模拟高原缺氧环境对大鼠小肠组织病理和肠黏膜通透性的影响

目的 探讨模拟高原环境对大鼠小肠黏膜形态结构和超微结构的影响,并通过双糖吸收实验考察肠黏膜通透性的改变.方法 利用减压舱模拟5 500 m海拔高度,缺氧处理3周后,光镜及透视电镜下观察小肠黏膜上皮细胞形态结构和超微结构的变化.采用HPLC法检测研究对象尿液标本中甘露醇和乳果糖排出率比值.结果 与实验对照组比较,高海拔缺氧组大鼠小肠黏膜变薄、肠黏膜水肿、绒毛短缩;超微结构也显示线粒体肿胀、嵴稀疏或消失,微绒毛变短、倒伏和部分缺失,且肠黏膜细胞凋亡也较常见.高海拔缺氧组肠道的通透性显著高于实验对照组(P<0.01).结论 高原缺氧环境可导致小肠黏膜损伤,肠黏膜通透性增加,肠黏膜屏障破坏.

水动力注射法构建乙型肝炎病毒感染小鼠模型

目的 建立尽量接近人类自然条件下发生的急性病毒性肝炎感染动物模型,研究其发病机制和治疗方法.方法 选择中国地区高流行的人HBV C基因型具有复制能力的1.2倍HBV基因组为材料,构建可高效表达HBV基因组的重组腺病毒相关病毒载体pZAC2.1-HBV.利用尾静脉水动力注射法将pZAC2.1-HBV注入小鼠.结果 瞬间转染人肝癌细胞系HepG2细胞后,在细胞上清和裂解液中检测到HBsAg.ELISA方法检测小鼠血清中HBsAg和HBeAg的水平可持续表达14天,随后抗-HBs、抗-HBe出现.同时在14天之内可检测到血清中HBV-DNA特异片段.结论 采用水动力注射法成功建立HBV感染急性小鼠模型.

粪便转铁蛋白试验在提高消化道出血检出率中的作用

目的 研究粪便转铁蛋白试验(TFPT)与免疫粪隐血试验(IFOBT)互补的可行性,以提高消化道出血的检出率.方法 连续性收集接受胃镜或结肠镜检查患者的粪便,其中上消化道出血性疾病27例,上消化道非出血性疾病31例;下消化道出血性疾病30例,下消化道非出血性疾病16例.分别计算IFOBT和TFPT的敏感性、特异性、阳性预示值、阴性预示值,再计算转铁蛋白试验与粪隐血试验的互补率.结果 在上消化道出血性疾病中,TFPT的敏感性(8/27)显著高于IFOBT(2/27)(P<0.05).在下消化道出血性疾病中,TFPT的敏感性(25/30)也显著高于IFOBT(16/30)(P<0.05).两个试验结合互补后,将上、下消化道出血检出率分别提高到29.6%和83.3%.结论 无论是上消化道出血还是下消化道出血,转铁蛋白试验的敏感性均高于免疫粪隐血试验.两个试验结合互补可明显提高消化道出血的检出效率.

咪达唑仑联合异丙酚静脉麻醉在胃镜检查中的临床应用评估及对照研究

目的 探讨咪达唑仑联合异丙酚静脉麻醉在胃镜检查中临床应用的安全性和价值.方法 收集我院2007年10月～2008年10月门诊及住院患者,选择常规胃镜检查者226例为对照组,咪达唑仑联合异丙酚静脉麻醉辅助胃镜检查者72例为镇痛组,监测患者胃镜术前、术中收缩压(SBP)、舒张压(DBP)、心率(HR)、血氧饱和度(SpO2)的变化;观察并记录患者对胃镜插入时间、检查完成时间、耐受程度,是否有恶心、呛咳、躁动、呕吐等反应,术后患者完全清醒后询问其对胃镜检查的记忆缺失及感受,以及麻醉药物发生副作用的情况.结果 镇痛组术中SBP、DBP、HR与术前比较有明显下降,差异有统计学意义(P<0.05);对照组术中SBP、DBP、HR与术前比较出现明显升高,差异有统计学意义(P<0.05),两组患者SpO2均无明显变化.镇痛组的平均胃镜插入时间较对照组短,差异有统计学意义(P<0.05);镇痛组的平均完成时间与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);镇痛组患者术中反应明显降低,感受明显好于对照组;患者术后对胃镜检查无痛苦回忆,满意度高,且并发症发生未增加;镇痛组胃镜检查成功率100%,对照组为96.9%,差异无统计学意义.两组患者均无意外情况发生.结论 本组研究结果显示咪达唑仑联合异丙酚静脉麻醉用于胃镜检查镇静镇痛效果好,安全有效.但检查过程中应密切监测生命体征的变化.

