2002年上海地区医院细菌耐药性监测

目的了解上海地区医院2002年临床分离菌株的耐药情况.方法使用Kirby-Bauer法将2002年1月～12月上海11家医院临床分离菌22 849株进行34种抗菌药物的敏感性试验.结果 22 849株细菌中,革兰阳性球菌6940株(30.4%),革兰阴性菌15 909株(69.6%).葡萄球菌中耐药甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌(MRSA)和甲氧西林耐药凝固酶阴性葡萄球菌(MRCNS)的检出率分别为68.2%和75.3%;肺炎链球菌中青霉素不敏感株(PISP+PRSP)的发生率儿童组为40%,成人组7.5%,已出现对第3代头孢菌素头孢曲松的耐药株(28.9%).万古霉素对革兰阳性球菌的抗菌活性强,未发现万古霉素中度敏感金黄色葡萄球菌(VISA)、万古霉素高度耐药金黄色葡萄球菌(VRSA)和万古霉素耐药肠球菌(VRE)菌株.对革兰阴性杆菌的抗菌活性以亚胺培南强.大肠埃希菌ESBLs产生株检出率为24%,克雷伯菌中的检出率为35.2%.住院患者临床分离株对多数抗菌药物的耐药率较门诊患者为高,且差异有显著性.结论本组资料对临床合理选用抗菌药物具有重要参考价值.

慢性重型肝炎患者早期血清IL-18和NO水平变化及N-乙酰半胱氨酸对其的影响

目的探讨白细胞介素18(IL-18)、一氧化氮(NO)在慢性重型病毒性肝炎(慢重肝)早期中的作用以及N-乙酰半胱氨酸(NAC)治疗慢重肝早期对IL-18和NO水平的影响.方法采用夹心酶联免疫吸附法分析65例慢重肝早期患者血清IL-18和NO的水平表达及动态变化;通过NAC治疗29例与单用综合治疗36例的自身治疗前、后及治疗后两组中疗效的对比,观察IL-18和NO水平表达的变化及影响.结果慢重肝早期患者血清IL-18、NO水平分别为:NAC组:(259.41±13.79)pg/ml,(191.57±6.95)μmol/ml;综合治疗组:(264.97±18.91)pg/ml,(206.17±10.16)μmol/ml,明显高于健康对照组[IL-18:(84.93±2.59)pg/ml,NO:(60.74±4.25)μmol/ml],差异有显著性(P＜0.001).NAC组经治疗后上述两项指标的水平分别是(136.86±17.63)pg/ml,(112.34±12.57)μmol/ml,比治疗前明显下降,差异有显著性(P＜0.001).NAC组治疗后有效组IL-18、NO水平由治疗前(274.89±16.92)pg/ml,(196.30±6.10)μmol/ml分别下降至(97.67±17.11)pg/ml,(74.18±4.86)μml/ml;而无效组则由治疗前(218.78±16.81)pg/ml,(179.17±19.75)μmol/ml分别升高至(239.76±14.98)pg/ml,(212.50±11.59)μmol/ml,两组治疗前后比较差异有显著性(P＜0.05).结论 IL-18和NO与慢重肝早期具有相关性.NAC可降低上述细胞物质的水平.

HCV C-Fc融合基因修饰的树突状细胞疫苗抗HCV功能研究

目的探讨丙型肝炎病毒(HCV)C-Fc基因修饰的树突状细胞(DCs)能否诱导抗HCV细胞和体液免疫反应.方法将pcDNA3HCV-Fc质粒用电穿孔法转染经过白介素4(IL-4),粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)刺激增殖的小鼠DCs前体细胞,观察HCV、Fc抗原表达;将制备的5×105/100μlDC疫苗皮下免疫Balb/c小鼠,两周后检测特异性抗体、脾脏CD4+、CD8+细胞增殖作用以及诱导的细胞毒性T淋巴细胞(CTL)反应.结果 HCV C-Fc基因电穿孔法转染细胞在上述细胞因子作用下发育成能有效表达HCV C-Fc并具有典型形态学与表型特征的DCs.免疫小鼠后,HCV C-Fc基因转染DCs能诱导产生抗HCV特异性抗体和较强的CTL反应.结论 HCV C-Fc基因修饰的DCs能增强对HCV特异性CTL效应的诱导能力,提示它在抗病毒疫苗发展中的潜力.

