中药药理与临床杂志
Pharmacology and Clinics of Chinese Materia Medica 중약약리여림상
- 主管单位： 四川省中医管理局
- 主办单位： 中国药理学会 四川省中医药科学院
- 影响因子： 0.99
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 1001-859X
- 国内刊号： 51-1188/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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达如奇颗粒解热作用及其对下丘脑PGE2和血清TNF-α含量的影响
目的:探讨蒙药达如奇颗粒的解热作用及其机理.方法:采用干酵母致大鼠发热模型,将大鼠按基础体温随机分为空白组、模型组、达如奇颗粒高(0.5g/kg)、低剂量组(0.3g/kg)、布洛芬片组(0.02g/kg),共5组.除空白组,其余组大鼠背部皮下注射10％干酵母悬液10ml/kg致热;给药组分别在致热6、8、10h连续灌胃给药3次,每隔1h测量体温1次,连续观察24h.致热后6h空白组和模型组分别随机抽取8只,致热后13、24h各组分别随机抽取8只,取血清和下丘脑,采用酶联免疫法检测血清TNF-a和下丘脑PGE2含量,绘制平均升温曲线图、计算体温反应指数(TRI6-11).结果:达如奇颗粒低剂量组致热后10～16h、24h体温与空白组比较无显著性差异.达如奇颗粒高剂量组致热后10～24h体温与空白组比较,无显著性差异;致热后7～20h体温明显低于模型组;致热后16～24h体温明显低于布洛芬片组.模型组与达如奇颗粒高、低组,布洛芬片组大升温差值出现在致热后11h,与模型组比较,体温反应指数(TRI6-11)有显著性差异.达如奇颗粒高、低剂量组致热后13h下丘脑PGE2和血清TNF-α含量低于模型组.于致热后24h,达如奇颗粒高、低剂量组和布洛芬片组血清TNF-α含量低于空白组,有显著性差异.结论:达如奇颗粒对大鼠干酵母所致发热具有明显的解热作用,且作用稳定持久,其解热机理之一可能是通过减轻炎症反应,减少下丘脑PGE2和血清TNF-α产生或加速降解而起到解热作用.
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蒿蓝感冒颗粒抗炎、镇痛、镇咳及解热作用研究
目的:研究蒿蓝感冒颗粒的抗炎、镇痛、镇咳及解热作用.方法:通过二甲苯致小鼠耳廓肿胀及小鼠腹腔毛细血管炎性渗出实验考察其抗炎作用.采用冰醋酸致小鼠扭体实验和小鼠热板致痛实验考察其镇痛作用.采用氨水引咳法及枸橼酸引咳法考察其镇咳作用.采用干酵母致大鼠发热模型考察其解热作用.结果:蒿蓝感冒颗粒(2.9,5.8,11.6 g/kg)对二甲苯诱发小鼠耳廓肿胀及冰醋酸所致小鼠腹腔毛细血管炎性渗出均有显著抑制作用;冰醋酸致小鼠扭体试验及热板致痛实验显示,蒿蓝感冒颗粒(5.8,11.6 g/kg)能减少冰醋酸致小鼠扭体反应次数并延长热板致小鼠疼痛痛阈值;蒿蓝感冒颗粒(5.8,11.6 g/kg)对氨水致小鼠咳嗽反应及枸橼酸致豚鼠咳嗽反应均有明显的抑制作用;蒿蓝感冒颗粒(5.8 g/kg)对干酵母引起的大鼠发热有一定的解热作用.结论:蒿蓝感冒颗粒具有良好的抗炎,镇痛,镇咳及解热作用.
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苏合香对非孕雌性大鼠动情周期和血清性激素以及子宫平滑肌的影响
目的:观察苏合香对非孕大鼠动情周期、血清雌二醇、孕酮以及在体子宫平滑肌的影响.方法:依据阴道脱落细胞观察各组大鼠的动情周期;酶联免疫吸附分析法(ELISA)测定血清雌二醇(E2)及孕酮(P)水平;重量法检测各组子宫指数、卵巢指数;采用生物机能系统测定苏合香不同浓度对大鼠在体子宫平滑肌张力、频率、峰面积的影响.结果:苏合香0.666、1.332g/kg组均能显著延长非孕雌性大鼠的动情周期和间期,并降低血清E2、P水平,抑制子宫及卵巢指数;尚能显著抑制在体子宫平滑肌的张力、峰面积和频率.结论:苏合香大剂量、连续使用,能显著降低非孕大鼠血清中E2和P水平,干预动情周期和影响生殖器官发育,抑制子宫平滑肌的运动.
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苦参碱对人早幼粒细胞白血病HL-60细胞凋亡相关基因表达的影响
目的:探讨苦参碱对人白血病HL-60细胞的生长抑制作用及对凋亡相关基因表达的影响.方法:HL-60细胞分为对照组、不同浓度苦参碱药物处理组和阳性对照组顺铂.采用MTT比色分析法检测苦参碱对HL-60细胞生长的抑制作用,采用TUNEL法测定细胞凋亡、比色法测定Caspase-3活性、实时定量RT-PCR法检测Bax、BCl-2、Casspase-9及Survivin的mRNA的表达.结果:苦参碱0.5 mg/ml组、1 mg/ml组和2 mg/ml组均能抑制HL-60细胞生长,其抑制作用呈浓度依赖性.苦参碱可诱导人白血病HL-60细胞凋亡并上调Caspase-3酶活性,同时苦参碱可减少BCl2、Survivin的mRNA表达,增加Bax、Caspase-9的mRNA表达.结论:苦参碱可有效诱导HL-60细胞发生凋亡,其机制可能与上调Bax、Caspase-9的mRNA表达并抑制BCl2、Survivin mRNA表达相关.
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加味四君子汤含药血清对B16恶性黑色素瘤细胞NF-κB(p65)活性和表达的影响
目的:研究加味四君子汤含药血清对转录因子核因子-κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB)p65的活性和表达的影响.方法:应用血清药理学方法给药,37℃、5％ CO2的恒温培养箱中培养B16恶性黑色素瘤细胞,收集对数期细胞,小鼠含药血清终浓度为10％,作用24h.实验分为空白对照组、血清对照组、4.61 g/kg、9.22 g/kg、18.44 g/kg加味四君子涛含药血清组和5 mg/L顺铂组,每组含5个样本数.分别应用Real-Time PCR法、EMSA法、Westem blot法检测加味四君子汤含药血清对B16恶性黑色素瘤细胞活性和表达的影响.结果:加味四君子汤含药血清作用24 h后,呈剂量依赖式降低NF-κB(p65)的活性和基因蛋白表达,与空白对照组和血清对照组相比,9.22 g/kg中药组、18.44 g/kg中药组和5 mg/L顺铂组分别显著降低NF-κB(p65)活性、mRNA及蛋白表达(P＜0.05),但5 mg/L顺铂组活性、mRNA及蛋白表达低于9.22 g/kg中药组,高于18.44 g/kg中药组.结论:加味四君子汤含药血清能够降低恶性黑色素瘤细胞NF-κB(p65)的活性和表达水平,NF-κB(p65)可能是加味四君子汤含药血清抗恶性黑色素瘤的机制之一.
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HPLC-MS法同时测定白术内酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ及其在大鼠体内的药动学
目的:建立一个灵敏、快速、可靠的HPLC-MS法,以对乙酰氨基酚为内标(IS),同时测定白术内酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ(AT-Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ)及其在大鼠体内的药动力学研究.方法:血浆样品经乙酸乙酯萃取后,使用HPLC-MS法,ZORBAX SB-C18色谱柱(3.5um,2.1×100mm),柱温35℃,流动相为甲醇:0.1％甲酸水(85∶15),流速为0.4ml/min;采用正离子模式MRM检测.结果:白术内酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的方法学验证(专属性、线性、检测灵敏度、准确度与精密度、基质效应与提取回收率、稳定性)良好,并成功应用于给药白术药材及白术-麻黄(4:3)药材提取物后大鼠体内的药代动力学研究.结论:本方法可用于白术及其体内的药动学研究,为临床合理使用白术药材提供一定的参考价值.
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脑血通对脑缺血的作用研究
目的:研究脑血通对脑缺血病变的作用,为其在临床上的应用提供药理学依据.方法:运用大鼠局灶性永久脑缺血模型,大鼠局灶性脑缺血再灌注模型及高脂大鼠脑缺血再灌注模型,观察脑血通对实验性脑缺血模型的保护作用.结果:脑血通6.0g/kg可显著减少局灶性脑缺血大鼠的神经评分和大脑梗死面积,减轻局灶性脑缺血再灌注模型大鼠脑水肿程度,降低其神经系统评分;脑血通3.0g/kg和1.5g/kg可显著减少局灶性脑缺血大鼠大脑梗死面积;脑血通1.5g/kg、3.0g/kg、6.0g/kg均可显著降低脑缺血再灌注高脂大鼠代水平,改善其血液流变学指标.结论:脑血通能够减少脑缺血大鼠脑梗死比率,减轻脑水肿程度,改善神经系统症状,改善脑组织病理表现,调节脂代谢紊乱,对血液流变学异常有改善作用.
