人巨细胞病毒特异性淋巴细胞的体外活化与增殖

目的:寻找一种安全有效的HCMV特异性淋巴细胞体外活化增殖方法.方法:分离外周血单核细胞,用白介素-4(IL-4)和粒细胞-单核细胞集落刺激因子(GM-CSF)诱导分化为未成熟树突细胞,流式细胞仪检测表面特征标志;从AD169感染的人胚肺成纤维细胞(HELF)提取HCMV抗原,以未成熟树突细胞作抗原呈递细胞,共同刺激自体淋巴细胞的活化增殖,2 d后检测TNF-α的分泌;继续刺激12d后,收获淋巴细胞作为效应细胞,以吞噬HCMV抗原的自体树突细胞作靶细胞,检测被杀伤细胞LDH的释放,估计其特异性细胞毒功能.结果:①单核细胞经IL-4和GM-CSF刺激4 d分化为未成熟树突细胞,高表达CD1a(87.5%);低表达CD14(4.2%)、CD83(48.4%)、CD86(45.8%)和HLA-DR(55.4%).②HCMV感染者的淋巴细胞经自体未成熟DC和HCMV抗原诱导2 d后,细胞因子TNF-α的分泌显著增加(P＜0.05).③继续诱导12 d后,部分淋巴细胞转化为HCMV特异性细胞毒T细胞,能特异性杀伤靶细胞(P＜0.01).结论:IL-4和GM-CSF可有效地促使HCMV感染者单核细胞转化为树突细胞,这些细胞能有效呈提HCMV抗原至自身淋巴细胞(HCMV感染者),并使其活化增殖.这为HCMV感染的免疫预防和治疗进一步提供了依据.

SARS患者合并肺炎支原体和肺炎衣原体感染的研究分析

目的:分析比较SARS患者中肺炎支原体和衣原体感染的水平.方法:收集87例SARS患者、105名血站献血员及116例普通发热患者的血清,分别检测其血清中肺炎支原体和衣原体抗体.统计学分析采用卡方(X2)检验.结果:SARS病例组的肺炎支原体IgG阳性率(80.5%)高于发热组(56.9%)和正常组(47.6%),IgM在SARS病例组(57.5%)也高于发热组(30.2%),支原体IgG、IgM同时阳性的比较显示,病例组(51.7%)高于正常组(24.8%),并有显著的统计学意义.衣原体的IgG和IgM阳性率在病例组(56.3%和24.3%)均高于正常组(37.1%和11.4%).结论:在SARS患者中肺炎支原体和衣原体的感染率处于较高水平,需在SARS治疗过程中注意肺炎支原体或肺炎衣原体的合并感染,并对症治疗.

直肠刺激的脑功能磁共振成像研究

目的:运用功能磁共振成像(fMRI)研究正常人和肠易激综合征(IBS)患者直肠刺激时脑内局部活动.方法:11名正常人和26例IBS患者为对象.以不同气体容量扩张直肠获得fMRI图像,并和T1W解剖图像融合,进行脑内活动区的面积和信号强度分析.结果:大多数正常人和IBS患者的直肠刺激明显激活扣带回前皮层(ACC)、脑岛皮层(IC)、前额叶皮层(PFC)和丘脑(THAL).在正常人中,注气量达90 ml和120 ml时,均以ACC中的活动区面积大;在不同的注气量时,绝大多是以PFC和ACC中的活动区MR信号强度变化幅度大.在相同容积直肠刺激时,IBS患者脑内活动区比正常人组活跃;IBS患者组在疼痛性直肠扩张时脑内活动区以PFC为明显.结论:正常人直肠刺激时,中枢兴奋区主要位于ACC和PFC;而IBS患者在疼痛性直肠扩张时以PFC为主.

