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汉防己甲素对马兜铃酸A诱导的人近端肾小管上皮细胞转分化的干预作用
目的:探讨汉防已甲素(tetrandrine,Tet)时马兜铃酸A(aristolochic acid I,AAI)诱导的人近端肾小管上皮细胞(HK-2)转分化的拮抗效应.方法:将正常培养的HK-2随机分组:正常组、模型组、汉防已甲素高浓度组、汉防己甲素中浓度组、汉防己甲素低浓度组、泼尼松龙对照组(糖皮质激素组).48 h后观察各组细胞形态的变化,逆转录-聚合酶链式反应方法检测各组E-cadherin、TGF-β1、α-SMA mRNA表达水平,双抗体夹心酶联免疫吸附法测定各组细胞培养液中TGF-β1浓度,流式细胞技术测定各组E-cadherin阳性表达细胞的百分率.结果:汉防己甲素干预组及泼尼松龙对照组E-cadherin mRNA表达水平明显高于模型组(P<0.05),相反,其TGF-β1、α-SMA mRNA表达水平明显低于模型组(P<0.05);汉防己甲素干预组及泼尼松龙对照组TGF-β1浓度亦明显低于模型组(P<0.05);汉防己甲素干预组(中、低浓度)E-cadherin阳性表达细胞的百分率明显高于模型组(P<0.05),但汉防己甲素高浓度组和泼尼松龙对照组E-cadherin阳性表达细胞的百分率较之模型组增高不明显(P>0.05).结论:一定浓度(10μg/ml)的AAI能诱导体外培养的HK-2转分化,适当浓度的Tet对AAI诱导的HK-2转分化具有明显的拮抗作用;AAI亦能上调TGF-β1的表达,而适当浓度的Tet能拮抗AAI引起的TGF-β1的高表达.
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Apocynin对缺氧复氧后肾小管上皮细胞MCP-1表达的干预作用
目的:研究缺氧复氧后肾小管上皮细胞单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)的表达及apocynin对其影响.方法:选用人肾小管上皮细胞(HK-2)建立缺氧复氧损伤模型,设正常对照组、单纯缺氧复氧组、不同浓度(0.05、0.25、0.5 mmol/L)Apocynin干预组.流式细胞术检测细胞内氧化应激水平,流式细胞术检测MCP-1蛋白表达、RT-PCR法测定细胞MCP-1 mRNA表达.结果:缺氧复氧后HK-2细胞内氧化应激水平提高,细胞MCP-1蛋白和mRNA表达上调,且随缺氧时间的延长,细胞内氧化应激水平逐渐升高,MCP-1蛋白和mRNA表达逐渐增强;Apocynin呈剂量关系抑制细胞内氧化应激水平,同时呈剂量关系抑制MCP-1蛋白和mRNA表达的上调.结论:缺氧复氧诱导细胞内氧化应激的产生,诱导MCP-1表达上调;Apocynin可以通过抑制细胞内氧化应激抑制MCP-1的上调.
关键词： 肾小管上皮细胞 缺氧复氧 单核细胞趋化蛋白-1 Apocynin -
马兜铃酸致肾小管上皮细胞损害及释放内皮素与血管紧张素的实验研究
目的:探讨马兜铃酸(AA)对培养的肾小管上皮细胞的损害,及释放内皮素(ET)、血管紧张素(Ang-Ⅱ)的影响. 方法:5%FCS RPMI-1640培养肾小管上皮细胞(LLC-PK1),采用结晶紫染色法观察细胞增殖;荧光染色观察活细胞数目;酶动力学检测LDH活性,比色法检测NAG水平;透射电镜观察细胞超微结构;放射免疫法测定ET、Ang-Ⅱ的浓度.结果: (1) AA 40、80、160 μg/ml可明显抑制细胞增殖,结晶紫OD值显著减少,与无AA对照组比较P<0.01.在AA 40 μg/ml作用下,随着时间延长,活细胞数目逐渐下降,显示AA对细胞损伤有一定的延续性;增加LDH释放率和NAG酶水平,与无AA对照组比较P<0.01.细胞超微结构观察:AA 40 μg/ml作用24 h后,细胞超微结构发生显著改变,以核变异突出, 出现染色质浓染、核边集、核缺失、核膜卷曲增厚,线粒体肿胀等严重细胞损伤改变.AA( 40、80、160 μg/ml)可明显刺激细胞释放ET、Ang-Ⅱ,与无AA对照组比较P<0.01.[ HT5"H 结论:马兜铃酸对肾小管上皮细胞有明显的细胞毒性损害作用,使细胞超微结构发生显著损伤性改变,刺激肾小管上皮细胞分泌和释放ET、Ang-Ⅱ,此作用可能与 AA的毒性有关.
