世界华人消化杂志
World Chinese Journal of Digestology 세계화인소화잡지
- 主管单位: 华人消化杂志;新消化病学杂志
- 主办单位: 山西省科学技术厅
- 影响因子: 0.00
- 审稿时间: 1-3个月
- 国际刊号: 14-1260/R
- 国内刊号: 李军亮
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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ERCP对梗阻性黄疸病因的诊断价值
目的:探讨ERCP对梗阻性黄疸病因的诊断价值.方法:对74例梗阻性黄疸行ERCP检查并与术后诊断比较,其中4l例同时有ERCP,B超及CT检查,比较三者诊断的符合率.结果:本组示恶性胆道梗阻36例,占48.6%;良性梗阻38例,占51.4%.与术后诊断比较,ERCP对胆总管结石的诊断符合率96.9%.对恶肿瘤诊断符合率77.8%,主要是胰腺癌、胆管癌、胆囊癌及壶腹周围癌等.41例中ERCP对梗阻性黄疸病因的诊断率明显高于B超及CT(P<0.05).结论:ERCP对梗阻性黄疸具有较高的诊断价值,优于B超和CT.
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彩色多普勒超声诊断慢性非结石性胆囊炎的意义
目的:探讨应用高分辨率,高灵敏度彩色多普勒超声对慢性非结石性胆囊炎诊断的可行性及其意义.方法:胆囊壁增厚组86例,选择胆囊结石患者63例作为对照组,将其测得的血流参数与正常组相比较.结果:胆囊结石与慢性胆囊炎患者之间的血流参数无显著性差异(P≥0.05),而二者与正常组之间存在显著性差异(P<0.01).单纯胆囊壁增厚组与正常组之间无差异(P≥0.05).三项参数中以阻力指数(RI)为敏感.结论:二维超声仅以胆囊壁增厚不能诊断慢性胆囊炎,利用血流参数的变化,结合二维超声、临床表现有利于慢性胆囊炎的诊断.
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复方二甲基硅油对功能性肠胀气的疗效观察
目的:评价复方二甲基硅油对功能性肠胀气的临床疗效及安全性,并探讨其治疗机制.方法:功能性肠胀气患者54例,采用随机分组、平行对照的实验设计方法,在应用复方二甲基硅油和安慰剂治疗后观察临床症状积分、肠管积气量及肠排气次数的改变.结果:与安慰剂比较,复方二甲基硅油能够明显降低功能性肠胀气患者临床症状积分、肠内胀气指数并增加肠排气次数(0.65+0.61 vs 1.83+0.49,45+21 ys 117+40,13+4vs8+3,P<0.01).复方二甲基硅油治疗功能性肠胀气的总有效率为88.9%,显著高于安慰剂的29.6%(P<0.01).结论:复方二甲基硅油能够减少肠内气体,改善临床症状,且安全性好.
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腹腔镜结直肠癌手术中特殊情况的处理
目的:探讨腹腔镜结直肠癌手术中特殊情况的处理方法.方法:总结1995-06/2003-06作者施行的142例结直肠癌手术中有特殊疑难情况的14例患者的手术处理技巧和经验.结果:使用腹腔镜结合电凝固化、小切口辅助、手辅助等手段,14例患者均顺利完成手术,4例有术后并发症,3例经保守治疗治愈,l例拒绝再次手术.结论:随着经验的积累,一些特殊情况也可以通过腹腔镜联合其他手段辅助完成手术,取得满意的效果.
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扶正养阴方与高强度超声聚焦联用对晚期肝癌疗效的探讨
目的:观察扶正养阴方联用高强度超声聚焦(HIEU)对晚期肝癌的疗效及其减毒增效作用.方法:60例晚期肝癌患者随机分HIFU治疗组和HIFU联用中药组,中药以扶正养阴方加减,定期观察HIFU术前、术后体温、肝功能、甲胎蛋白(AFP)及肿瘤大小的变化.结果:HIFU术后多数患者有不同程度的发热及肝功能的损伤,而中药联用组在治疗2 wk内体温及肝功能(如ALT)明显改善,明显优于单纯HIFU治疗组;两组的肿瘤大小及AFP较治疗前获得明显好转,但两组比较无显著差异.结论:扶正养阴方能有效减轻HIFU术后造成的发热及肝功能损伤等不良反应,改善病情.
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根除幽门螺杆菌对胃窦萎缩性胃炎的改善作用
目的:探讨根除幽门螺杆菌(H pylori)对慢性萎缩性胃炎(CAG)患者症状及胃黏膜萎缩(GA)的作用.方法:CAG患者52例,经胃镜、快速尿素酶试验(RUT)及病理组织学检查诊断为胃窦CAG伴H pylori感染.随机分为A,B两组.A组予洛赛克、阿莫西林、痢特灵治疗1 wk及对症治疗,B组予对症治疗.随访l a,记录治疗前、治疗后l mo,6 mo,12 mo的症状积分(SSc).1 a后复查胃镜、RUT及病理组织学.结果:完成试验48例:A组25例,B组23例.A组GA改善率36.0%,B组8.7%,二者有显著差别(P<0.025).A组SSc在治疗后l mo,6 mo,12 mo均较治疗前明显下降(P<0.01),且与GA改善与否无明显关系(P>0.05);B组治疗后6 mo,12 mo SSc明显高于A组同期(P<0.05),SSc降低值明显低于A组同期(P<0.05).结论:根除H pylori能使CAG患者的症状及胃窦GA明显改善.
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胰管结石85例的内镜诊治
目的:探讨内镜逆行行胰管造影(ERCP)在咦管结石诊断与治疗中的价值.方法:回顾分析1998-07/2003-12经ERCP诊治的85例胰管结石患者的临床治疗、治疗方法和治疗结果.结果:85例患者共行137次ERCP检查,诊断准确100%.59例胰管结石经乳头括约肌切开(EPST)或胰管括约肌切开(EPS)取石或置入胰管支架而得到成功治疗.18例经ERCP结石取净,腹痛近期缓解率为88.9%,远期缓解率为81.2%;26例置入支架患者的腹痛近期缓解率80.7%,远期缓解率66.7%;10例EPST后探条扩张、部分取石、ENPD引流患者的近期缓解率70%.并发症发生率为9.4%(8/85),1例发生术后胰腺炎.结论:ERCP是诊断胰管结石的主要手段,经ERCP治疗胰管结石具有微创、并发症少的特点,可作为胰管结石的首选治疗手段.
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热盐水致大鼠萎缩性胃炎胃黏膜COX-2的表达
目的:检测热盐水灌胃导致的大鼠萎缩性胃炎(CAG)胃黏膜组织COX-2的表达情况,探讨长期热咸饮食造成萎缩性胃炎的机制.方法:用热盐水灌胃建立大鼠萎缩性胃炎动物模型,用免疫组化方法检测各实验组4,8,12,32 wk胃黏膜组织COX-2的表达情况,用ELISA方法检测胃黏膜组织PGE2的含量.结果:灌胃至12 wk时出现胃黏膜层变薄,固有层腺体减少,固有层纤维结缔组织增生,黏膜肌层明显增生,慢性炎细胞浸润等萎缩性胃炎表现,随着热盐水灌胃时间的延长,32 wk胃黏膜萎缩程度明显加重.正常对照组大鼠胃黏膜组织细胞COX-2蛋白不表达或仅有微量表达;实验组8 wk开始有少量表达,12 wk胃黏膜出现萎缩时,COX-2表达明显增加,与正常组相比具有显著差异(4.5±2.1%vs 14.7±5.7%,P<0.05).后随着灌胃时间的延长,COX-2的表达持续性上升,32 wk达高峰.实验组12 wk PGE2水平升高,与正常组相比有显著差异(125.6±21.2 ng/g vs 188.4±37.6 ng/g,P<0.05),32 wk升至高.结论:在热盐水引起的大鼠萎缩性胃炎的形成和发展过程,COX-2扮演了重要角色,提示热成饮食可导致萎缩性胃炎的发生,而改变喜食高盐热烫的饮食习惯将有助于预防萎缩性胃炎及胃癌的发生.
