双酚A等化学物对耗尽内源性雌激素诱导T47D细胞凋亡的影响

目的在乳腺癌细胞株T47D细胞内采用雌激素耗尽的方法诱导其发生凋亡,然后观察对-壬基酚(n-4-noniphenol,NP)、双酚A(bisphenol A, BisA)和邻苯二甲酸酯二丁酯(dibutylphthalate,DBP)对这种凋亡的影响,探讨环境雌激素是否能够抑制雌激素耗尽所诱导的细胞凋亡作用.方法 T47D细胞在达克尔培养液(DMEM,含10%小牛血清)中进行常规传代培养,于实验前4 d将细胞用磷酸盐缓冲盐水洗涤后改为在无酚红DMEM培养,目的是耗尽细胞内源性雌激素.实验设溶剂对照、雌激素对照(E2)、抗雌激素他莫昔芬(TAM)对照及3个试验组,采用流式细胞术,琼脂糖凝胶电泳和HE染色镜检观察环境雌激素对雌激素耗尽所诱导的细胞凋亡的影响.结果流式细胞仪分析结果表明,雌激素耗尽能够诱导T47D细胞发生凋亡,凋亡率为34.5%,此时往培养液中分别加入32×10-7 mol/L NP和32×10-7mol/L BisA,对细胞处理72 h,可显著抑制细胞凋亡作用(凋亡率分别变为20.1%和16.5%);琼脂糖凝胶电泳显示,细胞凋亡特有的DNA-ladder消逝;HE染色镜检表明,细胞出现活跃核分裂相.加入5×10-7mol/L TAM可加重细胞的凋亡现象(细胞凋亡率为55.6%).结论 NP和BisA均可抑制雌激素耗尽所诱导的T47D细胞的凋亡作用;DBP对凋亡的抑制作用不明显.环境雌激素有可能影响细胞凋亡信号传导途径.

水痘-带状疱疹病毒糖蛋白I基因在昆虫细胞中的表达及纯化

目的将北京水痘-带状疱疹病毒(VZV)84-7株克隆糖蛋白I(gpI)基因在杆状病毒-昆虫细胞表达系统中表达,并对其表达产物进行纯化.方法采用PCR方法从VZV DNA中扩增gpI全基因序列,并将其插入杆状病毒转移质粒pBacPAK9中,获得重组转移质粒pBacVZVgpI,对pBacVZVgpI中的插入基因进行测序.重组转移质粒与线性杆状病毒BacPAK6 DNA(Bsu36I digested)共转染Sf 9昆虫细胞,获得重组病毒BacPAK-gpI.通过亲和层析纯化重组蛋白,并检测其抗原性.结果 PCR扩增得到gpI基因,测序结果表明克隆的外源基因正确.经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、免疫印迹(western-blot)方法证明gpI基因在昆虫细胞中获得表达,表达产物在培养72 h达到高峰,重组蛋白的相对分子质量约为58 000和70 000,与理论值相符,蛋白质加工与天然蛋白类似.动物实验结果表明,重组蛋白具有较好的免疫原性,可刺激小鼠产生中和抗体.SDS-PAGE检测纯化的重组蛋白,纯度达80%.纯化蛋白经western-blot和ELISA检测后显示,具有特异的抗体结合活性.结论应用昆虫细胞表达水痘-带状疱疹病毒gpI基因,可为水痘-带状疱疹病毒抗原定量分析、糖蛋白ELISA的研制和制备亚单位疫苗提供基础.

