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EB病毒LMP1促鼻咽癌细胞生长与CD23、bcl-2表达和凋亡的关系
目的:探讨EB病毒LMP1表达的促鼻咽癌细胞生长作用与CD23、bcl-2表达和细胞凋亡的关系.方法:用免疫组化LSAB法检测LMP1、CD23和bcl-2蛋白的表达;用MTT法测定鼻咽癌细胞的生长能力;用DNA电泳法、流式细胞仪测定法和末端脱氧核苷酸转移酶介导核苷酸缺口标志(TUNEL)法检测癌细胞凋亡;用MTT法观察CD23单克隆抗体对鼻咽癌细胞生长能力的影响.结果:用含LMP1基因质粒转染并表达LMP1的鼻咽癌细胞(L-CNE1)在15%血清和无血清培养液培养下的生长能力均明显增强,并表达CD23蛋白,而空白质粒转染和非转染的LMP1阴性的鼻咽癌细胞(V-CNE1和CNE1)均无CD23蛋白表达;L-CNE1、V-CNE1和CNE1 3种鼻咽癌细胞在15%血清和无血清培养液培养下均未检出凋亡细胞,而都只有2%~3%的细胞表达bcl-2蛋白;CD23单克隆抗体能明显地抑制L-CNE1细胞的生长,但对V-CNE1和CNE1细胞的生长无明显影响.结论:结果提示LMP1在鼻咽癌细胞中表达的促生长作用可能是通过上调CD23所致,而与bcl-2的表达和细胞凋亡无关.
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TRAIL在树突状细胞杀伤活化T细胞中的作用及其机制的研究
活化后的细胞死亡(activation-induced cell death, AICD)是机体调控免疫反应、防止其过度活化的一种主要机制.研究表明,活化后的T细胞表达DR4、DR5的水平增高,对TRAIL诱导的凋亡敏感性增加.DC是机体内强的抗原提呈细胞,能够刺激处女、记忆T细胞活化.
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Neuro-2a细胞株用于A型肉毒毒素重链体外实验的可行性研究
目的:探讨Neuro-2a细胞株用于A型肉毒毒素重链( botulinum neurotoxin serotype A heavy chain, BoNT/A HC)体外细胞模型的可行性。方法:体外培养Neuro-2a细胞检测HC相关受体,确定是否可用于HC作用的体外模型;后于Neuro-2a细胞培养液内加入一定浓度的HC,于不同时点在相差显微镜下摄取图片观察HC对细胞突起生长状况的影响,包括有突起细胞的百分比、细胞突起的长度以及突起总数。结果:(1)培养一定时间的Neuro-2a细胞表达HC的高亲和力(synaptic vesicle 2,SV2)和低亲和力(trisialoganglioside 1b,GT1b)受体。(2)培养液内加入一定剂量的HC可促进Neuro-2a细胞突起再生及增长。在HC影响下,有突起的Neuro-2a细胞百分比、神经突起的总数量以及平均突起的长度皆较对照组明显增加,且差异具有统计学意义( P<0.05)。结论:Neuro-2a细胞可用于HC体外研究的细胞模型;Neuro-2a对HC比较敏感;一定剂量的HC能够促进神经突起的生长。
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硫化氢拮抗高血压的天然免疫调节机制
目的:淋巴细胞表达胱硫醚γ裂解酶( cystathionine γ-lyase, CSE)/硫化氢( hydrogen sulfide , H2 S),但其是否参与高血压发病尚不清楚。本课题旨在探讨淋巴细胞CSE/H2 S拮抗高血压的免疫调节机制。方法:收取高血压患者及匹配的健康对照纳入研究。亚甲基蓝法检测外周淋巴细胞H2 S产率,Western blot 检测蛋白表达及磷酸化,RT-qPCR检测mRNA表达,biotin-switch法检测蛋白质硫氢化修饰。结果:高血压组外周血淋巴细胞CSE蛋白表达、H2 S产率及IL-10水平明显低于正常血压组,药物治疗血压恢复后CSE蛋白表达、H2 S产率及IL-10水平也恢复至正常水平。 SHR大鼠给予NaHS治疗4周后,动脉血压显著下调,同时Th17细胞亚群下调,而Treg亚群上调。分离小鼠脾脏CD4+T细胞,siRNA下调CSE或PAG均可抑制Treg的分化,减少IL-10的分泌。