首页 > 文献资料
-
流式细胞仪分析甲型流感病毒感染T淋巴细胞
一直以来人们认为流感病毒仅在局部增殖,一般不入血,其产生的毒素样物质入血,引起全身症状.目前,已有实验证实,甲型流感病毒不仅侵入呼吸道上皮细胞,也能感染末梢血免疫细胞[1].为进一步了解甲型流感病毒感染与末梢血淋巴细胞亚类的关系,我们采用流式细胞仪分析测定甲型流感病毒对CD+4细胞和CD+8细胞的感染率,以了解甲型流感病毒对机体免疫功能的影响.
-
胸腺增龄性萎缩的机理及其逆转
由第Ⅲ、Ⅳ对咽囊胚层发育而来的胸腺是重要的中枢免疫器官、T细胞分化成熟场所.动物在出生后胸腺的重量均与年龄增长呈负相关[1]. 成年Sprague-Dawley大鼠胸腺结构光镜和电镜观察见坏死和纤维化的区域随年龄增长而逐渐扩大,皮质区域进行性缩小,胸腺细胞体积显著下降,有丝分裂趋于静止[2].M arusic等人应用流式细胞仪分析了39例人体胸腺单细胞悬液样本[3],发现随年龄增长每克胸腺组织中单核细胞总数呈指数级下降,但不同龄的个体胸腺中细胞比例几乎一致 ,说明随年龄变化而退化萎缩的胸腺作为T淋巴细胞分化的场所仍然是重要的免疫器官.
-
粘附分子P选择素在肾病综合征患者中表达水平的变化及临床意义
有关外周血和肾组织中P选择素CD62p临床研究报告尚少[1,2].我们用免疫荧光标记单克隆抗体、免疫组化染色技术,检测了36例肾病综合征(NS)患者肾活检组织中CD62p的分布并对其外周血中表达水平以流式细胞仪分析,并就其临床意义进行探讨.1对象和方法1.1 NS组36例,为1998年1月~2000年4月我院住院患者,男21例,女15例,年龄18~65岁,平均44.5岁,临床诊断均符合NS诊断标准,并排除继发性因素,其中合并高血压者12例,尿蛋白定量3.6~28.2g/24h,平均5.8g/24h,血清白蛋白含量14.6~28.2g/24h,平均26.2g/24h,36例均行肾活检,肾活检组织作常规光镜(HE、PAS、Masson、PASM染色)、免疫酶标(兔抗人IgG、IgA、IgM、C3、HBsAg等LSAB法检测,DAKO产品)和透射电镜检查.病理类型(WH0 1982年分型标准)系膜增生性肾炎(MsPGN)17例、膜型肾病(MN)8例、膜增性肾炎(MPGN)7例、局灶节段性肾小球硬化(FSGS)4例.病程0.5~30个月,36例患者均行激素、环磷酰胺、雷公藤多甙、肝素及潘生丁、复方丹参等治疗.
-
心房颤动患者血栓形成与腺苷、血小板P选择素表达的关系
[李为民,韩薇,王岚峰.中华心血管病杂志,2000,28(5):367]目的研究慢性心房颤动(房颤)患者血栓形成与血浆腺苷水平、血小板活化的关系。方法应用反相高效液相色谱及流式细胞仪,分析窦性心律及房颤患者血浆腺苷水平、血小板P选择素、GPⅡb/Ⅲa表达量,同时放免法测定血浆TXB2、6-keto-PGF1α含量,计算TXB2/6-keto-PGF1α。并应用不同浓度的8-苯基茶碱阻断腺苷受体,流式细胞仪分析其对血小板P选择素表达量的影响。结果房颤组血浆腺苷水平明显低于窦性心律组,分别为(55.6±27.3)μg/L与(77.5±30.2)μg/L,(P<0.01)。血小板P选择素表达量明显高于窦性心律组,分别为(6.53±3.37)%与(4.72±1.97)%,P<0.05。血小板GPⅡb/Ⅲa有增高趋势,但无统计学意义(18.7±8.6)%与(15.6±8.3)%,P>0.05。血浆TXB2及TXB2/6-keto-PGF1α含量均显著增高[(150.3±58.0)ng/L与(102.4±36.5)ng/L,P<0.01;1.43±0.59与0.74±0.29,P<0.001];而血浆6-keto-PGF1α的含量无显著变化(P>0.05)。