西安交通大学学报（医学版）杂志
Journal of Xi'an Jiaotong University(Medical Sciences) 서안교통대학학보（의학판）
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TNF-α基因多态性与新疆哈萨克族慢性阻塞性肺疾病易感性的关系
目的 探讨新疆哈萨克族慢性阻塞性肺疾病(COPD)与TNF α基因-308位点(TNF-α-308)多态性的关系.方法 以新疆哈萨克族150例COPD患者和150例健康体检者为研究对象,通过反向测序法对TNF-α 308的基因型进行检测,利用SPSS17软件分析该多态性位点与COPD易感性的关系.结果 在COPD组和对照组中均以GG基因型为主,两组之间的GG、GA和AA基因型分布差异有统计学意义(P=0.004),等位基因G和A之间差异亦有统计学意义(P=0.001);经调整年龄、性别和吸烟史后,分析结果表明A等位基因是COPD发病的危险因素(P=0.001,OR=2.657,95％ CI=1.552～4.548).结论 哈萨克族人群TNF-α-308A等位基因可能是COPD发病的危险因素,携带GA或AA基因型患者发病风险较高.
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骨转录因子Runx2和骨桥蛋白OPN在人乳腺癌组织中的表达及其与乳腺癌微钙化的关系
目的 观察骨转录因子Runx2、骨桥蛋白(osteopontin,OPN)在人乳腺癌组织中的表达,并进一步探讨其与乳腺癌微钙化形成间的关系.方法 利用免疫组化方法观察骨转录因子Runx2和骨桥蛋白OPN在62例乳腺癌组织中的表达.根据乳腺癌患者钼靶X线片中微钙化的有无与数量多少,将62例乳腺癌分为3组,即无钙化组、少量钙化组以及大量钙化组,观察Runx2和OPN蛋白表达与不同乳腺癌微钙化之间的关系.结果 Runx2蛋白在人类乳腺癌组织中表达阳性率为72.6％(45/62). OPN蛋白在人类乳腺癌组织中表达阳性率为79.0％(49/62). Runx2和OPN蛋白的阳性表达与乳腺癌钼靶X线片中微钙化的出现和数量密切相关,随着微钙化从无到有以及由少至多,Runx2(x2=15.686,P＜0.05)和OPN(x2=16.161,P＜0.05)蛋白的阳性表达率呈逐步增高的趋势.但Runx2和OPN阳性表达与乳腺癌钼靶片中微钙化形态无关.结论 Runx2和OPN蛋白在人类乳腺癌组织中高表达,其可能参与了乳腺癌微钙化的形成过程.
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无创正压通气对AECOPD患者呼吸肌疲劳的治疗作用
目的 采用随机平行对照研究,评价无创正压通气(NPPV)对于轻度慢性阻塞性肺疾病急性加重期(AECOPD)患者早期治疗的效果.方法 符合入选标准和排除标准的轻度AECOPD的40例患者,随机分为NPPV组和对照组进行治疗并观察治疗前后血气指标、呼吸肌疲劳指标的改变以及医疗花费情况.结果 NPPV组和对照组的PaCO2和pH值差异无统计学意义.NPPV组在治疗2h时PaO2[(79.81±50.3)mmHg]明显升高,和对照组[(64.29±33.2)mmHg]比较差异有统计学意义.NPPV组膈神经动作电位[(200.67±54.0)μV]较治疗前[(127.03±36.0)μV]以及对照组[(150.53±52.0)μv]显著提高,均有统计学意义.NPPV组6 min步行距离[(400.25±70.5)m]较治疗前增加,和对照组[(338.41±70.9)m]比较差异有统计学意义.NPPV组的住院天数缩短,但同时治疗花费也增多,和对照组比较差异均有统计学意义.结论 NPPV对轻度AECOPD患者早期干预治疗后可以改善PaO2,缓解呼吸肌疲劳,提高活动耐力,但对PaCO2和pH值无改善.
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Gli-1在缺氧诱导乳腺癌MDA-MB-231细胞上皮-间质转分化中的重要作用
目的 探讨Gli-1在缺氧诱导乳腺癌MDA-MB-231细胞上皮-间质转分化(EMT)及侵袭中的重要作用.方法 通过缺氧培养乳腺癌MDA-MB-231细胞,以常氧培养作为对照.Transwell小室侵袭试验检测各组MDA-MB-231细胞的侵袭能力;Western blot检测HIF-1α、Gli-1、E-Cadherin和vimentin蛋白的表达水平.通过shRNA稳定转染乳腺癌细胞,再次通过Transwell小室侵袭试验检测缺氧对乳腺癌细胞侵袭能力的影响,Western blot检测HIF 1α、Gli-1、E-Cadherin和vimentin蛋白的表达水平.结果 缺氧可明显诱导乳腺癌MDA MB-231细胞侵袭,并上调HIF-1α、Gli-1和vimentin蛋白,下调E-cadherin蛋白.靶向沉默Gli-1基因后,缺氧失去了对乳腺癌细胞侵袭和EMT的诱导作用.结论 缺氧通过上调Gli-1表达活化Hedgehog通路,诱导乳腺癌细胞侵袭及EMT过程.
