医学分子生物学杂志
Journal of Medical Molecular Biology 의학분자생물학잡지
- 主管单位： 中华人民共和国教育部
- 主办单位： 华中科技大学同济医学院
- 影响因子： 0.31
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 1672-8009
- 国内刊号： 42-1720/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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端粒及端粒酶活性的调控机制
广义的端粒由帽子、双链的串联重复序列的DNA核心部分及亚端粒构成,其结合蛋白是一个复合体,由TRF1、TRF2、TIN2、Pot1、TPP1、RAP1 6个亚单位组成;另外,还结合组蛋白的特定成分H3K9三甲基聚合体和H4K20三甲基聚合体.端粒酶主要由hTerc、hTert、dyskerin构成.端粒的功能主要受端粒酶的活性调控;而端粒酶活性主要受hTert及hTerc的转录水平和转录后的剪切、hTert的翻译等因素的调控.端粒与端粒酶结构和功能的异常与细胞衰老及肿瘤的发生、发展关系密切.
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CMTM2在男性生殖系统中的作用
CMTM2是首次发现的基因超家族CMTM(CKLF-like MARVEL transmembrance domain containing)的成员,位于染色体16q22.1.大多数CMTM成员在睾丸组织中均有较高表达.前期体外实验研究表明CMTM2在睾丸组织中高度表达,并主要位于精原细胞的细胞质和曲细精管周围液中;在LNCaP细胞中,CMTM2能够加强配体介导的雄激素受体(androgen receptor,AR)的转录;CMTM2在不育患者睾丸组织中具有明显差异表达,其基因和蛋白表达量随着不育程度的加深而减少.CMTM2与它上游的CMTM1、下游的9紧密连接,它们之间可能相互作用发挥作用.
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β-catenin的生物学功能与调控机制
β-连环蛋白(β-catenin)是一种胞内糖蛋白,具有双重功能.一是作为附着连接的组成部分,与钙黏蛋白结合形成复合体参与细胞间连接;二是作为信号分子,是Wnt信号途径的重要环节,在胚胎发育和肿瘤发生中起重要作用.β-catenin选择何种途径发挥作用,与不同配体竞争性结合密切相关.目前已经证实β-catenin Y142位点酪氨酸磷酸化是决定β-catenin功能的关键调控点,而E-cadherin、Lef1、APC和α-catenin 均参与β-catenin活性的调节,对细胞的命运有着重要影响.
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极小胚胎样干细胞的生物学特性
近年来,研究者从小鼠骨髓和其他组织脏器中分离并纯化了一类数量极其稀少的极小胚胎样干细胞(very small embryonic-like stem cells,VSELs).VSELs不仅表达多能干细胞的表面分子标记,并能向3个胚层方向分化.有学者推测,VSELs可能是在哺乳动物组织/器官的发育早期迁移并定居下来的,且能在特定情况下向组织特异的单潜能干细胞方向分化.据此,VSELs可能在成体组织的更新和损伤组织的再生修复过程中发挥重要作用.
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选择性雌激素受体调节剂
雌激素替代疗法(estrogen replacement therapy,ERT)是治疗绝经后综合征的首选治疗方案,但是长期应用导致子宫内膜增生、乳腺癌等.选择性雌激素受体调节剂主要通过ER 亚型、共调节子、靶启动子、雌激素受体相关受体等机制实现其组织选择性,在发挥骨骼、心血管保护作用的同时,减少了对乳腺及生殖系统的副作用.目前,选择性雌激素受体调节剂的种类、作用的组织特异性及其临床应用在医学界引起广泛关注,具有广阔的发展前景.