血小板P选择素表达量房颤血栓形成组明显高于窦性心律无血栓组[(7.34±2.74)%与(4.72±1.97)%,P<0.01];房颤血栓形成组与房颤无血栓组无显著差异[(7.34±2.74)%与(6.17±2.76)%,P>0.05]。应用8-苯基茶碱阻断腺苷受体后,血小板P选择素表达量增加,并在一定范围内呈浓度依赖性。超过一定范围,血小板P选择素表达量反而下降。结论血浆腺苷水平降低可能是房颤患者血小板活化、血栓形成的原因之一。腺苷及腺苷调节替代治疗,有可能预防房颤患者的血栓形成。
-
我国血管外科基础研究现状及其发展趋势
随着细胞生物学、分子生物学和基因工程技术的迅速发展,血管外科基础研究的深度和广度,都已进入一个崭新时代,研究内容亦从组织器官深入到亚细胞结构,从单个基因、单个生长因子的分析,扩展到复杂信号传导、细胞周期变化、细胞凋亡状态以及多基因参与的细胞生命活动.研究方法由简单的聚合酶链反应技术和单参数流式细胞仪分析,走向现代生物学技术的结合、乃至基因转染、基因敲除等.现就近年血管外科领域的基础研究现状、存在问题及其发展方向概述如下.动脉疾患的基础研究
-
肿瘤抗原p185蛋白免疫鼠脾细胞的抗瘤效应研究(摘要)
目的研究肿瘤抗原p185蛋白作为肿瘤疫苗的诱导的抗肿瘤效应。方法亲和层析纯化的p185蛋白皮下注射正常BALB/c小鼠,取脾细胞分别与p185蛋白、3T3-neu细胞体外共培养,以单独佐剂注射组的小鼠脾细胞为对照,观察其培养上清中IFN-γ和TNF-α活性。将免疫鼠脾淋巴细胞经p185抗原和低剂量的IL-2体外培养1周后,再用CD3抗体刺激扩增,用流式细胞仪分析其细胞表型。3T3-neu和3T3细胞分别接种于裸鼠腋窝皮下验证其致瘤性。选择具有致瘤性的3T3-neu细胞与经抗CD3抗体扩增的免疫鼠脾细胞体外混合后(1∶9)接种于裸鼠腋窝皮下,以3T3-neu细胞单独或与CD3抗体活化的正常鼠脾细胞(CD3-AK)混合后,同法接种于裸鼠腋窝皮下观察其成瘤时间和带瘤宿主的存活期。结果免疫鼠脾细胞培养上清中IFN-γ活性为(40.27±9.6)U/ml,也具有产生较高TNF-α能力。对照组未能检测出有IFN-γ活性,其TNF-α活性也较低。裸鼠体内实验证实,2.5×105的3T3-neu细胞在裸鼠体内即可成瘤,而对照的3T3细胞无致瘤性。3T3-neu细胞与体外扩增的免疫鼠脾细胞混合后接种裸鼠,瘤结节形成时间平均为52.5 d,存活期平均为55.3 d(其中5只动物至60 d尚未成瘤,按60 d计算),而对照组瘤结节形成时间平均分别为12.5和9.2 d,存活期平均为27.8和25.6 d。表明p185蛋白免疫鼠脾细胞有相对特异的抗瘤活性。结论肿瘤抗原p185蛋白作为肿瘤疫苗可诱导一定的抗瘤效应。[全文刊登于中华微生物学和免疫学杂志 2000,20(3):258]
-
哮喘儿童淋巴细胞CD19的表达
哮喘是一种气道慢性变态反应性炎症性疾病,许多细胞、细胞因子和炎性介质参与了这种炎症反应,免疫功能失调在支气管哮喘发病机理中起着重要作用.本研究运用流式细胞仪分析技术检测哮喘儿童外周血淋巴细胞CD19的阳性率,以探讨CD19与儿童哮喘之间的关系.
-
CEA检测合并流式细胞仪分析对结核性与恶性胸水的鉴别价值
胸水的细胞学检查是鉴别结核性与恶性胸水的重要手段之一,更是确诊恶性胸水的金标准,但由于敏感性低,恶性肿瘤细胞的检出率不高,常给临床的鉴别诊断带来一定的困难,为此作者应用胸水CEA合并流式细胞仪分析对胸水脱落细胞DNA含量测定、细胞周期分析判断胸水性质,探讨两者在鉴别结核性与恶性胸水的诊断价值.
