乙型肝炎病毒感染不同阶段患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞的测定

目的 测定HBV感染不同阶段患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)的频率及标记分子,并分析其与临床指标的相关性.方法 采集79例慢性乙型肝炎(CHB)、12例急性乙型肝炎(AHB)患者、26例无症状HBV携带者(ASC)和20例健康对照的外周血,流式细胞仪分析Treg频率、Treg细胞表面和胞内特征性分子的表达.普通RT-PCR和相对荧光定量PCR测定叉头/翼状转录因子3(Foxp3)在CD25+Treg细胞的表达水平.所有患者及健康对照均经ELISA检测HBV血清标记物水平,实时荧光定量PCR测定血清HBV DNA载量,并进行肝功能检测.结果 总CD4+CD25+T细胞占外周血CD4+T细胞的比率,在各患者组和健康对照组之间差异均无统计学意义(P＞0.05).HBeAg阳性CHB组CD4+CD25高表达T细胞频率(3.42%±0.81%)与HBeAg阴性CHB组(3.19%±0.67%)、ASC组(3.05%±0.64%)比较,差异无统计学意义(均P＞0.05),但明显高于健康对照组(2.72%±0.71%,P=0.034)和AHB组(2.25%±0.54%,P=0.013).CD4+CD25高表达T细胞表面高表达CD45RO、CD25分子,低表达CD45RA,细胞内高表达细胞毒性T淋巴细胞相关抗原-4(CTLA-4)和Foxp3.各患者组及健康对照组Treg中Foxp3表达水平的差异无统计学意义(P＞0.05).CHB组患者的Treg频率与血清病毒载量呈正相关(r=0.48,P=0.018).结论 Treg可能通过抑制T细胞免疫应答反应而影响病毒清除,并与CHB患者的持续感染密切相关.

快速和早期病毒学应答对慢性丙型肝炎患者持续病毒学应答的预测价值

目的 探讨快速病毒学应答(RVR)和早期病毒学应答(EVR)对慢性丙型肝炎患者持续病毒学应答(SVR)的预测价值.方法 应用酶免疫方法检测105例慢性丙型肝炎患者基因型.患者给予聚乙二醇干扰素α-2a联合利巴韦林治疗.在治疗第4、12、24周和随访24周时检测患者的HCVRNA,观察不同时期的病毒学应答率以及对SVR的影响.结果 105例患者中,HCV基因1型44例,占41.9%;2型46例,占43.8%;3型15例,占14.3%.基因1型患者的RVR为51.2%,明显低于基因2或3型患者的73.8%(χ2=5.460,P=0.019);基因1型患者的EVR为73.2%,明显低于基因2或3型患者的96.7%(χ2=12.220,P=0.000);基因1型患者的SVR为43.9%,明显低于基因2或3型患者的75.4%(χ2=10.413,P=0.001).获得RVR的患者SVR为80.3%,明显高于未获得RVR的30.6%(χ2=24.662,P=0.000).RVR的阳性预测值均高于EVR,RVR的阴性预测值均低于EVR,但两者相比差异无统计学意义(P＞0.05).结论 基因1型患者的RVR、EVR和SVR均明显低于基因2或3型患者,RVR、EVR和SVR与基因型相关;RVR对慢性丙型肝炎患者SVR预测价值与EVR类似.

败血病患儿血浆甘露糖结合凝集素表达水平的变化及其基因分型

目的 了解败血病患儿血浆甘露糖结合凝集素(MBL)表达水平的变化及其基因启动子和外显子Ⅰ区的多态性.方法 用ELISA法检测血浆MBL浓度,用序列特异性引物(SSP)PCR法和序列分析法对MBL基因进行分型.统计分析采用非参数检验,遗传学分析采用SHEsis软件.结果 31例败血病患儿急性期和恢复期血浆MBL浓度中位数分别为2 978 ng/mL和1 254 ng/mL,急性期明显高于恢复期(P＜0.01),且两者间呈线性相关(r=0.781).PCR-SSP和序列分析显示,启动子-550位点H/H、H/L和L/L型分别占45.2%、29.0%和25.8%,等位基因突变频率为0.290,各型等位基因分布不符合Hardy-Weinberg平衡(χ2=4.90,P＜0.05);-221位点Y/Y和X/Y型分别占83.9%和16.1%,无X/X型,等位基因突变频率为0.098;各型等位基因分布符合Hardy-Weinberg平衡(χ2=0.008,P＞0.05).外显子Ⅰ A型、A/B型和B/B型分别占71.0%、25.8%和3.2%,+54密码子等位基因突变频率为0.161,各型外显子的分布符合Hardy-Weinberg平衡(χ2=0.066,P＞0.05).所有样本5'端非转录区+4位点均为P型,无C或D型外显子发现.A/A型外显子急性期和恢复期MBL浓度中位数分别为3 782 ng/mL和1 436 ng/mL,显著高于A/B型外显子的565 ng/mL(P＜0.01)和233 ng/mL(P＜0.01)以及B/B型外显子的16 ng/mL和9 ng/mL,但A/A型急性期MBL浓度的增加倍数为1.76±1.10,其他型为1.11±0.82,差异无统计学意义(t=1.577,P=0.126).结论 败血病患儿急性期血浆MBL浓度显著高于恢复期,且两者呈线性相关,血浆MBL浓度高低与MBL结构基因关系密切.