河豚毒素实验疫苗的不同剂量对免疫效应的影响

目的为提高河豚毒素抗毒实验疫苗的效价,探索不同免疫剂量对免疫反应的影响.方法以河豚毒素(TTX)与中国鲎血蓝蛋白(TTH)的化学偶联物TTX-TTH免疫Balb/c小鼠,比较高低不同免疫剂量(分别为每次100和25 μg)对抗体质量和疫苗的抗毒效价的影响.以血清抗体质量和TTX攻毒效果检验疫苗的效价.结果低剂量组的抗体质量升速比高剂量组快.两者相比,单次抗TTX中毒效价:半数活存剂量分别为16×LD和11×LD,大耐受剂量分别为26×LD和22×LD;累积抗毒效价:半数动物分别可累计耐受40×LD和22×LD以上,测得大累计耐受剂量分别为104×LD和90×LD.结论 TTX的实验疫苗在不同免疫剂量方案均有效预防了TTX的攻毒.低剂量组比高剂量组有更好的抗体质量、单次抗毒效价和累积抗毒效价.

大连和沈阳两市区79例母乳中二(口恶)英污染水平调查

目的通过测定乳汁中二(口恶)英类污染物浓度,了解我国人群体内二(口恶)英负荷水平,对新生儿授乳期间的二(口恶)英每日摄入量进行卫生学评价.方法采用CALUX生物法测定内陆城市(沈阳地区32例)和沿海城市(大连地区47例)初产妇乳汁中二(口恶)英总毒性当量.结果大连地区母乳中二(口恶)英类污染物总毒性当量中位数为15.847 3 pg TEQs/g fat,显著高于沈阳地区7.212 9 pg TEQs/g fat.结论我国母乳中二(口恶)英污染水平处于世界平均水平,新生儿授乳期间二(口恶)英摄入量估计值超过WHO推荐的成人每日耐受量,应该引起相关部门足够的重视.

西藏自治区六岁以下儿童维生素A缺乏情况调查

目的了解西藏自治区6岁以下儿童维生素A缺乏(VAD)情况.方法采用分层整群随机抽样方法,将西藏分为城市、牧业县、农业县、半农半牧县4层,每层抽2个市或县进行调查.调查内容包括家庭一般状况、儿童喂养和疾病情况,收集儿童血清.血清维生素A(VA)含量检测采用微量荧光法.结果共调查6岁以下儿童1 257人,男635人,女622人,藏族占98.8%.2岁以上儿童836人,发现儿童夜盲症6例,结膜干燥症2例,儿童临床VAD患病率为0.96%.在1 071名接受调查的母亲中,夜盲症18例(1.7%).4类地区均发现有临床VAD病例.西藏儿童VA平均水平为1.09 μmol/L,城市儿童(1.15 μmol/L)和牧业县儿童(1.12 μmol/L)显著高于农业县儿童(1.04 μmol/L )和半农半牧县儿童(1.05 μmol/L).儿童亚临床VAD(血清VA≤0.70 μmol/L)患病率:城市、牧业县、农业县和半农半牧县儿童分别为5.4%、4.7%、11.0%和12.3%,差异有显著性;0.5岁以下和0.5岁以上婴儿组亚临床VAD患病率分别为22.2%和 13.3%,显著高于1岁以上各年龄组儿童(1岁为8.5%,2～3岁为5.4%,4～5岁为7.9%);男女儿童血清VA水平和亚临床VAD患病率的差异无显著性.结论西藏儿童VAD情况较全国为轻,但农业县和半农半牧县属于中度亚临床VAD地区,需要对这些地区的儿童,特别是1岁以下的婴儿补充VA.

1994～2000年广州市区登记肺结核病的流行特征

目的了解广州市区肺结核病的流行特征,探讨登记肺结核病的流行趋势.方法对1994～2000年广州市肺结核病病例数据采用描述流行病学方法进行综合分析.结果 1994～2000年新发涂阳(首次发现并且痰涂片阳性)新登记率为(16.68～26.27)/10万,年均递升7.86%. 标化新发涂阳新登记率芳村区高,为33.70/10万.平均新发涂阳新登记率男性为30.50/10万,女性为11.60/10万.涂阳新登记率随年龄增长而升高, 70岁以上人群达高峰,新发涂阳新登记率为61.22/10万,与50～69岁组比较呈成倍上升的趋势.无业人群的肺结核涂阳新登记病例多,为2 529例,占总病例数的35.12%.涂阳登记率为(8.37～5.43)/10万,年均递降6.96%.肺结核死亡率为(6.84～4.41)/10万.结论需警惕高发病地区肺结核流行的延续;无业人群可能沦为肺结核病的高发患者群;要尽早挖掘潜在的传染源.