-
细胞DNA倍体及其周期分析在良恶性胸液鉴别中的价值
胸水脱落细胞学检查是鉴别良恶性胸液的重要方法,但恶性胸腔积液细胞学诊断的阳性率仅为60%左右[1].近年来,应用流式细胞仪分析胸水细胞DNA的含量有较好的临床应用前景.我们对30例胸腔积液患者进行胸液细胞DNA倍体检测及周期分析,探讨其在良恶性胸液鉴别中的应用价值.
-
益气护卫汤对哮喘小鼠T淋巴细胞亚群和sIL-2R的影响
目的观察益气护卫汤对哮喘小鼠外周血T淋巴细胞亚群和血清sIL-2R水平的影响.方法通过腹腔注射及吸入雾化卵蛋白,制作哮喘小鼠模型,分为四组:哮喘模型组、益气护卫汤组、地塞米松组和正常对照组,采用流式细胞仪分析外周血T淋巴细胞亚群比例及ELISA法检测血清sIL-2R.结果哮喘模型组CD3细胞、CD4细胞、cD8细胞、CD4/CD8、sIL-2R水平均较正常对照组升高(P<0.05).与哮喘模型组比较:益气护卫汤组、地塞米松组CD4细胞、sIL-2R水平降低(P<0.05);益气护卫汤组CD4/CD8比例下降(P<0.05),并与正常对照组比较无显著性差异(P>0.05).结论益气护卫汤能调节T淋巴细胞亚群比例平衡,并能有效抑制T细胞活化.
-
体外培养骨髓间质干细胞向神经细胞分化的研究进展
成年动物骨髓中有两类干细胞,一是造血干细胞,另一为非造血干细胞,早称之为成纤维克隆形成单位(CFU-fibroblast),现指骨髓间质干细胞(mesenchymal stemcell,MSCs)或称之为骨髓基质细胞(BMSCs).MSCs并非由单一的细胞群体组成,根据MSCs的形态特点将其分为毯子样细胞、网状细胞、脂肪细胞、脂肪细胞前体、平滑肌样细胞、成纤维细胞[1].通过流式细胞仪分析,发现MSCs特异性表面抗原有:SH2、SH2、CD29、CD44、CD71、CD90、CD106、CD12a、CD124等表面抗原,但是与造血干细胞不同,MSCs不表达CD45、CD34、CD41、CD14D等表面抗原[2].
-
异体角膜对人外周血T细胞及其亚群CD69分子表达的体外调节
目的观察异体角膜体外对人外周血T细胞及其亚群CD69分子表达的调节.方法应用异体角膜与外周血淋巴细胞体外共同培养和流式细胞分析技术(FACS).结果对照组T细胞CD69表达为10.3%;受角膜或佛波醇脂(PDB)激活后,T细胞CD69表达分别为31.6%和53.8%;受角膜激活后,CD4和CD8 T淋巴细胞CD69表达分别为47.3%和30.3%.结论角膜组织体外能够刺激人外周血T细胞CD69的表达和T细胞活化,早期以CD4 T细胞活化更明显.
-
苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒的感染对Sf9细胞周期的影响
病毒的感染导致细胞内部发生一系列变化.应用流式细胞仪FACS的荧光检测,测出Sf9细胞完成整个周期循环大约需要18h,G\-1、S、G\-2/M各时相的时间间隔约为6h;AcNPV感染Sf9细胞12-18h,细胞被抑制于G\-2/M期;Sf9细胞同步于G\-1/S期后释放细胞并用AcNPV感染,12h后,2/3的细胞处于G\-2/M期,1/3的细胞处于S期.
关键词: 苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒 细胞周期 流式细胞仪分析 周期抑制 -
冠状动脉球囊成形术后中心血血小板表面GPⅡb/Ⅲa、vWF、GMP-140变化的临床意义
冠状动脉球囊成形术(PTCA)应用于临床20年,大量资料证实,术后急性血管闭塞的发生率为2%~8.3%(术中或术后6 h内)而远期再狭窄发生率高达20%~40%(术后6个月内).本文采用单克隆抗体和流式细胞仪分析技术,研究PTCA后局部中心血血小板表面粘附蛋白及其受体的变化,以进一步探讨其在PTCA后急性血管闭塞和远期再狭窄发生中的作用及临床意义.
