万古霉素和替考拉宁分别与利福平联合应用对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌体外抗菌活性的研究

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococcus aurues,MRSA)是医院感染和社区获得性感染的重要病原菌[1-2],对多种抗菌药物产生不同程度的耐药,所造成的感染发病率呈逐年攀升态势.万古霉素、替考拉宁是治疗MRSA的有效药物.本研究对从临床各类感染标本中分离的30株MRSA进行了万古霉素、替考拉宁分别与利福平联合应用的体外抑菌试验,以期为临床有效的治疗MRSA感染提供实验室依据.

梅毒螺旋体血清学检测方法比较

梅毒血清学试验是目前国内外诊断梅毒的主要实验室检查方法,目前使用的方法较多,探讨各种试验方法在梅毒的诊断、治疗等方面的应用价值,确定适合临床的佳方法很有必要.本研究运用ELISA、胶体金快速检测试验(ACONSYP)、梅毒螺旋体血凝试验(TPHA)、梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验(TPPA)、甲苯胺红不加热血清试验(TRUST)5种血清学检测方法,对各期梅毒患者的标本进行检测,并对检测结果及各种方法的优缺点进行比较分析,为临床梅毒检测方法的选择提供参考.

人Smith D1抗原在原核细胞中的表达与纯化及临床应用

目的 获得人Smith D1(Sm D1)抗原基因,并进行原核表达及建立斑点免疫金渗虑(dot immunogold filtration assay,DIGFA)检测方法.方法 采用基因工程技术,通过PCR从人白血病HL-60细胞cDNA文库中扩增人Sm Dl抗原基因,构建pGEX-5T-Sm D1重组表达载体,在大肠杆菌BL21中通过异丙基硫代半乳糖苷酶(IPTG)诱导表达Sm D1蛋白.利用初步纯化的Sm D1抗原建立DIGFA.结果 重组质粒测序和酶切结果显示Sm D1抗原基因正确插入pGEX-5T,重组蛋白、复性及纯化产物经12%十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE),在相对分子质量为39 000处有一明显的蛋白表达条带,免疫印迹法分析表明,重组蛋白具有人Sm D1抗原的抗原性.DIGFA与色疫印迹法检测结果的差异无统计学意义(P＞0.05),二者的符合率为91.7%.DIGFA敏感度为100%,特异度为83.3%结论通过基因工程技术制备获得初步纯化的谷胱苷肽转移酶(GST)-Sm D1融合蛋白,用该抗原建立的DIGFA与免疫印迹法相似,且具有快速、简便和可靠等优点.

人精液液化的显微镜下特征观察

目的 比较观察精浆内凝胶状物质消失前后精液分析主要指标的差异,了解该现象在判定精液液化中的意义.方法 体外采精后立即充池入精子计数板,置光学显微镜下观察其液化过程中凝胶状物质的形态变化,并于胶状物质消失前后进行精液分析.结果 人精液液化过程中可以通过显微镜观察到精浆中凝胶状物质呈现特征性的形态变化,32份精液分析结果显示,前向运动精子和精子活动率在此形态变化前后分别为(30.3±12.4)%和(45.0±14.9)%、(44.9±12.7)%和(59.0±15.3)%,差异有统计学意义(t=-1.130和5.023,P均＜0.01),而精子密度在液化前后分别为(55.3±33.9)×106/ml和(62.1±32.3)×106/ml,差异无统计学意义(t=1.180,P＞0.05).结论 通过显微镜观察到精液中凝胶状物质呈特征性变化,该特征可作为一种客观和简易可行的判定精液液化的手段.

大肠埃希菌中检出多种质粒介导的AmpC酶

目的 了解安徽省产质粒介导的AmpC β内酰胺酶细菌的基因型特征及耐药性.方法 收集临床分离无重复大肠埃希菌共407株,采用头孢西丁三维试验检测AmpC酶,琼脂稀释法检测耐药性,PCR扩增各组基因及测序以确定AmpC酶基因型.结果 头孢西丁三维试验阳性率为8.1%(33/407),其中质粒介导的AmpC β内酰胺酶的检出率为3.0%(12/407).PCR扩增和测序结果证实为5株blaCMY-2、4株blaDHA-1和2株blaACT-2基因,并发现1株新的CMY型基因,DNA测序表明该基因和CMY-2有97%的同源性,并在国内首次发现blaACT-2基因.药敏试验显示对头霉素和哌拉西林耐药,对亚胺培南100%敏感,2株产DHA-1型酶的菌株对头孢吡肟耐药.结论 安徽省各地区已有质粒介导AmpC酶的出现,基因型有CMY-2、DHA-1和ACT-2.碳青霉烯类药物可作为治疗产质粒介导的AmpC酶细菌感染的首选药物.

