后外侧小切口金属对金属大头THA与常规THA的比较研究

目的:比较经后外侧小切口行大头金属-金属(Large diameter metal on metal,L-MoM)全髋置换术(Total hip arthroplas-ty,THA)与常规金属-聚乙稀假体(Metal on poly ethylene,MoPE)THA的临床疗效.方法:2005年1月～2007年12月经后外侧小切口行L MoM THA 20例(22髋)、常规THA 20例(22髋).比较两者的切口长度、手术时间、出血量、手术前后血红蛋白(Hemoglobin,Hb)减少量、切口疼痛程度、C-反应蛋白(C reactive protein,CRP)、血沉(Erythrocyte sedimentation rate,ESR)、大腿周径增加值、住院时间、术后并发症及假体的位置.结果:两组间切口长度、手术时间、出血量、手术前后Hb减少量、切口24 h视觉模拟评分(Visual analog scale,VAS)、CRP、ESR、大腿周径增加值、住院时间、术后并发症、及髋臼外展角、前倾角经统计学处理均无显著性差异(P＞0.05).结论:经后外侧小切口行L-MoM THA可取得与常规THA相似的临床疗效,但手术需要一定技巧.

剖宫产与自然分娩子宫复旧情况的比较

目的:探讨剖宫产术对子宫复旧的影响.方法:对650例剖宫产妇女于术后测量子宫底下降高度,计算宫底下降速度,观察恶露持续时间,行常规超声检查了解子宫复旧情况,并与同期自然分娩的580例妇女进比较.结果:产后5 d内宫底平均下降速度两组差异有统计学意义,自然分娩组子宫底下降速度快(P＜0.05);剖宫产组术后恶露42 d内消失者占61.8%.少于自然分娩组(92.4%);产后5、30、42 d B超测子宫三径之和,差异有显著性意义(P＜0.05);产后42 d剖宫产组、自然分娩组宫腔积液发生率分别为38.2%和7.6%,子宫复旧不良发生率分别为12.62%和8.62%,差异有显著性意义(P＜0.05).结论:剖官产术后子宫复旧有其自身的规律,但较自然分娩者子宫复旧速度慢,应严格掌握剖宫产指征,减少不必要的剖宫产.

原发性低颅压综合征的MRI及临床表现

目的:报告3例原发性低颅压综合征(Primany intracraial hypote nsion,PIH)的磁共振成像(Magnetic resonance imaging,MRI)及临床表现特点,提出其诊断要点及检查注意点.方法:回顾性分析3例原发性低颅压综合征患者的MRI及临床表现特征.结果:颅脑MRI示2例硬脑膜弥散性强化;1例小脑扁桃体下移位,桥前池、枕大池变窄.2例脊髓MRI示:多序列多方位上蛛网膜下腔均变窄,境界不清,分别位于T5～T7、T8～T9节段,表现为硬膜外条状、弧形脑积液信号影.腰穿结果提示:3例病人脑脊液压力均低于60 mmH2O.结论:体位性头痛是原发性低颅压综合征患者典型的临床表现,硬脑膜弥散性强化是常见的MRI表现,颅脑MRI增强扫描与常规脊髓MRI检查相结合有助于本病的诊断及病因的查找.

复发性腰椎间盘突出症再手术的临床疗效

目的:探讨后路减压,椎间cage融合,椎弓根钉内固定术治疗同间隙复发性腰椎间盘突出症(Recurrent lumbar disc herniation,RLDH)的临床疗效.方法:对51例采用上述术式治疗的RLDH进行回顾性的分析,根据术前及术后的JOA评分评价手术效果.结果:51例平均手术时间160min,平均出血量580ml.平均随访3年,手术前后JOA评分有显著性差异(P＜0.05),优良率为88%.结论:后路减压融合内固定术治疗同间隙的RLDH临床疗效满意.

儿童播散性脑脊髓炎60例临床分析

目的:分析儿童急性播散性脑脊髓炎(Acute disseminated encephalomyelitis,ADEM)的临床和实验室特点,以提高对本病认识及早期诊断治疗.方法:对2005年1月至2007年1月重庆医科大学附属儿童医院60例ADEM患儿的临床表现、辅助检查及治疗预后进行分析.结果:60例中有前驱上呼吸道感染史者49例,疫苗接种史2例,无明显诱因9例.患儿均呈急性或亚急性起病;首发症状表现为活动障碍、意识障碍、惊厥及阵发性头痛头晕.临床主要表现为脑型30例,脑脊髓型25例,脊髓型5例.脑脊液48例异常,47例行MRI检查的患儿中43例异常,表现为脑皮质下或脊髓T1加权像呈低混合信号,T2加权像呈不均质信号或高信号.皮质激素、丙种球蛋白治疗ADEM有效.结论:儿童ADEM临床表现多样,呈多部位损害MRI表现具有一定的特征性,对本病诊断有一定的价值.

心内直视术后多器官功能不全综合征的防治研究

目的:总结心内直视术后多器官功能不全综合征(Multiple organ dysfunction syndrome,MODS)病人的防治体会.方法:本研究对近10年来心内直视术后未预防组和预防组发生MODS患者的临床资料根据病情轻、中、重进行分层分析,并采取Man-tel-haenszel检验,对MODS的防治进行探讨.结果:未采取防治措施组与采取防治措施组,在轻度患者中无显著差异(Fisher's确切概率法,P=0.213 2,P＞0.05);在中、重度患者中,采用卡方检验(χ2=13.564 1,P=0.0002和x 2=33.5149,P＜0.001)均有显著性差异(χ2=49.2371,P＜0.05);合并3层做总的Mantel-haenszel检验表明(Cochran-Mantel-Haenszel卡方x 2=49.2371,P＜0.001),认为未预防组和预防组结果有差异显著.结论:术中良好的心肌保护、提高手术技巧、缩短主动脉阻断时间、加强呼吸循环及胃肠道管理、预防感染是防治MODS的关键因素.