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蛋白组学分析放射抗拒性鼻咽癌细胞差异表达蛋白
目的 筛选同一来源放射敏感性不同的鼻咽癌细胞蛋白组学差异表达,探讨鼻咽癌放射抗拒机制.方法 建立放射敏感性不同的人鼻咽癌细胞株,采用双向凝胶电泳技术和图像分析软件PDQuest分离和分析不同阶段细胞间的差异蛋白质点,采用LC MS/MS质谱分析系统鉴定差异蛋白质点,采用Gene Oncology Annotation将已知差异蛋白质进行分类.部分筛选蛋白质采用Western blot进行验证.结果 CNE-2和CNE-2R细胞有差异候选差异蛋白质27个,其中11个蛋白质在放射抗拒CNE 2R细胞中表达下调,16个上调.其中的4个:4-3-3σ、GADD45、PRKDC和HSP27用Western blot的方法得到了进一步确认.结论 CNE-2细胞受射线反复照射产生放射抗拒性细胞,在蛋白组学水平上发生了某些突变,并将这些突变稳定的遗传下来,从而表现出放射抗拒性的表型;通过调控其中与放射抗拒性产生相关的某些蛋白表达,就有可能调控细胞的放射敏感.4-3-3σ、GADD45、PRKDC和HSP27是预测NPC放疗敏感性的潜在基因标志物,它们表达失调可能参与NPC放射抗拒性的产生.
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含hITF基因cDNA的腺病毒载体的构建及其感染肠上皮细胞的研究
目的 构建含有人肠三叶因子基因cDNA的腺病毒载体,并观察其对肠上皮细胞的感染能力.方法 利用PCR技术扩增hITF基因cDNA全长序列,测序后亚克隆至腺病毒穿梭质粒,转化至含腺病毒骨架质粒pAdEasy-1大肠杆菌株BJ5183感受态细胞中进行同源重组,内切酶PmeⅠ线性化后转染HEK293细胞进行病毒包装及扩增,并进行滴度测定.将重组腺病毒感染肠上皮细胞(HT-29),荧光显微镜观察感染效果.结果 成功构建出重组穿梭质粒pAdTrack-CMV-hITF,Pme Ⅰ线性化后与骨架质粒pAdEasy-1同源重组,Pac Ⅰ酶切鉴定后命名为Ad-hITF;重组腺病毒载体在HEK293细胞中包装,获得重组腺病毒颗粒;根据Karbers公式计算病毒颗粒滴度为2×109 pfu/mL;重组腺病毒可以感染肠上皮细胞(HT-29),感染效率较高.结论 成功构建含hITF基因cDNA的重组腺病毒载体并获得大量子代重组腺病毒,为腺病毒介导hITF基因治疗的应用打下基础.
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山奈酚对四氯化碳致小鼠急性肝损伤的保护作用
目的 研究山奈酚对四氯化碳(CCl4)致小鼠急性肝损伤的保护作用并探讨其作用机制.方法 昆明种雄性小鼠随机分为空白对照组、模型组、阳性对照组(水飞蓟宾组)和低、高剂量山奈酚组.前2组给予溶剂蒸馏水灌胃,其余组分别给予0.1 g/(kg·d)水飞蓟宾或6 mg/(kg·d)、18 mg/(kg·d)山奈酚,连续7d.末次灌胃2h后,空白对照组腹腔注射花生油,其余各组腹腔注射1.5 mL/L CCl4花生油混合液,制备急性肝损伤模型.测定并比较各组小鼠血清谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST),肝组织丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)的含量或活力及肝脏病理学变化的差异.结果 与模型组比较,山奈酚低、高剂量均可明显降低小鼠血清ALT和AST含量(P＜0.05或P＜0.01),降低肝组织MDA含量(P＜0.01),增加SOD活力(P＜0.05或P＜0.01),水飞蓟宾对上述指标有相似作用(P＜0.05或P＜0.01).病理切片显示,与模型组比较,水飞蓟宾组和低、高剂量山奈酚组的肝细胞坏死范围及程度均明显减少,炎细胞浸润程度明显减轻,其中高剂量山奈酚组的效果好.结论 山奈酚对CCl4致小鼠急性肝损伤有保护作用,其机制可能是山奈酚减少自由基的生成.