不同年代铜绿假单胞菌1型整合子结构比较

目的 研究1992-1996年和2003-2005年两个时间段90份铜绿假单胞菌1型整合子结构,比较其结构差异,以了解不同年代1型整合子变化趋势.方法 用常规和长片段PCR方法扩增1型整合子及耐药基因,并对PCR产物进行测序和GenBank比对分析.结果 41份1992-1996年间样本有13份检出1型整合子结构,长片段PCR扩增1型整合子DNA平均长度为1 868 bp,平均包含2个耐药基因,包括qacE△1(n=6)、sul1(n=14)、aadA1(n=2)、aadB(n=1)、PSE-1(n=2)和tetA(n=1)等6种耐药基因,形成5种耐药基因盒组合.49份2003-2005年间样本中有19份检出1型整合子结构,长片段PCR扩增产物平均长度为3 383 bp,平均包含3.6个耐药基因,包括qacE△1(n=18)、sul1(n=25)、aadA1(n=6)、aadB(n=7)、aacA4(n=2)、PSE-1(n=3)、VEB-1(n=4)、OXA10(n=1)、cm1A(n=1)和tetA(n=2)10种耐药基因,形成9种耐药基因盒组合.结论 根据整合子碱基数量和所携带耐药基因盒数量,发现2003-2005年间检出的1型整合子结构比1992-1996间检出的复杂程度增加.

编码人疱疹病毒8型小衣壳蛋白开放阅读框65的原核表达及应用

目的 构建人疱疹病毒8型(HHV8)小衣壳蛋白ORF65编码基因的原核表达载体,并进行原核表达.方法 提取BCBL-1细胞(HHV8阳性而EBV阴性)DNA,PCR技术扩增HHV8ORF65基因,目的 基因与原核表达载体pThioHis A连接后,转化宿主菌Escherichia coli BL21,异丙基硫代-D-乳糖苷(IPTG)诱导融合蛋白表达,经带有6个组氨酸标签的亲和层析柱纯化获得重组抗原.重组蛋白电泳后转至聚偏氟乙烯(PVDF)膜,与HHV8阳性血清进行免疫印迹反应.对相关患者进行检测,并与美国Biotrin公司生产的HHV8 IgM和HHV8 IgG抗体间接荧光抗体试验(IFA)检测试剂盒和德国Qiagen公司ELISA检测试剂盒进行比较.结果 DNA序列分析表明目的 基因序列与HHV8标准毒株相应序列完全一致,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酸胺凝胶电泳(SDS-PAGE)电泳可观察到相对分子质量为31 500的融合蛋白的表达,免疫印迹反应显示重组抗原具有较高的特异性.基因工程抗原的各项技术指标与Biotrin公司和Qiagen公司检测试剂盒有较好的符合率,对临床标本的检测表明该试剂盒简单、实用、结果稳定可靠.结论 HHV8重组抗原具有较好的抗原性,进一步完善后可用于HHV8抗体的检测.

导致高水平氨基糖苷类抗生素耐药的新型16S rRNA甲基化酶研究进展

氨基糖苷类抗生素通过与细菌30S核糖体的16S rRNA亚单位结合,导致读码错误,干扰蛋白合成从而阻止细菌生长[1].氨基糖苷类抗生素作为一类高效、广谱的抗生素,因其具有浓度依赖性的快速杀菌、可与细胞壁活性抗菌药物产生协同作用的特点,一直是临床上治疗革兰阴性菌所致严重感染的重要药物.

实体肿瘤分子标志的研究现状及其潜在的临床应用价值

随着近40年来肿瘤研究基金的大量投入,现代诊断治疗仪器和技术的发展,以及分子水平科研技术在肿瘤研究上的应用,人们对肿瘤发生的认识和诊断治疗的水平都有所提高.