砷体外诱导人Jurkat T淋巴细胞的差异表达cDNA文库的构建

目的了解三氧化二砷(As2O3)诱导人T淋巴细胞的差异表达基因,探讨砷的免疫毒性和免疫抑制的机制.方法在体外用As2O3处理人Jurkat T淋巴细胞(5 μmol/L,24 h)后,应用抑制性消减杂交技术(SSH)和克隆技术构建差异表达的cDNA文库,用聚合酶链反应技术和测序技术鉴定阳性克隆.结果用SSH技术成功地构建了由As2O3诱导的Jurkat T淋巴细胞的差异表达基因的正向消减cDNA文库.经测序分析该文库含有30个基因片段,其中仅有1个是重复基因片段.与基因库的序列比较显示,这些基因序列的同源性在95%～100%.该文库的基因有:氧化代谢基因(包括磷酸丙糖脱氢酶、酰胺腺嘌呤二核苷酸4亚单位、焦磷酸合成酶、16S核糖体、琥珀酰CoA合成酶和ATP合成酶6),转录和翻译基因(包括多聚腺苷结合蛋白、泛醌素特异性蛋白酶14、核糖体蛋白L23、核糖体蛋白S15a、真核翻译起始因子3、Rab5相互作用蛋白、剪切因子和ADP-核糖体因子6样相互作用蛋白),与氧化应激相关的基因(铁蛋白重链和高泳动类蛋白2),与细胞分化或凋亡相关基因(髓细胞分化初期应答蛋白和凋亡相关蛋白),参与蛋白活化或信号传导的基因(酪氨酸激酶、丝氨酸激酶和磷脂酰4磷接头蛋白-1相关蛋白);5个功能不详的基因是KIAA0092、CGI-147蛋白、GCI-35、核磷蛋白Nopp34和与骨骼肌部分mRNA假设蛋白同源基因.1个在基因库中无同源序列的新基因.结论应用SSH技术成功构建了As2O3诱导T淋巴细胞差异表达基因的正向消减cDNA文库.并且发现以往在砷的研究中从未涉及的基因.基因功能分析结果提示,As2O3在诱导T淋巴细胞凋亡的过程中不但有多种基因参与,而且还有一些未知的基因也参与细胞凋亡或(和)细胞抗砷毒性作用的应答过程.

1～23个月儿童睡眠问题的流行病学研究

目的了解上海市1～23个月儿童常见睡眠问题的发生以及不良睡眠习惯的存在状况,分析可能影响儿童睡眠问题发生的高危因素.方法 2000年8～9月间在上海5个行政区随机抽取1 252名无严重疾病和异常出生史的正常儿童,在严格质量控制的条件下由专人负责对其家长进行儿童家庭社会环境与睡眠健康问卷调查.调查的应答率为90.18%.结果上海地区1～23个月儿童睡眠问题的发生率为65.90%,其中梦魇及夜惊、鼾症及睡眠呼吸暂停男孩的发生率明显高于女孩.儿童不良睡眠习惯包括与父母同睡、入睡需要帮助及睡眠无规律等的发生率较高.影响儿童睡眠问题的主要因素有母亲有焦虑情绪、儿童睡眠无规律、入睡需要帮助、困难型气质及母亲孕期睡眠等.结论目前上海地区1～23个月儿童睡眠问题的发生率较高,其主要影响因素还是以社会家庭环境因素为主,尤其是父母不重视儿童良好睡眠习惯的养成,以及对孩子睡眠行为的不正确应答所致.