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观察脑啡肽在大鼠缺血再灌注脑组织中的表达特点
目的 观察大脑中动脉缺血再灌注大鼠脑皮层和海马CA1区脑啡肽的表达,探讨缺血时间和再灌注时间的改变对脑啡肽含量、分布的影响.方法 56只雄性SD大鼠,随机分为7组,通过线栓法制作双侧大脑中动脉栓塞大鼠模型,在预定的时间点取脑组织固定,进行免疫组化及免疫荧光染色评估脑组织中脑啡肽的表达.结果 假手术组与实验组皮层、海马CA1区均可见脑啡肽阳性表达及脑啡肽阳性细胞.实验组皮层及海马CA1区脑啡肽的含量与假手术组比较从再灌注8h后开始增加,24 h增加明显,且缺血100 min组脑啡肽含量较缺血30 min组增加明显(P＜0.05).实验组海马CA1区阳性细胞数与假手术组比较无明显差异(P＞0.05),皮层内脑啡肽阳性细胞数实验组在再灌注8h开始增加,24 h增加明显,且缺血100 min组脑啡肽阳性细胞数较缺血30 min组增加明显(P＜0.05).结论 皮层和海马CA1区脑啡肽的表达随缺血时间和再灌注时间延长而增加;皮层内脑啡肽表达的增加既包括脑啡肽总含量的增加,也包括脑啡肽阳性细胞数的增加,而海马CA1区仅仅表现为脑啡肽总含量的增加.
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SLC-Her-2/neu-p53-Fc融合基因重组腺病毒真核表达载体对荷黑色素瘤小鼠的免疫治疗效果
目的 扩增纯化携带融合基因SLC-Her-2/neu-p53-Fc(SLC-HP Fc)的重组腺病毒AdEasyTM-SLC-HP-Fc真核表达载体,研究其对荷黑色素瘤小鼠的免疫治疗效果.方法 将重组腺病毒真核表达载体AdEasyTM-SLC-HP-Fc在人胚肾293细胞中扩增、纯化;向小鼠皮下注射表达Her-2/neu-p53融合基因的B16F10-psig-Her-2/neu p53细胞(B16-HP细胞)建立荷黑色素瘤小鼠模型;将小鼠随机分成对照组、肌肉注射组和皮下注射组,用重组腺病毒AdEa-syTM-SLC-HP-Fc真核表达载体进行治疗,观察肿瘤生长情况,测定细胞毒性活性、血清p53抗体.结果 纯化后重组腺病毒AdEasyTM-SLC-HP-Fc真核表达载体滴度8×108 pfu/mL.目的基因SLC-HP在小鼠体内成功表达.重组腺病毒AdEasyTM SLC-HP-Fc真核表达载体高剂量肌肉注射能有效抑制小鼠肿瘤的生长,瘤重与对照组比较差异有统计学意义(P=0.005),抑瘤率达到98.8％,细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的特异性杀伤力有明显提高.结论 重组腺病毒AdEasyTM-SLC-HP-Fc真核表达载体高剂量肌肉注射能延长出瘤时间,抑制肿瘤的生长.
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腹腔镜直肠癌根治术与开腹手术短期疗效的比较
目的 探讨腹腔镜与开腹直肠癌根治术的短期疗效.方法 对腹腔镜(68例)和开腹(64例)直肠癌根治术患者的临床资料进行回顾性分析,对两组患者的短期疗效进行对比分析.结果 腹腔镜组较开腹组患者手术时间和住院费用增加(P＜0.05),但腹腔镜组术中出血量明显减少(P＜0.01),术后镇痛剂使用比例降低(P＜0.01),术后尿管留置时间、胃肠道功能恢复时间及住院时间缩短(P＜0.05);腹腔镜组术后并发症总发生率为23.53％,开腹组为34.38％,两组间差异有统计学意义(P＜0.05).结论 与开腹手术相比较,经腹腔镜下直肠癌根治术具有创伤小,疼痛轻,术后恢复快,住院时间短,并发症少的优点,是目前直肠癌的一种安全微创的治疗方法.
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简易胰岛素释放试验对评价胰岛B细胞功能的意义
目的 探索简易胰岛素释放试验(insulin release test,IRT)对评价2型糖尿病患者胰岛B细胞功能的价值.方法 对广东医学院附属医院2003～2013年门诊以及住院的1 631例2型糖尿病患者和168例健康人(正常糖耐量组,即NGT组)口服75 g无水葡萄糖粉,行简易IRT和相应时点的血糖测定,按测定结果将糖尿病患者再分为空腹胰岛素低值组(A组)、空腹胰岛素正常组(B组)、空腹胰岛素高值组(C组),将A、B、C各组的结果分别与NGT组进行比较.结果 NGT组中,血清胰岛素的峰值出现在餐后1h,峰值为空腹血清胰岛素值的5倍以上,餐后2h时血清胰岛素明显降低.A组各时点的血清胰岛素值均低于NGT组,在餐后2h时出现低峰值,各时点的血清胰岛素值与NGT组相比差异均有统计学意义(P＜0.05).B组空腹和餐后1h与NGT组无差异,峰值出现在餐后2h,餐后2h血清胰岛素值与NGT组相比差异有统计学意义(P＜0.05).C组各时点血清胰岛素值均明显高于NGT组,峰值出现在餐后2h,各时点血清胰岛素值与NGT组相比差异均有统计学意义(P＜0.05).简易IRT各点的胰岛素水平与相应的糖耐量试验(OGTT)的血糖值均呈负相关.结论 简易IRT对评价糖尿病患者的胰岛细胞功能具有一定的临床指导意义.
