日本血吸虫卵黄铁蛋白基因免疫在不同处理小鼠诱导免疫应答的观察

[目的]研究日本血吸虫卵黄铁蛋白DNA免疫在两种处理小鼠诱导的免疫应答及其保护作用.[方法]免疫小鼠分两大组进行:实验Ⅰ组小鼠有预感染,实验Ⅱ组小鼠没有预感染.将构建的携带日本血吸虫卵黄铁蛋白基因的重组质粒pLXSN-Fer1经左后腿肌肉注射BALB/c小鼠,共免疫2次,间隔2周.末次免疫后5周以血吸虫尾蚴攻击感染,6周后剖杀小鼠,计数成虫负荷及肝组织虫卵数.设空载质粒免疫组为对照组.[结果]免疫小鼠后在实验Ⅰ组主要诱生IgG1和IgG3,在实验Ⅱ组主要诱生IgG2a和IgG2b;实验组产生较高水平的IgA和IFN-γ应答.pLXSN-Fer1免疫小鼠获得一定程度的减虫率(26.47%,34.08%)和减卵率(40.02%,36.83%).[结论]日本血吸虫卵黄铁蛋白在两种不同处理小鼠均能产生一定程度的保护作用,有可能成为有价值的疫苗候选分子,值得进一步深入研究.

外周神经和3-异丁基-1-甲基黄嘌呤对成年金黄地鼠视网膜节细胞再生的影响

[目的]探讨玻璃体内插入外周神经和玻璃体内注射3-异丁基-1-甲基黄嘌呤(IBMX)对轴突损伤的视网膜节细胞再生的影响.[方法]20只成年金黄地鼠随机分4组,每组5只动物.切断视神经(ON)并缝接坐骨神经(attached graft,AG)为再生对照组;ON切断并缝接坐骨神经后再于玻璃体内注射IBMX和/或插入一小段自体坐骨神经(SN)为实验组.采用逆行示踪标记术,观察视网膜平铺片节细胞数.[结果]①对照组(AG)每个视网膜再生的节细胞数为(1 428±284)个/reti-na;②外周神经组(AG+SN)为(2 220±415)个/retina;③IBMX组(AG+IBMX)为(2 424±1 026)个/retina;④外周神经和IB-MX联合组(AG+IBMX+SN)为(3 065±654)个/retina;其中,AG+SN组同AG组相比存在显著性差异(P<0.01);AG+IBMX+SN组同AG、AG+IBMX和AG+SN组相比均有显著性差异(P<0.01).[结论]研究结果提示联合应用外周神经和IBMX可大幅提高受损视网膜节细胞的再生.

人羊膜诱导胚胎干细胞向表皮样干细胞的定向分化

[目的]探索体外定向诱导胚胎干细胞(ES细胞)分化为表皮样干细胞的条件,为研究其分化机理及寻找新的皮肤组织工程种子细胞奠定基础.[方法]将小鼠胚胎干细胞单独(对照组)或与人羊膜共培养4～5 d,观察其形态分化,分别用β1整合素免疫组化和流式细胞仪检测胚胎干细胞向表皮样干细胞的分化.[结果]与人羊膜共培养4～5 d后,ES细胞分化为表皮细胞样的单层细胞,细胞排列紧密,呈多边形,免疫组织化学染色后,多数细胞呈现β1整合素阳性,对照组大量细胞死亡,未见β1整合素阳性细胞;流式细胞仪检测结果显示:实验组和对照组β1整合素阳性细胞分别为81.4%和8.4%,两者比较差异显著,Z检验P<0.01.[结论]人羊膜组织可在体外诱导胚胎干细胞分化为表皮样干细胞.