胎儿心脏畸形的超声筛查和诊断模式的临床评估

目的:分析重庆医科大学附属第一医院产前诊断中心2005年2月至2008年12月胎儿心脏畸形诊断及漏诊情况,对我院目前的胎儿心脏超声筛查和诊断模式进行临床评估.方法:妊娠20～24周在我院行产科系统超声检查并在本院分娩的胎儿9 685例,随访胎儿预后.胎儿心脏超声筛查切面包括四腔心切面、左右心室流出道切面.胎儿心脏的超声诊断是在以上切面的基础上更多切面的检查.计算不同切面的敏感性和特异性.结果:9685例胎儿中,产前诊断胎儿心脏畸形46例,漏诊5例.四腔心切面诊断的敏感性为58.82%,特异性为99.98%.四腔心切面结合流出道切面的敏感性为86.27%,特异性为99.98%.结论:四腔心结合流出道切面对心脏畸形的宫内诊断有较高的敏感性和特异性,是诊断胎儿先天性心脏病的首选方法.目前的胎儿心脏畸形的筛查和诊断模式可较全面地了解胎儿心脏结构,发现异常率高.临床上切实可行,易于推广.

舒芬太尼与芬太尼用于婴幼儿漏斗胸矫正术麻醉的比较

目的:比较舒芬太尼和芬太尼在婴幼儿漏斗胸矫正术麻醉中对患儿血流动力学及术后苏醒质量的影响.方法:ASA Ⅰ～Ⅱ择期行先天性漏斗胸矫正术患儿40例,随机分为两组(n=20):舒芬太尼组(SF组)和芬太尼组(F组)分别以舒芬太尼、芬太尼静脉诱导及麻醉维持,两组均复合丙泊酚、维库溴铵.观测记录麻醉诱导前(T0)、气管插管即刻(T1)、切皮时(T2)、剥离肋软骨时(T3)及手术结束时(T4)各时点心率(HR)、动脉收缩压(SBP)、动脉舒张压(DBP)、平均动脉压(MAP),观察自主呼吸恢复时间、拔管时间与苏醒期躁动、术后呼吸抑制等不良反应.结果:与T0比较,F组T1-T3时SBP、DBP、MBP升高,HR增快(P＜0.05),SF组各时点差异无统计学意义;与SF组比较,F组T1～T3时SBP、DBP、MBP显著升高、HR明显增快(P＜0.05)SF组自主呼吸恢复时间、拔管时间均短于F组(P＜0.05);与F组比较,SF组患儿苏醒期躁动等并发症少.结论:与芬太尼复合麻醉相比,舒芬太尼对血流动力学和应激反应影响小,是婴幼儿漏斗胸矫正术中比较理想的麻醉选择.

老年男性排尿障碍的临床病因及尿流动力学分析及意义

目的:探讨老年男性排尿障碍的临床病因和尿流动力学检测的临床意义.方法:对老年男性排尿障碍患者304例,通过完整的病史资料和尿动力学结果进行临床病因诊断及尿动力学分析.结果:304例患者中,前列腺增生症患者186例(61%),其它男性泌尿生殖系统疾病21例(7%),非男性泌尿生殖系统疾病77例(25%).尿流动力学诊断:膀胱出口梗阻132例(43%),逼尿肌不稳定119例(39%),逼尿肌顺应性降低187例(61%),逼尿肌无力/受损77例(25%),逼尿肌-括约肌协同失调38例(12%).结论:男性老年排尿障碍的病因,有多系统、多种疾病原因,尿流动力学检查能有助于排尿障碍的进一步认识.临床病因与尿流动力学表现结合分析,才能对老年男性排尿障碍患者有较全面、准确的诊断,从而为良好治疗提供基础.

妊娠期糖耐量受损的妊娠结局临床分析

目的:探讨妊娠期糖耐量受损(Gestational impaired glucose tolerance,CIGT)对妊娠结局的影响.方法:选择2007年6月至2008年6月在我院门诊检查并住院分娩的71例GIGT的孕妇作为研究组,并随机选择同期在我院检查并分娩的50g葡萄糖负荷试验(Glucose challenge test,GCT)正常的孕妇71例为对照组,比较两组的妊娠结局.结果:两组剖宫产率、胎膜早破、胎儿畸形发生率、新生儿窒息率差异无统计学意义(P＞0.05).GIGT组妊娠期高血压疾病发生率、羊水过多、早产率、外阴阴道假丝酵母菌病(Vulvovaginal candidiasis,VVC)发病率、巨大儿发生率、新生儿低血糖率与对照组相比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论:GIGT对妊娠结局有不良影响.

旋转DSA技术在脑血管造影中的应用价值

目的:探讨旋转DSA技术在颅内动脉瘤诊断中的应用价值.方法:采用日本岛津1 250 mA CCD数字减影C臂X光机系统,对35例疑似颅内动脉瘤患者进行常规正侧位造影检查和旋转DSA检查,比较颅内动脉瘤的显示情况.结果:35例疑似患者中,经旋转DSA技术检出32例,且清晰显示瘤颈及载瘤血管与周围血管的关系;常规DSA检出27例,其中有9例动脉瘤的载瘤血管动脉与周围血管显示不清,6例瘤颈显示不清.结论:旋转DSA可清晰显示颅内动脉瘤瘤体、瘤颈及载瘤血管与周围血管关系,具有极高的临床应用价值.

