中国病原生物学杂志
Journal of Parasitic Biology 중국병원생물학잡지
- 主管单位： 中国寄生虫病防治杂志
- 主办单位： 中华人民共和国卫生部
- 影响因子： 1.21
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 11-5457/R
- 国内刊号： 王利磊
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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志贺菌喹诺酮类耐药株gyrA和parC基因突变研究
目的 检测志贺菌对喹诺酮类药的耐药情况,指导临床合理用药:探讨志贺菌喹诺酮类耐药株gyrA和parC基因的突变,分析GyrA和ParC氨基酸改变与喹诺酮类耐药的关系. 方法 2010～2012年从宿州市3家综合性医院收集志贺菌76株,进行分离培养和血清型鉴定;采用K-B纸片法进行药物敏感试验;采用PCR方法检测志贺菌喹诺酮耐药决定区(QRDR)相关gyrA和parC基因1,并挑选部分PCR产物进行DNA测序分析. 结果 收集的76株志贺菌中福氏志贺菌74株(占97.4％),宋内志贺菌2株(占2.6％);药敏结果显示志贺菌耐药情况严重,其中对阿莫西林耐药率高,达100％;对头孢噻肟耐药率低,为6.5％.对gyrA基因的序列分析发现3个导致氨基酸改变的基因点突变:Ser83→Leu,Asp87→Gly及His211→Tyr;对pa rC基因序列分析发现2个导致氨基酸改变的基因点突变:parC Ser80→Ile和Asp197→Asn. 结论 宿州市志贺菌感染仍以福氏志贺菌为优势菌群,且耐药严重,临床治疗志贺菌感染可优先选择头孢噻肟.志贺菌属对喹诺酮类药物产生耐药性与gyrA和parC基因突变有关,GyrA His211→ Tyr和ParCAsp197→Asn氨基酸变异与喹诺酮类耐药的关系需进一步研究.
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耶氏肺孢子菌主要表面糖蛋白合成及人群IgG抗体调查
目的 原核表达耶氏肺孢子菌(Pneumocystis jirovecii,Pj)主要表面糖蛋白(major surface glycoprotein,Msg)氨基端片段,获得可溶性Pj重组Msg抗原(recombinant Msg,rMsg),利用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测266例成年人外周血抗Pj rMsg IgG抗体. 方法 从耶氏肺孢子菌感染者的痰液获得Pj DNA,构建表达载体pGEX-3X-Pj Msg,转化感受态大肠埃希菌DE3,用异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导表达.利用谷胱甘肽转移酶(GST)标签进行亲和纯化,对纯化Pj rMsg抗原进行鉴定并建立ELISA方法,检测266例成年人外周血抗Pj rMsg IgG抗体. 结果 成功构建了表达质粒pGEX-3X-Pj Msg,并诱导表达分子质量单位约39 ku的可溶性Pj rMsg蛋白,产量为13 mg/500ml菌液,以此为抗原,采用ELISA检测266例成年人外周血抗Pj rMsg IgG抗体,阳性率为42.5％(113/266).其中男、女性患者阳性率分别为43.3％(58/134)和41.7％(55/132),差异无统计学意义(x2=o.071,P＞0.05);20～29岁、30～39岁、40～50岁组阳性率分别为31.8％(27/85)、48.3(42/87)和46.8％(44/94),差异无统计学意义(x2=5.911,P＞0.05). 结论 成功表达了可溶性Pj rMsg抗原,Pj rMsg-ELISA检测结果表明北京地区成人耶氏肺孢子菌感染率较高.