蛋白质组学在病原微生物基因功能研究中的应用

病原微生物,尤其是新病原微生物的出现及一些病原微生物的抗药性,使感染性疾病成为危害人类健康的大敌.目前已完成302个(不包括病毒)微生物基因组测序,还有573个重要微生物基因组在测序中,而病原微生物基因组的研究是全基因组测序的重要组成部分,多种重要病原微生物包括流感嗜血杆菌(Hemophilus influenzae)、幽门螺杆菌(Helicobacter pylori)、结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)、麻风分枝杆菌(Mycobacterium leprae)、铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)等全基因组序列的公布,极大促进了病原微生物的致病机制及其基因功能的研究,这些DNA序列的信息为进一步研究蛋白质组奠定了良好的基础,目前已建立了很多病原微生物的蛋白质组学数据库.蛋白质组学及比较蛋白质组学主要通过基因组测序信息鉴定菌株中的独特性蛋白质,获得表型水平上菌株差异的相关信息,并对特定的细胞组分进行分析[1].

儿童急性淋巴细胞白血病分子标志及临床应用的研究进展

儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)的现代分型策略及治疗模式是,首先在初诊时,将形态学-免疫学-细胞遗传学-分子生物学(即MICM)检测结果与一些临床指征相结合,将患儿初步划分为高危、中危和低危三级危险度.

质粒介导的喹诺酮类药物耐药研究进展

喹诺酮类药物(Quinolones)是一类广谱、强效的化学合成抗细菌药物.长期以来,细菌通过染色体介导的靶位点改变[1]、蓄积减少[2](包括孔蛋白缺失、主动外排增加)等机制逐渐对其形成耐药.

成年人神经母细胞瘤骨髓转移一例

神经母细胞瘤是常见于儿童时期的恶性肿瘤,成年人尤其中老年人罕见,国内外鲜有报道,近本院通过骨髓细胞学分析确诊了1例成人神经母细胞瘤,现报告如下.

镰刀菌致毛霉菌性肺炎一例

近年来随着医院感染菌种的不断变迁、大量抗生素的广泛应用,全身性真菌感染呈显著增高趋势,但由镰刀菌属菌引起的真菌性肺炎实为少见.我院于2006年6月份从痰中检出1例镰刀菌引起的毛霉菌性肺炎,现报告如下.

临床生物化学常规定量方法的分析性能评价

自动化装置与电子计算机数据处理系统的不断完善,极大地推进了临床检验方法学的发展.20年多年来,临床生物化学检测已从手工操作发展为自动化测定.自动化分析极大地提高了测定的精密度,检测效率也得到极大提高.临床实验室所使用的检验方法为常规方法,使用的是商品试剂.

2003-2006年北京安贞医院检验科标本不合格的特点分析及对策

实验室检查是临床诊疗工作中一个基本环节,1个检验结果要经过标本采集、处理及检测、报告和审核报告等不同阶段才能完成,这并非1个人或1个部门所能独立承担的.于是现代检验医学管理提出了分析前、分析中、分析后质量控制的3个阶段[1].

高效液相色谱-电化学法检测尿甲基福林和甲基去甲福林对诊断嗜铬细胞瘤的意义

目的 建立高效液相色谱-电化学法(HPLC-ECD)检测24h尿甲基福林(MN)和甲基去甲福林(NMN)的方法,并通过与血尿儿茶酚胺(CA)、尿CA的比较验证MN、NMN对嗜铬细胞瘤诊断的优越性.方法 使用MCX固相萃取柱对MN、NMN进行提取,采用HPLC-ECD法加以检测,计算组内、组间变异和样品回收率.用此方法对104例非嗜铬细胞瘤高血压患者和5例嗜铬细胞瘤患者进行MN、NMN检查,同时对所有病例的血CA、24 h尿CA进行检测.结果 MN的组内、组间变异系数和回收率分别为5.9%、7.5%、91.1%;NMN的组内、组间变异和回收率分别为6.3%、6.6%、88.5%.病例组的MN、NMN、血CA、尿CA均为阳性;对照组的MN和NMN无假阳性,而血CA、尿CA分别出现15、14例假阳性.结论 本研究建立了HPLC-ECD快速准确检测24 h尿MN、NMN的方法,MN、NMN是目前临床检验嗜铬细胞瘤的佳指标.