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基于镇痛作用的艾叶不同组分药效与毒副作用机制研究
目的:对艾叶不同组分发挥镇痛作用时出现的伴随毒副作用机制进行初步研究,并以此探讨艾叶“毒-效”相关性.方法:小鼠按体重随机分为8组,即正常对照组、扶他林组、艾叶水提组分高、中、低剂量组和挥发油高、中、低剂量组,每天给药1次,分别于1、3、7天药后90 min取血检测前列腺素E2(PGE2)水平,检测血内丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性、一氧化氮(N0)、一氧化氮合酶(NOS)、谷胱甘肽(GSH)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的含量和活性.结果:艾叶水提组分1.17 ～4.68g/kg、挥发油0.5％ ～2.0％范围内均可致血中PGE2含量明显降低,可致血中MDA含量增加,同时SOD活性下降;血中一氧化氮(NO)含量增加,一氧化氮合酶(NOS)活性升高;血中谷胱甘肽(GSH)含量下降,谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性下降.上述各指标变化随剂量的增加而改变,呈现一定的剂量依赖关系,与正常对照组比较有明显差异.结论:艾叶水提组分和挥发油发挥镇痛作用主要与降低血中PGE2含量、调节体内SOD、MDA、NO水平有关,其发挥药效作用时出现的伴随肝毒副作用机制主要与氧化损伤路径有关,这里发挥药效与产生毒副作用的机制指标部分重叠,也从作用机制方面为“中药毒性与功效密切相关”这一科学假说提供了药理学研究证据.
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姜黄素通过鞘氨醇激酶-1-一磷酸鞘氨醇信号通路抗糖尿病大鼠肾脏纤维化的研究
目的:研究姜黄素对链脲霉素(STZ)诱导的糖尿病大鼠肾脏损伤的改善作用,及其对糖尿病大鼠肾脏鞘氨醇激酶-1-一磷酸鞘氨醇(SphK1-S1P)信号通路和肾脏纤维化的抑制作用.方法:本研究采用STZ诱导的糖尿病大鼠,观察灌胃给药0.15g/kg的姜黄素对糖尿病大鼠肾脏功能和病理形态的影响,对大鼠肾组织的SphK1、S1P、纤维连接蛋白(FN)及转化生长因子(TGF)-β1等指标的影响.用Real-timePCR和Western blotting方法检测SphK1,FN和TGF-β1的表达;用LC-MS/MS方法检测SphK1活性和S1P含量.结果:0.15g/kg的姜黄素能够明显改善糖尿病大鼠的肾功能与肾脏病理变化,明显降低糖尿病大鼠肾脏SphK1的表达和活性以及S1P的含量,进而抑制SphK1-S1P诱导的FN和TGF-β1的表达.结论:姜黄素对于糖尿病肾脏纤维化的改善作用机制可能与其抑制肾脏SphK1-S1P信号通路密切相关.
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乳络通胶囊的镇痛、抗炎及改善微循环作用
目的:观察乳络通胶囊(乳络通)的镇痛、抗炎及改善微循环的作用.方法:采用热板法观察乳络通(0.60g/kg、0.30g/kg、0.15g/kg)的镇痛作用;采用二甲苯致小鼠耳廓肿胀法(乳络通0.60g/kg、0.30g/kg、0.15g/kg)和大鼠棉球肉芽肿法(乳络通0.60g/kg、0.30g/kg、0.15g/kg)考察乳络通的抗炎作用;通过对肾上腺素致小鼠耳廓微循环障碍模型的影响,考察乳络通对微循环的影响.结果:乳络通能够显著提高小鼠在30min、60min、90min、120min时的痛阈值,能使小鼠发生扭体反应的潜伏期明显延长;乳络通高、中剂量组对小鼠耳廓肿胀有显著地抑制作用及能显著减少大鼠棉球肉芽肿的重量;乳络通能使小鼠在5min、10min、20min时,耳廓微循环细静脉、细动脉管径收缩明显较小,能使小鼠耳廓微循环血流速度减少值显著较小.结论:乳络通有一定的镇痛和抗炎作用,同时可有效改善肾上腺素所致微循环障碍小鼠耳廓微循环.
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解毒扶阳方对2型糖尿病大鼠代谢紊乱的影响
目的:探讨解毒扶阳方对2型糖尿病(T2DM)模型大鼠代谢紊乱的调节作用.方法:取SPF级雄性大鼠,随机分为正常对照组、高脂高糖(模型)组、二甲双胍(降糖)组、立普妥(降脂)组、解毒扶阳方(试药)大、中、小剂量组.除正常对照组外,其他各组大鼠均以高脂高糖饲料喂养.除正常对照组外,各组大鼠禁食12h,按60mg/kg剂量尾静脉一次性快速注射链佐菌素制备动物模型,并于模型制作当日各给药组大鼠分别ig给予药物治疗,每日一次,连续12周.其中降脂组给予立普妥1.25 mg/kg,降糖组给予二甲双胍670 mg/kg,试药组给予解毒扶阳方浓缩液18g/kg、12g/kg、6g/kg,正常对照组、模型组给予同样量的生理盐水.于给药后一天眼球取血测定空腹血糖;采用酶联免疫吸附分析方法测定血清瘦素、胰岛素、抵抗素、脂联素水平,计算胰岛素抵抗指数.结果:解毒扶阳方能调节血糖水平,与模型组比较,中、小剂量组有显著差异,大剂量组有非常显著性的差异.其瘦素含量与模型组比较,均显示有非常显著性的差异.能调节胰岛素水平,与模型组比较,均具有非常显著性的差异.对抵抗素、脂联素水平也具有明显的调节作用.结果表明,本方治疗T2DM的有效剂量为6 g/kg,其有效范围为6～18 g/kg.结论:解毒扶阳方对T2DM所致糖、脂代谢紊乱有调节作用.
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甘草次酸对大鼠体内山柰酚组织分布的影响
目的:研究甘草次酸对大鼠体内山奈酚药物动力学的影响.方法:将78只SD大鼠,随机分成4组,雌雄各半,即高浓度实验组与低浓度实验组及对照组的高浓度组与低浓度组,每组中又包括三个小组即1h、2h、3h.高浓度实验组灌胃50mg/kg山奈酚+ 50mg/kg甘草次酸,低浓度实验组灌胃25mg/kg山奈酚+50mg/kg甘草次酸.对照组只灌胃等剂量的山奈酚.灌胃给药后分别于1h、2h和3h用摘眼球取血法取血,取血后立即处死大鼠,取出心、肝、肺、肾、脑组织,组织经处理后用HPLC法测定.结果:在肝脏、肾、肺、心中,灌胃山奈酚+甘草次酸后的组织样品的山奈酚含量与单独灌胃山奈酚的组织含量之间无显著差异.结论:甘草次酸对山奈酚在肝脏、肾、肺、心的分布没有影响.
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丁桂儿脐贴联合用药对幼龄大鼠厌食模型的影响
目的:观察丁桂儿脐贴联合用药及丁桂儿口服用药对幼龄大鼠厌食模型的作用.方法:采用病因模拟法制备幼龄大鼠厌食模型,观测大鼠食量、体重、胃酸、胃蛋白酶及血浆CCK-8、β-内啡肽的含量变化.结果:与正常大鼠比较,模型大鼠食量、体重、胃液量均显著降低,血浆CCK-8含量明显增高,提示大鼠食量减退,生长缓慢,且无腹泻等其他症状出现,较符合小儿厌食表现.丁桂儿口服药物(0.8g/kg)及丁桂儿脐贴联合用药(小儿健胃消食片3g/kg或西沙必利片0.6mg/kg联合丁桂儿脐贴)对上述指标有部分调节作用,特别是丁桂儿脐贴大剂量联合西沙必利片可显著降低厌食模型大鼠血浆CCK-8含量,丁桂儿小、大剂量联合健胃消食片,丁桂儿中、大剂量联合西沙必利片均可明显增高厌食模型大鼠血浆β-内啡肽含量.结论:丁桂儿脐贴联合用药对幼龄大鼠厌食模型有一定疗效.
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羟基红花黄色素A对猪冠状动脉环的舒张作用及机制
目的:研究羟基红花黄色素A (HSYA)对离体猪冠状动脉血管的舒张作用及其可能作用机制,为红花的生物学活性研究和应用提供参考.方法:以猪冠状动脉血管环为材料,以离体血管功能实验方法检测羟基红花黄色素A对猪冠状动脉血管活性作用.结果:羟基红花黄色素A对静息状态猪冠状动脉血管环无明显舒张作用;HSYA在10-4.5～ 10-2 mol/L的浓度范围内对PGF2α(10-6 mol/L)预收缩的冠状动脉血管环具有浓度依赖性舒张作用,大舒张效应为124.22％±6.25％,相应的pD2值为2.91±0.23,HSYA的有效剂量为10-3 mol/L,该剂量能使PGF2α(10-6 mol/L)预收缩的冠状动脉血管环达到65.55％±4.15％的舒张效应;HSYA可使KCl的量效曲线下移,呈浓度依赖性.用一氧化氮合成酶抑制剂L-NNA、鸟苷酸环化酶抑制剂亚甲蓝、β受体阻断剂普萘洛尔、β1受体抑制剂atenolol和β2受体抑制剂ICI 118551预处理后,均可明显减弱HSYA诱导的舒张血管作用;前列腺素合成酶抑制剂吲哚美辛,K+通道抑制剂TEA预处理后,血管舒张作用不能被阻断.结论:羟基红花黄色素A的舒血管活性作用通过内皮-NO-cGMP途径和β-肾上腺素受体途径,并能够阻断血管平滑肌上的电压依赖性钙通道,但与血管平滑肌舒张因子前列腺素的释放及钾离子(KCa)通道无关.
