中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae 중국실험방제학잡지
- 主管单位： 国家中医药管理局
- 主办单位： 中国中医科学院中药研究所 中华中医药学会
- 影响因子： 1.62
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 1005-9903
- 国内刊号： 11-3495/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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制何首乌中大黄素对ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化模型中JAK2/STAT3通路的影响
目的:探讨制何首乌中大黄素抗动脉粥样硬化的作用机制并对两面神激酶2(JAK2)/信号转导及转录激活因子3(STAT3)信号通路及相关因子细胞因子信号传导抑制蛋白3(SOCS3)的影响.方法:雄性ApoE基因敲除(ApoE-/-)小鼠80只,随机均分为8组,分别为大黄素高、中、低剂量组、模型组、阳性药组、阴性组、正常组和大黄素中剂量+ AG490组(DA组).除正常组,余7组用高脂饲料饲养,并皮下注射脂多糖,9周后停注.第10周开始小鼠给药,6周后处死.酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定JAK2,p-JAK2,STAT3,p-STAT3及SOCS3的含量,苏木素-伊红(HE)染色检测胸主动脉病理变化,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)法检测肝脏JAK2,STAT3,SOCS3 mRNA的表达.结果:与模型组比较,大黄素高、中剂量组SOCS3含量显著增加,p-JAK2,p-STAT3含量显著减少(P＜0.01),低剂量组SOCS3含量明显增加(P＜0.05);JAK2,STAT3无变化;各指标DA组效果不如中剂量组且两组间存在明显差异(P＜0.01),但STAT3相对表达量中剂量组与DA组有差异(P＜0.05);各组SOCS3 mRNA表达明显增加,JAK2,STAT3 mRNA表达明显降低(P ＜0.05,P＜0.01).HE染色切片镜下观察,大黄素高、中剂量能有效延缓动脉粥样硬化斑块形成,而低剂量的效果不明显.结论:大黄素能明显作用于ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化病变的发生发展,该作用机制可能与其抑制JAK2/STAT3信号通路有关.
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莪术醇联合5-氟尿嘧啶对大肠癌细胞增殖和凋亡的影响
目的:探讨莪术醇(curcumol)联合5-氟尿嘧啶(5-Fu)对大肠癌LoVo细胞增殖和凋亡作用的影响,以及药物处理后,LoVo细胞中增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)和凋亡相关蛋白B淋巴细胞瘤-2(B cell lymphoma-2,Bcl-2)表达量的变化情况.方法:莪术醇(50 mg·L-1)单独或联合5-Fu(2 mg·L-1)作用大肠癌LoVo细胞,用噻唑蓝(MTT)比色法检测各组药物对细胞增殖的抑制作用,采用流式细胞术分析各组对细胞凋亡作用的影响,应用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组细胞中,增殖和凋亡相关蛋白PCNA,Bcl-2蛋白表达的变化情况.结果:与空白组比较,莪术醇,5-Fu单独给药以及联合用药,均可以有效抑制大肠癌LoVo细胞的增殖,促进细胞凋亡(P＜0.05),同时可以降低PCNA,Bcl-2蛋白的表达(P＜0.05);与单独给药组比较,联合用药后,凋亡的促进作用更为明显(P＜0.05).与空白组比较,各药物组可以更有效的抑制PCNA,Bcl-2蛋白的表达(P＜0.05).结论:莪术醇联合5-氟尿嘧啶能有效抑制人大肠癌LoVo细胞的增殖和凋亡,与单独用药组比较,联合用药可以使癌细胞的敏感性增强,极大程度的促进人大肠癌LoVo细胞凋亡,且这些机制可能与下调PCNA,Bcl-2蛋白表达有关.
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石斛碱在小鼠体内的组织分布
目的:通过UPLC-MS检测小鼠主要脏器中石斛碱的含量,探讨石斛碱在小鼠体内的分布特征.方法:建立组织样品中石斛碱的分析方法,小鼠灌胃给予石斛碱(剂量60 mg· kg-1),分别于0,30,60,120 min收集小鼠心、肝、脾、肺、肾、脑和肠组织,样品处理后采用Q-Exactive型四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱系统分析,Hypersil Gold C18色谱柱(2.1 mm×150 mm,1.9 μm),流动相0.1％甲酸水溶液-乙腈梯度洗脱,流速0.3 mL·min-1,可加热电喷雾离子源(HESI)正离子模式检测石斛碱含量,选取盐酸伪麻黄碱为内标.结果:小鼠各组织样品中内源性物质对石斛碱含量测定无干扰,方法学考察符合要求.石斛碱在小鼠心、肝、脾、肺、肾、脑和肠组织中均有分布,30 min均已达峰值,此时肝脏样本中石斛碱质量浓度高(1 241.69 ±78.64) μg·L-1.60 min时各组织样本中石斛碱含量已显著降低,此时空肠组织样本中石斛碱质量浓度高(166.15±10.80) μg·L-1.120 min时各组织样本中石斛碱含量进一步降低,此时以回肠组织样本中石斛碱质量浓度高(118.25±8.51)μg·L-1.结论:石斛碱在小鼠体内的组织分布较为广泛,其中肠组织和肝脏中药物浓度较高.在脑组织中的分布情况提示石斛碱能够透过血脑屏障,为阐述其具有神经药理作用提供了实验依据.