星形胶质细胞钙调蛋白在损伤后胶质瘢痕形成中的作用

目的:探讨钙调蛋白对星形胶质细胞损伤后增生及胶质瘢痕形成的影响.方法:体外纯化培养星形胶质细胞,机械划痕法构建星形胶质细胞损伤模型,动态观察星形胶质细胞损伤前后钙离子浓度的变化,以及损伤后应用钙调蛋白抑制剂三氟拉嗪(Trifluoperazine dihydrochloride,TFP)处理,星形胶质细胞增生的主要标志物GFAP表达的变化.采用激光共聚焦观察细胞内游离钙离子浓度动态变化,免疫组织化学染色方法检测星形胶质细胞胶质纤维酸性蛋白(Glia fibrillary acidic protein,GFAP)表达量的变化.结果:星形胶质细胞损伤后细胞内钙离子浓度迅速上升,2 min后明显下降至接近基础水平.星形胶质细胞损伤后钙调蛋白抑制剂能够抑制星形胶质细胞GFAP蛋白表达量的增加.结论:星形胶质细胞损伤后钙离子浓度明显变化,激活细胞内钙离子信号传导并参与星形胶质细胞损伤后的增生反应,而钙调蛋白抑制剂三氟拉嗪对星形胶质细胞损伤后的增生反应有显著的抑制作用.

SDF-1/CXCR4与VEGF-C在喉癌中的表达及与淋巴结转移的关系

目的:探讨趋化因子受体(CXC chemokine receptor4,CXCR4)、血管内皮生长因子-C(Vascular endothelial growth factor C,VEGF-C)、基质细胞衍生因子-1(Stromalcell derived factor-1,SDF-1)在喉鳞状细胞癌及颈淋巴结组织中的表达及其在淋巴结转移过程中的作用和可能机制.方法:应用RT-PCR技术及免疫组织化学SP法检测10例癌旁正常组织、45例喉癌原发灶中CXCR4、VEGF-C和45例颈淋巴结组织中SDF-1表达的情况.结果:不论在mRNA还是蛋白水平,喉癌原发灶均表达较高水平的CXCR4与VEGF-C(78%、67%与78%、71%),与癌旁正常组织相比,差异有统计学意义;SDF-1在颈部淋巴结组织中呈高表达,在有癌细胞浸润组的表达率(100%)显著高于无癌细胞浸润组(30%).喉癌原发灶中CXCR4和VEGF-C表达呈正相关(P＜0.05);CXCR4和VEGF-C的表达与喉癌患者的TNM分期,分化高低及有无淋巴结转移有显著相关性(P＜0.05);SDF-1的表达则仅与患者有无淋巴结转移显著相关(P＜0.05);喉癌原发灶中CXCR4与淋巴结组织中SDF-1的表达经pearson相关分析结果显示,两者的表达水平呈显著负相关(r=-0.3309,P=0.0167).结论:SDF-1/CXCR4/VEGF-C在喉癌组织及转移淋巴结中高表达,并与喉癌淋巴转移显著相关,三者在喉癌的器官特异性转移中可能起协同作用,共同促进喉癌的淋巴转移.

参附注射液对腹腔感染脓毒症小鼠心肌能量代谢的保护作用研究

目的:观察腹腔感染脓毒症小鼠心肌能代谢情况,用参附注射液进行干预治疗,探讨参附注射液对其能量代谢的保护作用.方法:采用肓肠结扎穿孔法(Cecal ligation and puncture,CLP)复制腹腔感染脓毒症动物模型.83只小鼠随机分为CLP组(感染组)、CLP加参附注射液治疗组(治疗组)和假CLP组(对照组).于造模后6h、12 h及24h分别采用电镜和形态计量学方法观察心肌线粒体形态、数量和膜磷脂定位;酶细胞化学法分析线粒体细胞色素氧化酶(Cytochrome oxidase,CCO)和琥珀酸脱氢酶(Succinate dehydrogenase,SDH)活性,反相高效液相色谱法测定心肌组织ATP、ADP和AMP含量.结果:感染组小鼠心肌线粒体大破坏,膜磷脂严重缺失、定位改变;CCO和SDH活性降低,ATP、ADP和AMP含量下降.各时间点治疗组上述各项指标均较感染组显著改善.结论:脓毒症小鼠心肌线粒体结构严重破坏、功能明显下降,参附注射液能有效保护脓毒症小鼠心肌线粒体结构和功能,改善心肌能量代谢.

针对IER3IP1基因的shRNA真核表达

目的:构建特异性针对IER3IP1基因的shRNA(Short Hairpin RNA)的真核表达载体,观察对IER3IP1基因表达的沉默作用,筛选出抑制效果较好的干扰片段.方法:针对IER3IP1基因,设计合成2对特异性DNA片段以及1对无关序列的阴性对照DNA片断,将它们插入真核表达载体pGenesil-1中构建重组质粒,质粒转染L02正常肝脏细胞株后,以半定量RT-PCR法检测转染后24、48、72 h IER3IP1基因的抑制效果.结果:成功构建2个特异性针对IER3IP1的shRNA真核表达载体;所构建的载体中有1对能够特异性的降低L02细胞中IER3IP1的mRNA表达水平,且干扰效果显著,抑制率较高,与空载对照组比在转染后24、48、72 h抑制率分别为64%、79%、69%.结论:设计构建的真核表达载体可以特异性干扰IER3IP1基因的表达,为进一步研究IER3IP1基因的功能奠定了基础.

外源性反义血管内皮生长因子-C基因稳定转染对人胃癌细胞SGC-7901体外生长的影响

目的:观察以pCI-neo为载体的血管内皮生长因子-C(Vascular endothelial growth factor-C,VEGF-C)反义基因转染的人胃癌细胞SGC-7901中VEGF-C蛋白的表达,并研究其对人胃癌细胞体外生长的影响.方法:应用重组质粒pCI-neo-antiVEGF-C和pCI-neo空载体质粒,以脂质体转染法转染体外培养的人胃癌细胞株,以未转染组为对照,经G418筛选抗性克隆,扩大培养后,再用免疫组化和Western-blot分析VEGF-C基因及蛋白的表达,后用MTT法分析其对细胞生长的抑制作用.结果:免疫组化和Westem-blot均显示pCI-neo-anti VEGF-C转染组无VEGF-C mRNA及其蛋白的表达,MTT检测表明pCI-neo-anti VEGF-C转染组活细胞数较其它各组均低(P＜0.05).结论:pCI-neo-anti VEGF-C成功转染人胃癌细胞SGC-7901且可封闭VEGF-C mRNA,使已转染pCI-neo-anti VEGF-C的人胃痛细胞VEGF-C蛋白的表达减少,并能抑制胃癌细胞SGC-7901的体外生长,为进一步研究VEGF-C的生物学功能及胃癌的基因治疗研究创造了条件.