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枳实对奥美拉唑在大鼠体内药代动力学的影响
目的:探讨枳实对奥美拉唑(OMZ)在大鼠体内药物动力学的影响,为中药-化学药物联合用药提供科学依据.方法:将SD大鼠分为空白组、枳实干预组;连续28天分别灌胃给予纯水和枳实水煎液(2.06g/kg·d),于末次枳实干预12小时后,枳实干预组与空白组大鼠单次灌胃奥美拉唑钠(6mg/kg),于不同时间点采集血浆样本,用高效液相色谱法测定血浆中奥美拉唑浓度;利用Kinetica软件采用非房室模型计算相关的动力学参数,运用SPSS软件对各组参数进行统计学分析.结果:枳实(1.03 g/kg)干预组大鼠体内的奥美拉唑峰浓度(Cmax)增高、血药浓度-时间曲线下面积(AUC)升高、清除率(Cl)降低.结论:枳实能增加奥美拉唑在大鼠体内的生物利用度,结合相关枳实化学成分的类型,提示枳实可能具有一定的药物代谢酶抑制作用.
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醒脑静注射液对酒精性昏迷小鼠的促醒作用及对乙醇代谢的影响
目的:探讨醒脑静注射液对酒精性昏迷小鼠的促醒作用及对其乙醇代谢的影响.方法:腹腔注射乙醇制作酒精昏迷小鼠模型,模型小鼠随机分5组:模型对照组、纳洛酮组(阳性对照组)、醒脑静注射液低、中、高剂量组(5、10、20 ml/kg).采用翻正反射消失时间(LORR)对比法探究其促醒作用;试剂盒测定其肝脏乙醇脱氢酶(ADH)及乙醛脱氢酶(ALDH)的活性;气相色谱法测定其血清中乙醇浓度.结果:各实验组反射消失时间及血清中乙醇浓度均比生理盐水组低,醒脑静注射液高剂量组的ADH及AL-DH活性显著高于生理盐水组.结论:醒脑静注射液能够显著提高肝脏ADH及ALDH活性,促进乙醇的体内代谢,从而起到醒酒作用.
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复方抗毒升白合剂的抗肿瘤活性及其机制探讨
目的:初步探讨复方抗毒升白合剂的体内外抗肿瘤活性及其作用机制.方法:MTT法测定抗毒升白合剂对人肝癌细胞BEL7404和HepG2的抑制作用;S180肉瘤模型小鼠灌胃给予抗毒升白合剂,计算肿瘤抑制率和免疫器官指数,制作肿瘤、肝脏及脾脏切片;Elisa方法测定荷瘤小鼠血清IL-2、Bcl-2及wtp53含量,探讨抗毒升白合剂的抗肿瘤机制.结果:抗毒升白各剂量组(15.63～ 1000μg/ml)对人肝癌BEL7404及HepG2细胞均表现出一定的抑制作用;各剂量(10、20、40g/kg)对S180肉瘤模型小鼠肿瘤抑制率分别为49.03％、44.78％和32.78％,给药组免疫器官指数均高于环磷酰胺组;抗毒升白合剂能降低荷瘤小鼠血清Bcl-2含量,升高IL-2及wtp53的含量.结论:抗毒升白合剂具有一定的抗肿瘤作用,其作用机理可能是通过降低荷瘤小鼠Bcl-2的含量,升高荷瘤小鼠IL-2及wtp53的含量来抑制肿瘤的生长.
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荞麦花叶总黄酮体外抗肿瘤及促细胞凋亡作用研究
目的:研究荞麦花叶总黄酮(extraction of buckwheat flower and leaf EBFL)的体外抗肿瘤作用及其可能的机制.方法:MTT法观察荞麦花叶总黄酮对H22细胞体外增殖的影响,计算肿瘤细胞生长抑制率.流式细胞术观察荞麦花叶总黄酮对H22细胞周期的影响.PI染色法检测荞麦花叶总黄酮对H22细胞凋亡的影响,计算细胞平均凋亡率.结果:荞麦花叶总黄酮在48h 300μg/ml、150μg/ml浓度对H22细胞增殖具有明显抑制作用,抑制率分别为35.33±1.53,40.33±2.52.EBFL 150μg/ml浓度将肿瘤细胞周期阻止于G0/G1期,抑制肿瘤细胞的分裂增殖.荞麦花叶总黄酮对H22细胞具有明显的促进凋亡作用,以150μg/ml浓度组为明显.凋亡率48h为40.67±2.08.结论:荞麦花叶总黄酮可直接抑制H22细胞增殖,将H22细胞周期阻止于G0/G1期,促进H22细胞凋亡.
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黄连总生物碱对糖尿病大鼠的血浆代谢组学研究
目的:应用代谢组学的方法研究黄连总生物碱对糖尿病血浆中内源性物质及其代谢状态的影响.方法:60只正常SD大鼠随机分为空白、模型、阳性药物组、黄连高剂量组、黄连低剂量组,每组10只.模型组,阳性药物组,黄连高低剂量组均使用STZ造糖尿病模型大鼠,造模成功后,阳性药物组给予100 mg/kg二甲双胍,黄连总生物碱大小剂量分别按578.7 mg/kg(含小檗碱300 mg/kg),192.9 mg/kg(含小檗碱100 mg/kg)口服灌胃给予黄连总生物碱.大鼠连续给药68 d后,眼眶取血,HPLC/MS/MS采集血浆中内源性物质数据,主成分分析(PCA),正交信号校正偏小二乘法(OSC-PLS)对数据分析.结果:给药68 d后,黄连总生物碱高低剂量给药组,阳性药物组大鼠血浆中内源性物质的含量水平与模型组具有明显的差异,各给药组及阳性药物组中,大鼠血浆中内源性物质的含量水平总体向空白对照大鼠组血浆中含量水平方向回归,黄连高低剂量组间差异不明显.大鼠血浆中m/z值496.4,524.5等内源性化合物发生了与其代谢含量水平改变方向一致的变化.结论:黄连总生物碱剂量为578.7 mg/kg和192.9mg/kg均能明显影响模型大鼠血浆中内源性物质的含量水平,并引起相应的内源性物质含量水平向正常组大鼠含量水平方向回归.
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应用Microtox技术检测鱼腥草注射液综合毒性的研究
目的:探索将Microtox技术应用于鱼腥草注射液综合毒性检测.方法:以费氏弧菌作为测试菌种,通过方法学考察确定优检测体系以及方法可靠性,在优检测体系下,对3批鱼腥草注射液成品,3批鱼腥草注射液半成品以及2批鱼腥草注射液溶媒进行生物综合毒性检测.结果:优检测时间为15min,优pH值是5.0～9.0,且15min发光强度以500～1000为宜;重复性试验和中间精密度试验的相对偏差均＜15％;成品的EC50值分别为51.62％,48.26％,41.69％,半成品的EC50值分别为57.64％,54.26％,57.04％,显示半成品的生物综合毒性均不同程度地小于成品的生物综合毒性;溶媒100％浓度(同注射液中溶媒浓度,即2.5％‰的吐温80溶液)的抑制率分别为12.29％和7.97％,显示生物毒性均较小,几乎可认为无毒.结论:鱼腥草注射液对费氏弧菌的毒性存在显著的浓度-效应关系,故应用Microtox技术检测鱼腥草注射液综合毒性并用于控制其质量具有很好的应用前景.
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银杏酮酯抗自然衰老大鼠前额叶皮层氧化DNA损伤和延缓端粒长度的作用及其机制探讨
目的:探讨银杏酮酯(GBE50)抗自然衰老大鼠前额叶皮层(prefrontal cortex,PFC)氧化DNA损伤和延缓端粒长度的作用及SIRT1在其中的作用机制.方法:建立自然衰老大鼠模型,用GBE50(100mg/kg)每日灌胃,连续60天.免疫荧光双标观察PFC中8-OHDG的亚细胞定位及表达强度;荧光定量PCR(Real time-PCR)检测PFC全基因组DNA相对端粒长度;Western-blot检测SIRTl、p53和p21的蛋白水平.结果:免疫荧光双标结果显示8-OHDG主要位于PFC神经元胞体中.与青年对照组相比,自然衰老大鼠PFC神经元8-OHDG表达增加,GBE50 (100mg/kg)处理后减少.RT-PCR结果显示:与青年对照组相比,自然衰老大鼠PFC相对端粒长度缩短,GBE50(100mg/kg)处理后相对端粒长度缩短延缓.Western blot结果显示:与青年对照组相比,自然衰老大鼠PFC的SIRTl蛋白表达下降,p21蛋白表达增加;GBE50(100mg/kg)处理后自然衰老大鼠PFC的SIRT1蛋白表达增加,p21蛋白表达有下降趋势;而p53蛋白变化不明显.结论:GBE50 (100mg/kg)可降低自然衰老大鼠PFC内8-OHDG表达,延缓相对端粒长度缩短,其过程可能与SIRT1、p21蛋白表达有关.