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基于氧化应激和NLRP3炎性小体探讨锦鹤养心方总黄酮抗心肌缺血的作用机制
目的:研究锦鹤养心方总黄酮提取物对盐酸异丙肾上腺素(ISO)诱导的小鼠心肌缺血损伤保护作用,并初步探讨其作用机制.方法:108只SPF级KM小鼠随机分为正常组,模型组,阳性药组(盐酸普萘洛尔,33 mg·kg-1),总黄酮提取物高、中、低剂量组(4.4,2.2,1.1 g·kg-1),给药组连续给药7d,各组于第5天开始,除正常组外,其余各组小鼠均于给药1h后皮下注射IS0 20 mg· kg-1,正常组小鼠皮下注射等剂量生理盐水,连续注射3d,制备心肌缺血模型.造模24 h后取材,记录各组小鼠第1次注射ISO前及后1次注射24 h后心电图;测定各组小鼠的心脏指数;用2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色法测定心肌缺血面积;试剂盒检测血清中肌酸激酶同工酶(CK-MB),心肌钙蛋白Ⅰ(cTnⅠ),乳酸脱氢酶(LDH),丙氨酸氨基转移酶(ALT),天门冬氨酸氨基转移酶(AST),超氧化物歧化酶(SOD),丙二醛(MDA),白细胞介素-6(IL-6),肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白细胞介素-1β(IL-1β)的含量;苏木素-伊红(HE)染色观察心肌组织病理形态学变化;蛋白免疫印迹法(Western blot)测定小鼠心肌组织核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3),凋亡相关斑点样蛋白(ASC)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)蛋白的表达.结果:与正常组比较,模型组小鼠Ⅱ导联心电图ST段位移增加(P＜0.01),血清CK-MB,cTnⅠ,ALT,AST,LDH,MDA,IL-6,TNF-α,IL-1β含量及心脏指数水平显著升高,SOD的含量显著降低(P＜0.01),心肌缺血面积显著增加(P＜0.01),心肌组织损伤明显,NLRP3,ASC,Caspase-1蛋白表达显著升高(P＜0.01);与模型组比较,锦鹤养心方总黄酮各剂量组小鼠Ⅱ导联心电图ST段位移降低(P ＜0.05,P＜0.01),血清CK-MB,cTnⅠ,ALT,AST,LDH,MDA,IL-6,TNF-α,IL-1β含量及心脏指数水平降低,SOD的含量升高(P ＜0.05,P＜0.01),心肌缺血面积降低(P ＜0.05,P＜0.01),心肌缺血损伤明显减轻,NLRP3,ASC,Caspase-1蛋白表达降低(P ＜0.05,P＜0.01).结论:锦鹤养心方总黄酮对心肌缺血损伤具有保护作用,且呈现一定的量效关系,该作用可能与提高机体抗氧化活性,减少氧化应激损伤,抑制NLRP3炎性小体活化有关.
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辣椒碱对肝癌SMMC-7721细胞迁移和侵袭的影响及机制
目的:观察辣椒碱(capsaicin)对肝癌SMMC-7721细胞迁移和侵袭的影响及可能的分子机制.方法:设立不同浓度辣椒碱组以及空白组,采用细胞计数试剂盒-8法(CCK-8)检测辣椒碱(0,25,50,75,100,150,200,250 μmol·L-1)处理肝癌SMMC-7721细胞24 h后的细胞活性;穿透小室(transwell)检测辣椒碱(0,50,75,100 μmol· L-1)的肝癌SMMC-7721细胞迁移和侵袭能力;蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测辣椒碱(0,50,75,100 μmol·L-1)处理肝癌SMMC-7721细胞24 h后,对细胞中的E-钙黏蛋白(E-cadherin),波形蛋白(Vimentin),基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)和(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)蛋白表达水平的影响.结果:与空白组比较,辣椒碱(25,50,75,100 μmol· L-1)作用24 h后均对细胞存活率未产生明显影响,从150 μmol·L-1开始,随着辣椒碱浓度逐渐升高,细胞存活率逐渐下降(P＜0.01),且呈剂量依赖效应;与空白组比较,辣椒碱(50,75,100μmol·L-1)干预能显著抑制肝癌SMMC-7721细胞迁移和侵袭,且呈浓度依赖效应(P＜0.01);与空白组比较,辣椒碱(50,75,100 μmo1·L-1)干预能明显上调肝癌SMMC-7721细胞中E-cadherin蛋白表达水平(P＜0.01),下调Vimentin,MMP-2,MMP-9蛋白的表达水平(P＜0.01).结论:辣椒碱干预对肝癌SMMC-7721细胞迁移和侵袭具有抑制作用,可能与其上调肝癌SMMC-7721细胞中E-cadherin蛋白的表达,下调肝癌SMMC-7721细胞中Vimentin,MMP-2和MMP-9蛋白的表达有关.
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石斛合剂对糖尿病肾病小鼠TNF-α及IL-6表达的影响
目的:观察石斛合剂对db/db糖尿病小鼠肾组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白细胞介素-6(IL-6)表达水平的影响.方法:选用11 ～12周龄雄性db/db小鼠,按空腹血糖及体质量随机分成模型组、格列吡嗪治疗组、石斛合剂低剂量组和高剂量组,db/m小鼠为正常组.连续灌胃给药8周.检测小鼠体质量及24 h尿蛋白定量;苏木素-伊红(HE)染色观察肾组织病理形态改变;通过酶联免疫吸附测定(ELISA)检测小鼠血清及肾组织TNF-α,IL-6的含量;分别应用免疫组织化学染色和蛋白免疫印迹法(Western bolt)检测肾组织中TNF-α,IL-6蛋白的表达.结果:石斛合剂能明显降低db/db小鼠的体质量(P＜0.05,P＜0.01)及24 h尿蛋白定量(P ＜0.05,P＜0.01).HE染色结果显示模型组小鼠肾小球体积增大,系膜基质增多,系膜区增宽,肾小管上皮细胞空泡变性;与模型组相比,各治疗组肾小球基底膜变薄,系膜细胞增生情况减轻,细胞外基质减少,肾小管结构基本恢复正常.免疫组织化学,ELISA和Western bolt结果表明,与正常组比较,模型组小鼠TNF-α,IL-6的表达均显著增加(P＜0.01);与模型组比较,各治疗组TNF-α,IL-6的表达均明显减少(P＜0.05,P＜0.01),但仍高于正常组.结论:石斛合剂可能通过下调TNF-α及IL-6的表达减轻肾组织内的炎症反应,改善db/db小鼠的肾脏损害,从而延缓DN的进展.