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中药肝脂复煎剂对酒精和高脂饲养诱导的大鼠脂肪肝的影响
目的:观察中药肝脂复煎剂对酒精和高脂饲养诱导的大鼠脂肪肝的防治作用.方法:采用高浓度酒精灌胃合高脂饲料饲养制备大鼠脂肪肝模型,同时给予不同剂量肝脂复煎剂治疗,以二甲双胍为对照.通过检测血清肝酶谱、肝组织匀浆甘油三脂含量和肝脏组织学变化,观察不同剂量肝脂复煎剂对脂肪肝的防治作用.结果:模型组大鼠肝脏出现明显的脂肪变性,肝酶活性(ALP、GGT)、血脂和肝组织甘油三脂含量升高(ALP:8 156±2 696 vs 4 478±2 229;GGT:52±14 vs24±21;TG:615±106 vs454±113,P<0.05;肝TG:53±10 vs27±8,P<0.01).肝脂复剂量组肝细胞脂肪变显著减轻,肝酶活性(ALP、GGT)、血脂和肝组织甘油三脂含量较模型组显著下降(ALP:5 666±2 187 vs8 156±2 696;GGT:24±14 vs52±14;TG:442±148 vs615±106;肝TG:35±4,36±6,38±6 vs 53±10,P<0.05-P<0.01),二甲双胍组肝组织甘油三脂含量较模型组下降(32±1 vs53±10,P<0.01),其余指标无显著差异.结论:肝脂复煎剂对脂肪肝具有良好的防治作用.
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同种和异种混合淋巴细胞反应及分类混合淋巴细胞反应的比较
目的:对比体外人外周血淋巴细胞对于异种小鼠细胞和同种异体细胞混合淋巴细胞反应.方法:建立异种-同种混合淋巴细胞反应模型,进行分类细胞反应试验.结果:人外周血淋巴细胞对于异种小鼠细胞的反应明显低于对于同种异体细胞的反应(P<0.05).细胞分类研究显示:在异种混合淋巴细胞反应中,主要是CD4+T细胞通过间接途径受小鼠抗原刺激而增生;在同种混合淋巴细胞反应中,主要是CD4+T细胞通过直接途径受同种异体抗原刺激而增生.在两种混合淋巴细胞反应中,CD8+T细胞也参与.结论:异种混合淋巴细胞反应弱于同种混合淋巴细胞反应,异种细胞只通过间接途径刺激T细胞.同种和异种混合淋巴细胞反应均需要抗原提呈细胞参与,CD4+T淋巴细胞是反应的主要细胞.
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螺内酯对大鼠肝纤维化及TGFβ1 TIMP-1表达的作用
目的:探讨醛固酮受体拮抗剂螺内酯对TGFβ1和TIMP-1表达的作用,评价螺内酯的抗纤维化作用.方法:♂ SD大鼠34只,随机分为3组.肝硬化模型组:400 mL/L CCl4油3 mL/kg,sc,2次/wk;螺内酯组:CCl4油注射的同时予螺内酯20 mg/(kg/d)灌胃;正常对照组:正常饮食、饮水.光镜下动态观察组织学改变,RT-PCR检测肝组织中TGFβ1和TIMP-1的表达.结果:10 wk时,螺内酯组肝纤维化级别显著低于肝纤维化模型组(P<0.05);但在13 wk,螺内酯组与肝纤维化模型组相比无显著性差异.肝纤维化时TGFβ1和TIMP-1mRNA水平与正常组相比显著升高(P<0.05).在10 wk时,螺内酯组TGFβ1TIMP-1 mRNA水平与肝纤维化模型组相比有下降的趋势,但无显著性差异.结论:TGFβ1和TIMP-1在肝纤维化时表达显著增加,螺内酯对肝纤维化有一定程度的抑制作用,但对TGFβ1和TIMP-1 mRNA的表达作用不明显.
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拉米夫定停药后复发的慢性乙型肝炎的抗病毒治疗
乙型肝炎病毒(HBV)的感染是重要的传染病之一.拉米夫定现仍是治疗慢性乙型肝炎的一线药物,但由于疗程短及耐药株的出现可引起停药后复发.对于这些患者可以拉米夫定再治疗,联合IFNα或其他核苷类似物或免疫调节剂治疗,及新药治疗,但这些方法各有优缺点,不能完全解决慢性乙型肝炎的治疗问题.尚需开发更加有效的药物.
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拉米夫定治疗乙型肝炎相关失代偿期肝硬化的进展
乙型肝炎病毒在体内的复制引起肝炎、肝硬化,拉米夫定是目前抗HBV的主要药物之一.拉米夫定通过抑制或干扰HBV病毒复制过程中反转录酶的活性而发挥其抗HBV作用,可以延缓慢性乙型病毒性肝炎患者进展为失代偿期肝硬化的进程.对于失代偿期肝硬化患者,拉米夫定可以改善肝脏储备功能和生存率,降低原发性肝癌的发生率,而且安全、有效.
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丙型肝炎病毒感染动物模型研究进展
丙型肝炎病毒(HCV)感染是全球关注的公共卫生问题,对HCV分子生物学特性的深入探讨有赖于实验模型的建立.建立理想的HCV动物模型,不仅有利于丙型肝炎疫苗的研制,同时对深入研究丙型肝炎慢性化机制,包括病毒变异与宿主免疫应答以及与疾病的关系等,均具有重要意义.文章主要介绍了黑猩猩、猴、树鼩转基因鼠以及人鼠嵌合肝模型感染HCV,同时探讨了该模型体系存在问题及应用前景.
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抗乙型肝炎病毒治疗中病毒载量的动力学特点
病毒载量动力学的检测被越来越广泛地用来预测抗病毒药物的治疗效果,先前的免疫学检测受很多因素的影响,已不能正确反应病毒的复制.而病毒载量定量检测可使人们能够比较清楚地了解病毒在体内的变化情况,弥补了免疫学方面的不足.通过对病毒动力学的研究可以使我们了解病毒在清除过程中的特点,从而用于指导临床来评估药物疗效,以及针对不同的患者设计合理的治疗方案.
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丙型肝炎病毒p7蛋白研究进展
p7蛋白是一个介于丙型肝炎病毒(HCV)结构蛋白和非结构蛋白之间的一小蛋白,在脂质膜中形成六聚体阳离子通道,在病毒的自然感染过程中起一定的作用.金刚烷胺和长烷基链的亚氨基糖衍生物可抑制p7形成的阳离子通道,从而对HCV的治疗发挥重要作用.本文就p7蛋白的基因组结构、合成与功能作一综述.
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幽门螺杆菌感染和环氧化酶-2表达在胃癌发生中的作用
幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)感染是胃癌发生的重要病因和促进因子,但其确切的致癌机制尚不清楚.近年来研究表明,环氧化酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)在胃癌及癌前病变中表达增加,在肿瘤的发生、发展过程中起重要作用.Hp感染可能通过多种途径诱导COX-2表达,刺激胃上皮细胞增生,使细胞增生和凋亡失衡,促进胃癌的发生和发展.
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乙型肝炎病毒基因分型的临床意义
虽然近年来对乙型肝炎病毒(HBV)基因组变异已进行了较为系统的研究,但仍有许多问题尚未解决.目前研究的热点集中在HBV基因型的特点及临床意义和HBV聚合酶基因变异与核苷类似物耐药性的研究.根据聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)基因型分型法,目前已将前-S基因分为A,B,C,D,E,F,G,H八种基因型.现就HBV基因型分型方法,基因型与肝炎疾病的关系、预后以及与干扰素、拉米夫定等抗病毒疗效相关性的研究作一综述.
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拉米夫定在免疫受损慢性乙型肝炎患者抗病毒治疗中的应用
HBV感染是重要的传染病,对于抗HBV的治疗显得尤为重要,但在慢性HBV感染患者当中,有许多合并其他疾病,对于需要运用免疫抑制剂或疾病本身就产生免疫抑制的免疫受损宿主来说,在使用免疫抑制剂的同时,有可能使得HBV再激活,从而出现肝炎的症状,治疗更加棘手.拉米夫定可以迅速降低血清中HBV水平,无论免疫抑制的种类,包括肿瘤、器官移植、AIDS患者等,且可以应用于对干扰素难以耐受的患者,在免疫受损宿主慢性乙型肝炎患者抗病毒治疗中具有非常重要的地位.
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乙型肝炎治疗的新靶点与新方法
抗病毒治疗一直是乙型病毒性肝炎治疗过程中的重要环节,但目前所用的抗病毒治疗措施均有其局限性.寻找新的、有效的抗病毒治疗措施应从病毒的生命周期、机体的免疫反应出发,以达到抑制病毒复制以至清除病毒的目的.基因治疗方法也正处于研究阶段.本文就目前乙型病毒性肝炎的抗病毒治疗及其进展方面作一阐述.
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抗乙型肝炎病毒的联合序贯治疗
乙型肝炎(Hepatitis B)是一种致命性的肝脏疾病,系感染HBV所致,是世界上常见的传染病之一,在我国HBV感染率非常之高,因此乙型肝炎的抗病毒治疗成为国内、外专家的研究热点,且其进展很快.但由于单一药物治疗效果不佳,抗乙肝病毒的联合/序贯治疗已得到了专家们的共识.目前常见的抗病毒药物仍为干扰素以及核苷类似物(如拉米夫定),他们之间的联合应用可以取得较好的效果.
