中药药理与临床杂志
Pharmacology and Clinics of Chinese Materia Medica 중약약리여림상
- 主管单位： 四川省中医管理局
- 主办单位： 中国药理学会 四川省中医药科学院
- 影响因子： 0.99
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 1001-859X
- 国内刊号： 51-1188/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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乙肝抗病毒药物苦参碱联合拉米夫定对乙肝病毒DNA聚合酶活性的影响
目的:探讨苦参碱联合拉米夫定抗乙肝协同作用的研究及对乙肝病毒DNA聚合酶(HBV DNAP)活性的影响.方法:本文采用MTT法测定苦参碱和拉米夫定对转染人肝癌细胞株(HepG2)的2.2.15细胞生长抑制能力,利用酶抑制动力学方法,研究了苦参碱和拉米夫定对HBV DNAP的抑制作用、并进一步地分析了苦参碱对HBV DNAP的抑制动力学常数,后对苦参碱联合拉米夫定对HepG2.2.15细胞生长抑制和HBV DNA合成的抑制是否具有协同效应进行了探讨.结果:苦参碱是一种可逆的竞争型HBV DNAP抑制剂(半抑制浓度IC50为11.24±2.06 μmol/L,抑制常数Ki为0.34±0.05 μrnol/L),圆二色性谱分析表明苦参碱诱导HBV DNAP的构象发生部分改变,α-螺旋含量逐渐增加;且低浓度的拉米夫定与苦参碱联合使用对HepG2.2.15细胞生长抑制和对HBV DNA合成的抑制都具有协同作用.结论:苦参碱能够通过结合到HBV DNAP的活性中心,并诱导酶的结构变得紧密,而不利于活性中心的形成,终使HBV DNAP活性降低.而这种诱导酶的活性降低直接影响到乙肝病毒DNA的合成,加之拉米夫定的联合使用,起到了协同作用,增加了抗乙肝病毒的药效.
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肿节风总黄酮对体外骨髓基质细胞-巨核细胞共培养体系的影响
目的:探索肿节风总黄酮对骨髓基质细胞-巨核细胞共培养体系中巨核细胞分化成熟,以及基质细胞状态的影响.方法:模拟骨髓微环境,建立KM小鼠骨髓基质细胞和巨核细胞共培养体系,实验分为空白对照组、阿糖胞苷模型组、二甲基亚砜(DMSO)对照组、肿节风总黄酮组7.80、3.90、1.95 μg/ml剂量组,每组3个复孔.各组培养4天后分离巨核细胞进行涂片、染色、统计多倍体数目,流式细胞术分析巨核细胞CD61表达量,消化培养体系中贴壁的基质细胞,流式细胞术检测其凋亡情况,ELISA检测培养体系中TPO和SDF-1的含量.结果:与阿糖胞苷模型组相比,肿节风总黄酮7.80 μg/ml和3.90 μg/ml剂量组中多倍体巨核细胞数目显著增加,肿节风总黄酮7.80 μg/ml剂量组巨核细胞CD61表达水平明显提高.肿节风总黄酮7.80 μg/ml和3.90 μg/ml剂量组显著降低基质细胞的凋亡率.肿节风总黄酮7.80、3.90、1.95μg/ml剂量组显著提高培养体系中TPO和SDF-1的含量.结论:肿节风总黄酮可能是通过抑制共培养体系中基质细胞凋亡促进“量”的增加,增进其分泌细胞因子TPO、SDF-1影响“质”的变化,改善骨髓微环境,促进巨核细胞分化成熟和产生更多的血小板.
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半乳糖化的波棱芴酮脂质体对四氯化碳致肝损伤小鼠的保护作用
目的:以半乳糖基修饰的脂质(LAC)为肝靶向材料,制备载波棱芴酮肝靶向脂质体,考察其与波棱芴酮脂质体对CCl4致肝损伤小鼠保护作用的疗效差异.方法:采用薄膜分散法制备波棱芴酮半乳糖化脂质体、波棱芴酮脂质体,并对半乳糖化的波棱芴酮脂质体进行质量评价.体内药效实验,小鼠随机分为空白组、模型组、波棱芴酮单体组、波棱芴酮脂质体组、波棱芴酮半乳糖化脂质体组.每日给小鼠尾静脉注射生理盐水或单体、波棱芴酮脂质体、波棱芴酮半乳糖化脂质体1次,给药剂量20 mg/kg,共7天.实验末期,腹腔注射CCl4建立小鼠急性肝损伤模型.肝脏称重,计算肝脏系数,并测定各组小鼠天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、肝组织匀浆中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)等指标,HE染色对肝组织进行组织病理学检查.结果:制备的波棱芴酮半乳糖化脂质体平均粒径(128.9±1.8)nm,分散系数为0.172±0.006,给药剂量为20mg/kg的体内药效结果表明,与波棱芴酮脂质体组相比,半乳糖化的波棱芴酮脂质体组显著降低CCl4致急性肝损伤模型小鼠肝脏系数和血清ALT、AST水平,肝组织病理形态损伤减轻,肝脏SOD和GSH-Px活性升高,减少肝组织匀浆中MDA的含量.结论:经半乳糖基修饰的脂质体能够提高药物在肝脏的聚集,增强CCl4致化学性肝损伤小鼠的保护作用.
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茵蒿蓝颗粒保肝退黄降酶作用的实验研究
目的:评价茵蒿蓝颗粒退黄降酶保肝的药理作用.方法:分别采用异硫氰酸-1-萘酯(isothiocyanate-1-naphthyl esters,ANIT)、D-氨基半乳糖(D-galactosamine,D-GaIN)、卡介苗(bacillus calmette-guerin,BCG)加大肠杆菌脂多糖(intestinal coli lipopolysaccharide,LPS)致小鼠肝细胞损伤模型,以小鼠肝功能和肝病理改变为判断指标,观察茵蒿蓝颗粒的保肝降酶、退黄作用.结果:茵蒿蓝颗粒可显著降低黄疸型肝炎模型小鼠血清丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)、总胆红素(total bilirubin,TBIL)、直接胆红素(direct bilirubin,DBIL),降低D-GaIN急性肝损伤模型和BCG加LPS免疫性肝损伤模型小鼠血清ALT、AST、TBIL水平;肝脏组织病理学检查显示,茵蒿蓝颗粒对以上3种肝细胞损伤均具有明显的修复作用,试验结果提示5.2g/kg可作为有效参考剂量.结论:茵蒿蓝颗粒具有良好的保肝降酶、退黄的作用.
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风寒感冒浸膏体内外抗菌作用的实验研究
目的:探讨风寒感冒浸膏的体外、体内抗菌作用.方法:采用琼脂二倍稀释法、液体二倍稀释法及动物试验对风寒感冒浸膏进行体外和体内试验,测定其对受试菌的低抑菌浓度(MIC),低杀菌浓度(MBC)和对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌感染小鼠的体内保护作用.结果:风寒感冒浸膏对受试菌具有体外抗菌活性,对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌感染小鼠有保护作用,半数有效剂量ED5o为1.388g/kg和3.788g/kg.结论:风寒感冒浸膏具有体内外抗菌活性.
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黄地安消胶囊改善自发性T2DM大鼠胰岛素抵抗机制研究
目的:观察黄地安消胶囊对2型糖尿病(T2DM)模型GK(Goto-Kakizaki,GK)大鼠肝脏组织中IRS-1/PI3K/Akt/GSK-3β/CS信号通路关键基因表达的影响,探讨其改善胰岛素抵抗(Insulin resistance,IR)的可能机制.方法:选取符合T2DM模型的GK大鼠纳入实验,随机分为模型组,黄地安消胶囊(12、6、3 g/kg)组,参芪降糖颗粒组(1.08 g/kg),以及正常Wistar大鼠为对照组.每组10只,每天1次灌胃给药,连续6周.试验结束后取肝脏组织进行PAS染色,观察其对糖原合成的影响.RT-qPCR技术检测肝脏组织INSR、IRS-1、PI3K、GS mRNA表达水平,Western bolt检测INSR、IRS-1、PI3K、p-PI3K、GS、p-GS蛋白的表达水平.免疫荧光组织化学染色法检测肝脏组织IRS-1、p-PI3K、p-Akt、GSK-3β蛋白的表达.结果:与模型组比较,黄地安消胶囊组(12、6、3 g/kg)可以显著增加肝脏糖原合成,同时增加INSR、IRS-1、PI3K、p-PI3K、GS、p-GS的表达水平.结论:黄地安消胶囊可通过IRS-1/PI3K/Akt/GSK-3β/GS信号通路,调控蛋白活性,促进糖原合成,降低血糖,改善胰岛素抵抗,治疗T2DM.