镰刀菌毒素DON对心肌细胞膜电位的影响及硒的保护效应

目的观察镰刀菌毒素单端孢霉烯族化合物脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)对培养心肌细胞动作电位的影响及亚硒酸钠的保护效应.方法取新生1～2 d龄Wistar大鼠,分离心肌细胞,培养基为80%DMEM与20%小牛血清,于37℃,在含5%CO2与95%空气的培养箱内进行培养,于培养后第4天,引导心肌细胞动作电位为加入毒素前对照,然后向培养基中分别加入50 、100和200 mg/L DON,以观察不同剂量DON 对心肌细胞动作电位的影响.在培养基中加入含0.5 mg/L硒的亚硒酸钠,继续培养16 h后,观察硒对DON致心肌细胞膜电位改变的保护作用.结果 DON使心肌细胞去极化过程发生改变,动作电位(APA)、大除极速度(Vmax)、超射(OS)及阈电位(TP)均减小,部分参数指标存在较明显的剂量效应关系.OS在DON为50 mg/L 时出现增高现象.复极化过程的变化,复极动作电位时程(APD)明显延长; 大舒张电位(MDP)减小; 动作电位发放频率(APF)受到明显的抑制,且存在明显的剂量依存关系.在培养基中加入含0.5 mg/L硒的亚硒酸钠,继续培养16 h后,200 mg/L DON对其心肌细胞动作电位的抑制作用明显减弱,但部分参数(APA、Vmax、OS、TP、APD90及APF)没有完全保持在正常对照组水平,亚硒酸钠不能完全对抗DON 引起的心肌细胞动作电位的改变.结论 DON能抑制大鼠培养心肌细胞的跨膜电位,初步表明亚硒酸钠可减轻DON对心肌动作电位的影响,呈现明显的保护作用.

自然抗性相关巨噬细胞蛋白1基因多态性与肺结核易感性的研究

目的探讨自然抗性相关巨噬细胞蛋白1基因(NRAMP1)多态性与中国汉族人群肺结核发病的关系.方法采用以医院为基础的病例对照研究设计,用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析(PCR-RFLP)法检测NRAMP1基因中INT4、D543N及3′UTR 3个多态性位点的基因型,并对结核病相关危险因素进行问卷调查,应用SPSS软件进行单因素和多因素非条件logistic回归分析.2001年4月至2002年6月选择110例肺结核病例,平均年龄为(28±13)岁;对照组为180名健康体检者,平均年龄为(27±9)岁.对NRAMP1基因各多态性位点进行单因素分析.结果病例组D543N G/A 及3′UTR TGTG+/del基因型频率显著高于对照组,OR值(95% CI)分别为2.22(1.03～4.78)和1.93(1.14～3.26).病例组和对照INT4 各基因型频率比较差异无显著性.多因素分析调整暴露史和疫苗接种史2个因素后,D543N G/A 及3′UTR TGTG+/del基因型仍与结核病显著相关,调整OR值(95% CI)分别为3.04(1.12～8.27)和2.36(1.20～4.64),而病例和对照组INT4位点多态性比较差异未见显著性.结论 NRAMP1基因D543N及3′UTR位点多态性可能是汉族人群肺结核的易感因素.

鲑鱼鱼白DNA对小鼠胸腺作用的差异表达基因筛选

目的探讨鲑鱼鱼白DNA(salmon milt DNA,SMD)对小鼠胸腺增龄性萎缩的作用及作用机制.方法 10月龄雌性BALB/C小鼠按体重随机分为高剂量组(333.33 mg*kg-1*d-1)、低剂量组(166.67 mg*kg-1*d-1 )和对照组(0 mg*kg-1*d-1 ).喂饲5周后,测定胸腺脏器指数;组织切片后以Image-Pro Plus专业图像分析系统(4.0版)进行胸腺细胞计数和皮质厚度测量,所得数据经SAS统计软件分析.应用基因芯片技术在对照组和高剂量组胸腺组织中筛选差异表达的基因片段、RT-PCR鉴定部分片段.结果 SMD对小鼠的体重、胸腺重量和胸腺指数均无影响;高剂量组小鼠的胸腺皮、髓质细胞数量与对照组经统计学分析相比均显著增多;低剂量组的胸腺皮、髓质细胞数量与对照组相比经统计学分析差异均不显著;高、低剂量组的胸腺皮质平均厚度经统计学分析均显著高于对照组;经基因芯片技术初筛出112条差异表达的基因片段;Genebank登录号为Aw209102、U23789、X80232的3条上调表达的基因片段,经RT-PCR鉴定,在高剂量组确实存在上调表达.结论 SMD有通过促进细胞增殖相关基因的表达并同时促进发育、分化相关基因表达而逆转胸腺增龄性萎缩的可能.

