医学分子生物学杂志
Journal of Medical Molecular Biology 의학분자생물학잡지
- 主管单位： 中华人民共和国教育部
- 主办单位： 华中科技大学同济医学院
- 影响因子： 0.31
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 1672-8009
- 国内刊号： 42-1720/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
-
1型多发性内分泌腺肿瘤综合征Men1基因变异
1型多发性内分泌瘤综合征(multiple endocrine neoplasia type 1,MEN1)是一种主要以累及甲状旁腺、胰岛细胞和垂体的家族性常染色体显性遗传性肿瘤疾病,其致病基因是Men1的基因突变.目前在MEN1患者中发现了大量Men1基因突变位点,其中9个位点突变频率较高,占据所有胚系细胞突变的20 %,同时,MEN1患者中还存在Men1基因大片段的外显子缺失,具有外显率高和临床表现多样化的特点,与1型多发性内分泌瘤以及零散型内分泌肿瘤都可能相关.因此,在部分疑似MEN1患者中开展Men1基因变异分析可辅助确诊,在Men1基因突变携带者及其家属中开展Men1变异筛选将有助于对MEN1发生做好提前预防和治疗.
-
Notch1与NF-κΒ信号通路在中枢神经系统疾病中的串话
Notch1与NF-κB信号通路之间存在着复杂的串话关系,彼此之间的相互影响不仅在生命体正常生理活动中意义重大,同时也是很多疾病及其并发症发生发展的病理因素所在.近年来的许多研究表明,Notch1与NF-κB信号通路之间复杂的串话与脑内炎症、肿瘤、发育障碍等多种中枢神经系统疾病密切相关.
-
Claudins蛋白在胃癌组织中的表达
紧密连接(tight junctions,TJs)对于维持上皮细胞或内皮细胞的正常结构和发挥生理功能起着重要作用.Claudins(CLDNs)蛋白是构成细胞膜紧密连接的主要成分之一,其异常表达导致上皮细胞或内皮细胞结构破坏、功能受损,与多种疾病的发生、发展关系密切.近年来,越来越多的文献报道了claudins蛋白在胃癌组织中的异常表达.不同claudin蛋白亚型在胃癌组织中的表达降低或增高所起作用亦不相同.Claudins蛋白与肿瘤形成、癌细胞的增殖、转移、以及预后关系密切.因此,深入研究claudins蛋白与胃癌发生、发展的关系具有重要意义.
-
RHD mRNA替代剪接区域研究
目的 2007年国内报道一例弱D型个体存在第4～9外显子选择性剪接的转录子,我们探讨正常Rh(D)阳性个体的RHD基因mRNA的选择性剪接区域.方法 随机选择3名Rh(D)阳性个体,从新鲜全血中提取总RNA,通过特异性引物,采用"一步法"逆转录-PCR(RT-PCR),扩增RHD mRNA第1～7外显子区域,以及第6～10外显子区域,然后cDNA琼脂糖凝胶电泳和成像分析.结果 未发现第1～7外显子区域存在mRNA的选择性剪接条带,仅存在由特异性引物所扩增的第1～7外显子全长的序列条带;而第6～10外显子区域观察到5种替代剪切条带,序列分析显示分别为无缺失片段,以及完整缺失第7、第9、第7和9、第7～9外显子5种RHD转录子.结论 正常Rh(D)抗原阳性个体的RHD基因mRNA的选择性剪接仅存在于第7～9外显子区域.
-
白色念珠菌菌丝相培养条件及RAPD反应体系优化的研究
目的 优化白色念珠菌菌丝相培养条件,为白色念珠菌菌丝相的分子生物学研究提供必要条件;建立白色念珠菌菌丝相RAPD的佳反应体系,应用于其基因组DNA扩增.方法 在RPMI1640培养基的基础上,通过单因素试验研究了小牛血清用量、培养液pH值、培养温度和转种次数等对白色念珠菌菌丝相形成的影响.采用单因素试验,分别研究了Mg2+浓度、dNTPs浓度、Taq酶的浓度、引物浓度和模板DNA浓度对白色念珠菌菌丝相RAPD反应的影响;应用L16(45)正交试验对RAPD反应条件进行了优化.结果 白色念珠菌菌丝相诱导的佳条件为:每100 ml培养液中的小牛血清用量为10 ml,培养液pH值为7.5,培养温度为36 ℃,转种次数为12次.白色念珠菌菌丝相的适RAPD反应体系为:Mg2+1.25 mmol/L、dNTPs 0.4 mmol/L、随机引物0.1 μmol/L、TaqDNA聚合酶5 U/50 μl、模板DNA 495 ng/50 μl.结论 通过单因素和正交试验,获得了较适白色念珠菌菌丝相培养条件和其基因组RAPD扩增条件.