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“补骨脂-肉豆蔻”醇提物调控CRF-CREB信号通路对肠易激综合征内脏高敏感大鼠发挥治疗作用的研究
目的:观察“补骨脂-肉豆蔻”醇提物对母子分离结合乙酸灌肠诱导肠易激综合征内脏高敏感大鼠CRF-CREB信号通路的作用.方法:将新生SD大鼠随机分为正常组、模型组、“补骨脂-肉豆蔻”醇提物(15 g/kg、10 g/kg、5 g/kg)组和匹维溴铵(0.05g/kg)组.除正常组外,其余各组采用母子分离结合乙酸灌肠法复制内脏高敏感大鼠模型,于造模后第6周起,给药组分别灌胃给予相应的受试药物,正常组和模型组给予等量溶媒,l天1次,连续2周.采用直肠扩张法评价其腹部收缩反射(AWR)阈值,HE染色观察大鼠结肠组织病理学变化;免疫荧光检测大鼠结肠促肾上腺皮质激素释放因子(CRF),CRF 1型受体(CRFR1)蛋白的表达;RT-qPCR技术检测蛋白激酶A(PKA)、环磷腺苷效应元件结合蛋白(CREB)、c-fos mRNA的表达;Western blot技术检测PKA、CREB、p-CREB、c-fos蛋白的表达.结果:“补骨脂-肉豆蔻”醇提物(15 g/kg、10 g/kg)不仅能降低结肠组织中CRF、CRFR1蛋白的表达,还能降低结肠组织中PKA、CREB、p-CREB、c-fos mRNA和蛋白表达.结论:“补骨脂-肉豆蔻”对肠易激综合征内脏高敏感性大鼠有一定的治疗作用,其机制与调节结肠组织中CRF-CREB信号通路有关.
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伤科黄水治疗急性软组织损伤的药效学研究
目的:研究伤科黄水对急性软组织损伤的治疗作用.方法:将小鼠随机分为空白对照组,扶他林1.00 g/kg组,伤科黄水69.00 g/kg剂量组、34.50 g/kg剂量组、17.25 g/kg剂量组,每组15只.采用小鼠二甲苯耳肿胀模型和毛细血管通透性模型,考察伤科黄水的抗炎作用;采用小鼠热刺激致痛模型、小鼠醋酸扭体模型,以及小鼠甲醛致痛模型,考察伤科黄水的镇痛作用.采用重物高空击打法制备大鼠急性软组织损伤模型,将符合实验要求的大鼠随机分为空白对照组、模型对照组、扶他林0.50 g/kg组,以及伤科黄水34..50 g/kg剂量组、17.25 g/kg剂量组、8.63 g/kg剂量组,每组15只,连续外用给药5d,观察组织损伤程度和病理学差异,测定血液流变学参数及炎性介质的变化.结果:伤科黄水69.00 g/kg剂量组、34.50 g/kg剂量组、17.25 g/kg剂量组可以明显减轻二甲苯对小鼠耳廓所致的肿胀,伤科黄水69.00 g/kg剂量组对醋酸引起的毛细血管通透性增加也有明显的抑制作用.伤科黄水备剂量对热刺激所致疼痛无显著镇痛作用,伤科黄水69.00 g/kg剂量组、34.50g/kg剂量组对醋酸和甲醛致刺激性疼痛有明显镇痛作用,与空白对照组相比有显著性差异.本研究成功建立了大鼠急性软组织损伤模型,与模型对照组大鼠相比,伤科黄水34.50g/kg剂量组、17.25 g/kg剂量组大鼠在软组织损伤程度、病理形态变化及血液流变学方面有显著性的差异;伤科黄水8.63 g/kg剂量组、17.25 g/kg剂量组、34.50 g/kg剂量组大鼠局部损伤组织的前列腺素E2(PGE2)、白细胞介素-1β(IL-1β)的含量明显下降.结论:伤科黄水具有抗炎、镇痛的药理作用,对炎性渗出肿胀有显著的抑制作用,可用于治疗急性软组织损伤.
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苦豆碱对野百合碱致大鼠肺动脉高压的保护作用
目的:研究苦豆碱对野百合碱致大鼠肺动脉高压的影响.方法:将SD大鼠随机分为6组:对照组、模型组、苦豆碱25mg/kg、50 mg/kg、100 mg/g及西地那非30 mg/kg组.模型组和各给药组大鼠给予野百合碱60 mg/kg造模,对照组给予等量生理盐水.21天后开始灌胃给予大鼠相应的药物,每天一次.在实验第43天,测量各组大鼠血流动力学指标、组织学指标、超声心动图指标及心电图指标.结果:苦豆碱25 mg/kg、50 mg/kg、100 mg/kg可以在不同程度上改善肺动脉高压大鼠中由野百合碱导致的血流动力学指标、组织学指标、超声心动图指标及心电图指标的不利变化.结论:苦豆碱对野百合碱致大鼠肺动脉高压具有保护作用.
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四氢姜黄素聚乙二醇-聚乳酸嵌段共聚物纳米颗粒的制备及其作用于成纤维细胞以促进创面愈合的初步研究
目的:制备四氢姜黄素(Tetrahydrocurcumin,THC)聚乙二醇-聚乳酸嵌段共聚物(MPEG-PLA)纳米颗粒(THC-MPEG-PLA-NPs),考察其理化性质,探究四氢姜黄素纳米颗粒在体外对创面愈合的疗效.方法:采用溶剂萃取法制备THC-MPEG-PLA-NPs,利用透射电子显微镜观察纳米粒形态;激光粒度仪考察粒径和Zeta电位;超速离心法测定其包封率及载药量.利用皮肤成纤维细胞划痕实验模型探究纳米颗粒在体外的创面愈合作用.结果:制备的THC-MPEG-PLA-NPs外观呈圆形或类圆形,平均粒径为(32.70±1.15)nm,包封率和载药量分别为(99.49±0.03)％和(16.58±0.01)％;第12h,与未加入THC-NPs的成纤维细胞的迁移率56.3±8.5％相比,加入THC-NPs(THC给予量是5.0和10.00μg)的皮肤成纤维细胞的迁移率更高,分别是77.5±2.9％,69.3±4.7％.结论:溶剂萃取法可成功制备THC-MPEG-PLA-NP;四氢姜黄素聚乙二醇-聚乳酸嵌段共聚物纳米粒在创面愈合领域具有较大的临床应用潜力.
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基于AMPK/Sirt1信号通路研究黔北绿茶水提物对过氧化氢诱导的PC12细胞氧化损伤的保护作用
目的:探讨黔北绿茶水提物通过AMPK/Sirt1信号通路抗过氧化氢诱导的PC12细胞凋亡作用及机制.方法:采用噻唑蓝(MTT)法测定黔北绿茶水提物对过氧化氢诱导的PC12细胞存活率和死亡率的影响,ELISA法检测活性氧(ROS)含量,TUNEL实验检测细胞凋亡情况,罗丹明123荧光染色观察线粒体膜电位的改变,Western-blot法检测相关蛋白表达.结果:不同浓度黔北绿茶水提物(12.5 ～50 μg/ml)能够提高过氧化氢作用的细胞活力并呈浓度依赖性.黔北绿茶水提物(12.5～ 50 μg/ml)作用48 h后能够显著提高细胞线粒体膜电位并上调抗凋亡蛋白Bcl-2蛋白、p-AMPK、Sirt1蛋白表达,下调促凋亡蛋白Bax、caspase 3蛋白表达.结论:黔北绿茶水提物能够显著抑制过氧化氢诱导的PC12细胞凋亡,其作用可能与调控AMPK/Sirt1依赖的细胞凋亡途径相关.
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肠腑康胶囊对大鼠脾虚型溃疡性结肠炎作用实验研究
目的:研究不同提取方法及给药途径的肠腑康胶囊对大鼠脾虚型溃疡性结肠炎(Ulcerative Uolitis,UC)的作用.方法:采用灌服番泻叶浸剂加直肠注入2,4,6-三硝基苯磺酸复制脾虚型溃疡性结肠炎模型,灌胃给药或者灌胃给药加直肠给药,观察其对脾虚型溃疡性结肠炎的治疗作用.结果:造模后各组大鼠陆续出现脾虚症状并有大鼠死亡;模型组结肠重量及体重结肠比显著升高,大鼠溃疡数增加,大鼠粪便异常的动物数显著增加,肠黏膜可见溃疡,可见“陷窝脓肿”、“陷窝溃疡”形成,炎症程度较重,可见肠黏膜和黏膜下组织大量炎细胞浸润.给药组给药后,症状明显得到改善,各给药组体重在给药10天及15天后,较造模组增长明显加快,肠腑康胶囊口服+直肠组结肠重量及体重结肠比显著降低;肠腑康胶囊分别提取组体重结肠比显著降低;肠腑康胶囊灌胃+直肠给药组和分别提取灌胃组肠内溃疡个数明显减少;肠腑康胶囊灌胃+直肠给药组和肠腑康胶囊分别提取灌胃组大鼠粪便异常的动物数显著减少.病理组织学检查:口服+直肠组、分别提取组、混合提取组、补脾益肠丸组可显著提高溃疡愈合评分,提示本品对溃疡性结肠炎有较好的治疗作用,肠腑康胶囊给药途径口服+直肠组的作用优于其他两个给药途径和提取方法.结论:肠腑康胶囊(4.8g/kg)对大鼠脾虚型溃疡性结肠炎有较好的治疗作用,不同给药途径和提取方法的肠腑康胶囊对大鼠脾虚型溃疡性结肠炎的影响不同,其中口服+直肠明显优于其他2个给药途径及方法.