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胰腺癌的治疗进展
胰腺癌(pancreatic cancer)是常见的消化道恶性肿瘤之一,由于其早期诊断困难,因此预后极差,5 a生存率不足5%.近年来,胰腺癌的外科手术治疗取得了一定的进步,尤其是腹腔镜技术的应用为手术切除胰腺癌开辟了新的发展空间.放射治疗及化学治疗仍然是主要的辅助治疗方法,其不但可以提高根治术后患者的生存率,而且可以改善晚期患者的生存质量.目前,胰腺癌的有效治疗方法仍然是以外科手术为主,放射治疗及化学治疗为辅的综合治疗.随着免疫和分子生物学在肿瘤发生、发展和转移机制等方面研究的不断深入,使胰腺癌的基因治疗及免疫治疗成为可能,也使其成为胰腺癌的治疗的新的发展方向.现就胰腺癌的治疗进展作一综述.
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Sp1/Kruppel样转录因子家族研究进展
Spl/Kruppel样转录因子(Spl-like and Kruppel-like transcription factors,Spl/KLFs)是参与真核细胞转录的高度相关锌指蛋白,以细胞和启动子特异性方式通过调控富含GC启动子的基因表达,参与调节细胞功能如细胞增生、凋亡、分化和肿瘤形成.
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高温环境对人肠屏障功能的损伤
正常肠屏障可防止肠道内细菌和内毒素侵入血液循环,但是在高温环境下,肠黏膜会出现功能紊乱,引起肠道屏障功能损害.现主要从肠屏障功能的组成,高温对肠屏障功能损伤的机制,肠屏障功能改变的测定,对高温下肠屏障功能障碍的防治等方面综述高温对肠屏障功能的损伤.
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乙型肝炎病毒DNA YMDD变异的检测技术
拉米夫定治疗乙型肝炎耐药性的产生主要与HBV P基因突变有关,耐药株中多见P基因变异且相对集中于YMDD基序.YMDD变异的检测技术包括核苷酸序列测定法、聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析、基因芯片技术、聚合酶链反应微板核酸杂交-酶联免疫黏附法等.本文就乙型肝炎病毒DNA YMDD变异的检测技术作一综述.
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拉米夫定治疗儿童乙型肝炎
慢性HBV感染可引起小儿慢性肝损害甚至发生肝细胞癌,严重影响小儿身体健康.拉米夫定是治疗成人HBV感染的有效药物之一,在儿童乙型肝炎中应用较少,本文讨论了拉米夫丁的药理学作用和治疗儿童HBV感染的依据,并重点探讨了儿童HBV感染后应用拉米夫丁在不同剂量、不同疗程、与干扰素不同联合等治疗方法中,他们的安全性和疗效,并分析了影响拉米夫定疗效的可能因素.
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溃疡性结肠炎相关基因研究
溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)是一种反复发作的难治性肠病,其病因和发病机制复杂,迄今尚不十分清楚,诸多基因与之密切相关.免疫功能的异常是UC发病的关键因素之一,多种细胞因子参与UC的发生发展;凋亡基因、癌相关基因与UC肠道病变及癌变密切相关;UC具有较高的遗传倾向,遗传基因表达失调;新的基因表达谱研究也显示UC与多种基因表达异常相关.
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肝源性糖尿病的治疗研究进展
我国肝源性糖尿病多继发于慢性肝炎,肝硬化,这类患者存在不同程度的肝损害,治疗更要考虑周全,综合治疗,使血糖得到控制.根据肝源性糖尿病的特点,明确肝源性糖尿病的治疗目的和降低血糖的达标标准,以便合理地进行综合治疗,原则禁用口服降糖药,尽量早用胰岛素,除了药物,目前对糖尿病的治疗已进展到胰腺移植,胰岛细胞移植,人工毛细血管装置的胰岛细胞移植,还有对重型肝炎,肝硬化实施肝移植,这些是否适合肝源性糖尿病以及移植后一系列问题尚研究中.
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应用基因表达谱芯片技术筛选NS3TP1转染细胞差异表达基因
目的:应用基因芯片技术,检测丙型肝炎病毒(HCV)非结构蛋白3(NS3)反式激活基因1(NS3TP1)的表达对肝母细胞瘤细胞HepG2基因表达谱的影响,进一步NS3TPl蛋白可能的分子生物学功能.方法:设计并合成NS3TPl基因序列特异性的引物,应用聚合酶链反应(PCR)技术扩增NS3TP1蛋白编码基因片段,以常规的分子生物学技术构建表达载体pcDNA3.1(-)-NS3TPl.以脂质体技术转染肝母细胞瘤细胞系HepG2,提取总mRNA,逆转录为cDNA,与转染空白表达载体pcDNA3.1(-)的HepG2细胞进行DNA芯片分析并比较.结果:构建的表达载体经过限制性内切酶分析和DNA序列测定,证实准确无误,提取高质量的总mRNA并进行逆转录成为cDNA,进行DNA芯片技术分析.在1152个基因表达谱的筛选中,发现有26个基因表达水平显著上调,14个基因表达水平显著下调.结论:应用基因表达谱芯片技术成功筛选了NS3TPl转染细胞后差异表达基因,为进一步阐明NS3TPl蛋白可能的生物学功能及HCV的致病机制提供理论依据.
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hMSH2在胃癌组织中的表达及其与DNA甲基化之间的关系
目的:分析胃癌组织中DNA甲基化酶Dnmtl和hMSH2表达情况的相关性及与肿瘤生物学行为之间的关系.方法:以real-time RT PCR法检测28例胃癌组织中Dnmtl和hMSH2 mRNA的表达,亚硫酸氢钠变性后测序分析hMSH2启动子区甲基化状态.结果:在28例胃癌组织中有9例(32%)DNMT1 mRNA的高表达,10例hMSH2(35.7%)的低表达,在hMSH2低表达的胃癌组织中有2例存在DNA启动子区的高甲基化.两个基因mRNA的表达与胃癌生物学行为包括肿瘤大小、淋巴结转移、组织学类型均无明显相关性.结论:胃癌组织中存在Dnmtl的高表达,DNA甲基化在一定程度上参与了hMSH2基因表达的缺失.
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大鼠急性坏死性胰腺炎心肌组织中巯基物质的抗氧化作用
目的:探讨巯基物质在急性坏死性胰腺炎(ANP)时在心肌组织中抗氧化作用.方法:大鼠随机分为A组生理盐水组;B组巯基物质处理组;C组假手术组.各组大鼠检测心肌组织内过氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)含量;观察光镜下胰腺组织、电镜下心肌组织形态学改变.结果:B组心肌组织SOD含量明显低于C组(分别于4、6、12 h的50.3±9.6、57.2±9.1、62.4±7.3比83.1±8.6、82.4±9.4、82.6±9.2,P<0.01),高于A组(37.3±5.6、41.3±7.1、44.5±8.0,P<0.05);B组心肌组织丙二醛含量均明显高于C组(分别于4、6、12 h的1.0 256±0.0325、0.7956±0.0351、0.6012±0.0415比0.3 171±0.0 632、0.2 951±0.0 265、0.3 025±0.0 712,P<0.01),低于A组(1.5126±0.1 032、L3 025±0.0856、0.9213±0.0 578,P<0.05);B组胰腺组织及心肌组织病理改变较A组减轻,腹水量亦少于A组.结论:ANP时心肌组织SOD减少,MDA含量增加明显;在ANP时外源性巯基物质可作为氧自由基清除剂在减轻心肌组织氧化应激反应中发挥作用.
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大鼠肝再生相关基因LRRP1的人同源基因是一种新型琥珀酸脱氢酶的亚单位编码基因
目的:应用分子生物学和生物信息学方法,寻找、克隆大鼠肝再生相关基因LRRPl的人的同源基因,阐明LRRPl基因的结构和功能,为研究肝脏再生调节的分子生物学机制奠定基础.方法:利用美国国立卫生研究院建立的核苷酸数据库(GenBank)以及相应的核苷酸序列同源性搜索分析软件(BLASTN),以大鼠的LRRPl的cDNA序列作为参照,对于人的同源性cDNA序列进行搜索分析,寻找人的LRRPl的同源基因序列.利用蛋白质一级结构序列的数据库以及相应的同源蛋白序列的搜索分析,阐明人LRRPl蛋白质一级结构与已知蛋白序列的同源性,从而根据蛋白质一级结构的相似性,对于新克隆基因进行功能方面的预测分析.应用在线软件的分析,对于人LRRPl蛋白质一级结构序列进行分析预测,分析其氨基末端序列是否具有信号肽序列,以判断人LRRPl蛋白是否是一种可以分泌表达的蛋白;同样对人LRRPl蛋白质一级结构序列进行在线软件的分析,对于人LRRPl蛋白质分子结构中的潜在的糖基化位点以及其他类型的修饰位点进行预测.结果:人的LRRPl的编码基因由480nt组成,编码产物由159aa组成.人LRRPl的蛋白质一级结构序列与人琥珀酸脱氢酶亚单位D、牛琥珀酸脱氢酶亚单位D高度同源,同源性分别为79%(126/159),78%(123/156).人LRRPl是一种分泌蛋白,在其分子结构中具有N-糖基化位点、蛋白激酶C磷酸化位点和豆蔻脂化修饰位点.结论:人LRRPl蛋白是一种新型的琥珀酸脱氢酶的亚单位编码基因.
