端粒DNA形成鸟嘌呤四链体结构

[目的]在体外观察K+、Na+对富含端粒重复序列寡核苷酸二级结构的影响.[方法]在K+、Na+存在下,利用核磁共振光谱仪观察含端粒重复序列的核苷酸d(TTAGGGT)光谱的变化;利用非变性凝胶电泳观察d(TTAGGG)3、d(TTAGGG)4和d(TTAGGG)5迁移速度的变化.[结果]在含K+或Na+缓冲液中,d(TTAGGGT)在化学移位δ11～12区域内出现代表有鸟嘌呤四分体形成的波峰;K+比Na+具有更强的稳定四链体能力.K+、Na+均可加速d(TTAGGG)4、d(TTAGGG)5在凝胶中迁移速度.[结论]在体外,K+、Na+可诱导含端粒重复序列的核苷酸形成鸟嘌呤四链体结构.

肾病综合征鼠骨代谢变化特点及芪归合剂对其的作用

[目的]探讨肾病综合征(NS)鼠骨代谢的变化特点及芪归合剂对其的作用.[方法]制备大鼠阿霉素NS模型,设模型组、激素治疗组、芪归治疗组、激素芪归治疗组及正常对照组,每组8只,用药时间为3周.测量各组尿蛋白、血生化指标和右股骨长度;用Hologic QDR-2000+DEXA行股骨全段骨密度(BMD)测定;以放射免疫法测定血清骨钙素(OC)、Ⅰ型前胶原氨基端伸展肽(PINP)、Ⅰ型胶原羧基端关联肽原(ICTP)水平.[结果]模型组股骨长度(3.35±0.09)cm,低于正常组(3.53±0.11)cm(P<0.05);芪归治疗组(3.46±0.09)cm,高于模型组(P<0.05);激素芪归组(3.28±0.07)cm,高于激素治疗组(3.16±0.11)cm(P<0.01);激素治疗组低于模型组(P<0.05).模型组股骨全段BMD(0.1357±0.0137)g/cm2,低于正常组(0.1599±0.0101)g/cm2(P<0.01);激素治疗组(0.1208±0.0123)g/cm2,低于模型组(P<0.05).模型组血OC(16.31±3.87)μg/L和PINP(2.02±0.51)μg/L水平,低于正常组,分别(31.49±4.16)μg/L、(3.58±0.46)μg/L(P<0.01);芪归治疗组血OC(25.90±8.26)μg/L和HNP(3.42±1.07)μg/L水平,高于模型组(分别P<0.05和P<0.01);激素芪归组血OC(12.01±1.97)μg/L和PINP(2.47±0.88)μg/L水平,高于激素治疗组,分别(6.12±3.26)μg/L、(1.63±0.74)μg/L(P<0.05);激素治疗组低于模型组(P<0.05).激素治疗组的ICTP(10.15±3.77)μg/L高于模型组(8.71±3.29)μg/L(P<0.05).[结论]NS鼠存在骨代谢的异常,激素治疗使骨代谢异常进一步加剧,而芪归合剂治疗对其有改善作用.

鉴定AP-4是在非激素依赖型前列腺癌中上调L-plastin表达的转录因子

[目的]鉴定AP-4是在非激素依赖型前列腺癌中调控L-plastin表达的转录因子,进一步阐明非激素依赖型前列腺癌的发病机制.[方法]在鉴定L-plastin启动子近3'端-216到1序列片段存在明显的转录活性的基础上,利用TFSEARCH软件分析该片段的序列,寻找可能调控L-plastin表达的非甾体激素类转录因子,并用凝胶滞后实验和超滞后实验证实结合于该片段的转录因子,利用PCR定点突变法构建删除该转录因子结合位点的重组子,并检测切除该片段序列后荧光素酶活性,研究该转录因子在非激素依赖型前列腺癌中调控L-plastin表达的作用.[结果]TF SEARCH软件分析表明在距转录起始点-199～-194bp处含有AP-4转录因子结合位点CAGCTG,凝胶滞后实验和超滞后实验表明AP-4是结合于L-plastin启动子3'端序列CAGCTG的转录因子,删除AP-4结合位点后荧光素酶活性下降.[结论]AP-4是促进L-plastin在非激素依赖型前列腺癌中表达的重要调控因子.