原发性胆汁性肝硬化26例临床特征及疗效回顾分析

目的 总结原发性胆汁性肝硬化(PBC)患者的临床特征及诊治经验,以提高对该病的认识.方法 对我院1996年7月～2005年12月收治的26例PBC患者的临床特征、生化、免疫学及组织学等资料进行回顾性分析.结果 26例PBC患者中男6例,女20例,中位年龄47岁(36～76岁),临床表现主要为黄疸(100%,26/26),贫血(84.6%,22/26),皮肤瘙痒(69.2%,18/26).血清总胆红素[(208.0±119.7)μmol/L,26/26]、总胆汁酸[(128.7±94.9)μmol/L,26/26]、碱性磷酸酶[(467.1±289.0)U/L,25/26]、γ-谷氨酰转肽酶[(476.8±469.1)U/L,23/26];65.4%(17/26)患者IgM明显升高(4.2±1.8)g/L,抗线粒体抗体(AMA)阳性率76.2%(16/21).19例患者行肝穿刺病理检查,早期(Ⅰ～Ⅱ期)占47.4%(9/19),进展期(Ⅲ～Ⅳ期)占52.6%(10/19);26例患者经常规护肝加熊去氧胆酸治疗,23例病情好转,有效率达88.5%.结论 PBC以中年女性多见,黄疸为患者主要表现,血清总胆红素、总胆汁酸、碱性磷酸酶、γ-谷氨酰转肽酶水平及AMA等有助于疾病的诊断,肝穿病理学检查可进一步确诊疾病及组织学分期,常规护肝加熊去氧胆酸治疗效果确切.

姜黄素对人结肠癌细胞SW480作用的体外实验研究

目的 研究姜黄素促进人结肠癌细胞系SW480凋亡的作用.方法 人结肠癌细胞系SW480与不同浓度的姜黄素共孵育48 h,MTT法检测细胞存活率,并用相差显微镜观察细胞形态学改变.用流式细胞术(检测细胞凋亡相关指标Annexin V/PI)和Ho-echst3258染色检测细胞凋亡.结果 姜黄素能够不同程度地抑制人结肠癌细胞系SW480的生长.姜黄素对SW480细胞的IC50(半数抑制浓度)为65 mg/mL.Hoechst3258荧光染色与流式细胞术分析SW480细胞的结果一致.结论 姜黄素可促进SW480细胞凋亡,为姜黄素治疗结肠癌提供依据.

埃索美拉唑联合莫沙必利治疗重度反流性食管炎的疗效观察

目的 探讨埃索美拉唑联合莫沙必利治疗重度反流性食管炎的临床疗效.方法 将90例经内镜证实为Ⅱ、Ⅲ级反流性食管炎患者随机分为埃索美拉唑联合莫沙必利组(A组)、奥美拉唑联合莫沙必利组(B组)和埃索美拉唑组(C组),三组分别口服埃索美拉唑20 mg,2次/d,莫沙必利5 mg,3次/d;口服奥美拉唑20 mg,2次/d,莫沙必利5 mg,3次/d;以及口服埃索美拉唑20 mg,2次/d治疗,疗程8周,停药后复查胃镜.观察治愈率,并记录症状改善情况及不良反应.结果 治疗8周后A、B、C三组症状改善总有效率分别为96.88%、75.00%、70.00%;胃镜下有效率分别为93.75%、71.43%、66.67%,A组与其他两组比较均有显著性差异(P<0.05).结论 埃索美拉唑联合莫沙必利治疗重度反流性食管炎有较高的治愈率和症状改善率,临床疗效明显优于奥美拉唑联合莫沙必利及单独应用埃索美拉唑治疗.