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表皮生长因子受体与他莫西芬耐药机制
雌激素受体及其信号通路在乳腺癌的发生发展中发挥着关键作用.到目前为止,抑制或阻断雌激素信号通路的内分泌治疗尤其是他莫西芬,仍是对雌激素受体阳性乳腺癌患者有效的治疗手段之一.然而,他莫西芬的耐药问题直接影响了乳腺癌患者的治疗及预后.近多项研究表明雌激素受体与表皮生长因子受体家族尤其是HER2介导的信号传导通路在多个点上相互交叉,彼此影响,与他莫西芬的耐药密切相关
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酵母双杂交系统在膜蛋白相互作用研究中的应用
膜相关蛋白约占细胞总蛋白质中的1/3,它们大都参与了细胞的诸多生理、病理过程和药物反应机理.研究膜蛋白的相互作用对于揭示细胞的生命活动规律及寻找药物作用靶标都有重要的意义.由于膜蛋白本身的特性及其难以进入核内等原因,经典的酵母双杂交技术并不适用于检测膜蛋白间的相互作用.针对在活细胞中研究膜蛋白相互作用的需要,近年来国际上先后发展了一系列用于膜蛋白相互作用研究的酵母双杂交新系统,并取得了许多重要发现.
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血清/血浆microRNA及其应用
微小核糖核酸(microRNA,miRNA)在生物体的生长、发育及疾病的发生发展等过程中起着十分重要的作用.目前,人们关注的主要是miRNA在组织细胞内的功能.然而,近的研究发现血清/血浆中存在一些循环的miRNA,血清/血浆miRNA在肿瘤、糖尿病等多种疾病中呈特异性表达,提示血清miRNA可作为潜在的生物标记物用于疾病的诊断和治疗.
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肺炎链球菌假想蛋白SPD0873的表达纯化及保守性分析
目的 通过构建原核表达载体,获得纯化的肺炎链球菌S.pn重组假想蛋白SPD0873,并制备多克隆抗体,进一步分析其在常见S.pn菌株中的保守性.方法 分离培养D39型肺炎链球菌,获取其基因组DNA.利用PCR方法扩增去除信号肽的spd0873序列,采用基因体外重组法将spd0873序列克隆到原核表达载体pET-32(a)内,测序鉴定.将重组质粒转化到E.coli Rossetta(DE3)中,经IPTG诱导大量表达融合6个组氨酸标签的SPD0873重组蛋白,经Ni-NTA树脂纯化后,获得的重组蛋白用SDS-PAGE和Western 印迹鉴定;将鉴定后纯化的蛋白免疫BALB/C小鼠制备多克隆抗体,并用间接ELISA检测多克隆抗体的效价,Western 印迹方法分析多克隆抗体的特异性,同时,鉴定该蛋白在5种常见肺炎链球菌分离株的保守性.结果 克隆的spd0873序列与GenBank中的数据相符,并实现了SPD0873蛋白高水平的可溶表达.纯化蛋白免疫BALB/C小鼠获得高滴度、高特异性的的多克隆抗体,Western 印迹验证SPD0873蛋白在5株常见肺炎链球菌菌株中均有表达.结论 成功制备了高滴度、高特异性的SPD0873蛋白多克隆抗体,同时,检测到SPD0873蛋白在5种常见的肺炎链球菌菌株中非常保守,为研究该蛋白的生物学功能及肺炎链球菌多肽联合疫苗的研制奠定了基础.
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人血红素加氧酶-1的原核表达、纯化及其中和抗体的制备
目的 确定人血红素加氧酶-1(human heme oxygenase-1,hHO-1)在大肠埃希菌中的表达条件与纯化方法,利用纯化的蛋白制备具有中和活性的hHO-1多克隆抗体.方法 将hHO-1原核表达质粒pMW172/hHO-1转入大肠埃希菌菌株BL21,通过改变摇床转速、诱导剂IPTG浓度和培养时间确定hHO-1蛋白的佳可溶性表达条件;利用超声破碎、高速离心、分级盐析、分子筛层析等方法纯化hHO-1蛋白,建立体外HO-1活性测定方法检测hHO-1蛋白的活性;利用纯化的hHO-1活性蛋白作为抗原免疫新西兰兔,制备多克隆抗体;利用ELISA方法和Western印迹技术分别测定抗体的效价和特异性,通过HO-1活性测定检测抗体的中和活性.结果 确定hHO-1佳可溶性表达条件为:37 ℃、200 r/min培养3 h后,0.1 mmol/L IPTG诱导培养4 h.超声破碎菌体,上清经30%～40%盐析纯化及分子筛层析纯化,获得活性hHO-1蛋白,收得率为30.3%,纯化倍数为2.83倍,纯度为90 %.制备的抗hHO-1的兔血清效价达到10~6,并能中和掉46 % hHO-1的催化活性.结论 为hHO-1蛋白的表达和纯化以及多克隆抗体制备确立了可行的技术方案;获得了高纯度活性hHO-1蛋白及hHO-1多克隆抗体,为HO-1功能、结构研究,以及相关疾病研究奠定了基础.
