中华检验医学杂志
Chinese Journal of Laboratory Medicine 중화검험의학잡지
- 主管单位： 中华医学检验杂志
- 主办单位： 中国科学技术协会
- 影响因子： 1.40
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 11-4452/R
- 国内刊号： 韩锟
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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HBV感染对日本血吸虫病患者肝纤维化的影响及Th1/Th2型细胞因子水平的变化
目的 评估慢性日本血吸虫病患者血清中Th1型[γ干扰素(IFN-γ)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)]和Th2型[白细胞介素(IL)-10、IL-13)]细胞因子水平,探讨晚期肝纤维化易感性与细胞因子水平的关系.方法 358例晚期血吸虫病患者,采用B超对肝纤维化程度进行分级.随机选取HBsAg阴性,早期肝纤维化患者39例,晚期肝纤维化患者29例.检测患者血清IL-10、IL-13、IFN-γ、TNF-α的水平.结果 358例患者HBsAg阳性率高达23.2%(83/358).血吸虫病患者合并乙型肝炎感染较未感染者、晚期肝纤维化患者平均发病年龄并未提前,且构成比无明显差异(x2=0.427,P=0.513).晚期肝纤维化患者血清IL-10水平[4.20(1.43～52.07)ng/L]高于早期肝纤维化患者[1.60(1.30～12.14)ng/L,Z=-3.907,P＜0.01];血清IL-13水平[21.37(0.56～61.37)ng/L]显著高于早期肝纤维化患者[12.94(3.37～26.99)ng/L,Z=-4.653,P＜0.01];血清IFN-γ水平[3.12(1.38～66.14)ng/L]与早期肝纤维化患者[5.87(1.33～216.33)ng/L]比较差异无统计学意义(Z=-1.067,P＞0.05);血清TNF-α水平[2.48(0.79～19.86)ng/L]与早期肝纤维化患者血清TNF-α水平[2.28(0.67～15.72)ng/L]差异无统计学意义(Z=-0.112,P＞0.05).结论 晚期血吸虫病患者中乙肝感染率高于全国平均水平.晚期肝纤维化的患者血清存在着高水平的IL-13.
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两种检测方法测定13种高危型人乳头状瘤病毒的比较研究
人乳头状瘤病毒(HPV)感染是宫颈癌发生的主要原因[1],及早发现及监测HPV感染是预防宫颈癌发生的重要手段.本研究采用实时荧光定量多重PCR法检测13种高危型HPV DNA,与美国Digene公司的第2代杂交捕获法(Hybrid Capture(R)2,HC2)相比较,综合评价荧光定量多重PCR法检测HPV在宫颈病变筛查中的应用价值.
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人类白细胞抗原基因与重症血液病的相关性
目的 研究HLA-A、B、DRB1基因与5种常见重症血液病的相关性.方法 采用序列特异性引物PCR(polymerase chain reaction with sequence-specific primers,PCR-SSP)技术,对368例血液病患者进行HLA分型,其中急性淋巴细胞白血病(ALL)53例、急性髓细胞白血病(AML)105例、慢性髓细胞白血病(CML)109例、骨髓增生异常综合征(MDS)42例、再生障碍性贫血(AA)59例,并与1 000份健康新生儿脐带血进行比较,并计算相对危险度.结果 在ALL患者中DRB1*14的等位基因频率为10.38%,高于对照组的4.70%,差异有统计学意义[x2=6.849,P=0.009,相对危险度(RR)=2.348];而B*46和DRB1*09的等位基因频率分别为1.89%和6.60%,显著低于对照组的6.75%和13.15%,差异有统计学意义(B*46的x2=3.914、P=0.048、RR=0.266,DRB1*09的x2=3.86、P=0.049、RR=0.467).在AML患者中B*51的等位基因频率为10.48%,高于对照组的6.80%,差异有统计学意义(x2=3.869,P=0.049,RR=1.604);在CML患者中A*29和DRB1*14的等位基因频率分别为2.75%和8.72%,高于对照组的0.95%和4.70%,差异有统计学意义(A*29的x2=4.226、P=0.040、RR=2.951,DRB1*14的x2=6.556、P=0.010、RR=1.936).在MDS患者中A*01、B*54和B*57的等位基因频率分别为12.07%、12.07%和6.90%,高于对照组的4.10%、2.80%和1.20%,差异有统计学意义(A*01的x2=6.832、P=0.009、RR=3.21,B*54的x2=13.345、P=0.000、RR=4.765,B*57的P=0.007、RR=6.099).在AA患者中B*13、B*54和DRB1*09的等位基因频率分别为17.86%、8.04%和20.34%,高于对照组的11.50%、2.80%和13.15%,差异有统计学意义(B*13的x2=4.107、P=0.043、RR=1.673,B*54的x2=8.071、P=0.004、RR=3.033,DRB1*09的x2=4.916、P=0.027、RR=1.686);而DRB1*03的等位基因频率为0.85%,低于对照组的5.10%,差异有统计学意义(x2=4.355,P=0.037,RR=0.159).结论 不同血液病分别与不同HLA基因有显著的相关性,这对血液病的病因研究有重要意义.