定值冰冻人血清校准前后γ-谷氨酰转移酶室间测定结果调查

目的 观察采用参考方法赋值的冰冻人血清样本作为校准品,校准不同检测系统后,测定冰冻人血清样本γ-谷氨酰转移酶(γ-GT)活性,可否改善测定的准确性和可比性.同时观察统一校准前后,不同质控品测定结果的离散度.方法 由北京市临床检验中心向参加调查的15家实验室发放标定值为59.5 U/L的γ-GT校准品1支,不同浓度冰冻人血清样本5支,不同厂家冰冻质控样本10支.比较统一校准前、后,不同检测系统间γ-GT测定结果的变异和不同检测系统测定结果与参考方法测定结果间的偏差.结果 对于血清样本,统一校准前、后,各检测系统测定结果与参考方法测定结果间的偏差从-9.0%～-14.2%下降到-0.8%～-7.9%.各检测系统间的变异从6.9%～11.6%下降到2.8%～4.4%.对于质控样本,统一校准前、后,各检测系统测定结果与参考方法测定结果的偏差有增加趋势,各系统间变异无明显变化.结论 采用定值冰冻人血清样本作为校准品可以改善不同检测系统测定结果的准确性和可比性,但不能改善实验室质控品测定结果的可比性.

几种人血清肌酐常规测定方法与反相高压液相色谱测定法的比对研究

目的 观察人血清肌酐反相HPLC测定的不精密度和准确性,以HPLC为标准,评价几种人血清肌酐常规测定方法的准确性.方法 Beckman LX20测定系统采用Jaffé动力学法,强生Vitros 250测定系统采用干化学法,酶法采用协和酶法试剂盒,在Hitatchi7170全自动生化分析仪上进行测定人血清肌酐.肌酐HPLC测定以反相C18为固定相,5-氟尿嘧啶(5-Fluorouracil,5-Fu)为内标,于235 nm处进行检测.结果 HPLC法的批内不精密度(n=5)＜2.0%,日间不精密度(n=20)＜5.1%.绝对回收率＞95.31%,相对回收率＞98.95%.不同肌酐浓度有证参考物质的测定值与靶值一致,平均偏倚为-0.31%～1.35%.HPLC法作为独立变量,当肌酐浓度＜200 μmol/L时,Beckman LX20系统、强生干化学系统及酶法的偏倚分别为-19%～21%、-14%～21%和-30%～11%;当肌酐浓度＞200 μmol/L时,Beckman LX20系统、强生干化学系统及酶法的偏倚分别为-10%～13%、-13%～14%和-20%～10%,其中酶法结果基本为负偏倚,在肌酐浓度70 μmol/L时,有的负偏倚达到30%.结论 以5-Fu为内标的人血清肌酐反相高压液相色谱法精密度和准确性好.Beckman LX20和强生测定系统与反相高压液相色谱法的偏倚相对较小,酶法测定结果系统偏低,且当血清肌酐浓度＜70 μmol/L时不能准确测定.

《中华检验医学杂志》编审专家介绍

周惠平《中华检验医学杂志》第五、六届编辑委员会委员,第七届编辑委员会资深编委.研究员、教授、硕士研究生导师.1938年5月出生.1962年毕业于北京医学院(现北京大学)医疗系,1962-1969年工作于解放军军事医学科学院五所,1969-1978年工作于国防科委第十三研究院四所,1978年起至今一直工作在北京大学(原北京医科大学)第一附属医院,1985年9月至1986年11月于丹麦国立血清研究所及哥本哈根维多福医院进修,1990年1月至1990年10月于芬兰赫尔辛基大学医学院附属医院及米诺瓦研究所进修.曾任检验科副主任、主任,兼任医院感染科主任,北京医科大学(现北京大学)医学检验专业教学委员会(检验系)主任委员,北京大学(原北京医科大学)临床药理研究所兼职教授.