脑创伤性鼠红细胞免疫功能的变化

目的:探讨创伤性脑损伤(Traumatic brain injury,TBI)大鼠红细胞免疫功能(Erythrocyte immunity function,EIF)的改变及其机制.方法:选取Wistar大鼠70只,随机分成对照组(n=10)与创伤组(n=60),创伤组制备成轻型(n=30)和中重型(n=30)创伤性脑损伤模型,酵母菌花环法检测对照组与创伤组大鼠血液中红细胞C3b受体花环率(RBC-C3bRR)和红细胞免疫复合物花环率(RBC-ICR),放射免疫法测定血清中β-内啡肽(β-EP)水平.结果:与对照组比较,脑创伤大鼠RBC-C3bRR明显下降(P＜0.05),RBC-ICR和β-EP均明显升高(P＜0.05),中重型创伤组各指标改变较轻型创伤组更明显(P＜0.05).脑创伤大鼠β-EP变化与RBC-C3bRR呈直线负相关(轻型组r=0.698,P＜0.05;中重型组r=-0.744.P＜0.05);β-EP变化与RBC-ICR呈直线正相关(轻型组r=0.835,P＜0.05;中重型组r=0.729,P＜0.05).结论:大鼠脑创伤后红细胞免疫功能明显下降,其改变与体内β-EP明显升高密切相关.

凋亡相关基因livin及cyclin B1在乳腺癌中的表达及意义

目的:探讨livin在乳腺癌组织中的表达情况及其与细胞周期素B1(cyclin B1)的关系;方法:应用免疫组织化学方法检测Livin和cyclin B1在57例乳腺癌和10例正常乳腺组织中的表达情况,并分析livin和cyclin B1与临床病理学特征的关系.结果:Livin和cyclin B1蛋白在乳腺癌阳性表达率分别为77.2%(44/57)和68.4%(39/57),两者的表达呈正相关性(γ=0.701,P＜0.001);Livin的表达与淋巴结转移、年龄、临床分期、肿瘤大小未见显著相关性,cyclin B1的表达与淋巴结转移有显著相关性,而与年龄、临床分期、肿瘤大小未见明显相关性.结论:Livin和cyclin B1在乳腺癌组织中表达上调,提示其可能在乳腺癌发生、发展中起重要促进作用,cyclin B1和淋巴结转移的密切关系表明它的高表达可能反映患者较差的预后.

短期丰富生存环境对中老年大鼠空间学习能力的作用及性别差异

目的:探讨短期丰富生存环境对中老年大鼠空间学习能力的作用及性别差异.方法:将14月龄的Sprague-Dawley(SD)大鼠分雌、雄性后再随机分为丰富生存环境组与空白对照组,前者在丰富生存环境条件下饲养,后者在普通环境下饲养,4个月后分别测试在Morris水迷宫中的成绩.结果:短期丰富生存环境下,雌性大鼠的空间学习能力显著强于空白对照组,而同样条件干预的雄性大鼠空间学习能力与空白对照组相比无显著性差异.另外,在普通环境中饲养4个月的雄性大鼠空间学习能力明显强于雌性大鼠,而丰富生存环境条件下雌、雄性大鼠空间学习能力相比无显著性差异.结论:中老年雄性大鼠空间学习能力强于雌性大鼠,但中老年雌性大鼠大脑功能的可塑性可能要强于雄性大鼠,短期丰富生存环境的干预对于中老年雌性大鼠空间学习能力有显著性影响.本研究结果为将来寻找延缓大脑衰老过程的行为学手段提供了重要的理论依据.

己烯雌酚干预下围产期小鼠睾丸Leydig细胞INSL3 mRNA的表达变化

目的:通过体内、体外实验研究己烯雌酚(Diethylstilbestrol,DES)对KM小鼠围产期小鼠睾丸Leydig细胞胰岛素样因子3(Insuliu-like hormone 3,INSL3)mRNA表达的影响,探讨隐睾发生的可能机制.方法:DES分别以低、中、高3组剂量(1、5、25μg/L)分别作用于原代培养的胎龄16 d小鼠胚胎Leydig细胞,应用RT-PCR和原位分子杂交技术检测DES对睾丸Leydig细胞INSL3 mRNA 的表达水平;DES分别以低、中、高3组剂量[1μg/(kg·d)、10 μg/(kg·d)、100 μg/(kg·d)]灌胃作用于GD(Gestation day)12～PND(Postnatal day)3孕鼠,RT～PCR检测新生小鼠睾丸INSL3 mRNA表达的相对强度,并比较其差异性.结果:DES改变原代培养的小鼠胚胎Leydig细胞和新生小鼠睾丸的形态结构,以中、高剂量组改变尤为明显;体外实验中,DES中、高剂量组原代Leydig细胞INSL3 mRNA表达水平均明显低于对照组(P＜0.01)和DES低剂量组(P＜0.01);DES试验组Leydig细胞INSL3 mRNA表达相对强度低于对照组(P＜0.01) .体内实验中,DES试验组不同时间点的新生鼠睾丸INSL3 mRNA表达相对强度均明显低于对照组(P＜0.05,或P＜0.01),实验组组间两两比较也有差异(P＜0.05,或P＜0.01) .结论:DES可下调睾丸Leydig细胞INSL3 mRNA的表达水平,其可能是影响小鼠睾丸引带发育导致隐睾的机制之一.