人类Vimentin基因第1,2,6,7内含子序列的测定

[目的]人vimentin(VIM)基因位于10号染色体短臂1区3带,属于第Ⅲ型中间丝纤维蛋白基因.目前已知全部外显子序列及部分内含子序列,本文测定了部分未知的VIM基因内含子序列.[方法]通过已知VIM基因的外显子序列设计引物,用PCR扩增其未知的内含子片段,将PCR产物进行克隆测序.[结果]共测得未知的4个内含子序列,内含子1长692bp,测得其全部序列;内含子2长2kb,测得其两端与外显子相接的序列,共1kb;内含子6长456bp,测得其全部序列;内含子7长404 bp,测得其全部序列.[结论]本研究PCR检测多例人VIM基因的内含子7大小为404 bp,与文献报道人类vi-mentin基因的内含子7大小为800bp相差很大,但引物两端外显子序列相同.另外,文献报道的人类vimentin基因与外显子3相邻的第2内含子末端41nt的核苷酸序列与本研究所测的第2内含子末端序列完全不同.

恶性疟原虫红内期p41-3基因真核表达重组质粒的构建及序列分析

[目的]构建恶性疟原虫海南(FCC1/HN)株p41-3基因真核表达重组质粒pcDNA3-p41-3;测定p41-3基因序列,并了解FCC1/HN株与其它分离株p41-3序列的差异.[方法]根据p41-3基因已知序列设计合成2对引物,用PCR技术从FCC1/HN株基因组DNA中扩增p41-3基因;将p41-3基因定向克隆入真核表达载体pcDNA3,转化大肠杆菌DH5α感受态细胞;用酶切,PCR扩增鉴定筛选到的重组质粒阳性克隆.以正确的重组质粒为模板,用双脱氧链末端终止法测定p41-3基因序列,应用软件辅助分析p41-3序列及进行同源性比较.[结果]PCR扩增得到特异的FCC1/HN株p41-3基因;正确的pcD-NA3-p41-3重组质粒被筛选和鉴定.测序表明,FCC1/HN株p41-3基因大小为2 137 bp,编码375个氨基酸.恶性疟原虫FCC1/HN株与FCBR株p41-3基因核苷酸序列同性为98.98%,编码氨基酸序列同源性为99.73%.[结论]从恶性疟原虫FCC1/HN株基因组DNA中获取p41-3基因,成功构建真核表达重组质粒pcDNA3-p41-3,并测定了FCC1/HN株p41-3基因的序列;FCC1/HN株与其它分离株p41-3基因有高度的同源性.

慢速程序冷冻对透明带显微操作后人类胚胎冻存率及发育的影响

[目的]探讨慢速程序冷冻对透明带显微操作后胚胎冻存率及继续发育的影响.[方法]将96个Ⅱ级以上人类多精受精胚胎随机分为单纯透明带打孔组(n=24),胚胎活检组(n=40)及对照组(n=32).为模拟临床种植前诊断活检后胚胎冷冻过程,将透明带显微操作后胚胎继续培养6～10 h再进行慢速程序冷冻,观察各组胚胎冷冻解冻后的冻存率及胚胎继续发育能力.[结果]活检及透明带打孔后冻融胚胎中发生裂解的卵裂球多位于透明带破口附近.活检组胚胎完整率、胚胎存活率及卵裂球存活率分别为10%,25.0%和29.0%,较对照组(43.7%,66.0%和62.4%)明显降低(P<0.01).虽然单纯透明带打孔组冷冻后胚胎完整率及胚胎存活率与活检组无明显差异,但卵裂球存活率较胚胎活检组高(分别为40.9%和29.0%)(P<0.01),以上各组存活胚胎继续发育率差异无显著性(P>0.05).[结论]以丙二醇和蔗糖为冷冻保护剂的人类分裂期胚胎慢速冷冻程序并不适用于化学法透明带打孔活检胚胎的冷冻保存,有关人类活检后胚胎的冷冻保存方法值得进一步探讨.