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游离脂肪酸对培养肾小管上皮细胞增殖和转化生长因子-β1分泌的影响
目的:探讨游离脂肪酸(FFAs)在肾小管间质纤维化中的作用.方法:以去脂牛血清白蛋白(d-BSA)为油酸(OA)载体,用不同浓度OA刺激培养肾小管上皮细胞(RTECs),以不加d-BSA及只加普通培养液的细胞作对照组,应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测RTECs增殖能力,反转录多聚酶链反应(RT-PCR)检测RTECs TGF-β1 mRNA的表达水平,酶联免疫吸附(ELISA)法检测培养上清TGF-β1水平.结果:d-BSA组与空白对照组RTECs的增殖、TGF-β1 mRNA表达及蛋白分泌比较无统计学差异(P＞0.05),而不同浓度OA组与空白对照组比较有统计学差异(P＜0.05),且随差OA浓度增加,对RTECs的增殖抑制以及对TGF-β1 mRNA表达及蛋白分泌的促进作用有增强趋势.结论:FFAs可能通过抑制RTECs的生长并促进其TGF-β1的表达和分泌从而在肾小管间质纤维化(RTF)的发生发展中起着一定的作用.
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非经典型蛋白激酶C在尿蛋白诱导肾小管上皮细胞转分化中的作用
目的:探讨非经典型PKC同工酶(PKC-ζ和PKC-)在尿蛋白诱导的肾小管上皮细胞(RTECs)转分化中的作用.方法:首先免疫组化法检测PKC-ζ和PKC-ι在人正常及不同类型肾小球疾病患者肾组织的表达并分析其表达量的变化.接着应用不同浓度的尿蛋白(0 mg/ml、0.5 mg/ml、1.0 mg/ml、2.0 mg/ml、4.0 mg/ml及8.0 mg/ml)处理体外培养的HK-2细胞,应用免疫细胞化学法检测HK-2细胞E-cadherin和α-SMA的表达以观察HK-2细胞转分化情况,选择诱导HK-2细胞转分化适宜的尿蛋白浓度进行后续试验.将HK-2细胞分对照组和尿蛋白组,分别给予无血清培养基和尿蛋白(4.0 mg/ml)刺激,分别用免疫荧光及Western Blot法检测各组细胞内PKC-ζ和PKC-ι在细胞膜及细胞浆的活化易位情况.结果:(1)两种非经典型PKC同工酶PKC-ζ和PKC-ι在正常和肾小球疾病肾组织肾小球和RTECs均有表达,在肾间质均无表达,表达量不尽相同.PKC-ζ在肾小球疾病肾组织肾小球中的表达量均较正常肾组织显著减少(P＜0.05),在MCD和FSGS的RTECs中的表达量较正常肾组织显著减少(P＜0.05).PKC-ι在FSGS的肾小球和RTECs中的表达量均显著减少(P＜0.05),在IgAN肾组织RTECs中表达显著增高(P＜0.05),在肾小球表达无明显差别.(2)不同浓度的尿蛋白刺激HK-2细胞48 h后,当尿蛋白的浓度逐渐升高时,HK-2细胞随之转变为类似成纤维细胞形态,细胞E-cadhefin表达下调及α-SMA表达上调.尿蛋白浓度为4.0 mg/ml诱导HK-2细胞转分化明显.(3)尿蛋白诱导HK-2细胞转分化时,PKC-ζ和PKC-ι无明显活化易位.结论:两种非经典型PKC同工酶均在人类肾组织表达,提示PKC-ζ和PKC-ι均参与肾脏的生理过程,但PKC-ζ和PKC-ι在尿蛋白诱导的肾小管上皮细胞转分化中并未发挥相关作用.