-
重组人FOXL2基因的原核表达和纯化研究
目的 通过pET32a(+)原核表达载体,表达重组人叉头框蛋白L2(human forkhead box L2,FOXL2l),并且进行纯化和鉴定.方法 从正常人血液中提取基因组DNA,利用PCR扩增FOXL2l目的 基因片段,构建FOXL2l原核表达重组质粒[pET32a(+)-FOXL2l]并转化E.coli的BL21(DE3)菌株,IPTG诱导重组蛋白表达,经His TrapTM FF亲和层析柱纯化,再通过SDS-PAGE和Western印迹鉴定.结果 成功克隆到大小为1 131 bp的人源FOXL2l基因片段并准确插入表达载体pET32a(+),0.1 mmol/L IPTG诱导转化菌8 h可表达大量的FOXL2l蛋白,并可经His TrapTM FF柱亲和层析得到高度纯化.结论 成功获得纯化的66 kD重组人FOXL2l蛋白,为后续进行FOXL2l蛋白的功能研究奠定了基础.
-
用pLNCX2携带人MCPH1基因shRNA重组逆转录病毒载体的构建及鉴定
目的 建立逆转录病毒介导的MCPH1基因RNA干扰表达体系并观察其在宫颈癌Caski细胞中对MCPH1表达的影响.方法 将人MCPH1基因RNA干扰双链DNA片段重组到逆转录病毒质粒pLNCX2中,构建携带人MCPH1基因RNA干扰的逆转录病毒载体pLNCX2-shRNA-MCPH1,经PT67细胞包装后,产生的重组逆转录病毒感染宫颈癌细胞株Caski细胞,并用G418筛选产生稳定的细胞克隆,用RT-PCR和Western印迹检测细胞中MCPH1 mRNA和蛋白表达的变化.结果 重组逆转录病毒质粒经测序鉴定正确,逆转录病毒感染Caski细胞后用G418筛选出稳定的细胞克隆,RT-PCR和Western印迹检测人MCPH1 mRNA和蛋白表达水平明显低于阴性对照组和未干扰组.结论 携带人MCPH1基因RNA干扰双链DNA片段的逆转录病毒感染Caski细胞后能明显抑制MCPH1 mRNA和蛋白表达,为进一步研究MCPH1在宫颈癌中的作用奠定了基础.
-
hMAM启动子/增强子调控表达载体构建和调控作用
目的 构建人乳腺珠蛋白(human mammaglobin,hMAM)启动子/增强子调控报告基因表达载体,探讨hMAM启动子/增强子序列在乳腺癌细胞中的特异性调控作用.方法 应用PCR技术,从基因组DNA中扩增出hMAM启动子/增强子DNA序列,构建于PGL3报告基因上游,分别转染体外培养的乳腺癌细胞MDA-MB-415、T47D及胃癌细胞7901,分析启动子和增强子序列对乳腺癌细胞的基因表达调控作用.结果 酶切图谱分析、DNA序列测定表明成功构建hMAM启动子/增强子调控的表达载体;荧光素酶报告基因检测结果分析表明,hMAM启动子/增强子能够调控报告基因的表达.结论 hMAM启动子/增强子,在MDA-MB-415乳腺癌细胞具有调控基因表达的作用;
-
PML coiled-coil结构域与RAN结合蛋白9相互作用的验证
目的 验证前髓细胞性白血病的卷曲螺旋结构域(PML-C)和RAN结合蛋白9(RANBP9)之间的相互作用.方法 构建分别表达诱饵蛋白PML-C和靶蛋白RANBP9的载体pGBKT7-PML-C和pACT2-RANBP9,然后转入酵母AH109,培养3～5 d后对其是否有胞内相互作用进行检测.将目的 片断PML-C和RANBP9再次构建于真核生物表达载体pCMV-HA和pCMV-myc里,然后共转染人胚肾293细胞里(HEK293),后对其是否有体外相互作用通过免疫共沉淀和免疫印迹进行分析.结果 在共转化了质粒pGBKT7-PML-C和pACT2-RANBP9的AH109酵母平板里观察到蓝色菌落生长.用抗HA多克隆抗体对共转染过重组质粒的HEK293细胞的蛋白提取物进行免疫共沉淀,再用抗myc单克隆抗体作为一抗进行免疫印迹,终检测出融合蛋白myc-RANBP9条带.结论 酵母双杂交实验验证了PML-C和RANBP9之间存在胞内相互作用,同时免疫共沉淀实验也从体外验证了它们之间的相互作用.