毒性弥漫性甲状腺肿一例诊断与治疗评析

患者,女性,58岁.因手抖、怕热、多汗、心慌2月余,于2006年11月30日入住本院.患者于2006年9月无明显诱因出现手抖、怕热、多汗、乏力,活动后心慌、气短.无胸闷,无多食.之后逐渐出现食欲减退、恶心,无呕吐.口干、多饮,多尿,大便次数增多至3～4次/日.

2007临床蛋白质组学高峰论坛在京召开

本刊可直接使用的医学缩略语

卵巢上皮癌中DNA错配修复基因启动子区甲基化状态研究

目的 探讨卵巢上皮癌中DNA错配修复基因(hMLH1、hMSH2)启动子区甲基化状态及其在卵巢癌发生发展中的作用.方法 用甲基化特异性PCR(MSP)法检测20份正常卵巢组织,25份良性卵巢肿瘤,56份卵巢上皮癌中hMLH1、hMSH2基因启动子区的甲基化状态;同时检测5-氮-2'-脱氧胞苷(5-aza-2'-deoxycytidine,5-Aza-CdR)处理前后卵巢癌细胞株SKOV3和3AO中hMLH1、hMSH2甲基化改变;逆转录(RT)-PCR法检测5-Aza-CdR(1 μm/L)处理前后卵巢癌细胞株中hMLH1和hMSH2 mRNA表达水平.结果 正常卵巢癌组织中均未见hMLH1、hMSH2启动子甲基化;良性卵巢肿瘤中hMLH1和hMSH2甲基化阳性率分别为4%(1/25)、8%(2/25);卵巢上皮癌中hMLH1和hMSH2甲基化阳性率分别为30.4%(17/56)、51.8%(29/56);且与肿瘤细胞的分化程度和淋巴结转移密切相关(P＜0.05).5-Aza-CdR处理卵巢癌细胞株后,可逆转hMLH1和hMSH2启动子区的甲基化,细胞株的hMLH1和hMSH2 mRNA表达均有不同程度的增加.结论 DNA错配修复基因hMLH1、hMSH2甲基化为卵巢癌发生发展中的早期基因改变,有可能成为卵巢癌早期诊断、评价疗效和判定预后的分子生物学指标.hMLH1和hMSH2甲基化与mRNA表达密切相关,是表达调节的重要方式之一,这种改变可被甲基化酶抑制剂所逆转.

真性红细胞增多症20例患者JAK2 V617F基因突变分析

真性红细胞增多症(PV)是一种较少见的造血干细胞水平异常克隆性疾病,迄今对其确切的发病机制尚不十分清楚,国际真性红细胞增多症研究小组(PVSG)和WHO等对PV的各种诊断标准仍是排他性的,且缺少像慢性粒细胞性白血病(CML)一样的BCR/ABL融合基因特异性标志.近,有学者报道[1-6],在BCR/ABL阴性骨髓增殖性疾病(MPD)患者中存在JAK2基因突变--JAK2 V617F.本研究对20例PV患者进行JAK2 V617F检测分析,并初步探讨其临床意义.

ShineRoar探针技术检测单核苷酸多态性

目的 建立一种低成本、高效率、操作简便的单核苷酸多态性(SNP)检测技术.方法 采用自行设计的"ShineRoar探针",结合融解曲线技术检测目的 基因SNP.并根据其工作原理分别对肿瘤坏死因子受体Ⅱ(TNFRⅡ)和载脂蛋白M(apoM)的基因多态性进行检测;同时用DNA测序技术鉴定ShineRoar探针技术的准确性.结果 融解曲线分析结果显示,某一基因的野生型及突变型纯合子分别在2个不同的融解温度出现融解谷.TNFRⅡ基因第6外显子196位突变(ATG→AGG)所产生的T和G等位基因的融解温度分别为(52.84±0.75)℃和(58.38±0.61)℃;apoM T-778C突变所产生的T和C等位基因的融解温度分别为(42.55±0.73)℃和(49.19±0.57)℃.一致性Kappa检验显示ShineRoar探针技术与DNA测序技术的SNP检测结果一致(Kappa=1,P=0.000).结论 ShineRoar探针技术简单、快速、准确,适用于大批量基因分型的研究.

