光诱导CRISPR/Cas9系统在基因表达调控中的研究进展

Cas9是CRISPR/Cas9系统中RNA引导的可切割双链DNA的核酸酶,野生型Cas9可通过基因剪切直接导致目的基因表达沉默.将Cas9蛋白D10A和H840A位点突变,可获得失去切割活性但仍保留与DNA结合能力的dCas9,其与转录激活因子连接后结合到DNA特定位点可实现转录激活;若dCas9直接与靶基因特定位点结合则可阻碍目的基因的转录.将光可调节物质引入CRISPR/Cas9可设计成光诱导CRISPR/Cas9系统.此系统在蓝光(470 nm)诱导下作用于靶DNA可实现人为可控的基因表达激活和抑制.本文主要介绍了光诱导CRISPR/Cas9系统的特性及其在基因表达调控中的运用.

神经类固醇激素与焦虑症及抑郁症等精神疾病关系的研究进展

在中枢神经系统中,神经类固醇激素在胶质细胞内由胆固醇经过一系列酶促反应合成,主要包括脱氢表雄酮、孕烯醇酮、孕酮和四氢孕酮等,通过与γ-氨基丁酸(GABA)受体结合而发挥抗焦虑和抗抑郁样行为学效应,其中神经类固醇激素对机体内环境的稳态具有重要作用.本文就神经类固醇激素的合成、代谢,以及神经类固醇对焦虑症和抑郁症等应激反应的调控作用做一综述,并对相关机制进行探讨.

中电导钙激活钾通道的研究进展

中电导钙激活钾通道(KCa3.1),又称IKCa和SK4,广泛分布于机体成纤维细胞、增殖型平滑肌细胞、内皮细胞、T淋巴细胞、浆细胞、巨噬细胞、上皮细胞中,并参与体内血管舒缩、炎症、钙化,组织纤维增生、免疫反应、恶性肿瘤发生和内外分泌腺分泌等病理生理过程.近几年发现通过阻断KCa3.1通道或基因敲除等方法,可明显阻止其参与的病理生理进程,而其特异性阻断剂三芳甲烷-34(TRAM-34)已在动物及人类中应用,表现出了药物的安全性及耐受性,为治疗相关疾病提供了新的方向.本文就近几年KCa3.1通道相关疾病研究进展作一综述.

氢吗啡酮微创给药泵临床应用及稳定性研究进展

2013年在中国新上市的氢吗啡酮是一种作用强于吗啡的阿片类镇痛药,可用于中至重度疼痛.微创给药包括持续输注及自控镇痛(PCA),并且其中PCA具有起效快、可及时控制爆发痛、患者满意度高等优势,目前被广泛应用于急、慢性疼痛和癌性疼痛的治疗.但是,随之也带来一些涉及用药安全的思考,如药物配伍后注药泵内药物的稳定性问题不容忽视.本文将近几年氢吗啡酮在不同镇痛泵中的临床应用以及稳定性(外观、pH值和浓度的变化情况)等进行归纳总结,为临床合理应用氢吗啡酮提供依据.

槲皮素通过STAT3信号通路抑制肺癌A549细胞迁移和侵袭

目的 观察槲皮素通过抑制信号转导和转录激活因子3(STAT3)信号通路对肺腺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响.方法 体外培养A549细胞,以不同浓度(0、7.5、15、30、60、120μmol/L)槲皮素处理24、48和72 h,采用CCK-8检测槲皮素对A549细胞增殖的抑制作用,计算半数抑制浓度(IC50).A549细胞随机分为4组:分别以0(空白对照组)、15和30μmol/L槲皮素和3μg/ml顺铂(阳性对照组)处理24 h.采用细胞黏附实验、划痕修复实验、Transwell小室体外侵袭实验观察A549细胞黏附、迁移、侵袭能力,Western印迹法检测STAT3、磷酸化信号转导和转录激活因子3(p-STAT3)蛋白表达的变化.结果 槲皮素剂量依赖性地抑制A549细胞增殖.与空白对照组相比,槲皮素显著抑制A549细胞黏附率、迁移率、侵袭细胞数(P<0.05或P<0.01);与空白对照组相比,槲皮素显著降低A549细胞STAT3和p-STAT3蛋白表达(P<0.05或P<0.01).结论 槲皮素具有明显的抑制A549细胞增殖、迁移和侵袭能力的作用,其机制可能与抑制STAT3信号通路有关.

降香及其伪品挥发性成分对比研究

目的 分析降香及其伪品挥发性成分的异同点,为降香的真伪优劣鉴别提供科学依据,并为降香的进一步研究提供参考.方法 采用顶空固相微萃取法(HS-SPME)结合气质联用(GC-MS)技术对降香及其伪品挥发性成分进行分析鉴定,并用面积归一化法计算各成分的相对百分含量.结果 共检测出70种成分,鉴定出38种成分,主要为烯类、醇类和醛酮类,从降香挥发性成分中检测出42个峰,鉴定出25个成分,占挥发性成分的96.54%;从其伪品中检测出28个峰,鉴定出19种成分,占挥发性成分的80.7%.结论 降香及其伪品的挥发性成分差异较大,两者共有的成分有6种,含量差异大,降香的主要成分为橙花叔醇,占挥发性成分的61.47%,其伪品的主要成分为β-芹子烯,占总挥发性成分的59.04%.本实验为降香真伪优劣的鉴别提供科学指导,同时为降香的进一步开发提供参考依据.