HCMVpp65抗原和IgM抗体检测诊断儿童HCMV活动性感染的比较

目的:比较人巨细胞病毒(HCMV)pp65抗原(以下简称pp65)检测和血清HCMV-IgM抗体(以下简称IgM抗体)检测两种方法对儿童HCMV活动性感染的诊断实用意义.方法:采集临床疑似HCMV活动性感染儿童血标本(共251份),分离血浆和多形核白细胞,分别用于IgM抗体检测和pp65检测.同时进行荧光定量PCR检测HCMV DNA,与pp65抗原作平行比较.结果:pp65抗原检测的结果与IgM抗体检测的符合率为73.3%.与HCMVDNA检测相比pp65抗原检测法的符合率、特异度和敏感度分别为85.5%,85.2%和86.2%.而且高pp65抗原血症与患者的临床症状密切相关.结论:pp65抗原血症反映该病毒活动状况,可监测HCMV活动性感染.由于儿童患者还存在原发感染的可能性,所以,联合HCMV-IgM的监测来提高临床的诊断率.

北京市部分职业人员血脂水平及血脂异常流行情况

目的:分析2003年北京部分职业人员血脂水平及高脂血症的患病率,并与国内1984～1986年有关血脂研究资料及日本、美国血脂调查结果比较.方法:以16 963名体检者为研究对象,对其进行问卷调查、体检及血脂指标检测,血脂包括总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、三酰甘油(TG).结果:由于TC、HDL-C、LDL-C及TG数据呈偏态分布,按百分位数法得出各年龄组的血脂结果,统计血脂异常的不同性别和年龄组的流行率.与20年前相关研究结果比较,男女TC高0.09 mmol/L及0.1mmol/L,TG增高明显,男女分别为0.47 mmol/L和0.3 mmol/L,LDL-C差异无显著性,HDL-C下降0.07 mmol/L(男)和0.05 mmol/L(女).高脂血症患病率比20年前明显增高,TC高于合适水平者有27.4%,高TC检出率为14.2%.本统计TC水平比日本低0.55 mmol/L,比美国低0.53mmol/L(男)和0.56mmol/L(女),差异均具有显著性(P＜.001).结论:与20年前资料相比,各型血脂异常检出率明显上升.TG升高幅度较大,而TC水平较稳定.目前我国冠心病血脂危险水平仍低于日本和美国.

冠心病患者血清中相关自身抗体的检测及临床意义

目的:探讨血清中抗氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)抗体和抗内皮细胞抗体(AECA)这2种自身抗体与冠状动脉粥样硬化的关系.方法:分别用酶联免疫吸附法(ELISA)和间接免疫荧光法(IIF)检测118例冠状动脉硬化性心脏病患者及44名健康对照者血清ox-LDL和AECA水平,同时用生化方法检测其血脂水平.结果:冠心病组血清抗ox-LDL抗体阳性率为32.20%,明显高于正常对照组阳性率6.82%(P=0.001);血清抗内皮细胞抗体阳性率冠心病组为38.14%,健康对照组为13.64%(P=0.002).在血脂正常的冠心病组中抗ox-LDL抗体阳性率25.00%也高于正常对照组(P=0.045).结论:血清中上述2种自身抗体阳性率与冠状动脉粥样硬化密切相关,而且抗ox-LDL抗体阳性率与血脂无明显相关性,自身免疫反应是动脉粥样硬化的一种可能的发病机制.

生存素在结肠癌患者中的表达及临床意义的研究

目的:研究抗凋亡蛋白生存素(survivin)在结肠癌患者的癌组织和外周血中的表达,以评估其临床应用价值.方法:用免疫组化技术检测28例结肠癌患者组织中生存素的表达,用逆转录-实时定量PCR技术检测了28例结肠癌患者癌组织和13例非癌性结肠病变组织和30名正常人外周血中生存素的表达.结果:结肠癌组织中生存素蛋白的表达率为96.4%.生存素基因在结肠癌组织中的表达率为100%,mRNA的平均拷贝数为1.22×105/mg;在非癌性结肠病变组织中的表达率为46%,mRNA的平均拷贝数为1.59×103/mg,两者间mRNA的表达率和表达量差异均有显著性(P＜0.01;P＜0.05).81.5%的结肠癌患者外周血中检测到生存素转录本,30名正常人外周血中均未检测到.结论:生存素的表达与结肠癌密切相关,患者外周血中检测到生存素基因的转录本提示患者外周血循环中可能存在从癌组织脱落的肿瘤细胞,因此在外周血中检测生存素的转录本可能是观察肿瘤复发、判断疾病预后的良好指标.