骨保护素的克隆及对骨髓间充质干细胞分化的影响

目的:克隆人骨保护素(Osteoprotegerin,OPG)基因并构建其重组腺病毒,观察其对BMSCs分化的影响.方法:RT-PCR方法从人肝克隆OPG基因全长cDNA,利用穿梭质粒将OPG基因重组获得复制缺陷型重组腺病毒AdOPG;分离培养兔骨髓间充质干细胞,使用AdOPG感染兔BMSCs,以RT-PCR及Western Blot的方法鉴定BMSCs对OPG的表达.比色测定和细胞碱性磷酸酶染色法观察AdOPG感染BMSCs后5 d时碱性磷酸酶(ALP)的表达.结果:克隆获得人OPG基因,测序与Gene bank一致,构建的重组腺病毒AdOPG滴度达109 efu/ml,AdOPG感染BMSCs 5 d后ALP活性值为(21 024±507)IU,AdGFP对照组为(3 079±89)IU,空白对照组为(2 156±78)IU.结论:骨保护素有利于骨髓间充质干细胞向成骨细胞方向分化.

siRNA干扰对乳腺癌(MCF-7)ATX表达和侵袭力的影响

目的:研究针对自分泌运动因子(Autotaxin,ATX)的小干扰RNA(Small interfering RNA,siRNA)对人乳腺癌细胞ATX基因表达的影响,探讨RNA干扰技术治疗乳腺癌的前景.方法:参考人黑色素瘤ENPP2基因序列,设计合成ATX-siRNA及随机阴性对照.在阳离子脂质体的介导下转染人乳腺癌细胞MCF-7,转染后48 h收集细胞,用半定量RT-PCR和western blot检测转染后ATX mRNA和ATX蛋白的表达,体外实验测定肿瘤细胞穿透matrigel的能力.结果:体外合成的siRNA在转染乳腺癌细胞48 h后ATX mRNA和蛋白表达降低,转染48 h后测定乳腺癌MCF-7细胞的侵袭力明显降低(P＜0.01).结论:ATX-siRNA能有效抑制人乳腺癌细胞株ATX基因和蛋白的表达,降低人乳腺癌细胞的侵袭力.

siRNA沉默FAK基因表达对乳腺癌MCF-7细胞生物学特性的影响

目的:研究RNAi干扰粘着斑激酶(Focal adhesion kinase,FAK)的表达及对人类乳腺癌细胞生物学特性的影响.方法:构建表达FAK基因siRNA的重组质粒FAK-siRNA,在脂质体的介导下转染入人乳腺癌MCF-7细胞,荧光倒置显微镜下观察转染效率,应用RT-PCR和Western blot检测FAK mRNA和蛋白表达,流式细胞术分析细胞周期分布,体外实验测定肿瘤细胞穿透matrigel的能力.结果:成功转染FAK-siRNA后乳腺癌MCF-7细胞FAK基因的表达与阴性对照组、空白质粒转染组相比FAK mRNA和蛋白表达水平明显降低(P＜0.05),细胞增殖指数及侵袭力明显降低(P＜0.01).结论:FAK-siRNA能有效抑制人乳腺癌细胞FAK基因mRNA和蛋白的表达,降低细胞增殖能力及侵袭力.

重组耻垢分枝杆菌联合抗痨药物对鼠结核病治疗作用的探讨

目的:探讨携带编码人天然颗粒溶素(Granulysin,GLS)和小鼠IL-12基因的重组耻垢分枝杆菌(M.smegmatis,MS)与抗痨药物对结核分枝杆菌感染的协同治疗效果.方法:将结核分枝杆菌H37Rv感染的Balb/c小鼠40只随机分成4组.感染4周后分别用生理盐水、重组MS、INH+PZA和重组MS联合INH+PZA治疗,于第一次治疗后3个月,处死小鼠,检测器官荷菌量、脾淋巴细胞IFN-γ和TNF-α的分泌水平、血清IL-12和IFN-γ和肺、脾组织中GLS表达,同时观察小鼠肺、脾组织病理改变情况.结果:重组MS联合INH+PZA治疗组肺、脾组织荷菌量(lg CFU/g)比重组MS和INH+PZA治疗组显著降低;重组MS和INH+PZA治疗组肺、脾组织荷菌量比生理盐水组显著降低.重组MS组经PPD刺激后IFN-γ和TNF-α分泌水平明显高于其它组.重组MS联合INH+PZA治疗组和重组MS组血清IL-12和IFN-γ水平明显高于生理盐水组.重组MS和INH+PZA组病变轻且局限,生理盐水组肺组织病理改变以渗出为主,病变广泛.重组MS联合INH+PZA治疗组肺组织病变轻.结论:GLS/IL-12重组MS对小鼠结核病有一定免疫治疗作用;重组MS联合临床常用的抗痨药可增强抗结核病的疗效.

生存素反义寡核苷酸在胃癌化疗中对表阿霉素的增敏性及其信号转导途径研究

目的:通过构建survivin反义寡核苷酸,研究其在胃癌化疗中对表阿霉素(Epirubicin,EPI)的增敏作用及作用机制.方法:构建survivin反义寡核苷酸链(Antiscnse RNA,ASODN)及正义寡核苷酸对照链(SODN),脂质体法转染胃癌SGC-7901细胞,MTT法检测转染组细胞抑制率并筛选出适宜浓度,不同浓度表阿霉素处理胃癌SGC-7901细胞,MTT法检查表阿霉素对其生长抑制作用并筛选出4组浓度做为待测浓度,将2种因素联合作用于SGC-7901细胞,Western-blot法检查survivin蛋白表达情况,MTT法检查表阿霉素对其抑制率,流式细胞仪检查细胞周期,Annexin V-FITC法榆查细胞凋亡情况,RT-PCR法检查bcl-2、SMac mRNA表达情况.结果:经200 nmol/L survivin反义寡核苷酸处理后的SGC-7901细胞对表阿霉素的敏感性明显增加:MTT法示转染后细胞经表阿霉素作用24 h后,抑制率较单独使用表阿霉素的未转染组明显提高(P＜0.05,q＞1.15),流式细胞仪检查示联合作用组使细胞G2/M期细胞数较单独使用表阿霉素组明显增多:Western-blot检查示转染后survivin蛋白表达水平显著降低,Annexin V-FITC检查示转染组细胞凋亡明显增加,RT-PCR检查示:SMac mRNA在联合作用组较空白对照组表达上调.结论:Survivin反义寡核苷酸能够增强SGC-7901细胞对表阿霉素的敏感性,其作用可能是通过上调SMac的表达实现的.