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参苓白术散协同奥沙利铂对人结肠癌细胞增殖及凋亡的作用
目的:探讨参苓白术散(Shenling Baizhu San,SBS)对人结肠癌HCT116细胞增殖及凋亡的影响.方法:以化疗药奥沙利铂(oxaliplatin,L-OHP)为阳性药,采用噻唑蓝[3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2H-tetrazolium bromide,MTT]比色法检测SBS联用L-OHP前后对HCT116细胞生长的抑制情况,碘化丙啶(PI)染色分析细胞周期分布,Annexin VFITC试剂盒检测HCT116细胞凋亡,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测其对细胞内B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白的影响.结果:①MTT比色法结果显示,分别取0.002,0.004,0.008,0.016,0.032,0.064,0.128 g·L-1 L-OHP联用5％ SBS药物血清作用于HCT116细胞48 h,与联用前各组比较,联用后各组细胞抑制率均明显上升(P＜0.05),其中以0.064 g·L-1L-OHP联用5％ SBS高,达(94.95±0.90)％;②周期结果显示,与联用前L-OHP (0.002,0.004,0.008 g·L-1)组比较,分别联用5％SBS后,G2/M期HCT116细胞分布增多,均由G0/G1,S和G2/M期转至G2/M期,以L-OHP 0.008 g·L-1联用5％ SBS组为明显(P＜0.05);③凋亡结果显示,与联用前L-OHP(0.002,0.004,0.008 g·L-1)组比较,分别联用5％ SBS后均能明显增加HCT116细胞凋亡率(P＜0.05),以高剂量联用组凋亡率高,为(24.97±2.45)％;④蛋白检测显示,与5％空白血清组比较,L-OHP(0.002,0.004,0.008 g·L-1)分别联用5％ SBS后,Bax蛋白表达量明显上调(P＜0.05),以L-OHP 0.008 g·L-1联用5％ SBS组高.分别与空白血清组、空白组比较,各用药组Bcl-2蛋白表达量均明显降低(P＜0.05),其中以L-OHP 0.008 g·L-1联用5％ SBS组低.结论:参苓白术散能协同L-OHP抑制人结肠癌HCT116细胞增殖及凋亡,其作用机制可能是通过促进HCT116细胞增殖、诱导细胞凋亡、改变细胞周期分布、上调Bax蛋白表达及下调Bcl-2蛋白表达来实现的.
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壮骨伸筋胶囊对去卵巢大鼠骨质疏松症的治疗及其作用机制
目的:研究壮骨伸筋胶囊(Zhuanggu Shenjin capsule,ZGSJC)对去卵巢骨质疏松大鼠的治疗作用,探讨ZGSJC治疗绝经后骨质疏松的机制.方法:将去卵巢大鼠随即分为模型组,阳性药结合雌激素组,ZGSJC高、中、低剂量组(生药5.42,2.71,1.36 g·kg-1),另设假手术组,每组12只.实验结束,取右侧胫骨制作不脱钙骨切片,用于骨形态计量学考察;左侧胫骨提取蛋白后用蛋白免疫印迹法测定Ⅰ型胶原蛋白表达.结果:与假手术比,模型组大鼠骨小梁体积百分率(TBV)显著降低(P＜0.01),骨小梁吸收表面百分率(TRS),骨小梁形成表面百分率(TFS),骨小梁矿化率(MAR),类骨质平均宽度(OSw),骨皮质矿化率(mAR)显著增高(P＜0.01),Ⅰ型胶原蛋白表达显著降低(P＜0.01);与模型组比,ZGSJC能够显著抑制TBV％的降低(P＜0.01),抑制TRS,TFS,MAR,mAR的升高(P＜0.01,P＜0.05),提高Ⅰ型胶原蛋白表达(P＜0.01),对OSW则无明显作用.结论:壮骨伸筋胶囊对卵巢切除所致大鼠骨质疏松具有一定的治疗作用,具体体现在调节去卵巢所致的骨代谢高转换状态,能提高Ⅰ型胶原蛋白表达含量.
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LC-MS/MS同时测定鸡矢藤提取物中4个主要有效成分的含量
目的:建立运用液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)同时测定鸡矢藤提取物中4个主要有效成分(鸡矢藤苷酸、鸡矢藤苷、鸡矢藤苷酸甲酯、车叶草苷)含量的分析方法.方法:采用Venusil MP C18色谱柱(2.10 mm×50 mm,5μm),以甲醇(A)-水(B)为流动相进行梯度洗脱(0 ～0.3 min,10％A;0.3 ～0.8 min,10％ ～ 95％A;0.8 ～3.0 min,95％A;3.0～3.2 min,95％ ～10％A;3.2～4.5 min,10％A),流速0.35 mL· min-1,柱温为室温,进样量10 μL.采用电喷雾离子源(ESI),正离子模式下多反应监测扫描(MRM),通过优化三重四级杆的质谱仪参数以及4个化合物相关的质谱参数,进行检测和定量分析.结果:通过仪器精密度,线性范围,重复性,稳定性,加样回收率等方法学验证,发现其结果均符合定量分析的相关标准.鸡矢藤苷酸、鸡矢藤苷、鸡矢藤苷酸甲酯、车叶草苷在测定浓度范围内均具有良好的线性关系(r≥0.994 7);平均加样回收率(n=6)在90.8％ ～ 112.1％,RSD均≤5.1％.结论:该方法简便、快速、准确、可靠,可用于鸡矢藤提取物中4种主要有效成分的含量测定.
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基于复合质量常数的北柴胡饮片等级评价
目的:建立北柴胡饮片等级评价标准,为根及根茎类规则形状中药饮片的等级标准构建提供理论依据.方法:复合质量常数是一种基于传统又优于传统的综合性中药饮片等级评价方法,该方法基于质量常数,通过考察中药饮片的外观性状、挥发油、浸出物、柴胡皂苷a和d含量等指标,将北柴胡饮片的内在指标和外观性状有效结合,构建复合质量常数,完善并建立北柴胡饮片等级标准.结果:该研究收集20批不同质量的北柴胡饮片,以检验合格的19批北柴胡饮片为研究对象,研究结果显示其复合质量常数为1.616 ～8.414,可以将北柴胡饮片划分成3个等级,一级北柴胡饮片复合质量常数≥7.871,二级北柴胡饮片复合质量常数＜ 7.871且≥5.602,三级北柴胡饮片复合质量常数＜5.602.结论:复合质量常数能够科学、客观、合理地划分饮片的等级,解决了相对质量常数评价方法存在的诸多问题,为多指标成分中药饮片等级划分提供了新方法、新模式,为进一步建立和健全北柴胡饮片综合质量评价体系提供有益参考.