反之CSE过表达或H2 S供体可促进Treg分化和IL-10分泌。提示CD4+T细胞内源性CSE/H2 S可促进其向Treg亚群分化。 Treg细胞的分化受到能量代谢的调节。 CSE下调或PAG可抑制AMPK Thr172位点磷酸化,促进mTOR Ser2448位点磷酸化。反之CSE过表达或H2 S供体促进AMPK磷酸化,抑制mTOR磷酸化。 AMPK Thr172位点磷酸化受LKB1激酶调控,H2 S可促使LKB1 Cys430位点发生硫氢化修饰进而增加LKB1的磷酸化水平。结论:淋巴细胞内源性H2 S可使LKB1 Cys430位点硫氢化修饰并激活LKB1/AMPK通路,促使Treg细胞的分化,并使Treg募集到肾脏、血管周淋巴节,局部分泌IL-10增加,发挥其抗高血压作用。
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端粒酶与肝胆、胰腺肿瘤关系研究进展
端粒(telomere)与端粒酶(telomerase)是近年来国际生物医学界的研究热点之一。大量资料证明,85%以上的人类恶性肿瘤细胞表达端粒酶活性,而绝大多数体细胞和良性肿瘤细胞则无此活性。因此,通过对端粒与端粒酶的研究,将有助于人们了解肿瘤的发生发展机制,并可获得一些有用的治疗……
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全反式维甲酸对转化生长因子β诱导的肾小球系膜细胞Sp1及c-met表达的影响
肝细胞生长因子(HGF)是一种多效性的细胞因子,c-met是HGF现已知的唯一的受体,HGF与c-met结合后,发挥相应的生物学效应[1].Sp1蛋白是众多基因的基本转录因子,能与c-met基因启动子区域的多重GC盒结合,是调节肾脏细胞表达c-met的重要转录因子[2].全反式维甲酸(ATRA)能抑制肾脏纤维化,保护肾功能.本研究探讨ATRA对肾小球系膜细胞Sp1、c-met表达的影响,以进一步了解ATRA对肾脏的保护机制.
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罗格列酮对环孢素A急性肾毒性时肾组织中骨调素及RANTES的影响
环孢素A(CsA)的肾毒性主要表现为早期的炎细胞浸润和晚期的肾间质纤维化.罗格列酮(RGZ)是一种噻唑烷二酮类胰岛素增敏剂,除具有改善机体胰岛素抵抗等代谢调节作用外,还具有抗炎、影响细胞增殖和转型、抗脏器纤维化等作用,与肾脏疾病有着密切的关系~([1]).本实验通过观察RGZ对CsA所致急性肾毒性肾组织中炎性反应趋化因子骨调素(OPN)及调节激活正常T细胞表达和分泌的细胞因子(RANTES)的下调作用,进一步证实RGZ在早期肾脏疾病中的抗炎作用.
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霉酚酸对白蛋白刺激肾小管上皮细胞表达单核细胞趋化因子1及p38丝裂原活化蛋白激酶的影响
肾小管间质病变程度是决定肾脏疾病预后的重要因素,而肾小管上皮细胞的损伤可进一步加重肾间质病变.研究发现白蛋白与肾小管上皮细胞增殖和凋亡失衡、表型转分化以及炎性细胞浸润密切相关,但其确切机制仍未完全阐明.
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血管紧张素Ⅱ对大鼠腹膜间皮细胞表达细胞外基质的调控作用
腹膜纤维化(PF)可导致超滤衰竭,是长期腹透(PD)患者的主要并发症之一.细胞外基质(ECM)过度积聚是PF的特征性改变,与ECM合成和降解间的动态平衡受到破坏有关.现已证实腹膜间皮细胞(PMC)能产生纤连蛋白(FN)[1].金属蛋白酶组织抑制物(TIMP)和纤溶酶原激活物抑制物1(PAI-1)可通过抑制蛋白降解酶活性减少ECM降解.本研究观察血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对大鼠腹膜间皮细胞(RPMC)表达FN、TIMP-1及PAI-1的影响,并探讨有丝分裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路的3个组份,即胞外信号调节蛋白激酶通路(ERK)、蛋白激酶p38通路(p38 MAPK)和c-Jun-氨基末端激酶通路(JNK)在AngⅡ促进RPMC表达FN中所起的作用.