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稳定长期沉默肾小管上皮细胞Megalin基因表达的载体构建
目的:为探讨沉默Megalin基因对肾小管上皮细胞Megalin蛋白诱导表达的抑制作用,构建长期下调Megalin蛋白表达的慢病毒载体作为研究工具.方法:分别用30,50,80,100 nmol/L siRNA或对照siRNA转染人HK-2细胞,48 h后用免疫荧光和RT-PCR鉴定Megalin基因表达筛选有效的序列,用有效或对照组序列的正义链和反义链,中间加loop环,两端加入XhoⅠ和hindⅢ的酶切位点作为目的序列,经过XhoⅠ和HindⅢ双酶切的慢病毒载体质粒PLL3.7作为载体,将目的序列与载体连接,转化到XL-10Gold高感受态大肠杆菌中,XhoⅠ和HindⅢ双酶切初步鉴定,测序进一步鉴定正确的序列.得到长期下调人Megalin基因表达的慢病毒载体,并包装慢病毒感染人HK-2细胞,免疫组化鉴定干扰有效,以此获取Megalin表达下调的HK-2细胞株.结果与结论:成功筛选出有效干扰人Megalin基因的siRNA,通过慢病毒感染成功获得长期稳定下调人Megalin表达的肾小管上皮细胞株.
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多毛孢菌菌粉含药血清对肾小管上皮细胞增殖及纤维生长因子基因表达的影响
目的:研究多毛孢菌菌粉不同提取物对肾小管上皮细胞增殖及纤维生长因子(FGF)mRNA表达的影响.方法:培养猪肾小管上皮细胞株(LLCPK),用庆大霉素刺激,同时加多毛孢菌的不同提取物干预.MTT法检测LLCPK细胞增殖;逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)测定纤维生长因子mRNA的表达.结果:研究发现多毛孢菌水提物及醇提物均可显著增高LLCPK细胞OD值;庆大霉素刺激的肾小管上皮细胞纤维生长因子mRNA的表达显著增高,而经多毛孢菌菌粉水提物和醇提物干预后,纤维生长因子mRNA的表达显著下降.结论:多毛孢菌菌粉可以促进LLCPK细胞增殖和拮抗庆大霉素对细胞的损伤,以及下调庆大霉素诱导的LLCPK细胞纤维生长因子mRNA的过度表达.
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肾康注射液抑制高糖诱导肾小管上皮细胞应激性衰老
目的:观察肾康注射液对高糖诱导肾小管上皮细胞衰老的影响.方法:将体外培养的小鼠原代肾小管上皮细胞分为空白对照组、甘露醇组、高糖组、高糖+肾康注射液高、中、低剂量组.观察细胞形态及衰老标志SAHF、P16和SA-β-半乳糖苷酶的表达,测定超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量,确定肾康注射液对高糖诱导肾小管上皮细胞应激性衰老的影响.结果:肾康注射液可以剂量依赖性的抑制高糖诱导的肾小管上皮细胞扁平肥大、SAHF、P16和SA-β-半乳糖苷酶的表达,减少MDA含量、增加SOD的活性.结论:肾康注射液可以通过抗氧化应激抑制高糖诱导肾小管上皮细胞应激性衰老.
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中医药治疗双胞胎膜性肾病病例2例?
