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乙型肝炎病毒E抗原肝细胞结合蛋白E-18调节基因的表达谱芯片研究
目的:应用基因芯片技术对于pcDNA3.1(-)和pcDNA3.1(-)-E-18分别转染的HepG2细胞的基因表达谱进行分析,筛选能被E-18反式调节的靶基因,研究未知功能的HBeAg结合蛋白E-18的生物学功能.方法:应用酵母双杂交技术和体外免疫共沉淀技术筛选并验证HBeAg的肝细胞结合蛋白基因,反转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术从HepG2细胞中扩增E-18蛋白编码基因片段,以常规的分子生物学技术构建表达载体pcDNA3.1(-)-E-18.以脂质体技术转染肝母细胞瘤细胞系HepG2,提取总mRNA,逆转录为cDNA,与转染空白表达载体pcDNA3.1(-)的HepG2细胞进行DNA芯片分析并比较.结果:筛选出肝文库中HBeAg结合蛋白E-18的编码基因,构建的表达载体经过限制性内切酶分析和DNA序列测定鉴定正确.提取转染细胞的总mRNA并进行逆转录成为cDNA,进行DNA芯片技术分析.在1 159个基因表达谱的筛选中,发现有52个基因有差异表达,其中36种基因表达水平显著下调,16种基因表达水平显著上调.结论:成功地应用DNA芯片技术筛选出HBeAg结合蛋白新基因E-18的反式调节蛋白,证明E-18基因的表达对于肝细胞基因表达谱有显著影响.
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应用基因表达谱芯片技术筛选HBV前-S2蛋白反式调节基因
目的:乙型肝炎病毒(HBV)前-S2蛋白是由HBV S基因编码的具有多种功能的蛋白质.前-S2蛋白的表达对于HBV感染肝细胞的基因表达谱具有显著影响.为了研究前-S2蛋白反式调节的靶基因,我们应用基因芯片技术对于pcDNA3.1(-)和pcDNA3.1(-)-preS2分别转染的HepG2细胞的基因表达谱进行分析.方法:以含有HBV全基因组的质粒G376-7(GenBank号:AF384371)作为模板,应用聚合酶链反应(PCR)技术扩增前-S2蛋白编码基因片段,以常规的分子生物学技术构建表达载体pcDNA3.1(-)-preS2.以脂质体技术转染肝母细胞瘤细胞系HepG2,提取总mRNA,逆转录为cDNA,与转染空白表达载体pcDNA3.1(-)的HepG2细胞进行DNA芯片分析并比较.结果:构建的表达载体经过限制性内切酶分析和DNA序列测定,证实准确无误,提取高质量的总mRNA并进行逆转录成为cDNA,进行DNA芯片技术分析.在1152个基因表达谱的筛选中,发现有42个基因表达水平显著上调,36个基因表达水平显著下调.结论:HBV的前-S2蛋白是一种反式激活因子,前-S2基因的表达对于肝细胞基因表达谱有显著影响.
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胃癌组织bcl-2基因表达与细胞凋亡和增生的关系
目的:探讨胃癌细胞bcl-2基因表达水平与肿瘤细胞增生活性及细胞凋亡程度的关系.方法:胃癌组织53例,用原位杂交及免疫组化染色法分别检测bcl-2 mRNA,bcl-2蛋白和增生细胞核抗原(PCNA)的表达,并采用凋亡细胞原位检测方法对组织切片中的凋亡细胞进行观察和比较.结果:胃癌组织表达bcl-2 mRNA 41例(77.4%),表达Bcl-2蛋白43例(81.1%),X2检验表明两种方法检测阳性率差异无显著性.胃癌53例增生期细胞标记物PCNA表达及凋亡细胞的阳性率均为100%,细胞凋亡和细胞增生指数呈显著性负相关(r=-0.993,P<0.01).随胃癌细胞Bcl-2蛋白表达水平升高,PCNA阳性细胞指数相应增加,肿瘤凋亡细胞指数则相应减少,Bcl-2蛋白+++组与++组间(t=2.552,2.699,P<0.05)及前两组分别与-组和+组间(t=4.487,3.975,2.807,3.094,4.885,5.816,3.404,3.895,P<0.01)凋亡和增生细胞指数差异均有显著性.结论:胃癌细胞bcl-2基因高表达可引起细胞凋亡减少与过度增生.