椎体间融合器的单节段植入对腰椎多节段椎弓根固定装置中螺钉应力的影响

[目的]通过体外生物力学实验评价椎体间融合器(cage)的单节段植入对腰椎多节段固定装置中椎弓根钉应力的影响.[方法]10具牛新鲜尸体腰骶椎标本L2-S1用于实验.经后方行L3-L4、L4-L5和L5-L6椎板和椎间盘部分切除,用椎弓根钉和一对碳纤维cage行以下3种三节段固定:①无cage植入;②L4-L5 cage植入;③L5-L6 cage植入.每组分别行载荷量为600N的轴向压缩试验,记录各节段椎弓根钉的折曲应变量,并加以比较.[结果]在无cage植入组中,L3和L6椎弓根钉的折曲应变量显著高于L4和L5;在L4-L5cage植入组中,L4和L5椎弓根钉的折曲应变量显著低于L3和L6;在L5-L6cage植入组中,L5和L6椎弓根钉的折曲应变量显著低于L3和L4.[结论]多节段椎弓根固定结构可导致上下两端椎弓根钉的应力增大;Cage的植入可降低上下相邻椎弓根钉的应力,但使相邻以远的椎弓根钉的应力增大.

大剂量甲泼尼龙对幼猪体外循环肺表面活性物质的影响

[目的]研究体外循环(CPB)对肺表面活性物质(PS)变化的影响以及大剂量甲泼尼龙(MP)对体外循环前后SP的保护作用.[方法]用6周大的幼猪,平均体质量(14.4±0.7)kg,分为3组:G1组(n=6),气管插管后切开胸骨,肝素化120 min后鱼精蛋白中和,再过180 min结束;G2组(n=9)和G3组(n=6),气管插管后切开胸骨,肝素化,建立CPB,主动脉阻断100 min,CPB总时间120 min,随后撤离CPB,鱼精蛋白中和.CPB结束后180 min实验结束;G3组于CPB开始前8 h、1.5 h分别肌肉注射甲泼尼龙各1次,每次剂量为30mg/kg.分别于CPB开始前、CPB 60 min、CPB 120 min、CPB后180 min,以纤维支气管镜吸取不同肺叶支气管肺泡灌洗液(BALF)样本.测定BALF中表面活性蛋白A(SP-A)、总蛋白(TP)、总磷脂(PL)、饱和卵磷脂、表面活性物质大分子聚合物(LA)及小分子聚合物(SA)磷脂、血红蛋白(Hb)的变化.[结果]G3组的SP-A水平明显高于G1组和G2组(P<0.05);G2组内CPB 120 min及CPB后180 min的SP-A明显低于手术前,CPB后180 min又较CPB 120 min明显上升(P<0.05);G3组内SP-A无差别.G2组内CPB后180 min的TP明显高于CPB前和CPB 120 min(P<0.05).G2组和G3组PL较G1显著升高(P<0.05);G2组内,CPB 120 min的PL较其他时间点高(P<0.05).饱和卵磷脂在各组间和组内均无差别.G2组的小分子聚合物与大分子聚合物磷脂比例高于G1组和G3组(P<0.05).G2组Hb明显高于G1组和G3组的Hb(P<0.05).G2组内Hb在CPB 60 min、CPB 120 min、CPB后180 min均较CPB前显著上升:CPB 120 min和CPB后180 min均较CPB60min显著上升(P< 0.05).[结论]体外循环对肺表面活性物质产生不利影响;大剂量甲泼尼龙能使表面活性蛋白A水平上升;CPB术前应用大剂量甲泼尼龙对肺表面活性物质系统有明显的保护作用.

骨髓间充质干细胞向肌管状结构分化的动态

[目的]探讨5-氮胞苷体外诱导骨髓间充质干细胞(MSCs)向心肌细胞分化的佳条件和体外分化的过程.[方法]体外培养Sprague-Dawley(SD)大鼠的MSCs,传代至P3、P6或P12;用5-氮胞苷诱导,比较不同诱导浓度组、不同诱导时间组和不同体重动物组MSCs的分化率,观察诱导后细胞分化过程中形态学的变化,并且用cardiac troponin I、desmin和α-sarcomeric actin抗体鉴定分化的心肌样细胞.[结果]P12代较P3或P3代骨髓MSCs易向心肌样细胞分化并融合成肌管样结构.经10 μmol/L的5-氮胞苷诱导24 h后细胞分化率为(27±2.5)%,20 μmol/L的5-氮胞苷诱导24h后细胞分化率为(17±2.2)%,其它诱导浓度和诱导时间均不能诱导细胞分化;50 g(幼年鼠)体重组细胞分化率为(27±2.8)%,150 g(成年鼠)体重组细胞分化率为(15±2.9)%,各组的差异有统计学意义.[结论]5-氮胞苷诱导MSCs向心肌样细胞分化并融合成肌管样结构,年幼的SD大鼠MSCs易向心肌样细胞分化.