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玄参及其拆分组分对热证大鼠物质与能量代谢的影响
目的:探讨微寒中药玄参及其拆分组分对左甲状腺素钠片所致热证大鼠物质与能量代谢的影响.方法:除空白组外,各组分每日灌胃给予120mg/kg左甲状腺素钠片,造模1小时后灌胃给予玄参总提物水煎液及各拆分组分的水煎液,给药体积为10ml/kg,空白组和模型组给予等体积蒸馏水,连续灌胃15天后处死,测定肝脏葡萄糖激酶(GCK)、6-磷酸果糖激酶1(PFK-1)、丙酮酸激酶(PK)、丙酮酸脱氢酶(PDH)、乙酰辅酶A(Acetyl-CoA)、柠檬酸合成酶(CS)、异柠檬酸脱氢酶(ICD),肝脏和肌肉糖原合成酶激酶-3(GSK-3)、磷酸化酶(PYGL),肌肉中脂肪甘油三酯脂肪酶(ATGL),肝脏中琥珀酸-细胞色素C还原酶(CCR)、细胞色素C氧化酶(COX)、ATP合酶(ATPase)、腺苷激酶(ADK).结果:与模型对照组相比,玄参总提取物1.350g/kg和大极性环烯醚萜1.205g/kg组GCK、PK、CS、ICD、CCR、COX和ADK值明显降低,玄参总提物1.350g/kg组肝脏中的PYGL含量明显降低,玄参总提物1.350g/kg、苯丙素提取物0.028g/kg组和大极性环烯醚萜1.205g/kg组的ATGL含量显著升高.结论:玄参对热证模型大鼠的物质与能量代谢有抑制作用.
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饿蚂蝗总黄酮对鸭乙型肝炎的保护作用研究
目的:研究饿蚂蝗总黄酮对鸭乙型病毒性肝炎的作用.方法:采用鸭乙型肝炎病-毒-(DHBV)血清感染1日龄广西麻鸭.感染7d后采用PCR法筛选出DHBV DNA强阳性鸭,随机分为5组:模型组、阳性药拉米夫定组(50mg/kg)、饿蚂蝗总黄酮组(300,150,75 mg/kg),每组10只.另设正常对照组(经PCR筛选出的未造模DHBV阴性鸭)10只.各组从造模后第14d开始给药,每天灌胃给药1次,持续给药14d.每组动物分别于给药前0天(T0)、给药后7天(T7)、给药后14天(T14)、停药后3天(P3)自颈静脉采血,检测血清中鸭乙型肝炎病毒DNA(DHBV DNA)、鸭乙型肝炎表面抗原(DHBsAg)和鸭乙型肝炎e抗原(DHBeAg)的水平,谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)的活性,白介素-2(IL-2)、γ干扰素(IFN-γy)的含量变化.结果:与模型组比较,在T14时,饿蚂蝗总黄酮300、150、75 mg/kg剂量组能够降低T14时鸭血清DHBV DNA载量以及ALT和AST含量,升高IL-2和IFN-γy水平;在P3时,饿蚂蝗总黄酮300、150mg/kg剂量组对鸭血清DHBV DNA载量以及ALT和AST含量的抑制仍然明显,停药后无反跳.结论:饿蚂蝗总黄酮具有抗鸭乙型病毒性肝炎作用,其机制与抑制病毒复制、保肝降酶、调节免疫功能有关.
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淫羊藿总黄酮胶囊活性成分宝藿苷Ⅱ对MC3T3-E1细胞增殖分化的影响
目的:从淫羊藿总黄酮胶囊中制备分离宝藿苷Ⅱ,检测不同浓度宝藿苷Ⅱ对体外培养的MC3T3-E1细胞增殖分化的影响.方法:分别用10、20、40nmol/ml的宝藿苷Ⅱ作用MC3T3-E1细胞,CCK-8法检测细胞存活率;比色法测定碱性磷酸酶(ALP)活力;ELISA法检测骨钙素(OT)含量;茜素红染色分析并用氯化十六烷基吡啶测定钙沉积量;Western Blot法检测宝藿苷Ⅱ对BMP2信号通路蛋白表达的影响.结果:10、20、40nmol/ml的宝藿苷Ⅱ均可明显促进MC3T3-E1的增殖;提高MC3T3-E1分泌ALP和OT的能力;矿化结节数量明显增多且钙沉积量吸光度值显著增大;明显提高BMP2、Runx2和Osterix蛋白表达量,且呈剂量依赖性.结论:淫羊藿总黄酮胶囊活性成分宝藿苷Ⅱ可以明显促进MC3T3-E1细胞的增殖分化.
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三七总皂苷联合三苯氧胺对人乳腺癌细胞的抑制作用及对PI3K-AKT-mTOR信号通路的影响
目的:探讨三七总皂苷联合三苯氧胺对人乳腺癌细胞的抑制作用及对PI3K-AKT-mRNA信号通路的影响.方法:70只裸鼠于右胸部皮下接种乳腺癌LCC2细胞,选取造模成功的66只裸鼠随机分6组,每组11只,分别为模型对照组,单纯三苯氧胺组,三七总皂苷100 mg/kg、200 mg/kg组及三苯氧胺联合三七总皂苷100 mg/kg、200 mg/kg组,单纯三苯氧胺组腹腔注射三苯氧胺5mg/kg,三七总皂苷100 mg/kg、200 mg/kg组分别灌胃给予三七总皂苷,三苯氧胺联合三七总皂苷100 mg/kg、200 mg/kg组均腹腔注射三苯氧胺5 mg/kg,并分别灌胃给予三七总皂苷100 mg/kg及200 mg/kg,模型对照组给予等体积生理盐水(NS),每日一次,连续给药30天,每周记录肿瘤抑制率,瘤体重量,给药结束后分离瘤体,观察瘤体病理学结果,免疫组化法检测HER-2,GST-л,Caspase-3的表达情况.结果:与三苯氧胺组相比较,三苯氧胺联合三七总皂苷100 mg/kg、200 mg/kg组肿瘤抑制率均明显大于单纯三苯氧胺治疗组,HER-2及GST-л表达量显著低于模型对照组,Caspase-3表达显著高于模型对照组.结论:三七总皂苷能显著协同增加三苯氧胺抗乳腺癌的作用,其机制可能与调控mTOR信号通路,逆转三苯氧胺耐药有关.
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溃结康对溃疡性结肠炎小鼠肠粘膜炎症因子及肠屏障功能相关蛋白的影响
目的:探讨溃结康对溃疡性结肠炎小鼠肠粘膜炎症因子及肠屏障功能的影响.方法:建立葡聚糖硫酸钠诱导小鼠实验性溃疡性结肠炎模型,实验分为正常对照组、模型组、柳氮磺胺吡啶组(0.45g/kg)、溃结康组(12.8g/kg、6.4g/kg、3.2g/kg).造模7天内,每天观察UC小鼠体质量及疾病活动指数变化,第8天实验结束时,采集结肠组织,量取各组小鼠结肠长度,HE染色观察小鼠结肠病理变化,酶联免疫法检测结肠组织IL-1β、TNF-α、IL-4、IL-10含量变化,实时荧光定量PCR检测结肠ITF、NF-κB、Occludin、Claudin 1 mRNA表达,Western-blot法检测结肠ITF、NF-κB、Occludin、Claudin 1蛋白表达.结果:模型组小鼠体质量较正常对照明显减轻,疾病活动指数显著升高,结肠长度明显缩短,结肠组织损伤明显,病理学评分显著增加,结肠IL-1β、TNF-α含量显著增加,IL-4、IL-10含量显著降低,NF-κBmRNA及蛋白表达均明显增加,而ITF、Occludin、Claudin 1 mRNA及蛋白表达均显著降低;溃结康组(12.8g/kg、6.4g/kg)及柳氮磺胺吡啶组(0.5g/kg)小鼠体质量及结肠长度较模型组增加,疾病活动指数降低,结肠病理损伤较模型组减轻,病理学评分降低,TNF-α含量显著降低,NF-κB mRNA及蛋白表达明显减少,而occludin mRNA水平明显增加;溃结康组(12.8g/kg)还可明显增加IL-4含量,上调ITF mRNA、蛋白及occludin蛋白表达,溃结康组(6.4g/kg)可降低IL-1β含量,增加IL-10含量,上调ITF mRNA水平.溃结康组(3.2g/kg)除可上调ITF mRNA水平外,对各指标均无明显影响.结论:溃结康可能通过降低结肠组织致炎因子含量、增加抑炎因子含量,同时促进肠粘膜修复,保护肠粘膜屏障功能而治疗溃疡性结肠炎.
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穿心莲内酯的协同抗菌作用及相关机制研究
目的:研究穿心莲内酯对左氧氟沙星抗铜绿假单胞菌的协同抗菌作用及相关机制研究.方法:用铜绿假单胞菌PAO1复制小鼠腹腔菌感染模型,考察穿心莲内酯对左氧氟沙星的协同抗菌作用;利用实时荧光定量PCR(Real-Time PCR)技术考察穿心莲内酯在l00μg/ml、1 μg/ml、0.01 μg/ml剂量下对铜绿假单胞菌PAO1群体感应系统(QS)系统中lasR、rhlR和pvdQ基因mR-NA在24h内表达量的影响,分析药物协同抗菌作用的机制;考察穿心莲内酯在100μg/ml、1μg/ml、0.01 μg/ml剂量下对PAO1胞内总蛋白和己糖激酶(HK)活性的影响作用.结果:体内抗感染保护性实验显示,左氧氟沙星和穿心莲内酯配比中剂量组(1:0.1587)和低剂量组(1:0.0373),感染动物24h ～ 72h死亡率明显降低,作用明显优于单用左氧氟沙星,提示其保护性作用明显加强;Real-Time PCR实验结果显示,穿心莲内酯不同剂量对PAO1 lasR、rhlR和pvdQ基因mRNA的表达均呈现相似的先抑制后加强再抑制的动态调控趋势;在各剂量穿心莲内酯影响下,PAO1胞内总蛋白量未见明显变化,但己糖激酶活力降低明显,各剂量组与空白组比较均存在明显差异.结论:穿心莲内酯对左氧氟沙星呈现体内的协同抗铜绿假单胞菌作用,而且对PAO1 QS系统相关基因存在规律性调控,同时这一调节作用可能与降低细菌胞内己糖激酶活性存在关联.