-
肝癌细胞中反义寡核苷酸的分布及作用
我们通过激光共聚焦显微镜观察血管内皮生长因子(VEGF)反义寡核苷酸(ODN)在肝癌细胞中的分布情况,定量分析反义ODN作用的浓度及时间特点,并通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和流式细胞仪分析其对肝癌细胞VEGF表达的抑制作用,为VEGF反义ODN的进一步应用提供相关的依据.
-
端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸对人肝癌细胞生长抑制的研究
本实验旨在探讨端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸(ASODN-t)抑制端粒酶活性[1],诱导肝癌细胞凋亡,从而抑制肝癌细胞生长的作用[2],为肝癌基因治疗提供依据,现将结果报道如下。 一、材料和方法 1. ASODN-t对细胞抑制作用的观察: 取2×107个/L对数生长期肝癌细胞(肝癌细胞株SM MC -7721 引自中国科学院上海细胞生物研究所细胞库)接种于96孔的细胞培养板中,每孔100 μl,设3个复孔。分别加入ASODN-t(上海生工生物工程公司合成,序列为5’-CT CAGTTAGGGTTAGACA-3’,调节其终浓度分别为1、2、3、4、5 μmol/L)、无关寡聚核苷酸(N-ODN,上海生工生物工程公司合成,序列为5’-CATTTCTTGCTCTCCACG- 3’,终浓度为3 μmol/L),培养24、48、72、96 h,于结束前4 h加入质量分数为0. 5%四唑蓝(MTT)20 μl,继续培养4 h,再加入SDS溶液100 μl,终止反应。37 ℃培养箱过夜,用酶联免疫检测仪检测各孔在波长570 nm的吸光度A值。 2.形态学观察: 在培养状态下,倒置显微镜观察细胞生长状况及形态学改变,并将5 μm ol/L的ASODN-t处理3 d的细胞在荧光显微镜下观察凋亡细胞的形态。 3.DNA抽提及电泳: 将1×109个/L肝癌细胞经5 μmol/L ASODN-t处理3 d后按试剂盒方法抽提DNA,取抽提好的DNA 5 μl,在质量分数为2.0%琼脂糖凝胶,80 V电压条件下电泳 3 h,紫外光透射仪下观察电泳条带并拍照。 4.流式细胞仪分析: 将1×109个/L肝癌细胞与5 μmol/L ASODN-t共同孵育3 d,磷酸盐缓冲液(PBS)清洗2次,加无水乙醇固定24 h,随后清洗细胞,与含有质量分数为1.0% RNA 酶的Tris-HCl 缓冲液(pH 7.4)共同孵育10 min,碘化丙啶DNA染色后上机检测。 5.端粒酶活性测定:同上法肝细胞孵育3 d,按试剂盒要求处理细胞,取反应管,各加入45 μl反应混合物、2 μl已处理的标本,混匀,加入30 μl液体石蜡,置25 ℃水浴保温 30 min,在聚合酶链反应(PCR)仪上循环,94 ℃120 s,94 ℃30 s,48 ℃30 s,72 ℃90 s ,72 ℃300 s。循环35次。循环结束后,在微孔板各孔中加入杂交反应液,再加入扩增产物 25 μl混匀,设立阴阳及空白对照,置37 ℃恒温反应60 min。加入显色剂,37 ℃避光显色 10 min,加入终止液,终止反应。在波长450 nm读取A值。 二、结果 1.ASODN-t对细胞生长的影响(图1): 不同浓度ASODN-t与2×107个/L肝癌细胞共同孵育后,细胞生长受到抑制,这一抑制作用随浓度的升高及作用时间的延长而加强。N-ODN(对照组)对肝癌细胞无作用。 2.细胞形态学变化: 倒置显微镜下可见N-ODN作用的细胞及不加药组细胞呈上皮型贴壁生长,细胞轮廓清楚,细胞间结构紧密,细胞生长旺盛;而ASODN-t组细胞有部分变圆浮起,细胞间接触变松,增殖减慢,细胞中颗粒增多,随药物浓度增高,细胞周围碎片增多,并将5?μmol/L?ASODN-t处理3?d的细胞在荧光显微镜下观察,细胞核染色质深染,聚积于核膜下呈新月形,膜突起呈小泡样,小泡脱落形成含核小体片段的凋亡小体。而N-ODN(对照组)作用的细胞及不加药细胞无明显形态学变化。 3.DNA电泳结果: 5?μmol/L?ASODN-t作用3?d后,肝癌细胞DNA电泳呈明显凋亡带,对照组则无凋亡带。 4.流式细胞仪分析结果: 流式细胞仪检测5 μmol/L ASODN-t作用3 d的肝癌细胞在G1 期前出现亚二倍体凋亡峰,对照组未见凋亡峰。 5.端粒酶活性: 5 μmol/L ASODN-t作用3 d后,肝癌细胞端粒酶活性明显受到抑制(A 值:0.06),不加药的肝癌细胞及N-ODN作用的细胞粒酶活性很高(A值:0.13、0.14) 。