新加香薷饮标准汤剂的HPLC指纹图谱

目的 建立新加香薷饮标准汤剂(简称汤剂)的HPLC指纹图谱,为新加香薷颗粒(简称颗粒)的质量控制提供鉴定方法.方法 采用高效液相色谱法,色谱柱为Phenomenex Luna C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以乙腈-0.1%H3PO4溶液为流动相进行梯度洗脱,检测波长为280 nm,检测时间为130 min.采用2012版《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》软件,以绿原酸峰为参照峰,建立汤剂对照指纹图谱,并将其与5批颗粒的指纹图谱进行相似度评价.结果 5批颗粒的指纹图谱与新加香薷饮标准汤剂对照指纹图谱的相似度均>0.90.结论 该方法简单、稳定、重复性好,可用于辅助控制颗粒的质量.

Ento-Ⅰ涂膜剂经皮给药对小鼠耐缺氧和抗心肌缺血作用初探

目的 观察Ento-Ⅰ涂膜剂的耐缺氧及抗心肌缺血作用.方法 采用检测小鼠常压耐缺氧时间、小鼠缺血缺氧喘息时间和张口呼吸次数以及小鼠亚硝酸钠中毒存活时间,探索Ento-Ⅰ涂膜剂的耐缺氧作用.实验分组为生理盐水组、涂膜剂基质组、阿司匹林组和Ento-Ⅰ涂膜剂组(9.125、18.25、37.5 mg/kg);通过皮下注射异丙肾上腺素致小鼠心肌缺血模型初步评价Ento-Ⅰ涂膜剂的抗心肌缺血作用,实验分组为生理盐水组、涂膜剂基质组、复方丹参滴丸组和Ento-Ⅰ涂膜剂组(5、10、20 mg/kg).实验中各组给药方式如下:生理盐水组、阿司匹林和复方丹参滴丸组为灌胃,涂膜剂基质组及Ento-Ⅰ涂膜剂组为涂抹于太阳穴两侧.结果 4个实验中涂膜剂基质组与生理盐水组比较,所有指标均无统计学差异.与生理盐水组比较,Ento-Ⅰ涂膜剂中剂量组(18.25 mg/kg)小鼠常压耐缺氧时间(50.87±11.90)min、亚硝酸钠中毒后存活时间(14.15±4.61)min和断头后喘息时间(27.90±4.79)s均显著延长(P<0.01).抗心肌缺血实验中,与生理盐水组比较,Ento-Ⅰ涂膜剂高剂量组(20 mg/kg)小鼠缺血心肌超氧化物歧化酶活性显著升高(P<0.01),丙二醛含量显著降低(P<0.01);各组小鼠缺血心肌病理切片结果表明Ento-Ⅰ涂膜剂可明显减轻缺血心肌损伤,增强心肌抗缺血作用.结论 Ento-Ⅰ涂膜剂可有效提高小鼠耐缺氧和抗缺血的能力.

miRNA-24对血管内皮细胞eNOS表达/活性及其代谢产物NO生成的影响

目的 探讨微小RNA(miRNA)-24对血管内皮细胞内皮型一氧化氮合酶(eNOS)基因表达、活性调节的分子机制及其代谢产物的影响.方法 构建miRNA-24高表达质粒,并转染人脐静脉内皮细胞(HUVEC).MTT法检测细胞的增殖情况,划痕实验检测细胞的迁移能力,RT-PCR和Western印迹法检测细胞eNOS mRNA和蛋白的表达情况,ELISA法检测eNOS的表达活性,硝酸还原法测定细胞培养上清液中NO的含量.结果 与对照组相比,转染miRNA-24后细胞增殖能力下降54.32%、迁移能力下降48.62%;转染miRNA-24后eNOS mRNA降低43.92%,蛋白表达量减少42.71%;转染miRNA-24后eNOS的酶活性降低73.20%,同时NO的合成与释放减少55.29%.结论 miRNA-24高表达抑制eNOS的表达及酶活性;miRNA-24抑制代谢产物NO的合成与释放,这可能成为心血管疾病防治的分子靶点.

气相色谱-质谱法分析桑枝挥发油的化学成分

目的 提取桑枝中的挥发油,并对挥发油的化学成分进行分析.方法 采用同时蒸馏萃取法及水蒸气蒸馏法提取桑枝中的挥发油,气相色谱-质谱(GC-MS)联用法鉴别挥发油的化学成分.结果 同时蒸馏法萃取提取的桑枝挥发油中鉴定了19个化合物,占总检出量的94.49%,挥发油中含有烷、酸、醛、酮、酯和醇等物质.水蒸气蒸馏法提取的桑枝挥发油中鉴定出16个化合物,占总检出量的97.12%,挥发油由呋喃、羧酸、酯、醛、醇、酚、酮、烯烃及酰卤等物质组成.同时蒸馏萃取法提取的挥发油的化学成分多于水蒸汽蒸馏法.结论 两种提取法的结合,可更加全面地鉴定出桑枝挥发油的化学成分.