神经前体细胞的分离培养及绿色荧光蛋白基因的转染

[目的]为替换中枢神经损伤后死亡的神经元提供方便追踪观察的神经前体细胞.[方法]应用含碱性成纤维生长因子(bFGF)的无血清培养技术,从新生大鼠海马组织分离培养神经前体细胞,并借助免疫组织化学技术检测这些细胞巢蛋白(nestin)的表达以及细胞分化后神经丝蛋白(NF)和胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)的表达.采用磷酸钙法将绿色荧光蛋白(GFP)基因转染目的细胞内.[结果]从海马组织分离的细胞具有分裂能力,能表达nestin.分化后一些细胞能表达NF,而另一些细胞则表达GFAP.GFP基因修饰的细胞能发出荧光.[结论]从海马组织分离的细胞能表达nestin,属于神经前体细胞,它们具有明显的增殖能力.有些神经前体细胞已经分化为神经元和神经胶质细胞.GFP基因已成功转染到神经前体细胞内,并表达了GFP.

细菌-酵母穿梭表达质粒pGBKT7-LMP1 的构建与鉴定

[目的]构建能在酵母中表达EBV潜伏膜蛋白1(LMPl)的穿梭表达质粒pGBKT7-LMP1.[方法]RT-PCR方法扩增EB病毒LMP1全外显子片段,利用DNA重组技术将其定向插人细菌-酵母穿梭质粒pGBKT7的T7启动子下游.[结果]限制性内切酶酶切和DNA测序分析证实RT-PCR获得的LMP1 cDNA片段与GenBank中的数据完全吻合;LMP1准确克隆人pGBKT7的多克隆位点,未改变读码框架.[结论]成功构建了穿梭质粒pGBKT7-LMP1.

丹参注射液诱导间质干细胞分化为神经元样细胞

[目的]丹参注射液体外定向诱导成人骨髓间质干细胞(MSC)分化为神经元样细胞.[方法]采用Ficoll-Paque液离心分离成人MSC,体外扩增,流式细胞仪检测MSC表面抗原表达,分别采用含丹参注射液或硫代甘油等试剂的无血清达乐伯克改良必需基本培养基(DMEM)诱导MSC分化为神经元,免疫组化鉴定神经元特异性烯醇化酶(NSE)、神经丝蛋白(NF-M)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、巢蛋白(nestin)的表达.[结果]成人骨髓间质干细胞在体外扩增原代可获得0.5×106,15代可获得(2～3)×1012个细胞,细胞流式细胞仪检测结果显示CD29、CD44、CD90、CD105、CD166表达阳性,CD11a、CD14、CD34、CD38、CD45、CD80、CD86为阴性.加入丹参或硫代甘油诱导后,MSC胞体收缩,突起伸出;免疫组化显示诱导出的神经元样细胞NSE、NF-M、nestin表达阳性,GFAP阴性.[结论]丹参可以在体外诱导成人骨髓间质干细胞分化为神经元样细胞.

上颌前部牙槽骨内圆柱洞形扩宽同期牙种植

[目的]观察上颌前部牙槽骨内圆柱洞形扩宽后行同期人工牙种植的临床效果.[方法]选择11例上颌前部失牙的患者,经螺旋CT多层面重建图像检查确定为牙槽骨高度足够,宽度不足,采用扁尖刃圆柱形扩宽器械增宽牙槽骨并形成骨内圆柱洞形,植入17个圆柱形牙种植体.[结果]全部牙种植伤口一期愈合,经3～55个月观察全部成功.[结论]该技术适用于牙槽骨宽度不足的牙种植,比较牙槽骨劈开术有明显的优点.

糖化血红蛋白与糖尿病患者白内障术后反应的关系

[目的]探讨糖尿病患者白内障术前糖化血红蛋白水平与术后眼前段反应的关系和前瞻性意义.[方法]对52例伴有糖尿病和40例不伴有糖尿病的白内障患者术前测定糖化血红蛋白(HbAlc)水平,术后观察眼前段反应并作相关分析.[结果]HbAlc水平与术后眼前段反应密切相关(rs=0.865,P<0.01),HbAlc≥9%组患者术后眼前段反应明显高于HbA1c<9%组和对照组患者,差异有显著性意义(P<0.01),HbAlc<9%与对照组术后眼前段反应差异无统计学意义(P>0.05).[结论]术前测定HbA1c对糖尿病患者白内障术后眼前段反应的预测及疗效评价具有重要的临床价值.