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UPLC-Q-TOF-MS/MS研究胆木药材水提物的化学成分
目的:采用超高效液相色谱串联四级杆飞行时间质谱法(UPLC-Q-TOF-MS/MS)对胆木药材水提物的化学成分进行定性分析.方法:采用AcclaimTM RSLC 120 C18色谱柱(2.1 mm×100 mm,2.2 μ,m),以0.2％甲酸铵缓冲盐溶液-0.2％甲酸铵缓冲盐甲醇溶液为流动相进行梯度洗脱,柱温30℃;采用电喷雾离子化源,正、负离子全扫描模式.结果:通过高分辨质谱数据分析结合对照品及相关文献,从胆木药材水提物中共鉴定出47个化学成分,包括26个吲哚类生物碱,15个有机酚酸及其苷类,2个喹啉酮类生物碱,2个三萜类,1个黄酮类和1个环烯醚萜苷类化合物,其中奎宁酸,3,4-二羟基肉桂酸,马尾柴酸,nauclefiline,香草酸,3,4,5-三甲氧基苯酚,3,4-二羟基苯甲酸甲酯,2,3-二羟基苯甲酸和乌檀酰胺A同分异构体为首次从胆木中报道.结论:该研究采用UPLC-Q-TOF-MS/MS技术快速鉴定胆木药材水提物的主要化学成分为吲哚类生物碱和有机酚酸及其苷类,其中9个化合物为首次从胆木中报道.
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白鲜皮饮片-标准汤剂-配方颗粒的HPLC指纹图谱相关性分析
目的:建立白鲜皮饮片-标准汤剂-配方颗粒的HPLC指纹图谱,对其质量相关性进行评价.方法:采用HPLC,InertSustain C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以乙腈-水为流动相进行梯度洗脱,检测波长228 nm;流速1.0 mL·min-1,柱温30℃.以对照指纹图谱对白鲜皮饮片-标准汤剂-配方颗粒进行相关性评价.结果:白鲜皮15批饮片、标准汤剂、配方颗粒指纹图谱呈现了10个共有峰,且具有良好的相关性.此外,从10个共有峰中指认出白鲜碱、黄柏酮、梣酮3个化学成分.结论:建立了白鲜皮饮片、标准汤剂、配方颗粒的指纹图谱,全面反映了三者的多组分情况,为白鲜皮配方颗粒质量标准的建立及其全程质量控制提供了参考.
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鸡血藤提取物的TLC鉴别及儿茶素和表儿茶素的含量测定
目的:建立鸡血藤提取物的薄层色谱法(TLC)鉴别及其有效成分儿茶素和表儿茶索总量的高效液相色谱法(HPLC)测定,为该药材的质量控制提供参考.方法:TLC以0.7％羧甲基纤维素钠硅胶G作为吸附剂,三氯甲烷-丙酮-正丁醇-甲醇-甲酸(67∶ 13∶ 14∶ 3∶3)为展开剂,5％香草醛硫酸溶液为显色剂.儿茶素、表儿茶索总量测定的HPLC采用Kinetex(R)C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以甲醇-0.02％磷酸水溶液为流动相进行梯度洗脱,流速1.0 mL· min-1,柱温25℃,进样量5μL,检测波长280 nm.结果:鸡血藤提取物的TLC中,在与儿茶素、表儿茶素对照品相对应的位置上显相同颜色、相同形状的斑点,且斑点清晰、分离度好.在HPLC定量分析中,儿茶索、表儿茶素的线性范围(质量浓度与峰面积积分值)分别为9.9 ～ 198.8,20.6 ～412.4 mg·L-1,相关系数均为0.999 9;儿茶素、表儿茶素的平均回收率分别为98.12％和97.94％,RSD分别为1.7％和1.4％.结论:该研究建立的TLC专属性强、分离度好;建立的测定儿茶素、表儿茶素总量的HPLC准确度高、重复性好,可用于鸡血藤提取物的质量控制.
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黔产刺梨不同部位重金属污染与分布特征
目的:研究刺梨不同部位重金属污染与分布特征.方法:采用原子吸收光谱仪和原子荧光光谱仪测定刺梨不同部位重金属含量,采用富集系数法、污染指数法、相关性分析对重金属含量进行评价.结果:重金属标准曲线分别为Pb:Y=373.54X-2.168 7(0～ 100 μg·L-1),As:Y=120.184X+ 1.626(0～ 100μg·L-1),Hg:Y=742.222X-16.301(0～2 μg·L-1),Cd:Y=0.023 3X+ 0.017 9(0～10μg·L-1),相关系数均＞0.999.依据《药用植物及制剂外经贸绿色行业标准》(WM/T2-2004)中重金属限值,131批刺梨样品中(15批刺梨根,48批刺梨茎,48批刺梨叶,20批刺梨果),有25批样品存在重金属超标,包括Cd 16批,Hg 4批,Pb 4批,As 1批.各重金属的单因子污染指数为Cd＞ Pb＞ Hg＞ As,刺梨各部位的综合污染指数为根＞茎＞叶＞果,富集系数为Cd＞ Hg＞ Pb≈As.刺梨基地45批土壤样品重金属Pb,As,Hg,Cd平均值均低于国家土壤二级标准限定值,符合中药材种植规范基地土壤中重金属限量规定要求.结论:刺梨植株污染Cd主要来自土壤,Hg,Pb,As可能与大气沉降和农业活动有关.