微探头超声内镜鉴别诊断表面光滑型食管隆起性病变的价值

目的 探讨微探头超声内镜(MPS)鉴别诊断表面光滑型食管隆起性病变的价值.方法 189例患者胃镜检查发现表面光滑型食管隆起性病变,行MPS检查并与病理检查比较.结果 MPS诊断食管平滑肌瘤或间质瘤56例,其中起源于黏膜肌层35例,起源于固有肌层21例;食管静脉瘤52例;食管外压性隆起38例;食管囊肿34例;食管息肉9例.结论 MPS能准确判断表面光滑型食管隆起性病变的起源和层次,并能较好地提示病变性质,对明确该类病变的诊断及指导治疗具有较高的价值.

慢性乙型病毒性肝炎选用不同抗病毒药物临床疗效观察

目的 临床观察拉米夫定和阿德福韦酯及干扰素治疗慢性乙型病毒性肝炎的疗效及不良反应.方法 随机应用单一抗病毒口服药拉米夫定治疗24个月患者43例、应用阿德福韦酯治疗24个月患者41例,联合应用阿德福韦酯及干扰素-α患者36例.分别记录并对比三组患者治疗6个月、12个月、18个月、24个月时疗效及不良反应.结果 三组病例在治疗各时段肝功能明显改善、血HBV-DNA水平大幅下降、乙肝标志物的阴转率增高.病毒变异发生率以拉米夫定治疗组高(P<0.01).联合治疗组在肝功能改善、血HBV-DNA水平降低、乙肝标志物的阴转率等各方面均优于前两组单一口服用药组,差异显著(P<0.01).结论 阿德福韦酯保护肝功能、抑制病毒复制效果良好而不易发生病毒变异.与干扰素联合使用,安全有效,明显提高乙肝标志物的阴转率和治疗成功率.

白蛋白透析联合去甲肾上腺素治疗重型肝炎Ⅰ型肝肾综合征临床研究

目的 观察白蛋白透析联合去甲肾上腺素治疗重型肝炎Ⅰ型肝肾综合征的疗效.方法 应用白蛋白透析联合去甲肾上腺素治疗15例重型肝炎Ⅰ型肝肾综合征患者,并与传统的多巴胺药物治疗进行比较.结果 白蛋白透析联合去甲肾上腺素治疗组肝肾功能、血流动力学及电解质恢复明显好于多巴胺药物治疗组,且生存率较单纯多巴胺药物治疗组明显提高.结论 白蛋白透析联合去甲肾上腺素是治疗重型肝炎并发Ⅰ型肝肾综合征的有效方法.

非酒精性脂肪性肝病患者内毒素、瘦素、IL-6及IL-8水平测定

目的 探讨非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)患者内毒素(ET)、瘦素、IL-6、IL-8水平在NASH发生发展中的变化情况,以及它们与脂肪肝严重程度的关系.方法 90例NAFLD患者根据脂肪肝严重程度分为轻度者30例,中度者30例,重度者30例.测定患者及30例健康对照者的体重指数(BMI)、内毒素(ET)、瘦素、IL-6、IL-8的水平.结果 与健康对照者比较,NAFLD患者ET升高,伴随ET水平的升高,瘦素及IL-6、IL-8也升高,中度及重度更加明显(P<0.05).重度与中度相比差异无统计学意义(P>0.05).结论 NAFLD患者存在肠源性内毒索血症(IETM)、瘦素、IL-6、IL-8等细胞因子在非酒精性脂肪性肝病发病中具有重要致病作用,其升高程度与脂肪肝严重程度一致.