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实时荧光定量PCR测定人乳头状瘤病毒16型E7基因方法学的建立及其在宫颈疾病诊断中的应用价值
宫颈癌是世界妇女第2高发肿瘤,每年新发病例493 000人,并导致274 000人死亡[1].高危型人乳头状瘤病毒(HPV),尤其是HPV16型,在宫颈癌发生、发展进程中起关键作用[2].病毒早期,E7基因是导致宫颈上皮细胞恶性转化和永生化的重要因素[3],其编码的E7蛋白通过与pRb结合,干扰细胞周期调控及DNA修复,从而使细胞不稳定性增加[4].
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血清GPC3联合AFP对原发性肝癌的诊断价值探讨
原发性肝癌早期诊断是改善预后的关键[1].AFP联合肝脏超声筛查和随访是早期诊断的主要途径,但对慢性肝病基础上较为常见的良性病变与小肝癌的鉴别仍较困难[2].AFP≥200μg/L作为诊断肝癌临界值(cut-off值),敏感度仅为20%～45%[3].AFP异质体(AFP-L3)检测等对肝癌有很好的特异度,但是敏感度也低[4].磷脂酰肌醇硫酸类肝素蛋白聚糖3(glypican-3,GPC3)是通过磷脂酰肌醇(GPI)锚定于细胞膜表面脂质的硫酸类肝素蛋白聚糖,参与调节胚胎生长发育.
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基因测序确认二例造血干细胞捐献者新等位基因HLA-DRB1*0114
人类白细胞抗原(HLA)是迄今所知的人类复杂的免疫遗传多态性系统,由于分子生物学技术尤其是DNA测序技术在HLA分型上的应用,新的等位基因不断被发现[1-3].随着中国造血干细胞库捐献者数量的增加,不断地在中国人中发现新等位基因的报道.我们报告2例在对中华骨髓库陕西分库注册的捐献者进行HLA低分辨的过程中发现的一个新等位基因,该等位基因2006年3月被世界卫生组织(WHO)HLA因子命名委员会正式命名为HLA-DRB1*0114.
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线粒体tRNALeu(UUR)基因A3243G突变糖尿病家系的基因诊断
目的 确认一个由线粒体tRNALeu(UUR)基因A3243G点突变引起的母系遗传糖尿病家系,并分析其临床特征.方法 采用PCR产物直接测序法对53例无血缘关系的有家族史的2型糖尿病(T2DM)患者线粒体DNA(mitochondria DNA,mtDNA)片段(nt3153～nt3551)进行点突变筛选,然后对筛选到的A3243G异质性突变样本作DHPLC分析确认.详细调查此突变糖尿病家系发病特征,并做线粒体基因组全序列分析.结果 在53例样本中检测到1例A3243G突变,对其家系调查发现7例母系成员中5例患病(1男4女),患者多数伴听力损害,体重指数减低,口服降糖药效果不佳终需用胰岛素治疗,呈母系遗传,发病年龄不等,平均32.75岁.线粒体全基因组测序表明患者存在包括A3243G突变的共33个变异位点,但除A3243G突变外其余都不是进化上高度保守的位点,因此A3243G突变是与这个糖尿病家系发病有关的惟一的mtDNA突变.结论 线粒体tRNALeu(UUR)基因A3243G突变是这个三代母系遗传糖尿病家系发病的原因,其临床特点是发病年龄轻、不胖、母系遗传、耳聋发生率和使用胰岛素比率高等.
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血清与胆汁胆红素联合判定肝移植术后早期肝功能
肝脏移植是中晚期肝病的有效治疗手段.肝移植术后的胆汁分泌是肝脏功能早期恢复的表现之一[1].临床发现,移植术后胆汁的分泌量与胆汁内成分的含量均与移植肝功能的恢复存在密切联系.我们对本院肝移植病例术后早期血清及T管引流胆汁胆红素进行了动态监测,以探讨其联合判定肝移植术后早期移植肝功能恢复的价值.现将结果报告如下.