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胎元饮合寿胎丸加减联合主动免疫治疗不明原因复发性流产患者的疗效及其对辅助性T淋巴细胞17/调节性T淋巴细胞免疫失衡的影响
目的:探讨胎元饮合寿胎丸加减治疗不明原因复发性流产患者的临床效果及其机制.方法:选择2015年1月至2016年3月收治的96例不明原因复发性流产(URSA)患者,根据随机数表法分为对照组和观察组,每组48例.对照组给予主动免疫治疗,观察组采用胎元饮合寿胎丸加减联合主动免疫治疗.比较两组的妊娠成功率及妊娠结局.测定并比较两组外周血Th17细胞,Treg细胞,炎症因子白细胞介素(IL)-4,IL-10,IL-17,Th17,Treg转录因子维甲酸相关孤核受体γt(RORγt),FoxP3 mRNA表达水平.比较两组治疗中不良反应发生情况.结果:对照组再次妊娠率95.8％,与观察组的97.9％比较差异无统计学意义.观察组的妊娠成功率93.8％ (45/48),明显高于对照组的77.1％ (37/48) (P ＜0.05).观察组的足月分娩比例为95.6％,明显高于对照组的81.1％(P＜0.05).治疗后两组的Th17/CD4+,Th17/Treg较本组治疗前明显降低,Treg/CD4+较本组治疗前明显升高(P＜0.05),且观察组的变化程度较对照组更加明显(P＜0.05).治疗后两组的IL-4,IL-10水平均较本组治疗前上升,IL-17水平降低(P＜0.05);治疗后观察组IL-4,IL-10水平较对照组高,IL-17水平较对照组低(P＜0.05).治疗后两组RORγt mRNA表达水平较本组治疗前降低,FoxP3 mRNA表达水平较本组治疗前升高(P＜0.05);观察组FoxP3,RORγt mRNA变化水平较对照组更加明显(P＜0.05).所有患者均无明显不良反应发生.结论:采用胎元饮合寿胎丸加减联合主动免疫治疗不明原因复发性流产疗效确切,其机制可能通过调节炎性因子水平,改善Th17/Treg的免疫失衡状态,进而改善妊娠结局,降低流产率,且安全性较高,治疗成本低,值得临床推广应用.
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柴芍承气汤联合低分子肝素对高脂血症性胰腺炎患者炎症介质、血脂水平及凝血功能的影响
目的:探讨柴芍承气汤联合低分子肝素对高脂血症性胰腺炎(hyperlipidemic pancreatitis,HLP)腑实热结证患者炎症介质、血脂水平及凝血功能的影响.方法:2014年3月至2016年3月郑州大学第二附属医院共收治167例HLP患者,以该批患者为研究对象,随机数字表法分为治疗组(89例),对照组(88例).对照组在西医常规疗法的基础上采用低分子肝素钙注射给药,治疗组加服柴芍承气汤联合治疗,每日1剂,清水煎煮至200 mL,连续用药7d后对两组患者疗效、炎症介质、血脂水平及凝血功能进行评价.结果:治疗组患者总有效率为93.25％,对照组为80.68％,治疗组高于对照组(P＜0.05);经治疗,治疗组HLP患者在腹痛、腹胀缓解时间及胃肠道功能、血尿淀粉酶(amylase,AMY)恢复正常时间方面明显短于对照组(P＜0.05);与本组治疗前比较,治疗后两组患者血清中肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α,白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6),C-反应蛋白(C-reactionprotein,CRP)与血清甘油三酯(triglyceride,TG)水平均明显降低,且治疗组明显低于对照组(P＜0.05);通过治疗两组患者凝血酶原时间(prothrombin time,PT),活化部分凝血激酶时间(activated partial thromboplastin time,APTT)水平均明显升高,且治疗组明显高于对照组(P＜0.05).结论:柴芍承气汤可以缓解HLP患者体征及临床症状,明显缩短病患病程,下调血清炎症介质的表达,降低血脂TG水平,改善患者的凝血功能,因此对HLP具有积极的治疗效果.
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参芪肾气丸加减对膀胱过度活动症患者尿动力学和神经调控的影响
目的:观察参芪肾气丸加减治疗肾虚证膀胱过度活动症(OAB)的临床疗效及对尿动力学和尿液神经生长因子(NGF),脑源性神经营养因(BDNF)的影响.方法:将108例患者,采用随机按数字表法分为对照组和观察组各54例.对照组口服托特罗定片,2 mg/次,2次/d;观察组在对照组治疗的基础上加用参芪肾气丸加减,1剂/d.两组疗程均为连续治疗8周.患者记录排尿日记(24 h排尿次数、夜尿次数、尿急次数、漏尿次数);进行治疗前后膀胱过度活动症症状评分(OABSS),尿急程度评分(IUSS),主要症状和肾虚证评分;采用膀胱过度活动症调查表(OAB-q)评价治疗前后生活质量;测量治疗前后大尿流率(MFR),残余尿量(PVR),急迫尿意容量(VUD),初始尿意容量(VFD)等尿动力学指标;检测治疗前后NGF和BDNF,并计算与尿肌酐(UCr)的比值即NGF/UCr和BDNF/UCr.结果:观察组患者临床总有效率为92.59％,高于对照组75.93％(x2=5.654,P＜0.05);治观察组24 h排尿次数、夜尿次数、尿急次数、漏尿次数均少于对照组(P＜0.01);观察组OABSS,IUSS,主要症状和肾虚证评分均低于对照组(P＜0.01);观察组VFD,VUD和MFR均多于对照组,PVR少于对照组(P＜0.01);观察组OAB-q量表症状评分均低于对照组,应对方式等4个维度评分均高于对照组(P＜0.01);治疗后观察组患者尿NGF,BDNF水平和NGF/UCr,BDNF/UCr均低于对照组(P＜0.01).结论:采用参芪肾气丸加减联合托特罗定片治疗肾虚型OAB,可明显改善临床症状、提高患者的生活质量,可调节尿动力学指标和尿液NGF,BDNF水平,改善逼尿肌功能.