齐留通对胃癌SGC-7901细胞生长的影响

目的:观察5-脂氧合酶抑制剂齐留通对胃癌SGC-7901细胞增殖、凋亡的影响,初步探讨齐留通影响胃癌细胞生长的机制.方法:MTT法测定齐留通对胃癌SGC-7901细胞增殖的影响;TUNEL染色法计数细胞凋亡率;RT-PCR和免疫细胞化学检测齐留通处理前后SGC-7901细胞Bax、Bcl-2和caspase-3 mRNA和其蛋白表达的改变.结果:齐留通以时间剂量依赖的方式抑制SGC-7901细胞生长;TUNEL染色法显示6.2×10-5 mol/L、3.1×10-5 mol/L齐留通作用72 h后细胞凋亡率为19.6%±6.3%和28.9%±2.3%,均显著高于对照组0.6%±0.1%(P＜0.01);RT-PCR和免疫细胞化学显示6.2 × 10-3 mol/L齐留通作用胃癌SGC-7901细胞72h后,可显著促进Bax、caspase-3mRNA和其蛋白的表达(P＜0.05),抑制Bcl-2mRNA及其蛋白的表达(P＜0.05).结论:齐留通能抑制胃癌SGC-7901细胞增殖,并通过促进Bax和caspase-3的表达,抑制Bcl-2表达,诱导其凋亡,从而抑制胃癌SGC-7901细胞生长.

雄激素受体、凝血酶敏感蛋白-1与前列腺良、恶性疾病血管生成的关系

目的:探讨雄激素受体(Androgen receptor,AR)、凝血酶敏感蛋白-1(Thrombosopndin-1,TSP-1)在良性前列腺增生(Benign prostatic hyperplasia,BPH)、前列腺癌(Prostate cancer,Pca)中的表达及与血管生成的关系.方法:良性前列腺增生20例;前列腺癌60例,前列腺癌组中根据Gleason分级,Gleason评分＜7为低评分组前列腺癌(35例),Gleason评分≥7为高评分组前列腺癌(25例);无骨转移者47例,有骨转移者13例.运用免疫组化二步法检测各组中AR、TSP-1的表达水平及微血管密度(Microvesel density,MVD).结果:BPH组中AR、TSP-1表达高于Pca组(P＜0.01),MVD值低于Pca组(P＜0.01);在Pca中低评分组AR、TSP-1的表达高于高评分组(P＜0.01),MVD值低于高评分组(P＜0.01);无骨转移组AR、TSP-1的表达高于骨转移组(P＜0.01),MVD值低于有远处转移组(P＜0.01).AR、TSP-1阳性组的MVD值分别小于阴性组的MVD值(P＜0.01).TSP-1与AR呈正相关(r=0.722,P＜0.05).结论:AR、TSP-1在前列腺癌中均为低表达,且与肿瘤的Gleason评分及有无骨转移密切相关.前列腺癌中AR突变使TSP-1减少,从而促进血管生成.

ATP50对生长激素诱导大鼠睾丸间质细胞睾酮分泌的影响

目的:研究ATP50在SD大鼠睾丸Leydig细胞中对生长激素(Growth hormone,GH)诱导睾酮合成及生长激素受体功能的影响.方法:采用离体细胞体外孵育法,观察反义ATP50寡脱氧核苷酸(Oligo deoxy nucletides,ODN)对GH诱导大鼠睾丸Leydig细胞分泌睾酮的影响及GH受体功能的影响,以睾酮放射免疫试剂盒测定睾酮合成的情况,cAMP放免试剂盒检测cAMP含量来评定GH受体的功能,免疫组织化学检测ATP50蛋白的表达.结果:反义ATP50 ODN呈剂量依赖性抑制GH诱导睾丸Leydig细胞睾酮的分泌(P＜0.05),同时使Leydig细胞中ATP50蛋白表达下降,而无义tat ODN则没有相应的作用,免疫组织化学显示ATP50蛋白阳性颗粒在Leydig细胞中中呈密集性分布,表达强度明显高于GH组(P＜0.05).结论:在SD大鼠睾丸Leydig细胞中,ATP50可能通过增强GH受体的功能,进而刺激GH诱导睾酮的合成.提示ATP50参与GH诱导大鼠睾丸Leydig细胞睾酮的分泌过程.

hsa-miR-518b反义寡核苷酸对胃癌细胞生长抑制作用的研究

目的:探讨hsa-miR-518b反义寡核苷酸(Antisense oligonucleotide,ASODN)对胃癌细胞生长和细胞周期的影响,以分析其在胃癌中的作用机制.方法:设计合成全硫代磷酸化修饰的hsa-miR-518b ASODN,将其转染于胃癌细胞株SGC7901.用Real time RT-PCR分析hsa-miR-518b在胃癌细胞转染前后的表达情况,MTT检测胃癌细胞转染后的生长情况,流式细胞仪分析细胞周期.结果:转染hsa-miR-518b ASODN后,胃癌细胞hsa-miR-518b表达显著降低(P=0.000),生长受到抑制(P=0.000),大量胃癌细胞阻滞于G1期(P=0.000).结论:hsa-miR-518b ASODN能使胃癌细胞阻滞于G1期,抑制胃癌细胞的生长.提示hsa-miR-518b可能通过促进细胞周期G1/S期转换而促进胃癌细胞生长.