强直性脊柱炎易感基因定位的比较研究

目的:比较分析中国人群与欧美人群在强直性脊柱炎(AS)易感基因定位方面的异同点.方法:采用全基因组扫描法对中国9个AS家系101份DNA样本进行基因分型和连锁分析;采用比较分析法对国外3个课题组殚的基因定位数据作统计学处理.结果:两群均在HLA区域尤其是D6S276附近存在连锁遗传标记;除HLA区域外,中国人群在D3S1292(3q)、D4S1535(4q)和D18S64(18q)处可能存在与AS相连锁的标记,而欧美人群在D1S255(1p)、D3S1300(3p)、D6S441(6q)、D9S1862(9q)、D11S4094(11q)、D16S515(16q)和D19S420(19q)等处存在与AS相连锁的标记.结论:中国人群与欧美人群在HLA区域肯定存在1个或1个以上易感基因或标记;此外,不同人群在非HLA区域的不同部位还存在多个AS易感基因或标记.总之,多个易感基因的协同作用是AS发生的遗传基础.

液相蛋白芯片与酶免疫法检测4种肿瘤标志物的比较

目的:建立液相蛋白芯片测定AFP、CEA、CA19-9、CA125等肿瘤标志物的方法,讨论其应用于临床检验的可行性.方法:分别用液相蛋白芯片法检测微粒子酶免分析法(MEIA)检测的阳性标本AFP 60例、CEA 42例、CA19-9 65例、CA125 50例及上述项目阴性样本33例.结果:液相蛋白芯片法检测的样品浓度范围比MEIA法的范围更大,在共同的样品浓度范围内,两者检测定性和定量结果基本是一致的.而液相蛋白芯片的方法可以同时进行多指标的检测,体现出高通量的概念,可以节省临床上检测的时间和人力需求.结论:液相蛋白芯片法检测肿瘤标志物,可应用于临床检测.

尿液红细胞荧光检查方法及其在肾病诊断中的应用

目的:建立免疫荧光方法对尿中红细胞膜进行荧光定位,以鉴别肾性与非肾性血尿.方法:以荧光标记兔抗人免疫球蛋白为抗体,采用直接免疫荧光染色法检测176例肾病患者和163例非肾病患者,观察尿中红细胞膜上荧光着色程度,从而建立红细胞荧光定位检查,用于肾病的鉴别诊断;同时作尿沉渣形态学对比检查.结果:用荧光标记的兔抗人Ig抗体(抗IgA、IgG、IgE、IgM抗体)分别对176例肾病组患者尿中红细胞膜上4种Ig抗体染色检查,总阳性率为97.2%(171/176);形态学检查总阳性率为64.2%(113/176);对163例非肾病患者尿中红细胞作Ig染色检查,总阳性率为1.2%(2/163).结论:直接免疫荧光染色法是在尿沉渣检查的基础上发展的一种新染色法,免疫荧光染色方法特异性强,是鉴别肾性与非肾性血尿的一种有价值的诊断方法.