甘草酸二铵对慢性乙型肝炎患者Fas/FasL表达的影响

甘草酸二铵有抗炎、抗氧化、保护细胞膜及改善肝功能等作用[1].近年来已广泛应用于慢性乙型肝炎(CHB)的治疗.Fas与Fas配体(FasL)结合,可引起表达Fas的靶细胞发生凋亡,细胞毒性T淋巴细胞(CTL)介导的细胞免疫在乙型肝炎的发病机制中起重要作用,其主要机制是通过FasL介导Fas阳性的肝细胞凋亡[2].

拉米夫定对乙型肝炎相关失代偿肝病患者预后的影响

目的 探讨长期拉米夫定治疗对伴有HBV复制的失代偿肝病患者预后的影响.方法 采取随机、对照队列研究方法,将168例患者分为应用拉米夫定的试验组及未用拉米夫定的对照组,直至患者发生终点事件或研究结束(研究截止日为2006年6月30日),准确记录生存时间.终点事件定义为肝病相关死亡或确诊为肝细胞癌(HCC).采用Kaplan-Meier检验进行生存分析,并计算生存率,对可能影响预后的因素引入Cox比例风险模型,作多因素回归分析.结果 至研究结束,对照组中位生存时间为635 d,2年生存率为41.4%.实验组患者因其至研究结束时生存率超过50.0%,故无法估计中位生存时间,2年生存率为84.6%(Log-rank检验:χ2=29.377,P=0.000).将17个经单因素分析对预后有影响的变量引入Cox模型,在α=0.05水平上,抗病毒治疗是影响预后的独立保护性因素(β=1.180,RR=0.307,P=0.000).结论 长期拉米夫定治疗能延长乙型肝炎相关失代偿肝病患者的存活时间及发展为HCC的时间,在一定程度上改善预后.

肝硬化患者外周血单核细胞表面CD14表达及其与Toll样受体4、2的相关性

目的 检测肝硬化患者外周血单核细胞(PBMC)表面CD14的表达,并探讨其与Toll样受体(TLR)-4、TLR-2的相关性,及CD14表达与细菌感染的关系.方法 采用三色荧光染色法,荧光素标记的抗TLR-2、抗TLR-4、抗CD14单克隆抗体对57例研究对象(肝硬化腹水患者30例,肝硬化患者12例,健康对照者15例)血细胞表面分子进行免疫荧光染色,应用流式细胞仪检测;肝硬化患者血及腹水细菌培养采用床边接种10 mL至BACTECTM血培养瓶方法送细菌培养.组间比较采用两样本t检验,相关性分析采用Spearman秩相关.结果 CD14平均荧光强度的几何均数(GMF)在肝硬化腹水组为413.8±80.4,健康对照组为187.7±34.9,两组比较差异有统计学意义(P＜0.05);肝硬化腹水与无腹水患者组(189.8±29.5)比较,差异有统计学意义(P＜0.05);肝硬化无腹水患者组与健康对照组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).在肝硬化腹水组,CD14的表达与TLR-2、TLR-4的表达呈显著正相关性(P=0.01,r=0.849;P=0.05,r=0.483).14例肝硬化腹水患者腹水细菌培养呈阳性.结论 外周血中PBMC表面CD14、TLR-2和TLR-4的高表达提示肝硬化腹水存在细菌感染和细菌移位导致的机体炎性反应,有可能进一步加重肝损伤.