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结直肠癌患者血清p53抗体检测的意义
目的:通过对结直肠癌患者血清p53抗体的检测,分析其与临床病理特征的关系,探讨其作为一种新的肿瘤标志物的临床意义.方法:选择2002-04/2003-01手术治疗的结直肠腺癌患者132例和同期非肿瘤患者36例为研究对象.用ELISA法定性检测血清p53抗体.结果:结直肠癌组中53例(40.2%)血清p53抗体阳性,而对照组仅1例(2.9%)阳性.血清p53抗体与患者的性别,年龄,肿瘤位置及大小无关,其阳性率在高分化腺癌为17%,中分化腺癌为42%,低分化腺癌为64%(P=0.0007).肝脏转移患者的血清p53抗体阳性率显著高于无肝转移患者(75% vs37%,P=0.0098).发生淋巴结转移的患者,血清p53抗体阳性率为52%,而没有淋巴结转移患者的阳性率为33%(P=0.0261).在不同的Dukes分期中,血清p53抗体的阳性率分别为A期14%,B期30%,C期44%,D期78%(P=0.0013).结论:血清p53抗体可以反映结直肠癌的恶性生物学行为,有助于临床判定病情,监测疗效.
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针刺对胃黏膜损伤家兔表皮生长因子、生长抑素及生长抑素受体基因表达的影响
目的:为了证实针刺足阳明经对胃黏膜损伤的保护作用,对表皮生长因子(EGF)、生长抑素(SS)及生长抑素受体基因(SSR1 mRNA)表达影响,从多层次探讨经脉-脏腑相关的特异性.方法:40只家兔随机分为:A对照组,B胃溃疡模型组,C足阳明胃经(胃经)组,D足少阳胆经(胆经)组,E足太阳膀胱经(膀胱经)组.乙醇灌胃造成家兔胃溃疡模型后,采用经络刺激仪对C-E组分别针刺胃经、胆经、膀胱经(穴)7 d.治疗结束后测定以上各组胃黏膜损伤指数,用放射免疫及RT-PCR法分别测定胃黏膜EGF、SS及SSR1 mRNA表达.结果:模型组EGF含量(73.6±14.8)较正常组(91.3±14.9)明显降低(P<0.01);胃黏膜损伤指数(24.88±6.29)、SS含量(2978.6±587.6)及SSR1 mRNA表达(2.56±0.25)较正常组(8.50±2.98)、(1852.4±361.7)、(1.04±0.36)显著升高(P<0.01).胃经组EGF(92.2±6.7)、胃黏膜损伤指数(10.88±3.23)、SS含量(1 800.2±488.1)及SSR1 mRNA表达(1.07±0.08)与模型组比较有显著差异(P<0.01).但胆经及膀胱经组与模型组比较上述指标未得到改善,与胃经组比较有显著差异(P<0.01或0.05).结论:针刺足三阳经对家兔胃黏膜损伤的保护作用以胃经组的作用强,其机制可能是通过调整有关脑肠肽及生长抑素受体基因表达有关.上述结果为经脉-脏腑相关的特异性提供了一定实验依椐.
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大鼠小肠移植排斥反应期移植肠RANTES表达的变化
目的:探讨移植肠RANTES(regulated upon activation,normal T cell expressed and secreted活化T细胞调节的,正常T细胞表达和分泌的因子)的表达在小肠移植急性排斥反应中的意义,以及他克莫司(FK506)对他的影响.方法:选用成年健康♂ SD和Wistar大鼠进行全小肠异位移植.实验分4组,第l组:非手术对照组(Wistar);第2组:同基因移植对照组(Wistar→Wistar);第3组:异基因移植组(SD→Wistar);第4组:FK506治疗组[SD→Wistar+FK506(1 mg/kg-1/d-1,im)].移植术后3,5,7 d取各组大鼠移植肠标本进行病理学检查,并采用免疫荧光染色和激光扫描共聚焦显微镜技术对移植肠RANTES的表达进行连续定量测定.结果:异基因移植组大鼠的移植肠RANTES表达在术后均非常显著高于其他3个对照组(P<0.01),其动态变化与急性排斥反应的进程呈正相关;FK506治疗组大鼠移植肠RANTES的表达明显低于未治疗组(P<0.01).结论:RANTES阳性细胞在小肠移植急性排斥反应中发挥了重要作用,动态检测移植肠RANTES的表达变化,可能成为小肠移植急性排斥反应有效的诊断指标之一.
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幽门螺杆菌感染儿童HLA-DQAl的免疫遗传学特征
目的:了解昆明汉族儿童中幽门螺杆菌(H pylori)感染率及其HLA-DQAl免疫遗传学特征.方法:用胶体金标免疫渗滤法检测153名6-14岁的学生血H pylori-IgG抗体.并用聚合酶链反应-序列特异性引物(PCR-SSP)技术对以血清学试验及13C尿素呼气试验确诊的34例H pylori感染儿童及37例无H pylori感染儿童进行HLA-DQAl基因分型.结果:昆明儿童H pylori感染率为34.5%,其HLA-DQAl*0103等位基因频率明显高于无H pylori感染儿童(29.41% vs9.46%,P=0.002,Pc=0.028,OR=3.988,95%CI:1.562-10.180);而H pylori感染儿童HLA-DQAl*0302等位基因频率低于无H pylori感染儿童(19.12% vs33.78%,P=0.049,OR=0.463,95%CI:0.214-1.003),但经等位基因多项比较校正,差异消失(Pc=0.686).结论:昆明汉族儿童H pylori感染率较高.他们在HLADQAl位点上与无H pylori感染儿童存在免疫遗传学差异,HLA-DQAl*0103基因可能是H pylori感染的易感基因;而DQAl*0302基因则是否具有免疫抵抗作用,需要进一步研究.
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HBV核心蛋白结合蛋白1编码基因C1的克隆化
目的:对乙型肝炎病毒(HBV)核心蛋白结合蛋白l的基因C1进行克隆化研究.方法:对应用酵母双杂交技术筛选的白细胞中与HBV核心蛋白结合的新蛋白基因,利用分子生物学与生物信息学技术相结合的方法获得新基因的编码序列,根据GenBank中的序列信息设计引物,以HepG2细胞系cDNA文库为模板,以逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)技术扩增获得该新基因的全长编码序列,并经测序证实,命名该新基因为C1,在GenBank中注册,注册号为AY555145.结果:C1基因编码区为366个核苷酸(nt),编码产物由121个氨基酸残基(aa)组成.经核苷酸序列数据库(GenBank)和蛋白质一级结构序列数据库(SwissProt)同源序列的搜寻,与已知基因序列和蛋白序列之间没有显著同源性,表明我们克隆的C1基因属于未知功能新基因.结论:成功克隆了HBV核心蛋白结合蛋白新基因C1.
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基因表达谱芯片筛选双环醇作用HepG2细胞后的差异表达基因
目的:应用基因表达谱芯片技术了解双环醇在肝细胞中可能上调或下调的基因,了解其可能的调节功能线索.方法:以双环醇处理HepG2细胞,同时以二甲基硫氧化物(DMSO)处理的相同细胞系作为对照;24h后制备细胞裂解液,提取mRNA.应用基因表达谱芯片技术对差异表达mRNA进行检测和分析.结果:经基因表达谱芯片分析,12种基因的表达水平上调,9种基因的表达水平下调.结论:筛选到的一些与细胞周期、蛋白质的翻译合成、能量代谢、体内免疫调节、细胞凋亡及细胞内的信号传导方面的起重要作用及肿瘤发生相关的基因,推测了双环醇可能存在的调控机制的线索,尚需进一步的实验证明.
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酵母双杂交筛选白细胞中新基因NS3TP6结合蛋白基因
目的:用酵母双杂交技术筛选白细胞中与丙型肝炎病毒(HCV)非结构蛋白3(NS3)反式调节靶基因编码产物NS3TP6蛋白结合蛋白的基因.方法:用多聚酶链反应(PCR)法扩增HCV NS3TP6蛋白基因,连接入酵母表达载体pGBKT-7中构建诱饵质粒,转化酵母细胞AHl09并在其内表达,然后与转化了人白细胞文库质粒的酵母细胞Y187进行配合,在营养缺陷型培养基上进行双重筛选阳性菌落,增菌后提取质粒,转化入大肠杆菌,提取质粒并测序,进行生物信息学分析.结果:成功克隆出HCV NS3TP6蛋白基因并在酵母细胞中表达,配合后选出在四缺(SD/-Trp-Leu-Ade-His)培养基和铺有X-α-半乳糖(X-α-gal)的四缺培养基上均能生长并变成蓝色的真阳性菌落共7个,其中3个人类白细胞CDl4抗原,1个人类免疫球蛋白入轻链,3个人类推定蛋白基因(ACl24014,AC097504,AC023785).结论:成功克隆出NS3TP6蛋白的结合蛋白,为进一步研究HCV的作用提供了新线索.