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一株引起病毒性脑炎的柯萨奇B3病毒的生物学特性分析
目的 通过分析分离自病毒性脑炎病人的一株柯萨奇病毒B3株KMA103-09生物学特性,研究其致病机理.方法 将KMA103-09病毒分别按一定量接种至KMB17细胞、RD细胞、VERO细胞、Hep-2细胞、Hela细胞及MRC-5细胞进行培养,观察细胞的生长情况,并采用微滴法检测病毒在不同时间、不同细胞中的病毒感染滴度;将一定量KMA103-09病毒注射乳鼠和成鼠脑内,观察病毒的致病性,并检查鼠血清中IL-2、IL-4、IL-6、IFN-r、TNF、IL-17A、IL-10含量. 结果 该病毒株在6种细胞上皆能适应生长,并产生明显的细胞病变效应.病毒在Hela细胞上生长繁殖快,42 h时细胞全部发生病变,感染性滴度达8.625 lgCCID50/ml;在MRC-5细胞上病毒的感染性滴度低,120 h才全部发生病变,感染性滴度为5.50 lgCCID50/ml.该病毒对一日龄乳鼠致死并在脑、肺和心脏等组织产生病理改变,实验乳鼠血清IL-6、IL-10、TNF含量分别为4.71pg/ml、21.08 pg/ml和36.79 pg/ml,与阴性对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05),其余4种皆无表达.该病毒对成鼠不致病,脑、肺、心脏病理检查无异常. 结论 KMA103-09病毒在Hela细胞生长适应性良好,对乳鼠致病而对成鼠不致病.
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柔嫩艾美尔球虫病毒RDRP部分序列的克隆及原核表达
目的 构建柔嫩艾美尔球虫病毒RNA依赖RNA聚合酶(RDRP)蛋白部分Ⅸ段的原核表达重组质粒,并在大肠埃希菌中表达目的蛋白. 方法 根据柔嫩艾美尔球虫病毒RDRP基因序列设计引物,以病毒基因组dsRNA为模板,RT-PCR扩增目的片段;扩增产物与pMD-18T克隆载体相连接,经测序鉴定序列正确后,将该质粒酶切,酶切目的片段与原核表达载体pET-28a连接构建原核表达质粒,转化入Transetta(DE3)中,经IPTG诱导表达重组蛋白,用SDSPAGE和Western blot分析目的蛋白表达. 结果 成功克隆柔嫩艾美尔球虫病毒RDRP基因部分序列,其长度为1 330 bp,DNA测序表明重组原核表达质粒构建成功,推导的编码氨基酸序列与GenBank中布氏艾美尔球虫病毒RDRP氨基酸序列同源区段同源性为36％.经SDS-PAGE和Western blot分析,柔嫩艾美尔球虫病毒部分RDRP蛋白得到表达,表达蛋白的分子质量单位为52 ku,与理论值相符,且该重组蛋白可被His标签单克隆抗体识别. 结论 构建的重组原核表达载体pET 28a-RDRP在大肠埃希菌中高效表达柔嫩艾美尔球虫病毒RDRP蛋白部分区段,为进一步研究该病毒奠定了基础.
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C9orf47-1重组蛋白的克隆表达及其对HepG2细胞周期的调控作用
目的 克隆表达C9orf47 1蛋白,探索其可能的生物学功能. 方法 构建C9orf47-1原核表达载体,转化BL21,IPTG诱导目的蛋白表达;纯化目的蛋白,制备兔源多克隆抗体;采用生物信息学软件对C9orf47 1蛋白进行生物信息学分析;采用Western blot检测其在HepG2、L02、LX2和Jurkat细胞系的表达情况,及重组蛋白对HepG2细胞内质网应激的影响;采用流式细胞术检测其对HepG2细胞周期的影响. 结果 PCR扩增获得序列完全正确的C9orf47-1基因片段,构建的C9orf47-1原核表达载体能在大肠埃希菌中以包涵体的形式表达C9orf47-1重组蛋白;重组蛋白经Ni NTA纯化后免疫大耳白兔,获得的多克隆抗体效价高达1∶640 000,并识别C9orf47-1蛋白;C9orf47-1蛋白在4种细胞系中均有表达,其中在HepG2和Jurkat中的表达量高于L02和LX2;重组蛋白未引起HepG2细胞的内质网应激,但可引起细胞周期的变化:延长G1、G2期,缩短S期(P＜0.05). 结论 C9orf47-1重组蛋白具有抗原性,该蛋白对肝细胞周期(G2/S)有一定的阻滞作用.