-
槲寄生蛋白抗癌活性研究及新成分鉴定
目的 评价槲寄生蛋白的抗癌活性,鉴定其中的新成分.方法 以H22肝癌移植瘤为模型,评价槲寄生蛋白对肿瘤生长的抑制作用.采用CM Sepharose F.F.弱阳离子交换色谱,分离出一种低含量的槲寄生蛋白.基质辅助激光解吸飞行时间质谱测定其分子量.蛋白电泳后转印PVDF膜,采用Edman降解,测定该成分A,B两链的N端序列.结果 槲寄生蛋白对H22的抑制率达80.2 %,其中的CM0为未见报道的新成分.结论 槲寄生总蛋白主要含有3种成分,且具有显著的抗癌活性.
-
JNK信号通路对蜂胶抑制白血病K562细胞增殖的调控作用
目的 探讨JNK信号通路对蜂胶抑制K562细胞增殖过程的调控作用.方法 体外培养K562细胞,用不同浓度蜂胶、c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)特异性抑制剂SP600125对白血病K562细胞进行处理,用MTT法检测细胞增殖抑制率,流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡率,Western 印迹检测JNK下游分子c-Jun以及磷酸化c-Jun(p-c-Jun)的变化.结果 蜂胶作用K562细胞后,增殖抑制率、凋亡率显著升高,具有时间和剂量依赖性,并伴随p-c-Jun蛋白水平上调;加入SP600125能下调p-c-Jun的水平,显著提高蜂胶对K562细胞的增殖抑制率和凋亡率.结论 JNK信号通路参与了蜂胶抑制K562细胞增殖过程的调控.抑制JNK活性可增强蜂胶对K562细胞的增殖抑制、凋亡诱导作用.
-
沉默Bmi-1基因表达对MCF-7细胞阿霉素敏感性的影响
目的 研究Bmi-1对MCF-7细胞阿霉素敏感性的影响及机制.方法 阿霉素处理MCF-7/Bmi-1si、MCF-7/GFPsi和MCF-7细胞株,MTT法检测阿霉素的IC50;DAPI检测阿霉素处理后细胞的凋亡,计算凋亡指数(apoptosis index,AI);Western印迹检测相关蛋白P53,phospho-Akt(Ser473)(pAkt),totle-Akt(tAkt),Bcl-2,Bax的表达.结果 阿霉素处理72 h的MCF-7/Bmi-1si组生长抑制率明显高于MCF-7 和MCF-7/GFPsi组,MCF-7/Bmi-1si组的IC50为(0.15±0.02)μg/ml,而MCF-7组和MCF-7/GFPsi组的IC50分别为(0.87±0.06)μg/ml和(0.81±0.02)μg/ml(P＜0.05).阿霉素处理48 h后用DAPI检测凋亡发现,MCF-7/Bmi-1si+doxorubicin组可见大量凋亡细胞,而MCF-7+doxorubicin 和MCF-7/GFPsi+doxorubicin组出现较少的凋亡细胞,MCF-7/Bmi-1si+doxorubicin组凋亡指数明显高于对照组(P＜0.05).进一步研究发现:MCF-7/Bmi-1si+doxorubicin组与MCF-7+doxorubicin 及MCF-7/GFPsi+doxorubicin组相比,P53表达量增加,tAkt表达未发生改变,而pAkt的表达明显减少,另外,Bcl-2表达量减少而 Bax表达量增加,差异具有显著性(P＜0.05).结论 沉默Bmi-1基因表达能增加MCF-7细胞对阿霉素的敏感性,增加阿霉素引起的凋亡.