病例
病例1(弟)：患者,男,20岁,因“发现泡沫尿伴双下肢水肿半年余“收住院。患者于2012年2月下旬无明显诱因情况下出现泡沫尿,双下肢及颜面部水肿并逐渐蔓延至全身,至当地县级医院查24 h 尿蛋白定量6600 mg,肾功能提示血肌酐115μmol／ L,白蛋白13．6 g／ L,遂行肾穿刺活检术,具体报告如下：光镜：35个小球,所见小球体积增大,毛细血管袢僵硬、增厚；小部分肾小球系膜细胞无明显增生,节段性系膜基质轻度增多。大部分肾小球系膜基质轻度增多,部分节段中度增多,少数节段系膜细胞轻度增生,9个肾小球节段性系膜基质重度增生伴节段性硬化,其中部分小球节段性毛细血管袢与球囊壁黏连。6个肾小球节段性球囊壁增厚、纤维化。银染色见肾小球毛细血管壁外侧大量钉突形成。轻度肾间质水肿,小灶状肾小管萎缩,部分肾小管上皮细胞浊肿,见肾间质泡沫样细胞；灶性肾微动脉内膜轻度增厚。免疫荧光： IgG (+++)、IgM(+)、C3(+)沉积于毛细血管袢。 IgA、C1 q：阴性。诊断：膜性肾病Ⅱ期伴局灶节段性硬化。术后予糖皮质激素加环磷酰胺(CTX)冲击,其中 CTX 冲击0．4 g ×2 d,泼尼松龙50 mg Qd,配合抗凝调脂治疗。患者肾功能有所改善,水肿有所减轻。1月后至市级医院就诊复查24 h 尿蛋白定量8220 mg,肾功能：肌酐65μmol／ L,白蛋白25．1 g／ L,该院予患者再次冲击CTX 0．4 g ×2 d,泼尼松龙减量至45 mg Qd,尿蛋白未见明显下降,此后患者曾在当地医院口服中药治疗,自行激素逐渐减量。2012年10月患者初诊我科,当时仍有明显泡沫尿,并伴有双下肢轻度水肿。患者当时服用泼尼松龙20 mg Qd。入院后查肾功能：白蛋白30．6 g／ L,肌酐75μmol／ L,尿素6．61 mmol／ L。血脂：总胆固醇8．6 mmol／ L,三酰甘油5．2 mmol／ L,低密度脂蛋白5．26 mmol／ L,高密度脂蛋白2．04 mmol／ L,脂蛋白( a)：103 mg／ L。24 h 尿蛋白定量4498 mg。 ANA、ds - DNA、ANCA等风湿免疫指标,肿瘤标志物均为阴性,乙肝表面抗体阳性。 -
自身免疫性肝炎合并膜性肾病1例诊治分析
病例
患者，男，29岁，藏族。因“全身水肿伴腹胀10 d”于2012年6月1日入院。患者于10 d前无明显诱因出现全身水肿，腹胀，活动后心悸气促，伴有恶心、呕吐胃内容物，无发热腹痛及关节肌肉疼痛，8d前当地医院检查发现蛋白尿，水肿腹胀进行性加重，遂入我院。否认肝炎史，有大量饮酒史9年，每天半斤白酒。入院体检：T 36．8℃，P 83次／min，R 19次／min， BP 90／60 mmHg，神清。颜面水肿，口腔黏膜未见溃疡，全身皮肤无皮疹，右下肺叩诊呈浊音，呼吸音消失，双肺未闻及干湿罗音。腹部膨隆，剑下压痛，无反跳痛，肝脾未触及，肝、肾区无叩痛，移动性浊音（＋）。双下肢重度指凹性水肿。2012年5月30日查血常规：WBC 8．75×109／L，NEUT 0．903，Hb 211 g／L；尿常规：PRO（＋＋），尿蛋白定量15．9 g／24 h；血生化：TP 55．7 g／L，Alb 14．8 g／L，GLO 40．9 g／L，ALT 53 U／L，AST 44．7 U／L，ALP 96．1 U／L，γ-GGT 266．8 U／L，BUN 22．88 mmol／L， Scr 109μmol／L。病毒性肝炎、肿瘤标志物均阴性。腹水常规：乳糜性，浑浊，无凝块，李凡他试验（-），有核细胞计数0．01×109／L；腹水生化：蛋白7．8 g／L；腹部彩超：肝脏体积增大，结构欠清晰，左肝缘变钝，实质回声不均匀，弥漫性增粗，第二肝门静脉消失，门静脉主干内径1．2 cm，腹腔大量腹水。泌尿系彩超：双肾形态大小正常，皮实质回声均匀，皮髓质分界清楚。