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天参胶囊对2型糖尿病大鼠脂糖紊乱的作用
目的:观察天参胶囊对2型糖尿病大鼠的脂糖紊乱的作用.方法:高糖高脂饲料配合腹腔注射链脲佐菌素(STZ)35mg/kg建立2型糖尿病大鼠模型.糖尿病大鼠按血糖值随机分为模型组、罗格列酮组(4mg/kg)、天参胶囊低(180mg/kg)、中(360mg/kg)、高剂量组(720mg/kg).天参胶囊低、中、高剂量组分别灌胃不同剂量的天参胶囊水溶液,罗格列酮组灌胃罗格列酮,模型组与对照组灌胃等量自来水,连续给药30d后取血,测定各组大鼠血脂、血糖、糖耐量、胰岛素耐量的变化,并检查胰腺组织的病理变化.结果:天参胶囊高剂量(720mg/kg)可降低大鼠血清总胆固醇(TC)和甘油三酯(TG),显著降低游离脂肪酸(FFA),显著升高高密度脂蛋白(HDLC)、空腹胰岛素(FINS)水平和胰岛素敏感指数(ISI),改善胰腺细胞病变.结论:天参胶囊能改善实验性2型糖尿病大鼠的糖代谢和脂代谢紊乱,其作用机制可能与增加模型大鼠对胰岛素的敏感性有关.
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黄芪甲苷对高糖诱导SH-SYSY细胞凋亡的保护作用
目的:探讨黄芪甲苷对高糖诱导SH-SY5Y神经细胞凋亡的保护作用及其机制.方法:以50 mmol/L葡萄糖诱导SH-SY5Y神经细胞凋亡,实验分为正常组、模型组、不同剂量黄芪甲苷(12.5,25,50 mg/ml)保护组和甘露醇组,MTT比色法检测细胞存活率,Hoechst-33258染色观察细胞核形态变化,流式细胞仪检测细胞凋亡率,酶联免疫吸附法检测细胞培养液中8-羟基脱氧鸟苷酸(8-hydoxydeoxyguanosine,8-OHdG)的含量.结果:与对照组相比,凋亡组细胞存活率明显降低,细胞凋亡率明显升高,Ho-echst33258染色细胞核出现凋亡小体,上清中8-OHdG含量升高,与凋亡组相比,黄芪甲苷(25,50 mg/ml)保护组细胞存活率均明显升高,凋亡率降低,Hoechst33258染色发现细胞核形态明显改善,细胞核固缩减少;上清波中8-OHdG含量明显降低.结论:黄芪甲苷对高糖诱导的SH-SY5Y细胞凋亡具有保护作用,其机制可能与黄芪甲苷的抗氧化作用有关.
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白芍总苷在大鼠体内的排泄研究
目的:研究白芍总苷在正常大鼠体内的排泄特点.方法:正常大鼠灌胃给予白芍总苷(1.41g/kg)后,分段收集其尿液、粪便和胆汁,采用固相萃取法处理样品,RP-HPLC法同时测定白芍总苷主要药效成分芍药苷和芍药内酯苷的含量,不同比例的乙腈-0.1％冰乙酸为流动相,检测波长232nm.结果:尿液、粪便及胆汁中芍药苷和芍药内酯苷专属性良好,方法回收率为90.34％～109.54％,提取回收率为96.09％ ～ 109.96％,日内和日间精密度的RSD均小于10％.大鼠灌胃给予白芍总苷后,48 h尿液中芍药苷和芍药内酯苷的累积排泄量分别占给药量的0.583％、0.424％,48 h粪便中芍药苷和芍药内酯苷的累积排泄率分别为59.11％、74.70％,36 h胆汁中芍药苷和芍药内酯苷的累积排泄率分别为4.88％、5.98％.结论:正常大鼠口服白芍总苷胃肠吸收较差,吸收后主要以原形经由胆汁排泄.
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柚皮素对脂多糖诱导小鼠急性肺损伤的保护作用研究
目的:探讨柚皮素对内毒素(lipopolysaccharide,LPS)诱导小鼠的急性肺损伤(acute lung injury,ALI)保护作用.方法:于小鼠腹腔注射LPS(5mg/kg)复制诱导小鼠的急性肺损伤动物模型.将小鼠随机分为空白组、LPS组、地塞米松组(2mg/kg)、柚皮素高剂量组(40mg/kg)、柚皮素低剂量组(20mg/kg),观察各组肺组织病理学改变,测量肺湿/干重比,支气管肺泡灌洗液中性粒细胞百分比、SOD、肺组织中MPO及炎症因子IL-6、TNF-α含量.结果:柚皮素能有效减轻LPS所致肺组织病理学变化,降低肺泡灌洗液中炎症细胞的数目,显著降低肺湿/干重比重,提高SOD水平,并能降低MPO水平.结论:柚皮素可减轻LPS所致急性肺组织损伤,对LPS诱导的急性肺损伤有保护作用.
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解虑安神汤对焦虑小鼠脑内GABA水平及其受体表达的影响
目的:通过观察解虑安神汤乙酸乙酯提取部位对社会隔离焦虑动物模型行为学及脑内-氨基丁酸(GABA)水平及其A亚型受体(GABAA-R)α1、α2、击亚基的影响,阐明其抗焦虑的作用机制.方法:复制小鼠社会隔离焦虑模型,分为正常组(等体积溶媒)、模型组(等体积溶媒)、地西泮组(0.002g/kg)及解虑安神汤乙酸乙酯提取部位组(0.21g/kg),连续灌胃给药2周后用高架十字迷宫和旷场实验进行行为学测定;行为学实验结束后,ELISA法测定海马区GABA的含量;Western blot检测GABAA-R α1、α2、α5亚基的蛋白表达水平.结果:模型组小鼠在开臂停留时间、OT％及进入旷场中央次数减少,海马内GABA水平下降,GABAA-Rα1、α2亚基表达减少,GABAA-Rα5表达升高.与模型组相比,地西泮和解虑安神汤乙酸乙酯提取部位均可延长小鼠在开臂停留时间、增加OT％,并增加小鼠进入开臂次数及进入旷场中央次数,差异有显著性意义;解虑安神汤乙酸乙酯提取部位小鼠海马内GABA水平升高,GABAA-Rα1、a2亚基表达增加,GABAA-Rα5表达降低;地西泮可升高GABAA-Rα1、α2的表达,对GABA水平及GABAA-Rα5无影响.与正常对照组相比,解虑安神汤乙酸乙酯提取部位对GABAA-Rα1、α2、α5亚基表达均无明显影响;地西泮可显著升高GABAA-Rα1亚基的表达.结论:解虑安神汤乙酸乙酯提取部位可能通过增加GABA的水平、调节GABAA-R的功能发挥抗焦虑作用.
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人参皂苷Rg1对脂多糖诱导心肌细胞肥大的保护作用
目的:探讨人参皂苷Rg1对脂多糖(LPS)诱导心肌细胞肥大的保护作用及机制.方法:利用体外培养模型,以脂多糖1 mg/L诱导心肌细胞肥大,观察不同剂量人参皂苷Rg1(12.5、25、50μmol/L)及环孢菌素A(CsA)对脂多糖诱导的心肌肥大的抑制作用.用考马斯亮蓝法测心肌细胞蛋白质含量;消化分离法及计算机图像分析系统检测心肌细胞体积;倒置相差显微镜下观察细胞形态大小;采用Fluo-3/Am荧光染色剂负载细胞,在激光共聚焦显微镜下测定细胞内钙离子浓度的瞬间变化;电泳法测定钙调磷酸酶(CaN)的表达.结果:与正常对照组相比,脂多糖模型组使心肌细胞总蛋白质含量增加,细胞体积增大,心肌细胞内[Ca2+]i瞬间峰值增大,钙调磷酸酶表达增加.与模型组相比,人参皂苷Rg1(25、50μmol/L)可有效改善脂多糖诱导的心肌细胞肥大,抑制心肌细胞内[Ca2+]i瞬间峰值增大,抑制钙调磷酸酶表达增加.结论:人参皂苷Rg1可通过抑制Ca2+/钙调磷酸酶信号通路抑制脂多糖诱导的心肌细胞肥大.
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香青兰抗血小板聚集及抗血栓作用
目的:评价香青兰提取物及不同萃取部位体外抗血小板聚集及抗血栓作用.方法:应用比浊法测定香青兰水提物、醇提物及三个不同萃取部位体外抗血小板聚集作用,采用FeCl3诱导大鼠颈动脉血栓模型,小鼠肺血栓模型及大鼠下腔静脉血栓模型3种实验性血栓模型,考察香青兰不同溶剂提取物抗血栓形成作用.结果:香青兰醇提物、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇等萃取部位以10μg/ml、100μg/ ml、1000μg/ ml均具有不同程度的抑制血小板聚集作用,10μg/ml为有效剂量;香青兰不同提取物100mg/kg、400mg/kg延长FeC13诱导大鼠颈动血栓形成时间,并减轻血栓湿质量;提高胶原蛋白-肾上腺素混合诱导剂所致肺血栓小鼠的存活率;减轻结扎法所致下腔静脉血栓湿质量,且其中乙醇为溶剂剂量为400 mg/kg的香青兰提取物效果为显著.结论:香青兰醇提物与正丁醇萃取部位具有较强的抗血小板聚集作用;香青兰醇提物具有显着的抗血栓作用.