Toll样受体4在D-氨基半乳糖/内毒素介导的急性肝损伤中的表达

目的研究D-氨基半乳糖(D-Gal)/内毒素介导的急性肝损伤模型中肝组织细胞Toll样受体4(TLR4)的表达变化,探讨TLR4在识别内毒素、启动炎性肝损伤中的作用.方法 BALB/C小鼠腹内注射D-Gal 900 mg/kg与内毒素(即脂多糖,LPS)10 μg/kg后0～7 h分别检测血清丙氨酸转氨酶(ALT)及天门冬氨酸转氨酶(AST)与血浆肿瘤坏死因子(TNF-α)含量以评价肝功能;另随机取10只小鼠给药后观察致死率.用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Tanon Gis 2.0软件分析不同时间点肝组织中TLR4 mRNA表达,并与血浆TNF-α含量进行相关分析;免疫组织化学观察肝组织TLR4蛋白的表达.实验数据用SAS软件分析.结果给药后4 h,血清转氨酶明显升高(与0h比较,P＜0.05);血浆TNF-α含量逐步上升,在2 h、5 h有两个分泌高峰;7 h小鼠开始死亡,10 h致死率达80%.正常小鼠肝组织少量表达TLR4 mRNA,给药后表达明显增强(与0 h比较,P＜0.05);免疫组织化学也显示TLR4蛋白有类似的变化,尤其肝窦内皮细胞、库普弗细胞表达更为显著.血浆TNF-α含量与肝组织TLR4 mRNA表达呈正相关.结论肝内细胞膜上表达的TLR4可能通过启动下游的炎性应答基因表达及细胞因子释放而诱导出肝组织对LPS的炎性应答.因此,调控TLR4表达可能是感染性疾病防治的一种新策略.

宿主和病毒各因素对干扰素治疗慢性乙型肝炎的影响

目的探讨慢性乙型肝炎(CHB)患者宿主因素和病毒因素对干扰素(IFN)治疗的影响.方法以聚合酶链反应-序列特异性引物(PCR-SSP)技术检测32例接受IFN治疗CHB患者人类白细胞抗原(HLA)-DR和-DQ等位基因,以荧光PCR技术定量检测HBV DNA水平,以PCR-限制片段长度多态性(PCR-RFLP)分析检测HBV基因型和基因组变异(A1896突变和T1762-A1764突变),并分析上述各因素对IFN应答率的影响.结果10例应答者HLA-DRB1*14等位基因的频度为20.0%高于22例非应答者的2 3%(相对危险度RR为10.750,P=0.030),而DQB1*07分布则相反(10.0%对38.6%,RR为0.176,P=0.022).IFN应答者治疗前血清HBV DNA水平低于非应答者(6.71±1.06对7.59±0.56)log10 copies/ml,(P=0.030).B基因型感染者对IFN的应答率为53.8%(7/13例)显著高于C型株者的15.8%(3/19例,P=0.049).治疗前血清丙氨酸转氨酶(ALT)水平、前C区A1896突变和X区C区启动子(CP)T1762-A1764双突变的发生在应答者和非应答者间差异均无显著性(P=0.087、P=0.681和P=0.165).多因素分析显示治疗前HBV DNA水平(RR为0.212,P=0.034)、T1762-A1764突变(RR为0.063,P=0.049)和HLA-DQB1*07(RR为13.358,P=0.045)均为影响IFN治疗HBV感染的独立因素.结论治疗前HBV低载量、T1762-A1764或B基因型与CHB患者的IFN应答率相关.