X线胸片：右侧胸腔少量积液；入院诊断：肾病综合征。予甲强龙80 mg每日1次静脉滴注，并给予抗凝，金水宝、黄芪颗粒等治疗。6月4日复查肝功：TP 34．8 g／L，Alb 15 g／L，GLO 19．8 g／L，总胆红素3．2μmol／L，DB 1．7μmol／L，ALT 495．8 U／L，AST 432．2 U／L，ALP 259．1 U／L，γ-GGT 659．4 U／L，血清总胆汁酸19．5μmol／L；肾功能：BUN 6．83 mmol／L，肌酐80μmol／L，胆固醇10．5 mmol／L，三酰甘油2．32 mmol／L，LDL-C 6．77 mmol／L， ；VLDL 2．07 mmol／L。免疫球蛋白：IgG 24．3 g／L，IgA ，IgM，C3， C4正常；血浆蛋白电泳：γ25．7，Alb、α1、α2、β正常；ANCA和抗GBM（-），血沉14 mm／h。抗核抗体谱：抗组蛋白抗体（＋）， u1-snRNP抗体（＋）。自身免疫性肝病标记物：Sp100抗体阳性（＋），SLA可溶性肝抗原（＋），gp210抗体（＋），LC 1抗肝细胞质液抗体（＋），LKM1抗肝肾微粒体抗体（＋），AMA-M2抗线粒体抗体（-）。凝血功能：PT 15．3 s，APTT 49．1 s，凝血酶时间22．7 s。6月8日复查肝功：TP 36．1 g／L，Alb 18．8 g／L， GLO 17．3 g／L，TB 3．0μmol／L，DB 1．2μmol／L，ALT 313．6 U／L， AST 153．2 U／L，ALP 323．1 U／L，γ- GT 981．4 U／L，TBA 13．2μmol／L；6月13日复查尿蛋白定量11．9 g／24 h；肾活检病理报告光镜：镜下见24个肾小球，未见肾小球球性硬化及节段性硬化；肾小球系膜细胞和基质轻度增生，毛细血管袢开放良好，外观显僵硬，基底膜略增厚，钉突样结构不明显，上皮下可见嗜复红蛋白沉积，未见纤维素样坏死，未见新月体形成；肾小管上皮细胞空泡及颗粒变性，无明显萎缩，肾间质无明显炎症细胞浸润及纤维化，小动脉管壁无明显病变；免疫荧光：IgA（＋），IgG（＋＋＋），IgM（＋＋），C3（＋），C1 q（＋）；电镜见：肾小球基底膜轻度不规则增厚，上皮下及基膜内见少量电子致密物沉积，足突弥漫融合；病理诊断：膜型肾病Ⅰ期。用甲泼尼龙25 d后，患者水肿腹胀消失，复查抗核抗体谱和自身免疫性肝病标记物均阴性，腹部彩超：肝胆胰脾未见异常，无腹腔积液。尿蛋白定量0．95 g／24 h，7月2日复查肝功：TP 52．1 g／L， Alb 33．8 g／L，GLO 18．3g／L，TB 6．2μmol／L，DB 3．7μmol／L， ALT 83．7 U／L，AST 25．1 U／L，ALP 121．3 U／L，γ-GT 305．9 U／L，病情好转出院。 -
纤维样肾小球病1例
病例患者王某某,男,63岁,因“反复浮肿、尿浊2年,再发1月”于2013年1月16日收住我科,既往否认糖尿病、高血压、肝炎病史,入院后查体：Bp 171/86 mmHg,双下肢中度浮肿。入院后完善相关检查：尿蛋白(++),尿 IgG 669 mg/L,尿转铁蛋白301 mg/L,尿白蛋白3180 mg/L,尿α1-微球蛋白57.7 mg/L, ANA(-),ANCA(-),血红蛋白84 g/L,iPTH114 pg/ml,丙肝抗体阴性,总蛋白46.2 g/L,白蛋白12.8 g/L,血糖4.33 mmol/L,尿素氮16.8 mmol/L,血肌酐172.6μmol/L,尿酸469μmol/L,总胆固醇10.31 mmol/L,三酰甘油1.85 mmol/L,乙肝表面抗体阳性,24 h 尿蛋白定量4.77 g,肾脏 B 超示左肾93 mm ×50 mm、右肾105 mm ×46 mm。诊断考虑：肾病综合征,慢性肾衰竭,CKD4期,肾性贫血,肾性高血压。