腰椎管减压植骨坚强连接(SOCON)复位器治疗腰椎滑脱

[目的]观察应用腰椎管减压、横突间植骨和坚强连接(SOCON)复位器治疗腰椎滑脱合并腰椎管狭窄患者的早期疗效.[方法]对18例腰椎滑脱患者采用腰椎管减压,横突间植骨和SOCON内固定手术.[结果]18例患者中,15例症状完全消失,达83%,14例Ⅰ°滑脱完全复位,3例Ⅱ°滑脱完全复位,解剖复位率达94%.[结论]SOCON复位器治疗腰椎滑脱,效果良好,复位满意.

PCNA表达水平对上皮性卵巢癌化疗效果的影响

[目的]探讨增殖细胞核抗原(PCNA)表达水平对上皮性卵巢癌化疗效果的影响.[方法]应用PCNA单克隆抗体检测81例上皮性卵巢癌的表达水平,术后用以铂类为基础的方案进行化疗,并分析她们的2次探查结果及生存率.[结果]PCNA总的阳性表达率为80%(65/81),按增殖指数水平分A、B、C 3组,2次探查结果A组阳性率为44.18%,B组20.69%,C组11.11%,(P<0.05).A组3年及5年生存率是59.68%和45.60%,B组55.70%和45.57%,C组74.66%和74.66%.Kaplan-Meier生存曲线无差异(Log-rank检验P>0.05).[结论]PCNA表达对上皮性卵巢癌化疗效果近期有影响,随PCNA增殖指数升高,第二次手术探查阳性率下降.对化疗的远期效果--生存时间影响不大.

颌骨肿瘤的X线、二维及三维CT影像对比研究

[目的]对比研究常规X线、二维CT和三维CT对颌骨肿瘤显示的优缺点。[方法]对51例颌骨肿瘤患者行常规X线、二维CT和三维CT检查，比较分析三种检查方法对颌骨肿瘤晃示的特征，并与手术病理结果相对照。[结果]对下颌骨肿瘤三种检查方法均能有交地显示，以三维CT显示得为直观明了。对上颌骨肿瘤，三维CT通过旋转与切割，能够立体直观地显示肿瘤的部位、大小、形状及毗邻关系，尤其对腭板、眶下壁以及颅底骨质破坏的显示更具成越性；二维CT对肿瘤的囊性或实性改变、肿瘤的软组织成份以及颅内受侵情况的显示为有利；常规X线对肿瘤区牙根周围的改变显示得为清楚。[结论]常规X线、二维CT和三维CT对颌骨肿瘤的显示各有优缺点，三者结合能提高肿瘤显示的准确性，对颌骨肿瘤的诊断和治疗具有重要作用。

胎盘成熟度分级与胎盘功能的相关性探讨

[目的]探讨孕妇胎盘成熟度分级与胎盘功能之间的联系,以提供更多监测胎盘功能的方法.[方法]对中山一院1994年8月～1995年1月,孕龄在30～42周的单胎妊娠孕妇91例,在B超下进行胎盘成熟度分级和检测孕妇血中胎盘生乳素(HPL)值,以及羊水池和胎盘钙化追踪.[结果]孕妇胎盘成熟度0级～Ⅱ级胎盘者其HPL值正常,Ⅲ级胎盘者其HPL值明显较0级～Ⅱ级胎盘者低,但尚在正常值范围;Ⅲ级胎盘合并羊水过少、胎盘钙化较0级～Ⅱ级胎盘明显增多.[结论]孕妇胎盘成熟度0级～Ⅱ级胎盘其胎盘功能正常,Ⅲ级胎盘其胎盘功能储备能力下降.