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双氢青蒿素对C2株蓝氏贾第鞭毛虫Centrin基因mRNA表达水平的影响
目的 分析双氢青蒿素(dihydroartemisinin,DHA)对体外C2株蓝氏贾第鞭毛虫(Giardia lamblia)中心体蛋白(Centrin)基因mRNA表达水平的影响,探讨其对蓝氏贾第鞭毛虫的抑制作用. 方法 采用改良型TYI-S-33培养基培养C2株蓝氏贾第鞭毛虫,培养基内分别加入浓度为100 μg/ml、200 μg/ml的双氢青蒿素,以不含药物组作为阴性对照,分别培养2、4、8、12h后,收集各组虫体并提取总RNA,以此为模板,反转录合成cDNA,采用实时荧光定量RT-PCR检测药物作用后Centrin基因mRNA表达水平的相对变化量. 结果 实时荧光定量RT-PCR检测显示,经双氢青蒿素作用虫体后Centrin基因mRNA表达水平显著降低,培养2、4、8、12 h后100 μg/ml药物组Centrin基因mRNA相对表达量分别为0.46、0.43、0.35和0.27,200 μg/ml药物组分别为0.42、0.38、0.29和0.25. 结论 双氢青蒿素对C2株蓝氏贾第鞭毛虫Centrin基因mRNA的表达具有明显的抑制作用,且抑制作用随着药物浓度的增高和作用时间的延长而增强,提示双氢青蒿素对蓝氏贾第鞭毛虫具有明显的损伤作用,可供蓝氏贾第鞭毛虫病防治参考.
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金黄色葡萄球菌肠毒素SEC3抑制剂的筛选及活性鉴定
目的 从噬菌体随机12肽库中筛选出金黄色葡萄球菌SEC3抑制剂并鉴定其活性. 方法 用纯化的重组的金黄色葡萄球菌SEC3包被酶标板,按吸附-洗脱-扩增的淘洗过程对噬菌体随机12肽库进行3轮筛选;用竞争ELISA法观察单个噬菌体克隆的竞争抑制效应,评价其活性. 结果 噬菌体3轮筛选的投入产出比逐轮升高,回收率从4.5×101升高至6.3×10-4,升高140倍,提示具有良好的富集效果;与阴性对照(未加噬菌体)相比,随机挑选的8个噬菌体克隆(A1～A8)竞争抑制率为10.6％～38.3％,差异有统计学意义(t值为9.0～23.5,P＜0.05),其中A1平均竞争抑制率高,为(30.5±7.4)％,A5的平均竞争抑制率小,为(16.4±4.7)％.以噬菌体滴度对数值为x轴,以克隆噬菌体各滴度对应的平均竞争抑制率为y轴,绘制竞争抑制曲线,其回归方程为Y=2.7943X-4.7733,相关系数r=0.935,决定系数R2 =0.8727.在噬菌体滴度在108～1012 pfu范围内,随着噬菌体滴度的增高,其抑制率也增高,且克隆噬菌体滴度在1011 pf或1012 pfu的竞争抑制率高. 结论 用纯化的SEC3从噬菌体随机12肽库中筛选的SEC3抑制剂具有一定的竞争抑制活性,而且竞争抑制活性随着噬菌体滴度的增高而增强.