-
失血性休克大鼠肠上皮细胞凋亡的实验研究
目的:探讨大鼠失血性休克肠上皮细胞凋亡的发生情况,阐述肠道靶学说的分子机理.方法:采用DNA凝胶电泳、电镜、光镜以及流式细胞仪分析(FACS)等方法测定了大鼠缺血缺氧后肠上皮细胞凋亡和坏死情况.(1)动物模型:Wistar大鼠随机分为正常对照组与失血性休克缺血再灌流组.用戊巴比妥钠(30 mg/kg)腹腔麻醉,右侧股动脉插管.按Wigger法放血至平均动脉压5.33 kPa,分别在休克2 h、3 h、5 h活杀动物.(2) 光镜:动物活杀后立即取回盲部小肠5 cm,3%戊二醛固定,常规脱水包埋,切片,光镜观察.(3)电镜:动物活杀后立即取回盲部小肠5 cm,10%甲醛固定.脱水后石腊包埋,切片厚度为2 μm,HE染色后光镜下观察.(4)细胞DNA凝胶电泳: 按戴纪纲等方法分离肠上皮细胞,提取DNA,肠上皮细胞悬液经PBS洗涤2次后,将细胞数调至1×109/L,加annexm v-FITC和碘化丙啶(PI)避光反应 10 min后,流式细胞仪分析.结果:失血性休克缺血再灌流组细胞凋亡主要发生于肠上皮细胞,并可见大量坏死组织;DNA ladder呈明显的梯型条带;FACS检测肠上皮细胞凋亡比例明显增多,其大凋亡率(MAR)较对照组明显增加,与DNA ladder结果一致.而对照组未发现附着在小肠上皮细胞的凋亡细胞.讨论:大鼠失血性休克后小肠细胞凋亡特征是:凋亡细胞主要发生于上皮细胞,凋亡细胞的数量以休克3 h后为明显,先分布于绒毛顶端, 逐步扩散至绒毛中下部,固有层和隐窝也有部分凋亡出现;值得注意的是小肠细胞凋亡出现在休克后早期,说明凋亡过程可能与缺血缺氧和氧自由基有关.严重创伤休克后,大量过度的粘膜细胞凋亡,必然导致粘膜屏障的损伤,导致肠源性感染的发生.因此进一步研究失血性休克后小肠上皮细胞的凋亡机制及药物防治,无疑对临床救治肠源性感染具有十分重要意义 .结论:失血性休克可诱导肠粘膜上皮细胞凋亡和坏死,其机理可能与缺血缺氧及氧自由基有关.
-
紫杉醇、羟基喜树碱对晶体上皮细胞生长周期的影响
目的:研究紫杉醇(Taxol)和羟基喜树碱(Hydroxycamptothecine, HCTP)对兔晶体上皮细胞(rabbit lens epithelial cells, RLECs)生长周期的影响.观察Taxol和HCPT对体外培养的兔晶体上皮细胞抑制的作用.方法:2~3月龄家兔30只;DMEM/F12培养基;胎牛血清;MTT;细胞培养瓶;全自动酶标光度仪;倒置显微镜;离心机;流式细胞仪.(1)取2~3代的对数生长期RLECs于96孔板中,放入CO2孵箱内培养24 h后,将不同浓度的Taxol和HCPT分别作用24及72 h,用MTT测定法观察其对RLECs增殖的作用.(2)将消化的第2代RLECs计数成一定浓度的细胞悬液加入3组培养瓶中,一组为不加药的正常对照组,其余两组为分别加入一定浓度的Taxol和HCPT的实验组,作用48 h,用0.25%胰蛋白酶消化、PBS洗涤、立即进行流式细胞仪分析.结果:本研究发现Taxol和HCPT对体外培养的兔晶体上皮细胞均有抑制作用,Taxol 24 h的半效抑制量(ID50)为6μg/mL,72 h的ID50为4μg/mL.HCPT 24 h的ID50为96.041 μg/mL,72 h的ID50为1.34 μg/mL.流式细胞仪分析表明Taxol将RLECs的细胞周期阻断于G2/M期,并在G2/M期阻断前还有短时的G0/G1期阻断.HCPT将细胞周期阻断于S期.结论:Taxol和HCPT增多属细胞周期特性药.Taxol为新型抗微管药物,其作用目标为细胞骨架的微管系统,抑制微管解聚.本实验证实Taxol使RLECs周期阻断于G2/M期,至于在G2M期阻断前还有短时的G0/G1期阻断,其机制值得进一步研究.羟基喜树碱靶向高度选择性抑制拓扑异构酶(Topo Ⅰ),主要作用于RLECs的S期.