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地黄丸合芎归二陈汤加减治疗肾虚血瘀型多囊卵巢综合征高雄激素血症
目的:观察地黄丸合芎归二陈汤加减对多囊卵巢综合征高雄激素血症(PCOS-HA)性激素水平和细胞因子的影响.方法:将120例患者以就诊先后,随机按数字表法分为对照组和观察组各60例.对照组口服炔雌醇环丙孕酮片,从月经第5天开始服用,1次/d,连续服用21 d,停药,待月经来潮.观察组采用地黄丸合芎归二陈汤加减治疗.两组疗程均为治疗3个月经周期.检测治疗前后血清睾酮(T),双氢睾酮(DHT),硫酸脱氢表雄酮(DHEAS),促黄体生成素(LH),卵泡刺激素(FSH),性激素结合球蛋白(SHBG),催乳素(PRL)水平,并计算游离睾酮指数(FAI);进行治疗前后痤疮严重情况(Rosenfield),多毛和肾虚血瘀证评分;进行妇科B超检查记录卵巢大小、每侧卵巢的窦卵泡个数、恢复排卵情况等;记录月经周期、月经量、基础体温(BBT),计算BBT双相率和月经恢复正常率;检测治疗前后瘦素(LP),胰岛索样生长因子-1(IGF-1)和脂联素(APN)水平;评价治疗前后胰岛素抵抗指数(HOMA-IR),体质量指数(BMI)和腰臀比(WHR).结果:经有序资料的x2检验,观察组的临床疗效优于对照组(x2 =7.213,P＜0.05);治疗后观察组患者T,DHT,DHEAS,FAI,LH,PRL水平均低于对照组,LH/FSH比值低于对照组,SHBG,FSH水平均高于对照组(P＜0.01);观察组患者Rosenfield,多毛、肾虚血瘀证评分均低于对照组,卵巢体积小于对照组(P＜0.01);观察组月经恢复率为86.67％,高于对照组的68.33％(x2=5.784,P＜0.05);观察组患者排卵恢复率为78.33％,高于对照组的56.67％(x2=6.419,P＜0.05);观察组BBT双相率为80％,高于对照组的60％(x2 =5.714,P＜0.05);观察组IGF-1和LP水平均低于对照组,APN水平高于对照组(P＜0.01);治疗后观察组患者HOMA-IR,BMI和WHR均低于对照组(P＜0.01).结论:地黄丸合芎归二陈汤加减治疗肾虚血瘀型PCOS-HA,可改善高雄激素血症的临床症状和血清生化指标,调节内分泌指标,促进了PCOS月经恢复和自发排卵恢复,临床疗效优于西医治疗.
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高血脂症动物模型研究进展
随着人们生活方式的改变,生活质量的不断提高,高血脂症成为现代常见临床疾病.目前对于高血脂症的治疗以药物治疗为主.与西药相比,中药治疗高血脂症的机制复杂,但鲜有不良反应发生.为探究其病理病机,寻找预防和治疗措施,阐明中药治疗高血脂症的优势和特色,需要建立与人类高血脂症相类似的动物模型.动物模型是实验研究的基础,动物模型的建立方法要尽量与病程发展相吻合,动物模型的评价指标也要尽量与临床指标相对应.理想的高血脂症模型应该具备造模方法可重复、操作简单、成本较低、便于推广等特点.目前高血脂症动物模型的研究方法众多,化学诱导是常用的方法,实验动物主要是大鼠、小鼠,先天性模型和转基因模型较为少用.不同动物的生物特性不同,适合的造模方法也不尽相同.根据实验目的、实验周期、实验技术等因素,选择合适的模型动物和造模方法是高血脂症实验成功的关键.本文对近年来国内外过高血脂症模型动物的选择、造模方法及对应的模型评价指标进行归纳总结,为降脂中药新药开发者研究、选择和建立高血脂症动物模型提供参考.
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青蒿挥发油羟丙基-β-环糊精包合物的制备及其抗病毒活性分析
目的:制备及表征青蒿挥发油羟丙基-β-环糊精(HP-β-CD)包合物,对包合物的体外抗病毒活性进行研究.方法:采用饱和水溶液法、研磨法、单相溶液法制备青蒿挥发油HP-β-CD包合物,通过显微鉴别、薄层色谱法、红外光谱法和紫外分光光度法对包合物进行表征,采用体外细胞培养法研究青蒿挥发油及其包合物抗呼吸道合胞病毒(RSV),柯萨奇病毒A16型(CA16)的活性.结果:单相溶液法为佳包合方法,在HP-β-CD与青蒿挥发油的投料比8∶1,乙醇体积分数100％,包合温度25 ℃,包合时间2h时包合效果佳,包合率80.62％,表征手段表明包合物已生成.体外抗病毒结果表明青蒿挥发油与包合物对RSV的半数有效浓度(EC50)分别为3.12,0.28 mg·L-1,对CA16的EC50分别为9.14,0.59 mg·L-1.结论:单相溶液法制备青蒿挥发油HP-β-CD包合物的工艺稳定可行,该工艺可显著提高青蒿挥发油的包合率,且包合物的抗RSV和CA16活性较包合前更强.
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“丹参-三七”药对作用机制的网络药理学探讨
目的:探讨“丹参-三七”药对的物质基础,预测其作用方向.方法:在中药系统药理学分析平台(TCMSP)检索“丹参”和“三七”所有的分子、靶点和相关疾病,使用cytoscape 3.2.1软件构建“活性成分-作用靶点”和“作用靶点-相关疾病”的网络模型,对药对物质基础和机制进行预测和研究.结果:通过口服利用度(oral bioavailability,OB)和类药性(drug-likeness,DL)筛选得到73个活性成分,145个靶点和325中相关疾病.自由度(degree)值较高的活性成分有槲皮素(87),β-谷固醇(51)和1,2,5,6-四氢丹参酮(46)等,degree值较高的靶点有雌激素受体(63),雄激素受体(59),前列腺素G/H合成酶2(56)等,Degree值较高的疾病有癌(16),肺转移性骨肉瘤(12),心血管疾病(10),乳腺癌(9)和胰腺癌(9)等.结论:该文对“丹参-三七”药对的物质基础和机制进行初步预测,为更深层次的研究和临床提供思考方向.