新疆地区苯丙氨酸羟化酶基因外显子7的突变研究

目的 研究分析新疆地区苯丙酮尿症(PKU)患者中苯丙氨酸羟化酶(PAH)基因外显子7的突变特征.方法 用PCR及单链构象多态性(SSCP)分析技术结合基因序列测定法,对37例PKU患者进行PAH基因外显子7突变筛查和鉴定.结果 从37例PKU患者(共74条染色体)中,发现20条染色体等位基因异常,经测序鉴定共检出5种错义突变,即R243Q、L255S、E280G、E280K和P281L,等位基因突变检出率为27%.其中R243Q频率高(18.9%),L255S次之(4.1%),而E280G、E280K和P281L仅为1.4%.在5种基因突变中,E280G为在国际上第2次发现,L255S、E280K和P281L为在国内第2次检出.维吾尔族群体也检出了2例突变,分别是P281L和R243Q,均为在本地区维吾尔族中首次报道.查阅国内外研究结果结合本结果分析后发现,R243Q是亚洲黄种人常见的突变体,P281L和E280K是欧洲及拉美等国较为普遍存在的突变型,而E280G与L255S则是具有中国特色的基因突变.结论 新疆PKU基因突变类型及频率具有明显的地区特点,是我国与欧亚地区之间相互区别、又相互联系的一个较为特殊的PAH突变基因分布带,也是研究基因突变多样性、PAH基因异质性特点以及人类起源、迁徙等的理想资源地.

等位基因特异-荧光定量PCR检测胱硫醚-β-合成酶基因T833C/G919A点突变及其与糖尿病肾病的关联性初步观察

目的 建立胱硫醚-β-合成酶(CBS)基因T833C、G919A点突变的等位基因特异-荧光定量PCR(TaqMan-ARMS)测定方法,探讨2型糖尿病肾病患者CBS基因T833C、G919A点突变率及与糖尿病肾病(DN)的相互关系.方法 采用PCR时引物3'端错配扩增阻滞(ARMS)原理,结合荧光定量PCR技术(TaqMan探针),制备野生和突变质粒标准品,建立野生引物和突变引物2个反应体系,根据荧光定量PCR时野生引物循环阈值(Wct)与突变引物循环阈值(Mct)的比值△ct(△ct=Wct/Mct)及扩增有无指数增长期出现,建立点突变等位基因型的判定标准,并对94例DN患者(组1)和140例尿微量白蛋白正常的非糖尿病对照者(组2)的CBS基因T833C、G919A点突变进行检测.结果 建立的TaqMan-ARMS方法检测T833C野生等位基因型的判定标准为△ct＜0.72或Mct＞40,杂合突变型为0.9＜△ct＜1.10,纯合突变型为1.40＜△ct或Wct＞40;G919A野生等位基因型判定标准为△ct＜0.74或Mct＞40,杂合突变型为0.92＜△ct＜1.03,纯合突变型为1.26＜△ct或Wct＞40.T833C点突变TT、TC、CC 3种基因型在DN组分布频率分别为98.94%、1.06%和0,组2中分别是99.29%、0.71%和0;两组人群833C等位基因频率分别为0.53%和0.36%,基因型和等位基因频率差异均无统计学意义.各组中未发现G919A等位基因杂合突变和纯合突变型.结论 成功建立了测定CBS基因T833C、G919A点突变的TaqMan-ARMS方法,该方法准确、特异,适合高通量点突变的检测.本研究未观察到CBS基因T833C、G919A点突变为DN的遗传危险因素.

慢性丙型肝炎患者的血清HCV基因型和RNA含量与ALT和AST水平不相关

目的 研究HCV基因型、RNA含量与肝损伤指标的相关性.方法 对来自14家医院的208例慢性丙型肝炎患者的血清进行ALT、AST检测,采用罗氏公司的Cobas Amplicor HCV Monitor Test version 2.0(v2.0)试剂进行HCV RNA定量和Simmons酶切分型方法进行HCV基因分型检测,分析HCV基因型、HCV RNA含量与ALT、AST水平及AST/ALT比值的相关性.结果 本研究的208例慢性丙型肝炎患者中,基础HCV RNA含量与ALT、AST水平及AST/ALT比值没有相关性(r值分别为0.093、0.092、0.009,均P＞0.05),高病毒含量组(≥8.5×105 IU/ml)与低病毒含量组(＜8.5×105IU/ml)比较ALT、AST水平及AST/ALT比值的差异无统计学意义(P=0.101、0.052、0.746);HCV基因1型与非基因1型之间ALT、AST、AST/ALT的差异无统计学意义(P=0.406、0.461、0.528),HCV基因1型与非基因1型之间RNA含量差异无统计学意义(P＞0.05);治疗结束时病毒应答组和非应答组比较的ALT、AST水平及AST/ALT比值的差异无统计学意义(P=0.443、0.641、0.942),随访结束时,病毒应答组和非应答组的ALT、AST水平及AST/ALT比值的差异无统计学意义(P=0.201、0.411、0.76).结论 慢性丙型肝炎患者的HCV基因型和RNA病毒含量与肝损伤指标没有相关性.

