镇江地区B、C基因型慢性乙型肝炎临床因素分析

目的 比较B、C基因型慢性乙型肝炎患者(慢乙肝)在临床特征上的差异,总结与C基因型乙型肝炎有关的临床因素.方法 选择经肝穿刺行肝组织病理检查、并经基因型检测确定为B、C基因型的患者共78例,检测血清HBV DNA载量,统计重型肝炎、肝硬化、肝细胞癌和HBeAg阳性发生率,确定肝组织病理炎症分级及纤维化分期.通过x2检验和多分类Logistic多元回归,分析B、C基因型患者间上述指标的差异,总结与HBVC基因型有关的临床因素.结果 HBV C基因型慢乙肝患者血Alb、前白蛋白均低于B基因型,而ALT、TBil及凝血酶原时间(PT)均高于B基因型,差异有统计学意义.HBV C基因型慢乙肝患者比率随肝组织炎症分级G0～G4(1.8%、11.1%、20.4%、33.3%、33.3%)及纤维分期S0～S4(5.6%、5.6%、14.8%、33.3%、40.7%)进展均明显增加,而B基因型患者随炎症分级(16.7%、25.0%、25.0%、20.8%、12.5%)及纤维分期(16.7%、29.2%、20.8%、16.7%、16.7%)进展变化不大,两种基因型分布与炎症分级(x2=11.49,P=0.022)及纤维分期(x2=13.56,P=0.006)差异均有统计学意义.在HBV DNA＞1.0×106拷贝/mL时,C基因型患者比率明显高于B基因型(51.8%比12.5%),5.0×102～1.0×106拷贝/mL时差异不大(35.2%比45.8%),＜5.0×102拷贝/mL时明显低于B基因型(13.0%比41.7%),两种基因型分布与DNA载量差异有统计学意义(x2=13.25,P=0.001);C基因型慢乙肝患者HBeAg阳性率明显高于B基因型(61.1%比25.0%),差异有统计学意义(x2=8.67,P=0.003);C基因型患者发生失代偿期肝硬化比率明显高于B基因型(40.7%比4.2%),未发生肝硬化比率明显低于B基因型者(37.0%比75.0%),两种基因型患者发生肝硬化比率差异有统计学意义(x2=12.47,P=0.002).结论 C基因型慢乙肝患者与肝纤维化、炎症损伤程度、HBV标志物、肝硬化发生率及程度等均有较高的相关性.

无血清免疫学标志的乙型肝炎病毒株分子生物学某些特性的初步探讨

目的 了解无血清免疫学标志的HBV株分子生物学的改变.方法 收集104例不明原因性肝炎患者的血清,套式PCR扩增HBV S、X、C基因,HBV S、X区扩增产物测序和变异位点分析.结果 检测出隐匿性HBV感染13例.S基因区未发现有义突变,X基因区及重叠核心启动子区、增强子Ⅱ区发现多位点变异.结论 X基因区及重叠核心启动子区、增强子Ⅱ区多位点变异可能是无血清免疫学标志HBV株的分子基础.为深入研究隐匿性HBV感染的临床检测及防治奠定基础.

儿童脑脊液中人疱疹病毒的基因芯片检测

疱疹病毒科是一群中等大小、有包膜的DNA病毒,现已发现100多种.已知与人类疾病有关的疱疹病毒有8种:单纯疱疹病毒1型和2型(HSV-1、HSV-2)、水痘-带状疱疹病毒(VZV)、爱泼斯坦-马尔病毒(EBV)、巨细胞病毒(CMV)、人类疱疹病毒6型、7型和8型(HHV-6、HHV-7、HHV-8).