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不同感染来源疟原虫虫株的18S sRNA基因同源性分析
目的 分析云南省不同感染来源疟原虫株的遗传差异. 方法 采集不同地区疟疾患者的血样,利用巢式PCR扩增疟原虫18S sRNA基因,扩增产物进行双向测序分析,以分子进化树描述18S sRNA基因序列的同源程度.结果 对2012年8月～2013年8月期间诊断为云南当地感染的全部疟疾患者22例及感染地为缅甸、非洲、老挝的13例疟疾患者血样进行18S sRNA基因巢式PCR扩增,8份检出恶性疟原虫目的基因片段(205 bp)、35份检出间日疟原虫目标片段(120 bp).对43份PCR扩增阳性产物进行测序分析,其中8株恶性疟原虫的18S sRNA基因进化树显示属云南本地感染的虫株与非洲虫株分布在不同亚支,但均与鸡疟原虫(P lasmodiumgallinaceum)(Accession:M61723)遗传进化关系较近;35株间日疟原虫的18S sRNA基因进化树显示所有虫株均集中在一个进化分支内,与食蟹猴疟原虫(P.cynomolgi)(Accession:L07559)遗传关系较近,89％的云南本地感染虫株与南美两个虫株(Accession:X13926、U03079)同在一个进化亚支. 结论 恶性疟原虫不同地理株的18S sRNA基因序列差异性较间日疟原虫株间的差异性更明显.
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应用酵母双杂交技术筛选与pGBKT7-CT813编码产物相互作用蛋白的研究
目的 以pGBKT7-CT813作为诱饵质粒与HeLa细胞酵母GAL4 AD融合cDNA文库进行酵母双杂交试验,以进一步探讨沙眼衣原体包涵体膜蛋白的生物学功能. 方法 根据STD基因库提供信息设计引物,用PCR法获取目的基因片段CT813,经酶切处理的CT813和pGBKT7质粒,在T4连接酶作用下连接,连接产物转入感受态细胞BL21,培养后进行菌落PCR验证,对阳性质粒进行测序分析.质粒转化入酵母菌株Y187和AH109中,检测其有无自激活及毒性作用.阳性重组酵母菌株AH109与cDNA文库菌株Y187进行配合,待三叶草(或米奇)形状合子形成后涂布于腺嘌呤、组氨酸、亮氨酸、色氨酸缺陷型培养基和铺有X-Gal的SD/-Ade/-His/-Leu/-Trp平板上初筛,再经过2次筛选,收集阳性菌落.将阳性菌液点种在滤纸上,在液氮中反复冻融2次,然后浸泡在Z缓冲液-β巯基乙醇-X-Gal混合液中室温温育8h.对筛选出的显色阳性菌液进行PCR验证.选取22个PCR阳性菌液提取酵母质粒,将22个质粒再转入感受态细胞E.coli,BL-21,对阳性菌落提取质粒,进行回交试验,对验证阳性的菌落对应的质粒进行测序. 结果 成功构建了pGBKT7-CT813诱饵质粒,该质粒的表达产物对AH109和Y187均无自激活和毒性作用.将回交试验筛选的阳性菌落对应的质粒进行测序,对测序结果做BLAST检索分析,确定筛选出与pGBKT7-CT813特异性相互作用的基因可能编码的蛋白是:半乳糖凝集素-1(LGALS1)、环腺苷酸应答原件结合蛋白3(CREB3)、核糖体核糖体蛋白L10a(RPL10a)和微管蛋白37E-16(RP1-37E16). 结论 筛选出的4种蛋白可能与沙眼衣原体的致病机制相关,但仍需要进一步验证.pGBKT7-CT813编码产物与多种蛋白有相互作用,为进一步研究其生物学功能打下了基础.
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2011年龙岩市流行株柯萨奇病毒A组16型VP1基因特征分析
目的 分析2011年龙岩市流行的柯萨奇病毒A组16(CVA16)分离株的分子生物学特征. 方法 对从龙岩市2011年散发的手足口病(HFMD)患者标本中分离CVA16病毒,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增VP1基因片段全长,并对扩增产物测序.根据VP1基因核苷酸序列与国内外其他CVA16毒株序列构建进化树,并进行核苷酸和氨基酸同源性分析. 结果 4株龙岩分离株CVA16核苷酸同源性为99％～100％.比较推导的氨基酸序列,VP1不存在位点差异,氨基酸序列完全相同.对分离株病毒进行VP1核苷酸序列两两差异分析,与国内其他分离株VP1基因序列的一致性为87％～100％.确定4株CVA16病毒均属于B1b基因型. 结论 引起2011年龙岩市HFMD流行的CVA16病毒均为B1b基因型,与日前国内其他地区流行毒株高度同源.