SV40LT抗原介导的人源性肝细胞系的构建

目的建立人源性肝细胞系,为生物人工肝和肝细胞移植等提供合适的细胞源.方法利用SV40LTag基因和真核表达载体pcDNA3.1(-)经脂质体转染至来源于25岁男性脑死亡者供肝的原代培养细胞,使其永生化,进一步鉴定其形态学特征和生物学功能.结果经G418 700～300μg/ml筛选,42 d后获一抗G418肝细胞系.该细胞系呈单层贴壁、上皮细胞样形态生长,体外培养可无限传代,具有分泌白蛋白(ALB)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)及乳酸脱氢酶(LDH)的功能,超微结构观察发现,转染肝细胞具有原代培养肝细胞的大多数典型特征,如较大的细胞核、胞浆内含有丰富的糖原颗粒、大量的线粒体和粗面内质网等.经逆转录聚合酶链反应(PCR)和蛋白质印迹检测,转染肝细胞的ALB mRNA阳性和细胞色素P450 2E1阳性.结论新建人源性肝细胞系与原代培养肝细胞具有类似的形态学特征和生物学功能.

丙型肝炎病毒核心区蛋白对 HepG2细胞周期、细胞凋亡和细胞端粒酶活性的影响

目的研究丙型肝炎病毒核心区(HCV-C)蛋白对肝癌细胞HepG2细胞周期、细胞凋亡和细胞端粒酶活性的影响.方法首先运用基因重组技术构建含有HCV-C基因的真核表达质粒pcDNA3.1(+),然后利用脂质体介导将重组真核表达质粒转染HepG2,经G418筛选获得稳定转染HepG2细胞(HCV-C转染HepG2细胞),经逆转录-聚合酶链反应技术(RT-PCR)和间接免疫荧光法证实其中有HCV-C蛋白表达.然后进行如下实验:(1)利用四甲基偶氮唑蓝比色(MTT)法检测HCV-C转染HepG2细胞、空白质粒转染HepG2细胞和未转染HepG2细胞的生长增殖率;经流式细胞术(FACS)检测3组细胞的细胞周期;(2)经流式细胞术检测细胞凋亡率;(3)经端粒重复扩增-酶联免疫吸附试验(TRAP-ELISA)法检测上述3组细胞端粒酶活性表达情况.结果(1)HCV-C转染HepG2细胞增殖率显著高于空白质粒转染HepG2和未转染HepG2细胞增殖率;HCV-C转染HepG2细胞S期所占百分率高于未转染HepG2细胞S期所占百分率;(2)HCV-C转染HepG2细胞凋亡率显著低于无HCV-C转染细胞凋亡率;(3)上述3组细胞端粒酶活性之间差异无显著性.结论(1)HCV-C蛋白具有抑制细胞凋亡的作用;(2)HCV-C蛋白促进HepG2从G0/1期进入S期,从而可能促进细胞生长增殖,抑制细胞凋亡;(3)HCV-C蛋白对HepG2细胞端粒酶活性没有影响,说明HCV-C蛋白不是通过上调细胞端粒酶活性途径来调节细胞周期、促进细胞增殖和抑制细胞凋亡.