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雷公藤甲素对C6胶质瘤细胞凋亡及TNF-α、NF-κb和Caspase-3表达的影响
目的:检测雷公藤甲素对C6胶质瘤细胞TNF-α、NF-κb和Caspase-3表达的影响,探讨其诱导胶质瘤细胞凋亡机制.方法:将大鼠C6胶质瘤细胞培养于含10％ FBS,100 mg/L青霉素链霉素的DMEM培养液中,设立雷公藤甲素给药组和空白组,给药组设0.2、0.4、0.8、1.6、3.2、6.4 μg/L雷公藤甲素6个剂量,置37℃5％ CO2培养箱中培养,采用四甲基偶氮唑盐比色(MTT)法检测雷公藤甲素对大鼠C6胶质瘤细胞的抑制作用,酶联免疫(Enzyme Linked Immunosorbent Assay,ELISA)试剂盒检测TNF-α表达,Western Blotting (WB)检测NF-κb和Caspase-3的表达.结果:与空白组相比,浓度大于0.8 μg/L的雷公藤甲素能诱导C6胶质瘤细胞凋亡(P＜0.05),且其诱导效应具有浓度依赖性.同时,雷公藤甲素可以下调NF-κb表达,而上调TNF-α和Caspase-3表达,且Caspase-3被部分活化.结论:雷公藤甲素可诱导C6胶质瘤细胞凋亡,同时,可降低NF-κb表达,增强TNF-α和Caspase-3表达,且部分活化Caspase-3.
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不同桂枝配伍对CIA大鼠血清TNF-α、IL-1β、IL-6因子的影响
目的:观察桂枝配伍对类风湿性关节炎模型促炎细胞因子(PICK)的调控作用.方法:以Ⅱ型胶原(CⅡ)诱导的免疫性关节炎(CIA)大鼠为RA动物模型,通过关节炎指数观察桂枝、桂枝配伍附子、桂枝配伍川乌、桂枝配伍白芍及桂枝配伍当归组的治疗效果;采用ELISA法测定大鼠血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)活性.结果:模型组大鼠血清TNF-α、IL-1β及IL-6含量明显升高;经治疗后桂枝及各配伍组关节炎指数明显均降低;与模型组比较,桂枝组(1.8g/kg)明显降低TNF-α(P＜ 0.05),桂枝白芍组(3.6g/kg)明显降低TNF-α、IL-1β、IL-6(P＜0.01或P＜0.05),桂枝附子组(4.5g/kg)、桂枝川乌组(4.5 g/kg)及桂枝当归组(3.6g/kg)明显降低TNF-α、IL-6(P＜0.01或P＜0.05).结论:桂枝及不同配伍可以降低CIA大鼠血清中异常增高的TNF-α、IL-6浓度,提示这可能是其治疗RA的作用机理之一.
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荞麦花叶总黄酮对大鼠急性心肌梗塞后心室重构的影响
目的:观察荞麦花叶总黄酮对大鼠急性心肌梗塞后心室重构的影响及其可能机制.方法:结扎左冠状动脉前降支建立大鼠急性心肌梗死模型,设假手术组、模型对照组、卡托普利组(10 mg/kg)及荞麦花叶总黄酮低、中、高剂量组(100、200、400 mg/kg).造模后连续灌胃给药4w,1次/d.腹腔静脉取血,放射免疫法检测血清中内皮素(ET)、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、Ⅲ型前胶原氨端肽(PⅢP)、层粘连蛋白(LN)、透明质酸(HA)的含量.取出心脏称重,计算心脏质量指数(HMI)以及左心室质量指数(LVMI).硝基四氮唑蓝(NBT)染色法测定心肌梗死面积.结果:与模型对照组比较,荞麦花叶总黄酮在100～400mg/kg剂量范围内可不同程度降低HMI、LVMI值及心肌梗死面积,同时降低血清中ET、AngⅡ、PⅢP、LN、HA的含量.结论:荞麦花叶总黄酮具有抑制大鼠急性心肌梗塞后心室重构的作用,其机制可能与降低血清中ET、AngⅡ、PⅢP、LN、HA的含量相关.
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苦瓜总皂苷的利尿作用及对肾功能的影响研究
目的:考察苦瓜总皂苷对水负荷大鼠的利尿作用及并考察其对大鼠肾功能的影响.方法:筛选排尿量正常的大鼠,并随机分为空白对照组(蒸馏水)、模型对照组(蒸馏水)、阳性对照组(氢氯噻嗪10 mg/kg)、苦瓜总皂苷高剂量组(0.576 g/kg)、中剂量组(0.288 g/kg)、低剂量组(0.144g/kg),连续8天灌胃给药后,以生理盐水灌胃造成水负荷模型,测定水负荷后4h内的排尿量,并测定尿蛋白浓度,同时测定血肌酐、血尿素氮含量.结果:苦瓜总皂苷0.288g/kg能显著增加水负荷大鼠在4h内的排尿量,各实验剂量的苦瓜总皂苷均有降低尿蛋白水平的趋势,且Na+、Cl离子的排泄量增加,但对血肌酐、血尿素氮含量没有明显影响.结论:苦瓜总皂苷(0.288g/kg)对大鼠有显著的利尿效果,0.144 g/kg～ 0.576 g/kg的剂量不会引起肾功能的明显改变.
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黄芩对热证大鼠肝脏能量代谢的影响
目的:探讨寒药黄芩对酵母所致热证大鼠肝脏能量代谢的影响.方法:大鼠皮下注入20％酵母悬液10ml/kg,并立即灌服黄芩水煎液6.0g生药/kg、3.0g生药/kg,给药后第12小时处死大鼠,测定其血清游离脂肪酸(NEAF)含量、肝组织琥珀酸脱氢酶(SDH)、Na+-K+-ATP酶、Ca2+-ATP酶活性、三磷酸腺苷(ATP)含量及能荷值(EC)值.结果:与模型对照组相比,黄芩6.0g生药/kg、3.0g生药/kg组大鼠肝脏二磷酸腺苷(ATP)、二磷酸腺苷(ADP)、单磷酸腺苷(AMP)及腺苷酸池(TAN)含量均明显下降,EC值明显上升;黄芩3.0g生药/kg有升高血清NEFA含量的趋势,6.0g生药/kg可明显升高血清NEFA含量;黄芩6.0g生药/kg、3.0g生药/kg可降低肝糖原水平及SDH活力;黄芩3.0g生药/kg降低Na+-K+-ATPase、Ca2+-ATPase活力而6.0g生药/kg对Na+-K+-AT-Pase、Ca2+-ATPase活性影响均不明显.结论:黄芩对热证大鼠肝脏能量代谢有抑制作用.
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肿节风总黄酮含药血浆对大鼠骨髓巨核细胞增殖及TPO、TGF-β1含量的影响
目的:探讨肿节风总黄酮含药血浆对大鼠骨髓巨核细胞增殖及TPO、TGF-β1含量的影响.方法:分别一次性灌胃给予SD大鼠肿节风总黄酮0.39、2.0 g/kg,于给药后20、40、60 min眼眶取血收集肿节风总黄酮含药血浆.采用兔抗大鼠血小板相关抗体(稀释倍数为128倍)建立大鼠骨髓巨核细胞增殖障碍模型,考察肿节风总黄酮0.39、2.0 g/kg含药血浆对大鼠骨髓巨核细胞增殖及培养上清液中TPO、TGF-β1含量的影响.结果:(1)兔抗大鼠血小板相关抗体可显著降低大鼠骨髓巨核细胞增殖;相对于空白血浆组,肿节风总黄酮0.39、2.0 g/kg含药血浆可显著促进大鼠骨髓巨核细胞的增殖.(2)兔抗大鼠血小板相关抗体可显著降低大鼠骨髓巨核细胞培养体系中TPO含量,显著增加TGF-β1含量;相对于空白血浆组,肿节风总黄酮0.39、2.0 g/kg含药血浆可显著增加大鼠骨髓巨核细胞培养体系中TPO含量,显著降低TGF-β1含量.结论:肿节风总黄酮0.39、2.0 g/kg含药血浆可显著促进大鼠骨髓巨核细胞的增殖,可能与增加大鼠骨髓巨核细胞培养体系中TPO含量,降低TGF-β1含量等有关.
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醒脑益智胶囊对亚硝酸钠致小鼠记忆巩固障碍模型的影响
目的:研究醒脑益智胶囊对亚硝酸钠致小鼠记忆巩固障碍模型的影响.方法:小鼠60只随机分为空白对照组,模型组,石杉碱甲0.05 mg/kg,醒脑益智胶囊高剂量组、中剂量组、低剂量组(179.2,89.6,44.8 mg/kg),每天ig给药2次,连续15d进行预防性给药.给药后一次性皮下注射亚硝酸钠(120mg/kg)复制小鼠学习记忆巩固障碍模型,避暗法、跳台法测定学习记忆能力,测定脑组织中超氧化物岐化酶(SOD)活力、丙二醛(MDA)的含量.结果:与模型组比较,醒脑益智胶囊中(89.6 mg/kg)、高剂量组(179.2 mg/kg)能在一定程度上延长小鼠潜伏期,减少5分钟内错误次数,提高SOD活力,降低MDA的含量,以高剂量治疗效果尤为明显.结论:醒脑益智胶囊有促进记忆和改善亚硝酸钠致小鼠记忆巩固障碍的作用.