饮食诱导肥胖有抵抗性的大鼠解偶联蛋白-2基因的表达

目的探讨高脂饮食诱导肥胖抵抗大鼠褐色脂肪组织(BAT)、白色脂肪组织(WAT)和骨骼肌解偶联蛋白-2(UCP2)基因的表达.方法采用50只健康雄性SD大鼠,随机分为对照组和高脂组,分别用基础饲料和高脂饲料喂养13周,然后根据体重筛选出DIO-R和DIO组观察饮食诱导肥胖抵抗(DIO-R)大鼠体重与能量摄入量的变化,应用RT-PCR方法测定大鼠褐色脂肪组织、白色脂肪组织和骨骼肌UCP2 mRNA表达水平.结果饮食诱导肥胖(DIO)大鼠体重与总能量摄入量(489.7±20.5)g、(34 363±1 465)kJl明显高于DIO-R大鼠(425.1±27.1)g,(31 693±946)kJ.白色脂肪组织中,DIO-R大鼠UCP2mRNA的峰面积为(352±30)mm2,DIO大鼠UCP2mRNA的峰面积为(101±12)mm2;DIO及DIO-R大鼠骨骼肌UCP2mRNA的峰面积分别为(130±15)mm2、(170±12)mm2; DIO-R大鼠和DIO大鼠褐色脂肪组织UCP2mRNA的峰面积为(124±14)mm2、(147±19)mm2.结论 DIO-R大鼠白色脂肪组织UCP2 mRNA表达明显增加,提示肥胖抵抗与组织特异增加UCP2的表达相关.

人体生物样品中邻苯二甲酸酯类的含量

目的研究和探讨环境内分泌干扰物邻苯二甲酸酯类在人体生物样品中的含量水平.方法运用反相高效液相色谱分析法测定了人体生物样品(60份血清、36份精液、11份脂肪)中3种邻苯二甲酸酯类物质(phthalates)[邻苯二甲酸二乙酯(DEP)、邻苯二甲酸二丁酯(DBP)和邻苯二甲酸-2-乙基己酯(DEHP)]的含量水平,同时测定了血清中有关激素水平和精液常规指标,并运用SPSS分析软件中的非参数统计方法对测定结果进行了相关性分析.结果上述3种人体生物样品中均可检测到phthalates,脂肪中的phthalates含量范围在ND～2.19 mg/kg,血清中为ND～37.91 mg/L,精液中为0.08～1.32 mg/L;Spearman相关分析显示,女性血清中DBP与E2呈正相关(r=0.442),DEP与T呈负相关(r=-0.486);精液中phthalates与液化时间呈显著正相关关系(P<0.01),DBP与精液量、活力分级中的c级精子活力呈显著负相关,与b级精子活力呈显著正相关(P<0.05),DEHP与精液量、活力分级中的c级精子活力呈显著负相关,与精子畸形率、b级精子活力呈显著正相关(P<0.05).结论邻苯二甲酸酯类物质存在于人体组织中,并可影响人类的精液质量.