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寡核苷酸基因芯片检测HBV基因型方法的建立与临床研究
目的 建立寡核苷酸基因芯片检测HBV基因分型的方法并对HBV携带者基因型进行临床分析.方法 根据Genbank中已发表的128株HBV全基因组序列系统进化分析结果设计了A～H不同HBV基因型的特异探针及巢式PCR引物.利用反向杂交原理,先将不同HBV基因型特异的寡核苷酸探针固定在芯片上,再与地高辛(Dig)标记的扩增产物杂交从而检测HBV基因型.本研究检测了200例HBV DNA阳性患者,为了验证基因芯片检测的结果,随机选取其中40份样本进行直接测序.结果 在200份血清样本中检测到B、C基因型以及BC混合型,依次占11.5%(23/200),80.5%(161/200),8%(16/200).在与测序方法进行对比的40份样本中,除3份例混合型用测序方法不能检出混合感染外,利用测序结果进行系统发育分析得到的结果与基因芯片检测结果一致.进一步的克隆分析发现这3份样本均为混合感染.结论 基因芯片是进行HBV基因分型的方便可靠的工具,并能更好地检测不同基因型混合感染的情况.本研究中,HBV基因型以C型为主,与B型相比,C型HBV感染者病情较为严重.
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丙型肝炎病毒抗体诊断试剂盒的诊断性能评价
目的 通过与Ortho 3.0丙型肝炎病毒(HCV)抗体诊断试剂盒比较,分析评价EIAgen HCV抗体诊断试剂盒(EIAgen)的诊断性能.方法 应用考核试剂EIAgen和参比试剂Ortho 3.0HCV抗体诊断试剂盒对2 881份样本进行检测,检测结果不一致时,应用重组免疫印迹试验(RIBA)确证试剂RIBA HCV 3.0或核酸试验(NAT)确证试剂进行确证,以对结果进行综合分析.结果 2 881份样本中,考核试剂及参比试剂检测结果均为阳性,且参比试剂的测量值/临界值(S/CO)≥3.8,或检测结果符合确证试验阳性结果的阳性标本为274份,考核试剂及参比试剂检测结果均为阳性且参比试剂的S/CO＜3.8为59份,阴性标本2 539份,不确定的9份被剔除.考核试剂检测真阳性274份,无假阴性结果;真阴性2 527份,假阳性12份.考核试剂敏感度为100%,高于参比试剂的98.91%;特异度为99.53%,略低于参比试剂的99.88%.考核试剂对部分国内常见HCV基因型(1a型、1b型、2a型、3型和6型)样本27份,均为真阳性,敏感度为100%,对于非HCV感染的病毒性肝炎、自身免疫性疾病及妊娠样本具有良好的特异度,特异度均为100%.溶血、脂血样本对考核试剂检测结果无影响.考核试剂阳性预测值为95.80%,阴性预测值为100%,准确性为99.57%.考核试剂S/CO≥5.9的样本301份,其中用参比试剂检测S/CO≥3.8占88.70%;考核试剂S/CO＜5.9的29份,其中用参比试剂检测S/CO＜3.8占86.21%.结论 EIAgen敏感度100%,特异度较好,是一种优秀的检测抗-HCV EIAgen试剂,尤其适用于阳性样本的筛选.采用EIAgen试剂检测样本,当S/CO≥5.9时,样本的阳性预测值较高.
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糖尿病并发感染时趋化因子mRNA与蛋白表达变化的临床研究
目的 通过检验2型糖尿病(T2DM)并发感染患者炎症性趋化因子mRNA与蛋白表达变化,探讨其病理机制以及临床意义.方法 采用实时逆转录(RT-PCR)定量等检测技术,对48例早期T2DM(31～56岁,男、女各24名)并发感染患者治愈前后单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)和白介素-8(IL-8)mRNA与蛋白表达变化,以及与中性粒细胞(PMNL)、C超敏反应蛋白(hs-CRP)进行分析.结果 糖尿病并发感染患者的趋化因子IL-8和MCP-1 mRNA与蛋白表达均明显升高(均P＜0.01).PMNL、淋巴细胞(LC)、血小板(PLT)、hs-CRP和空腹血糖(FBG)治疗前后差异有统计学意义(均P＜0.05).MCP-1、MCP-1 mRNA以及IL-8 mRNA的半定量值与中性粒细胞和hs-CRP呈显著相关性(均P＜0.05);趋化因子mRNA与蛋白表达水平有正相关性(IL-8为r=0.33;MCP-1为r=0.88;均为P＜0.05).结论 T2DM患者感染急性期趋化因子高表达,渗出的吞噬细胞仍以中性粒细胞为主,单核-巨噬细胞等在受到LPS刺激后产生趋化因子并不依赖血糖水平和胰岛素功能.