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虎杖与茵陈不同配比对急性痛风性关节炎大鼠模型的影响及部分机制研究
目的:痛风属于内科疾病的常见病、多发病,本文拟建立成熟的急性痛风性关节炎动物模型,考察虎杖与茵陈不同配比对其的影响,为临床合理用药提供实验依据.方法:建立急性痛风性关节炎大鼠模型60只,将大鼠分为空白组,模型组,阳性组(秋水仙碱1 mg/kg组),虎杖配茵陈1∶1(5g/kg)组、1∶2(7.5 g/kg)组、1∶3(10 g/kg)组,各组10只,以HE染色法观察组织病理学变化,采用绕线法检测各组大鼠右后足踝关节的足趾容积,测量治疗前后足趾容积变化;采用Elisa试剂盒检测大鼠血清TNF-α、IL-1β指标的含量变化,RT-PCR检测TLR2、TLR4基因的表达.结果:HE染色法显示,虎杖与茵陈不同配比对急性痛风性关节炎大鼠模型的炎症状况有所改善,其中1∶3配伍组在病理组织变化为明显,与模型组比较具有显著差异;足趾容积结果显示,虎杖与茵陈1∶3组优于其余各组;Elisa检测结果显示,模型组血清中TNF-α、IL-1β水平较高,虎杖与茵陈不同配比均能有效抑制炎性介质的释放,且1∶3组优于其余各组;RT-PCR检测结果显示,虎杖配伍茵陈为1∶3组的TLR2、TLR4基因的表达水平上较其余配伍用药组显著降低.结论:虎杖配伍茵陈为1∶3时能有效降低炎性介质水平,发挥治疗作用佳,其机制可能与抑制TLR2、TLR4基因的表达从而阻断信号转导通路,降低炎性因子释放,达到抗炎的作用.
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京大戟提取物pekincnin D通过PI3K/AKT/mTOR信号通路诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡
目的:通过观察京大戟提取物pekinenin D对肝癌SMMC-7721细胞体外生长的抑制作用,初步探讨其诱导凋亡的可能机制.方法:采用MTT法分析不同剂量的pekinenin D对体外培养SMMC-7721细胞增殖的影响;原位末端标记法(TUNEL)和AnnexinV/PI双染法检测对细胞凋亡的作用;应用流式细胞术分析对细胞周期的影响;采用RT-PCR检测pekinenin D对PI3K/AKT/mTOR mRNA的影响;应用生物膜干涉技术(BLI)分析pekinenin D与PI3K启动子是否存在相互作用.结果:MTT结果显示3.988ug/ml的pekinenin D可显著抑制SMMC-7721细胞的增殖,抑制率过半,并且呈剂量依赖性.AnnexinV/PI双染法结果显示,随着pekinenin D剂量的增加,SMMC-7721细胞的凋亡率明显增加,与对照组比较,差异具有明显统计学意义.TUNEL法检测结果表明,0.249、0.997、3.988 ug/ml的pekinenin D作用于SMMC-7721细胞后均可诱导肝癌细胞凋亡,凋亡指数(AI)随着药物浓度的升高明显增加.流式细胞术分析显示,0.249、0.997、3.988 ug/ml的pekinenin D均可使细胞被阻滞于S期,RT-PCR显示pekinenin D显著下调SMMC-7721细胞中PI3K,AKT,mTOR的mRNA表达量.采用BLI技术分析发现pekinenin D与PI3K的启动子存在一定亲和力.结论:pekinenin D具有抑制肝癌细胞增殖及诱导凋亡的作用,显著下调SMMC-7721细胞中PI3K,AKT,mTOR的mRNA表达,其机制可能是与PI3K的启动子相结合从而抑制PI3 K/AKT/mTOR信号通路有关.
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补肾强督治偻方可改善地塞米松对大鼠成骨细胞的骨破坏作用
目的:研究补肾强督治偻汤方对体外培养大鼠成骨细胞的作用.方法:以地塞米松为诱导剂,使用MTT法、对硝基苯磷酸盐法及茜素红染色法观察补肾强督治偻汤复方影响体外培养大鼠成骨细胞增殖、碱性磷酸酶表达及矿化结节形成的作用.结果:与地塞米松组相比,地塞米松+补肾强督治偻汤组(10-8 g/ml、2×10-8 g/ml、4×10-8 g/ml、8×10-8 g/ml)能促进大鼠成骨细胞的增殖表达,24h～48h时明显.与地塞米松组相比,地塞米松+补肾强督治偻汤组可以提高大鼠成骨细胞的碱性磷酸酶活性,第7天时,地塞米松+补肾强督治偻汤组(4×10-8 g/ml)有显著差异;第14天时,地塞米松+补肾强督治偻汤组(4×10-8 g/ml)有统计学意义.与地塞米松组相比,地塞米松+补肾强督治偻汤组(10-8 g/ml、2×10-8 g/ml、4×10-8 g/ml、8×10-8 g/ml)及补肾强督治偻汤组(10-8 g/ml、2×10-8 g/ml、4×10-8 g/ml、8×10-8 g/ml)均可以显著提高大鼠成骨细胞矿化结节形成的数量.结论:补肾强督治偻汤方有助于刺激体外培养大鼠成骨细胞增殖和分化成熟,可有效保护地塞米松对大鼠成骨细胞的骨破坏.
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雷公藤内酯酮下调SOX2表达抑制肺癌细胞恶性行为的研究
目的:研究雷公藤内酯酮能否抑制肺癌细胞中关键促癌因子SOX2的表达.方法:用不同剂量的雷公藤内酯酮(0.025 μg/ml、0.05μg/ml、0.1μg/ml和0.2μg/ml)作用于常规培养的SK-MES-1人肺癌细胞.用荧光定量PCR检测SK-MES-1细胞中SOX2 mRNA表达水平的变化.用Western-blot检测SK-MES-1细胞中SOX2蛋白表达水平的变化.用亚硫酸氢盐测序检测SK-MES-1细胞中SOX2基因启动子区DNA甲基化水平的变化.用CCK-8实验、Transwell实验和悬浮成球实验分别检测SK-MES-1细胞增殖能力、侵袭能力和肿瘤干细胞亚群自我更新能力的变化.结果:0.05μg/ml、0.1 μg/ml和0.2μg/ml的雷公藤内酯酮下调了SK-MES-1细胞中SOX2mRNA和SOX2蛋白的表达水平,升高了SOX2基因启动子区的DNA甲基化水平,抑制了SK-MES-1细胞的增殖能力、侵袭能力和肿瘤干细胞亚群的自我更新能力.结论:雷公藤内酯酮通过表观遗传调节机制下调了肺癌细胞中关键促癌因子SOX2的表达,从而抑制了肺癌细胞的恶性行为.
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木棉花提取物对H2O2诱导血管内皮细胞氧化应激损伤的保护作用
目的:探讨木棉花提取物对过氧化氢(H2O2)所诱导的人脐静脉血管内皮细胞(HUVECS)氧化应激损伤的保护作用及其机制.方法:体外培养HUVECS,采用MTT法检测木棉花提取物对正常HUVECS细胞毒性作用;给予不同浓度木棉花提取物(15,30,60 mg/L)预处理保护HUVECS 24 h后,采用0.5 mmol/L H2O2诱导损伤3h建立氧化应激损伤模型,MTT法检测细胞增殖活力,ELISA法测定细胞上清液中一氧化氮(NO)、乳酸脱氢酶(LDH)含量和谷胱甘肽-S转移酶(GST)、超氧化物歧化酶(SOD)的活性;同时检测细胞中丙二醛(MDA)的含量及过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性;采用流式细胞仪检测活性氧(ROS)和细胞内钙离子含量.结果:木棉花提取物对HUVECs细胞无毒性作用;与H2O2损伤模型组比较,15、30、60 mg/L剂量组的木棉花提取物能明显提高H2O2诱导损伤HUVECs的增殖活力,提高细胞上清液NO含量和SOD、GST活性,降低LDH漏出量;能增强细胞内CAT、GSH-Px的活性,降低MDA水平;同时能减少细胞内ROS表达,下调细胞内钙离子浓度.结论:木棉花提取物对H2O2诱导的内皮细胞氧化应激损伤具有保护作用,其机制可能与通过抑制氧化应激、抗过氧化损伤以及清除细胞内ROS,抑制细胞内钙离子介导的细胞凋亡有关.