胎盘滋养层细胞的乙型肝炎病毒感染与宫内感染机制

目的 检测HBV对胎盘、胎肝和滋养层细胞的感染情况,探讨HBV的宫内感染机制.方法 研究对象包括20例孕妇胎盘组织、6例引产胎儿胎肝组织及体外培养的胎盘滋养层细胞.ELISA法检测孕妇外周血、胎儿脐血和6个月婴儿外周血HBV标志物;荧光定量PCR法检测血清和滋养层细胞中的HBV DNA;免疫组织化学法和免疫荧光法检测胎盘、胎肝组织及滋养层细胞中HBV标志物的表达;末端脱氧核糖核酸转移酶介导的缺口标记法(TUNEL)检测胎盘和滋养层细胞凋亡情况.结果 孕妇血清HBV DNA水平与胎儿脐血HBV DNA水平相关,脐血HBV DNA阳性者其母血HBV DNA＞1.0×107拷贝/mL;6例胎盘组织和3例引产胎儿胎肝组织中可见HBsAg免疫组织化学染色阳性细胞,其中1例胎肝组织中发现HBcAg阳性细胞;体外培养滋养层细胞与HBVDNA阳性血清共孵育后,可检测到HBsAg的表达,亦可检测到HBV DNA.体内和体外实验均检测到HBV感染后滋养层细胞凋亡呈增加趋势,且胎盘细胞的凋亡与脐血HBV DNA水平相关.体外实验结果显示,随感染时间的延长,滋养层细胞凋亡呈增加趋势.6个月后,12例新生儿有1例血清HBsAg、HBeAg和抗-HBc阳性,6例抗-HBs阳性.结论 HBV宫内感染的机制可能是通过HBV感染胎盘屏障而使胎儿发生HBV宫内感染.HBV在胎儿组织器官内的定位和复制可能是新生儿发生慢性HBV感染的重要因素.滋养层细胞凋亡可能是胎盘屏障阻断HBV宫内传播的一种保护性机制.

宿主细胞因子及黏病毒抵抗蛋白A基因多态性与干扰素治疗慢性乙型肝炎疗效的相关性

目的 探讨IFN治疗慢性乙型肝炎(CHB)患者的疗效与TNF-α启动子-238、-857、-863位点,IL-10启动子-1082、-592位点及黏病毒抵抗蛋白A(MxA)启动子-88位点单核苷酸多态性(SNP)的关系.方法 305例CHB患者IFNα-1b治疗12个月,随访至停药后6个月判断疗效,分为持续应答(SR)和非持续应答(NSR)组.应用PCR及限制性片段长度多态性方法,检测TNF-α-238、-857、-863和IL-10-592、1082及MxA-88位点的SNP.判断SNP与IFN疗效的关系.结果 本研究失访43例.262例CHB患者IFNα-1b疗效SR为50例,占19.1%;NSR 212例,占80.9%.在MxA-88位点,GT型分别与GG型、TT型患者IFN疗效比较,差异均有统计学意义(x2=20.119,OR:5.302,95%CI:2.458～11.433,P＜0.01;x2=13.071,OR:4.110,95%CI:1.858～9.092,P＜0.01).在TNF-α-863位点,CC型分别与CA型、AA型患者疗效比较,差异均有统计学意义(x2=29.628,OR:7.578,95%CI:3.444～16.672,P＜0.01;x2=13.543,OR:4.513,95%CI:1.966～10.357,P＜0.01).在TNF-α-857位点,CC与CT型患者疗效比较,差异有统计学意义(x2=12.927,OR:0.293,95%CI:0.146～0.586,P＜0.01).在IL-10-592位点,AA与CC型患者疗效比较,差异有统计学意义(x2=8.984,OR:3.380,95%CI:1.484～7.697,P＜o.01).结论 MxA-88位点为GT杂合型,TNF-α-863 CC纯合型,IL-10-592 AA纯合型的CHB患者对IFNα-1b治疗反应好,可作为预测IFN疗效的参考指标之一.