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高效液相色谱-荧光法测定血清犬尿喹啉酸和色氨酸方法的建立
目的 建立同时检测血清犬尿喹啉酸(kynurenic acid,KYNA)和色氨酸(tryptophan,Trp)的高效液相色谱-荧光法.方法 采用高效液相色谱在线衍生技术,通过对佳检测波长、流速、流动相中醋酸锌浓度和乙腈比例等因素的探讨,得出测定Trp和KYNA的优实验方案,并对其进行方法学评价;测定50名正常人血清KYNA和Trp含量.结果 KYNA保留时间约为8.1 min,线性范围为1.05～2 093 nmol/L,低检出浓度为0.05 nmol/L,平均回收率为101.19%;Trp保留时间约为11.3 min,线性范围为0.49～196 μmol/L,低检出浓度为0.001 μmol/L,平均回收率为104.43%,二者日内、日间测定的变异系数均小于5%,苯丙氨酸、酪氨酸、5-羟色胺和犬尿氨酸等物质对该法均无干扰.健康成人血清KYNA和Trp含量分别为(24.25±9.11)nmol/L和(49.05±11.67)μmol/L.结论 建立的方法简便、快速、稳定、可行,适用于临床和科研工作.
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实时荧光定量PCR在人血液循环DNA检测中的应用
循环DNA主要存在于人血浆和血清等体液中,在多种人类疾病中含量升高,具有临床诊断意义和预后判断价值[1].本研究以人工重组质粒DNA为内参照物,建立双重实时荧光定量PCR检测方法,对健康人血浆和血清DNA含量进行定量测定.
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荧光定量PCR检测急性髓细胞白血病患者BAALC基因及临床意义
目的 研究急性髓细胞白血病(AML)患者BAALC(brain and acute leukemia cytoplasmic)基因的表达水平及其临床意义.方法 构建实时定量PCR检测BAALC基因表达的技术,并定量检测63例初治AML患者BAALC基因的表达水平及分析其与临床疗效的关系.结果 建立的实时定量PCR方法的标准曲线相关系数大于0.99.49例(78%)初治AML患者存在BAALC基因表达;BAALC基因高表达患者发病时外周血WBC计数、Hb浓度、PLT计数及骨髓白血病细胞比例分别为:(26.3±18.1)×109/L、(78.3±21.8)g/L、(76.9±64.5)×109/L和(61.2±22.3)%,低表达患者发病时外周血WBC计数、Hb浓度、PLT计数及骨髓白血病细胞比例分别为:(30.2±21.7)×109/L、(81.6±30.9)g/L、(73.9±57.2)×109/L和(54.3±16.3)%,两组间差异无统计学意义(P＞0.05);正常核型初治AML患者中BAALC高表达率为68%(25/37),高于非正常核型AML患者[23%(6/26)],差异有统计学意义(x2=12.093,P=0.001);正常核型初治AML患者中BAALC基因高表达患者化疗的完全缓解率(CR)为65%(20/31),低于低表达患者[84%(27/32)],差异有统计学意义(x2=6.573,P=0.013).结论 BAALC基因高表达是正常核型AML患者一个重要不良预后因素.
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白细胞介素6基因启动子区两个突变位点多态性检测方法的建立
目的 建立一种快速检测IL-6基因启动子区-597G/A、-572G/C多态性的双重实时荧光PCR方法.方法 采用1对引物,2对荧光标记探针,结合荧光共振能量转移原理和熔点曲线分析技术,检测IL-6基因启动子区-572G/C,-597G/A 2个位点多态性.结果 用建立的双重实时荧光PCR方法对123名健康查体者进行检测,发现中国汉族人IL-6基因启动子区-572位点有3种基因型,分别为GG,GC,CC型;-597位点仅发现4名为GA型,其余均为GG型,尚未发现AA型.结论 双重实时荧光PCR法简便快速,与其他方法比较具有准确、经济的特点,适合临床基因快速分型.
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采用自身抗体建立氧化脂蛋白(a)水平的ELISA检测法
目的 提取和鉴定人血清中氧化脂蛋白(a)[ox-Lp(a)]自身抗体,建立ox-Lp(a)ELISA检测法并进行临床研究.方法 采用溴化氰活化的sepharose 4B交联ox-Lp(a)制备免疫吸附层析柱,从正常人血清中提取抗ox-Lp(a)自身抗体,分析其免疫反应性.分别建立以抗ox-Lp(a)的自身抗体、抗氧化LDL(ox-LDL)多克隆抗体为包被抗体,酶标抗载脂蛋白(a)[apo(a)]为检测抗体的ox-Lp(a)ELISA检测法,并对100例冠心病患者和100名健康体检人群进行分析.结果 8份正常人血清中均存在抗ox-Lp(a)自身抗体,与ox-Lp(a),ox-LDL均具有良好的反应性;再经亲和层析除出抗ox-LDL自身抗体后,2份标本同ox-Lp(a)仍具有较高的反应性.同对照组相比,本组冠心病患者血浆Lp(a)水平显著升高[(279.6±162.7)mg/L比(206.3±126.4)mg/L,P＜0.01];ox-Lp(a)水平亦明显增加(P＜0.01),采用自身抗体和抗ox-LDL抗体建立的ELISA法测定结果分别为:(24.3±33.4)μg/ml比(8.4±9.3)μg/ml和(13.0±13.8)μg/ml比(7.3±9.7)μg/ml;两种ELISA法间结果高度相关(r=0.78,P＜0.01).结论 提取的人血清ox-Lp(a)自身抗体可识别apo(a)和apoB氧化位点,采用自身抗体建立的ox-Lp(a)检测法能更真实、准确地反应体内Lp(a)的氧化状态,冠心病患者ox-Lp(a)水平显著升高.