镍钛合金机用锉与超声波手用根管锉临床效果分析

[目的]采用镍钛合金机用锉与超声波、手用根管锉对弯曲、细小或堵塞根管进行根管预备,分析其临床应用效果,评价3种根管锉在根管治疗中的作用.[方法]选择126例148颗根管弯曲、细小或堵塞的患牙;用3种不同的根管锉进行根管预备,观察临床疗效.[结果]镍钛合金根管锉(A组)与超声波根管锉(B组)差异显著(P<0.05);镍钛合金根管锉(A组)、超声波根管锉(B组)与手用根管锉(C组)差异显著(P<0.001).[结论]镍钛合金机用锉柔韧性好、成功率高、价格低廉、值得临床推广和应用.

全反式维甲酸对急淋白血病骨髓基质细胞粘附能力的影响

[目的]探讨全反式维甲酸(ATRA)对急性淋巴细胞自血病(ALL)骨髓基质细胞(BMSC)粘附能力的影响.[方法]将ATRA加进骨髓基质细胞培养体系,培养18 h后用流式细胞仪检测6例ALL骨髓基质细胞表达粘附分子ICAM-1和VCAM-1阳性率,用MTT方法检测ALL骨髓基质细胞对正常骨髓造血细胞或淋巴瘤Raji细胞的粘附率.[结果]药理浓度的ATRA(1.0 μmol/L)使ALL骨髓基质细胞ICAM-1表达明显增高(P<0.05),使ALL骨髓基质细胞对正常骨髓造血细胞或肿瘤细胞的粘附率均明显增高(P<0.05).[结论]药理浓度的ATRA可增强ALL骨髓基质细胞对正常造血细胞和肿瘤细胞的粘附能力.

32例胃肠道类癌的临床病理治疗及预后

[目的]探讨胃肠道类癌的临床及病理特点、诊断与治疗方法.[方法]对1980～2000年32例胃肠道类癌的临床资料和31例患者1～5年的随访资料进行回顾性分析.[结果]所有患者均接受手术治疗并经病理证实,包括阑尾类癌10例,结肠类癌8例,直肠类癌7例,胃类癌4例,小肠类癌2例,十二指肠类癌1例.32例胃肠道类癌中,良性类癌25例,恶性类癌7例.8例患者术前经内镜活检证实,4例出现恶性类癌综合征.在平均29个月的随访中,7例患者死于转移.[结论]胃肠道类癌大小、有无浸润及远处转移是判断胃肠道类癌良恶性的主要依据.胃肠道类癌的良、恶性是影响预后的主要因素,手术治疗为其首选的治疗方法.

改良阴式子宫切除术282例临床分析

[目的]比较非脱垂子宫经阴道切除术与腹式子宫切除术的手术效果.[方法]分析282例非脱垂子宫的改良阴式切除术和250例同期指征相近的腹式子宫切除术的手术时间、术中出血量、术后体温、肛门排气时间、术后病人下床活动时间、住院天数及术后3个月随访情况进行比较.[结果]改良阴式子宫切除术组在手术时间、术中出血量、术后体温、术后排气时间、下床活动时间及住院天数均少于腹式子宫切除术组(P<0.01),术后3个月随访阴道残端愈合、下腹部疼痛等(P>0.05).[结论]改良阴式子宫切除术,术后患者的恢复明显优于腹式子宫切除术.

不同术式治疗良性前列腺增生症术后性功能比较

[目的]比较开放与腔内不同术式治疗良性前列腺增生症(BPH)术后对性功能的影响.[方法]对120例腔内经尿道前列腺电切术(TURP)与经尿道前列腺汽化电切术(TVP)和80例包括膀胱耻骨上前列腺摘除术(SPPC)与保留尿道前列腺切除术(MPC)开放手术的BPH病人进行9个月的追踪观察,总结其术后阳萎及逆行射精发生率.[结果]TURP与TVP术后阳萎发生率分别是10%(4/41)和5%(2/42),逆行射精发生率分别是55%和51%.SPPC与MPC术后阳萎发生率分别是10%(3/31)和3%(1/29),逆行射精发生率分别是48%和14%.[结论]治疗BPH的4种术式术后性功能损害TVP和MPC优于TURP和SPPC,逆行射精发生率MPC术式明显优于其他术式.