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重组pEGFP-C2-p100-TSN点突变质粒构建及表达
目的 将6个不同的p100-TSN.Mutants基因片段分别定向连入PEGFP-C2质粒中,使P100-TSN突变蛋白能够与绿色荧光蛋白在COS7细胞中融合表达,从而为进一步研究p100蛋白TSN结构域的功能奠定实验基础. 方法 利用EcoR Ⅰ和XhoⅠ双酶切方法从6个pcDNA3.1 (+) -p100-TSN.Mutants重组质粒中分别获得p100-TSN.Mutants的cDNA片段,将其连入pEGFP-C2质粒载体中,再将成功构建的6个pEGFP-C2-p100-TSN.Mutants质粒分别转染COS7细胞中,荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白表达.结果 ①将重组质粒进行双酶切鉴定可见p100-TSN.Mutants的cDNA片段;②转染重组质粒后可观察到绿色荧光蛋白的表达.结论 ① 6个pEGFP-C2-p100-TSN.Mutants重组质粒构建成功;② p100-TSN突变蛋白可与绿色荧光蛋白在COS7细胞中融合表达.
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血红素加氧酶-1对肝癌细胞细胞周期调控因子的影响
目的 观察血红素加氧酶-1(heme oxygenase 1,HO-1)对人肝癌细胞HepG2细胞周期调控因子的影响.方法 构建含有野生型和突变型HO-1基因的重组载体pcDNA3.1(+)-wtHO-1和pcDNA3.1(+)-mHO-1G143H.利用脂质体介导的方法将构建好的重组载体转染肝癌细胞系HepG2,以空载体转染作为对照组.通过G418筛选建立稳定表达野生型和突变型HO-1的HepG2肝癌细胞系.经半定量RT-PCR、Western印迹检测转染细胞系中HO-1 mRNA和蛋白的表达水平.在HO-1表达改变的稳转细胞系中,利用Western 印迹检测转染细胞系中P21、P27蛋白表达水平.结果 成功实现了野生型和突变型HO-1在HepG2细胞中的过表达;野生型和突变型HO-1过表达均能诱导抑癌基因p21和p27的表达.结论 HO-1过表达诱导抑癌基因p21和p27的表达与血红素分解产物无关.HO-1可能通过其它机制调节p21和p27的表达.
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PSF不同功能片段融合蛋白的构建及其在细胞内的分布
目的 将人类PSF基因的不同功能片段定向连入pEGFP-C2质粒,使PSF蛋白的各功能片段与绿色荧光蛋白在HeLa细胞内融合表达,观察其在HeLa细胞中的表达及定位. 方法 以重组质粒pEGFP-C2-PSF为模板,PCR法扩增出目的基因,将扩增片段双酶切后连接到质粒pEGFP-C2上,构建重组质粒pEGFP-C2- PSF(Ⅰ～Ⅴ).将构建成功的pEGFP-C2-PSF(Ⅰ～Ⅴ)质粒脂质体法转染HeLa细胞,Western印迹检测融合蛋白的表达,并在荧光显微镜下观察融合蛋白的定位与分布. 结果 成功构建质粒pEGFP-C2-PSF(Ⅰ～Ⅴ),并在HeLa细胞中实现表达;Western印迹检测到融合蛋白GFP-PSF(Ⅰ～Ⅴ);在激光共聚焦显微镜下观察到绿色的融合蛋白表达和定位. 结论 人类PSF基因的不同功能片段的重组质粒pEGFP-C2-PSF(Ⅰ～Ⅴ)构建成功,可用于标记PSF蛋白的不同功能片段,为进一步研究PSF在信号转导中的作用机制以及其生物学功能奠定基础.
