医学分子生物学杂志
Journal of Medical Molecular Biology 의학분자생물학잡지
- 主管单位： 中华人民共和国教育部
- 主办单位： 华中科技大学同济医学院
- 影响因子： 0.31
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 1672-8009
- 国内刊号： 42-1720/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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微小 RNA-499的表达特征及生物学作用
微小RNA-499(microRNA-499,miR-499) 是近年来发现的肌球蛋白基因编码的 miRNA(miRNA encoded by myosin gene,myo-miR) 家族新成员,目前发现它主要在人和动物的心肌和骨骼肌中表达,同时在其它多种组织中也可以被检测到.miR-499 在心肌细胞的分化中起着至关重要的调控作用.在成人心肌和骨骼肌中,miR-499 通过促进β-肌球蛋白重链(β-myosin heavy chain,β-MHC) 的表达,使肌细胞的氧代谢和耐受力增强.miR-499 可能通过不同的信号转导通路,参与了不同的心肌病理过程.此外,miR-499的血清/血浆水平在多种疾病患者中有显著变化,miR-499 前体 (pre-miR-499)的多态性也与人体对多种疾病的易感性相关,这些使其有望成为某些疾病临床检验的生物学标志物之一.
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microRNA 转基因小鼠在心脏发育研究中的应用
microRNA(miRNA) 参与调控胚胎心脏的发育,在心脏形态发生、心肌细胞生长及分化过程中发挥着极其重要的作用.通过转基因技术可以实现特异 miRNA 在心肌组织的过表达与敲除,据此建立的心肌特异性 miRNA 转基因小鼠模型可以在整体水平揭示 miRNA 心脏方面的功能.近年,以 miRNA 为研究对象的心肌特异性转基因小鼠模型数量不断增加.
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神经调节:瘦素调控骨代谢过程中的重要角色
肥胖可以增加骨密度、减少骨质疏松的发生.而大多数肥胖者血清瘦素水平升高,并与肥胖的程度呈正相关.研究证实,来源于脂肪组织的瘦素可直接作用于骨细胞和软骨细胞,进而影响其增殖分化.瘦素通过抑制脑 5- 羟色胺 (serotonin,5-HT)的合成、神经肽 Y (neuropeptide Y,NPY) 的表达等,并经由交感神经系统 (sympathetic nervous system,SNS) 介导的成骨细胞内β2 肾上腺素能受体(β2-adrenergic receptor,Adrβ2) 信号通路共同调节骨代谢.这些工作为治疗骨质疏松、骨性关节炎等的新策略提供了理论基础.
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精子趋化运动的研究近况
精子趋化作用具有重要的生理功能,体现在这种趋化过程促使大量的精子到达受精部位,从而实现精子与卵子的相遇、顶体反应的发生及精卵融合.近年,人们研究发现精子在趋化运动存在一种新的运动模式 (turn-and-straight 模式).同时,在信号转导方面认为 CatSper 就是孕酮在精子膜上的受体,并参与信号的跨膜转导.
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hnRNP K 的结构及功能
核内不均一性核糖核蛋白K (heterogeneous nuclear ribonucleoprotein K,hnRNP K) 早在 hnRNA加工过程中被发现,属于 hnRNP 家族的一员.研究表明 hnRNP K 的主要功能结构为 3 个引导 DNA-RNA 连接的 KH 域和一个独特的 KI 域.hnRNP K 不仅能够通过依赖 CT 元件的途径或不依赖 CT 元件的途径在转录水平上对基因表达进行调控,还能够通过自身的磷酸化,改变 mRNA 的翻译效率,以及调控基因翻译及转导胞内信号.此外,hnRNP K 与肿瘤发生和转移的关系也是近年来的研究热点.hnRNP K 被发现在许多肿瘤组织中高表达,主要通过调控与细胞增殖有关的基因表达而影响肿瘤的发生发展,同时它与肿瘤细胞的扩散转移也有关.