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阴立爽洗剂抗炎、抗过敏和止痒作用
目的:研究阴立爽洗剂的抗炎、抗过敏和止痒作用.方法:抗炎实验用小鼠耳肿法和大鼠足肿胀方法;抗过敏实验用DNCB(2 4-二硝基氯苯)致小鼠DTH(迟发性过敏反应)模型;止痒实验用磷酸组胺和右旋糖酐致痒方法.观察不同浓度阴立爽洗剂对实验动物炎症反应、过敏反应和局部皮肤搔痒的影响.结果:阴立爽洗剂(0.169、0.338、0.675g生药/ml)对二甲苯所致的小鼠耳肿和角叉菜胶所致的大鼠足肿胀均有明显的抑制作用;阴立爽洗剂(0.338、0.675g生药/ml)可不同程度的抑制2,4-二硝基氯苯所致的小鼠迟发性超敏反应,0.675g生药/ml浓度时还可增加小鼠的胸腺指数及脾指数;止痒实验显示,阴立爽洗剂(0.169、0.338、0.675g生药/ml)能明显减少右旋糖酐诱导的小鼠搔痒发作的次数和持续的时间,并可提高豚鼠耐受磷酸组胺的致瘁阈,抑制由组胺引起的皮肤搔痒.结论:阴立爽洗剂具有抗炎、抗过敏和止瘁作用.
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红葱对急性胃黏膜损伤的保护作用及抗氧化作用
目的:研究红葱乙醇提取物对实验性急性胃黏膜损伤的保护作用及其抗氧化作用,并研究了红葱的急性毒性.方法:采用无水乙醇诱导大鼠胃溃疡损伤模型,通过测定胃黏膜溃疡指数观察红葱乙醇提取物不同剂量组对大鼠胃黏膜损伤的保护作用;采用老龄小鼠模型,测定小鼠血液和肝组织中SOD、GSH-Px活性与MDA的含量;采用小鼠大耐受量(MTD)灌胃法,间隔6小时连续3次给药后,常规饲养小鼠14天,记录小鼠毒性反应情况,死亡数目及体重变化.结果:与模型组比较,红葱乙醇提取物中剂量组(18.75g/kg)能显著减小溃疡大鼠的溃疡面积,降低血液中MDA含量,增强SOD活性及GSH-Px活性;红葱乙醇提取物能显著增强血液中SOD活性及GSH-Px活性;红葱乙醇提取物高剂量组、中剂量组能明显降低肝组织中MDA含量,增强SOD活性;低剂量组能明显降低肝组织中MDA含量,增强GSH-Px活性.小鼠1天内的大给药量为112.5g/kg,14天内未见小鼠出现毒副反应.结论:红葱乙醇提取物具有保护胃黏膜作用和抗氧化作用,初步评价无明显毒性作用.
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丹参中抗血栓活性成分的虚拟筛选
目的:计算机辅助药物虚拟筛选和药物作用机制的研究将成为中药研究发展的一种新趋势,本文利用分子对接技术对丹参抗血栓的活性成分进行虚拟筛选.方法:选取149个丹参化学成分作为配体,选取与血栓密切相关的4种蛋白:抗凝血酶Ⅲ、凝血酶、血栓调节蛋白、凝固因子Xa作为受体,运用PyRx 0.8软件autodock vina模块进行对接.结果:在149个丹参化学成分中,3-(3,4-dihydroxyphenyl) lactamide,protocatechuic acid,oleoyl neocryptotanshinone,tanshilactone分别与抗凝血酶Ⅲ、凝血酶、血栓调节蛋白EGF(4-5)、凝固因子Xa结合的活性较高.结论:虚拟筛选结果可以为丹参抗血栓的分子机制研究提供参考.
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佛甲草对荷瘤小鼠的抗肿瘤作用及其免疫机制研究
目的:观察佛甲草对S180荷瘤小鼠肿瘤生长、T淋巴细胞亚群及细胞因子水平的影响,进一步研究其抗肿瘤的免疫机制.方法:采用小鼠右前肢腋部皮下接种S180细胞建立移植瘤模型,观察佛甲草提取物4、8 g/kg连续给药14天对荷瘤小鼠瘤重、抑瘤率、胸腺及脾脏指数的影响;应用流式细胞术(FCM)分析荷瘤小鼠外周血CD3+、CD4+、CD8+细胞在T淋巴细胞中的百分含量,并计算CD4 +/CD8+比值;酶联免疫吸附法(ELISA)检测荷瘤小鼠血清白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-10(IL-10)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平.结果:佛甲草4、8g/kg均可显著抑制小鼠S180肉瘤的生长,抑瘤率分别高达84.26％、62.24％,明显高于环磷酰胺组的抑瘤率29.28％,且能有效的调节荷瘤小鼠的胸腺指数及脾脏指数;显著提高荷瘤小鼠CD3+、CD4+T细胞的百分含量,降低CD8+T细胞的百分含量,CD4 +/CD8+比值明显升高;显著提高荷瘤小鼠血清细胞因子IL-6、IL-10水平,对TNF-α水平有升高趋势.结论:佛甲草可通过增强荷瘤小鼠抗肿瘤免疫应答功能,发挥其抗肿瘤活性.
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吉祥草乙酸乙酯部位对人宫颈癌Caski细胞抑制作用及COX-2基因表达与BCl-2蛋白家族关系的研究
目的:研究吉祥草乙酸乙酯部位对人宫颈癌Caski细胞抑制作用及可能的作用机制.方法:用不同浓度的吉祥草乙酸乙酯部位(3.125、4.6875、6.25、9.375、12.5、18.75、25.0、50.0μg/ml)处理宫颈癌Caski细胞24h后,采用MTT法检测不同浓度的吉祥草乙酸乙酯部位在不同作用时间下对Caski细胞增殖率的影响;用12.5、25.0和50.0μg/ml的吉祥草乙酸乙酯部位处理人宫颈癌Caski细胞不同作用时间(4、8、12、24、48h)后,MTT法检测其对细胞活力的影响,Hoechst33258染色检测其对细胞凋亡的影响,RT-PCR测定COX-2、BCl2和Bax mRNA表达,并计算BCl2与Bax的比值.结果:吉祥草乙酸乙酯部位在3.125～50.0 μg/ml浓度范围内对Caski细胞的生长抑制作用呈明显的时间-剂量依赖性,当药物浓度达到50.0 μg/ml时,抑制率达到大到58.4％,并且经IC50分析软件进行计算其IC50值为35.29μg/ml;吉祥草乙酸乙酯部位(12.5、25.0和50.0μg/ml)处理能显著抑制Caski细胞增殖,促进其凋亡(P＜0.05或P＜0.01),当药物浓度为50.0 μg/ml,作用时间48h时,其抑制率高达98.9％;上调Bax mRNA表达,下调COX-2、BCl2 mRNA表达和BCl2与Bax的比值.结论:吉祥草乙酸乙酯部位有显著的抑制Caski细胞增殖和诱导凋亡作用,其作用机制可能与其上调Caski细胞Bax mRNA表达,下调COX-2、BCl2 mRNA表达和BCl2与Bax的比值有关.
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穿山龙总皂苷对痛风性关节炎大鼠关节炎滑膜IL-1β及其信号转导通路的影响
目的:考察穿山龙总皂苷(total saponins from rhizoma Dioscoreae nipponicae,RDN)对痛风性关节炎大鼠关节炎滑膜IL-1β及其介导的信号转导通路的影响.方法:40只雄性Wistar大鼠随机分为四组,分别为正常组、模型组、穿山龙总皂苷低(40mg/kg)、高剂量组(160mg/kg),连续灌胃穿山龙总皂苷5天.第3d灌胃穿山龙总皂苷1h后,膝关节上方髌上韧带进针,注射0.2ml浓度为25mg/ml的微晶尿酸钠结晶混悬液到关节腔,造成实验性痛风性关节炎模型.采用HE和伊红染色观察关节滑膜组织病理学变化,免疫组化法检测穿山龙总皂苷对大鼠膝关节滑膜组织中IL-1β、SDF-1、CXCR4、PI3K、PKC和NF-κB表达的影响.结果:与正常组比较,模型组大鼠膝关节滑膜组织中IL-1β、SDF-1、CXCR4、PBK、PKC和NF-κB表达水平显著升高(0.087±0.021,0.064±0.017,0.146±0.042,0.139±0.057,0.088±0.021,0.079±0.018),穿山龙总皂苷低剂量组能显著降低CXCR4表达水平(0.081±0.006).穿山龙总皂苷高剂量组能显著降低IL广1β、CXCR4、PBK、PKC和NF-κB表达水平(0.035±0.007,0.104±0.011,0.077±0.017,0.039±0.011,0.030±0.009).结论:穿山龙总皂苷可抑制IL-1β及其介导的信号转导通路;穿山龙总皂苷具有治疗痛风性关节炎(Gouty Arthritis,GA)的潜在价值.