肾综合征出血热患者外周血循环内皮细胞的检测及临床意义

目的 探讨肾综合征出血热(HFRS)患者循环内皮细胞(CEC)数量变化的临床意义.方法 共纳入72例HFRS患者及30例健康对照者,利用Percoll密度梯度离心法分离外周血CEC进行检测.数据行t检验.结果 HFRS患者发热期CEC数量(单位为细胞数/0.9 μL)为23.36±11.53,低血压休克期为48.25±18.40,少尿期为17.38±7.38,多尿期为4.56±1.58,恢复期为4.02±1.39,对照组为3.33±2.06,发热期、低血压休克期、少尿期明显高于多尿期、恢复期和健康对照组,差异有统计学意义(P＜0.01);HFRS发热期各型(轻型、中型、重型和危重型)患者CEC数量与健康对照组比较,差异均有统计学意义(P＜0.01),发热期各型之间CEC数量随着病情加重逐渐增多,各型之间比较差异均有统计学意义(P＜0.01).结论 HFRS患者外周血CEC数量呈动态变化,与病情发展及轻重相关,HFRS患者外周血CEC的早期检测可作为早期诊断、早期预测病情轻重的可靠指标.

HBeAg阳性慢性乙型肝炎患者拉米夫定治疗后远期疗效相关因素分析

核苷(酸)类药物治疗HBeAg阳性患者有一替代性治疗终点,即实现HBeAg血清转换,同时伴有HBV DNA阴转和ALT正常.但达到替代性治疗终点并维持上述疗效6个月后停药,其远期疗效以及影响远期疗效的相关因素应引起关注,对此我们进行了初步探讨.

丙型肝炎病毒F蛋白克隆表达及其抗原性

目的 在原核表达系统中诱导表达1b型HCV F蛋白及Core蛋白,建立F抗体ELISA检测方法,对F蛋白在慢性丙型肝炎患者体内的抗原性作相关研究.方法 应用RT-PCR方法从HCV感染者血清中获得Core蛋白编码基因,在第42位和144位人工增加或减少1个核苷酸,使其读码框移位,利用多重PCR技术拼接获得全长F蛋白的基因序列,分别构建编码F和Core蛋白的重组质粒.将鉴定正确的重组质粒转人大肠埃希菌BL21中,加入异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达HCV Core和F蛋白.应用镍离子亲和层析树脂纯化蛋白,并用Western印迹法鉴定其免疫原性.建立ELISA检测方法对121例慢性丙型肝炎患者血清巾抗F蛋白抗体进行检测.结果 成功构建含HCV F蛋白、Core蛋白编码基因的重组克隆,表达纯化获得的HCV F蛋白和Core蛋白,Western印迹法鉴定并确定其特异性.121例慢性丙型肝炎患者血清巾抗Core和抗F抗体的阳性率分别是93%和65%,而40例HBV感染者和40例健康对照者血清反应阴性.结论 F蛋白在HCV自然感染中有表达,并能产生特异的免疫反应,其生物学功能及在HCV感染过程中的作用有待进一步研究.

暴发性肝功能衰竭大鼠肝组织核因子-κB和诱导型一氧化氮合酶的表达及其意义

目的 探讨核因子-κB(NF-κB)在暴发性肝功能衰竭肝细胞炎性反应中的作用机制.方法 Wistar大鼠腹腔注射D-氨基半乳糖(D-Gain)和脂多糖(LPS)制作暴发性肝功能衰竭模型.免疫组织化学技术分别观察注药后2、4、8、12和24 h大鼠肝组织中NF-κB和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的表达情况,分析NF-κB、iNOS与暴发性肝功能衰竭的关系.结果 模型组NF-κB p65蛋白表达阳性细胞主要为肝细胞、库普弗细胞.造模后4、8和12 h时,核阳性表达的细胞数逐渐增多,明显高于对照组.2 h组主要是非实质细胞的胞质着色;而4、8、12和24 h组以肝细胞胞核着色为主.对照组不同时间点NF-κB p65蛋白表达差异无统计学意义(P＞0.05),模型组则随肝细胞坏死程度的加重而增加(r=0.694,P＜0.01).随着肝细胞炎性反应、坏死程度的增高,模型组肝细胞质iNOS表达逐渐增多(r=0.867,P＜0.01),以肝细胞表达为主.对照组肝细胞质iNOS表达较弱(P＞0.05).肝组织中NF-κB活化与iNOS表达呈正相关(r=0.801,P＜0.01).结论 NF-κB可能是暴发性肝功能衰竭肝细胞炎性反应、坏死过程中的关键环节.