脑梗死患者血浆神经元特异性烯醇酶的动态变化及意义

目的:探讨急性脑梗死患者血浆神经元特异性烯醇酶(neuron-specific enolase,NSE)的动态变化及预后意义.方法:选择急性脑梗死患者68例,分别于发病后3 d内(68例)、第7天(66例)、第14天(65例)和第30天(64例)采集血标本,应用酶联免疫吸附法测定血浆NSE水平,检测结果与35名正常对照者比较;并探讨脑梗死患者血浆NSE水平与脑梗死体积及临床神经功能改善的相关性.结果:脑梗死患者发病3 d内、第7天血浆NSE水平明显高于对照组,以3 d内变化尤著;预后不良组血浆NSE水平在3 d内(12例)、第7天(10例)、第14天(9例)各时间点均明显高于预后良好组(56例).66例脑梗死患者第7天的脑梗死体积与其发病3 d内、第7天血浆NSE水平呈正相关,相关系数分别为0.83、0.75(均P＜0.001).64例脑梗死患者第30天神经功能缺损评分减少值与3 d内、第7天血浆NSE水平呈负相关,相关系数分别为-0.41(P＜0.001)、-0.37(P＜0.01).结论:急性脑梗死患者早期血浆NSE水平明显升高,血浆NSE的动态变化可反映脑梗死的严重程度及其近期预后.

血清γ-谷氨酰转移酶同工酶测定在肝癌鉴别诊断中的意义

目的:建立免疫沉淀法测定血清中低密度脂蛋白(LDL)-极低密度脂蛋白(VLDL)-γ-谷氨酰转移酶(GGT)活性及用垂直板不连续梯度聚丙烯酰胺凝胶电泳分析GGT同工酶,观察其在肝癌鉴别诊断中的价值.方法:以载脂蛋白B(Apo B)抗体沉淀血清中与LDL及VLDL结合的GGT并测定其活性,同时用电泳法分析原发性肝癌、肝硬化、慢性肝炎患者及正常人血清GGT同工酶.结果:血清LDL-VLDL-GGT活性对肝癌的诊断敏感度可达86.2%,肝癌与肝硬化和慢性肝炎鉴别诊断的特异度分别为67.9%和81.3%;GGT同工酶Ⅱ在原发性肝癌患者血清中的阳性率为78.7%,胆石症、肝硬化、肝炎患者的GGT Ⅱ阳性率分别为15.4%、9.8%和6.4%,正常人为0%.结论:血清LDL-VLDL-GGT活性对鉴别肝癌与其他肝病具有重要意义;血清GGTⅡ是肝癌特异性的同工酶形式.

蛋白质组学及其临床应用

随着人类基因组计划的逐步完成,现已进入后基因组时代,即蛋白质组学(proteomics)时代[1].蛋白质组学研究在生命科学研究领域中具有举足轻重的战略地位,已应用于生命科学的许多领域.如在5年前提到蛋白质组学,恐怕知之者甚少,而在略知一二者中,部分人还抱有怀疑态度.但2001年的《Science》已把蛋白质组学列为6大研究热点之一,其"热度"仅次于干细胞研究,名列第二.蛋白质组学的受关注程度如今已令人刮目相看.

检验医学实践中科研思路的形成

科研设计是目前检验医学一个明显的薄弱环节,随着医学科学的发展和检验医学的确立,以往那种从属和被动局面应在我们努力之下予以改观.我们应站在主持和主动位置参与科研课题的设计和实施.为参与或主持设计,一些科研思路的建立必须掌握.为此,在多年的科研活动中,有关课题设计思路的一些个人经验体会简述如下,供同道参考.

重视心脏生物标志物临床应用

1954年,Ladue等发现谷草转氨酶(GOT,即现在的天冬氨酸转氨酶AST),在急性心肌梗死(AMI)时出现增高.这是第一个用于临床的心脏生物标志物,至今已整整50年.半个世纪以来,临床医学(包括临床心脏病学、急诊医学和临床检验医学等)研究人员在研究实践中不断探索,先后发现了许多有临床应用价值的心脏生物标志物.早先的心脏生物标志物以AST、乳酸脱氢酶(LDH)和心肌型肌酸激酶同工酶(CK-MB)等组成的"心肌酶谱"为主要代表,主要测定酶的活性,检测结果常以单位/升(U/L)表示.目前引起临床重视并得以广泛应用的心脏生物标志物则有心肌肌钙蛋白(cTn)、心脏利钠肽、超敏C反应蛋白(hs-CRP)等多种,测定的主要是各生物标志物的蛋白质量,检测结果多以微克/升(μg/L)或纳克/升(ng/L)表示.