肠结核与克罗恩病的临床鉴别及肠黏膜结核分枝杆菌聚合酶链反应检测的意义

目的 总结肠结核与克罗恩病临床症状、内镜、病理表现的差异及肠黏膜组织结核分枝杆菌聚合酶链反应(polymerasechain reaction for Mycobacterium tuberculosis,TB-PCR)对二者鉴别诊断的意义.方法 回顾分析1994年1月～2006年2月于我院确诊的42例肠结核和60例克罗恩病病例,记录患者的临床、内镜、病理表现特点及肠黏膜TB-PCR检测结果.结果 克罗恩病患者临床表现为消化道出血者占56.9%(33/58),较肠结核(16.1%,5/31)多见(P<0.001);29.3%克罗恩病患者有肠外表现(口腔溃疡、皮疹、关节痛、肛周病变),而肠结核患者未见;内镜下克罗恩病表现为纵行/裂隙样溃疡(44.9%,22/49)、卵石征(28.6%,14/49)、节段性病变(51.0%,25/49)多于肠结核(7.7%、3.9%、0)(P值分别为0.001、0.011、0.000);克罗恩病患者肠黏膜组织病理表现为淋巴细胞聚集占34%(18/53),小血管炎占26.4%(14/53),明显较肠结核多见(0%、3.8%)(P值分别为0.001、0.016).82.4%(14/17)的肠结核患者试验性抗结核1～2周症状改善,而5例克罗恩病患者试验性抗结核治疗4～8周均无效.肠黏膜组织TB-PCR检测阳性率肠结核组为11.5%(3/26);与CD组(14.3%,3/21)比较无显著差异(P>0.5).结论 肠结核与克罗恩病鉴别需结合临床表现、内镜、影像学表现综合判断;肠黏膜TB-PCR对肠结核与CD鉴别诊断的意义有限;试验性抗结核治疗及内镜随访仍是鉴别肠结核与克罗恩病的有效方法.

黄芩甙对重症急性胰腺炎大鼠胰腺氧化应激的保护作用

目的 探讨黄芩甙对大鼠重症急性胰腺炎(SAP)氧化应激的保护作用.方法 45只大鼠随机分为假手术组、模型组和黄岑甙干预组,每组15只.假手术组进腹后仅翻动胰腺和十二指肠后关腹,不给予任何干预,模型组、黄芩甙干预组采用3.5%牛磺胆酸钠逆行胰胆管注射制造SAP大鼠模型.黄芩甙干预组在造模成功后给予黄芩甙治疗,其余两组给予等量生理盐水.术后3h、6 h及12 h,测定各组大鼠血清淀粉酶的水平及胰腺组织MDA、SOD及MPO的含量,免疫组化法检测胰腺组织聚腺苷二磷酸核糖(PAR)及硝基酪氨酸的表达.结果 术后3 h、6 h及12 h,模型组血清淀粉酶较假手术组显著增高(P<0.01),黄芩甙干预组血清淀粉酶显著降低于模型组(P<0.01);术后各时间点,黄芩甙干预组胰腺组织MDA、MPO含量显著低于模型组(P<0.01);SOD水平显著高于模型组(P<0.01);术后各时间点,假手术组胰腺组织均无PAR及硝基酪氰酸表达,模型组PAR及硝基酪氨酸表达阳性,且随时间延长表达增多,黄芩甙干预组PAR及硝基酪氨酸表达均低于模型组,且随时间延长显著减少.结论 黄芩甙可能通过降低胰腺炎的氧化应激水平,减轻胰腺炎症程度而发挥对胰腺炎的保护作用.

rAAV载体介导的HDV核酶对HBV基因表达的抑制作用

目的 探讨重组腺相关病毒介导的HDV核酶在细胞内抑制乙型肝炎病毒基因表达的作用.方法 将针对HBV基因序列C区的反式HDVRz与U6启动子和绿色荧光蛋白基因EGFP及其启动子CMV共同插入腺相关病毒载体pSNAV中并取代其原有CMV启动子区域,构建为pSNAV-CRz重组载体.并将pSNAV-CRz、pSNAV及pLEGFP质粒转染HepG2.2.15培养细胞,荧光显微镜下观察绿色荧光,对转染后培养细胞内蛋白进行HBeAg和HBsAg的ELISA分析.结果 所构建的重组载体经双酶切及PCR验证与实验设计一致.重组载体转染培养细胞后,荧光显微计数表明,pSNAV-CRz的转染效率为30%.HBeAg和HBsAg的ELISA检测显示,pSNAV-CRz重组载体对HepG2.2.15细胞中HBV病毒的HBeAg和HBsAg表达抑制率分别为63.5%和50.07%.结论 细胞水平试验证明,重组腺相天病毒载体介导的反式HDVRz在体外培养细胞水平对HBV的复制起到一定的抑制作用.