雌二醇纳米粒对大鼠免疫性肝纤维化模型的作用

目的 比较β-雌二醇纳米化前、后对猪血清诱导的肝纤维化动物模型肝脏纤维化的疗效及雌二醇抗肝纤维化的机制.方法 将S-D大鼠随机分为健康对照组、模型对照组、雌二醇治疗组、雌二醇纳米粒组和空白纳米粒组,每组10只,除健康对照组外,其余4组均腹腔注射猪血清(0.5 mL/次,2次/周).雌二醇治疗组、雌二醇纳米粒组和空白纳米粒组在第9周给予腹腔注射相应的干预药物,每周2次;在12周末处死大鼠.免疫组织化学法检测平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达;比色法检测一氧化氮合酶(NOS)、一氧化氮(NO)、总抗氧化能力(T-AOC)和谷胱甘肽(GSH);RT-PCR检测肝组织Ⅰ、Ⅲ型胶原、结缔组织生长因子(CTGF)、转化生长因子-β1(TGF-β1)及基质金属酶(MMP-1)、组织金属蛋白酶抑制剂(TIMP-1)mRNA的表达.结果 肝纤维化动物模型肝脏组织的Ⅰ、Ⅲ型胶原、TGF-β1、CTGF和TIMP-1 mRNA的表达在雌二醇纳米粒治疗组和雌二醇治疗组均有明显减少,MMP-1 mRNA的表达明显增多,与模型对照组、空白纳米粒组比较,差异有统计学意义(P＜0.05);经治疗后雌二醇治疗组和雌二醇纳米粒组的T-AOC、NO、NOS、GSH活性均有提高,与模型对照组、空白纳米粒组比较,差异有统计学意义(P＜0.05);但雌二醇治疗组和雌二醇纳米粒组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 β-雌二醇通过抗氧化、降低Ⅰ、Ⅲ型胶原产生,抑制与肝纤维化有关的细胞因子TGF-β1及其下游信号CTGF的表达,促进MMP-1表达但抑制TIMP-1的表达等发挥其抗肝纤维化作用.纳米化β-雌二醇的抗大鼠免疫性肝纤维化作用比无纳米化β-雌二醇更强.

低相对分子质量肝素抗肝纤维化作用及对肝细胞生长因子表达的影响

近年研究证实,肝素除有抗凝血、抗血栓作用外,还有抗炎、调节免疫、调节多肽生长因子、抑制细胞增殖、抗肿瘤转移等多种生物学活性和药理作用,肝素还有潜在的抗肝纤维化作用[1],但其详细的作用机制还有待深入研究.

肝细胞核因子3结合位点的突变及对抑制乙型肝炎病毒复制的影响

目的 研究肝细胞核因子(HNF)3结合位点HNF3β对HBV转录和复制调节作用的机制.方法 通过分别位于HBV基因组的多聚酶编码区Pp、PS1p和sp区上的HNF3结合位点,构建HBV基因组2个或3个位点的复合突变,获得4个复合突变型重组质粒;分别转染非肝源性细胞小鼠成纤维细胞株(NIH3T3),Northern印迹法检测3.5 kb、2.4 kb/2.1 kb、0.7 kb HBV RNA的转录水平,Southern印迹法检测HBV DNA复制中间体水平,观察上述突变是否会影响HNF3β对HBV转录和复制的抑制作用.结果 在被转染的非肝源性细胞3T3中,HNF3β仍能降低4个复合突变型HBV重组质粒3.5 kb HBV RNA的转录水平,抑制HBV DNA的复制;与未共转染HNF3β相比,转录水平下降50%～75%、复制水平下降80%～96%.结论 在位于HBV基因组的多聚酶编码区Pp、PS1p和Sp区上的3个HNF3结合位点中,即使其中2个或3个结合位点同时联合突变,HNF3β仍能抑制HBV的转录和复制.Pp、PS1p和Sp区HNF3结合位点的突变不能阻断HNF3β对HBV复制的抑制作用.

急性肝功能衰竭肝细胞损伤机制与治疗进展

肝功能衰竭(liver failure)是临床常见的严重肝病症候群,病死率极高.各国学者对肝功能衰竭的定义、分类、诊断和治疗等问题仍有很多不同意见.2005年美国肝病学会发布了对急性肝功能衰竭处理建议,我国中华医学会感染病学分会肝功能衰竭与人工肝学组和中华医学会肝病学分会重型肝病与人工肝学组借鉴国内外新研究成果,2006年制订了我国第一部肝功能衰竭诊疗指南.

回眸干扰素研究历程,全面认识干扰素

2007年是发现干扰素50周年.有关干扰素的基础和临床研究涉及诸多领域,其临床应用价值也已得到充分肯定,尤其是用于慢性病毒性肝炎的治疗,彻底打破了慢性病毒性肝炎抗病毒治疗"无药可用"的局面,使大量患者获益,或痊愈,或延长了寿命,或改善了生活质量.

2008年本刊一些常用词汇可直接用缩写