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参芎化瘀胶囊通过VEGF/Notch1信号通路改善大鼠缺血性脑卒中损伤
目的 探讨参芎化瘀胶囊对全脑缺血再灌注损伤大鼠的治疗作用及对海马区VEGF/Notch1通路的影响.方法 SD大鼠分为假手术组、模型组及参芎化瘀胶囊高、低剂量组.采用改良的Pulsineli 4血管阻断(4-VO)法制作全脑缺血模型,分别在缺血24、48、72 h应用光镜观察海马区神经细胞形态的变化;应用免疫组化法检测海马区VEGF、Notch1表达.结果 与假手术组比较,模型组海马区各时间点的存活神经细胞率降低,差异有统计学意义(P＜0.05);VEGF、Notch1表达升高,差异有统计学意义(P＜0.05).与模型组比较,参芎化瘀胶囊组各时间点的存活神经细胞率增加,差异有统计学意义(P＜0.05);VEGF、Notch1表达进一步升高,差异有统计学意义(P＜0.05).上述变化在高剂量参芎化瘀胶囊组更为明显.模型组VEGF与Notch1表达呈正相关(r=0.846,P＜0.01);参芎化瘀胶囊组VEGF与Notch1表达呈正相关(r=0.814,P＜0.01).结论 参芎化瘀胶囊对脑缺血损伤有很好的治疗作用,其机制可能与调控VEGF/Notch1信号途径有关.
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绿原酸对体外培养的人鼻咽癌细胞株CNE-1的作用
目的 探讨绿原酸(chlorogenic acid,CHA)对体外培养状态下人鼻咽癌细胞株CNE-1的作用及其机制.方法 在无菌状态下复苏人鼻咽癌细胞株CNE-1,取传4代的细胞,向培养基内加入CHA,使其终浓度达到0、25、50、100、200、500 μmol/L,应用CCK-8体外抑制实验进行筛选CHA的佳抑癌浓度.选择CHA佳抑癌浓度,作用于CNE 1细胞系.检测人鼻咽癌细胞株CNE-1中端粒酶活性、抑癌基因p27和p16的表达、细胞周期蛋白(cyclinD1)和细胞周期蛋白依赖激酶(CDK4)的表达.结果 经CCK-8体外抑制实验进行筛选CHA的佳抑癌浓度为100μmol/L.人鼻咽癌细胞株CNE-1的培养基中加入终浓度为100 μmol/L的CHA,维持10d,CNE-1细胞株中其端粒酶活性为1.621,远低于试剂盒中的阳性对照和未处理的CNE-1细胞株,差异具有统计学意义(P＜0.01).应用CHA处理CNE-1细胞株10d后,抑癌基因p27和p16均有少量的表达,而在阳性对照组(HT1080细胞)和未处理的CNE-1细胞几乎没有表达.应用CHA处理CNE-1细胞株10 d后,cyclin D1和CDK4的表达量与阳性对照组(HT1080细胞)和未处理的CNE-1细胞相比明显降低.结论 应用100 μmol/L CHA 10 d,可以降低CNE-1细胞株端粒酶活性、增加抑癌基因的表达,降低细胞周期蛋白的表达.CHA对人鼻咽癌细胞株CNE-1的作用是通过活化抑癌基因和抑制细胞周期蛋白的表达来实现的.
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补肾活血方联合地屈孕酮对复发性流产患者临床疗效及Th1/Th2型细胞因子的影响
目的 探讨补肾活血方联合地屈孕酮治疗复发性自然流产(RSA)的疗效及可能免疫作用机制.方法 选择中医辨证属肾虚血瘀型RSA妊娠患者62例,随机分为中药组(21例)、西药组(20例)、中西药组(21例).中药组采用自拟补肾活血方治疗,西药组采用地屈孕酮治疗,中西药组采用两者联合治疗.同时,随机选取正常妊娠者20例为正常对照组,不予任何药物治疗.观察各组治疗前后中医证候积分、证候疗效、临床综合疗效、外周血中IL-2、IL-10水平及IL-2/IL-10比值的变化.结果 治疗后中医证候积分中西药组优于西药组(P＜0.05);治疗组各组治疗后较治疗前IL-10水平均明显升高,IL-2水平及IL-2/IL-10比值明显降低(P＜0.01).治疗后与中药组、西药组相比,中西药组血清IL-10水平显著升高,血清IL-2及IL-2/IL-10比值显著降低(P＜0.05),中药组与西药组间比较,则均无明显差异(P＞0.05).结论 补肾活血方联合地屈孕酮治疗肾虚血瘀型RSA临床疗效确切,从整体上调节机体免疫平衡使妊娠得以维持.