溃疡性结肠炎大鼠结肠黏膜中MMP-3和PPAR-γ的表达及其意义

目的 检测基质金属蛋白酶-3(matrix metallopmteinases-3,MMP-3)及过氧化物酶体增殖物激活受体-γ(peroxisome prolif-erator-activated receptor-γ,PPAR-γ)在溃疡性结肠炎大鼠结肠黏膜中的表达情况,探讨二者在溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)发病机制中的作用.方法 运用复合法制备UC大鼠模型,应用免疫组化Elivision法检测模型组和正常对照组大鼠结肠黏膜中MMP-3和PPAR-γ表达,并分析其与病理组织学分级关系.结果 模型组和正常对照组大鼠结肠黏膜中MMP-3阳性表达率分别为90%(18/20)和55%(11/20),两者差异有统计学意义(P=0.013).MMP-3的表达在UC大鼠Ⅰ级、Ⅱ级、Ⅲ级分别为74.79±7.75、88.07±7.05、98.77±6.87;UC大鼠Ⅰ级、Ⅱ级、Ⅲ级两两比较MMP-3差异有统计学意义.PPAR-γ在模型组大鼠结肠上皮中阳性表达率为35%(7/20),在正常大鼠结肠上皮中阳性表达率为80%(16/20),两者差异有统计学意义(P=0.004).UC大鼠Ⅰ级、Ⅱ级、Ⅲ级PPAR-γ的表达分别为74.09±13.76、49.25±10.86、11.76±6.12;UC大鼠Ⅰ级、Ⅱ级、Ⅲ级两两比较PPAR-γ差异有统计学意义(P<0.05).UC大鼠结肠黏膜中MMP-3表达与PPAR-γ表达呈负相关(rs=-0.454,P=0.044).MMP-3在UC大鼠结肠黏膜中呈过度表达,并与病理组织学分级呈正相关;UC大鼠结肠黏膜中PPAR-γ表达明显下降,且与病理组织学分级呈负相关.结论 MMP-3与PPAR-γ不同表达在UC发病机制中可能起协同作用,二者联合检测有可能成为UC临床诊断及评估病理组织学分级的监测指标.

肝病患者甲胎蛋白定量检测的临床意义

目的 探讨肝病患者血清甲胎蛋白定量检测的临床意义,分析甲胎蛋白水平与肝病的相天性.方法 收集130例肝病患者,其中包括急、慢性肝炎、肝硬化、重型肝炎及原发性肝癌的甲胎蛋白结果及生化学指标,分析其与病情发展的相关性.结果 肝癌患者中有82.35%(14/17)甲胎蛋白升高,且明显高于其他组(P<0.01);慢性乙型重型肝炎患者的甲胎蛋白也显著升高(P<0.01),但低于肝癌患者(P<0.01),重型肝炎好转组甲胎蛋白显著高于死亡组(F=6.40,P<0.01).结论 甲胎蛋白轻度升高是重型肝炎患者预后良好的预测指标,但明显升高要警惕原发性肝癌的发生.

胰蛋白酶原基因突变影响T淋巴细胞受体对乙型肝炎病毒表面抗原的应答

目的 研究胰蛋白酶原基因(PRSS1)不同的基因型对乙型肝炎病毒表面抗原的反应性.方法 将8例携带PRSS1 A121T(c.361 G>A)突变、12例PRSS1基因沉默突变D162D(c.486 C>T)的胰腺炎患者和16例健康体检者的外周血淋巴细胞分别加于乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)衣壳抗原和0.9%生理盐水进行体外培养,存0、12、24、36、48、72 h计数点对不同组别的淋巴细胞进行充池计数并折算成增殖率,同时用流式细胞术检测CD4、CD8的表达情况,并对不同基因型咦腺炎患者的乙型肝炎病毒表面抗体(hepatitis B surface antibody,anti-HBs)水平在病程中变化情况进行统计分析.结果 携带PRSS1基因A121T突变的胰腺炎患者的anti-HBs水平在胰腺炎病程中波动较大,而携带沉默突变的胰腺炎患者与健康对照无显著性差异,在外周血淋巴细胞刺激增殖实验中A121T突变的胰腺炎患者对HBV的反应性呈减弱状态,而沉默突变的胰腺炎患者与健康对照无显著性差异,流式细胞术检测显示PRSS1基因A121T突变的胰腺炎患者的CIM/CD8比值降低.结论 来自胰蛋白酶原基因不同基因型的淋巴细胞对乙型肝炎病毒表面抗原的反应性不一.胰蛋白酶原基因突变会干扰T淋巴细胞受体对乙型肝炎病毒表面抗原的反应性.