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复方石韦胶囊治疗脾肾气虚型糖尿病肾病临床研究
目的:观察复方石韦胶囊治疗脾肾气虚型糖尿病肾病临床疗效.方法:纳入2016年1月～2017年3月在我院诊治的114例糖尿病肾病患者为受试对象,且均为脾肾气虚型.所有患者均进行降糖、降压等常规治疗,抽取一半患者另给予复方石韦胶囊口服,分析该中药对糖尿病肾病的影响.结果:治疗后,观察组肾功能指标24小时尿蛋白定量、血清BUN和Scr水平分别为(1.31±0.17g、9.62±1.01mmol/L、184.6±29.6 μmol/L),均明显低于对照组(1.75±0.19g、11.37±1.05mmol/L、226.5±31.7 μmol/L),炎症指标hs-CRP、MCP-1和TNF-α水平分别为(6.48±0.82mg/L、12.30±1.15ng/L、15.07±2.94ng/L),均明显低于对照组(8.29 ±0.89mg/L、15.67±1.29ng/L、18.62±3.04ng/L),血脂指标TC、TG、HDL-C和LDL-C水平分别为(4.61±0.20、2.26±0.15、1.19±0.15、3.12±0.25) mmol/L,均明显优于对照组(5.07±0.25、2.53±0.16、1.02±0.14、3.52±0.31) mmol/L.不良反应方面,组间差异无统计学意义.结论:复方石韦胶囊可配合常规治疗措施用于脾肾气虚型糖尿病肾病的治疗,其可改善患者肾功能、减轻炎症、并协助调节血脂紊乱,安全性较高.
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益安宁丸联合二丁酰环磷腺苷钙对慢性心力衰竭患者心肺功能及血清MMP-9、BNP水平的影响
目的:探究益安宁丸联合二丁酰环磷腺苷钙对慢性心力衰竭患者心肺功能及血清基质金属蛋白酶(MMP-9)、脑尿钠肽(BNP)水平的影响.方法:选取我院2013年11月～2016年11月收治的慢性心力衰竭患者80例为研究对象,按随机数表法将其分为观察组(n=40)和对照组(n=40),对照组采用二丁酰环磷腺苷钙治疗,观察组在对照组基础上联合益安宁丸治疗,比较两细患者心肺功能指标[左室收缩末内径(LVESD)、左室舒张末内径(LVEDD)、左室射血分数(LVEF)、一秒用力呼气容积(FEV1)、一秒用力呼气容积/用力肺活量(FEV1/FVC)]和血清MMP-9、BNP水平.结果:观察组疗效总有效率(92.5％)明显高于对照组(72.5％);治疗后两组LVESD、LVEDD、LVEF、FEV1％、FEV1/FVC均有明显改善,且观察组LVESD、LVEDD、LVEF、FEV1％、FEV1/FVC改善情况优于对照组;治疗后两组血清MMP-9、BNP水平均明显降低,且观察组血清MMP-9、BNP水平明显低于对照组.结论:益安宁丸联合二丁酰环磷腺苷钙治疗慢性心力衰竭疗效显著,能有效改善患者心肺功能,减轻临床症状.
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咳喘顺丸治疗慢性支气管炎患者的疗效观察及对血清及痰中炎症介质水平的影响
目的:探讨咳喘顺丸治疗慢性支气管炎患者的疗效观察及对血清及痰中炎症介质水平的影响.方法:回顾性收集2014年6月至2016年12月期间我院门诊及住院的90例慢性支气管炎急性发作患者的临床资料,中医诊断辨证属痰热郁肺证,按治疗方法不同分为对照组(常规西药治疗,n =45)和观察组(对照组基础上加服咳喘顺丸治疗,n=45).判定治疗疗效,治疗前后分别检测血清、痰标本中细胞炎症介质水平.结果:观察组临床总有效率为93.33％,明显高于对照组的77.78％.两组治疗前血清、痰中炎症介质水平比较无统计学意义,治疗后备项血清、痰中炎症介质水平均较治疗前降低,但观察组治疗后血清、痰中白介素4(IL-4)、白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子(TNF-α)C反应蛋白(CRP)水平降低幅度均明显高于对照组.观察组咳嗽、咳痰、喘息消失时间均较对照组短.两组患者在治疗观察期间均未见明显的不良反应.结论:常规治疗基础上加用咳喘顺丸可通过有效降低血清及痰中炎症介质水平来提高慢性支气管炎的临床治疗疗效,并有效促进患者症状缓解,安全可靠.
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止渴养阴胶囊联合诺和锐30对气阴两虚、脾肾不足型糖尿病患者脂糖代谢、D-二聚体及HOMA-IR水平的影响
目的:研究止渴养阴胶囊联合诺和锐30对气阴两虚、脾肾不足型糖尿病患者脂糖代谢、D-二聚体及胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)水平的影响.方法:我院自2012年3月～2016年12月收治的糖尿病患者,经相关纳入排除后,共筛选60例气阴两虚、脾肾不足型糖尿病患者,将其按就诊编号单双分组,分别为观察组(n=30)和对照组(n=30),两组患者均给予诺和锐30治疗,观察组则给予止渴养阴胶囊联合诺和锐30,观察并对比两组相关指标差异.结果:经治疗后,观察组总有效率为93.33％,明显高于对照组73.33％;经治疗后,两组患者TC、TG、LDL-C、FPG、HbA1c、FINS、HOMA-IR、sTM及D-二聚体水平下降,HDL-C、HOMA-IS水平增加,但观察组各指标水平均明显优于对照组.结论:止渴养阴胶囊联合诺和锐30对气阴两虚、脾肾不足型糖尿病患者脂糖代谢、D-二聚体及HOMA-IR水平有显著改善作用.
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麝香乌龙丸治疗类风湿关节炎患者的临床疗效
目的:探究麝香乌龙丸治疗类风湿关节炎患者的临床疗效.方法:选取2015年3月～ 2015年6月郑州大学附属南阳市中心医院收治的类风湿关节炎患者84例,随机平均分为两组,对照组应用常规方法治疗,治疗组使用麝香乌龙丸治疗,对比两组患者治疗前后的主要症状变化、红细胞沉降率(ESR)、C反应蛋白(CRP)和白介素-18(IL-18)及人CX3C趋化因子/fractalkine(FKN/CX3CL1)值.结果:经治疗后,治疗组患者总有效率明显高于对照组,经分别治疗后,两组患者的主要症状有所好转,两组ESR、CRP、IL-18、FKN/CX3CL1值均明显下降,且治疗组下降程度明显高于对照组.结论:麝香乌龙丸能有效缓解类风湿关节炎患者的主要症状,降低患者IL-18、FKN/CX3CL1、ESR、CRP含量,临床上值得应用推广.
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降糖通脉片联合胰岛素注射治疗对2型糖尿病患者凝血状态、微血管并发症的影响
目的:研究降糖通脉片联合胰岛素注射治疗对2型糖尿病患者凝血状态及微血管并发症的影响.方法:采取随机数字表法将2015年4月至2016年9月我院收治的84例2型糖尿病患者分为两组,各42例.对照组单纯予以胰岛素注射治疗,观察组采取降糖通脉片联合胰岛素注射治疗方案,比较2组治疗前后血糖浓度,球后动脉舒张末期小流速(EDV)、收缩期大流速(PSV)、血流阻力指数(RI),D二聚体(B-D)、纤维蛋白原(FIB)水平、血小板聚集率(MPAR),血浆内皮素水平、微血管并发症情况.结果:经过治疗,观察组FPG、2hPG、D-D、FIB、血浆内皮素水平、MPAR均显著低于对照组,且EDV、PSV、RI明显高于对照组;观察组微血管并发症总发生率为4.76％,显著低于对照组19.05％.结论:对2型糖尿病给予降糖通脉片联合胰岛素注射治疗,可有效改善血糖浓度与球后血管血流动力学指标,优化凝血状态,降低微血管并发症风险.
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PD1/PDL1信号通路在达明饮治疗增殖期糖尿病视网膜病变的机制研究
目的:观察达明饮治疗增殖期糖尿病视网膜病变的效果并阐述PD1/PDL1信号通路在治疗过程中发挥的作用.方法:设置对照组为单纯糖尿病患者,达明饮组及羟苯磺酸钙组为增殖型糖尿病视网膜病变患者,各组均为55人.达明饮组每日每次口服150ml达明饮制剂2次,羟苯磺酸钙组每日每次口服500mg羟苯磺酸钙3次,治疗时长均为3个月.基础实验,分离各组成员静脉血中单核细胞,用含10％该名供血者血清的1640培养基培养24h,用ELISA法检测细胞培养液中TNF-α、IL-6、IL-10的含量,q-PCR检测单核细胞PD-1、PD-L1 mRNA的表达情况.结果:临床实验,无论是视力的恢复还是眼底的改变,达明饮制剂的治疗效果(总有效率达到90％以上)都要较羟苯磺酸钙明显为好.基础实验,治疗一个月后,达明饮组PD1、PD-L1表达较治疗前有明显降低,但高于对照组(约2.6倍)、低于羟苯磺酸钙组(约2倍);达明饮组TNF-α (45 pg/ml)、IL-6(150 pg/ml)、IL-10(150.3 pg/ml)表达较治疗前有明显降低,但仍然高于对照组及羟苯磺酸钙组.治疗3个月后,达明饮组PD1、PD-L1表达较治疗前有明显降低,稍高于对照组(约1.1倍)但低于羟苯磺酸钙组.达明饮组TNF-α (10.6pg/ml)、IL-6(1 1.0 pg/ml)、IL-10(62.1 pg/ml)表达较治疗前有明显降低,TNF-α、IL-6稍高于对照组但低于羟苯磺酸钙组,IL-10高于对照组和羟苯磺酸钙组.结论:中药达明饮制剂临床上可以改善增殖期糖尿病视网膜患者的视力,可能是通过抑制PD1/PD-L1的表达和激活从而恢复单核细胞的功能,使单核细胞转变为以抑制炎症作用为主,抑制TNF-α、IL-6等验证因子的表达来实现的.