于2013年1月23日B超引导下行肾穿刺活检,送检肾穿刺组织常规做HE、PAS、PASM、Masson 染色,肾脏病理详细描述：(1)光镜描述可见23个肾小球,其中4个肾小球球性硬化。其余肾小球系膜细胞和基质中-重度增生,呈结节状改变,系膜区嗜复红蛋白沉积,肾小球毛细血管襻分叶状,毛细血管腔狭窄、闭塞,基底膜增厚,可见节段性系膜插入及双轨形成,未见血管瘤样扩张及“睫毛样”结构,未见钉突样结构,可见3个细胞纤维性,2个纤维性,1个小细胞性,3个小细胞纤维性新月体形成。肾小管上皮细胞颗粒变性,灶状萎缩(萎缩面积约15%),肾间质灶状炎症细胞浸润伴纤维化,小动脉管壁增厚,管腔狭窄。(2)免疫荧光：肾小球数6个,其中IgG：阴性,IgM：(+),IgA：阴性,C3：阴性,C1 q：阴性。病理诊断：符合系膜结节性改变肾小球疾病,待电镜进一步检查。(3)特殊染色：刚果红染色阴性。(4)电镜描述：镜下检测到1个肾小球。毛细血管内皮细胞明显空泡变性,个别管腔内可见红细胞,无明显内皮细胞增生,毛细血管襻部分受压,管腔狭窄。肾小囊壁层增厚、分层,壁层细胞无明显增生。基底膜：弥漫增厚,厚度约500~800 nm。脏层上皮细胞：上皮细胞肿胀,空泡变性。足突弥漫融合。系膜区：系膜细胞和基质增生,未见电子致密物沉积,系膜区和基底膜内可见大量纤维样物质沉积,直径约20 nm,无分支,排列紊乱。肾小管-间质：肾小管萎缩,基底膜增厚。肾间质胶原纤维增生。电镜诊断：符合纤维样肾小球病。
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重视凝血酶在肾间质纤维化中的地位及中医虫类药的干预作用
慢性肾脏病( chronic kidney disease,CKD)患病率在全球范围内呈持续增长趋势,2012年我国的一项调查研究发现中国慢性肾病发病率为10.8%[1],CKD已成为严重危害公众健康的议题。而肾小管间质病变较肾小球病变在慢性肾脏疾病进展中的意义更为重要[2],这显然已成为国内外学术界的共识,并因此开展了一系列有关肾间质纤维化( renal interstitial fi-brosis,RIF)的发病机制及防治研究。我们可以看到,近二十年来现代医学应用细胞分子生物学对RIF的发病机制进行了广泛的研究,研究表明多种细胞因子及相互间复杂的信号级联转导参与了RIF炎症、氧化应激、细胞凋亡、成纤维细胞增殖和活化等过程的发生发展,而具有放大级联效应的核转录因子-κB ( nu-clear factor kappa B,NF-κB)、TGF-β/Smads信号通路、肾素-血管紧张素系统( renin -angiotensin sys-tem,RAS)、及肾小管上皮细胞间充质转分化( epitheli-al to mesenchymal transition,EMT)在肾间质纤维化中的作用,日益得到广泛的重视。其中,肾小管上皮细胞间充质转分化为RIF的发病机制提供了合理的解释而成为我们研究的新宠,大多学者认为在RIF的发生发展过程中,无论是血管紧张素Ⅱ( angiotensin Ⅱ, Ang Ⅱ)抑或其他致纤维化因素,几乎都可作为EMT相关细胞信号转导的上游分子,介导EMT的发生,并以此为理论基础,提出抑制或逆转EMT是防治肾纤维化的有效途径。然而近年来国外学者对EMT与肾脏纤维化的传统观点提出挑战,新研究未能发现EMT参与肾间质纤维化的直接证据[3~5],可以说, EMT与肾间质纤维化的关系还需要更加严密的研究来明确。因此,无论是基础实验还是临床研究,我们急需努力挖掘新的切入点,从多方位、多视角深入研究RIF的病变机制,从而为RIF的防治研究提供新的思路和靶点。
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乙型肝炎病毒相关性肾炎的诊治问题?