新流式细胞分析技术在实验诊断中的应用

实验诊断主要是应用各种实验方法和技术检测人体中血液、体液、排泄物、分泌物及组织中各种细胞、代谢产物、结构成分,或者与感染病原体及其相关的成分等,为临床疾病的诊治、预防和研究等提供客观的实验依据.随着各种基础科学和应用学科飞速发展,各种新实验方法与技术的应用已成为促进临床实验诊断水平不断提高的重要推动力.

B型利钠肽在心脏疾病中的应用

在20世纪中叶,科学家开始把心脏作为一个具有内分泌功能的器官来研究.初,Kisch发现心房中存在具有内分泌功能的腺体颗粒.接着Henry和Pearce报道当犬科动物的左心房发生囊性扩张后,尿量会随之明显增多.通过25年研究,De Bold在1984年证实了心房利钠肽(ANP)的结构.1988年在猪的大脑中分离出一种与ANP作用相似的多肽--脑利钠肽[1],但进一步研究表明BNP的主要合成位点在心室,为了与ANP英文缩写相呼应,故又称为B型利钠肽(BNP).1990年科学家再次从猪脑中分离得到了C型利钠肽(CNP).

寰枢关节旋转稳定性的影像学研究进展

寰枢椎在整个脊柱结构中为复杂,为头颅与脊柱的移行部位,是完成头颅旋转及部分屈伸运动的重要结构.寰枢椎的畸形、损伤、炎症和肿瘤等可造成其正常解剖结构的异常,并因此而导致寰枢椎不稳,若处理不及时,随时可发生压迫脊髓的危险,甚至危及生命.故有作者把上颈椎不稳对脊髓存在的潜在危险,称之为"上颈椎危象".影像学检查能真实直观反映寰枢区正常解剖结构及病变所导致的结构关系改变,是临床上诊断寰枢区病变的主要依据之一.颈椎寰枢关节旋转性固定在文献上有不同的名称,如旋转性脱位(半脱位),旋转性畸形,单侧性寰枢关节半脱位等.1968年Wortzman等[1]定名为"寰枢关节旋转固定"(rotary fixation ofthe atlantoaxial joint),并指出本病显著特点是寰枢关节固定于正常旋转运动时可到达的位置,故此名称较为合适.国内外许多学者对此作了大量研究,起初以平片研究为主,研究方法各异,意见尚有分歧,随着CT和MRI技术的发展及推广应用,进一步提高了寰枢区影像诊断的敏感性和准确性.

蛋白质组研究技术及其在筛选肿瘤标志物中的应用

肿瘤标志物是细胞在特定疾病状态下的分子信号,是检测、诊断、治疗、监测肿瘤和判断肿瘤预后的重要工具.如何发现新的、具有高度特异度和灵敏度的肿瘤标志物多年来一直是肿瘤研究的热点之一[1-3].蛋白质和蛋白质组学研究的快速发展给肿瘤标志物研究注入了新的活力.蛋白质组一词由Wilkins于1994年首次提出,意指一种基因组或一种细胞所表达的全套蛋白质,近年迅速发展为一门新兴学科--蛋白质组学(proteomics),其含义主要包括3个方面:①表达蛋白质组学,研究细胞或组织中蛋白质表达的质和量的变化;②功能蛋白质组学,研究在不同生理和病理条件下细胞中各种蛋白质之间的相互作用关系及其调控网络等;③结构蛋白质组学,以阐明生物大分子的三维结构特性为目的[4,5].由于蛋白质组研究具有在整体水平上发掘和寻求潜在肿瘤标志物的能力,使其一经提出便受到肿瘤研究者的重视.

囊性纤维化的消化系统表现

囊性纤维化(cystic fibrosis,CF)是白种人常见的致命性遗传病,新生儿发病率为1/2 500～1/3 500,近年成人CF患病率正逐渐上升.随着CF诊断技术的改进和治疗水平的提高,CF患者的生存率已明显提高.