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X-连锁肾上腺脑白质营养不良的分子诊断方法研究
X-连锁肾上腺脑白质营养不良(X-linked adrenoleukodystrophy,X-ALD)是过氧化物酶体病的一种,由ABCD1基因突变所致,该疾病基因定位于Xq28,其成熟mRNA长约3 700bp,编码1个含745个氨基酸残基的蛋白质,称为ABCD1蛋白.自ALD的致病基因被定位克隆以来[1],至今国际上已报告了900余种ABCD1基因突变(www.X-ald.nl),其中错义突变占60%[2].笔者于2006年7月至11月分别对6个X-ALD家系进行基因突变分析,现报告如下.
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原发性Ⅱb型高脂血症尿酸和炎性因子及其血清胱抑素C水平观察
目的 观察原发性Ⅱb型高脂血症血清胱抑素C(Cys C)、尿酸(UA)、超敏C反应蛋白(HsCRP)、IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)以及血脂水平的改变,探讨其变化规律和可能的变化机制.方法 总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、UA采用酶法,载脂蛋白AI(apoAI)、载脂蛋白B(apoB)、脂蛋白(a)[Lp(a)]、HsCRP、Cys C采用免疫比浊法,IL-6、TNF-α采用ELISA法.使用仪器为AU-640全自动生化分析仪.结果 原发性Ⅱb型高脂血症组的TC、TG、LDL-C、apoB、Cys C、UA、HsCRP均高于健康对照组(P＜0.01),它们分别为(3.70±0.66)mmol/L,(9.50±0.92)mmol/L,(4.50±0.31)mmol/L,(1.70±0.21)g/L,(1.21±0.17)mg/L,(441.4±114.7)μmol/L,(11.5±3.2)mg/L.正常健康人则分布为(1.88±0.66)mmol/L,(4.00±0.66)mmol/L,(2.80±0.33)mmol/L,(0.74±0.23)g/L,(0.71±0.18)mg/L,(343.0±113.9)μmol/L,(1.8±0.7)g/L.而且原发性Ⅱb型高脂血症组血清Cys C与HsCRP、UA呈正相关(P＜0.05).结论 Cys C和UA在原发性Ⅱb型高脂血症中的改变具有趋势性.HsCRP作为炎症标志物,在原发性Ⅱb型高脂血症中的检测价值优于IL-6和TNF-α.
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儿童急性淋巴细胞白血病IgH基因重排的定量检测研究
目的 建立免疫球蛋白重链(IgH)的实时定量(RQ)-PCR检测体系,以用于儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)微小残留病(MRD)检测.方法 采用定性PCR筛选109例儿童B细胞ALL(B-ALL)IgH基因单克隆重排,根据连接区序列设计等位基因特异性引物,应用RQ-PCR技术,采用胚系Taqman探针与引物,在41例患儿中建立RQ-PCR定量检测方法,并分析其敏感度、特异性等.结果 109例儿童B-ALL初诊标本中IgH单克隆重排有48例,经测序分析发现,V、D、J片段频率高的分别为V3家族、D3家族和J4家族.RQ-PCR方法扩增48例IgH单克隆重排的初诊DNA,其中41例可重复敏感度和大敏感度均≤10-4,非特异性扩增的循环阈值(Ct值)均＞40,与特异性扩增Ct值的差距均＞3.标准曲线斜率均值为-3.31±0.19,截距均值为37.66±1.23,相关系数均为0.97以上.结论 以IgH基因重排为靶分子,采用RQ-PCR方法和胚系探针策略检测儿童B-ALL,敏感性≤10-4,并具有较高的特异性,适于MRD的定量研究.