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新型重组人内毒素结合肽突变体的构建及原核表达纯化
目的 构建新型人内毒素结合肽(a new endotoxin binding peptide consisting of 25 amino acid residues,EBP_(25))及其突变体(mutant of EBP_(25),mEBP_(25))的原核表达重组质粒,并在大肠埃希菌中诱导表达.方法 采用PCR法,扩增EBP_(25)基因,构建pET-30-EBP_(25)融合表达载体并转化E.coli DH5α扩增.重组质粒经酶切和测序鉴定后,应用快速定点突变法将EBP_(25)第2位缬氨酸和第5位谷氨酰胺所对应碱基均替换成赖氨酸所对应的碱基,突变后重组质粒再经测序鉴定后,将二者转化至E.coli BL_(21)(DE_3)PlysS后经IPTG诱导表达,表达产物采用Western印迹进行鉴定后,用His-Tag亲和层析对融合蛋白进行纯化. 结果 两次测序结果 显示人EBP_(25)和mEBP_(25)重组序列和理论设计序列完全一致后,经IPTG诱导表达获得目的融合蛋白,通过SDS-PAGE电泳、Western 印迹证实蛋白表达的特异性,并对蛋白进行纯化,获得EBP_(25)和mEBP_(25)融合蛋白. 结论 构建、表达纯化了EBP_(25)和mEBP_(25)融合蛋白,为进一步研究其中和内毒素/脂多糖活性奠定了基础.
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靶向大鼠β-catenin基因的shRNA真核表达质粒的构建与筛选
目的 构建靶向β-连环蛋白(β-catenin)基因的shRNA的真核表达质粒,并筛选出沉默β-catenin基因效果明显的shRNA表达质粒.方法 设计3对针对β-catenin 基因不同位点的shRNA片段,构建携带此shRNA片段的真核表达质粒(shRNA1～3)并行测序分析,电穿孔转染神经干细胞(neural stem cells NSCs),测定转染率,并分别采用RT-PCR及Western 印迹检测β-catenin mRNA和蛋白表达情况,免疫组化方法检测shRNA对神经干细胞分化的影响.结果 构建靶向β-catenin基因的shRNA真核表达重组质粒shRNA1,2,3.经筛选,NSCs转染shRNA3后,β-catenin RNA水平和蛋白水平均明显低于阴性对照组和空白对照组(0.08±0.00 vs 0.75±0.01,0.74±0.02;0.12±0.10,vs 0.56±0.02,0.65±0.01,P均＜0.01;与空白组和阴性对照组相比,shRNA3组NSCs分化为GFAP阳性细胞的百分率明显增加,分化为NSE阳性细胞的百分率明显减少(P＜0.05).结论 β-catenin RNA3对神经干细胞的β-catenin表达具有明显抑制作用,可影响细胞的分化.为研究wnt/β-catenin信号途径在NSCs生长分化中的作用奠定基础.
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干细胞因子逆转录病毒表达载体的构建及体外性质研究
目的 通过逆转录病毒介导两种类型人干细胞因子在NIH3T3细胞中稳定表达,并研究它们对白血病细胞的作用.方法 用DNA重组技术构建并鉴定可溶型及膜结合型干细胞因子的重组逆转录病毒表达载体MSCV-PGK-GFP-sSCF、MSCV-PGK-GFP-mSCF,与空载体对照MSCV-PGK-GFP分别转染Phoenix细胞包装病毒,并感染NIH3T3细胞,流式分选术获得3种阳性细胞,CCK8法分别检测与其共培养的K562细胞的增殖情况.结果 成功构建了sSCF、mSCF逆转录病毒表达载体;经Phoenix包装的重组及对照逆转录病毒成功感染NIH3T3细胞,获得了稳定表达细胞株NIH3T3-S、NIH3T3-M和对照细胞株NIH3T3-V.共培养中NIH3T3-S、NIH3T3-M均可促进K562细胞的增殖,且在低血清条件下,NIH3T3-M的作用高于NIH3T3-S.结论 可溶性及膜结合SCF分别通过旁分泌和并置性作用促进白血病细胞的增殖.