-
EBV-LMP1通过NFκB介导的信号传导途径活化CyclinD1机制初探
目的:探讨EBV-LMP1促进细胞增殖,参与EBV相关疾病致瘤的分子机制和EBV-LMP1通过NFκB介导的信号传导途径活化细胞周期重要正性调节因子CyclinD1表达的机制.方法:利用已建株的,LMP1表达受四环素衍生物强力霉素严密调控的pTet-on-LMP1-HNE2稳定鼻咽癌细胞系,用强力霉素诱导LMP1的表达,Western blotting从蛋白质水平分析LMP1诱导CyclinD1表达的表达动力学,包括时间效应及剂量效应,进一步在LMP1稳定表达的鼻咽癌细胞系CNE-LMP1中,用反义硫代磷酸化寡聚核苷酸分别从LMP1,NFκBp65及CyclinD1三个层次阻断,结合报导基因分析法分析从转录水平阻断后,CyclinD1报导基因强度的差异,结合流式细胞仪分析这三个层次的阻断对细胞周期产生的影响,从而探讨在鼻咽癌中,EVB-LMP1促进CyclinD1表达的机制.结果:在pTet-on-LMP1-HNE2细胞中,Western blotting方法显示,较未经诱导比较,随着LMP1的诱导表达,CyclinD1的表达明显增强,且表达具有时间依赖性,但是剂量诱导表达效果不显著.在CNE-LMP1细胞系中,导入LMP1、p65及CyclinD1的反义寡聚核苷酸从三个层次分别阻断各自的表达后,报导基因分析结果显示,CyclinD1的报告基因活性均被抑制,分别下降7.1倍,13.7倍,及35.7倍,流式细胞仪分析结果显示,较之未处理的CNE-LMP1细胞,反义LMP1、P65及CyclinD1均可抑制细胞进入增殖期,分别抑制了35%,26%及7%.结论:EBV-LMP1可能经NF-κΒ介导的信号传导途径活化CyclinD1表达,导致细胞周期紊乱,进而赋于鼻咽癌细胞恶性增殖特性.通过本研究将信号传导与细胞周期这两个当前活跃的研究领域交叉起来,为阐明EB病毒致瘤机制开辟了一个新的视野.
-
多发性硬化患者淋巴细胞Fas和FasL的表达
赵忠新黄坚庄建华邵福源实验科张玲珍报道选择31例符合Poser诊断标准的多发性硬化(MS)患者及20例正常人为对照组为研究对象.MS复发期23例,男10例,女13例,年龄16~53岁,平均(34.1±9.2)岁;缓解期8例,男3例,女5例,年18~41岁,平均(30.9±7.7)岁.MS和对照组除外标准:其他自身免疫性疾病、肿瘤、近期感染、组织损伤、3个月内应用免疫抑制剂.用流式细胞仪检测血和脑脊液(CSF)Fas和FasL的表达,Fas用直接法;全血或CSF 100μL,分别加入FITC标记的Fas单抗,孵育30min;FasL用间接法:全血或CSF 100μL分别加入FasL单抗,孵育30min后,PE标记的二抗孵育30min,经溶红细胞、稀释和固定后,24 h内上流式细胞仪分析.操作中根据不同白细胞前向和侧向光散射的不同可区分淋巴、单核和中性粒细胞.每个样本分析5000个细胞,结果以阳性细胞的百分率表示.