喉癌动物模型中播散肿瘤细胞与突变型p53的研究

目的:建立喉癌裸鼠肿瘤模型,进行外周血播散肿瘤细胞(Disseminated tumor cell,DTC)和肿瘤组织突变型p53基因的检测,判断两者之间的相关性及早期预示肿瘤远处转移和预后的价值.方法:从50只裸鼠中随机选择40只建立裸鼠喉癌肿瘤模型,其余10只为对照组,采用套式PCR法,以CK19 mRNA为标记物于肿瘤种植成功后第10周检测肿瘤组及对照组裸鼠外周血中的DTC;以RT-PCR和免疫组化法检测肿瘤组织中突变型p53蛋白表达情况.待裸鼠死亡后解剖肝、肺及淋巴结,采用连续病理切片HE染色证实是否发生转移.结果:肿瘤组DTC阳性率为50.0%(20/40),对照组为阴性,差异有统计学意义(P＜0.05).肿瘤组织中突变型p53阳性率为55.0%(22/40),p53的表达与DTC呈正相关.1年内DTC与突变型p53都为阳性组中位生存期为34周,阴性组为43周,生存差异有统计学意义(P＜0.05);阳性组发生远处器官转移率为38.9%(7/18),阴性组转移率12.5%(2/16),差异有统计学意义(P＜0.05).结论:DTC联合突变型p53蛋白阳性表达可以作为早期判断肿瘤转移的指标,是预后不良的一组独立危险因素;DTC与突变型p53蛋白表达存在正相关.

新生大鼠心肌细胞原代培养方法的改良

目的:探讨更为简便的新生大鼠心肌细胞原代培养的方法,使分离的心肌细胞达到理想的数量、存活率和纯度.方法:用胰蛋白酶和Ⅱ型胶原酶联合消化,分离新生大鼠心肌细胞,进行体外培养,观察心肌细胞形态学变化,并以细胞免疫荧光进行心肌细胞纯度鉴定.结果:心肌细胞分离良好,收获细胞数量及存活率高,可贴壁搏动生长,免疫荧光显示培养的心肌细胞纯度达95%以上.结论:改良的细胞培养技术可获得生长状态良好的心肌细胞.

鸟氨酸氨基甲酰转移酶在肾脏疾病中的诊断价值

目的:探讨鸟氨酸氨基甲酰转移酶(Ornithine carbamoyltransferase,OCT)在肾脏疾病的诊断价值.方法:分别利用酶联免疫吸附试验和速率法测定健康对照组130例和各类肾脏疾病114例的血清、尿OCT和尿肌酐(UCr)值.结果:健康对照组、肾肿瘤、肾病综合征、上尿路感染、急性肾小球肾炎组的血清OCT值分别为:0.12、0.68、2.35、6.45、144.22 IU/L,它们的尿OCT/尿Cr比值分别为:21、133、118、143、371,肾脏疾病组的血清OCT及尿OCT/尿Cr分别显著高于健康对照组(P＜0.05).血清OCT与尿OCT/尿Cr诊断急性肾小球肾炎的敏感度分别为83%、87%,特异性分别为73%、75%.结论:血清OCT与尿OCT/尿Cr是诊断肾脏疾病的特异性指标,对肾脏疾病有较高诊断价值.

实时荧光定量PCR检测大鼠组织Angptl3表达的标准曲线构建

目的:采用实时荧光定量PCR(染料法)建立检测SD大鼠组织血管生成素样蛋白3(Angiopoietin-related protein 3,Angptl3)表达量的标准曲线.方法:以SD大鼠肝组织总RNA为模板,通过RT-PCR获得目的DNA片段,用T-A克隆方法将其装载到质粒pUCm-T上,经过转化、质粒提取获得标准品,并以此为模板梯度稀释进行Real-time PCRR反应,建立该方法的标准曲线.结果:Angptl3标准曲线相关系数为0.997 6,相关性较好;斜率为0.862 3,扩增效率适中.结论:成功构建了用Real-timePCR方法检测SD大鼠肝组织Angptl3表达量的标准曲线.

小鼠肠道Caja1间质细胞膜雌激素受体的检测和分析

目的:检测并分析体外培养的小鼠肠道Cajal间质细胞(Interstitial cells of cajal,ICC)膜雌激素受体(Membrane estrogenreceptor,mER).方法:利用原代培养小鼠ICC,采用免疫荧光染色结合激光共聚焦显微镜技术分析ICC细胞膜雌激素结合位点;采用密度梯度离心法分离ICC细胞膜,采用同位素法、放射性配体结合分析法对mER的大结合容量(Bmax)和平衡解离常数(kD)进行分析.结果:免疫组化结果证实体外成功分离培养小鼠肠道ICC;激光共聚焦观察显示,ICC细胞膜上存在雌激素作用位点;放射性配体结合分析及Scatchard分析证实ICC细胞膜雌激素受体的的受体大容量(Bmax)为45.75 fmol/mg protein,平衡解离常数(kD)为0.717 3 nmol/L.结论:ICC表达mER,该受体可能介导雌激素对ICC的快速非基因组作用.

决策树在乳腺癌高位淋巴结转移判别诊断中的应用

目的:探讨决策树(Decision tree)模型从乳腺癌病例信息中自动提取诊断规则,用于乳腺癌腋窝高位淋巴结判别分类诊断研究的计算机辅助诊断系统.方法:利用重庆医科大学1998～2002年普外科223例手术证实的乳腺癌患者11项指标,采用C5算法、CR算法、QUEST算法及(Chi-square automatic interaction detector,CHAID)箅法4种决策树算法,建立了乳腺癌腋窝高位淋巴结判别分类模型.结果:建立的CHAID判别分类模型的准确率为83.79%,CHAID模型所获知识的可靠程度以及对测试集合的准确率明显优于Logistic模型.结论:CHAID模型可从病例自动提取诊断规则,具有较广泛的实用价值,可应用于乳腺癌腋窝高位淋巴结判别分类的诊断.