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模式生物秀丽线虫与吸入麻醉药敏感性相关的基因
吸入麻醉药虽已在临床上广泛应用,然其分子作用机制和作用位点仍然不清楚.以秀丽线虫为模式生物在研究麻醉药的分子机制上有着众多优点,近年亦取得了一定的进展.以秀丽线虫作为模式生物时麻醉终点的选择主要有两种:使用大于临床浓度的吸入麻醉药,使秀丽线虫停止运动作为麻醉终点和使用接近临床浓度的吸入麻醉药,使秀丽线虫行动变得不协调和迟缓作为麻醉终点.这两种研究方法已经发现一些与吸人麻醉药敏感性相关的基因,如 unc-79,unc-80,unc-9,unc-1,gas-1和 unc-64 等基因.这些基因主要表达于神经元,与神经突触、线粒体的功能有关.
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microRNA 调控血小板生成及功能
microRNA(miRNA) 是一类长约22 nt(19～23 nt) 在进化上非常保守的非编码 RNA,其能够通过降解 mRNA 或抑制 mRNA 翻译来调控蛋白表达.研究证实 miRNAs 在包括胚胎干细胞分化、单核细胞和巨核细胞生成等血细胞形成过程中扮演重要的角色.而由巨核细胞生成的血小板内同样存在 miRNAs,并且被证实参与到血小板活化和血小板生理病理状态改变等过程中.对 miRNA 调控血小板生成及功能的深入研究将有利于早期诊断治疗血液系统相关疾病.
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Ang2-siRNA 慢病毒干预裸鼠移植性恶性黑色素瘤的研究
目的 研究血管生成素2小干扰 RNA(Ang2-siRNA)对裸鼠移植性恶性黑色素瘤血管形成及其生长的影响.方法 建立人恶性黑色素肿瘤裸鼠异种移植瘤模型.在体内使用 pNL-EGFP-Ang2-siRNA 慢病毒干扰裸鼠移植性恶性黑色素瘤 Ang2 基因的表达,观察统计各组肿瘤(空白组、空载组、实验组)生长情况.应用实时荧光定量 RT-PCR 检测肿瘤组织中 Ang2 基因的 mRNA 表达水平;CD34 单克隆抗体作为血管内皮标志物,免疫组织化学法检测其表达,以评价肿瘤微血管密度.结果 成功建立了恶性黑色素瘤裸鼠异种移植瘤模型,实验组肿瘤 Ang2 基因 mRNA 水平、微血管密度、肿瘤体积显著小于空白组和空载组(P<0.01),空白组和空载组之间无统计学意义 (P>0.05).结论 pNL-EGFP-Ang2-siRNA 慢病毒能沉默Ang2 的表达,显著抑制恶性黑色素瘤血管的形成和肿瘤的生长,可能为临床恶性黑色素肿瘤的基因治疗开辟新的途径.
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EphA3基因启动子区域定位表达及活性分析
目的 构建含有不同长度 EphA3 基因启动子片段的报告基因载体,研究其在 293T 细胞和 MEF细胞中的转录活性.方法 以Balb/C小鼠基因组 DNA 为模板,扩增不同长度的 EphA3 基因启动子片段,并克隆进入荧光素酶报告基因质粒 pGL3-Basic 真核表达载体内.酶切鉴定及基因测序无误后,将重组质粒和 pRI-CMV 内对照质粒共转染 293T 和 MEF 细胞,分析不同长度的 EphA3 基因启动子片段的转录活性.结果 酶切和测序鉴定表明表达载体构建成功,EphA3 基因的核心启动子区域位于-279bp～+110 bp之间,在 293T 细胞和 MEF 细胞中其转录活性相似.结论 成功构建了荧光素报告基因重组质粒,并确定了E-phA3 基因的核心启动子区域.
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HBV 影响 XRN2基因在 HepG2-H7细胞中表达的机制研究
目的 利用稳定表达 HBV 的 HepG2-H7 细胞,研究 HBV 对 XRN2 基因表达的调控,并对其作用 机制进行初步探讨.方法 用 RT-PCR 和 Real-time PCR 的方法检测 HepG2细胞及稳定表达 HBV 的 HepG2-H7 细胞中 XRN2 在 mRNA 水平的表达差异.构建 XRN2 启动子的萤火虫荧光素酶报告质粒,分别转染Hepc2 细胞及 HepG2-H7 细胞,检测 HBV 对 XRN2 启动子的影响.将 XRN2 启动子质粒与 HBV 4 种蛋白的真核表达质粒共转染 HepG2 细胞,寻找对启动子影响较大的 HBV 蛋白.结果 RT-PCR 和 Real-time PCR 的结果显示 XRN2 在 HepG2-H7 细胞中的表达较 HepG2 细胞有所下降.荧光索酶活性分析显示 HBV 能抑制XRN2 启动子的活性,且 HBx 和 HBp 蛋白在这一过程中起主要作用.结论 HBV蛋白可以通过抑制XRN2启动子活性调节其在 HepG2-H7 细胞中的表达.