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双功能融合基因在肝癌细胞中的表达与作用
目的:构建含有融合基因FCUl的自杀基因系统,观察其对体外培养肝癌细胞的杀伤效应.方法:将FCUl基因亚克隆于pEGFP-C1载体,转化大肠杆菌DH5α,阳性重组子转染肝癌细胞HepG2,绿色荧光蛋白检测FCUl的表达,用G418筛选出阳性细胞克隆后,进行体外药物敏感实验,观察旁观者效应.结果:FCUl基因正确插入到pEGFP-C1中,pEGFP-FCUl转染成功的细胞在荧光显微镜下可见绿色荧光,在5-FC作用下细胞的生长抑制率明显高于未转染细胞,且旁观者效应显著.结论:本基因治疗体系具有很好的体外杀肿瘤效果,为肝癌的基因治疗提供了一个新的选择.
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血管内皮生长因子和淋巴结微转移检测与老年胃癌预后的关系
目的:研究老年胃癌术前活检标本血管内皮生长因子(VEGF)表达和术后淋巴结微转移的检测与老年胃癌预后的关系.方法:采用免疫组化法检测了92例老年胃癌VEGF和67例pN0胃癌淋巴结微转移的表达情况,并分析他们与胃癌临床病理因素的关系及对预后的影响.结果:VEGF蛋白阳性表达率为66.7%,淋巴结微转移阳性率为37.3%,且二者表达呈正相关(P<0.05)VEGF蛋白表达水平与肿瘤大小、组织分化程度、浸润深度、血管癌栓、淋巴结转移及TNM分期密切相关(P<0.01),淋巴结微转移与组织分化程度、浸润深度、TNM分期呈正相关(P<0.01).VEGF、淋巴结微转移的表达和胃癌预后呈负相关(P<0.01).结论:VEGF表达和淋巴结微转移呈正相关,二者与胃癌生长、浸润转移关系密切,可作为估计老年胃癌预后的重要因素.
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门脉高压症脾血管病变的研究
目的:通过观察门脉高压症患者睥动脉和脾静脉的病理学改变和门静脉高压时其血管内皮细胞eNOS,ET-1,PKC,NF-κB的表达以及Ⅰ,Ⅲ型前胶原mRNA在门脉高压症时脾静脉壁的表达,从而探讨门静脉局部内皮源性血管活性物质异常与内皮细胞应力信号转导通路激活的关系和细胞外基质在门脉高压性血管病变发生中的作用以及门脉高压症、内脏高动力循环和门脉高压性内脏血管病变三者之间的相互关系.方法:采用光镜和电镜方法观察20例门脉高压症患者和10例正常对照组的脾动脉和脾静脉的形态学改变;用免疫细化和免疫荧光激光扫描共聚焦显微镜技术检测20例门静脉高压症患者脾静脉和15只门静脉高压大鼠模型门静脉内皮细胞eNOS,ET-1,PKC,NF-κB的表达,探讨门静脉高压时其血管内皮细胞eNOS,ET-1表达改变与信息分子PKC,NF-κB的关系;用逆转录聚合酶链反应检测Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA在20例门静脉高压症患者脾静脉壁的表达.结果:光镜下可见脾动脉内膜破损,内弹性膜和弹力纤维断裂和变性;脾静脉内膜局灶性增厚,内皮细胞不完整,附壁血栓形成,中膜平滑肌显著增厚,纤维结缔组织明显增多.电镜下可见脾动脉平滑肌细胞变性,坏死,表型从收缩型向合成型转化,红细胞、血小板聚集在破损内皮周围;脾静脉血管平滑肌细胞以合成型为主,其胞质中含有丰富的粗面内质网和高尔基体,整个管壁沉积有大量胶原纤维,并排列紊乱,内膜损伤,血液有形成分聚集,内皮表面形态不规则,凹凸不平.PKC的阳性表达见于细胞的胞质、胞膜.门静脉高压患者脾静脉和实验组大鼠模型门静脉内皮细胞PKC表达呈阳性或强阳性,其血管平滑肌细胞也可见阳性信号.对照组则呈阴性或弱阳性表达.eNOS,ET-1与NF-кB双重免疫荧光标记的激光扫描共聚焦显微镜检测显示荧光定位均主要在血管内皮,三者在门静脉高压症患者脾静脉和实验组大鼠模型门静脉内皮的荧光信号强度均显著高于对照组门静脉高压症患者脾静脉壁Ⅰ型前胶原mRNA表达强度与非门脉高压症患者无显著性差异(P>0.05);门静脉高压症患者脾静脉壁Ⅲ型前胶原mRNA强度明显高于非门脉高压症患者(P<0.01).结论:门静脉高压时其血管内皮细胞ET-1和eNOS表达上调与该通路激活有关.Ⅲ型前胶原及胶原可能是门静脉高压症时导致血管构型改建的重要细胞外基质,门脉高压症时合并有脾动脉和脾静脉病变,门脉高压症和内脏高动力循环以及内脏血管病变之间互为因果关系.
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心理社会因素对肠易激综合征患者生活质量的影响
目的:探讨影响就诊肠易激综合征(IBS)患者生活质量的心理社会因素.方法:采用肠易激综合征生活质量量表、心理学症状自评量表(SCL-90)、生活事件量表、特质应对方式问卷、应付方式问卷、社会支持评定量表及匹兹堡睡眠质量指数对符合罗马Ⅱ标准连续在消化专科门诊的41例IBS患者进行测评,并与同期诊断的匹配的37名健康自愿者对照.通过多元逐步回归分析探讨心理行为因素对患者生活质量的影响.结果:与正常组相比,IBS组生活质量的8个因子和总分均显著降低(P<0.05),其中即烦躁不安、冲突行为、社会反应、健康忧虑降低为明显(P=0.000).此外,IBS患者精神症状明显(40.2±4.5,t=2.63,P=0.047),焦虑0.67±0.30,t=2.16,P=0.016)和抑郁(0.64±0.24,t=2.53,P=0.020)积分也显著增高.1BS患者的消极应对(40.8±8.0,P<0.05),幻想(4.95±2.1,P=0.001)和退避(4.81±2.1,P=0.004)以及主观支持(23.9±4.2,P=0.046)积分均明显高于正常人.同时IBS患者的睡眠质量、日间功能显著降低,PSQI、睡眠障碍积分和安眠药应用显著增加.多元回归分析显示IBS患者的生活质量降低与睡眠质量(β=0.281)和负性生活事件(β=-0.363)及焦虑状态(β=-0.175)关系更为密切.结论:IBS患者生活质量降低与多种心理社会参数异常呈明显的负相关.
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经蓝碟手辅助腹腔镜治疗腹部外科疑难疾病
目的:探讨经蓝碟手辅助腹腔镜下外科技术在腹部外科疾病诊断、手术切除上的可行性和优越性,扩大经蓝碟手辅助腹腔镜下外科技术的适用范围.方法:建立二氧化碳气腹、根据病变的部位和手术的要求,放置Trocar和蓝碟装置.在左手的引导下,用超声刀进行解剖、分离、切割等技术,分别对胰腺囊肿,腹膜后肿瘤,多发性结肠原发癌,巨大肝脓肿和β-地中海贫血巨脾各1例进行治疗.结果:手术均顺利完成,术中出血少,创伤小,术后近期效果良好.结论:蓝碟手助器的良好性能特点能很好满足该手术的需要.由于恢复了术者手的触觉感,在手术操作上更为方便,经蓝碟手辅助腹腔镜下可完成目前开腹手术时各种腹部外科疾病的手术治疗.
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科学研究的设计和方法中的科学性
生物学和医学的研究发展很快,不断有新的理论和技术出现,推动着生物学和医学领域的不断发展.现代分子生物学技术和理论为肝脏病学的研究提供了前所未有的机遇.由于发展不平衡,对于新理论和新技术的接受程度和推广还有一段艰难的过程.在这一过程中,不可避免地存在一些认识上的误差和偏差.因此本文选取3个有代表性的例子,阐明科学研究的设计和方法中的科学性.
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食管及胆囊同时性双原发癌1例
目的:通过报道食管及胆囊同时性双原发癌这一少见病例,分析其可能的发病因素及临床病理学意义.方法:收集分析临床病理资料,肉眼及显微镜下观察手术切除标本.结果:病理诊断为食管及胆囊同时性双原发癌,且组织病理学类型不同.结论:双原发癌的发生可能与遗传因素有关.