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厚朴汁炙远志含药血清对胃Cajal间质细胞活力及nNOS表达的影响
目的:考察厚朴汁炙远志炮制品含药血清对胃Cajal间质细胞(interstitial cells of Cajal,ICC)活力及胞内nNOS表达的影响,从细胞水平阐释其降低胃动力障碍的生物学机制.方法:采用体外培养胃Cajal间质细胞,再加入含药血清与之共培养的方法开展实验.实验分为空白组、厚朴10 g/kg组、远志20 g/kg组、厚朴汁炙远志炮制品高剂量30g/kg组4个不同组,采用MTT比色法检测细胞活性、We stern-Blot法分析各药对细胞内nNOS表达的影响.结果:远志20g/kg组ICC细胞的OD值明显低于空白组,且细胞突起变短,网状脱落;而厚朴10g/kg组、厚朴汁炙远志30g/kg组细胞OD值明显高于空白组和单味远志组.免疫印迹法检测结果显示,远志20g/kg组的nNOS的表达与空白组比较明显增强,厚朴10g/kg组的表达明显下降,远志20 g/kg组呈下降趋势.结论:远志能抑制胃动力起搏细胞活性,抑制胃间质细胞nNOS表达增强;而厚朴汁炙远志能明显促进细胞活性、下调nNOS表达从而缓解胃动力障碍.
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瘤果黑种草子总皂苷的长期毒性研究
目的:观察瘤果黑种草子总皂苷连续灌胃给药90天对大鼠产生的毒性反应.方法:给大鼠灌胃不同浓度(分别为35、157和700mg/kg)瘤果黑种草子总皂苷90天,分别于给药45天、90天及停药后17天处死10只大鼠进行血液学、血液生化学及组织病理学检查.结果:瘤果黑种草子总皂苷不同剂量组大鼠在给药及停药恢复期间外观体征、行为活动、体质量、摄食量、血液学、血液生化学及组织病理学检查均未见异常,与正常对照组比较差异均无显著性.结论:瘤果黑种草子总皂苷长期用药对大鼠无明显毒性.
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云南狗牙花抗炎活性研究
目的:对云南狗牙花进行体内外抗炎活性研究.方法:采用体外和体外两组模型对云南狗牙花中的单体化合物及其水提取物、30％乙醇提取物、60％乙醇提取物、90％乙醇提取物进行研究.除对照组外,试验药物组均灌胃给药,每天给药1次,连续给药7天,观察云南狗牙花水、乙醇提取物及九个单体化合物的抗炎效果.结果:小鼠单核巨噬细胞实验表明,云南狗牙花的乙醇提取物及九个单体化合物均有一定的抗炎作用,其中以90％乙醇提取物作用强,IC50为18.37μ g/ml;二甲苯致耳肿胀实验、毛细血管通透性实验及大鼠足肿胀的实验结果表明,云南狗牙花90％乙醇提取物200mg/kg给药抗炎活性优于对照组及其他比例乙醇提取物.结论:云南狗牙花具有一定的抗炎活性,其中90％乙醇提取物作用强.
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丹莪妇康煎膏对子宫内膜异位症大鼠VEGF和TNF-α表达的影响
目的:探讨丹莪妇康煎膏对子宫内膜异位症大鼠异位子宫内膜组织中血管内皮生长因子(VEGF) mRNA表达和肿瘤坏死因子(TNF-α)表达的影响.方法:采用自体移植法建立子宫内膜异位症大鼠模型,将造模成功的大鼠随机分为模型组、孕三烯酮组(1.25 mg/kg)、丹莪妇康煎膏高剂量组(6g/kg)、低剂量组(3g/kg),另设假手术组.给药30天后,观察异位病灶外观及形态学改变,以RT-PCR法检测大鼠在位以及异位内膜组织中VEGF mRNA表达,以免疫组化法检测TNF-α的表达.结果:与模型组相比,丹莪妇康煎膏高剂量(6g/kg)、低剂量(3g/kg)组大鼠子宫内膜移植物体积均显著缩小,异位内膜组织出现萎缩,异位内膜组织中VEGF mRNA的表达显著降低,丹莪妇康煎膏高剂量组(6g/kg)大鼠异位内膜组织中TNF-α的表达显著降低,低剂量组(3g/kg)TNF-α的表达与模型组相比虽无显著性差异,但也有降低趋势.结论:丹莪妇康煎膏通过降低VEGF和TNF-α的表达,抑制子宫内膜细胞的侵袭和增殖能力,这可能是其治疗子宫内膜异位症的作用机制之一.
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土茯苓银花汤治疗血热证寻常型银屑病及其对血清TNF-α、IL-8、VEGF水平的影响
目的:观察土茯苓银花汤治疗血热证寻常型银屑病的疗效及其对血清肿瘤坏死因子(TNF-α)、白介素-8(IL-8)及血管内皮细胞生长因子(VEGF)水平的影响.方法:将76例患者随机分为治疗组(39例)和对照组(37例),治疗组给予土茯苓银花汤(土茯苓30g、银花15g、紫草12g、贯众10g、白鲜皮10g等),水煎服,每日1剂,分2次服.对照组给予消银胶囊,5粒/次,于饭后半小时,温开水送服,每日3次.所有患者治疗前后均于早晨8:00 ～9:00空腹采取静脉血3ml,采用酶联免疫吸附法(ELISA法)检测血清中TNF-α、IL-8、VEGF的水平.结果:治疗后,治疗组PASI分值与对照组比较有显著性差异(P＜0.01),痊愈率、总有效率与对照组比较均有显著性差异(P＜0.01),血清中TNF-α、IL-8、VEGF水平治疗后显著下降(P＜0.01),且治疗组TNF-α、VEGF水平下降明显优于对照组(P＜0.01),而IL-8水平下降两者无差异(P＞0.05).结论:土茯苓银花汤在治疗血热证寻常型银屑病方面疗效显著,推测可能与调节血清中TNF-α、IL-8、VEGF的水平有关.
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活血通窍方治疗前列腺增生症随机、对照临床研究
目的:客观评价活血通窍方治疗前列腺增生症的有效性和安全性.方法:采用随机、对照临床研究方法,从2011年9月～2012年10月共纳入病例数124例,其中活血通窍方52例、复方天益胶囊组36例、舍尼通36例,4周为一个疗程,进行有效性和安全性评价.结果:活血通窍方对前列腺增生症具有良好的治疗作用,在疾病显效率、降低国际前列腺症状评分(IPSS)和提高大尿流率(MFR)方面,活血通窍方优于复方天益胶囊和舍尼通;在疾病总有效率和膀胱残余尿量改善方面,活血通窍方优于舍尼通;在安全性评价方面,活血通窍方未出现药物不良反应和有临床意义的实验室异常,优于复方天益胶囊.结论:与复方天益胶囊和舍尼通相比,活血通窍方对前列腺增生症具有更好的临床疗效和安全性.
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桔梗、牛膝对血府逐瘀汤治疗冠心病心绞痛疗效影响的临床观察
目的:通过对血府逐瘀汤治疗冠心病心绞痛的临床疗效观察,探讨血府逐瘀汤中引经药桔梗、牛膝对临床疗效的影响.方法:随机对照,治疗组60例口服血府逐瘀汤,每次150ml,每日3次;对照组60例口服缺引经药桔梗、牛膝的血府逐瘀汤,每次150ml,每日3次.连续治疗,两组总疗程均为4周,分别对两组病人进行心绞痛症状、心电图、硝酸甘油停减率和血脂分析评估.结果:治疗组心绞痛症状改善总有效率95.00％,明显优于对照组58.34％.治疗组心电图改善明显优于对照组.硝酸甘油减停率92.86％,明显优于对照组75％.治疗组胆固醇水平下降较对照组明显.结论:血府逐瘀汤治疗冠心病心绞痛的疗效优于缺少桔梗、牛膝的血府逐瘀汤组,得出引经药桔梗、牛膝能够影响血府逐瘀汤临床疗效的发挥.
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生脉注射液不良反应的Meta分析
目的:采用Meta分析对生脉注射液静脉注射给药的不良反应进行回顾性分析,评价其临床安全性.方法:检索PubMed、CNKI、VIP、Wanfang data等数据库1998 ～2013年公开发表的有关生脉注射液静脉给药的临床研究文献,根据纳入和排除标准汇集资料,采用RevMan5.2软件,对生脉注射液不良反应发生率进行Meta分析.结果:符合标准并纳入分析的文献共有28篇,Meta分析结果显示,生脉注射液组的不良反应发生率与对照组的比值比OR为0.96[0.49,1.88],两组间比较无显著性差异(P=0.91).亚组分析显示:2010 ～2013年亚组生脉注射剂不良反应发生率显著性高于对照组(P=0.02),而其他各亚组内,生脉注射剂不良反应发生率与对照组比较均无显著性差异.结果:生脉注射剂近几年不良反应发生率较高,临床静脉应用时,临床药师和临床医师应关注其不良反应的发生,保障合理用药.