汉坦病毒包膜糖蛋白G1、G2基因的DNA免疫

目的将编码汉坦病毒浙37(Z37)株包膜糖蛋白G1、G2的真核表达质粒免疫小鼠,观察其能否诱导体液免疫应答.方法重组质粒pcDNA3.1-G1、pcDNA3.1-G2以不同方式免疫BALB/C小鼠,用免疫荧光测定(IFA)法检测血特异性抗体,用半微量直接免疫酶斑减少中和试验检测血中和抗体.经肌内注射途径免疫15只BALB/C小鼠,3组小鼠分别注射100μg pcDNA3.1、pcDNA3.1-G1、pcDNA3.1-G2;每只小鼠免疫3次,初次免疫后4周,加强2次,间隔3周.经基因枪免疫9只BALB/C小鼠,3组小鼠分别注射1.5μg pcDNA3.1、pcDNA3.1-G1、pcDNA3.1-G2;每只小鼠免疫2次,初次免疫后4周,加强1次.结果 1.经肌内注射免疫时,产生特异性抗体的小鼠个数分别是:pcDNA3.1-G1组为5只中3只,pcDNA3.1-G2组为5只中2只;荧光抗体滴度1:20～1:80;产生中和抗体的小鼠个数分别是:pcDNA3.1-G1组为5只中1只,pcDNA3.1-G2组为5只中2只;中和抗体滴度1:10～1:20.2.经基因枪免疫时,实验组小鼠都产生了特异性抗体和中和抗体.荧光抗体滴度1:20～1:320,中和抗体滴度≥1:10.结论重组质粒pcDNA3.1-G1、pcDNA3.1-G2能诱导小鼠产生有效的体液免疫应答.

开放读码框架50基因介导HIV-1感染相关的肝细胞生长因子诱导人类疱疹病毒8型复制

目的研究人类疱疹病毒8型(HHV-8)开放读码框架(ORF)50基因启动子在HIV-1感染相关细胞因子肝细胞生长因子/驱散因子(HGF/SF)诱导原发性渗出性淋巴瘤(PEL)BC-3中潜伏感染的HHV-8复制过程中的作用.方法将HGF/SF连续加入到体外培养的BC-3中,分别于培养第3天和第7天收集刺激细胞,电子显微镜观察成熟HHV-8病毒的形成;提取细胞总RNA,North-ern blot和定量聚合酶链反应(PCR)法检查HHV-8次要衣壳蛋白ORF26 mRNA转录.同时,将已构建的HHV-8 ORF50启动子+虫荧光素酶报告基因重组质粒和含HIV-1 Tat基因重组表达质粒分别共转染BC-3和人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs),转染后24 h加入HGF/SF和/或重组HIV-1gp120刺激,刺激后24 h收集细胞,进行虫荧光素酶活性检测.试验同时以佛波酯(TPA)刺激为阳性对照.结果 HGF/SF可以上调HHV-8 ORF26 mRNA表达,且于刺激的第7天,ORF26 mRNA表达上升了4.1倍,BC-3细胞中同时可观察到成熟的HHV-8病毒粒子;HGF/SF能够诱导ORF50启动子活性,但HIV-1 Tat和gp120蛋白与HGF/SF协同上调ORF50启动子活性的能力较弱.结论 HIV-1感染相关细胞因子HGF/SF诱导HHV-8复制的过程至少有部分由ORF50启动子介导.

产前和产后联合阻断HBsAg、HBeAg阳性孕妇母婴传播的研究

目的评价产前和产后联合阻断措施对HBsAg、HBeAg阳性孕妇母婴传播的免疫效果.方法将HBsAg、HBeAg阳性的孕妇在产前检查时随机分成两组,乙型肝炎免疫球蛋白(HBIG)组:孕妇产前3个月(妊娠28周起)每4周肌内注射HBIG 400 IU直至临产;对照组:孕妇不注射HBIG.两组所生新生儿出生时及15 d时肌内注射HBIG,满月、2月和7月龄接种乙型肝炎疫苗,定期检测婴儿外周血的乙型肝炎病毒(HBV)感染标志.104例HBsAg、HBeAg阳性孕妇所生105例新生儿完成随访满1年.结果 51例新生儿系HBIG组母亲所生,宫内感染率为5.9%,达1岁时HBV慢性感染率为5.9%,具有保护性抗体水平的有效保护率达94.1%;54例对照组母亲所生新生儿的宫内感染率为18.5%,随访至1岁龄的HBV慢性感染率为16.7%,抗体有效保护率是83.3%.宫内感染率之比χ2=3.86,P＜0.05.结论产前和产后联合阻断HBsAg、HBeAg阳性孕妇的母婴传播,其有效保护率达到94%,能明显减少宫内感染的发生,获得目前大限度的提高对HBsAg、HBcAg阳性母亲HBV母婴传播的阻断作用.