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芪冬颐心口服液联合磷酸肌酸钠对病毒性心肌炎的临床效果观察
目的:研究芪冬颐心口服液联合磷酸肌酸钠对小儿病毒性心肌炎的临床效果.方法:将80例中医辨证为气阴两虚型病毒性心肌炎患儿采用随机数表法分为对照组(40例)和观察组(40例),对照组给予磷酸肌酸钠治疗,观察组在对照组基础上加用芪冬颐心口服液,2周为1个疗程,治疗1个疗程.比较两组临床疗效及心电图改善情况,检测T淋巴细胞水平(CD4+、CD8+、CD4+/CD8+)、炎性反应指标[白介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、超敏C反应蛋白(hs-CRP)]、心肌酶谱[肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)]、心肌肌钙蛋白I(cTnI)水平.结果:观察组患者治疗总有效率90.00％,明显高于对照组70.00％,心电图总有效率95.00％,明显高于对照组72.50％.观察组治疗后CD4+、CD4 +/CD8+分别为(30.16±1.69、1.55±0.25)％,明显高于对照组(27.79±1.58、1.20±0.24)％,观察组CD8+ (22.06±1.30)％,低于对照组(24.49±1.19)％.观察组治疗后IL-6、TNF-α、hs-CRP分别为(32.34±2.64)pg/ml、(9.52±3.74) ng/ml、(1.34±0.55) mg/L,均明显低于对照组(43.71±3.24) pg/ml、(14.43±3.94) ng/ml、(2.57±0.80) mg/L.观察组治疗后CK、CK-MB、LDH、cTnI分别为(125.6±15.1) U/L、(19.15±5.26) U/L、(91.2±12.1)U/L、(0.15±0.06) μg/L,均明显低于对照组(147.7±19.3)U/L、(25.16±6.51)U/L、(125.5±13.5)U/L、(0.25±0.08) μg,/L.结论:芪冬颐心口服液联合磷酸肌酸钠治疗儿童病毒性心肌炎可明显改善心肌功能,其机制可能为调节免疫功能、减轻炎症程度.
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苍耳子散加味方口服对鼻咽癌放疗患者放射性鼻窦炎的预防作用
目的:探讨苍耳子散加味方口服对鼻咽癌放疗患者放射性鼻窦炎的预防作用.方法:选取2016年1月～2016年12月我院收治的鼻咽癌放疗患者90例,随机分为两组,对照组应用鼻腔冲洗,观察组联合应用苍耳子散加味方.结果:观察组患者的治疗总有效率显著优于对照组(95.56％比75.56％),同时放射性鼻窦炎发生情况显著低于对照组(24.44％比57.78％).治疗后,两组患者鼻内镜评分、鼻窦CT评分以及纤毛传输速率均得到一定改善,观察组显著优于对照组[(6.90±0.61)分比(5.11±0.42)分;(11.64±0.42)分比(9.60±0.34)分;(4.67±0.39)分比(3.62±0.35)分].治疗后两组鼻塞、鼻腔分泌物、头痛、鼻腔黏膜充血均得到一定改善,观察组显著优于对照组[(1.35±0.12)分比(2.10±0.11)分;(1.26±0.15)分比(2.20±0.12)分;(0.41±0.06)分比(0.80±0.09)分;(1.15±0.15)分比(2.12±0.13)分].结论:鼻咽癌放疗患者口服应用苍耳子散加味方有利于预防放射性鼻窦炎,改善患者鼻窦功能.
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通窍活血汤联合奥拉西坦治疗血管性痴呆的临床分析
目的:研究通窍活血汤联合奥拉西坦治疗血管性痴呆的临床疗效.方法:受试对象来自我院神经内科,共152位.将按随机数字表法分成2组,使用不同治疗方案,对比两组效果,即一组采用奥拉西坦治疗3个月(对照组),一组通窍活血汤联合奥拉西坦治疗3个月(观察组).结果:观察组总有效率达92.11％,明显高于对照组75.00％.治疗3个月,两组MMSE和HDS均明显升高,ALD明显下降,观察组改善程度高于对照组,两组血液流变学均明显下降,观察组下降程度高于对照组.脑血流动力学平均血流速度均明显升高,观察组升高程度大于对照组.结论:奥拉西坦治疗血管性痴呆基础上,联合通窍活血汤方案对治疗疗效更佳,对血液流变学、血流动力学等均有一定改善作用.
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黄连解毒汤有效活性成分靶向调控TLR4/NF-κB信号通路的作用机理研究
目的:阐明黄连解毒汤有效活性成分对炎症级联反应信号传导通路TLR4/NF-κB的阻断作用.方法:利用脂质体转染试剂Li-pofectin 2000⑧将含有hTLR4(human toll-like receptor4)基因和NF-κB-Luc报告基因的质粒转染入人胚肾细胞(HEK293细胞),加入不同浓度和配伍组成的药物刺激后再检测细胞荧光素酶表达水平,筛选出能够有效阻断TLR4/NF-κB信号传导通路的黄连解毒汤有效组分;进一步选择Caco-2细胞单层模型研究转运蛋白对黄连解毒汤有效活性成分的吸收和转运机理.结果:黄连解毒汤中小檗碱和黄芩苷活性单体能阻断TLR4介导的信号通路的传导,显著抑制NF-κB因子的生成;摄取实验中,黄芩苷和小檗碱配伍组能够显著提高小檗碱活性单体在Caco-2细胞中摄取量[(1.23±0.03) ng/μg],加入多药耐药相关蛋白(multidrug resistance-as-sociated protein 2,MRP2)抑制剂MK-571之后,小檗碱的摄取量有显著提高[(1.05 ±0.09) ng/μg],但是在加入P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)抑制剂维拉帕米后,虽然有黄芩苷存在,小檗碱的摄取量未见提高[(0.53 ±0.05) ng/μg].结论:通过TLR4受体介导NF-κB通路抑制剂筛选模型,筛选出黄连解毒汤内小檗碱能够有效阻断TLR4/NF-κB信号通路的传导,在小檗碱的跨膜转运的过程中不存在肠道转运蛋白P-gp的作用,但存在MRP2的外排作用,这可能是因为黄连解毒汤中配伍黄芩苷可抑制MRP2蛋白活性,从而使Caco-2细胞中小檗碱被外排的量减少,增加小檗碱的吸收量.
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牛黄降压胶囊对自发性高血压大鼠血压及心肾功能的影响
目的:研究牛黄降压胶囊的降压活性、降压特点,安全性及长期给药对自发性高血压大鼠(SHR)心肝肾的影响,并初步揭示降压作用机制.方法:32只雄性SHR随机分为模型对照组,牛黄降压胶囊组,牛黄降压丸组,牛黄降压片组;另设WKY鼠作为正常对照组.各组连续灌胃给药31天,牛黄降压胶囊、牛黄降压丸及牛黄降压片组给药剂量分别为0.32 g/kg,0.64g/kg和030g/kg体重,于不同时间点测定血压.治疗结束后,取正常对照组、模型组和牛黄降压胶囊组大鼠心脏、肾脏、脾脏及肝脏,进行病理学分析.测定各组动物肝肾功能ALT、AST、BUN和CREA指标;测定肾脏及血浆中肾素、血管紧张素Ⅱ含量.结果:0.32 g/kg牛黄降压胶囊和0.30g/kg牛黄降压片在给药第6天显示出明显降压效果;三种剂型均在给药21天后达到大降压效果,且于一天内不同时间点降压效果保持稳定;治疗结束48h后牛黄降压胶囊仍保持显著降压效果.治疗期间,牛黄降压胶囊对于肝肾功能未见显著性影响.病理学结果显示,牛黄降压胶囊对高血压引起的心肌肥厚和肾小球毛细血管的高灌注具有一定的防治作用.牛黄降压胶囊可显著降低高血压动物血浆中的肾素和血管紧张素Ⅱ水平.结论:牛黄降压胶囊降压疗效确切,降压平稳、长效,对高血压引起的心血管并发症有一定的防治作用.