小鼠端粒酶蛋白亚单位重组腺病毒载体的构建及鉴定

[目的]构建小鼠端粒酶蛋白亚单位(mouse telomerase reverse transcriptase,mTERT)基因重组腺病毒载体,为下一步研究其体外表达和动物实验研究提供基础.[方法]从肝癌细胞中提取总RNA,采用RT-PCR技术扩增mTERT的基因编码区序列,将序列定向克隆至真核表达载体pAC,将此表达质粒与腺病毒重组质粒pJM17共同转染293细胞,经同源重组产生重组腺病毒载体Ad-mTERT,纯化后的重组腺病毒载体Ad-mTERT在293细胞大量扩增并通过氯化铯密度梯度离心法纯化,测定病毒滴度.[结果]PCR及酶切证实:mTERT DNA正确克隆到穿梭质粒pAC中,带mTERT DNA的表达盒成功重组到腺病毒载体基因组E1A缺失区,并在293细胞中成功包装出具有感染活性的重组腺病毒Ad-mTERT.[结论]成功构建了小鼠TERT基因重组腺病毒载体,为研究其用于肿瘤的基因治疗奠定基础.

汉族人群Y染色体多拷贝基因座DYS464遗传多态性

[目的]研究Y染色体多拷贝基因座DYS464遗传多态性在汉族群体中的分布规律.[方法]选择106例汉族无亲缘关系男性个体作为研究对象,荧光标记引物PCR扩增DYS464基因座片段,ABI377自动测序仪上变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分析PCR产物,并对不同重复序列分别测序.[结果]DYS464基因座在106例汉族男性无关个体中发现有8种片段,变异11～18次.根据其中任意4种片段的组合,即片段大小和峰高的比率来命名等位基因,E-型命名方法,观察到61种等位基因,其中36种等位基因只出现1次.基因多样性和个体识别力分别为0.9853和0.9760,比目前报道的单个Y-STR基因座的多态性都高.[结论]多拷贝基因座DYS464具有高度多态性,非常适于法医学实践和人类进化的研究.

转染survivin对HLF细胞增殖及凋亡的影响

[目的]探讨survivin基因表达对人肺纤维母细胞(human lung fibroblast,HLF)增殖、凋亡的影响.[方法]构建survivin基因真核表达质粒pcDNA3.1/SVN;利用脂质体转染法将其转入不表达survivin mRNA的HLF细胞系.连续培养10周,筛选出稳定表达的阳性克隆(HLF/SVN)及转空质粒对照(HLF/K).用RT-PCR、免疫组化、Western blot检测细胞中survivin、bcl-2和caspase3 mRNA表达:通过观察细胞生长曲线、细胞凋亡指数,探讨转染survivin基因对HLF细胞生长、凋亡的影响.[结果]转染pcDNA3.1/SVN后,在4、6、8和10周HLF/SVN细胞查见survivin mRNA表达;免疫组化和Western blot见HLF/SVN细胞survivin阳性表达;转染后caspase3 mRNA受到抑制,表达减弱或消失.HLF/SVN细胞凋亡指数(03%、1.0%、1.5%)皆低于HLF(0.9%、4.3%、2.1%)及HLF/K(0.8%、1.4%、2.8%).细胞生长曲线示HLF/SVN细胞生长快于HLF和HLF/K,差异有统计学意义(P<0.05).[结论]survivin基因能促进HLF细胞生长,可能通过抑制凋亡和促进细胞分裂而发挥作用.

人垂体腺瘤细胞原代培养的纯化及其激素的表达与分泌

[目的]探讨原代培养垂体腺瘤的细胞纯化方法及其激素表达与分泌的特点.[方法]采用三种原代培养方法对垂体腺瘤细胞进行培养,方法Ⅰ为目前常用的垂体瘤细胞培养方法,方法Ⅱ结合使用右旋颉氨酸(D-valine DMEM D-valine)培养液,方法Ⅲ采用反复贴壁法结合DMEM D-valine培养液培养.观察其细胞形态变化和生长特征,放射免疫法测定不同培养时间培养液中相应激素的水平.免疫组织化学染色法检测培养细胞生长激素(growth hormone,GH)、泌乳素(prolactin,PRL)的表达.[结果]3种方法均能成功培养出垂体腺瘤细胞,呈圆形或椭圆形,其纯度随培养时间的延长逐渐下降,培养第20天其平均纯度分别为40%,46%,96%.方法Ⅲ明显高于方法Ⅰ和方法Ⅱ,差异具有显著性意义(P<0.01);培养液中均含有相应激素,且3种方法的激素分泌量没有统计学差异(P>0.05);腺瘤细胞分别呈GH,PRL阳性表达,成纤维细胞表达Ⅰ型胶原.[结论]方法Ⅲ可得到纯度达95%以上的人垂体腺瘤细胞,纯化后的细胞可分别呈GH和PRL阳性表达并具有良好的激素分泌功能,为进一步研究人垂体腺瘤的发病机理、药物治疗和颅外移植等方面奠定了实验基础.