姜黄素对阿尔茨海默病细胞模型的保护作用及GAP-43蛋白表达的影响

目的 观察姜黄素对阿尔茨海默病(AD)细胞模型的保护作用及其对生长相关蛋白-43(GAP-43)表达的影响.方法 以Aβ25~35作用于原代培养大鼠海马神经元,建立AD细胞模型,通过噻唑蓝(MTT)法检测细胞存活率;实验分为空白对照组、模型组、10和20μmol/L姜黄素组,采用流式细胞术检测姜黄素对凋亡的影响;采用免疫细胞化学分析观察细胞突起生长情况,计算GAP-43阳性细胞率;采用Western印迹法检测GAP-43蛋白的表达.结果 与模型组比较,姜黄素能显著减轻Aβ25~35的毒性损伤,神经元细胞存活率升高,凋亡率下降(P<0.01);可显著增加平均突起长度,增高GAP-43阳性细胞率和GAP-43表达(P<0.05或P<0.01).结论 姜黄素对AD细胞模型有保护作用,其机制可能与上调GAP-43的表达有关.

不同配伍比例的瓜蒌皮-瓜蒌子与瓜蒌的化学指纹特征相似性研究

目的 研究不同配伍比例的瓜蒌皮-瓜蒌子与瓜蒌的化学指纹图谱的相似性,为瓜蒌皮与瓜蒌子的合理配伍比例提供理论依据.方法 采用高效液相色谱法建立30:70、35:65、40:60、45:55、50:50、55:45共6种比例的瓜蒌皮-瓜蒌子及瓜蒌的化学指纹图谱及其共有模式,比较不同配伍比例的瓜蒌皮-瓜蒌子与瓜蒌化学指纹图谱共有模式间的相似度.结果上述6种比例的瓜蒌皮-瓜蒌子与瓜蒌的化学指纹图谱共有模式间的相似度分别为0.8808±0.0407、0.8930±0.0236、0.8995±0.0195、0.9033±0.0190、0.9363±0.0082和0.8904±0.0144,其中瓜蒌皮-瓜蒌子比例为50:50时相似度高.各组与瓜蒌皮-瓜蒌子50:50组比较,差异有统计学意义(P<0.05或0.01).结论 采用指纹图谱技术确定了瓜蒌皮-瓜蒌子的佳配伍比例,为瓜蒌皮-瓜蒌子的合理配伍提供了理论依据.

LC-MS/MS法测定大鼠血浆中芍药内酯苷的浓度及其在毒代动力学研究中的应用

目的 建立测定大鼠血浆中芍药内酯苷的液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)法.方法 血浆样品经乙酸乙酯-异丙醇(95:5,V/V)提取后,以Poroshell 120 EC-C18柱(50 mm×2.1 mm,2.7μm)为分析柱,乙腈-水为流动相梯度洗脱,采用ESI源在多反应监测(MRM)方式下进行正离子检测.用于定量分析的离子反应为m/z 498.5→m/z 197.1(芍药内酯苷)和m/z 251.3→m/z 108.2(拉科酰胺,内标).结果 芍药内酯苷血浆浓度测定方法的线性范围为20~2000 ng/ml,日内、日间精密度RSD%均<15%,准确度(RE)在±8.06%之间.结论 该法适用于芍药内酯苷在大鼠体内的毒代动力学研究.

异烟肼致大鼠肝损伤中长链RNA肺腺癌转移相关转录体1与IL-6/STAT3通路的关系研究

目的 探讨异烟肼致大鼠肝损伤模型中长链非编码RNA(lncRNA)肺腺癌转移相关转录体1(MALAT1)表达与IL-6/信号转导及转录激活因子3(STAT3)的关系.方法 56只健康无特定病原体(SPF)级SD大鼠雌雄各半,随机分为实验组48只,给予异烟肼63 mg/(kg·d)连续灌胃3、7、10、14、21和28 d,每天固定时间点1次,每个时间点大鼠8只;对照组8只,给予等容积蒸馏水.测定血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)水平;实时荧光定量PCR检测肝组织lncRNA MALAT1、IL-6/STAT3 mRNA表达.结果 随给药时间的延长,肝组织在7 d后出现病理损伤,其后越加严重;与正常对照组相比,ln?cRNA MALAT1、IL-6/STAT3 mRNA,以及血浆ALT、AST的表达水平整体呈上升趋势(均P<0.01),lncRNA MALAT1、ALT和AST在28 d时均有不同程度回落(均P<0.05);lncRNA MALAT1与IL-6/STAT3 mRNA表达水平呈正相关(均P<0.01);ln?cRNA MALAT1、IL-6/STAT3 mRNA表达水平与ALT、AST含量呈正相关(均P为<0.01).结论 LncRNA MALAT1在异烟肼致大鼠肝损伤过程中异常高表达,且出现异常的时间早于ALT和AST指标,其作用机制可能与IL-6/STAT3信号通路激活相关.

新药研究与开发