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大理地区结核分枝杆菌MIRU-VNTR位点的多态性分析
目的 了解大理地区结核分枝杆菌基因组中的数目可变串联重复序列(variable number tandem repeat,VN-TR)即MIRU(mycobacterium interspersed repetitive unit)基因多态性,探讨MIRU-VNTR位点多态性的应用价值.方法 采用PCR和琼脂糖凝胶电泳检测大理地区临床分离的60株结核分枝杆菌7个VNTR位点,采用MIRU-VNTR技术进行分型,利用Hunter-Gaston指数(HGI)对各MIRU进行分辨力评价,并应用Quantity one软件和BioNumerics6.6软件进行数字化和聚类分析. 结果 60株结核分枝杆菌分为5个基因群(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ群)52个基因型.Ⅰ群占56.77％,含有29个基因型;Ⅱ群占25.00％,含有13个基因型;Ⅲ群占8.33％,含有5个基因型;Ⅳ群占6.67％,含有3个基因型;V群占3.33％,含有2个基因型.7位点组合总分辨力为0.900,高ETR-E位点0.735,低ETR-C位点0.455. 结论 大理地区分离株结核分枝杆菌存在基因多态性,7位点MIRU-VNTR分型简便快速,分辨力高,适合用于大理地区结核分枝杆菌的基因分型检测.
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利奈唑胺体外诱导粪肠球菌耐药株23S rRNA Ⅴ区基因突变位点分析
目的 阐明体外诱导利奈唑胺耐药粪肠球菌的核糖体23S rRNA Ⅴ区基因位点变异特征. 方法 收集1株血流感染的粪肠球菌和1株粪肠球菌质控菌ATCC29212(编号分别为F3和F4菌株,均为利奈唑胺敏感株),通过体外浓度倍增法诱导利奈唑胺耐药;挑取单克隆,经E-test条测定MIC值,获得各菌株的耐药浓度梯度;提取耐药菌株基因组DNA,PCR扩增23S rRNA Ⅴ区基因,扩增产物经测序后与野生株比较,获得Ⅴ区的突变位点. 结果 经体外多步法诱导利奈唑胺耐药的不同MIC值粪肠球菌共13株.PCR测序分析2株母株均无变异位点,23S rRNA Ⅴ区的突变位点主要是G2576U,此外还有T2504A、G2505A、C2610A、C2424U. 结论 体外多步法可诱导粪肠球菌利奈唑胺耐药,耐药机制与23S rRNA Ⅴ区位点突变密切相关,突变位点随着MIC值的增高而增多.