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ASCT2胞外域ECL2原核可溶性表达条件的优化及其纯化
目的 构建重组人ASCT2胞外域ECL2融合蛋白的原核表达载体,优化其在大肠埃希菌中可溶性表达的条件,并获得纯化的ECL2蛋白.方法 以PCR方法扩增编码ECL2的DNA片段,插入至pET-41b载体中,构建ECL2的原核表达载体,转化至大肠埃希菌,优化可溶性表达条件,GSH-Agarose亲和层析纯化并鉴定,与MCF-7细胞结合活性的测定.结果 免疫印迹显示,ECL2融合蛋白既表达于包涵体中,也能以可溶性形式表达.随IPTG浓度的增高,可溶性表达水平提高;培养温度为28 ℃和33 ℃时可溶性产物高于37 ℃;而随诱导时间的延长至12 h以上,可溶性表达量下降.可溶性表达优化条件为:温度33 ℃、IPTG浓度0.4 mmol/L、诱导时间4 h.经亲和层析获得高纯度ECL2蛋白并具有与MCF-7细胞结合活性.结论 优化了ECL2融合蛋白的可溶性表达条件,通过亲和层析一步法可获得高纯度融合蛋白.
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用巢式PCR检测育龄妇女人群人细小病毒B19感染的研究
目的 调查人类细小病毒B19在武汉地区普通人群,尤其是育龄妇女中的感染状况.方法 采集武汉地区2家医院的血液样本1 700份,分为两组.以血清中提取的DNA为模板,进行巢式PCR扩增.结果 第Ⅰ组(普通组,包括男性和女性)阳性检测率为4.50%,第Ⅱ组(妇女组)阳性检测率为8.33%.结论 武汉地区育龄妇女的B19感染率高于普通人群,很有必要对孕妇进行诊断从而预防新生儿感染B19病毒.另外,由于巢式PCR具有灵敏、特异、简便等优点,适合于用来检测血液样本中的人细小病毒B19.
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APPSWE转基因小鼠发育过程中海马CA1区神经细胞凋亡研究
目的 探讨APPSWE转基因小鼠发育过程中海马CA1区神经细胞凋亡规律.方法 取不同发育时间(P0、P7、P14、P30、P90、P180)APPSWE转基因模型鼠与同时间点对照鼠,Nissl染色观察海马结构和锥体细胞形态,免疫组织化学方法观察海马细胞内Caspase-3表达变化,RT-PCR检测Caspase-3 mRNA表达变化.结果 随着小鼠的生长发育,P14时间点以后,模型组CA1区神经元Caspase-3阳性细胞密度比对照组高,RT-PCR检测结果与Caspase-3免疫组织化学结果基本一致.结论 APPSWE转基因小鼠发育中的海马神经细胞过度凋亡可能与阿茨海默病的发生、发展具有联系.
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乙型肝炎病毒对HepG2细胞侵袭的影响
目的 研究HBV全长对HepG2细胞侵袭相关基因表达及活性的影响,探讨HBV在整体水平对HepG2细胞侵袭的影响.方法 采用定量PCR分析HBV对HepG2细胞MMP2、9和TIMP1-4基因转录的影响;通过明胶酶谱及反相明胶酶谱检测MMP2、MMP9及TIMPs的活性;应用体外侵袭小室法检测细胞的侵袭能力.结果 HBV的复制可以促进HepG2细胞MMP2、MMP9、TIMP1和TIMP3基因的转录,抑制TIMP4基因转录,增强HepG2细胞MMP2 、MMP9的活性并增强细胞中TIMP1、TIMP3功能,HBV稳定复制的细胞具有更强的体外侵袭能力.结论 HBV可影响HepG2细胞MMPs和TIMPs的基因转录、表达及功能,促进HepG2细胞的体外侵袭,这可能与HBV相关的HCC侵袭转移密切相关.
| 年 | 期数 |
| 2019 | 01 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2017 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 |
| 2011 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2010 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2009 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2008 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2007 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2006 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2005 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2004 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2003 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2002 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2001 | 01 02 03 04 05 06 |