-
重组泛素连接酶SH2-U-box/RING的构建与表达
目的 构建重组泛素连接酶SH2-U-box、SH2-RING,并克隆进入pFlag-CMV4真核表达载体,为研究靶向降解慢性粒细胞白血病(chronic myelocytic leukemia,CML)患者瘤细胞中过度活化的BCR/ABL,抑制肿瘤细胞的生长提供基础.方法 设计引物,扩增接头分子Grb2的SH2结构域以及E3泛素连接酶CHIP的U-box、Cbl的RING结构域,通过重组PCR,将SH2分别与U-box、RING进行融合,融合片段双酶切之后插入真核表达载体pFlag-CMV4,经过酶切鉴定及测序后,转染HEK293T细胞,Western 印迹验证重组质粒的表达.结果 PCR结果提示SH2-U-box条带大小888 bp,SH2-RING大小为633 bp,重组质粒酶切鉴定和测序结果均正确,转染后可见融合蛋白的表达.结论 成功构建真核重组表达载体pFlag-CMV4-SH2-U-box和 pFlag-CMV4-SH2-RING,转染HEK293T细胞后能够正确表达,为后续研究奠定了基础.
-
丙型肝炎病毒E1蛋白活化MAPK/ERK信号通路促进肝癌细胞增殖
目的 研究丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)编码蛋白E1的生物学功能.方法 分别构建编码HCV重要蛋白E1、E2、NS3、NS5a、NS5b 的腺病毒载体Ad-E1、Ad-E2、Ad-NS3、Ad-NS5a、Ad-NS5b;将重组并包装的腺病毒分别感染SMMC-7721细胞,测定感染滴度,通过RT-PCR方法在转录水平鉴定HCV E1、E2、NS3、NS5a、NS5b的表达,用Western 印迹在蛋白水平鉴定E1蛋白的表达.腺病毒感染SMMC-7721细胞后,通过细胞增殖实验筛选生物学功能明显的蛋白.将筛选到的Ad-E1感染SMMC-7721细胞,用MTS、结晶紫、细胞周期实验观察体外过表达E1蛋白对感染细胞增殖的影响;Western印迹检测p-ERK、ERK的表达;RT-PCR检测c-Myc、cyclinD1、c-Jun、c-Fos基因的表达.结果 成功扩增了能够编码HCV重要蛋白E1、E2、NS3、NS5a、NS5b 的高滴度腺病毒Ad-E1、Ad-E2、Ad-NS3、Ad-NS5a、Ad-NS5b,并且通过RT-PCR方法在转录水平鉴定了目的 基因的表达,Western 印迹方法在蛋白水平鉴定了E1蛋白的表达.通过细胞计数、MTS、结晶紫实验证实Ad-E1感染组细胞较对照组增殖速度加快,细胞周期显示Ad-E1感染组细胞 34.38 %处于S期,明显高于Ad-GFP(27.32 %)(P＜0.05)对照组;Ad-E1感染组p-ERK蛋白表达量增高,同时与细胞增殖相关的MAPK/ERK下游基因转录水平上调.结论 体外过表达HCV E1蛋白可以明显促进SMMC-7721细胞的增殖,其促增殖作用可能与MAPK/ERK信号通路的活化相关.
-
条索状透明质酸在乳腺肿瘤细胞BT549化疗耐药中的作用
目的 观察透明质酸的新存在形式--条索状透明质酸在乳腺肿瘤细胞BT549表面的表达情况,探索该结构在BT549细胞耐受紫杉醇杀伤中的作用.方法 采用免疫细胞荧光技术观察BT549细胞表面条索状透明质酸的分布情况;分别用流式细胞术和RT-PCR检测透明质酸的条索状结构被破坏前后,紫杉醇诱导的肿瘤细胞凋亡、坏死率的改变以及凋亡相关基因c-jun mRNA表达的改变.结果 BT549细胞天然表达大量的条索状透明质酸,条索状结构被破坏后,紫杉醇诱导BT549细胞的凋亡和坏死率显著增高(P＜0.05),凋亡基因c-jun的表达水平也显著增高(P＜0.05).结论 乳腺肿瘤细胞BT-549高表达条索状结构的透明质酸,这种透明质酸的新存在形式可能在BT549细胞耐受紫杉醇的杀伤过程中起到一定的保护作用.
| 年 | 期数 |
| 2019 | 01 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2017 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 |
| 2011 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2010 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2009 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2008 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2007 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2006 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2005 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2004 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2003 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2002 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2001 | 01 02 03 04 05 06 |