胎鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞的分离及原代培养

目的:探讨胎鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(Alveolar epithelial cell type Ⅱ,AECⅡ)的分离、纯化及原代培养方法,为有关胎儿肺发育及新生儿肺部疾病的研究奠定基础.方法:采用胰酶结合胶原酶的消化方法,分离肺组织细胞成份,然后经差速离心和差速贴壁的方法纯化AEC Ⅱ,进行原代培养;通过台盼蓝染色检测细胞活力,倒置相差显微镜观察细胞生长特点及形态特征,透射电镜鉴定,改良巴氏染色检测细胞纯度以及免疫荧光技术检测表面蛋白C(Surfactant protein c,SPC)的表达.结果:每3～5只胎鼠可获得AEC Ⅱ(36 ± 5)× 106,活力98%±2%.镜下观察原代AECⅡ呈岛状生长,外观呈多边形或立方形.透射电镜可见特征性的板层小体,改良巴氏染色见胞质内有较多颗粒,纯度为96%±3%,呈现SPC绿色免疫荧光的细胞占96%以上.结论:利用胰酶和胶原酶消化,以及差速离心和差速贴壁的方法可成功分离出高产量、高纯度的胎鼠AEC Ⅱ,能满足体外进一步实验的需要.

基于K-均值和区域生长计算法医损伤面积

目的:法医鉴定伤者器官受伤面积或器物损伤面积时,通常采用记数坐标纸上网格数量的方法,其结果与法医的经验有关,主观性强,误差大,不利于法庭的出示和案件的侦破.方法:提出了一种基于K-均值和区域生长相结合的方法来计算损伤面积.结果:实验研究表明,该方法能有效的计算不规则区域的面积.结论:区域生长的方法计算不规则区域面积比记数坐标纸网格数量的方法具有更高的精度.

0.2T永磁速愈贴促进肾移植术后切口愈合的疗效观察

肾移植手术后应用各种免疫抑制剂和糖皮质激素对抗机体排斥反应,另一方面此类药物抑制手术切口的生长愈合,故术后切口的感染和延迟愈合发生率较高.选择2007～2008年我科进行肾移植手术的患者,观察永磁速愈贴对移植术后切口愈合的促进作用,效果良好,现报告如下.

震后青少年创伤后应激障碍病例分析

随着社会应激事件的增多和自然灾害的频发,创伤后应激障碍(Post traumatic stress disorder,PTSD)已成为影响创伤救治整体水平的重要因素之一.5·12汶川地震不仅造成严重伤亡,也给劫后余生带来了难以愈合的精神创伤;此时如何对存在异质性的群体开展心理援助显得尤为重要.本文通过分析病例,对这类群体的心理状况及干预方法提出自己的思考.

左侧大叶性肺炎诱发急性上腹部疼痛1例

1 临床资料 患者,女,58岁,住院号:54693 .因右中上腹疼痛4 d,加重1 d伴畏寒发热、黄疸,凌晨由外院转入我科ICU治疗.

消息

12例原发性乳腺弥漫性大B细胞淋巴瘤的临床病理分析

目的:观察原发性乳腺弥漫性大B细胞淋巴瘤(Diffuse large B cell lymphoma,DLBCL)的临床病理、免疫表型特征及治疗情况,探讨该肿瘤的诊断、治疗及预后.方法:采用SP法对每例行CD20、CD79a、CD3、CD45RO、CD10、Bc16、MUM1、Ki-67、CK和EMA等免疫组织化学染色.按WHO(2008年)淋巴瘤分类标准,收集12例DLBCL并对每例进行详细的病理分型及随访.结果:女性10例,男性2例,中位年龄49岁,右乳7例,左乳5例.12例均为Ann Arbor Ⅰ E期,1例IPI 2分,2例IPI 1分,9例IPI0分.单侧乳腺无痛性肿块是常见的临床表现.6例(50%)获得随访资料,其中4例存活,存活时间11～31个月;2例死亡,存活时间分别7、19个月.5例(41.7%)有淋巴上皮病变(Lymphoepithelial lesions,LEL).7例(58.3%)为中心母细胞性变型,5例(41.7%)为免疫母细胞性变型.8例(66.7%)Bcl6阳性表达,12例(100%)MUM1阳性表达,12例(100%)CD10阴性表达,免疫套餐分型12例DLBCL(100%)全部为non GCB型.Ki-67指数中位40%,7例(58.3%)≥40%.结论:原发性乳腺DLBCL罕见,表现为non GCB型,病理活检加免疫表型检测有助确诊,治疗以联合化疗为主加放疗等的综合治疗方案为宜.

骨外粘液样软骨肉瘤的临床病理研究

目的:探讨骨外粘液样软骨肉瘤(Extraskeletal myxoid chondrosarcoma,EMC)的临床病理特征.方法:对9例EMC进行了免疫组织化学检测;其中2例进行了超微结构观察;7例获得了随访资料.结果:患者有7名男性和2名女性.年龄介于31～69岁间(中位数52.78岁).患者的主诉是局部疼痛、压痛和可触及的肿块.肿瘤主要位于下肢(66.7%),由纤维组织分割为结节状.大多数肿瘤细胞呈纵横交错的条索状或花环状排列,粘液样基质丰富.免疫组化:EMC表达波形蛋白(100%,9/9),神经元特异性烯醇化酶(77.8%,7/9),S-100蛋白66.7%,6/9),突触素和嗜铬粒蛋白A(22.2%,2/9),不表达上皮膜抗原和结蛋白.电镜,条索样瘤细胞沉浸在丰富的粘多糖基质内;其中1例瘤细胞内见直径140～180 nm的膜包致密核心分泌颗粒.结论:EMC是一种罕见的有显著形态学和细胞遗传学特征的软组织肉瘤.然而,其分化方向尚有待确定.部分EMC显示神经内分泌分化的免疫表型和(或)超微结构证据.EMC有很高的局部复发和转移潜力及死亡率.