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靶向 IRE1a 干扰质粒构建及对 ERS 时细胞增殖及凋亡的影响
目的 构建靶向人IRE1a 的 shRNA 干扰质粒(pSUPER-IRE1a)并观察其对人 HeLa 细胞和HepG2 细胞增殖及凋亡的影响.方法 设计并合成靶向 IREla 基因的两条 shRNA,分别克隆至真核表达载体 pSUPER 构建重组质粒 ps1、ps2,依次转染入 HeLa 细胞和 HepG2 细胞中.采用RT-PCR 检测 pS1、ps2转染前后IRE1a 在 HeLa 细胞和 HepG2 细胞中的 mRNA 水平,免疫印迹检测 psl、ps2 转染前后 IRE1a 蛋白的表达;MTT 比色法、BrdU/DAPI 双免疫荧光法及流式细胞仪分别检测各重组质粒对 HeLa 细胞和 HepG2细胞增殖及凋亡的影响.结果 干扰质粒(pSUPER.IREIa)能有效抑制 HeLa 细胞和 HepG2 细胞中IRE1a 基因的表达;成功转染后,细胞处于内质网应激 (ER stress) 状态时,各实验组细胞增殖率及凋亡率与对照组比较,差异均具有统计学意义(P<0.05).结论 成功构建靶向人 IREla 的 shRNA 真核表达载体pS1、ps2,有效抑制了 HeLa 细胞和 HepG2 细胞中 IRE1a 的表达;细胞处于 ERS 状态时,IREla-shRNA有效促进HeLa、HepG2 两种肿瘤细胞的增殖;抑制 HeLa 和 HepG2 细胞的凋亡.
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用于酵母双杂交的 HL-60细胞 ds cDNA 文库的构建
目的 构建用于酵母双杂交的 HL-60 细胞 ds eDNA 文库.方法 采用 CLONTECH 公司提供的SMART 技术,提取对数生长期 HL-60 细胞的总RNA,逆转录生成第一链 eDNA,LD PCR 合成 ds eDNA,与pGAOT7-Rec 共转化酵母菌AH109.结果 成功构建了用于酵母双杂交的 HL-60 细胞 ds cDNA 文库,AD转化效率为8×104 efu/3μg pGADT7-Rec.结论 HL-60 细胞 ds cDNA 文库可以充当酵母双杂交系统中的cD-NA文库,用于进一步筛选与 M-CSF 相互作用的非受体靶分子.
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含F/2A序列的抗 P185erbB2人鼠嵌合抗体慢病毒表达载体的构建
目的 构建含 F/2A 序列的抗 P185erbB2 人鼠嵌合抗体慢病毒表达载体,观察其在 293T 细胞中的表达.方法 用具有自我剪切能力的弗林蛋白酶(Furin)/口蹄疫病毒2A多肽(F/2A)连接人鼠嵌合抗体的重链和轻链,形成一个开放阅读框 (ORF),插入慢病毒表达载体pWPI,构建重组抗P185erbB2全长人鼠嵌合抗体表达载体pWPI/H-F2A-L.以已构建的慢病毒表达载体pWPI/H-IRES-L为对照质粒.应用磷酸钙沉淀法将慢病毒载体 3 质粒系统共转染入 293T 细胞进行包装,测定病毒滴度.再感染 293T 细胞,荧光显微镜下观察 GFP 的表达和转染效率,RT-PCR、ELISA 方法分别检测嵌合抗体 mRNA和蛋白的表达.结果 经测序鉴定,pWPI/H-F2A-L与预期设计一致;pWPI/H-F2A-L组的病毒滴度为4.3×105 TU/ml,而pW-PI/H-IRES-L 组的病毒滴度为3.5×105 TU/ml;两组重组慢病毒的转染效率分别为 87.68%和 79.08%:两组重组慢病毒感染 293T 细胞后,都有嵌合重链和嵌合轻链的表达,由F/2A介导的嵌合抗体的表达水平要高于由 IRES 介导的嵌合抗体.结论 成功构建了含F/2A序列的抗P185erbB2人鼠嵌合抗体慢病毒表达载体,为今后抗P185erbB2工程抗体的研究奠定了基础.