乙型肝炎病毒相关性肾炎( HBV associated glo-merulonephritis,HBV-GN)是我国常见的继发性肾脏疾病之一。新生儿实施常规接种乙型肝炎病毒疫苗之后,该病的发病率有所下降,但在成人慢性肾脏病中也不少见,在肾活检病例中占2.5‰~4.4%[1,2]。1971年Combes首次报道了1例HBV相关性膜性肾病,至今已有40多年,目前,对该病的发病机制及治疗上有了新的认识,认为其发病与遗传背景、免疫复合物介导、HBV直接感染及自身免疫紊乱等有关。乙肝病毒X蛋白(HBvx)可诱导肾小管上皮细胞(HK-2)凋亡、EMT[3,4],使足细胞cyclin B1降解受阻,同时下调cyclin A和上调p21的表达,从而抑制足细胞增殖[5]。尽管如此,但HBV-GN的诊治方面还存在许多问题,如HBV-GN进展机制不清楚、临床表现与病理类型特点及它们之间相关性,诊断与治疗方面也缺乏统一的指南与共识,影响HBV-GN预后的因素到底有哪些等。
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慢性肾脏病患者脂质代谢特征及调脂对策
早在150年前,Rudolf Virchow就发现脂质蓄积与肾脏病的发生有关,认为肾小管上皮细胞的脂肪变性是Bright's病的一个阶段.1982年Moorhead明确地提出"脂质"具"肾毒性",此后血脂异常与肾脏损害相关性得到广泛而深入的研究.越来越多的证据表明肾脏是脂代谢异常的重要靶器官,且有超过一半的慢性肾脏病(CKD)患者存在高脂血症,大多数CKD患者血脂异常的特点不仅表现为单纯脂蛋白量的增减,更表现为脂质组成成分的改变.
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糖尿病大鼠肾小管上皮细胞整合素连接激酶的表达及氯沙坦钾的干预作用
糖尿病肾病(DN)是糖尿病的常见并发症和终末期肾病(ESRD)的首要原因.大约有1/3的糖尿病患者发展为DN.DN是肾小球和肾小管发生病理改变的一种复杂疾病.整合素连接激酶(ILK)是一种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,在基质沉积、细胞黏附、细胞凋亡、细胞迁移、细胞增生以及肿瘤形成发挥重要作用,近年研究发现ILK在肾小管的高表达参与了DN的进展.本实验通过建立糖尿病大鼠模型,观察ILK在糖尿病大鼠肾小管表达及氯沙坦钾的干预作用.
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高糖环境下脂联素对人肾小管上皮细胞凋亡率及Bax Bcl-2表达的影响
目前糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)属于糖尿病常见的微血管并发症,由于其患病率逐年升高和较高的病死率,越来越被人们所重视.DN可以使肾小管基底膜增厚、动脉硬化等,这些改变严重影响肾小管的营养供应,引起肾小管细胞凋亡,从而导致肾间质纤维化.脂联素(ADPN)是脂肪细胞分泌的一种多功能的蛋白质激素,可以调节脂代谢、减轻动脉粥样硬化病变,抑制肿瘤坏死因子(TNF)的生成与释放,具有一定的抗炎症作用、增加胰岛素敏感性、降低血糖等作用.脂联素是否可以在高糖环境下保护肾小管上皮细胞,发挥抗纤维化作用,从而保护肾脏功能是本研究的目的所在.