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检测肺孢子菌巢式PCR方法的建立及其敏感性和特异性研究
目的 建立检测肺孢子菌基因的特异性mtLSU巢式PCR方法,研究其在实验动物肺孢子菌感染模型的检测效果及其敏感性和特异性,以期为临床提供检测肺孢子菌定植或感染的新方法. 方法 依据肺孢子菌线粒体大亚基保守序列设计巢式PCR内、外引物,建立并优化检测肺孢子菌基因的巢式PCR体系.以免疫抑制诱导肺孢子菌感染大鼠模型为检测对象,比较mtLSU巢式PCR与六亚甲基四胺银(GMS)染色法检测肺孢子菌的阳性率及符合率.对阳性标本进行DNA纯化,构建分子克隆,采用倍比稀释法检测mtLSU巢式PCR的敏感性;以呼吸道感染常见的8种病原体(光滑假丝酵母菌、近平滑假丝酵母菌、热带假丝酵母菌、白色念珠菌、克柔假丝酵母菌、溶血性链球菌、金黄色葡萄球菌、支原体)为对照,检测方法的特异性. 结果 肺印片GMS染色镜检实验组大鼠,14只查到肺孢子菌包囊,检出率为70.0％(14/20),对照组检出率为0(0/20).用mtLSU巢式PCR均能检测实验组大鼠肺孢子菌基因,阳性率为100％(20/20),对照组均为阴性.mtLSU巢式PCR法阳性率与GMS染色法比较差异有统计学意义(P＜0.05).敏感性检验结果表明,mtLSU巢式PCR检测小量为366 fg的肺孢子菌基因.特异性检测显示,其他8种呼吸道常见病原体的mtLSU巢式PCR的扩增结果均为阴性. 结论 成功建立了检测肺孢子菌基因的mtLSU巢式PCR方法,动物模型检测结果表明该方法的敏感性高、特异性强,有望应用于临床患者标本中肺孢子菌的基因检测.
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汉坦病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立
目的 通过建立汉坦病毒实时荧光定量PCR检测方法,快速准确地检测汉坦病毒. 方法 根据汉滩型和汉城型汉坦病S片段基因的序列分别设计特异性探针引物,使用含有目的基因片段的重组质粒标准品绘制标准曲线,建立检测两型汉坦病毒的实时荧光定量PCR方法. 结果 建立的检测方法特异性良好,与其他常见病原不发生交叉反应;低检测限为101 copies/μl,灵敏度高;不同梯度定量模板的拷贝数的对数值与Ct值之间线性关系表达式分别为y=-3.4607x+40.988(HTN),y=-3.5307x+39.356(SEO),扩增效率分别为92.2％(HTN)和92.6％(SEO),相关系数R2分别为0.9968(HTN)和0.9997(SEO),呈良好的线性关系,且重复性好. 结论 建立的实时荧光定量PCR灵敏度高,重复性好,可用于汉坦病毒的快速检测,并可初步辨别汉滩型和汉城型汉坦病毒,对肾综合征出血热的病原早期诊断和流行病学调查有较好的应用价值.
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耐药结核分枝杆菌PhoPR双组分系统基因表达的研究
目的 比较结核分枝杆菌(Mycobacteriumtuberculosis,MTB)原始耐药菌株与经过含不同浓度培养基培养后的菌株中PhoPR双组分系统基因表达水平的差异,研究MTB PhoPR双组分系统与MTB耐药的相关性. 方法 分别在原始状态下和用低浓度含药培养基及高浓度含药培养基培养单纯耐异烟肼MTB临床分离株(INH-MTB)、单纯耐利福平的MTB临床分离株(RFP-MTB)、单纯耐链霉素MTB临床分离株(SM-MTB)、单纯耐乙胺丁醇的MTB临床分离株(EB-MTB)、耐多药MTB临床分离株(MDR)养至对数期,提取各组MTB总RNA,并进行纯度鉴定;运用SYBRGreen Ⅰ实时荧光定量PCR,检测各组MTB的PhoP基因和PhoR基因的表达,比较不同耐药的MTB临床分离株PhoP基因和PhoR基因表达水平的差异. 结果 在低浓度抗结核药物条件下培养的INH-MTB、RFP-MTB、SM-MTB和MDR组MTB与原始状态下MTB相比,PhoP基因表达分别上调2.19、2.04、1.72、2.73倍,PhoR基因分别上调1.57、2.57、1.56和2.83倍,差异有统计学意义(P＜0.05);在高浓度抗结核药物条件下培养,INH-MTB、RFP-MTB、SM-MTB、EB-MTB和MDR组MTB中的PhoP基因表达分别上调1.79、1.44、2.10、1.27和1.97倍,PhoR基因在INH-MTB、RFP-MTB、SM-MTB和MDR组MTB分别上调1.05、1.91、1.76和2.13倍,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 PhoP和PhoR基因的差异表达与MTB的耐药性相关,提示PhoPR双组分系统与MTB耐药具有相关性.
