3-(2-吡啶二硫代)丙酸酯(SPDP)交联HTf(Fe)2和脂质体,制备成HTf(Fe)2-阿霉素脂质体.用MTT法分析HTf(Fe)2-阿霉素脂质体对人肝癌细胞系SMMC-7721的杀伤力.结果:实验检测HTf(Fe)2与脂质体的交联率为73.5%,电镜观察修饰后的脂质体呈单层状,平均直径56±38 nm,未用HTf(Fe)2修饰的脂质体直径平均为54±30 nm,两者无显著差异.SPDP修饰和脂质体交联不影响HTf(Fe)2的活力.MTT法分析发现,当浓度为0.10 mg/L时HTf(Fe)2阿霉素脂质体、无HTf(Fe)2阿霉素脂质体及游离阿霉素对肝癌细胞的杀伤率分别为64.52%,22.12%和37.82%,前一组与后两组之间有显著差异(P＜0.05).结论:HTf(Fe)2阿霉素脂质体体外杀伤肝癌细胞系SMMc-7721具有用药量小、高效、特异性强等优点,为体内应用治疗肝癌提供了实验依据.
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肿瘤坏死因子α在大鼠脑外伤后急性胃黏膜病变中的作用
目的:检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)在大鼠脑外伤后急性胃黏膜病变前后的含量并探讨其意义.方法:采用改良的Allen法建立大鼠颅脑外伤并发急性胃黏膜病变模型,同时设立假手术对照组,测定不同时间点(1,3,6,24 h)各组大鼠血清中TNF-α含量及胃黏膜溃疡指数,并观察胃黏膜大体及光镜下组织病理学改变.结果:模型组1,3,6,24 h血清中TNF-α含量明显高于对照组(t=16.45,P=0.000;t=5.252,P=0.000;t=9.099,P=0.000;t=12.028,P=0.000).模型组胃黏膜损伤严重,6,24 h点溃疡指数明显高于对照组(t=7.275,P=0.000;t=10.579,P=0.000),TNF-α含量与溃疡指数呈线性正相关(r=0.68,P=0.004),组织学也有相应改变.结论:TNF-α在颅脑外伤急性胃黏膜病变的发病中起一定作用.
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抗幽门螺杆菌中性粒细胞激活蛋白的单克隆抗体的制备和鉴定
目的:从抗幽门螺杆菌(H pylori)全菌蛋白的单克隆抗体(mAb)中,应用重组中性粒细胞激活蛋白(NAP),筛选出抗NAP单抗并进行鉴定.方法:临床分离H pylori DY01,DY04株.免疫BALB/c小鼠后,应用杂交瘤技术制备mAb.再用ELISA方法以重组表达的NAP蛋白筛选相应的单抗,对NAP单抗进行亚类鉴定和效价检测,并用Western blot和免疫组化方法鉴定其特异性.结果:获得3株针对H pylori-NAP蛋白的特异性mAb,抗体亚类为IgG1,轻链为κ型.单抗细胞培养液的抗体效价为1/16-1/32,腹水的抗体效价是1/32000-1/64000.Western blot鉴定表明,抗NAPmAb针对NAP蛋白产生特异性条带,具有高度的特异性;免疫组化分析显示:3株NAP mAb能与H pylori临床菌株发生特异性结合反应,菌体染成深棕色.结论:获得抗H pylori-NAP蛋白的特异性mAb,为幽门螺杆菌感染的诊断、预后判断及表位疫苗的研究提供基础.
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吉西他滨对人胰腺癌Patu-8988细胞株APE/Ref-1的诱导作用
目的:研究人胰腺癌细胞株在吉西他滨化疗时APE/Ref-1基因表达的变化,并试图揭示其在胰腺癌化疗耐药中所起的作用.方法:不同浓度吉西他滨0、10、20、40及60μmol/L作用人胰腺癌Patu-8988细胞株24 h,分别以RT-PCR及Western blot方法测定作用后APE/Ref-1的mRNA及蛋白表达情况.结果:吉西他滨作用人胰腺癌Patu-8988细胞株24 h后,APE/Ref-1的mRNA及蛋白表达水平明显上升,并与吉西他滨的浓度呈正相关(RT-PCR:r=0.645,P=0.012;Westernblot:r=0.598,P=0.020).结论:APE/Ref-1在胰腺癌化疗时表达明显增强,可能与化疗耐药性的产生有关,并提示针对APE/Ref-1的靶向干预可能有助于提高胰腺癌的化疗敏感性.