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DAPK1在弥漫性轴索损伤后大鼠脑组织中的表达及其与神经元凋亡的关系
目的 探讨大鼠弥漫性轴索损伤(diffuse axonal injury,DAI)后神经元凋亡及死亡相关蛋白激酶1(DAPK1)表达变化,为临床治疗提供新的靶点及治疗时间窗.方法 40只SD成年雄性大鼠随机分为对照组(n=8)和DAI组(n=32).DAI组选用大鼠头颅瞬间旋转装置制备DAI模型,分为6h、24h、72h、7d组共4个亚组(n=8).各组在造模前及处死前采用改良神经功能缺损评分(mNSS)对大鼠神经功能进行评分;同时将各组大鼠一半用于Western bolt检测大鼠胼胝体、脑干组织内DAPK1表达情况;另一半用于TUNEL检测大鼠脑组织内神经元细胞凋亡情况.结果 DAI后大鼠均出现明显体质量下降、神经功能缺失;DAI后6h组大鼠胼胝体、脑干组织可见DAPK1蛋白表达明显升高,并出现明显神经元细胞凋亡,DAI后24 h组DAPK1表达及神经元细胞凋亡均到达高峰值,DAI后72h、7d组表达开始下降,仍明显高于对照组.结论 DAI后出现神经功能缺失、体质量下降,可能与损伤后DAPK1表达及神经元细胞凋亡有关,二者在损伤后24 h一致性达到高峰;提示DAPK1抑制剂药物治疗时间窗为伤后24 h.
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辛伐他汀在弥漫性轴索损伤后神经保护中的作用及其机制
目的 探索辛伐他汀预处理在弥漫性轴索损伤(DAI)后神经保护中的作用,并初步阐明可能的机制.方法 采用大鼠头颅瞬间旋转损伤装置制备大鼠DAI模型,模型制作前随机给予白开水或辛伐他汀[60 mg/(kg·d)]灌胃1周,DAI后24 h用改良神经功能缺损程度评分(mNSS)评估神经功能状态,处死并取脑,脑组织切片行HE染色、Mallory磷钨酸苏木素染色、淀粉样蛋白前体(APP)免疫组化染色及TUNEL染色,另外大鼠用于提取脑组织蛋白行RhoA活性检测.结果 DAI后大鼠都出现明显神经功能缺失,组织病理学可见神经元死亡,轴突断裂.辛伐他汀预处理后神经功能有明显改善,APP分数明显降低,TUNEL染色强度也有降低.RhoA活性检测结果显示DAI后RhoA活性升高,但此效应可被辛伐他汀抑制.相关性分析显示RhoA活性与APP分数及TUNEL结果都有显著相关性.实验前后大鼠的生理指标和血液生化指标无明显差异.结论 辛伐他汀可改善DAI后神经功能状态,且此作用与抑制RhoA活性有关.
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大鼠弥漫性轴索损伤后海马区caveolin-1的表达及其与星形胶质细胞活化的关系
目的 研究大鼠弥漫性轴索损伤(diffuse axonal injury,DAD后小窝蛋白1(caveolin-1)在大鼠脑海马区的表达,探讨caveolin-1的表达变化与星形胶质细胞活化的关系.方法 运用Western blot检测大鼠海马中caveolin-1的表达,运用免疫组化检测海马区胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)的表达,并通过免疫荧光共定位分析caveolin-1与GFAP之间的相互作用.结果 Western blot结果提示DAI后海马区caveolin-1的表达从1d开始显著降低,并持续降低至7 d(P＜0.05);免疫组化结果提示DAI后星形胶质细胞活化标志物GFAP的表达从1d后逐渐升高,3d后达峰,7d后稍降低,但仍高于正常(P＜0.05);免疫荧光共定位提示DAI后caveolin-1与GFAP的共定位细胞数随着时间的延长逐渐增加.结论 大鼠DAI后海马区caveolin-1的表达减少,GFAP的表达增加,星形胶质细胞内caveolin-1的表达变化可能是导致GFAP升高及星形胶质细胞活化的机制之一.