黑热病一例

患者,男,27岁,2001年5月至11月在新疆务工.因畏寒、发热、出汗48 d于2001年12月30日收入我院.患者于48d前从新疆返回后始发热,发热以每日午后及夜间为主,每日体温波动在37.5℃～40℃,高体温达40.3℃,发热前有畏寒感,发热后伴出汗.发病后曾在外院予抗生素及抗结核治疗,病情无改善.

埃博拉出血热研究现状

埃博拉出血热(Ebola hemorrhagic fever,EHF)是20世纪70年代在非洲新发现的一种急性传染病,自1976年在非洲中部扎伊尔(现刚果民主共和国)和苏丹爆发流行后,已在非洲中部形成地方流行[1-3].病原体为埃博拉病毒(EBOV),主要通过密切接触传播,可致人类和非人灵长类动物感染.人类以急起发热、头痛、关节痛、肌痛、咽喉炎、皮疹、胃肠道症状、出血,随后出现肝、肾功能障碍,迟发性眼病变,传染性强,病死率高等为临床特征.现就EHF的研究现况作一综述.

慢性重型病毒性肝炎并低钠血症的治疗与转归

慢性重型病毒性肝炎(慢重肝)患者常发生血电解质紊乱,尤以低钠血症为常见,严重时可诱发各种并发症,使病情恶化,甚至死亡.我科对78例慢重肝并低钠血症患者随机分为限钠组和不限钠组,观察了血钠、尿钠、腹水钠、24 h尿量的变化及肝性脑病、低渗性脑病的发生率、病死率,现将结果报告如下.

SEN病毒在不同人群中的感染状况

SEN病毒(SEN virus,SENV)是近年来新发现的一种环状单链DNA病毒,目前分为8个亚型(A～H)[1].为了解国内SENV的感染状况,对不同地区人群的血清标本进行检测,现将结果报告如下.

类鼻疽伯克霍德菌败血症四例

类鼻疽是类鼻疽伯克霍德菌所致的地方性人兽共患病,我国类鼻疽的疫源地主要分布于海南、广东和广西,自从1989年我国湛江发现类鼻疽败血症病例[1],1996年海南报告2例类鼻疽[2]以来,类鼻疽严重地危害着疫源地居民的生命,现将我院2001年11月～2002年8月收治的4例类鼻疽败血症报告如下.

拉米夫定治疗慢性乙型肝炎1～3年随访结果

拉米夫定是一种较新的高效、直接抗乙型肝炎病毒的口服药,目前正在全国广泛应用,取得了较好疗效,但也出现过停药后病情反复或停药后发展为重症肝炎、病毒变异、服药后耐受性、安全性等问题.我们对上述问题进行了观察,追踪随访,其结果报告如下.

大黄对慢性肝炎抗肝纤维化的临床研究

大黄不仅具有利胆退黄、抗炎抑菌、抗病毒、调节免疫等多种作用,近年来实验研究还发现,大黄中的大黄素、大黄酸等成分具有抗肝纤维化的作用[1,2].有关大黄抗肝纤维化作用的临床研究报道较少,为此我们观察了37例应用大黄治疗慢性肝炎患者,从肝组织学、转化生长因子β1(TGF-β1)及血清透明质酸(HA)、层粘连蛋白(LN)、Ⅳ型胶原(IVC)、Ⅲ型前胶原(PCⅢ)等方面来探讨大黄抗肝纤维化的作用.