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基于网络药理学预测二妙丸“一方多效”的分子机制
目的:基于网络药理学思路与方法,研究二妙丸中有效成分、靶点、通路之间的关系,预测其可能的“一方多效”药理机制.方法:依托中药分子机制的生物信息学分析工具服务器(BATMAN-TCM)对二妙丸进行成分-靶点的预测和筛选,借助检索相互作用的基因/蛋白质的搜索工具平台(STRING)构建靶蛋白互作网络,利用BiNGO和MCODE插件对靶基因进行基因本体(G0)生物过程富集和聚类分析,通过注释、可视化和集成发现的数据库(DAVID)平台对关键靶点京都基因与基因组百科全书(KEGG)信号通路进行富集分析.结果:二妙丸活性成分作用于血清白蛋白(ALB),丝裂原活化蛋白激酶1(MAPK1),肿瘤坏死因子(TNF),前列腺素内环氧合酶2(PTGS2),5-羟色胺受体2A(HTR2A),腺苷脱氨酶(ADA),糖皮质激素受体(NR3C1)等37个关键靶点;参与炎症反应、神经传导、金属阳离子稳态平衡、氧化还原、脂质代谢、核苷酸代谢等GO生物过程;调控TNF,TRP通道炎症调控,FcεRI信号通路,Ⅱ型糖尿病,钙离子信号通路,5-羟色胺以及多种信号转导、肿瘤、细胞色素P450通路.结论:二妙丸除具有治疗痛风、关节炎、湿疹等炎症疾病外,还可能具有抗糖尿病周围神经病变、治疗神经系统、胃肠系统、心血管系统疾病的“一方多效”作用.
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基于DNA条形码技术的毒性药材金钱白花蛇药源调查
目的:建立基于DNA条形码技术的毒性药材金钱白花蛇药源调查方法,调查市售金钱白花蛇的药源构成.方法:建立金钱白花蛇正品及其主要混伪品的参考细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ (Co Ⅰ)条形码库,收集51份市售金钱白花蛇样品,分别获取每份样品头部和尾部的Co Ⅰ序列,通过构建邻接系统发育树进行物种鉴定.结果:共获得60条金钱白花蛇正品及其主要混伪品的Co Ⅰ条形码,银环蛇种内大遗传距离0.020 1,与金环蛇、赤链蛇和赤链华游蛇的种间小遗传距离分别为0.156 1,0.208 8和0.209 3,种内大变异小于种间小变异;金钱白花蛇正品及其混伪品在邻接系统发育树上聚为独立的支,金钱白花蛇正品及其混伪品在系统发育树上可明确区分.所有市售金钱白花蛇样品均可从头部和尾部成功获得Co Ⅰ序列,药源调查结果表明银环蛇29份,赤链蛇20份,赤链华游蛇2份,混伪品占比43％;基于头部和尾部的鉴定结果一致.结论:DNA条形码技术可用于市售金钱白花蛇的药源调查;金钱白花蛇市场混乱、混伪品较多,质量问题严重.
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川贝母转录组中SSR位点信息分析
目的:通过分析川贝母转录组简单重复序列标记(SSR)信息,为其分子标记辅助育种及种质资源保护提供技术支撑.方法:采用Illumina HiSeq2000技术平台对川贝母鳞茎及叶片进行高通量测序,采用MISA对Unigene进行SSR位点分析.结果:从转录组得到44 973条,Unigene中共检测到3 817个SSR位点,分布于3 367条Unigene序列中,出现频率为8.49％,平均每10.37 kb序列出现1个SSR位点.其中重复类型多的为三核苷酸和二核苷酸,所占比分别为56.51％和27.06％.三核苷酸重复基序CCG/CGG所占比率大,其次为二核苷酸重复基序AG/CT.6种SSR重复类型的重复次数主要集中于4～12次,24.55％ SSR的序列长度＞20 bp.结论:川贝母SSR位点出现频率较高,类型丰富,多态性较高,为其遗传多样性分析和遗传图谱构建及分子辅助育种提供了丰富的候选分子标记.
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基于GC-MS代谢组学技术比较冬虫夏草与蝉花的质量
目的:基于气相色谱-质谱(GC-MS)代谢组学分析方法探究冬虫夏草和蝉花的代谢物组成特征,为冬虫夏草的品质评价提供理论依据.方法:采用GC-MS测定冬虫夏草和蝉花的50％甲醇提取物,结合NIST和GMD数据库进行代谢物结构鉴定,分别采用主成分分析(PCA)和偏小二乘法-判别分析(PLS-DA)考察样品分类情况、筛选差异代谢物.结果:从冬虫夏草和蝉花中共鉴定得到64种代谢物,主要包括氨基酸及其衍生物类、糖醇类、有机酸类和脂肪酸类等.PCA结果显示冬虫夏草与蝉花样品根据代谢物特征完全区分,表明二者化学组成差异较大;采用PLS-DA筛选获得导致2种样品区分的差异代谢物共21种,其中冬虫夏草含有更多的D-甘露醇、海藻糖、脯氨酸、焦谷氨酸等,而蝉花中肌醇和γ-氨基丁酸、鸟氨酸、苏氨酸等代谢物的含量更高.结论:冬虫夏草和蝉花的化学成分差异较大,蝉花不适合替代冬虫夏草使用.
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中医药研究现代化发展方向高峰论坛暨《中国实验方剂学杂志》第五届编委会在满州里市隆重举行
为推进中医药现代化发展,传承发扬中医药优秀的传统文化,鼓励中医学者将现代化的手段与中医药研究创新结合,展现中医药现代化理论和实践的新科学研究成果,2018年7月21日,中医药研究现代化发展方向高峰论坛暨《中国实验方剂学杂志》第五届编委会在满洲里市套娃酒店隆重举行.
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独活寄生汤配合膝四针治疗风寒湿痹型膝骨关节炎的临床观察
目的:观察独活寄生汤配合膝四针治疗风寒湿痹型膝骨关节炎(KOA)的临床疗效及部分作用机制,为临床应用提供参考.方法:将91例KOA患者随机分为观察组(49例)和对照组(42例),对照组给予硫酸氨基葡萄糖胶囊0.5 g/次,3次/d,口服,观察组给予独活寄生汤150 mL/次,口服,2次/d,配合膝四针进行针刺治疗,疗程均为4周;观察两组患者治疗前后膝关节视觉模拟评分(VAS),西安大略麦马斯特大学骨关节炎指数评分(WOMAC),中医证候积分,自制膝关节肿胀评分,总有效率及综合疗效治疗反应评分变化;采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测两组患者治疗前后关节液中Toll样受体-4(TLR-4),髓系分化因子(MyD88) mRNA的表达;并比较两组患者治疗后3,6个月复发率.结果:两组患者治疗后VAS,WOMAC,中医证候积分,自制膝关节肿胀评分及综合疗效治疗反应评分均较本组治疗前降低,且观察组较对照组治疗后上述评分更低(P＜0.05);两组患者较本组治疗前关节液中TLR-4,MyD88 mRNA表达降低,且观察组治疗后较对照组更低(P＜0.05);观察组患者总体有效率,3,6个月复发率均低于对照组(P＜0.05).结论:观察独活寄生汤配合膝四针治疗风寒湿痹型KOA有较好疗效,且复发率低,其作用机制可能阻断TLR-4/MyD88信号通路,抑制下游软骨细胞分解代谢因子与炎性因子表达有关.