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清肺润泽丸联合化疗治疗继发型肺结核临床观察
目的:评价蒙药清肺润泽丸联合化疗治疗初治和复治继发型肺结核临床疗效,探讨该药对抗结核药物增效、增敏,促进空洞闭合、痰菌转阴、改善症状等作用.方法:采用随机、单盲、平行对照的研究方法,将初治和复治继发型肺结核患者分为试验组和对照组,试验组初治采用前两个月强化期用乙胺丁醇、异烟肼、利福平及吡嗪酰胺,每日1次;后四个月用异烟肼及利福平,每日1次(2HRZE/4HR)加清肺润泽丸(10g/日)和复治采用前两个月强化期用链霉素、乙胺丁醇、异烟肼、利福平及吡嗪酰胺,每日1次;第三个月用乙胺丁醇、异烟肼、利福平及吡嗪酰胺,每日1次;后五个月巩固期用异烟肼、利福平及链霉素,每日1次(2SHRZE/1 HRZE/5 HRE)加清肺润泽丸(10g/日),对照组采用上述标准化疗方案.肺部病灶吸收率,痰菌转阴率,病症显效率为观察指标.结果:初治患者治疗第1个月、第2个月试验组肺部病灶吸收的患者比例高于对照组,第3～6个月肺部病灶明显吸收的患者比例试验组优于对照组,试验组治疗后肺部病灶吸收率明显降低,与对照组比较有统计学意义(P＜0.05);复治患者治疗后第4～8个月试验组肺部病灶明显吸收与吸收的患者比例高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).试验组治疗第3个月痰菌转阴率达到100％高于对照组,有显著性差异(P＜0.05).试验组改善病症较快,在治疗后第2个月各种病症明显好转,痊愈率试验组优于对照组,有显著性差异(P＜0.05).结论:清肺润泽丸联合化疗治疗初治和复治继发型肺结核临床疗效显著,对化疗药具有增效、增敏作用.
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香莲祛痛霜Ⅰ期临床耐受性试验研究
目的:观察人体对香莲祛痛霜的耐受性,确定安全耐受的人用剂量,了解在此剂量下的不良反应,为制定本品的Ⅱ期临床试验给药方案,提供安全的剂量范围.方法:采用随机、盲法、安慰剂对照的单中心临床研究,选择70名健康受试者,分别采用单次给药及连续给药观察该药的安全性和耐受性.结果:70例受试者完成试验,6例受试者实验室检查结果异常,均为试验药组,单次给药5例,连续给药1例,与药物关系为可能无关.结论:单次给药,安全剂量范围为不大于10.0∥日;连续给药,安全剂量范围为不大于10.0g/日,疗程为7天.
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常见风湿病中西医结合诊疗指南(草案)
骨关节炎中西医结合诊疗指南一、概述(一)西医对骨关节炎的认识 骨关节炎(osteoarthritis,OA)是一种由多种因素引起的关节软骨的变性、破坏及骨质增生为特征的慢性关节疾病.又称骨关节病,退行性关节病.本病以中老年人多见,其发病率随年龄增长而增加,特别是当今世界人口老龄化,发病率呈逐年人升趋势.本病40岁以下少见发病,据X线普查发现,55岁以上发病率高达88％,女性多于男性.(二)中医学对骨关节炎的认识本病属中医学之“骨痹”范畴,其形成,与肾元亏虚、肝血不足、脾气虚弱,致骨失所养,筋骨不坚,瘀血内阻或外邪侵袭,经脉痹阻有关.肾主骨生髓,髓居骨中,本病常因肾精不充,骨骼不健,肝血不足,筋脉不强而加重.
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二冬膏对小鼠诱发性肺肿瘤发生及TNF-α、IL-6、IL-10、Foxp3的影响
目的:研究二冬膏对乌拉坦诱发性肺肿瘤小鼠的肿瘤发生情况和抗肿瘤免疫功能的影响.方法:雌性KM小鼠60只,分为5组:正常组(A)、模型组(B)、二冬膏0.78 g/kg组(C)、二冬膏1.56 g/kg组(C)、六味地黄丸1.56 g/kg组(E),每组12只.除正常组外,其余各组注射乌拉坦(1 g/kg/d)诱发小鼠肺肿瘤,造模后,正常组和模型组灌胃生理盐水,二冬膏0.78g/kg组、二冬膏1.56 g/kg组、六味地黄丸1.56 g/kg组灌胃给予等体积药物,每日给药1次,连续给药100天后处死小鼠,取血清和肺脏检测,HE染色光镜下观察药物对小鼠肺肿瘤发生的影响,用双抗体夹心-酶联免疫吸附(ABC-ELISA)法检测血清中TNF-α、IL-6、IL-10的含量,免疫组化检测肺组织中Foxp3活性的表达.结果:二冬膏能使模型小鼠肺肿瘤诱发率明显降低,并可明显降低血清中TNF-α、IL-6、IL-10含量,使肺组织中Foxp3活性的表达也显著下降.结论:二冬膏能通过提高小鼠的抗肿瘤免疫功能和减少炎症因子产生来延缓乌拉坦诱发肺肿瘤的发生发展.
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参附注射液对老年大鼠肢体缺血再灌注后肾脏损伤的保护作用
目的:观察参附注射液对老年大鼠肢体缺血再灌注(hind limb ischemia/reperfusion,I/R)损伤后肾功能变化、血红素加氧酶-1(Heme-oxygenase 1,HO-1)表达的影响,并对其保护机制作一初步探讨.方法:64只雄性大鼠,随机分为4组,分别为:假手术对照组、肢体缺血再灌注组、参附干预组、参附+锌原卟啉干预组.假手术对照组:大鼠麻醉后仅分离不夹闭股动脉,分离血管前10 min以7.5ml/kg腹腔注射生理盐水;肢体缺血再灌注组:夹闭股动脉前10 min以7.5ml/kg腹腔注射生理盐水,夹闭股动脉缺血3h,再灌注4h;参附干预组:夹闭股动脉前10 min以中等实验剂量7.5m1L/kg(常用实验剂量有效范围5-20ml/kg)腹腔注射参附注射液,夹闭股动脉缺血3h,再灌注4h;参附+锌原卟啉干预组:术前30min腹腔注射锌原卟啉Ⅸ5mg/kg,余同参附干预组.再灌注完毕后取材,测定肾组织丙二醛(Malondialdehyde,MDA)含量、超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase,SOD)活性;采用免疫组化法测定肾组织HO-1的表达和定量;光镜下观察肾脏病理学改变;取外周静脉血测血清肌酐(Co、尿素氮(BUN)含量.结果:与假手术组比较,各肢体缺血再灌注造模组MDA含量均升高;肢体缺血再灌注组、参附+锌原卟啉干预组SOD含量降低;各组血清肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)含量升高,肾组织损伤明显(P＜0.05或0.01).与肢体缺血再灌注组比较,参附+锌原卟啉干预组各项指标未见显著差异(P＞0.05),参附干预组MDA含量降低,SOD含量升高(P＜0.05);血清肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)含量降低,肾组织损伤明显减轻(P＜0.05).与参附干预组比较,参附+锌原卟啉干预组MDA含量升高,SOD含量降低(P＜0.05);血清肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)含量升高,肾组织损伤加重(P＜0.05).与假手术组比较,肢体缺血再灌注组、参附干预组、参附+锌原卟啉干预组肾组织HO-1表达升高,(P＜0.05);与肢体缺血再灌注组比较,参附干预组、参附+锌原卟啉干预组肾组织HO-1表达升高(P＜0.05).与参附干预组比较,参附+锌原卟啉干预组HO-1表达未见差异(P＞0.05).结论:肢体缺血再灌注可造成肾脏功能损伤,给予常规剂量7.5ml/kg参附注射液预处理可以减轻肾脏损害程度,这种保护作用可能与参附注射液预处理上调HO-1蛋白在肾组织中的表达,抑制氧自由基生成有关.
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逍遥散及其功效拆方对CUMS大鼠血清细胞因子与皮质酮水平的影响
目的:观察逍遥散及其功效拆方对CUMS模型大鼠血清白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、干扰素-γ(IFN-γ)及皮质酮(C ort)水平的影响,初步揭示逍遥散中体现不同治法的功效拆方抗抑郁效应机制上的差异.方法:采用慢性不可预知温和应激+孤养6周的方法制备CUMS大鼠抑郁模型,逍遥散(30g/kg)、逍遥散中疏肝药(柴胡+薄荷,5.25g/kg)、逍遥散中养血药(当归+白芍,9g/kg)、逍遥散中疏肝药+逍遥散中健脾药(柴胡+薄荷+白术+茯苓+生姜+炙甘草,21g/kg)、逍遥散中养血药+逍遥散中健脾药(当归+白芍+白术+茯苓+生姜+炙甘草,24.75g/kg)、阿米替林(10mg/kg)连续4周灌胃给予(造模第3周开始给药),ELISA法测定大鼠血清IL-1β、IL-6、TNF-α、IFN-γ、Cort的含量.结果:与模型组比较,逍遥散、疏肝药、养血药、疏肝药+健脾药、养血药+健脾药均能显著降低大鼠血清IL-1β、IL-6、TNF-α、IFN-γ水平,且逍遥散、疏肝药、疏肝药+健脾药的作用优于养血药、养血药+健脾药;逍遥散、养血药、养血药+健脾药显著降低大鼠血清Cort水平,但疏肝药、疏肝药+健脾药的作用不明显.结论:逍遥散抗抑郁作用的发挥与抑制CUMS模型大鼠炎性细胞因子的释放、降低血清皮质酮水平有关,其中代表“疏肝”治法的柴胡-薄荷药组对细胞因子的调节作用突出,而代表“养血”治法的当归-白芍药组对皮质酮水平的影响作用显著,共奏全方抗抑郁效应.
| 年 | 期数 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 |
| 2017 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2011 | 01 02 03 04 06 |
| 2010 | 02 03 04 05 06 |
| 2009 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2008 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2007 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2006 | 01 02 03 05 06 |
| 2005 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2004 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2003 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2002 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2001 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2000 | 01 02 03 04 05 06 |
| 1999 | 03 04 05 06 |