产酸克雷伯菌超广谱β内酰胺酶与AmpC酶耐药表型及基因型分析

目的 了解呼吸道感染患儿产酸克雷伯菌超广谱β内酰胺酶(ESBLs)与AmpC酶的耐药表型和基因型.方法 采用API及VITEK32鉴定菌株;琼脂稀释法检测MIC值;CLSI纸片确认实验检测ESBLs,3-氨基苯酚硼酸(APB)纸片增强法检测AmpC酶;基因芯片技术检测ESBLs与AmpC酶的基因型;并进行肠杆菌基因间共有重复序列(Enterobacterial repetitive intergenic consensus,ERIC)分型.结果 165株产酸克雷伯菌ESBLs阳性129株(78.2%),ESBLs与AmpC酶同时阳性16株(9.7%),表型及基因型均未检出AmpC单独阳性株;CTX-M型是其主要基因型(89/109),产AmpC酶株的基因型仅见DHA型;ERIC分型显示多数耐药产酸克雷伯菌具有相同的分子型.产酸克雷伯菌的产酶株及非产酶株对碳青霉烯类100%敏感,但产酶株(尤其是同时产ESBLs与AmpC酶)比非产酶株耐药率高,多重耐药性更常见.结论 儿童患者中产酸克雷伯菌产ESBLs分离率较高;ESBLs与AmpC酶的耐药基因型分别主要是CTX-M型和DHA型.

慢性HBV感染者肝组织HBV cccDNA的定量检测

目的 建立一种肝活检组织中HBV共价闭合环状DNA(cccDNA)的定量检测方法.方法 待检肝组织标本共21份,来源于江苏省人民医院肝脏手术患者,包括19份慢性HBV感染,其中HBeAg(+)标本10份,HBeAg(-)标本9份,4份非HBV感染为阴性对照组,取HBV DNA阳性的患者外周血作为rcDNA组.检测方法的主要步骤为肝组织经蛋白酶K和细胞裂解缓冲液消化后,用液相抽提法提取核酸,将提取的核酸溶液分为2等份.1份用特异性降解单链DNA的核酸酶加以消化,纯化后使用跨缺口引物和SYBR Green Ⅰ荧光染料进行实时荧光定量PCR分析;另1等份则用以定量检测肝细胞看家基因(β-Globin)作为样本细胞参数.检测结果的特异性主要通过PCR反应产物的序列分析及rcDNA组结果的对照进行证实,HBeAg(+)组和HBeAg(-)组cccDNA水平的差异通过两样本t检验进行分析.结果 PCR产物经琼脂糖凝胶电泳分析显示扩增产物的碱基数为350 bp左右,DNA测序分析提示产物与目的 片段的序列符合率为99%以上,且以rcDNA为对照的结果均为阴性,排除有可能造成假阳性的rcDNA对结果的干扰.本方法对10 mg HBeAg(+)肝组织标本的cccDNA的检测阳性率为100%.血清HBeAg(+)的肝组织样本的平均HBV cccDNA水平高于HBeAb(+)的肝组织标本(P＜0.05).结论 通过上述三种途径证实了本文所建立方法的特异性.应用SYBR Green Ⅰ荧光染料和β-Globin作为样本细胞参数所建立的实时荧光定量PCR方法检测肝细胞内HBV cccDNA,具有较高的特异性、敏感性,且成本较低的特点.