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香砂六君子汤对萎缩性胃炎大鼠胃窦组织病理改变及白细胞介素1β、肿瘤坏死因子α、核因子κB p65基因蛋白表达的影响
目的:观察香砂六君子汤对脾胃虚弱型慢性萎缩性胃炎大鼠胃窦组织病理改变、白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量和核因子-κB p65(NF-κB p65)基因及蛋白表达水平的影响.方法:SPF级Wistar大鼠54只,雌雄备半,分为空白组(n=8)和模型组,采用综合法成功复制脾胃虚弱型慢性萎缩性胃炎动物模型,造模成功后将大鼠按随机数字表法分为模型组、香砂六君子汤(24、12、6 g/kg)剂量组和维酶素组(0.3g/kg),每组8只;其中空白组、模型组大鼠每日按10 ml/kg体积给予蒸馏水灌胃,其余各组每日分别给予24、12、6 g/kg香砂六君子汤药剂灌胃;阳性组每日给予0.3 g/kg维酶素灌胃,连续治疗120 d后观察各组大鼠一般生存状况、平均每日摄食量和平均每日体重增加量以及胃窦组织病理变化的基础上,采用ELISA法分别对各组大鼠胃黏膜组织IL-1 β、TNF-α含量进行检测,采用qPCR测定胃组织IL-1β、TNF-α和NF-κB p65基因,采用Western-blot法检测NF-κB p65蛋白表达.结果:与空白组比较,模型组大鼠一般生存状况较差,平均每日摄食量和平均每日体重增加量明显降低,HE染色镜下胃黏膜明显变薄,甚至可见胃黏膜全层萎缩,腺体排列稀疏而紊乱,可见显著肠化病理改变;胃组织促炎因子IL-1β、TNF-α mRNA和含量显著升高,NF-κB p65 mRNA和蛋白表达水平显著升高;与模型组比较,香砂六君子汤24g/kg剂量组大鼠一般生存状况、平均每日摄食量和平均每日体重增加量显著增加,胃窦黏膜组织萎缩变薄及肠化等病理变化显著改善,胃组织IL-1β、TNF-αmRNA和含量显著降低,NF-κB p65 mRNA和蛋白表达水平显著降低,各治疗组中以香砂六君子汤24g/kg剂量组作用显著.结论:香砂六君子汤可通过下调NF-κB p65基因和蛋白表达,抑制促炎因子IL-1β、TNF-α异常分泌而发挥保护胃黏膜的作用.
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六味地黄汤及其三个“一补一泻”药对干预绝经后骨质疏松大鼠模型的作用
目的:观察六味地黄汤及其三个“一补一泻”药对干预绝经后骨质疏松症模型大鼠的作用.方法:将42只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、六味地黄汤组、山茱萸-丹皮组、熟地-泽泻组、山药-茯苓组、阿仑膦酸钠(阳性药物)组共7个组.造模后第16d开始,除假手术组灌服蒸馏水外,其余各组按药物相应剂量灌胃给药.90天后,观察各组大鼠的体重周变化,并检测模型大鼠骨密度(BMD)值、血清雌二醇(E2)水平、血钙(Ca)及血磷(P)含量、碱性磷酸酶(ALP)及血清抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)水平.结果:与模型组比较,六味地黄汤(6.75g/kg)可显著提高绝经后骨质疏松症模型大鼠的BMD值,升高模型大鼠的E2水平,提高模型大鼠的血P、Ca含量,降低模型大鼠的TRAP、ALP水平;与六味地黄汤组比较,山茱萸-丹皮药对(1.89 g/kg)没有显著性差异,但实验数据略低于六味地黄汤;熟地-泽泻(2.97 g/kg)、山药-茯苓药对(1.89g/kg)有显著性差异.结论:六味地黄汤可升高血磷、血钙含量,降低血清ALP、TRAP水平,调节骨吸收和骨形成的骨代谢平衡,从而干预绝经后骨质疏松症.山茱萸-丹皮药对为该方干预绝经后骨质疏松症的主要药效组成部分之一,且在方中扮演君药对的角色.
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西黄丸逆转三阴性乳腺癌多药耐药的作用机制研究
目的:探索西黄丸对三阴乳腺癌耐药株MDA-MB-231/ADM多药耐药的逆转作用及其机制.方法:细胞实验:采用MTT法检测不同浓度西黄丸作用于MDA-MB-231、MDA-MB-231/ADM细胞48 h后肿瘤细胞的生长抑制率,以生长抑制率低于20％的药物浓度作为非细胞毒性浓度;MTT法检测非细胞毒性浓度西黄丸对MDA-MB-231/ADM细胞多药耐药的逆转作用,计算耐药倍数;采用Western Blot法检测西黄丸对MDA-MB-231/ADM细胞P-gp、P-Akt、AKt、PTEN蛋白的表达的影响,RT-PCR法检测西黄丸干预后的MDA-MB-231/ADM细胞耐药基因的表达.结果:西黄丸对MDA-MB-231及MDA-MB-231/ADM细胞均有抑制增殖作用,且呈剂量依赖性,并选取4mg/ml和6mg/ml作为西黄丸的非细胞毒性浓度;非细胞毒性浓度的西黄丸联合ADM作用于MDA-MB-231/ADM细胞后,能明显降低ADM对MDA-MB-231/ADM的IC50值,西黄丸在4mg/ml和6mg/ml浓度下,逆转倍数分别为1.82和2.19倍;Westem-blot结果显示,西黄丸能降低MDA-MB-231/ADM细胞中P-gp蛋白表达及PI3 K/Akt信号通路中的p-AKt蛋白表达,增高PTEN蛋白水平表达,总Akt蛋白表达量的变化不明显.RT-PCR结果显示,西黄丸能明显降低耐药基因P-gp及MRP1的表达.结论:西黄丸能有效逆转三阴乳腺癌多药耐药株MDA-MB-231/ADM的耐药性,从而增强耐药株对化疗药物ADM的敏感性,与化疗药物ADM联用后具有化疗增效作用,其机制可能是通过抑制PI3K/AKT信号通路发挥作用.
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基于Microtox技术的参麦注射液过敏反应检测及相关物质基础的研究
目的:利用基于发光细菌的Microtox测试技术,对国家药品不良反应监测中心数据库指引的高风险品种 参麦注射液的生物毒性实现定量化表征,初步探索导致其过敏反应的物质基础及临床意义,以期为参麦注射液的质量控制和不良反应风险预警提供新型、快速、灵敏的检测方法和技术平台.方法:(1)应用基于费氏弧菌CS234的Microtox测试体系对6个厂家共计15个批次的参麦注射液市售产品进行测试,得到相应的Microtox测试参数IC50.(2)采用高效液相色谱法对上述参麦注射液中三种代表性人参皂苷Re、Rg1及Rb1进行含量测定,分析IC50与三种人参皂苷及其总含量的相关性.(3)采用肥大细胞脱颗粒模型观察上述参麦注射液和人参皂苷Re对HMC-1细胞组胺及β-氨基己糖苷酶释放的影响.结果:(1)除A公司的参麦注射液无法计算IC50外(高浓度受试样品的抑制率未达到50％),其余厂家的IC50从46.7％至72.3％不等,且存在显著性差异.(2)各厂家参麦注射液中人参皂苷Re及三种人参皂苷的总含量分别在0.07 mg/ml～0.14 mg/ml以及0.34 mg/ml～0.60 mg/ml范围内,非参数检验显示厂家间含量均存在显著性差异.经Pearson相关性分析显示,各厂家间IC50和人参皂苷Re含量之间存在显著的正相关关系(P=0.001),相关系数为0.823.(3)人参皂苷Re终浓度为0.10 mg/ml时,能显著增加HMC-1细胞上清液中组胺的含量.结论:本测试体系可用IC50定量表征参麦注射液的生物毒性,人参皂苷Re为显著影响IC50的物质之一,且Re在一定剂量下(终浓度0.10 mg/ml)对HMC-1细胞有显著的促组胺释放作用,提示参麦注射液中人参皂苷Re含量控制的必要性.基于费氏弧菌CS234的Microtox测试体系有望成为参麦注射液质量控制及不良反应风险预警的新型检测技术平台,以期终为临床安全用药提供参考和保障.
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天麻钩藤饮含药血清对MPP+诱导PC12细胞损伤保护作用的研究
目的:观察天麻钩藤饮含药血清对1-甲基-4-苯基-吡啶离子(1-methyl-4-phenyl pyridinium,MPP+)诱导的PC12细胞凋亡的影响,并且探讨其作用机制.方法:将48只大鼠随机分为空白组、美多巴组、天麻钩藤饮2.85、5.7、11.4、22.8g/kg剂量组,天麻钩藤饮按照相应剂量灌胃,空白组灌胃等体积生理盐水,美多巴片(0.05g/kg)溶于生理盐水灌胃.采血制备含药和空白血清,常规培养PC12细胞,空白组和模型组给予空白血清,其他5组给予10％含药血清,孵育30min后,再加500μmol/L MPP‘共孵育48h后收集细胞,采用MTT法检测细胞存活率,LDH释放检测细胞毒性,Annexin V/PI染色流式细胞术检测PC12细胞凋亡,Westernblot检测Bax、Bcl-2、Cleaved-caspase-3蛋白表达水平,分光光度法检测Caspase-3及Caspase-9活性.结果:模型组较空白组细胞活力明显降低,LDH释放率增加,诱导细胞发生凋亡,同时Bax、Cleaved-caspase-3蛋白表达水平增加,而Bcl-2蛋白表达降低,Caspase-3及Caspase-9活性明显增加.与模型组比较,10％的天麻钩藤饮5.7、11.4、22.8g/kg含药血清组细胞活力显著增加,LDH释放率减少,凋亡细胞量减少,Bax、Cleaved-caspase-3蛋白表达水平降低,而Bcl-2蛋白表达升高,Caspase-3及Caspase-9活性降低;而10％的天麻钩藤饮2.85g/kg含药血清组无明显变化.结论:天麻钩藤饮含药血清对MPP+诱导的PC12细胞的凋亡具有保护作用,其机制可能与调节线粒体功能密切相关.