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转录因子Sp1和核因子кB调节小鼠足细胞单核细胞趋化蛋白1基因的转录
以往的研究发现羰甲基赖氨酸(CML)修饰的白蛋白可以通过足细胞上晚期糖基化产物受体(RAGE)激活足细胞.阻断足细胞中活性氧(ROS)及p21Ras和抑制ERK1/2,对CML诱导足细胞表达单核细胞趋化蛋白(MCP)1基因的作用不同,提示可能有不同的信号途径诱导MCP-1基因表达.本研究通过检测小鼠足细胞MCP-1基因上游启动子近端和远端调节区的核因子кB(NF-кB)结合位点、AP-1结合位点和GC丰富区的作用,试图了解这些转录调节因子的上游信号途径.
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肝细胞生长因子对大鼠肾小球系膜细胞表达基质金属蛋白酶及纤连蛋白的影响
肝细胞生长因子(HGF)能通过促进肾小管上皮细胞(TEC)合成基质金属蛋白酶(MMPs)而激活基质降解途径来减缓肾小管间质纤维化的进展[1].但HGF是否能通过促进MMPs表达来延缓肾小球硬化目前尚未见到相关报道,因此我们拟通过研究HGF对大鼠系膜细胞(MC)表达MMP-2、-9以及纤连蛋白(FN)的变化以探讨HGF对ECM的异常代谢可能的作用.
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罗格列酮对高糖环境下肾脏成纤维细胞表达细胞外基质的影响
罗格列酮(RGZ)是近年应用于临床的一种噻唑烷二酮类(TZDs)胰岛素增敏剂,是核转录因子过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)的配体,目前临床上主要作为口服降糖药治疗2型糖尿病.一系列研究表明,TZDs具有抗炎、影响细胞增殖和转型、抗纤维化等作用[1-3],对肾脏疾病有着潜在的治疗价值.本实验观察了RGZ对高糖条件下大鼠肾脏成纤维细胞(NRK)表达基质金属蛋白酶1(MMP-1)、基质金属蛋白酶l抑制剂(TIMP-1)及Ⅲ型胶原(ColⅢ)的影响,进一步探讨该药对糖尿病肾病的保护作用及其机制.
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狼疮肾炎不同病理类型及活动指数与血RANTES浓度的关系
正常T细胞表达和分泌的活性调节蛋白(RANTES)是一种T淋巴细胞特异的趋化因子,主要趋化并激活单核巨噬细胞、淋巴细胞,引导炎性细胞浸润到肾脏并产生损伤因子,在炎性反应的发生发展中发挥重要作用.研究发现RANTES在LN肾组织的表达增高[1,2],由此推测RANTES在LN发生、发展中可能起着重要作用.我们应用ELISA法检测LN患者血清RANTES的水平,探讨其与不同肾脏病理类型、SLEDAI、尿蛋白量以及RAI、等的关系.
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TNF-α预处理对鼠脑缺血及再灌注过程中ICAM-1诱导作用的研究
脑缺血及再灌注过程中,ICAM-1(细胞间粘附分子-1)高表达[1],促进内皮细胞与单核细胞的粘附,加重脑损伤.TNF-α是诱导血管内皮细胞表达ICAM-1的直接原因之一,从而加重缺血性脑损伤.但也有促进组织吸收及神经重塑的双重作用,有待研究.本实验探讨预先给予不同剂量的TNF-α在脑缺血及再灌注过程中对ICAM-1表达的作用.