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人Toll样受体3基因表达水平的实时荧光定量PCR测定
目的 建立检测人Toll样受体3(TLR3)mRNA表达水平的实时荧光定量逆转录PCR(FQ-RT-PCR)法,及探讨其在外周血单个核细胞(PBMC)中的表达水平.方法 用Beacon Designer2.1软件设计TLR3基因特异性引物和荧光探针,逆转录扩增目的片段,构建重组体pMD18-T-TLR3作为定量标准品.在ABI Prism 7000型荧光定量分析仪上,通过荧光强度达到一定阈值时的循环数来定量起始模板,建立标准曲线;并检测30名正常人及20例原发性胆汁性肝硬化(PBC)患者,20例慢性乙型肝炎肝硬化患者外周血PBMC TLR3基因的荧光强度,根据标准曲线及循环阈值,由软件自动计算样本中TLR3 mRNA的起始拷贝数.结果 FQ-RT-PCR检测TLR3基因的线性范围为102～108拷贝数/μl RNA(r=-0.9974),内参β-actin的线性范围为103～108拷贝数/μl RNA(r=-0.9984);高浓度样本批内和批间变异系数(CV)分别为6.7%和8.7%,低浓度样本批内及批间CV分别为12.3%和14.0%,30名健康人,20例PBC及20例慢性乙型肝炎肝硬化患者PBMC中均有TLR3 mRNA的表达,分别为3.46×102～4.51×103拷贝/μg RNA、4.92×102～1.42×104拷贝/μgRNA和2.58×102～7.17×103拷贝/μg RNA.结论 成功建立检测TLR3 mRNA的FQ-RT-PCR方法,可作为临床和基础研究TLR3基因表达的工具.
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急性白血病PTEN mRNA表达和Akt磷酸化水平的相关性研究
目的 了解急性白血病(AL)PTEN mRNA表达和Akt磷酸化(p-Akt)水平的关系,以期探讨急性白血病发生发展的机制.方法 采用逆转录(RT)-PCR法检测白血病细胞系K562、Jurkat、HL-60及21名健康对照者和68例AL患者PTEN mRNA表达情况.同时用流式细胞术检测K562、Jurkat、HL-60细胞和AL患者p-Akt水平.结果 (1)21名健康对照者PTEN mRNA阳性18名,占85.70%.K562细胞PTEN mRNA阳性,Jurkat、HL-60细胞阴性.68例AL中PTEN mRNA阳性18例,占26.47%,与健康对照者比较差异有统计学意义(x2=23.38,P＜0.01);31例AL缓解患者PTENmRNA阳性21例,与AL初诊组比较差异有统计学意义(x2=15.19,P均＜0.01).AL各亚型PTEN阳性率比较差异无统计学意义.(2)21名健康对照者p-Akt中位数1.57%.K562、Jurkat细胞p-Akt高表达,HL-60细胞低表达.68例AL患者p-Akt中位数25.47%,与健康对照者比较差异有统计学意义(P＜0.01).(3)AL患者PTEN mRNA表达缺失率与p-Akt阳性率呈显著正相关(r=0.73,P＜0.01).结论 AL患者PTEN mRNA表达缺失是导致p-Akt高表达的关键因素之一,可能和急性白血病的发生发展有关.
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EB病毒转化外周血淋巴细胞建立永生细胞系方法的研究
目的 保存家族性疾病家系成员特有的基因组资源,为进一步研究奠定物质基础.方法 应用EB病毒(Epstein-Barr Virus)转化外周血B淋巴细胞建立永生细胞系,分别采用4种方法:(1)外周血淋巴细胞转化法;(2)外周血淋巴细胞冻存转化法;(3)微量全血转化法;(4)微量全血冻存转化法.结果 4种方法建系结果分别为:外周血淋巴细胞转化培养20株;外周血淋巴细胞冻存转化培养4株;微量全血转化培养4株;全血冻存转化培养4株,总计32株建系均获成功.成功转化的细胞体积增大,形态多样,增生的细胞多聚集成团.所有的细胞株冻存后复苏的成功率为100%.结论 该研究提供了家族性疾病永生细胞系的建立方法,同时也为在分子水平上揭示家族性疾病的发病机理提供了DNA材料.
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短发夹RNA靶向抑制环氧化酶-2基因表达对肺癌细胞A549增殖的影响
目的 评价短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)靶向肺癌细胞A549环氧化酶-2(COX-2)基因表达的抑制作用,并观察对肺癌细胞A549生长和细胞周期的影响.方法 将抑制COX-2基因的shRNA DNA模板插入到真核表达载体pGenesil-1的U6启动子下游,构建靶向抑制COX-2基因的重组表达载体pshRNA-COX-2.将试验分为3组:未转染肺癌细胞A549组、阴性对照HK组和pshRNA-COX-2转染组.用脂质体LipofectamineTM2000转染肺癌细胞A549,逆转录(RT)-PCR和免疫印迹法(Wb)分别检测COX-2基因mRNA和蛋白表达情况,流式细胞术检测细胞周期,细胞计数检测细胞生长变化.结果 与阴性对照组相比,pshRNA-COX-2重组表达载体抑制COX-2 mRNA及蛋白表达的抑制率分别为72.2%和48.6%;Go-G1期细胞由63.7%上升为71.0%,S期细胞由26.5%下降为20.0%;细胞生长明显减慢.结论 pshRNA-COX-2重组表达载体能显著抑制肺癌细胞COX-2表达,引起G0-G1期细胞增多,S期细胞减少,从而抑制肺癌细胞生长.