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平胃散对湿阻中焦证大鼠肝脏水通道蛋白SLC12家族影响的研究
目的:观察平胃散对湿阻中焦证大鼠肝脏水通道蛋白SLC12家族的影响,探讨平胃散揭示湿阻中焦证可能存在的作用机制.方法:将大鼠分成正常组、模型组、自然恢复组、平胃散6.0、3.0、1.5g/kg剂量组,连续灌胃3天.利用酶联免疫法分别检测各组大鼠肝脏水通道蛋白KCC1、KCC3、KCC4、NKCC1含量.结果:与正常组比较,模型组胃肠动力明显障碍,肠道吸收明显降低,Na+-K+-ATP酶活力显著降低,肝脏组织KCC1、KCC3、NKCC1含量明显上升,KCC4含量明显下降.与模型组比较,平胃散组胃肠动力肠道吸收明显改善,Na+-K+-ATP酶活力显著增强,以平胃散1.5 g,/kg剂量组尤为明显,KCC1含量下降,KCC3和NKCC1含量明显上升.结论:平胃散能够减轻湿阻中焦证大鼠症状,可能与平胃散降低胃残留,促进肠道吸收功能,改善Na+-K+-ATP酶活性,抑制KCC1,激活KCC3和NKCC1的表达有关.
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阳和平喘颗粒对气道平滑肌细胞增殖的影响
目的:研究阳和平喘颗粒在体外对支气管哮喘大鼠气道平滑肌增殖及PI3K/PKB通路相关因子的影响.方法:将阳和平喘颗粒含药血清及PI3K/PKB通路阻断剂分别组合作用于体外培养的支气管哮喘大鼠气道平滑肌细胞,噻唑蓝比色法(MTT)检测大鼠气道平滑肌细胞的增值情况,实时聚合酶链反应(Realtime-PCR)检测阳和平喘颗粒对磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、蛋白激酶B(PKB)、肾上腺素受体(AR)、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)、增殖细胞核抗原(PCNA) mRNA表达水平的影响,蛋白印迹法(Western-Blot)检测阳和平喘颗粒对PI3K、PKB、AR、eNOS、PCNA蛋白表达水平的影响,酶联免疫吸附测定(ELISA)阳和平喘颗粒对磷脂酰肌醇二磷酸(PIP2)和磷脂酰肌醇三磷酸(PIP3)表达水平的影响.结果:50％阳和平喘颗粒(18.45g/kg)含药血清对支气管哮喘大鼠气道平滑肌细胞的增殖具有明显的抑制作用,阳和平喘颗粒含药血清及PI3 K/PKB通路阻断剂能显著抑制支气管哮喘大鼠细胞内PI3K、PKB、PIP2、PIP3和PCNA的表达,促进eNOS和AR的生成.结论:阳和平喘颗粒具有在体外通过PI3K/PKB通路治疗支气管哮喘大鼠气道重塑的作用.
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柴胡疏肝汤对炎症诱导的肠易激综合征大鼠HPA轴亢进及内脏高敏的影响
目的:观察柴胡疏肝汤对炎症诱导的肠易激综合征(irritable bowel syndrome,IBS)大鼠下丘脑-垂体-肾上腺皮质(hypothalamic-pit uitary-adrenal,HPA)轴亢进和内脏高敏的影响.方法:48只Wistar大鼠随机分为对照组,模型组,匹维溴铵组,柴胡疏肝汤低剂量组、中剂量组和高剂量组,采用乙酸灌肠法造模.造模后第7周,予匹维溴铵和柴胡疏肝汤治疗2周,检测血清IL-1β、IL-6水平,结肠5-HT含量及促肾上腺皮质激素释放激素受体1和2(corticotropin releasing hormone receptor 1 and 2,CRH-R1和CRH-R2) mRNA的表达,地塞米松/促肾上腺皮质激素释放激素测试各阶段的皮质酮(Corticosterone,CORT)水平,评价内脏高敏情况.结果:肠易激综合征大鼠模型出现IL-6、IL-1β水平升高,地塞米松/促肾上腺皮质激素释放激素测试不同时间段CORT水平升高,结肠5-HT含量增加,CRHR1 mRNA的表达上调,回缩反射中压力阈值降低,而避水应激实验中粪粒数明显增加.柴胡疏肝汤(5、10g/kg)下调肠易激综合征大鼠模型IL-6、IL-1β水平,降低地塞米松/促肾上腺皮质激素释放激素测试不同时间段CORT水平,减少结肠5-HT含量,抑制结肠CRH-R1 mRNA的表达,正常化回缩反射中压力阈值和减少避水应激实验中粪粒数.结论:柴胡疏肝汤通过下调IL-6、IL-1β水平,纠正失调的HPA轴,减少结肠5-HT含量,抑制结肠CRHR1 mRNA的表达,降低大鼠肠道敏感性而治疗肠易激综合征.
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基于“脑肠相通”理论的脑缺血与肠道菌群的关系探讨
本文从中医“脑肠相通”的理论出发,以现代医学中的脑-肠肽、脑-肠轴两方面佐证,并通过胃肠道损伤作为中介,对脑缺血与肠道菌群关系进行归纳整理,以期从中寻找出可以治疗脑缺血的新方向,为将来脑缺血的治疗方案研究提供有效的理论参考.
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多穗石柯化学成分及药理作用研究进展
多穗石柯为Lithocarpus Polystachys (Wall.) Rehd壳斗科石柯属植物,以根、叶及果实入药,含黄酮类、三萜类、多酚类化合物等化学成分.味甘性平,功效为清热解毒、化痰、祛风、降压,主要用于湿热泻痢、肺热咳嗽、痈疽疮疡、皮肤瘙痒等.现代研究表明,多穗石柯具有抗氧化、降血糖、降血脂、抗菌、抗炎、抗过敏等药理作用.但总体上讲,目前对多稳石柯的研究不多.为进一步研究和开发多稳石柯,本文结合国内外研究进展对多穗石柯的化学成分及药理作用方面进行综述.
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口腔溃疡动物模型制备规范(草案)
口腔溃疡是一种常见口腔黏膜疾病,可见口腔内黏膜表皮细胞发生上皮破坏脱落,主要表现为口腔黏膜出现圆形或椭圆形的溃疡,溃疡表浅,呈淡黄色或白色,中央凹陷,边缘整齐,周围绕以红晕,可单发或多发,可发生于口腔黏膜的任何部位.现有的口腔溃疡模型为病理性模型,以西医指标为主.基于对口腔溃疡中西医临床病症特点分析及对现有动物模型大量实验研究,形成如下口腔溃疡动物模型制备规范(草案).
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口腔溃疡模型制备规范(草案)起草说明
1 造模动物目前可应用于造口腔溃疡模型的动物有家兔、大鼠、小鼠、豚鼠、金黄地鼠等.金黄地鼠特殊的口腔结构、豚鼠口腔黏膜与人类相近,常选用;小鼠、大鼠则有种纯、量大、价廉等优点,也常用.一般用成年动物,雌雄各半.2 饲养环境动物饲养环境应符合GB 14925-2010实验动物环境与设施、《实验动物管理条例》、《实验动物国家标准》、《关于善待实验动物的指导性意见》、《中华人民共和国动物保护法》等要求,符合相应标准及等级动物饲养环境的要求.
关键词： -
基于临床中西医病症特点的中医药动物模型评价新方法
随着中医药研究的需要,各种类型的动物模型被广泛地用来研究人类疾病,动物模型已在中医药领域发挥了不可替代的作用,尤其是对疾病发病机制解析、预防、药物筛选与治疗评价、诊断标志物的发现等做出了巨大的贡献,是生物医学乃至整个生命科学研究的基础和重要组成部分,动物模型建立是否成功、有哪些指标体系等缺少必要的评价方法,这是一个极具价值的关键性问题.本文全面梳理了动物模型的研究以及动物模型评价现状,基于临床中西医病症特点,并将动物模型的表征指标进行量化分级,由此提出了评价动物模型的新方法,以期使动物模型的评价方法更趋于标准化、客观化、规范化,促进中医药研究事业的跨越式发展.
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基于中西医临床病症特点变应性鼻炎动物模型分析
目的:基于变应性鼻炎临床病症特点,对目前现有的变应性鼻炎模型特点进行归纳分析.方法:通过整理分析中西医对变应性鼻炎的诊断标准及临床表现,总结变应性鼻炎动物模型的特点及造模方法,根据临床诊断标准及症状特点,对现有动物模型与临床症状的吻合程度进行探讨,明确其优缺点及应用前景.结果:变应性鼻炎动物模型造模方法多样,在一定程度虽反映了变应性鼻炎临床病症特点,但缺少能反映变应性鼻炎中西医特点的病症结合动物模型,无法充分体现变应性鼻炎中西医病因的动物模型.结论:探索能进一步反应变应性鼻炎临床病症特点,体现变应性鼻炎中西医病因,复制出能更加吻合临床病症特点的动物模型是今后的发展方向,为促进变应性鼻炎的防治提供可靠的模型.
| 年 | 期数 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 |
| 2017 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2011 | 01 02 03 04 06 |
| 2010 | 02 03 04 05 06 |
| 2009 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2008 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2007 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2006 | 01 02 03 05 06 |
| 2005 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2004 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2003 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2002 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2001 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2000 | 01 02 03 04 05 06 |
| 1999 | 03 04 05 06 |