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氢气通过抗氧化应激减轻大鼠弥漫性轴索损伤
目的 探讨氧化应激在大鼠弥漫性轴索损伤(DAI)中的作用及氢气对其治疗作用.方法 将118只SD雄性大鼠随机平均分为假手术组、DAI模型组和氢气干预组.采用头颅瞬间旋转损伤装置制作大鼠DAI模型,干预组每日2次腹腔注射高纯度氢气(10 mL/kg).各组于预定时间点行神经功能评分、组织形态学、碘化丙啶(PI)染色及脑组织超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活力和丙二醛(MDA)含量检测.结果 与假手术组比较,DAI后脑组织MDA含量升高(P＜0.01),SOD及CAT活力下降(P＜0.01),神经细胞肿胀,大量神经元变性、坏死,胶质细胞增多,PI阳性细胞增加(P＜0.01),神经功能缺损加重(P＜0.01).给予氢气干预后脑组织MDA显著下降(P＜0.01),SOD及CAT活力增强(P＜0.01),组织形态学观察改善,PI阳性细胞数减少(P＜0.01),神经功能缺损改善(P＜0.05).结论 氧化应激参与了DAI急性期脑损伤的病理生理过程,自由基的大量产生及抗氧化酶活力的下降可能导致脑损伤的加重;氢气通过改善抗氧化酶活力并减轻自由基损伤改善DAI急性期脑损伤.减轻氧化应激程度对DAI急性期脑保护具有重要意义.
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高表达瞬时电位受体通道1在大鼠弥漫性轴索损伤中的作用机制
目的 研究瞬时电位受体通道1 (TRPC1)在弥漫性轴索损伤(DAI)中的作用,探讨TRPC1在DAI后神经元钙超载及髓鞘变性中的机制.方法 瞬间旋转损伤法建立大鼠DAI模型,用SKF96365干扰TRPC1通道活性后建立DAI干预组,Fura-2AM检测胞内Ca2+浓度,Western blot和免疫组化检测皮层TRPC1蛋白的动态表达,并与正常组、DMSO对照组相比较,电镜检测神经元及髓鞘改变,TUNEL检测皮层神经元凋亡.单因素方差分析数据.结果 DAI后皮层中TRPC1蛋白表达升高,在1d达到高峰,随后逐渐下降,同时皮层神经元胞内Ca2+浓度在1d达到峰值,髓鞘结构破坏.给予TRPC1通道阻断剂SKF96365后,皮层TRPC1蛋白表达被抑制,皮层神经元钙内流减低,髓鞘结构部分保留,神经功能评分改善.结论 DAI后TRPC1导致的钙超载是造成髓鞘变性及神经元死亡的重要原因,抑制TRPC1产生的钙内流可保护髓鞘结构完整,减轻神经元凋亡.
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大鼠弥漫性轴索损伤后突起坍塌蛋白Sema3A及其受体neuropilin-1的表达
目的 研究突起坍塌蛋白(semaphorin 3A,Sema3A)及其受体神经纤毛蛋白1(neuropilin-1,NRP-1)在弥漫性轴索损伤(DAI)大鼠脑组织中的表达,探讨二者在DAI后脑损伤及神经修复中的可能作用及分子机制.方法 健康成年雄性SD大鼠48只,随机分为4组:对照组、DAI后6h、24h、7d组,每组各12只.采用大鼠头颅瞬间旋转损伤装置,制作大鼠颅脑DAI模型,改良NSS法评估大鼠神经功能的改变.按预定时间点灌注取脑进行HE及镀银染色,免疫荧光染色检测Sema3A和NRP 1的表达定位.RT-PCR与Western blot分别检测皮质、海马、脑干Sema3A和NRP-1的mRNA及蛋白表达.结果 DAI造模后在脑干、皮髓交界区、胼胝体等部位观察到神经轴突有不同程度的肿胀、迂曲、断裂、轴索球形成等病理征象,并有不同程度的神经细胞变性、核固缩等改变,伤后24h明显.免疫荧光显示Sema3A主要表达于各脑区神经元,NRP-1表达于神经元、星形胶质细胞及微血管内皮细胞.对照组Sema3A和NRP-1 mRNA及蛋白表达水平较低,DAI后6h其表达显著升高,24 h达高峰,并持续到7d.结论 Sema3A及其受体NRP-1在DAI大鼠脑组织内表达升高,参与神经损伤及修复的病理生理过程.
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纳洛酮用于弥漫性轴索损伤患者的有效性和安全性的系统评价
目的 纳洛酮用于弥漫性轴索损伤(DAI)的疗效仍存在疑虑,本研究通过meta分析评价其有效性和安全性.方法 计算机检索各数据库,筛选纳洛酮与对照组比较治疗DAI的随机对照研究(RCT).由研究者独立评价纳入研究的方法学并提取研究数据,采用STATA 12.0软件进行统计分析.结果 共纳入12个低质量RCT,包括964例DAI患者.Meta分析结果显示:纳洛酮可以降低DAI患者病死率(RR=0.56,95％CI:0.46～0.68,P＜0.001);改善格拉斯哥预后评分(RR=1.56,95％ CI:1.14～2.12,P=0.005);并且能缩短患者昏迷时间(WMD=-9.47,95％CI:-13.84～-5.10,P＜0.001).结论 由于缺乏高质量的随机双盲对照试验,纳入研究中纳洛酮使用剂量、疗程等存在差异,故纳洛酮改善DAI患者预后的证据尚不充分,其疗效和安全性尚需进一步评价.