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乙型肝炎病毒慢性感染的临床免疫学检测和研究的重要性
免疫系统在HBV慢性感染的病程和转归中发挥着重要作用.慢性乙型肝炎(CHB)患者体内免疫功能异常,主要表现为抗HBV的特异性细胞免疫功能低下,同时伴有不同程度的树突状细胞(DC)、CD4辅助性T细胞(Th)、CD8细胞毒性T细胞(CTL)功能损伤,调节性T细胞(Treg)细胞数量增加以及PD-L1/PD-1抑制途径异常活跃等方面.同时,临床免疫学检测和研究对于CHB病程各阶段的免疫状态的判断,指导抗病毒治疗和评价疗效以及建立新的免疫治疗策略都有重要意义.
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病毒性肝炎免疫监测研究的新趋势:量化、特异及紧密结合临床
HBV和丙型肝炎病毒(HCV)感染的终清除依赖于机体有效的免疫系统的参与.对慢性HBV、HCV抗原及宿主免疫应答监测是近年来的研究热点.近在慢性HBV及HCV感染及抗病毒治疗过程中,关于病毒抗原及宿主免疫应答监测研究的新进展,也有效推动着临床免疫监测的发展.
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RNA干扰在肿瘤治疗中的应用及检测技术前景
早在1990年,人们就尝试利用反义链来抑制基因表达,并提出了核酸治疗的概念.RNA干扰(RNA interference,RNAi)是真核生物中普遍存在的抵抗病毒入侵、抑制转座子活动、调控基因表达的监控机制,随着此项技术的发展和机制研究的不断深入,其在感染性疾病、遗传病和肿瘤治疗中的作用日益受到人们的重视.由于恶性肿瘤细胞具有无限增殖、侵袭转移和逃避免疫监视等特点,目前还无特异的治疗方案,而RNAi技术能够特异沉默与肿瘤发生发展的相关基因,有望开发出新型的治疗药物,或研发出与现有治疗手段联用的新型疾病治疗模式.
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过敏性肺炎合并播散性念珠菌病一例
过敏性肺炎(hypersensitivity pneumonitis,HP)为一种吸入环境中颗粒性物质所引起的变态反应性疾病,我们发现1例桔青霉菌致过敏性肺炎合并播散性念珠菌病的患者,现报道如下.
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一种生化分析仪清洁剂的研制
目前国内使用的进口生化分析仪大多采用进口清洁剂进行清洗,价格昂贵,购买不方便.为了满足需求、节约开支,我们进行国产清洁剂的研制.本研究参考文献[1-3]和参照7060型全自动生化分析仪使用说明书,利用非离子表面活性剂等成分配制而成,用于生化分析仪反应槽的日常清洗中.此配方外观为无色透明、化学性质稳定,成本价格便宜,经过3年的试用,已达到实验要求,可以替代进口清洁剂(Hitergent).
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临床基因扩增检验实验室过程记录电子文档的建立及应用
临床基因扩增检验实验室的准入制度标志着我国临床实验室管理工作日臻完善和规范.其完整的文件管理和过程记录作为临床基因扩增检验实验室的重要组成部分,也日益受到广大同行的关注.客观、全面的质量管理体系,有赖于高效、便捷、准确的管理系统.为此,我们应用Excel工作表的强大功能[1],建立和开发了临床基因扩增检验实验室过程记录电子文档管理系统,并应用于临床基因扩增检验实验室的日常管理,结果满意,现介绍如下.
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自动生化分析仪测定参数的设置原则
生化分析仪的参数即仪器工作的指令,操作者通过参数控制仪器完成一系列复杂而有序的操作程序.参数种类很多,有些参数是在生产制造中设置好的,如分析仪的取样、冲洗、检测、数据处理等一些通用操作,其程序均已经固化在存储器里,用户不能修改,只需选择即可工作.另外一些参数属于测试项目的指令,即测定参数.