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以DIC为首发表现的胰腺癌1例
报告1例以DIC为首发表现的胰腺癌,对不明原因的广泛性出血性疾病,要排除恶性肿瘤并发DIC的可能,以提高临床医生对该病诊疗水平.
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绒毛膜细胞癌空肠转移1例
目的:通过对该罕见病例的报道拓宽人们对育龄妇女下消化道出血的病因分析思路.方法:剖腹探查,手术标本病理确诊.结果:下消化道出血病因为绒毛膜细胞癌空肠转移.结论:育龄妇女下消化道出血原因不明时,要考虑绒毛膜细胞癌消化道转移.
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小鼠和大鼠NS5ATP4同源基因序列的生物信息学分析
目的:克隆、鉴定、分析小鼠和大鼠NS5ATP4基因序列,确定编码产物序列,并对于其与人的NS5ATP4基因及其编码产物的序列的同源性进行分析.方法:利用基因芯片技术获得了人NS5ATP4的cDNA序列,利用生物信息学技术确定小鼠、大鼠的NS5ATP4的基因及其编码产物的序列,并对于其同源性进行生物信息学分析.结果:利用生物信息学技术确定了小鼠和大鼠的NS5ATP4的基因及其编码产物的序列,小鼠和大鼠的NS5ATP4编码基因区分别由762和756个核苷酸(nt)组成.编码产物分别由263和261个氨基酸残基(aa)组成.与人NS5ATP4基因和蛋白质一级结构序列的同源性分别为90.29%,84.25%和95.65%,86.96%.结论:应用生物信息学技术确定了小鼠和大鼠的NS5ATP4的基因及编码产物的序列.
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HBV前-S1蛋白结合蛋白大鼠同源基因的克隆化
目的:利用生物信息学(bioinformatics)技术克隆,鉴定人HBsAg前-S1蛋白结合蛋白(PSlBP)编码基因的同源基因.方法:人PSlBP由表达型cDNA文库的噬菌体展示技术筛选获得.以人的PSlBP的cDNA序列作为参照,对于美国国立卫生研究院(NIH)国立医学图书馆(NLM)生物工程信息学研究中心(NCBI)建立的核苷酸序列数据库GenBank,利用同源基因序列比对的在线分析软件BLASn进行同源基因序列的比对,发现新的来源于大鼠的同源基因.确定大鼠PSlBP的cDNA序列之后,对于大鼠PSlBP蛋白质一级结构序列与人和小鼠的PSlBP蛋白质一级结构序列的同源性进行分析.利用在线分析软件,对于大鼠PSlBP一级结构序列中潜在的修饰和功能位点进行初步的预测分析.结果:利用噬菌体展示技术获得了人的PSlBP的cDNA序列.以生物信息学技术确定了大鼠PSlBP的cDNA其编码产物的序列.大鼠PSlBP的cDNA由1 455 nt组成,编码产物由484aa组成.大鼠PS1BP蛋白质一级结构与人和小鼠PS1BP蛋白质一级结构的同源性分别为80.79%(391/484)和92.98%(450/484).利用在线分析软件,在大鼠PSlBP蛋白质一级结构中还发现了一系列潜在的蛋白质修饰结构位点.结论:大鼠PSlBP基因及其编码产物序列被确定.
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应用抑制性消减杂交技术筛选HBV DNA聚合酶中RNase H的反式调节基因
目的:应用抑制性消减杂交(SSH)技术构建HBV DNA聚合酶(DNAP)末端蛋白反式激活基因.方法:以RNase H表达质粒pcDNA3.1(-)-RNase H转染HepG2细胞,以空载体pcDNA3.1(-)为对照;制备转染后的细胞裂解液,提取mRNA并逆转录为cDNA,经RsaI酶切后,将实验组cDNA分成两组,分别与两种不同的接头衔接,再与对照组cDNA进行两次消减杂交及两次抑制性PCR,将产物与T/A载体连接,构建cDNA消减文库,并转染大肠杆菌进行文库扩增,随机挑选克隆PCR扩增后进行测序及同源性分析.结果:文库扩增后得到38个白色克隆,经菌落PCR分析,得到36个200-1 000bp插入片段.对所得片段测序,并进行同源性分析,显示33种已知基因编码蛋白和3种未知功能基因序列,可能是RNase H反式激活靶基因.结论:成功构建HBV RNase H反式激活基因差异表达的cDNA消减文库.
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丁型肝炎肝组织Bcl-2/Bax、Bak表达与细胞凋亡表达
目的:探讨Bcl-2,Bax,Bak及肝细胞凋亡在丁型肝炎发病机制中的意义.方法:采用TUNEL技术和免疫组化单、双标记染色,检测77例丁肝患者肝组织中HDAg,Bcl-2,Bax和Bak表达,以及肝细胞凋亡表达.同时以HDV阴性的67例乙型肝炎患者作对照.结果:Bcl-2,Bax和Bak均以肝细胞质表达为主,HDAg以肝细胞核表达为主.HDAg,Bax和Bak与肝细胞凋亡表达及分布有相关性(t=27.89,P<0.0l,P<0.05 t=19.16,P<0.05 t=18.22),四成分在各型肝炎中的表达强度有显著性差别意义(P<0.05).结论:HDAg,Bax,Bak和肝细胞凋亡表达强度及阳性细胞分布均与肝组织炎症和病理损害程度相关,HDV感染可诱导肝细胞表达Bax和Bak,增强肝细胞凋亡.
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丙型肝炎病毒非结构蛋白NS3上调硫氧还蛋白还原酶1基因的表达
目的:探讨丙型肝炎病毒(HCV)非结构蛋白NS3对硫氧还蛋白还原酶1(TXNRD1)启动子转录的激活作用.方法:以HCV非结构蛋白NS3反式调节基因的基因表达谱芯片结果为基础,利用生物信息学技术确定TXNRDl的启动子区域(TXNRDlp),聚合酶链反应(PCR)扩增TXNRDlp,克隆至真核报告载体pCAT3-Basic中,构建pCAT3-TXNRD1p报告载体;以该质粒转染肝癌细胞系HepG2细胞系,用酶联免疫黏附法(ELISA)检测氯霉素乙酰转移酶(CAT)的表达活性;并与pcDNA3.1(-)-NS3共转染HepG2细胞系,用ELISA法检测CAT的表达活性.结果:成功获得TXNRDl启动子的正确克隆.CAT3-TXNRDlp和pcDNA3.1(-)-NS3瞬时转染的HepG2细胞的CAT表达活性是pCAT3-Basic空载体的9倍,pCAT3-TXNRDlp的2.0倍,进一步验证了利用基因表达谱技术研究HCV NS3蛋白反式激活作用的结果.结论:TXNRD1启动子有顺式激活下游基因的活性;HCV的NS3蛋白具有对TXNRD1的反式激活作用.
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HBV慢性感染患者PBMC凋亡与血清病毒载量
目的:研究HBV慢性感染患者血清HBV载量与外周血单个核细胞(PBMC)凋亡的关系.方法:无菌条件下分离42例HBV阳性患者及健康献血员10名外周血单个核细胞(PBMC),在PHA的刺激下培养72 h后收集细胞.采用脱氧核糖核酸末端标记方法(terminal deoxyribonucleotidyl transferase-mediated biotinylated dUTP nick-end labeling,TUNEL)、流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测HBV慢性感染患者PBMC凋亡,并用HBV-PCR定量试剂盒检测血清HBV-DNA的含量.对不同组的PBMC凋亡及血清HBV-DNA含量进行单因素方差分析,并对凋亡情况及血清HBV-DNA含量进行相关性分析.结果:TUNEL法与FCM检测HBV阳性患者PBMC,证实PBMC存在凋亡,慢性乙型肝炎轻度组、中度组与肝硬化组凋亡率明显升高分别为(29.3±9.3%,24.8±10.8%,28.8±5.0%),与健康对照(18.0±6.4%)比较凋亡率显著升高(P<0.05).血清HBV-DNA含量在慢性乙型肝炎轻度组高(14.3±24.8×107cp/L),与其他组比较病毒含量明显增高(P<0.05).HBV慢性感染患者血清病毒载量与其PBMC凋亡率有一定的相关性,r=0.338,P=0.014(P<0.05).结论:HBV慢性感染患者PBMC存在凋亡,其凋亡率较健康组明显增加.慢性乙型肝炎轻度患者血清病毒含量高,其凋亡率亦高.凋亡状况与乙型肝炎的慢性化、机体的免疫状态相关.HBV慢性感染患者PBMC凋亡与其血清病毒载量有相关性.