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弥漫性轴索损伤后内质网钙释放对轴突内早期钙离子浓度的影响
目的 研究弥漫性轴索损伤(diffuse axonal injury,DAD后内质网(endoplasmic reticulum,ER)钙释放的变化,以及对轴突内早期钙离子浓度的影响,并探讨造成ER钙释放的可能分子机制.方法 使用体外培养7～12d的小鼠神经元行轴突牵拉损伤建立体外DAI模型,根据是否行牵拉损伤分为损伤组及对照组.使用ER Tracker Red标记ER,观察ER在轴突损伤前后的分布.通过Fluo-4 AM钙探针及激光共聚焦钙成像技术测量单个轴突内钙离子浓度的变化,并使用20 mmol/L咖啡因作用于细胞,使ER内钙离子快速排空,测量轴突部位咖啡因作用前后的钙离子浓度变化,从而间接观察ER内钙存量的变化.结果 ER Tracker Red荧光结果显示ER存在于神经元轴突部位中,损伤后的轴突肿胀部位存在ER聚集的现象.神经元牵拉损伤后,被牵拉的轴突钙离子浓度明显升高,与对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.05),受损的轴突表现出肿胀及“串珠样”变性等病理学改变.除损伤后2 min外,使用无钙细胞外液虽然明显降低了牵拉损伤导致的轴突的钙离子浓度升高,但在2～～30 min时间段中钙离子浓度升高依然存在,与对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).对照组中未经牵拉损伤的神经元轴突可被20 mmol/L咖啡因激起一个明显的轴突钙离子浓度升高,而牵拉损伤后的轴突对咖啡因的这种钙升高反应程度明显下降,与对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 DAI后的轴突钙离子浓度升高不仅由细胞外钙内流引起,细胞内钙释放同样参与其中.ER是引起这种DAI后轴突内钙释放的细胞器来源.
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硫化氢在大鼠弥漫性轴索损伤中的作用
目的 探讨弥漫性轴索损伤(diffuse axonal injury,DAI)后脑组织内源性硫化氢(hydrogen sulfide,H2S)含量的变化及外源性H2S对DAI的作用,阐明H2S作为一种新的气体信号分子在脑组织中发挥的作用,为DAI后神经功能障碍的防治提供理论基础.方法 采用大鼠头颅瞬间旋转装置制备大鼠DAI模型,给予外源性H2S干预,以造模后6h、24 h、7d为时间点,分别用亚甲蓝分光光度法检测脑组织H2S含量的变化,流式细胞仪检测海马CA3区神经元的凋亡及Western blot检测脑组织β淀粉样前体蛋白(β-amyloid precursor protein,β-APP)的变化.结果 DAI模型组皮层、海马、脑干内源性H2S的含量较对照组均显著增加,且DAI+ H2S干预组脑组织H2S含量增加更明显;DAI模型组较对照组海马神经元早期凋亡百分比明显增加,致伤时间越长,凋亡百分比越高,且DAI(7 d)+H2S干预组均较DAI(7 d)模型组的海马神经元凋亡百分比明显增高;DAI模型组皮层、海马、脑干β-APP的表达较对照组明显增高,且DAI+ H2S干预组均较DAI模型组β-APP的表达更明显.结论 DAI后脑组织神经元凋亡及β-APP表达的增加可能与脑组织自身内源性H2S含量的增加有关,其可能作为一种新的神经递质参与DAI的继发性神经元损伤过程.
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PARP-1在大鼠弥漫性轴突损伤脑组织中的表达及意义
目的 探讨多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP-1)在大鼠弥漫性轴突损伤(DAI)脑组织中的表达变化及意义.方法 健康成年雄性SD大鼠36只,随机分为6组:正常对照组、DAI后30 min组、DAI后6h组、DAI后12h组、DAI后24 h组、DAI后7d组,每组各6只.采用大鼠头颅瞬间旋转损伤装置制作DAI模型.在预定时间点取大脑皮质、脑干进行HE染色、银染及PARP-1免疫组织化学染色,采用阳性细胞计数法进行半定量统计,用单因素方差分析和SNK-q检验进行统计学处理.结果 光镜下银染可见大鼠DAI后脑皮质及脑干存在轴突回缩球,HE染色可见不同程度的轴突肿胀、神经细胞核固缩、血管内皮细胞肿胀、血管周间隙增大.上述形态改变在DAI后12h至24h达到高峰.PARP1在正常对照组脑皮质、脑干的神经元及神经胶质细胞的细胞核内有少量阳性表达.在DAI组的神经元及神经胶质细胞,以胞核阳性表达为主,同时存在胞质阳性表达.DAI后30 min时脑皮质及脑干阳性细胞数明显增加,12h达到高峰,24 h开始下降,到7d时脑皮质阳性细胞数仍高于正常水平(P＜0.05),脑干阳性细胞数与正常对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 PARP-1在DAI后皮质与脑干呈明显规律性表达;其变化规律与皮质和脑干的结构变化呈同步性动态改变;PARP-1可能在DAI后的继发性脑损伤中起重要作用.