HCV感染患者免疫细胞部分细胞因子分泌情况的初步研究

目的 研究与正常人比较丙型肝炎病毒(HCV)感染患者免疫细胞分泌γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素10(IL-10)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)及白细胞介素4(IL-4)的细胞频数情况,了解HCV感染对其影响.方法 分离外周血单核细胞(PBMCs),应用IL-10、IFN-γ、TNF-α及IL-4流式抗体进行细胞内因子染色,应用FACSCalibur流式细胞仪及FACSCalibur软件进行检测分析.结果 HCV感染患者分泌IL-10、IFN-γ、IL-4的细胞频数在CD4+CD8-T细胞、CD4-CD8+T细胞、NK细胞和NKT细胞均发生明显下降;分泌TNF-α的细胞频数在CD4-CD8+T淋巴细胞及NK细胞出现下降;HCV感染患者NK细胞、NKT细胞分泌IL-10和IFN-γ的细胞频数较CIM+CD8-T淋巴细胞、CD4-CD8+T淋巴细胞下降得更加明显.结论 HCV感染患者的细胞免疫功能受到明显的损害,细胞因子分泌能力明显减低;同有免疫细胞功能受损可能是HCV感染慢性化的重要原因;细胞因子分泌的调节是抗HCV感染免疫治疗过程中需要调节的方向.

H指数应用进展

H指数由Jorge E.Hirsch于2005年提出,一问世就受到世人极大的关注,成为近年来学术界一种定量评价学术成就的新指标.H指数综合评价一个学者的学术论文的产出量和质量,被视为下一代个人学术定量评价的核心.本文尝试探讨H指数应用于学术评价的优缺点,以及其应用范畴的扩展.

英夫利西单抗治疗顽固性克罗恩病并短肠综合征1例

英夫利西单抗有助于防止克罗恩病的复发,是克罗恩病合并短肠综合征者的有效治疗手段,有助于防止剩余小肠受累,提高生活质量.

杜氏病的诊断及治疗

对我院10年来收治的15例杜氏病(Dieulafny disease)进行回顾性分析.结果 显示11例内镜下治疗成功止血,3例行DSA治疗,1例手术治疗.急诊内镜检查是杜氏病主要的诊断手段,内镜下治疗足目前杜氏病首选的治疗方法.

腹型过敏性紫癜12例临床分析及内镜检查

为了促进成人腹型过敏性紫癜的早期诊断,对12例成人腹型过敏性紫癜的临床特点与胃镜表现进行分析.结果 显示,12例成人腹型过敏性紫癜均有阵发性腹部绞痛、恶心,呕吐10例,黑便3例.胃镜检查发现12例病人均见十二指肠黏膜散在大小不一的出血斑,3例十二指肠球部溃疡并出血,病理检查见黏膜组织内大量中性粒细胞及淋巴细胞浸润.腹痛发生后1～7 d出现下肢紫癜.表明早期胃镜检查对于过敏性紫癜腹型具有一定诊断价值.

上腹痛、胃体黏膜下肿物

病例 梁××,男,34岁.反复上腹隐痛,伴反酸、烧心5年余.患者5年前无明显诱因出现上腹部不适,主要表现为上腹部隐痛,伴反酸、烧心.门诊多次以慢性胃炎进行治疗.3年前在当地医院行胃镜检查提示:胃体黏膜下隆起性病变,慢性浅表性胃炎.

诱导多能干细胞的研究进展

诱导多能干细胞是指通过直接诱导成体细胞而获取的胚胎干细胞样细胞,具有获取方便、能向各类细胞分化及无限增殖等特性.本文就诱导多能干细胞的获取方法、应用前景及在肝病领域的应用展望作一概述.