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应用基因表达谱芯片技术筛选HBV前-S2蛋白反式调节基因
目的:乙型肝炎病毒(HBV)前-S2蛋白是由HBV S基因编码的具有多种功能的蛋白质.前-S2蛋白的表达对于HBV感染肝细胞的基因表达谱具有显著影响.为了研究前-S2蛋白反式调节的靶基因,我们应用基因芯片技术对于pcDNA3.1(-)和pcDNA3.1(-)-preS2分别转染的HepG2细胞的基因表达谱进行分析.方法:以含有HBV全基因组的质粒G376-7(GenBank号:AF384371)作为模板,应用聚合酶链反应(PCR)技术扩增前-S2蛋白编码基因片段,以常规的分子生物学技术构建表达载体pcDNA3.1(-)-preS2.以脂质体技术转染肝母细胞瘤细胞系HepG2,提取总mRNA,逆转录为cDNA,与转染空白表达载体pcDNA3.1(-)的HepG2细胞进行DNA芯片分析并比较.结果:构建的表达载体经过限制性内切酶分析和DNA序列测定,证实准确无误,提取高质量的总mRNA并进行逆转录成为cDNA,进行DNA芯片技术分析.在1152个基因表达谱的筛选中,发现有42个基因表达水平显著上调,36个基因表达水平显著下调.结论:HBV的前-S2蛋白是一种反式激活因子,前-S2基因的表达对于肝细胞基因表达谱有显著影响.
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腺病毒增强转铁蛋白受体介导的针对突变型P53的大酶转染可促进肝癌细胞凋亡
目的:通过腺病毒增强的转铁蛋白受体介导法(AVET)将针对突变型p53(mtp53)的大酶(Maxizyme)基因转入肝癌细胞后篌对肝癌细胞凋亡的影响,探索AVET用于肝癌基因治疗的可行性,为肝癌的基因治疗探索一条新途径.方法:以带有mtp53基因的人肝癌细胞株MHCC97细胞为模型,用腺病毒增强转铁蛋白受体介导法将针对mtp53的pEGFP-Maxizyme基因和空载体pEGFP分别导入MHCC97细胞,荧光显微镜观察细胞转染情况,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测mtp53 mRNA表达水平的变化,DNA琼脂糖凝胶电泳和流式细胞仪检测转染后对细胞凋亡的影响.结果:转染后48h荧光显微镜下可见呈细胞形态的绿色荧光.收集细胞检测,实验组mtp53 mRNA表达水平与空载体组和空白对照组相比,基因扩增条带亮度明显减弱,mRNA表达水平下降(P<0.05);DNA琼脂糖凝胶电泳出现典型的凋亡梯带(DNA Ladder);流式细胞仪分析显示细胞凋亡水平增高,凋亡指数22.95%,显著高于对照组的2.37%(P<0.05).结论:腺病毒增强转铁蛋白受体介导的基因转移系统可将pEGFP-Maxizyme有效的转染到肝癌细胞株MHCC97中,Maxizyme在细胞内成功的切割了mtp53 mRNA,促进了肝癌细胞的凋亡,这为腺病毒增强转铁蛋白受体介导法在肝癌基因治疗中的应用提供了实验依据,也为肝癌的基因治疗提供了一条新途径.
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肝癌中脱-γ-羧基凝血酶原的表达及意义
目的:探讨肝癌组织中脱-γ-羟基凝血酶原的表达情况及临床意义.方法:用免疫组化法探讨了92例肝癌及癌旁组织,7例转移性肝癌和19例慢性肝病组织中脱-γ-羧基凝血酶原的表达水平,并分析脱-γ-羧基凝血酶原与肝癌的临床病理特征间的关系. 结果:肝癌组织脱-γ-羧基凝血酶原阳性率(73.9%)明显高于癌旁组织(26.1%,P<0.01),但二者脱-γ-羧基凝血酶原阳性率明显高于转移性肝癌和慢性肝病肝组织(3.5%,P<0.01).浸润性生长的肝癌组织脱-γ-羧基凝血酶原阳性率明显高于膨胀性生长的肝癌组织(P=0.049),无包膜形成的肝癌组织明显高于有包膜形成的肝癌组织(P=0.037).大径>5 cm组的癌旁组织的脱-γ-羧基凝血酶原阳性率明显高于直径≤5 cm组癌旁组织(P=0.049),HBsAg和HCVAb均阴性或单HBsAg阳性的患者癌旁组织脱-γ-羧基凝血酶原染色阳性率明显高于HCVAb阳性组患者(P<0.01).肝硬化的癌旁组织脱-γ-羧基凝血酶原阳性率明显低于慢性肝炎的癌旁组织(P<0.01).肝癌组织、癌旁组织脱-γ-羧基凝血酶原阳性率与肝癌其他临床病理特征无明显的关系(P>0.05).结论:脱-γ-羧基凝血酶原可能是预测肝癌发生的重要标志物,但不能作为肝癌的预后指标.
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靶向survivin的siRNA对肝癌细胞生物学行为的影响
目的:探讨转入靶向survivin的siRNA对肝癌细胞生物学行为的影响.方法:设计、合成一对survivin编码基因的反向重复序列,中间间隔9个核苷酸序列,通过定向克隆至载体PSilencer2.1,构建siRNA真核表达载体,经稳定转染HepG2细胞后对转基因后肿瘤细胞的生物学行为进行观察.结果:测序证实siRNA真核表达载体构建成功.通过RTPCR及流式细胞术检测,siRNA在mRNA及蛋白质水平抑制survivin基因表达分别达73%和75%.转染细胞生长速度明显减慢,凋亡率增加15倍.裸鼠体内成瘤率下降75%,9-30 d肿瘤体积分别为0.10±0.01 cm3,0.30±0.03 cm3,0.39±0.11 cm3,0.45±0.13 cm3,0.49±0.07 cm3,0.58±0.01 cm3,0.60±0.10 cm3,0.65±0.07 cm3,与对照组相比差异显著(P<0.01).结论:靶向survivin的siRNA能有效降低目的基因的表达并能在体内体外抑制肝癌细胞株HepG2的生长.为进一步逆转肿瘤细胞的耐药性提供了理论指导.
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survivin反义寡核苷酸对肝癌细胞生长抑制作用的研究
目的:采用反义寡核苷酸封闭肝癌细胞中survivin基因的表达,研究其对肝癌细胞生长的抑制作用.方法:针对survivin mRNA翻译起始位点设计并合成反义寡核苷酸(antisense oligonucleotide,ASODN);采用脂质体介导survivin ASODN转染人肝癌细胞株SMMC-7721细胞,western-blot及原位杂交方法检测survivin蛋白及mRNA表达,流式细胞仪检测细胞凋亡率的变化,检测转染前后细胞贴壁率及细胞生长抑制率变化,绘制细胞生长曲线.结果:脂质体介导survivin反义寡核苷酸转染肝癌细胞后survivin蛋白及mRNA表达分别从69.59及75.61降低至10.71及22.94,细胞贴壁率从90.68%降低至33.16%,细胞凋亡率从0.7%增加至31.35%,均有显著差异.转染后对细胞生长的抑制作用可以维持大约1 wk,在转染后第3 d抑制率高可达71.8%.结论:脂质体介导转染survivin反义寡核苷酸可以有效降低细胞内survivin基因的表达,诱导细胞发生凋亡,抑制肝癌细胞生长.
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转化生长因子βⅡ型受体在胃癌组织中表达的研究
目的:研究转化生长因子β(TGFβ)Ⅱ型受体在胃癌组织中的表达及其意义.方法:应用免疫组织化学方法,对20例正常胃粘组织及74例胃癌组织(高中分化腺癌32例,低分化腺癌23例,黏液腺癌14例,印戒细胞癌5例)TGFβⅡ型受体的表达情况进行了研究.结果:在正常胃黏膜组织,TGFβⅡ型受体主要表达于腺体的体底部;在胃高中分化腺癌组织中,TGFβⅡ型受体表达减少(P<0.05,vs正常胃黏膜);在低分化腺癌及黏液印戒细胞癌中,其表达明显减少(P均<0.01,vs正常胃黏膜).结论:TGFβⅡ型受体表达的减少可能在胃癌的发生发展中起了一定的作用.
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Stat3反义寡核苷酸对人胃腺癌MKN45细胞相关信号传导影响的研究
目的:通过研究Stat3反义寡核苷酸对人胃腺癌MKN45细胞增生活性的影响,寻求胃癌治疗中相关信号传导途径的新靶点.方法:Stat3反义寡核苷酸是一种混合骨架寡核苷酸(MBO),采用脂质体介导的方式将其转染人胃腺癌细胞株MKN45;通过MTT法观察转染前后对细胞增生状态的影响;凝胶阻滞电泳(EMSA)和Western blot方法观察转染前后Stat3DNA的结合活性和磷酸化Stat3蛋白表达的变化.结果:Stat3反义寡核苷酸对MKN45细胞的增生有明显抑制作用;转染反义寡核苷酸后MKN45细胞中Stat3信号的组成性激活水平和磷酸化Stat3蛋白的表达分别下降了50.65%及78.86%.结论:Stat3反义寡核苷酸能显著抑制MKN45细胞中Stat3信号的传导,胃癌细胞株中活化的Stat3信号可作为胃癌治疗新的分子靶点.