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胆汁酸G-蛋白偶联受体激动剂齐墩果酸对高脂饮食小鼠体内糖脂代谢的影响
目的 观察胆汁酸G-蛋白偶联受体(G protein-coupled receptor for bile acids,TGR5) 激动剂齐墩果酸 (oleanolic acid,OA)对肥胖小鼠体重及糖、脂代谢的影响,探讨齐墩果酸减轻肥胖小鼠体重的机制.方法 建立高脂饮食诱导的肥胖小鼠动物模型,并喂食 OA 进行干预.动态测定体重及第17周后内脏脂肪、肝脏重量,并进行葡萄糖耐量实验(glucose tolerence test,GTT);肝脏组织石蜡切片HE染色,光镜观察病理变化;Realtime PCR 检测肝脏组织糖代谢相关基因的表达及白色脂肪组织脂肪合成酶 (fatty acid syn-thase,FAS) 的表达.结果 OA 减轻肥胖小鼠的体重、内脏脂肪及肝脏的重量;改善肝脏脂质沉积;增强胰岛素敏感性.OA 抑制肝脏内葡萄糖-6-酸酶(glucose-6-phosphalase,G6Pc)的表达,并下调肥胖小鼠脂肪组织 FAS 的 mRNA 水平的表达.结论 TGR5 激动剂 OA 能减少高脂诱导的肥胖小鼠的脂肪堆积,其机制可能与 OA 能改善肥胖小鼠胰岛素抵抗,减少脂质合成有关.
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p100蛋白表达抑制的 HepG2肝癌细胞稳定株的建立
目的 建立 p100 表达抑制的 HepG2 肝癌细胞稳定株,并初步探讨 p100 在 HepG2 肝癌细胞中的功能.方法 用脂质体将含有真核细胞筛选标记 Neo 和 GFP 的 p100 shRNA 表达质粒转染人 HepG2 细胞,检测 HepC2 细胞稳定株 HepG2(p1OOI) 中p100 表达的抑制效果;平板细胞克隆形成实验检测细胞克隆形成能力;MTS 检测细胞存活;划痕实验检测细胞迁移能力.结果 成功获得了p100 表达抑制的 HepG2 肝癌细胞稳定 HepG2(p100I),其中 p100 的表达明显降低.并且实验表明,该 plOO 表达抑制稳定的克隆形成能力,抵抗化疗药物 Cisplatin 诱导的细胞死亡的能力和迁移能力明显低于对照组细胞.结论 p100 表达抑制的 HepG2 肝癌细胞稳定株的建立为研究 p100 蛋白在肝癌中的作用提供了体外细胞系模,基于此稳定株的研究,发现 p100 能够影响 HepG2 肝癌细胞的多种细胞功能.
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UHRF2结构域突变体的原核表达与纯化
目的 构建 UHRF2 各个以结构域为基础的突变体原核表达载体,在大肠埃希菌中表达并对融合蛋白进行纯化和鉴定.方法 以 pCMV-3xFlag-UHRF2 为模板,PCR 扩增 UHRF2 的各个结构域基因片段,各 PCR 产物经酶切后连接到 pGEX-4T-1 载体上;将重组载体转化大肠埃希菌 (BL21菌株),IPTG 诱导表达各 GST 融合蛋白,超声波破碎细菌,离心收获蛋白并经谷胱甘肽琼脂糖凝胶 4B(glutathione sepharose 4B) 亲合纯化;纯化的蛋白经 SDS-PAGE 电泳后用考马斯亮蓝染色或免疫印记实验鉴定各蛋白表达情况.结果 成功构建了 UHRF2 结构域突变体的原核表达载体,各突变体蛋白表达正确.结论 UHRF2 各结构域突变体的成功构建便于用 GST pull-down 实验研究 UHRF2 参与与其它蛋白相互作用的结构域,为了解UHRF2 功能打下了基础.
| 年 | 期数 |
| 2019 | 01 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2017 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 |
| 2011 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2010 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2009 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2008 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2007 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2006 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2005 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2004 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2003 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2002 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2001 | 01 02 03 04 05 06 |