粉防己碱对大鼠静止期肝星状细胞细胞周期的影响

目的 观察粉防己碱对大鼠静止期肝星状细胞(HSCs)细胞周期的影响及机制.方法 分离正常大鼠HSCs,培养48 h后给予粉防已碱(1.6 μmol/L)和(或)TGF-β1(5 μg/L)处理3 d.流式细胞仪检测细胞周期分布;应用RT-PCR法检测Cyclin D1、Cyc-lin E、p21WAFI/CiP1和p27Kip1表达;使用Western blot法检测Cyclin D1和PPARγ蛋白水平.结果 粉防己碱使G0/G1期和G2/M期细胞增多,S期细胞数显著减少,抑制TGF-β1介导的G0/G1期细胞含量下调和S期细胞含量升高.上调p21WAFI/CiP1 mRNA表达,抑制Cyclin D1而维持PPARγ蛋白在一定水平.结论 在静止期HSC中,粉防己碱通过抑制Cyclin D1、上调p21WAFI/CiP1和维持PPARγ表达使HSCs出现G0/G1期停滞和S期向G2/M期转换加速.

LentiviralHGF的构建及其体外对β2 m-/Thy-1+ BDLSCs影响的研究

目的 构建携带大鼠HGF基阂的慢病毒载体,并观察慢病毒对体外分选的β2 m-/Thy-1+BDLSCs转染效果及影响.方法 采用RT-PCR法从大鼠肝脏中提取HGF基因,并将其克隆到穿梭质粒TG006,与包装质粒一起在293T细胞中重组产生LentiviralHGF慢病毒.通过免疫磁珠法体外分选出β2 m-/Thy-1+ BDLSCs;采用荧光显微镜检测LentiviralHGF对BDLSCs的转染效率;采用ELISA法检测大鼠HGF的蛋白分泌水平;采用MTT法和免疫荧光法分别检测病毒对增殖和分化的影响.结果 从纤维化大鼠肝脏中成功克隆出HGF基因,并构建LentiviralHGF慢病毒;慢病毒能高效转染BDLSCs.转染慢病毒的BDLSCs向胞外分泌高浓度的HGF.转染LentiviralHGF后,细胞增殖能力提高,ALB表达阳性.结论 LentiviralHGF能高效转染BDLSCs,两者结合为肝纤维化的研究奠定了基础.

胚胎干细胞用于肝组织工程研究的初步评价

目的 在生物材料上进行胚胎干细胞(embryonic stem cell,ESc)的三维培养和肝细胞定向诱导分化,评价其用于构建肝组织工程的可行性.方法 胰酶消化生物反应器悬浮旋转堵养5天的拟胚体(embryoid bodies,EBs),将细胞悬液与细胞外基质Matrigel 1∶1混合接种于聚乳酸(poly-L-lactic acid,PLLA)和聚乙醇酸(polyglycolic acid,PGA)共聚合三维支架内,用系列诱导剂定向诱导肝细胞分化.镜下动态观察ES细胞的培育和生长情况,并用HE染色、糖原染色、免疫荧光染色检测组织结构形态、肝细胞功能及其肝细胞标志物白蛋白(ALB)的表达.结果 显微镜和扫描电镜见ESc可在聚合支架材料上三维立体状态生长,随培养时间不断增殖,交织成网状.HE染色提示形成了致密的类肝组织样结构.糖原染色和免疫荧光染色结果提示形成的类肝组织表达Alb,并有大量糖原存在.结论 可在PLLA/PGA三维支架材料及Matrigel上培养ESc和定向肝细胞诱导分化,长时间培养后可形成类肝样组织.

生物反应器内EBs来源细胞的肝细胞分化与成熟

目的 观察微重力生物反应器内拟胚体(EBs)来源细胞的肝细胞分化与成熟.方法 将未分化鼠胚胎干细胞(ES细胞)以1×106/mL移入微重力反应器内,在DMSO、地塞米松、FGF4、HGF等刺激作用下,进行15 d的旋转培养.采用ELISA法动态检测培养液中鼠白蛋白的产生量.培养结束时转移EBs于载玻片和培养板,分别检测EBs来源细胞的糖原储存和对靛青绿(ICG)、荧光素标记低密度脂蛋白(DiI-Ac-LDL)的摄取能力.结果 在生物反应器旋转培养的第5、10 d,未从培养液中检出特异的鼠白蛋白,而在第15 d的培养液中检出一定量的鼠白蛋白.与原代培养的成熟肝细胞一样,转种的EBs来源细胞periodic acid-Schiff(PAS)糖原染色阳性,ICG摄取试验阳性,DiI-Ac-LDL摄取试验阳性.未分化的ES细胞均呈阴性.结论 微重力生物反应器不仅能加快EBs的形成与肝细胞分化,而且能促进分化肝细胞的成熟.