苦参素注射液治疗慢性乙型肝炎98例

慢性乙型肝炎抗病毒治疗一直是国内外研究的重点.目前公认有效的抗乙型肝炎病毒(HBV)药物为干扰素-α(IFN-α)和拉米夫定[1-3].苦参素注射液是植物提取药,我们采用苦参素注射液或与免疫调节剂胸腺肽联合治疗慢性乙型肝炎,以观察其抗病毒的效果,明确其佳用药剂量及疗程.

HIV-1外膜蛋白与 IFNα在重组鸡痘病毒中的共表达及特性分析

艾滋病(AIDS)是由人免疫缺陷病毒(HIV)引起的一类疾病,该病已成为危害人类严重的疾病之一,研制AIDS疫苗已成为当务之急.外膜蛋白gp120是由HIV-1囊膜蛋白gp160经蛋白酶裂解而成[1].它不仅与病毒进入细胞有关,同时它含有大量刺激机体产生体液免疫和细胞免疫的抗原决定簇[2-4].因此,它成为人们研制艾滋病疫苗的重要靶蛋白.以病毒为载体构建基因工程活载体疫苗是当前研制疫苗的一个重要途径,它不仅可以诱导体液免疫的产生,同时可引起特异性CTL,尤其对于病毒病的预防更为有效.本研究利用鸡痘病毒中国疫苗株为载体,构建了HIV-1外膜蛋白gp120与IFNα二者共表达的重组鸡痘病毒,探索了利用鸡痘病毒作为AIDS活载体疫苗载体的可行性.

物理型和混合型人工肝对慢性重型肝炎支持效果对比研究

重型病毒性肝炎所致肝功能衰竭的治疗一直是临床棘手的问题,早期的非生物型人工肝已广泛应用于临床,但疗效不一[1-3].为客观比较评价非生物人工肝的疗效,我们比较观察了物理型(血液灌流吸附)、混合型(血浆置换+血液灌流吸附)人工肝对重型肝炎肝功能衰竭的支持效果及安全性.

血清谷氨酸脱羧酶抗体、胰岛细胞抗体在肝源性糖尿病诊断中的价值

谷氨酸脱羧酶抗体(GADA)、胰岛细胞抗体(ICA)是两种针对胰岛细胞的特异性自身抗体,是1型糖尿病实验室诊断的重要指标.我们对217例慢性乙型肝炎(CH)、肝硬化(LC)患者进行GADA及ICA检测,探讨GADA、ICA在肝源性糖尿病诊断中的价值.

胎盘对e抗原的选择性通过

母亲为乙型肝炎病毒携带者特别是HBeAg阳性的婴儿,比母亲为HBeAg阴性的携带者的婴儿更容易发展为慢性持续性感染.出生前接触的抗原成分导致机体对这种物质的免疫耐受,Milich等[1]报道,HBeAg可以通过胎盘,在宫内暴露于HBeAg的新生鼠,其T细胞产生对HBeAg或HBcAg的耐受.但也有报道H-2b转基因小鼠HBeAg不能通过胎盘,且即使宫内暴露于HBeAg也不会使T细胞对HBeAg或HBcAg产生耐受[2,3].我们对慢性乙型肝炎携带者的母亲及其新生儿静脉血清及婴儿随访血清进行分析,以进一步阐明HBeAg是否能够通过胎盘由母亲体内进入胎儿体内.

中华医学会新增两大医学期刊系列

祝贺《丙型肝炎防治指南》发布

由中华医学会肝病学会和中华医学会传染病与寄生虫病学会联合制订的<丙型肝炎防治指南>(指南)的发布,是我国肝病学界和传染病学界的一件大事,业界同仁表示热烈的欢迎.中华医学会于1978年制订<病毒性肝炎防治方案>(防治方案)以来几经修改,对我国病毒性肝炎的防治工作,起到了积极的推动作用.随着时代的前进,科学的发展,原有<防治方案>已经跟不上形势的发展,有些内容比较陈旧,与国际制订的标准有一定的差距.