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应用竞争性荧光定量聚合酶链反应检测乙型肝炎病毒DNA
目的:建立竞争性荧光定量聚合酶链反应(CFQ-PCR),并探讨CFQ-PCR在乙型肝炎病毒(HBV)临床检测中的意义.方法:根据HBV病毒adr亚型基因组序列合成一对HBV特异的引物,和一条特异的TaqMan探针;根据上述引物序列,采用分子克隆技术制备内对照DNA;再根据内对照序列合成一条内对照DNA特异的与上述TaqMan探针不同标记的TaqMan探针;将适量的内对照DNA加入到PCR反应体系中,使其与HBV靶序列共扩增.结果:在30 μL CFQ-PCR反应体系中,加入约20拷贝内对照DNA能够稳定地获得共扩增曲线;经琼脂糖凝胶电泳分析,加入约100-500拷贝内对照DNA能够有效地获得共扩增产物条带信号;在210个临床HBsAg阳性血清标本的CFQ-PCR扩增中识别出8个未能有效扩增的标本,60份HBsAg阴性血清标本中识别出2个内对照未能有效扩增的标本,后经DNA纯化处理,上述全部标本的内对照均获得阳性扩增结果,其中有7个HBsAg阳性血清标本获得HBV DNA扩增阳性结果.结论:CFQ-PCR能够有效地提示临床标本HBV DNA体外扩增时由于扩增失败导致的假阴性,适合临床推广应用.
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表达胃癌相关基因GCRG213小干扰RNA腺相关病毒载体的构建和高滴度病毒制备
目的:构建一个表达胃癌相关基因GCRG213小干扰RNA的重组腺相关病毒载体,制备能靶向性抑制GCRG213表达的重组腺相关病毒.方法:将构建好并经验证的包含胃癌相关基因GCRG21 3特异性小干扰RNA片段GCRG213-RNAi-2的IMG800-GCRG213i-2质粒用BamH Ⅰ+BglⅡ双酶切,回收410 bp左右目的片段,将pSNAV2.0质粒用BamH Ⅰ单酶切后同目的片段连接,经酶切和测序鉴定后,用新建质粒脂质体转染BHK-21细胞,G418筛选后大规模培养,再用辅助病毒HSVl-rc/△UL2感染,获取病毒.结果:成功构建包含U6启动子和胃癌相关基因GCRG213特异性RNA干扰片段的重组腺相关病毒载体,并制备出滴度为5×1012 vectorgenome/L高滴度腺相关病毒.结论:载体的构建为进一步研究GCRG213的体内功能打下了基础,也将为更多的基因干预和基因的功能研究提供有效的工具.
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幽门螺杆菌NCTC 11637 cagT基因的克隆及序列分析
目的:克隆幽门螺杆菌(H pylori)NCTC 11637cagT(HP0532)的编码基因,并分析其核苷酸序列.方法:应用PCR技术从H pylori基因组DNA中扩增cagT编码基因片段,克隆至pGEM-T载体后,再将其定向插入pQE30载体中,双酶切鉴定筛选阳性克隆,并进行序列分析.结果:NCTC 11637 cagT基因全长843bp(GenBank登录号为EF114758),编码280个氨基酸,与GenBank公布的其他H pylori菌株基因序列的核苷酸同源性为97%-99%.结论:成功克隆了cagT基因,为进一步研究其生物学功能奠定了基础.
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Survivin、P16及RB表达与原发性胆囊癌发生和发展的关系
目的:探索Survivin、P16、RB表达与原发性胆囊癌发生和发展的关系.方法:选用46例原发性胆囊癌,22例癌旁黏膜,19例胆囊良性病变组织,采用免疫组化SP法定位观察Survivin、P16、RB基因蛋白表达.结果:Survivin、P16、RB在原发性胆囊癌中表达阳性率分别为69.6%(32/46),47.8%(22/46),71.7%(33/46),与胆囊良性病变(0%,73.7%,94.7%)和癌旁黏膜(0%,95.4%,95.4%)相比有显著性差异(P＜0.05或P＜0.01).Survivin与P16表达呈显著的负相关(r=-0.691,P＜0.01).P16与RB表达也呈显著的负相关(r=-0.6556,P＜0.01).P16/RB失活组Survivin阳性率为93.8%,显著高于P16+/RB+组(χ2=9.228,P＜0.01).Survivin与胆囊癌的分化程度(P=0.003)、浸润(P=0.003)和转移(P=10-6)密切相关,P16表达缺失患者更易发生淋巴结转移和周围脏器的浸润(P=0.04或P=0.001).结论:Survivin高表达,P16、RB表达缺失在原发性胆囊癌发生中起重要的调节作用.P16/RB通路失活,结合Survivin高表达可能是胆囊细胞癌变的重要通路之一.Survivin高表达和P16表达缺失与胆囊癌的转移和浸润可能有密切关系.