脐带组织来源基质干细胞的肝细胞相关标志物分析

目的 研究脐带组织来源基质干细胞(umbilical cord-matrix stem cells.UCMSCs)具备的部分肝细胞生物学特性.方法 观察分离脐带基质干细胞细胞形态和免疫表型,利用免疫组化检测脐带基质干细胞的CK-18、AFP、ALB和肝细胞抗原(hepatocyte paraf-fin 1,HepParl)的表达,通过RT-PCR方法评价脐带基质干细胞的多种肝细胞特异性基因表达的稳定性.结果 从脐带组织内分离出类成纤维细胞样的脐带基质干细胞,CD105表达阳性,CD45表达阴性;第4代脐带基质干细胞表达CK-18、AFP、ALB等蛋白,而不表达HepParl;RT-PCR结果表明10代内脐带基质干细胞持续稳定表达ALB、CK-19、CPS-1、CYP1A1,而不表达CYP3A4.结论 脐带基质干细胞是一种本身表达一定肝细胞标志物的间充质干细胞,可能更有利于向肝细胞分化或在移植后发挥更好的治疗作用.

大鼠脂肪间充质干细胞对四氯化碳所致慢性肝损伤的治疗作用

目的 探讨大鼠脂肪间充质干细胞(adipose tissue-derived mesenchymal stem cells,ADMSCs)对四氯化碳所致慢性肝损伤治疗的研究.方法 将从4周龄雄性SD大鼠腹股沟分离得到的原代脂肪间充质干细胞传至第3代,用5-溴脱氧尿嘧啶核苷(Br-du)在体外标记后,通过门静脉注射的方法移植入由四氯化碳造成慢性肝损伤的雄鼠体内.移植术后2周处死受体雄鼠,取其肝组织,通过免疫荧光双染色的方法观察BrdU标记细胞的存在和白蛋白的表达,行HE染色观察肝组织病理学改变,检测血清中ALT、AST及ALB,以确定所注入的脂肪间充质干细胞是否向肝细胞样细胞方向转化及对四氯化碳所致慢性肝损伤大鼠的治疗情况.结果 在经门静脉移植的实验组SD大鼠的肝组织内检测到同时表达BrdU和白蛋白的细胞,且其病理组织学及肝功能均较模型组有所好转.结论 本研究证实了脂肪间充质于细胞对四氯化碳所致慢性肝损伤大鼠有一定的治疗作用.

临床病例讨论:腹胀、右上腹疼痛、肝内占位性病变

原发性肝淋巴瘤(primary hepatic lymphoma,PHL)临床十分少见,约占淋巴瘤的0.4%,仅占肝脏恶性肿瘤之0.1%.本病好发于HBV、HCV或人类疱疹病毒(EB)感染者,也易见于AIDS和其他原因如恶性肿瘤、器官移植术后、原发性胆汁性肝硬化(PBC)、干燥综合征、自身免疫性甲状腺炎等引起的免疫功能缺陷患者.PHL因临床症状、实验室检查及影像学检查均无特异性,难以凭临床资料明确诊断,误诊率极高,常误诊为原发性或转移性肝癌、肝血管瘤,甚至肝炎.PHL虽然十分少见,但其治疗方法及预后与其他肝肿瘤不尽相同.本文通过对1例PHL患者的病例讨论,期望加强临床医师对本病的认识.

我刊2009年第7期《临床有奖病例讨论》胃窦溃疡—来源不明(正确答案)

反复黑便的年轻女性

病例 患者,女,35岁.既往体健,否认系统性疾病史,否认非甾体类抗炎药(NSAIDs)使用史.因黑便1次,量200 mL就诊于当地医院,内镜检查示胃体中部后壁黏膜不规则充血水肿,中央可见新鲜血痂.