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西比灵对脑缺血再灌注后HSP70表达的影响
血诱导神经细胞表达的热休克蛋白70(HSP70),被认为在脑缺血引起的损伤中具有脑保护作用.西比灵选择性阻断Ca2+过度内流,减轻缺血性神经损伤.本文用肾血管性高血压大鼠(RHR)制作脑缺血再灌注模型,评价西比灵对脑缺血再灌注损伤的保护作用并探讨其脑保护机制.选用纯种健康远交雄性Wistar大鼠36只,制作成肾血管性高血压大鼠并随机分组,采用Longa等人的方法加以改良制备大脑中动脉闭塞(MCAO)模型.术前,西比灵干预组大鼠腹腔注射新鲜配置的西比灵混悬液(1 mg@kg-1),脑缺血再灌注组和假手术组大鼠腹腔注射等容积的生理盐水.
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美罗华联合化疗治疗B细胞非霍奇金淋巴瘤的效果
非霍奇金淋巴瘤(NHL)绝大多数起源于淋巴细胞,95%以上的细胞表达CD20抗原,对放疗和化疗敏感,但复发率高,再次治疗缓解率低,缓解持续时间短.美罗华(Rituximab)的应用大大提高了CD20阳性的细胞淋巴瘤的缓解率和生存期.我科从2004年1月至2006年12月应用美罗华联合化疗治疗NHL患者共11例取得较好疗效,现报告如下.
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调节性T细胞和辅助性T细胞17细胞失衡在重症肌无力中的研究进展
重症肌无力(myasthenia gravis,MG)是自身抗体直接作用于神经肌肉街头引起的以肌肉无力为临床特征的一种自身免疫性疾病。主要的抗原靶点为乙酰胆碱受体(acetylcholine receptor,AChR),其次为肌肉特异性激酶(muscle-specific kinase,MuSK)和低密度脂蛋白受体相关蛋白4(low density lipoprotein receptor -related protein 4, LRP4)。胸腺异常、免疫调节的缺陷在抗AChR抗体的产生中起着重要的作用。近年来研究表明,调节性 T 细胞(regulatory T cells,Tregs)与辅助性 T 细胞17(helper T cell 17,Th17)表达失衡是引起包括MG在内的许多自身免疫性疾病的发病机制之一。本文将对Treg、Th17细胞表达失衡在MG发病机制中的作用做一综述。
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C5aR在肾脏的表达及功能的研究进展
过去认为C5aR仅在髓系细胞表达,现在发现在人和啮齿类动物的肝、肺、脑等实质器官也都有表达,而且通过与补体C5裂解片段C5a的结合在器官纤维化、急性肺损伤、组织再生等病理生理过程中发挥重要作用.近研究发现在肾脏也有表达,本文就C5aR在肾脏的表达及其作用作一综述.
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急性呼吸窘迫综合征渗透性肺水肿的处理
1 引言引起急性呼吸窘迫综合征(ARDS)的致病因子作用于机体后,首先引起炎症效应细胞特别是巨噬细胞被激活,并释放许多前炎症反应细胞因子(PIC),如肿瘤坏死因子(TNF),磷脂酶A2、白细胞介素(IL)及血小板激活因子(PAF)等.这些PIC又激活了中性粒细胞(PMN),使其聚集于肺循环中,并附着在肺毛细血管内皮表面,促使内皮细胞表达细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、内皮细胞白细胞黏附分子1(ELAM-1),并与PMN相互作用,通过产生和释放各种介质,如氧自由基、花生四烯酸代谢产物,包括前列腺素和白三烯类物质,与蛋白溶解酶等,加上PIC均可使血管内皮细胞、肺泡上使细胞和间质成分受损,导致正常情况下肺内液体动态平衡遭到破坏,肺毛细血管渗透性增加,从而引起肺间质和肺泡水肿.故称之为渗透性肺水肿.
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ELISA法检测HBsAg影响因素分析
HBsAg是病毒在肝细胞表达的产物,也是机体感染HBV后先出现的血清学指标物.HBsAg阳性可见于急性乙型肝炎患者的潜伏期、急性期、慢性乙型肝炎患者、无症状HBsAg携带者,所以HBsAg是HBV的感染指标之一.ELISA法检测HB-sAg具有灵敏度高,特异性强等优点而被广泛应用.现就实际操作中的影响因素分析如下.