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结肠癌术前多层面CT一站式检查的临床价值
目的:评估结肠充气多层CT(MSCT)多期增强扫描对结肠癌患者术前检查的价值.方法:63例结肠癌患者术前1 wk内行全腹MSCT平扫与多期增强MSCT扫描.采用Toshiba Aquilion16扫描仪,增强扫描是在对比剂开始注射后22 s(Ⅰ期)、37-40 s(Ⅱ期)、60s(Ⅲ期)采集数据.在工作站对采集数据行CT仿真内镜(CTC)、X线模拟投影(XRP)、多平面重组(MPR)、表面遮盖显示(SSD)、CT血管造影(CTA)等后处理观察,并与手术病理对照.结果:CT显示64个癌灶,升结肠18个,结肠肝曲2个,横结肠4个,结肠脾曲2个,降结肠6个,乙状结肠20个(包括乙状结肠与直肠交界区5个),直肠12个;16例发现肠外病变;与手术所见同.在不同扫描期相,原发灶为均匀或不均匀强化.增强扫描肿物峰值强化Ⅱ期30个,Ⅱ期-Ⅲ期17个,Ⅲ期13个,Ⅰ-Ⅲ期4个.58个原发灶(90.6%)可见相应供血动脉增粗,分支增多.CT判断是否累及肠周脂肪敏感性100%,特异性64.2%,准确性92.1%.CT对腹部淋巴结转移瘤诊断总的敏感性78.5%,特异性86.7%,准确性86.1%.结论:MSCT多期增强扫描一次检查为结肠癌术前了解肿瘤位置、数量、范围、血供及其他组织器官病变情况提供了其他影像技术难于同时提供的信息.
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厦门市乙型肝炎患者病毒基因型的分析
目的:采用多对型特异性引物,通过巢式PCR法检测厦门市乙型肝炎患者血清中乙型肝炎病毒(HBV)基因型的分布情况.方法:收集250例HBV感染患者血清,提取血清中HBV DNA作为模板,设计HBV前S1基因和S基因中区域内设计出10条内外引物,并将其中8条型特异性内引物分成A,B两组,分别扩增A,B,C和D,E,F型HBV,然后将第2轮PCR产物以用30 g/L琼脂糖进行电泳,根据PCR产物电泳显示的产物长度判定HBV基因型,以了解厦门HBV基因型分布情况.结果:共120例确定了HBV基因型.患者群中慢性乙型肝炎90例,占75.0%,急性乙型肝炎、肝炎肝硬化、原发性肝癌分别占5.8%(7/120)、6.7%(8/120)和12.5%(15/120).分型结果:B型58例(48.3%)、C型30例(25.0%),B/C混合型32例(26.7%).HBeAg阳性患者中B基因型占63.8%,B/C型混合感染21.9%;抗-HBe阳性患者中以B/C型混合感染68.8%,B型25.9%,HBeAg阳性组与抗-HBe组之间比较发现B型和B/C混合型之间(P＜0.05).结论:厦门乙型肝炎患者HBV基因型以B型为主,B/C混合感染是一个值得重视的问题.
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肿瘤热疗的细胞分子作用机制及应用进展
热疗是肿瘤治疗的有效手段之一,但是其作用机制长期不甚明了.近年来,随着热疗重新成为研究的热点之一,热疗的作用机制研究取得了很大进展.研究表明,亚高温热疗杀伤细胞以诱导细胞凋亡为主,而高温热疗则直接导致细胞坏死.热诱导凋亡通过线粒体或(和)死亡受体途径实现,氧化应激、胞内Ca2+增高等诱导凋亡过程中起重要作用.基于热诱导细胞凋亡机制的一些联合治疗方法,如热疗联合基因治疗、氧化应激、Ca2+靶向治疗以及降低细胞外pH值等可显著增强热疗作用.