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2009～2013年齐齐哈尔市粪肠球菌基因序列进化研究及耐药性分析
目的 研究化脓性胆管炎患者胆汁培养粪肠球菌基因序列,分析其对6种氟喹诺酮类药物的耐药性. 方法 对2009～2013年齐齐哈尔医学院附属三院ERCP治疗的化脓性胆管炎患者胆汁标本分离的60株粪肠球菌进行基因序列分析,并利用琼脂稀释法检测分离菌对6种氟喹诺酮类药物(FQs)的MIC50,MIC90和耐药率. 结果 本组粪肠球菌对6种氟喹诺酮类药物耐药率分别为:莫西沙星1 5.0％,加替沙星18.3％,左氧氟沙星25.0％,氧氟沙星和环丙沙星均为35.0％,诺氟沙星48.3％.粪肠球菌耐药株中的gyrA在喹诺酮类药物耐药决定区的第83位和87位氨基酸发生突变,分别为S83I,E87G.parC第80位氨基酸发生突变S80I,产生对氟喹诺酮类药物耐药. 结论 莫西沙星和加替沙星对粪肠球菌具有良好的抑制作用,但由于部分粪肠球菌菌株基因已发生突变,其耐药性还需进一步观察,同时还需开发更有效的具有抑制此类细菌DNA促旋酶和拓扑异构酶Ⅳ的氟喹诺酮类药物.
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猪带绦虫重组Bb(pGEX-TSO45W-4B-TSOL18)疫苗的构建及鉴定
目的 构建和鉴定猪带绦虫重组双歧杆菌(Bb)(pGEX-TSO45W-4B-TSOL18)疫苗. 方法 用疏水甘氨酸接头连接TSO45W-4B和TSOL18编码基因,通过全基因合成方法合成猪带绦虫TSO45W-4B-TSOL18融合基因.将该融合基因定向克隆到大肠埃希菌-双歧杆菌穿梭表达载体pGEX-1 λT中,构建重组质粒pGEX-TSO45W-4B-TSOL18.电穿孔法将该质粒导入Bb,构建猪带绦虫重组Bb(pGEX-TSO45W-4B-TSOL18)疫苗,从具有氨苄青霉素抗性的rBb中抽提质粒进行酶切、PCR和测序鉴定. 结果 全基因合成789 bp的TSO45W-4B-TSOL18融合基因片段.从具有氨苄青霉素抗性的rBb中抽提质粒pGEX-TSO45W-4B-TSOL18,经BamH Ⅰ和EcoR Ⅰ双酶切得到4 944 bp的pGEX-1λT载体片段和789bp的TSO45W-4B-TSOL18融合基因片段,与预期结果相符;以该重组质粒为模板进行PCR扩增得到789 bp的TSO45W-4B-TSOL18融合基因片段,经测序基因片段为789 bp,与预期大小相符. 结论 成功构建了猪带绦虫重组Bb(pGEX-TSO45W-4B-TSOL18)疫苗,为该疫苗的表达及免疫原性研究奠定了基础.
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棘球蚴病流行预测中的影响因素研究
棘球蚴病是由棘球绦虫引起的一种严重危害人类健康和畜牧业发展的人兽共患寄生虫病,在世界范围内是一个重要的公共卫生和经济问题.棘球蚴病的流行受到多种因素的影响.本文从自然环境、生物宿主和社会三个方面概述了应用于棘球蚴病流行预测中的影响因素.
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调节性B细胞在感染免疫中的作用研究进展
B细胞主要通过呈递抗原和产生抗体发挥免疫调节作用.近年来研究发现部分B细胞具有调节功能,这部分B细胞被命名为调节性B细胞(regulatory B cells,Bregs).Bregs可通过产生白细胞介素10(IL-10)和(或)转化生长因子β1(TGF-β1)等抑制性细胞因子介导免疫耐受,抑制过度炎症反应,加快炎症的恢复.相关研究表明Bregs在寄生虫、细菌、病毒感染中发挥重要作用.本文综述了Bregs的生物学特征、功能、微信号调节及其在感染性疾病中所发挥的作用机制及相关研究进展.