四种方法检测结核分枝杆菌耐药性结果的比较及方法评价

目的 比较噬菌体生物扩增法(PhaB)及分枝杆菌快速侦测系统(BacT-ALERT)测定结核杆菌(MTB)药物敏感度结果,研究其临床应用价值.方法 应用PhaB、BacT-ALERT检测200株MTB对异烟肼(INH)、链霉素(SM)、乙胺丁醇(EMB)和利福平(RFP)的耐药性,并以传统的耐药性测定方法作为金标准,评价其敏感度、特异度和准确度.结果 以绝对浓度法结果为判断标准:PhaB检测INH的敏感度、特异度和准确度分别为95.2%、88.3%和89.0%,检测SM的敏感度、特异度和准确度分别为95.1%、97.5%和98.0%,检测EMB的敏感度、特异度和准确度分别为100.0%、94.4%和94.5%,检测RFP的敏感度、特异度和准确度分别为95.7%、97.4%和97.0%;BacT-ALERT检测INH的敏感度、特异度和准确度分别为100.0%、97.2%和97.5%,检测SM的敏感度、特异度和准确度分别为92.7%、94.3%和94.0%,检测EMB的敏感度、特异度和准确度分别为100.0%、99.4%和99.5%,检测RFP敏感度、特异度和准确度分别为87.0%、93.5%和92.5%.以比例法结果为判断标准:PhaB检测INH的敏感度、特异度和准确度分别为58.3%、99.4%和94.5%,检测SM的敏感度、特异度和准确度分别为88.1%、96.8%和95.0%,检测EMB的敏感度、特异度和准确度分别为100.0%、94.4%和94.5%,检测RFP敏感度、特异度和准确度分别为88.0%、96.7%和94.5%.BacT-ALERT检测INH的敏感度、特异度和准确度分别为83.3%、97.7%和95.5%,检测SM的敏感度、特异度和准确度分别为88.1%、94.9%和93.5%,检测EMB的敏感度、特异度和准确度分别为100.0%、98.8%和99.0%,检测RFP敏感度、特异度和准确度分别为78.0%、96.0%和91.5%.结论 PhaB法和BacT-ALERT法检测MTB耐药性均具有较高的敏感度、特异度和准确度,可作为MTB耐药性的快速检测方法.

艾滋病合并新型隐球菌败血症一例

患者男,34岁,因消瘦1年、腹泻2个月、发热15 d入院.1年前患者无明显诱因消瘦,体质量下降15 kg.2个月前间断腹泻,黄水样便,无腹痛、便血及盗汗,以午后、夜间为著.15 d前发热,体温高达40℃.CT检查示肺部感染,应用阿奇霉素0.5 g,静脉点滴14 d无好转.10年前因外伤有输血史.无吸毒及性病史.经河北省疾病预防控制中心确认试验抗-HIV阳性.体格检查:体温38.3℃,消瘦,皮肤无出血点、淤斑,左颈部淋巴结肿大,约2.0 cm×1.0 cm,无触痛,活动度好.左中肺呼吸音减低,未闻及水泡音.心率90次/min,律整,无杂音.

水痘合并皮肤金黄色葡萄球菌感染一例

患儿男,6岁,因皮疹5 d、发热4 d入院.入院前5 d患儿无明显诱因出现皮疹,4 d前自觉发热,未测体温,自服尼美苏利、板蓝根冲剂,因皮疹增多,且出现水疱,3 d前体温高39.9℃,给予肌内注射利巴韦林、小诺米星、复方氨基比林,热退复升,间断自服尼美舒利,并服罗红霉素1 d,病情无好转,就诊于当地医院,静脉点滴药物1 d(具体用药不详),肘部水疱逐渐增大,遂来我院.

艾滋病合并伤寒一例

患者男,40岁.因反复高热2周余入院.患者近2周来反复出现畏寒、发热,体温高达40℃,伴咳嗽、咳痰、纳差、腹泻等,每日排水样稀便3～4次,在当地医院予以中药内服治疗无效.入院体格检查:体温38.8℃,神清,贫血貌,皮肤黏膜未见皮疹、出血点,右侧胸锁乳突肌后缘可触及2 cm×3 cm淋巴结,质硬、活动差,有压痛,余浅表淋巴结未扪及.心脏无异常发现,两下肺呼吸音减弱,右上肺可闻及少许湿性啰音.腹平软,肝脾肋下未及,移动性浊音(一).双下肢无水肿,克氏征阴性,病理征未引出.