三株奇异变形杆菌超广谱β内酰胺酶基因型研究

超广谱β内酰胺酶(ESBLs)是造成大肠埃希菌和克雷伯菌对3代头孢菌素等β内酰胺类抗生素耐药的主要原因.近年来肠杆菌科中的其他细菌ESBLs的检出率也逐年增加,不同国家和地区均有检测到变形杆菌ESBLs不同基因型的报道[1-2].本研究对温州医学院附属第一医院和浙江大学医学院附属第二医院分离的奇异变形杆菌进行ESBLs检测及基因型研究.

粪便DNA甲基化分析在结直肠癌诊断中的应用价值

目的 研究人粪便中分泌型卷曲相关蛋白2(SFRP2)、增生性息肉蛋白(HPP1)和O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(MGMT)基因甲基化状态及其用于结直肠癌(CRC)筛查的可行性.方法 从52例CRC患者、35例结直肠良性疾病患者和24名正常对照者粪便标本中提取DNA,采用甲基化特异性PCR(MSP)技术分析粪便DNA中SFRP2、HPP1和MGMT基因甲基化状态.结果 CRC患者粪便SFRP2、HPP1和MGMT基因甲基化阳性率分别为94.2%、71.2%和48.1%;96.2%的CRC和81.8%的癌前病变患者中至少存在1个基因的过甲基化.1例正常粪便标本SFRP2甲基化阳性.联合3个基因诊断CRC和癌前病变的敏感度、特异度、阳性预测值和阴性预测值分别为93.7%、77.1%、84.3%和90.2%.结论 联合分析SFRP2、HPP1和MGMT基因甲基化是检测CRC及癌前病变的高敏感性方法.检测粪便基因甲基化有望成为CRC无创诊断或高风险人群筛查的一个新途径.

术前检测骨髓中肺特异性X蛋白基因对肺癌微转移诊断的价值

目的 探讨肺特异性X蛋白基因检测对肺癌骨髓微转移的诊断价值.方法 用荧光定量逆转录(RT)-PCR法检测51例肺癌、13例肺外肿瘤(乳腺癌4例、胃癌6例、肝癌3例)、22例良性疾病(结核性脑炎4例、伤寒2例、流行性脑炎3例、再生障碍性贫血6例、粒细胞缺乏症7例)患者术前骨髓标本中LUNX mRNA,并对各组检测结果进行比较分析.结果 肺癌患者骨髓LUNXmRNA表达阳性率及中位拷贝数分别为58.8%(30/51)、35拷贝/ml;其他疾病组则均为0,其组间差异均有统计学意义(x2=11.12,Uc=3.7329,均P＜0.01).荧光定量RT-PCR法检测肺癌微转移患者骨髓LUNX mRNA表达的特异性为100%;而且肺癌患者骨髓标本LUNX mRNA表达与组织病理学类型、细胞分化程度及TNM分期均呈正相关(均P＜0.05).结论 LUNX mRNA是诊断肺癌骨髓微转移特异性较高的分子标志.

血清γ-谷氨酰转移酶测定参考方法的建立及在酶校准品定值中的临床应用

目的 通过建立γ-谷氨酰转移酶(GGT)测定参考方法,及其对酶校准品进行定值,并将此酶校准品在常规试剂配套使用,探讨血清GGT测定结果的准确性与一致性.方法 按照国际临床化学与检验医学联合会(IFCC)有关GGT活性测定的要求,建立参考方法;通过测定有证参考物质(CRM),验证参考方法的准确可靠性;并用参考方法对制备的酶校准品进行准确定值;在不同分析仪上,分别用理论K值和使用校准品校准的方法测定40份人血清,记录测定结果;计算测定结果与参考方法的相对偏倚及变异系数.结果 采用参考方法测定CRM,结果在CRM允许范围内;在HITACHI 7600、7060、7170、7180及BECKMAN LX20、OLYMPUS AU400生化分析仪上,测定40份人血清,采用校准品校准较理论K值,相对偏倚≤10%的样品比例明显上升,相对偏倚≥20%的样品比例下降;测定5个浓度水平的人血清,采用理论K值测定结果的变异系数为11.0%～14.0%,采用校准品校准变异系数下降到5.0%以下.结论 中生GGT试剂盒与酶校准品配套使用后,测定结果的准确性和一致性有明显提高.