准分子激光原位角膜磨镶术创面愈合机制的免疫组化实验

[目的]研究准分子激光原位角膜磨镶术(1aser in situ keratomileusis,LASIK)后角膜创面的愈合机制.[方法]对10只兔右眼施行IASIK手术,分别于术后1 d、1周、1个月、3个月和6个月取标本,应用病理学和免疫组化的方法研究及观察角膜基质成分的变化.[结果]LASIK后1周中央区角膜有少量的角膜细胞出现及产生少许Ⅲ型胶原及纤维连接蛋白,术后1～3个月时达高峰,6个月时明显减少.[结论]LASIK后,角膜愈合反应极轻,因而较少引起角膜混浊的发生.

子宫内膜异位症合并不孕者生殖内分泌的改变

[目的]通过检测血液及腹腔液中生殖内分泌激素水平,了解内分泌因素在子宫内膜异位症所致不孕中的作用.[方法]运用荧光微粒子发光法(MEIA),于卵泡期对78例不孕或子宫内膜异位症(EM)患者(EM合并不孕32例,单纯EM者20例,单纯不孕者26例)及14名健康绝育者的血液及腹腔液进行生殖内分泌激素的检测.[结果]EM者血中催乳素(PRL)、雌二醇(E2)及睾酮(T)水平高于无EM者(P<0.05),EM合并不孕者PRL及T高于EM非不孕者;重度EM的PRL、E2及T高于中度和轻度EM(P<0.05);无EM的不孕者除LH较正常对照组高外,其余与正常对照组之间无差异;卵泡刺激素(FSH)及孕酮(P)水平在以上各组之间无差异(P>0.05).EM合并不孕组腹腔液中PRL、LH、E2及T水平高于其他各组(P<0.05),而FSH及P与其他各组之间无差异(P>0.05).EM非不孕者PRL高于非EM不孕及正常对照组(P<0.05)、LH则与正常对照组无差异,但低于非EM不孕组(P<0.05),而FSH、E2及P与非EM不孕及正常对照组间无差异(P>0.05);非EM不孕组与正常对照组之间除LH较高外,其余各项无差异;不同程度EM组之间除FSH无差异外,其余各项均有差异,重度高于中度,中度又高于轻度EM(P<0.05).[结论]子宫内膜异位症特别是合并不孕者血及腹腔液中PRL和T水平较高,这可能是EM导致不孕的原因之一.

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脑血管平滑肌的舒缩是引起脑血管疾病发生的重要病理变化.血管平滑肌细胞功能的调节依赖胞浆游离Ca2+浓度.用共焦激光显微镜可以测试-个细胞内的Ca2+动态,但所用细胞需粘附在培养皿上且不能被液体冲掉,因此即使使用原代细胞也需培养一段时间.如没有共焦激光显微镜,使用RF-5000荧光分光光度计只能测定悬浮细胞内Ca2+浓度的动态变化,这就需要大量的活细胞才能测试.因此必须建立脑血管平滑肌细胞培养方法.本实验用改进的组织贴块法培养牛脑血管平滑肌细胞,方法简便,经济,通过电镜鉴

颅内外联合径路手术矫正眶距增宽症1例报告

眶距增宽症(orbital hypertelorism)是一种严重的颅面部畸形.多数患者智力正常,随着年龄增长,心理压力逐渐增大,出现自卑感,因此渴望治疗.矫形手术是唯一的治疗方法.由于眶距增宽症涉及到眼眶周围的重要解剖结构,如脑组织、视神经、颅骨内板较大的静脉导管等,手术难度大,容易出现严重并发症,造成不良后果.因此,迄今为止,国外文献仅报告了约200例此类手术,而国内仅报告了约50余例,而且都集中在少数几家医院.

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