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独活寄生汤治疗肝肾亏虚型膝骨关节炎患者血清赖氨酸,β-隐黄素含量变化及其与疼痛的相关性
目的:观察独活寄生汤治疗肝肾亏虚型膝骨关节炎(KOA)患者血清赖氨酸,β-隐黄素含量变化及其与疼痛的相关性.方法:将73例天津中医药大学第一附属医院确诊的KOA患者随机分为观察组(42例)及对照组(31例),观察组给予独活寄生汤150 mL/次,2次/d口服,对照组给予硫酸氨基葡萄糖胶囊0.5 g/次,3次/d口服,两组患者均治疗4周,以膝关节视觉模拟评分法(visual analogue scalescore,VAS),压痛值评定治疗前后疼痛变化情况;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组患者血清中前列腺素E2(PGE2),P物质(SP),多巴胺(DA),5-羟色胺(5-HT)含量;赖氨酸含量采用全自动氨基酸分析仪进行检测;采用高效液相色谱法检测β-隐黄素血清含量;采用Pearson相关性检验分析赖氨酸,β-隐黄素与VAS评分,压痛值,PGE2,SP,DA,5-HT相关性.结果:与本组治疗前比较,治疗后对照组、观察组患者VAS评分升高,压痛值降低(P＜0.05),治疗后与对照组相比,观察组VAS评分升高,痛值降低(P＜0.05);与本组治疗前相比,治疗后两组患者血清PGE2,SP,DA及5-HT含量均下降,治疗后与对照组相比,观察组患者血清PGE2,SP,DA及5-HT含量明显下降(P＜0.05);对照组治疗前后血清赖氨酸,β-隐黄素含量无明显变化,观察组治疗后较治疗前血清赖氨酸,β-隐黄素含量升高(P＜0.05);两组患者治疗前后血清赖氨酸,β-隐黄素与压痛值呈正相关(P＜0.05),与VAS,PGE2,SP,DA,5-HT均呈负相关(P＜0.05).结论:独活寄生汤治疗肝肾亏虚型KOA可明显缓解疼痛,可能与赖氨酸,β-隐黄素血清含量升高有关.
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独活寄生汤配合温针灸治疗风寒湿痹型膝骨关节炎患者的疗效及对血清疼痛介质、炎症介质、白三烯的影响
目的:观察独活寄生汤配合温针灸治疗风寒湿痹型膝骨关节炎(KOA)膝关节疗效及对血清疼痛介质、炎症介质、白三烯(LT)的影响.方法:将94例风寒湿痹型KOA患者随机分为对照组(30例),独活寄生汤组(34例)及联合组(30例),对照组给与硫酸氨基葡萄糖胶囊0.5g/次,3次/d口服;独活寄生汤组给予独活寄生汤150 mL,2次/d口服;联合组在独活寄生汤组治疗基础上给予温针灸治疗,疗程均为4周;观察入组患者治疗前后膝关节视觉模拟评分(VAS),自制膝关节肿胀评分及总有效率变化;酶联免疫吸附法(ELISA)检测各组患者血清中疼痛介质[前列腺素E2(PGE2),P物质(SP),多巴胺(DA),五羟色胺(5-HT)],炎症介质[肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白细胞介素-1β(IL-1β)]及白三烯B4,白三烯C4,白三烯D4(LTB4,LTC4,LTD4)的表达.结果:治疗后联合组VAS,膝关节肿胀评分及对KOA疼痛疗效明显高于对照组和独活寄生汤组(P＜0.05);与对照组治疗后相比,独活寄生汤组及联合组患者血清PGE2,SP,DA,5-HT,TNF-α,IL-1β,LTB4,LTC4,LTD4含量降低(P＜0.05),与独活寄生汤组治疗后相比,联合组患者血清PGE2,SP,DA,5-HT,TNF-α,IL-1β,LTB4,LTC4,LTD4含量降低趋势更加明显(P＜0.05).结论:独活寄生汤配合温针灸可有效治疗风寒湿痹型KOA患者膝关节肿痛,其机制可能与降低LTB4,LTC4,LTD4及炎症介质含量有关.
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基于古代文献分析经典名方四逆汤的主治疾病
研究从文献入手,对古代四逆汤主治病证进行分析探讨,以便更好地继承古人学术思想,扩大四逆汤应用范围,为临床医疗服务.从古代方书、医案著作中选取记载有四逆汤(及加味方)主治的条目,进行统计与整理,同时选择少量近代“扶阳派”医家著作进行同样统计与整理,以作参考.方书中四逆汤(及加味方)所治疾病病症表现常见手足厥冷、腹泻、呕吐、腹痛、汗出;医案中四逆汤(及加味方)所治疾病病症表现常见腹泻、呕吐、恶心、腹痛、肢冷、烦躁、汗出.四逆汤适应治疗的疾病(与西医疾病相对应)大致可能有霍乱、心衰、休克、溃疡性结肠炎、急慢性肠炎、冠心病心绞痛、心梗等,该复方值得进一步研究与挖掘.
| 年 | 期数 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 |
| 2017 | 01 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 |
| 2015 | 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 13 14 15 16 |
| 2011 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 |
| 2010 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 13 14 15 16 17 18 |
| 2009 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2008 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2007 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2006 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2005 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2004 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2003 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2002 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2001 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2000 | 01 02 03 04 05 06 |