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弥漫性轴索损伤后继发性脑损伤与神经保护治疗的研究进展
弥漫性轴索损伤(diffuse axonal injury,DAI)是一个进行性的病理生理变化,主要的脑损伤发生于继发性损伤(secondary injury,SI)阶段.因此,SI是影响患者病情及预后的重要因素.目前,有关SI病理机制的研究表明,DAI后神经元的SI涉及神经元及轴膜的离子平衡紊乱、沃勒变性、轴膜通透性改变、线粒体损伤及能量代谢障碍、免疫炎症反应以及氧化应激损伤等多种损伤机制.这些SI机制相互作用相互影响,是终导致DAI后神经元变性、甚至坏死和凋亡以及轴突继发性断裂的关键原因.虽然临床上对DAI患者的治疗目前无突破性进展,仍采用一般性治疗、亚低温以及神经营养等手段.但新近研究显示,有一些动物的体内或体外实验为DAI后的SI提供了潜在的治疗靶点,如钙离子拮抗剂、轴膜保护及修复药物、钙依赖的蛋白水解酶抑制剂、氧化应激抑制剂以及免疫抑制剂等.进一步阐明DAI后钙离子平衡紊乱、轴浆运输中断、线粒体损伤及能量代谢障碍、免疫炎症反应等SI的相关分子机制,以及这些多因素导致的DAI病理机制相互间的关系,将对减轻或阻断DAI后发生SI,加强神经保护与修复,以及为未来突破DAI的治疗瓶颈均具有重要意义.
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心房钠尿肽对气管移植兔急性肺损伤的保护作用
目的 探索心房钠尿肽(ANP)对新西兰兔气管移植后肺损伤的影响.方法 24只健康成年新西兰白兔随机分为2组,ANP组和对照组,均进行带支撑环的聚四氟乙烯(PTFE)替代物气管移植手术,术后第3日处死后,检测肺湿/于比(W/D)和动脉血氧分压,光镜下观察肺组织结构的变化.结果 与对照组比较,ANP组肺湿/干比显著减少(P＜0.05),且肺动脉氧分压显著升高(P＜0.05),肺组织学观察发现,肺水肿改变在对照组较ANP组更加显著.结论 ANP能够有效减轻PTFE气管移植兔的术后急性肺损伤.
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一种从血浆及血清中提取循环microRNA的方法
目的 提取和检测血浆和血清中的循环microRNA(miRNA)分子.方法 使用TRI REAGENT(R) BD试剂盒提取血浆和血清中的总RNA分子后,运用非变性凝胶电泳方法进行检测.随后采用miRNA反转录试剂盒反转录miRNA的cDNA分子,并使用实时定量荧光PCR方法检测miRNA分子.结果 成功提取和检测到了血浆和血清中的总RNA,同时实时定量荧光PCR方法检测出血浆和血清中的循环miRNA分子.结论 成功提取和检测到血浆和血清中的循环miRNA,并可用于实时定量PCR实验,为进一步的miRNA的理论研究和临床应用奠定了一定的实验基础.
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瘢痕疙瘩间充质干细胞的分离与培养及其生长曲线的研究
目的 探索获得瘢痕疙瘩来源的高纯度间充质干细胞(MSCs)的培养方法.方法 来源于第四军医大学唐都医院皮肤科住院的4例患者的瘢痕疙瘩标本,所取病变部位均位于前胸及后背皮肤,采用DMEM∶F12/(100 mL/L)胎牛血清(FBS)初步培养,再改用低糖DMEM/(100 mL/L) FBS培养,接着用低糖DMEM/(10 mL/L) FBS培养,后用无血清的干细胞培养基(SCM)培养,并通过观察细胞形态特征及应用流式细胞术检测细胞表面标记物的表达情况进行鉴定.结果 经血清梯度培养后得到了长梭形、形态均一,纯度较高的纤维样细胞,经流式细胞仪检测后细胞表面标记物表达情况为:CD29为99.99％,CD44为99.7％,CD45为0.69％,CD73为99.96％.结论 血清浓度逐渐降低的梯度培养法可获得高纯度的瘢痕疙瘩MSCs.
| 年 | 期数 |
| 2019 | 01 02 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2017 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2011 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2010 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2009 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2008 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2007 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2006 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2005 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2004 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2003 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2002 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2001 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2000 | 01 03 04 05 06 |
| 1999 | 03 |