创伤弧菌感染二例

患者女,49岁,曾行胃穿孔修补术,有乙型肝炎、胆结石史.因双下肢肿痛十余天,行走无力,伴头晕、胸闷、畏寒、发热2 d入院.体格检查:体温39.1℃,脉搏96次/min,呼吸22次/min,BP 10.6/7.3 kPa(1 kPa=7.5 mm Hg).左下肢重度肿胀,足背动脉搏动微弱,左侧小腿、大腿内侧皮肤可见大片红肿、出血性淤斑及剥脱,散在分布2 cm×2 cm大小不等的紫色张力性水疱,部分水疱融合,有暗红色液体渗出,局部皮肤变黑,触痛明显.右大腿中段内侧手掌大小皮肤发红、发紫,双侧腹股沟淋巴结肿大,压痛明显.

隐球菌合并粪类圆线虫中枢神经系统感染一例

患者女,75岁.因反复头痛、发热13 d入院.病初有寒战、发热及咽痛,高体温达38.2℃,头痛以前额持续性疼痛为主,伴纳差、恶心、呕吐,呈非喷射状.

从棘突蛋白基因重组探讨严重急性呼吸综合征冠状病毒的来源

目的 探讨SARS冠状病毒(SARS-CoV)的起源.方法 运用生物信息学的方法,比较不同SARS样冠状病毒之间的异同,着重分析蝙蝠所携带的SARS样冠状病毒(SL-CoV)跨越种属屏障传播的可能性.结果 除编码棘突蛋白(S蛋白)基因外,SARS-CoV与蝙蝠SL-CoV间编码结构蛋白的基因与编码复制酶的基因相似程度均很高;而S基因的差异主要集中在S1片段,且该片段的GC含量与SARS-CoV基因组的GC含量明显不同.进一步分析表明,由S1片段构建的冠状病毒进化树与由S2片段构建的进化树存在拓扑结构上的不平行性.结论 人类SARS病毒可能来源于蝙蝠SL-CoV,但在S基因内发生了基因重组事件,从而导致其获得跨越种属屏障传播的能力.

细菌激活系统血液免疫反应仿真自然体系实验研究

目的 用现代系统免疫学仿真自然体系探讨血液细菌感染的系统血液免疫反应状况.方法 将酵母菌及灭活卡介苗(5×108/mL)0.2 mL分别激活全血0.2 mL或WBC 0.2 mL和血浆(或0.9%氯化钠溶液)0.3 mL,37℃水浴1 h,用流式细胞仪法(FCM)、ELISA等方法观察IL-8含量,补体C3、C4和趋化因子受体Fy6的变化.结果 在血浆存在的条件下,细菌可激活RBC调控和促进WBC产生IL-8,使自然实验组IL-8激活指数(37.04±34.84)明显高于WBC激活分离实验组IL-8激活指数(1.09±0.77),而且前者补体C4增值(0.010 0±0.010 0)也明显高于后者(-0.0027±0.0080),差异有统计学意义(P＜0.05).结论 酵母菌及灭活卡介苗在血液中先被补体系统识别、激活,绝大部分附有C3b的细菌被红细胞黏附;提呈给WBC后,可引发血浆免疫反应、RBC免疫反应、吞噬细胞免疫反应和淋巴细胞免疫反应.

乙型肝炎病毒对HepG2细胞影响的蛋白质组学分析

HBV可引起急慢性肝炎、肝硬化,并与原发性肝细胞癌发生、发展关系密切.近年来,尽管HBV编码蛋白,如X蛋白[1]、表面抗原大蛋白等[2],致肝细胞病变作用得到广泛重视,但HBV对宿主细胞的整体影响尚鲜见报道.