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新型隐球菌性脑膜炎分子诊断方法的建立
新型隐球菌性脑膜炎(Cryptococcus neoformans meningitis,CNM)是新型隐球菌侵犯脑膜引起的中枢神经系统感染性疾病.近年发病率有所升高,由于早期极易误诊误治,晚期又缺乏有效的药物治疗,病死率很高.改善CNM预后的关键是早期明确诊断、早期治疗.本研究用荧光定量PCR(FQ-PCR)技术建立CNM的分子诊断方法,现报告如下.
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一种同时鉴定和检测产超广谱β内酰胺酶细菌的方法
目的 评价含64μg/ml头孢噻肟的CHROMagar尿道菌定位琼脂在检测产超广谱β内酰胺酶(ESBLs)细菌中的作用.方法 以美国临床和实验室标准协会(CLSI)推荐的酶抑制剂增强试验检测产ESBLs菌株结果为标准,评价含头孢噻肟CHROMagar尿道菌定位琼脂在检测产ESBLs细菌的敏感度和特异度.菌株鉴定采用API条.结果 在上海华山医院临床分离的260株大肠埃希菌和287株肺炎克雷伯菌中,CLSI推荐的酶抑制剂增强试验检测产ESBLs菌株分别为175株、200株.含64μg/ml头孢噻肟CHROMagar尿道菌定位琼脂检测产ESBLs菌株分别为172株、197株.与CLSI推荐的酶抑制剂增强试验检测结果相比,含64μg/ml头孢噻肟CHROMagar尿道菌定位琼脂检测大肠埃希菌中产ESBLs菌株的敏感度、特异度和准确性分别为98.3%(172/175)、100%(85/85)和98.8%(257/260),肺炎克雷伯菌中产ESBLs菌株的敏感度、特异度和准确性分别为98.5%(197/200)、100%(87/87)和98.9%(284/287)结论 含64μg/ml头孢噻肟CHROMagar尿道菌定位琼脂在鉴定大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的同时即能检测是否为产ESBLs菌株,不失为一种简便快捷的方法,值得在临床微生物实验室推广应用.
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全国免疫学与分子生物学技术新进展研讨会暨新技术培训班纪要
由中华检验医学杂志编辑委员会、中华医学会检验分会和卫生部临床检验中心联合举办的"全国免疫学与分子生物学技术新进展研讨会暨新技术培训班",于今年6月18日至21日在桂林召开.来自全国各省、自治区、直辖市的300余名检验、科研、临床和相关医药与检验诊断企业的专家和代表出席了会议.中华医学会罗玲副秘书长到会致辞,她在致辞中对近年来临床检验界参与生命科学研究和运用新技术和新方法,积极开展广泛的多学科交流,加速和促进学科发展所做的努力予以肯定.中华医学会检验分会丛玉隆主任委员和卫生部临床检验中心申子瑜主任的致辞都对临床检验界在21世纪应注重检验工作质量建设,承担起日益增强的保证医疗服务质量的重任,开展高层次临床检验质量管理工作与研究的对策提出了建议.
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《中华检验医学杂志》编审专家介绍
孙芾 《中华检验医学杂志》第六、七届编辑委员会委员.主任医师.1960年6月生.1984年毕业于中国医科大学医疗系.1984-1997年就职于卫生部北京医院检验科,曾任北京医院检验科副主任.1988-1989年赴美国约翰霍普金斯(John Hopkins)大学医学院临床病理科学习,主修流式细胞术和血液分析.1998年后在北京和睦家医院工作,任医学检验中心和血库主任.现任国际实验血液学会理事、中华医院管理协会临床实验室管理分会常委、中华医学会检验分会第六届委员会委员、北京医学会检验分会委员、中国医师协会检验医师分会常委、北京医师协会病理分会委员等.从事检验医学工作20多年,发表论文30余篇,参与编写著作6本,十几次参加国际学术交流会议,曾到访十几个国家进行学术交流.业务专长:血细胞及凝血分析、医学检验临床应用、临床实验室管理等.
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溃疡性结肠炎一例诊断与治疗评析
患者,男,52岁,因"间断腹泻、脓血便7年,再发1月",于2006年5月入住本院.患者7年前劳累后出现腹泻,初为黄色糊状便,数日后变成黏液脓血便,10余次/日,便前有腹痛,便后可缓解,伴里急后重,无发热.抗感染治疗后缓解,但症状反复出现.3年前外院肠镜示"全结肠黏膜充血水肿,散在溃疡,回盲部未见异常",诊断为"溃疡性结肠炎(UC)",未正规治疗,症状仍反复出现.
| 年 | 期数 |
| 2019 | 02 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2017 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2011 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2010 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2009 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2008 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2007 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2006 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2005 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2004 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2003 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2002 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2001 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2000 | 01 02 03 04 05 06 |
| 1999 | 01 02 03 04 05 06 |
| 1998 | 01 02 03 04 05 06 |