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2010年广西流动人口疟疾监测结果分析
目的 分析2010年广西流动人口疟疾发病情况,为制订防治策略提供依据. 方法 收集2010年广西流动人口疟疾监测数据进行统计、分析. 结果 2010年广西共报告疟疾病例66例,均为输人性病例;血检流动人口58 547人次,检出疟原虫阳性62例,临床诊断4例;流动人口发热病人血检45 435人,阳性61例,阳性率0.14％;外出返乡人员疟疾病例占总数的80.30％,其中到非洲、东南亚国家感染病例占87.88％. 结论 外出非洲、东南亚务工返乡的流动人口已成为广西疟疾病例的主要来源.
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烧伤患者创面感染金黄色葡萄球菌分离株耐药性及流行病学分析
目的 对河北地区烧伤患者创面分离的120株金黄色葡萄球菌进行mecA和SCCmec检测分析MRSA耐药机制,为临床合理用药提供依据. 方法 在2009～2013年收治的烧伤患者创面中分离的120株金黄色葡萄球菌,采用头孢西丁纸片法进行MRSA筛选,对mecA基因,SCCmec和spa基因进行PCR扩增以及分型. 结果 120株金黄色葡萄球菌中有74株为MRSA,占61.7％.药敏试验显示,MRSA对16种临床常见抗生素耐药率,超过85％的有7种,依次为苯唑西林(98.6％),青霉素(96.0％),环丙沙星(94.6％),阿莫西林和头孢唑林(89.2％),亚胺培南(87.8％),庆大霉素(85.1％),另有1株对万古霉素耐药. 结论 本组金黄色葡萄球菌MRSA检出率较高,并表现出较高的耐药性.MRSA具有的多重耐药性mecA基因密切关系.
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FGFR2在食管癌组织中的表达及临床意义
目的 通过检测FGFR2蛋白在食管癌组织中的表达,揭示FGFR2蛋白在食管癌发生、发展、侵袭、转移过程中的作用和意义. 方法 收集济宁市第一人民医院2011年1月～2013年3月133例患者手术切除的食管癌组织(均为鳞状细胞癌术前未行化放疗).患者中男性71例,女性62例,患者平均年龄61.4岁.应用免疫组化技术检测分析FG-FR2蛋白在食管癌组织中的表达及其与食管癌临床病理特征的关系. 结果 FGFR2在食管癌组织中的阳性率为45.11％(60/130),正常食管组织为12.5％(5/40),差异有统计学意义(P＜0.05). FGFR2蛋白表达与患者性别、食管癌分化程度、浸润深度及淋巴结转移等相关(P＜0.05),而与年龄、肿块类型无显著相关性(P＞0.05). 结论 相比正常食管组织,FGFR2在食管癌中高表达,其表达水平与食管癌的浸润深度及淋巴结转移呈正相关,与食管癌分化程度呈负相关.
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科研作为医学生第二课堂教学的实践
为了适应国家建设和发展的需要,培养创新能力强的高素质医学人才,作者在医学本科生中开展了科研作为第二课堂教学的活动.从建立科研小组、课题申报、项目实施、结题报告及论文撰写、论文的口头报告等全过程对医学生进行训练,使医学生学到了第一课堂不能学到的东西,学生的素质得到全面提高.因此,科研是培养医学生的创新精神、提高综合素质的有效途径.
| 年 | 期数 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 |
| 2017 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2013 | 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2011 | 01 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2010 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2009 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2008 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2007 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2006 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2005 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2004 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2003 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2002 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2001 | 01 02 03 04 |
| 2000 | 01 02 03 04 |