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致敏树突细胞及其亚细胞成分对荷胃癌小鼠的免疫治疗作用研究
目的:了解胃癌组织中DC的功能状态,探讨DC及其所分泌的亚细胞成分exosomes用于防治胃癌的可能性,旨在为胃癌的治疗探索一条新的途径.方法:利用致敏DC及其所分泌的亚细胞成分exosomes对荷胃癌小鼠进行治疗,观察其免疫治疗效果.结果:荷胃癌小鼠经胃癌细胞RNA致敏的DC及其所分泌的亚细胞成分exosomes治疗后,小鼠腹水产生率、肿瘤转移率、动物的存活率、瘤体平均质量等指标均明显优于对照组(P<0.01),局部组织中IL-12、IFNγ和IL-18的基因表达水平都明显升高(P<0.01),肿瘤局部CD4+、CD8+细胞数量增加(P<0.05),TIL细胞毒活性明显增强.结论:胃癌RNA致敏的DC及其所分泌的亚细胞成分exosomes,能促进胃癌抗原的提呈,并启动和增强局部的抗瘤免疫功能,改善临床症状和宿主的生存质量,对荷胃癌小鼠具有一定的免疫治疗效果.
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mRNA致敏树突细胞对胃癌的免疫治疗作用研究
目的:了解DC在胃癌胃黏膜中的功能状态,探讨DC用于胃癌等实体瘤防治的可能性,旨在为胃癌的治疗探索一条新的途径.方法:利用致敏DC治疗胃癌,以观察其对荷胃癌小鼠的免疫治疗效果.结果:荷胃癌小鼠经胃癌细胞RNA致敏的DC治疗后,小鼠腹水产生率、肿瘤转移率、动物的存活率、平均瘤体质量等指标分别为75%(6/8)、25%(2/8)、75%(6/8)、(2.04±0.33 g),均优于对照组(P<0.01);局部组织中IL-12、IL-18和IFN γ的基因表达水平都明显升高(P<0.01);肿瘤局部CD4+、CD8+细胞数量分别为0.71±0.25/μm2和0.67±0.22/μm2,P<0.05),TIL细胞毒活性明显增强.结论:胃癌RNA致敏的DC,能促进胃癌抗原的提呈并启动和增强局部的抗瘤免疫功能,改善临床症状和生存质量,对荷胃癌小鼠具有一定的免疫治疗效果.
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健康成人棕色脂肪组织的功能
在冷环境刺激下,我们利用正电子发射计算机断层扫描(PET)检测出健康受试者(5名)被激活的棕色脂肪组织,位于下颈部和锁骨上部之间,还发现此处的葡萄糖摄取量增加.我们获得其中三名受试者的组织活检标本,并对信使核糖核酸(mRNA)和棕色脂肪细胞的蛋白质标记物解偶联蛋白1(UCP1)进行了基因表达水平的检测;还对预留的样品进行了形态学评估以及生化分析,结果符合棕色脂肪的胞内特征(分布着很多小脂滴、呈现多室的脂滴).以上结果表明,在健康成人体内,仍存在大量的有代谢活性的棕色脂肪组织.
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调控性SNPs
人类遗传学的一个重要问题是如何鉴别那些能改变基因表达水平的多态性.通过对不同个体外显子序列的重新测序,可较容易地将编码区的多态性进行分类[1],而调控性SNPs因陷于基因附近的多态性"海洋"中,很难被准确描述[2].因此需要很多不同的策略来建立调控性多态的数据库.
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脂联素基因rs6773957(A/G)多态性与代谢综合征相关性研究
脂肪细胞可分泌脂联素、瘦素、抵抗素、内脂素等多种细胞因子,在代谢综合征(MS)发病机制中发挥重要作用,脂联素参与糖脂能量代谢,研究显示,MS患者血清脂联素水平下降.人脂联素基因(apM1)定位在染色体3q27上,3q27是MS的易感位点,而且有较大频率的单核苷酸基因多态性.脂联素基因rs6773957(A/G)多态性可部分调控脂联素基因表达水平,可能与MS存在关联性,但不同种族、不同地区研究结果存在差异,本研究旨在探讨秦皇岛市汉族人脂联素基因rs6773957(A/G)多态性与MS的相关性.