2000-2005年广州地区稻叶型霍乱弧菌的分子分型

目的 分析2000-2005年广州地区霍乱暴发点、散发事件和环境监测分离的稻叶型霍乱弧菌的致病相关基因型和脉冲场凝胶电泳技术(PFGE)分型,探讨该稻叶型霍乱的流行特征和趋势.方法 对分离株进行噬菌体生物分型,采用多重PCR方法检测菌株的4种致病相关基因,应用PFGE进行分子分型,并采用软件BioNumerics Version 4.0进行聚类分析.结果 广州地区稻叶型霍乱菌株中存在3种致病相关基因型:A、B和C型.98%感染者分离株为致病相关基因A型,45%环境分离株为C型.82株菌分为39个不同的PFGE型.各年份稻叶型暴发与散发事件中均存在具有PFGE分型特征一致的菌株,而环境中菌株则存在多种不同的PFGE型,来源不同地区分离株也均有相似的分型特征.结论 噬菌体-生物分型、致病相关基因分型和PFGE分型存在一定的关联规律性,分子分型可为分析霍乱疫情和预警提供技术平台.

乙型肝炎病毒前S1蛋白反式激活基因5在酵母细胞中的表达

目的 在真核生物酵母细胞中表达乙型肝炎病毒前S1蛋白反式激活基因5(PS1TP5).方法 以HepG2细胞来源的mRNA为模板,经RT-PCR法扩增PS1TP5基因,克隆到pGEM-T载体中,并测序鉴定,酶切回收后连接到酵母表达质粒pGBKT7中,并转化酵母AH109,色氨酸缺陷型培养基(SD/-Trp)上筛选阳性菌落,提取酵母蛋白质,进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和Western免疫印迹分析,以明确PS1TP5是否可在其中表达.结果 成功扩增出PS1TP5,测序鉴定符合基因库报告序列,酶切回收的PS1TP5基因片段成功克隆入酵母表达载体pGBKT7,并转化入酵母细胞AH109中,Western免疫印迹显示该基因在酵母细胞中成功表达,表达产物相对分子质量为36 950.结论 成功构建了PS1TP5酵母表达载体,并在酵母细胞中表达.

周期型马来丝虫副肌球蛋白基因克隆、序列分析及编码产物B细胞表位预测

目的 克隆周期型马来丝虫副肌球蛋白(BmPmy)基因,进行序列测定、分析及编码产物的B细胞表位预测.方法 从周期型马来丝虫虫体中抽提总RNA,以mRNA为模板,RT-PCR法体外扩增BmPmy基因,扩增产物经初步鉴定后将其克隆入pGEM T载体,转化E.coli DH5α,筛选阳性克隆,进行双酶切及PCR扩增鉴定,获得阳性重组质粒pGEM-T-BmPmy,经测序验证,并进行同源性比较.应用5种参数和方法对其编码产物进行B细胞表位预测.结果 RT-PCR扩增出一条约2 640 bp的特异性条带,重组质粒双酶切的PCR结果与预期相符,DNA序列分析与基因库已知的基因序列同源性为99%.经表位预测分析,BmPmy的B细胞表位可能在54～66位、144～152位、770～780位和834～845位氨基酸区域.结论 成功构建了BmPmy重组质粒pGEM-T克隆载体,为进一步研究该基因的功能提供了条件.

基孔肯雅病研究进展

基孔肯雅病(Chikungunya)是一种由节肢动物传播的病毒性疾病,主要在非洲与东南亚地区流行.在灵长类与人类中传播的媒介主要是伊蚊.虽然病毒感染人类后呈现低活性,但由于其可导致世界范围的广泛传播流行,且本身具有潜在危险性[1],故应当引起足够重视.

拉米夫定耐药的慢性乙型肝炎抗病毒治疗

全球慢性HBV感染者多达3.6亿,我国有1.2亿,其中有3 000万是慢性乙型肝炎患者,慢性乙型肝炎关键的处理应是抗病毒治疗,以拉米夫定(lamivudine,LAM)为代表的核苷(酸)类似物开创了慢性乙型肝炎治疗的新时代.LAM是被批准的第一个治疗慢性乙型肝炎的抗病毒口服药,随着其在国内、外临床的广泛应用,HBV耐药突变(resistant mutation)已成为令临床医师棘手的问题.LAM耐药后的抗病毒治疗是临床面临的一个新课题,为此,许多学者进行了有益探讨.

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