比较Ⅱ、Ⅲ导联ST段抬高幅度预测急性下壁心肌梗死罪犯血管

急性下壁心肌梗死的罪犯血管通常是右冠状动脉(RCA),少数为左回旋支(LCX).当RCA近段完全闭塞时,常并发高度房室传导阻滞和(或)休克等严重并发症,增加患者住院期病死率[1].因此,早期识别急性下壁心肌梗死的罪犯血管将有助于采取合理有效的治疗措施,预防严重并发症.本研究旨在评估Ⅱ、Ⅲ导联ST段抬高幅度比较在预测下壁心肌梗死的罪犯血管中的价值.

乳胶凝集法检测小儿急性胃肠炎粪便中轮状病毒抗原

轮状病毒是引起婴幼儿脱水性腹泻的重要病原体之一,世界范围内估计每年有9百万人发病,导致87 300人死亡,是发展中国家婴幼儿死亡的主要病因[1].因此快速、准确检测轮状病毒感染具有重要的临床意义.我们对2001年1月至2004年4月新华医院住院和门诊急性水样或蛋花样便腹泻患儿的粪便用乳胶凝集试验进行轮状病毒抗原检测,总结如下.

血清CA125联合组织多肽特异抗原检测在卵巢癌诊断中的意义

糖类抗原CA125是卵巢肿瘤细胞表面相关抗原,目前被认为是卵巢癌敏感的标志物[1],但还存在不少假阴性;组织多肽特异抗原(tissue polypeptide specific antigen,TPS)是一种反映细胞活性的标志物,TPS的水平与存活的细胞数有相关性.本文检测了112例卵巢良、恶性疾病患者血清中的CA125、TPS水平,以探讨其在卵巢癌诊断中的意义.

成年血液透析患者对重组乙型肝炎病毒疫苗的应答

慢性肾功能衰竭的患者与健康人群相比有更高的乙型肝炎病毒(HBV)感染率,作血液透析的上述患者的感染机会更多,而且感染率随透析时间而增高.HBV感染后常导致不同程度的肝脏损害,从而增加了医疗费用,也影响肾移植的成功.一些国家已经建议对透析患者进行乙型肝炎(乙肝)疫苗的预防性接种[1～3].

富含巨细胞的骨肉瘤放射-病理讨论

病例男,13岁,江苏人.左侧膝部疼痛5个月.左膝关节正侧位片显示左胫骨近侧干骺端破坏性病变(图1).在当地医院行病灶刮除和异体骨植入术,病理诊断为巨细胞瘤.术后疼痛加剧,并出现软组组织肿胀.3个月后再摄左膝关节正侧位片示左胫骨上端病变的范围更大、骨质破坏和骨皮质中断更明显,并出现软组织肿块(图2),转我院诊治.

2004年美国临床生化科学院心肌生化标志物应用指南(草案)介绍

1998年,美国临床生化科学院(NACB)提出了心肌标志物在急性冠脉综合征(ACS)诊治中的应用准则和建议[1],并将建议划分为3级.NACB的建议在ACS诊断和预后判断等临床实践中发挥了重要作用.随着心肌标志物的研究和临床应用的深入,2004年NACB起草了"急性冠脉综合征和心衰生化标志物的实验室医学实践指南",对原来的准则进行了修正和补充,并在原有建议分级的基础上,进一步对事实型依据的可靠性分为A、B、C 3层(表1).本文对该指南作综合介绍.

免疫学测定的发展趋势和关注热点

免疫学测定(immunoassay)是利用抗原抗体反应产生免疫复合物的原理分析体内微量(或超微量)活性物质的一种手段.从20世纪50年代美国学者Berson和Yallow发明了放射免疫测定技术检测胰岛素起,免疫学测定技术在过去的几十年里得到了长足的发展.目前免疫学测定已扩展并渗入到临床医学实验的各个专业,如血液学、微生物学、毒理学等.人们已很难在实验室内把免疫学测定与其他专业分开.

2004年诊断学理论与实践杂志函授继续医学教育--急诊症状诊断与鉴别诊断试题答案

2004年诊断学理论与实践杂志函授继续医学教育--卫生经济学评价试题答案