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环氧合酶和白三烯C4合成酶在阿司匹林性哮喘患者中的基因表达
针对阿司匹林性哮喘(AIA)的发病机制,既往曾提出阿司匹林等解热镇痛药物抑制了环氧合酶(COX),阻断了花生四烯酸生成前列腺素(PG)这一代谢途径,于是花生四烯酸的另一代谢途径[经5-脂氧合酶催化生成白三烯(LT)C4]便异常活跃,使LT合成增加,进而诱发哮喘.但这一理论并不能解释为什么只有部分哮喘患者存在对阿司匹林的不耐受.本研究通过检测阿司匹林性哮喘和非阿司匹林性哮喘患者外周血中COX-1、COX-2及LTC4合成酶的基因表达水平,来对这一问题进行探讨.
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热休克蛋白40、70、105β在三氧化二砷诱导的肝癌细胞系bel-7402凋亡中的作用
肝癌是我国为常见的恶性肿瘤之一.我国学者发现低浓度的三氧化二砷(As2O3)对于急性早幼粒细胞性白血病(APL)、实体瘤和其它血液系统恶性肿瘤均可以起到有效地缓解作用.我们使用新的基因芯片技术(microarray)等,从基因表达水平对As2O3对肝癌细胞在体外的杀伤机制进行了探讨.
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肝癌转移复发的分子机制与预测:从组学研究到临床应用
肿瘤转移是一个涉及癌细胞本身、癌细胞与癌周微环境及宿主免疫状态的相互作用等的复杂过程,许多因素参与调节.既往的单因素研究难以反映转移过程的本质,难以准确预测临床过程.人类基因组计划的顺利实施,比较基因组杂交( comparative genomic hybridization,CGH)、基因作图、cDNA微阵列等高通量新技术的发展,彻底改变了传统的单个基因研究模式,使我们能从全基因组水平分析相关基因表达水平及其结构的改变,以及其相互作用网络、途径及调控机制等.这些技术已成为功能基因组研究的重要手段,也使研究肿瘤转移过程中多基因改变的模式及其调控机制成为可能.
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载脂蛋白E缺乏鼠血25-(OH)D水平及维生素D受体表达研究
维生素D(VitD)对人类健康特别是儿童健康具有重要意义.ViID主要是通过与VitD受体(vitamin D receptor,VDR)结合发挥其生物学作用[1].既往我们研究发现纯合子VDR基因剔除鼠存在血压明显升高与心肌肥厚现象,并与影响血压水平的主动脉内皮型一氧化氮合酶、内皮素-1基因表达水平及心房利钠肽水平明显相关[2].
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急性髓性白血病p15INK4B基因表达和基因甲基化状态的研究
p15INK4B(p15)基因被认为是一个重要的肿瘤抑制基因,对细胞周期起负调控作用[1].p15基因的启动区中有一CpG岛,许多血液系统恶性病变表现为CpG岛异常的高甲基化状态[2].虽然有关急性白血病p15基因启动区中CpG岛甲基化异常已有不少的研究报道,但主要见于成人,CpG岛异常甲基化与该基因表达水平的关系研究则较少见.本研究同时检测儿童急性髓性白血病(acute myeloid leukemia, AML)p15基因表达水平和甲基化状态,以探讨两者之间的相互关系以及在急性白血病发病中的作用.
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左向右分流型先天性心脏病合并心力衰竭患儿肌浆网Ca2+-ATP酶mRNA表达的研究
婴幼儿左向右分流型先天性心脏病(简称先心病)合并心力衰竭(简称心衰,CHF)是儿科临床常见的心血管疾病,特别是中、重度心衰患儿具有较高的病死率.除血流动力学改变外,造成心衰的分子机制尚不明确.新近研究资料表明,心肌细胞肌浆网Ca2+-ATP酶基因表达水平的改变可能是心衰发生的关键因素,但国内尚未见有关婴幼儿先心病合并心衰时肌浆网Ca2+-ATP酶mRNA表达变化的研究报道.
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寡核苷酸Dbait乏氧放射双表达对人宫颈癌细胞的乏氧放射增敏效应
基因-放疗是将放射敏感性调控序列与治疗基因和药物相耦联,在肿瘤放疗同时诱导目的基因和药物在肿瘤内高效表达,从而提高肿瘤放射敏感性,它是近年来肿瘤放疗新策略[1].早期生长反应-1(early growth response-1,Egr-1)启动子在电离辐射诱导下能增强下游基因表达,并可提高放疗效果;乏氧反应元件(hypoxia response elements,HRE)在乏氧条件下可增强下游基因表达水平.