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肝细胞生长因子对高糖环境下肾小管上皮细胞增殖及转化生长因子β1表达的影响
糖尿病肾病(DN)是糖尿病的常见微血管慢性并发症之一,是导致慢性肾功能不全的重要原因.转化生长因子β1(TGF-β1)被认为是DN中促小管间质病变的重要的因子之一,TGF-β1可促进肾小管细胞向成纤维细胞的转分化.肝细胞生长因子(HGF)是一种多效性生长因子,它介导上皮-间质和内皮-间质之间相互分化,不仅与器官发育形成和再生修复有关,而且也可作为负性调节因子,在肝硬化、肺纤维化中起重要的抗纤维化作用;HGF还是一种促细胞修复因子,在DN肾修复过程中可能起着一定的作用.本研究通过体外细胞模型,探讨HGF对高糖环境下肾小管上皮细胞的作用.
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低浓度超顺磁性氧化铁标记兔骨髓间充质干细胞肾脏缺血再灌注损伤兔体内移植的初步活体示踪研究
肾脏缺血再灌注损伤(renal ischemia reperfusion injury,RIRI)是引起急性肾功能衰竭(acute renal failure,ARF)的主要原因之一,其病理表现为肾小管和间质的损伤,而肾功能的恢复主要依赖于肾小管上皮细胞的再生,因此肾移植应该是RIRI为理想的治疗选择,然而供体短缺和免疫排斥反应大大限制了肾移植的开展.间充质干细胞(mesenchymalstem cells,MSCs)在适当条件下可诱导分化为肾小球细胞、肾小球系膜细胞、肾小管上皮细胞等肾脏实质细胞,因此干细胞移植用于肾病特别是RIRI的治疗已经成为人们研究的热点.干细胞肾脏移植后采用非侵入性方法来活体实时监测MSCs在肾脏内的存活和生长状况,无疑是评估移植干细胞安全性和疗效的重要手段,而分子影像学的发展为此提供了可能.
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环孢素A对糖尿病肾病大鼠肾脏转化生长因子-β1及E-钙黏素表达的影响
糖尿病是一种常见的由内分泌系统代谢障碍引起的慢性终身疾病，而糖尿病肾病是其严重的微血管病变之一。肾脏纤维化的基本病理改变是细胞外基质（ECM）的过度沉积，进而取代了肾脏固有细胞，破坏肾脏正常结构。转化生长因子（TGF）-β1是上皮细胞-间充质转分化（EMT）过程主要的促进因子和启动因子［1］，E-钙黏素是肾小管上皮细胞特有的标志物，参与了EMT的主要过程。本研究利用环孢素治疗链脲佐菌素（STZ）诱导的糖尿病肾病大鼠，观察环孢素对糖尿病肾病大鼠肾组织TGF-β1以及E-钙黏素表达，为免疫抑制剂治疗糖尿病肾病提供新的理论依据。
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小鼠肾小管上皮细胞的培养和鉴定
目的 建立小鼠肾小管上皮细胞培养方法,为有关肾损伤体外研究提供实验平台. 方法 分别采用肾小管节段贴块法、胰蛋白酶和胶原酶Ⅰ法消化分离肾小管节段,用含10％血清的培养基培养,然后用含EDTA的0.25％胰蛋白酶消化,对原代和传一代肾小管上皮细胞进行鉴定. 结果 三种培养方法培养细胞3d基本贴壁,胶原酶Ⅰ法3-4d长满瓶底,肾小管节段贴块法4-5d长满瓶底,胰蛋白酶7d左右.细胞均鹅卵石铺路样生长,经细胞免疫组织化学染色鉴定cytokeratin 18呈阳性. 结论 肾小管节段贴块法和胶原酶Ⅰ消化都可以得到较理想的肾小管上皮细胞,后者细胞生长较快,为研究肾损伤的发生原因和机制提供实验基础.