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携带mIL-12基因的增生型腺病毒对小鼠移植胃癌的治疗作用
目的:研究携带mIL-12基因的增生型腺病毒对小鼠移植胃癌的治疗效果及其作用机制,探讨胃癌治疗的新思路及途径.方法:以ElB55KDa缺失的增生型腺病毒ONYX-015、带有小鼠IL-12(mIL-12)基因的增生型腺病毒CNHK200-mIL-12以及非增生型腺病毒Ad-mIL-12治疗SGC-790lBALB/C裸鼠及MFC 615小鼠胃癌移植模型,从肿瘤大小及动物生存期等方面评价治疗效果;并检测各治疗组的CD4+和CD8+淋巴细胞水平及NK和CTL细胞的杀伤活性,探讨其免疫学作用机制.结果:实验证实增生型腺病毒(ONYX-015,CNHK200-mIL-12)可以有效地杀伤裸鼠体内的SGC-790l胃癌细胞,但是不足以使其完全消退,仅起到延缓生长的作用.荷瘤615小鼠在注射Ad-mIL-12后部分(3/10)肿瘤消退,余者(7/10)生长明显减慢,肿瘤无破溃,生存期明显延长;CNHK200-mIL-12治疗组部分肿瘤(4/10)停止生长,1wk后开始缩小,10-14 d完全消退,其余小鼠肿瘤(6/10)生长明显减慢,肿瘤无破溃,生存期明显延长.免疫学检测发现各腺病毒治疗组的CD4+和CD8+细胞水平以及NK、CTL细胞的杀伤活性均高于对照组,尤以携带IL-12基因者明显(P<0.001).结论:以增生型腺病毒为载体携带IL-12基因可大量杀伤肿瘤细胞并与增生型腺病毒协同发挥抗肿瘤活性.
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三氧化二砷诱导人类大肠癌细胞凋亡的分子机制
目的:明确三氧化二砷(As2O3)注射液对人类大肠癌细胞株的诱导凋亡作用,并探讨其分子机制.方法:采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法、AO/EB荧光染色法、透射电镜观察、DNA电泳、流式细胞术法及免疫组化等方法,系统地观察了As2O3注射液对体外培养的人类大肠癌细胞株LoVo和CoLo-320的生长活力、细胞凋亡、细胞周期及其相关基因表达的影响.结果:用不同浓度(0.5,1.0,2.0,4.0 mg/L)As2O3作用LoVo和CoLo-320细胞不同时间(24,48,72 h),均能显著抑制其生长(P<0.05),用药后诱导其出现了典型的细胞凋亡的形态学和生化学改变,癌细胞Bcl-2基因表达明显下降,Bax和Fas基因表达显著增强(P<0.01).结论:As2O3注射液对人类大肠癌细胞具有显著的诱导凋亡作用,这一作用受到多种基因的调控,即Bcl-2基因表达下调,Bax和Fas基因表达上调.
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广东潮阳地区海尔曼螺杆菌感染与食管疾病的相关性研究
目的:探讨广东省潮阳地区海尔曼螺杆菌(Helicobacter Heilmannii,Hh)感染与食管疾患的关系.方法:集我院内镜活检标本和连有部分食管的胃切除标本,共92例.以Warthin-Starry银染色,镜检Hh和幽门螺杆菌(Helicobacter Pylori,Hp).结果与临床和病理结果对比分析.结果:92例共检出Hh(+)者43例,占46.74%,Hp(+)者32例,占37.78%,二者混合感染者12例,占13.04%.43例Hh(+)者中:食管癌19/33例(占本组的20.65%,占该疾病的57.58%,下同),食管贲门腺癌14/22例(15.22%,63.64%),食管溃疡3/11例(3.26%,27.27%),食管上皮增生4/8例(4.35%,50.0%),食管炎l/3例(1.09%,33.33%),食管平滑肌瘤l/2例(1.09%,50.0%),Barrett食管l/l例(1.09%,100%).随访家中养有猪狗猫或其中之一者16例,Hh(+)者10例(62.5%),未养上述动物者23例,其中Hh(+)者8例(34.78%).结论:食管Hh感染明显与食管癌、食管贲门腺癌、食管上皮增生等相关,Hh感染可能是潮阳地区上述疾病高发的重要因素之一,感染又可能与该地区普遍养有猪狗猫等动物有关.
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幽门螺杆菌外膜蛋白对Helicobacter pylori感染的诊断
目的:通过检测伴有H pylori感染的上消化道疾病患者血清对H pylori OMP的反应性,来探讨基因重组H pylori OMP对H pylori感染及其相关性疾病的诊断价值,为进一步开发诊断试剂盒及其临床应用奠定基础.方法:分别将已鉴定、测序的含H pylori Mr为18000,26 000 OMP重组质粒转化表达菌-大肠杆菌BL21中,让其大量表达、纯化,制备金标免疫检测试纸;选择2002-01/2002-12因消化道症状来我院就诊的H pylori阳性患者150例,经胃镜证实:慢性浅表性胃炎60例;胃溃疡30例;十二指肠球部溃疡30例;胃癌30例,以及33例H pylori阴性的健康者作为对照,分别采用以H pylori Mr为18 000,26000 OMP为抗原制备金标免疫检测试纸,对183例受试者血清进行特异性抗体检测.结果:重组蛋白经Ni2+-NTA琼脂糖树脂纯化后,其纯度高达95%以上,经检测其抗原性良好.用金标免疫试纸对H pylori感染的上消化道疾病患者150例,以及H pylori阴性的健康者33名进行了检测,其结果为:26 000 OMP对H pylori感染的检出率为94.0%,对慢性浅表性胃炎、胃溃疡、十二指肠球部溃疡以及胃癌患者中H pylori感染的检出率分别为95.0%,96.7%,96.7%和90.0%,与常规ELISA方法检测结果相比,二者无显著性差异(x2检验,P>0.05),其敏感性、特异性和准确性分别为94.0%、97.0%、94.5%;而18 000OMP对H pylori感染患者的检出率为52.0%,对慢性浅表性胃炎、胃溃疡、十二指肠球部溃疡和胃癌患者中H pylori感染的检出率分别为40.0%、40.0%、53.3%和86.7%,对胃癌患者中H pylori感染检出率86.7%与慢性浅表性胃炎、胃溃疡、十二指肠球部溃疡总检出率43.3%相比,具有显著的差异性(P<0.05).因此以26 000OMP的金标免疫检测试纸可以作为H pylori感染的常规检测方法,他与常规ELISA检测方法相比具有可靠的特异性以及敏感性,同时与18 000 OMP金标免疫检测试纸一起,对胃癌患者中H pylori感染检出率高对胃肠道肿瘤特别是胃癌的诊断及预测方面具有独特之处,这值得进一步的研究.结论:H pylori Mr 18000,26000 OMP金标免疫检测试纸对H pylori感染及其相关性疾病,尤其对消化道恶性肿瘤的诊断及预测具有重要的价值,可以作为常规检测手段对消化道溃疡及肿瘤高危人群进行检测.
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致谢世界华人消化杂志审稿人
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SLP-2基因在食管鳞癌中的差异表达及其生物信息学分析
目的:应用cDNA微阵列从食管鳞癌配对组织中得到一批在食管鳞癌中差异表达的基因,其中包括SLP-2.他在食管鳞癌组织中的表达比其在配对的正常组织中高6倍以上.验证SLP-2在食管鳞癌组织中高表达的结果,构建组织表达谱,同时对其进行生物信息学分析.方法:利用RT-PCR和Northern blot对SLP-2在食管鳞癌组织中高表达的结果进行验证,构建组织表达谱.利用CLUSTAL和SMART软件对SLP-2进行生物信息学分析.结果:RT-PCR和Northern blot表明,SLP-2在食管鳞癌组织中高表达,并在多种组织中表达.CLUSTAL软件分析表明,SLP-2蛋白是stomatin超家族的一员,但缺少stomatin超家族所特有的N-端疏水性结构域.SMART软件分析表明,SLP-2蛋白具有一个PHB结构域和一个螺旋丰富的区域.结论:cDNA微阵列是筛选差异表达基因的有力工具.SLP-2在食管鳞癌组织中高表达,并在多种组织中都有表达.生物信息学分析表明其缺少stomatin超家族所特有的N-端疏水性结构域,具有一个PHB结构域和一个螺旋丰富的区域,为阐明SLP-2参与肿瘤发生发展的分子机制奠定了良好的基础.