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复方藤梨根制剂对荷人肺巨细胞癌裸鼠移植瘤生长及Cx43基因表达水平的影响
细胞间隙连接通讯(gap junction intercellular communication,GJIC)是细胞间的一种重要连接方式,在细胞分化、生长控制和维持体内环境平衡等方面起重要作用.近年来研究表明,肿瘤和转化细胞中普遍存在GJIC的缺陷,GJIC在肿瘤的发生及转移过程中有着极为重要的作用.间隙连接蛋白是由许多同源性基因编码的多基因家族,它们的表达和分布异常与肿瘤的形成关系密切.在近的一些实验中,人们把野生型连接蛋白(connexin,Cx)基因转染到肿瘤细胞中,可见肿瘤的生长受到明显抑制,间隙连接通讯功能上调,细胞恢复正常生长,认为连接蛋白基因是一类肿瘤抑制基因家族[1].Cx43是一种主要的细胞间隙连接蛋白,在多种肿瘤细胞中都有Cx43表达的下降.为此,许多学者正在研究上调Cx43表达的药物,以此来实现其抑制肿瘤生长、分化、转移等作用.目前,对环磷酸腺苷(cAMP)、维甲酸、β-胡萝卜素上调Cx43表达的研究较多,中药提取物如姜黄素类似物、茶多酚等上调Cx43表达的研究已有报道.我们在体内观察复方藤梨根制剂(FFTLG)对荷人肺巨细胞癌(PG)裸鼠移植瘤的生长和瘤体组织Cx43表达的影响,并进一步探讨其作用机制.
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脑胶质瘤中全长新基因PKIβ的克隆与表达
目前世界上在不同组织或不同病理样本中获取差异表达基因的方法有很多种[1-9].在各种技术中诸如:差异显示技术,只适用于少量样本,同时跑电泳的工作相当辛苦,并受限于一次电泳样品数量,而高密度的基因芯片,一次就能完成大量样本的基因表达水平上的筛选工作.
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微RNA在炎症性肠病中的研究进展
炎症性肠病(IBD)的发生是通过遗传学、免疫应答和环境因素之间错综复杂的相互作用所致.在克罗恩病(CD)和溃疡性结肠炎(UC)发病中多种基因表达水平的改变可反映出这种相互作用.虽然IBD具有异质性表型,但是在UC和CD已知的病理生理学机制中存在相同的通路.
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一例心脏移植患者外周血白细胞多基因表达的变化
原位心脏移植患者移植器官的组织活检是临床检测免疫排斥反应的金标准。但由于活检不能实现动态监测,因此往往错过对早期免疫排斥反应的发现而延误了临床的及时控制和治疗;活组织检查中创伤部位移植物抗原的再释放,又可进一步刺激或加重免疫排斥反应。作者通过对一例心脏移植患者于移植前后白细胞多基因表达水平变化的比较,探讨和寻找外周血免疫排斥反应的早期监测指标。 一、对象与方法 1.对象:患者男,44岁,移植前情况:临床诊断为扩张性心肌病,行原位心脏移植术。供者配型: HLAI:A1,28;B8,35;[BW6] HLAII:DR1 3;[DR52] DQ5(1) DQ2。受者配型:HLAI:A11,B52(5),62(15)[BW4 BW4] HLAII:DR15(2),1304(6) DR52 DQ6(1) DQ(3)。术前超声心动图示:左心增大,室间隔肥厚,室壁运动普遍减低,左心功能减低,二尖瓣关闭不全。患者移植后情况:术后心功能II级;术后超声心动图示右房轻度增大,左室顺应性降低,极少量心包积液;CsA(环孢霉素A)浓度检测:术后第2天354.59 μg/L,术后第3天434 μg/L ,术后第5天303.4 μg/L,术后6 d 318 μg/L,术后7 d 611.8 μg/L,术后8 d 466.88 μg/L,术后9 d 502.22 μg/L,术后10 d 856 μg/L。
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NO吸入对海水淹溺肺水肿兔肺内c-foS及c-jun基因表达的图像定量分析
海水淹溺肺水肿(PE-SWD)是近年来由董文度等[1]提出的新型实验动物模型,对其治疗已有一些文献报道,但NO吸入对PE-SWD肺内c-fos和c-jun基因表达的研究尚未见报道.我们在应用高频喷射通气(high frquency jet ventiation,HFJV)、药物治疗的基础上,采用NO吸入疗法,观察和分析NO对兔c-fos、c-jun基因表达的影响,从基因表达水平探讨NO对PE-SWD的治疗效果.