毒理蛋白质组学

人类基因组计划的实施导致了基因组学(genomics)的诞生,而其快速推进促使了功能基因组计划的开展,使得蛋白质组学(proteomics)很快成为了一门新兴学科并得到了迅猛发展,被人们称为后基因组计划.紧接着,基于基因组学和蛋白质组学的战略和技术的边缘与交叉学科纷纷产生,毒理基因组学(toxicogenomics)和毒理蛋白质组学(toxicoprotenomics)就是在基因组计划和后基因组计划的开展中相继诞生和发展起来的,并得到了毒理学家和相关学科研究者以及各国政府的重视.

核分析技术与预防医学

核分析技术是一门以粒子与物质相互作用、核效应、核谱学及核装置(反应堆、加速器等)为基础,由多种方法组成的综合技术.核分析技术具有众多常规非核技术无可替代的优点,如高灵敏度、高准确度和精密度、高分辨率、特异性等.生命科学研究的发展,特别是近年来进入分子水平的研究,对核分析技术提出了新的要求.

CYP2E1基因多态性与慢性苯中毒

人类接触的化学物超过70 000种,包括药物、食品添加剂、杀虫剂及工业溶剂等[1].

济宁市桶装饮用纯净水生产现状分析

为了解济宁市桶装饮用纯净水生产卫生状况,规范其生产、销售卫生行为,我们于2002年3月至2002年11月对该市桶装饮用纯净水生产现状进行了调查分析.

病毒性肝炎多重感染的临床流行病学研究

从感染模式、对临床的影响以及危险因素探讨等方面对病毒性肝炎多重感染的流行病学进行研究,现报道如下.

儿童负重步行时呼吸形式和躯干姿态分析

学校儿童背着沉重的书包是一种常见现象.我们通过分析躯干运动学和潮气量、呼吸频率和每分钟通气量来测定分析在步行时携带不同重量的书包,对儿童身体的姿态和呼吸之间可能的关系.

新疆伊宁市1996～2000年艾滋病监测及现状

伊宁市是新疆省艾滋病流行严重的地区,目前仍处在艾滋病流行的上升阶段,自1996～2000年已累计报告1 532例,其中艾滋病57例,死亡8例.维吾尔族的感染率高,共1 322例(86.3%);经血液传播的占96.3%,经性传播的占1.9%,传播途径不明的占1.8%.3种传播途径并存,尤以静脉吸毒途径为主.

高效液相色谱法测定血清中的双酚A

双酚A(bisphonel A)是重要的化工原料,主要用于生产聚碳酸酯(PC)、环氧树脂(EP)和其他高分子材料,在这些材料中仍残留不少双酚A.PC用于制造耐热的茶具、咖啡杯等,EP用于食品包装材料,如罐装饮料与肉类罐头的内层涂料.由于这些物品都是人们经常接触的生活用品,造成双酚A也随之进入体内.双酚A是环境内分泌干扰物,在人体内能起到干扰体内正常激素分泌的作用,从而影响生殖功能,导致恶性肿瘤的产生.测定人血浆中的双酚A含量可对人类机体的影响提供评价依据.

癌基因组学(oncogenomics)

DNA微阵列(DNA microarrays)

逆转录聚合酶链式反应检测某些动物性产品中冠状病毒初探

对于引起人类严重急性呼吸综合征的冠状病毒(SARS-associated coronavirus)[1]检验方法有免疫荧光法、ELISA法和分子生物学方法,这些方法全部针对临床标本.目前食品中检测的病毒种类仅限于甲肝病毒、轮状病毒、诺瓦克病毒、柯萨奇病毒等肠道病毒.由于环境样品不同于医学标本,样品中病毒数量极少,传统方法需要从大量样本中富集、分离病毒,再经过如组织培养等方法检测,这些方法因细胞病变不明显、重复性差、时间太长等均不适用.

第十八讲循证医学的概念与系统综述方法

循证医学(evidence-based medicine)是指遵循证据的医学,所谓证据即指当前医学研究的可靠结果或其综合.循证医学并不为各类临床决策提供直接答案或指令,而仅为临床决策提供参考性证据.临床医师应根据个人经验、患者意愿和病情,结合这些证据作出科学的决策,处理患者,以提高医疗水平.