ES细胞源表皮样干细胞与胶原海绵体外构建组织工程化皮肤

[目的]探讨以ES细胞源表皮样干细胞构建组织工程皮肤的方法,为构建新的组织工程皮肤奠定基础.[方法]先把成纤维细胞放置于胶原海绵真皮支架内,体外培养2 d,再放置ES细胞源表皮样干细胞,体外培养3 d,观察其形态和进行免疫组化检测.[结果]成纤维细胞与ES细胞源表皮样干细胞均在真皮支架内黏附,免疫组化表明ES细胞源表皮样干细胞仍呈β1整合素强阳性和CK15、CK19阳性.[结论]结果提示ES细胞源表皮样干细胞在体外构建的组织工程化皮肤内仍维持未分化状态.

细胞外基质黏附分子表达与成釉细胞瘤生物学特性的关系

[目的]探讨细胞外基质黏附分子层粘连蛋白(LN)和纤黏连蛋白(FN)与成釉细胞瘤复发和侵袭的关系.[方法]采用免疫组织化学LABC方法检测28例成釉细胞瘤组织中LN和FN的表达.[结果]在28例成釉细胞瘤中,LN和FN在基底膜的阳性表达率分别为46.4%和39.3%,复发性成釉细胞瘤LN和FN在基底膜的阳性表达率明显低于原发性成釉细胞瘤(P<0.01).LN和FN的表达形式相似,阳性着色部位均位于基底膜及部分肿瘤细胞的胞浆,在基底膜连续着色的部位,靠近基底膜的肿瘤外周细胞胞浆染色较强,中央内层细胞胞浆染色弱或无,而在基底膜着色缺失的部位,靠近基底膜的肿瘤外周细胞胞浆染色弱或缺失.[结论]LN和FN在基底膜表达缺失与成釉细胞瘤的复发密切相关,可能是成釉细胞瘤局部侵袭的机制之一.

C-Myc/Fas基因转染对人颊癌细胞移植瘤的影响

[目的]探讨C-Myc/Fas基因BcaCD885细胞裸鼠移植瘤内转染的抑瘤效果,了解分子机制.[方法]构建人颊癌BcaCD885细胞裸鼠移植瘤模型,实验动物分3组,每组16只.分别瘤内注射脂质体、脂质体/pBK-fas、以及脂质体/pBK-Fas/pcDNA3-C-Myc共聚物,观测移植瘤增殖,绘制生长曲线.转染72 h后每组处死6只动物,RT-PCR检测移植瘤细胞Fas mRNA表达.流式细胞术(Flow cytometry,FCM)检测Fas蛋白表达和移植瘤细胞凋亡、增殖水平.[结果]Fas转染、C-Myc/Fas共转染抑制肿瘤增殖,生长抑制率分别为47.33%±2.29%和49.93%±5.15%,差异无显著性(P>0.05).Fas转染、C-Myc/Fas共转染增强移植瘤细胞FasmRNA表达,提高Fas蛋白阳性表达率、阳性表达强度和凋亡指数.共转染组增殖指数为65.45%±7.11%,高于对照组和Fas组(53.26%±6.37%和51.93%±7.51%),差异有显著性(P<0.01).对照组和Fas组差异无显著性(P>0.05).[结论]Fas、C-Myc/Fas转染抑制人颊癌细胞裸鼠移植瘤增殖与增强Fas表达、促进细胞凋亡有关.

兔结膜基质诱导人骨髓间质干细胞分化的初步研究

[目的]观察人骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)在保存人羊膜及兔眼表结膜基质上分化的情况.[方法]24只新西兰兔随机分为2组.实验组:培养有人MSCs的羊膜移植组,将人MSCs接种在保存人羊膜上培养4 d,用5-溴脱氧尿嘧啶(BrdU)标记后移植到兔眼表结膜缺损区;对照组,单纯羊膜移植组.分别于移植后1,2,3,4,6和8周,摘取各组实验眼行组织学和免疫组织化学检查,组织学检查移植到兔结膜基质的MSCs的存活、形态变化以及移植局部的反应等情况;免疫组织化学检测移植到结膜基质的带有BrdU标记的细胞角蛋白3/12(CK3/CK12)和角蛋白13(CK13)的表达.[结果]MSCs接种到羊膜后能在羊膜上生长,与羊膜共培养4 d后,MSCs贴附羊膜生长迅速,组织学特征无明显改变.用羊膜负载MSCs移植到兔结膜缺损区,术后免疫组织化学检测结膜上皮层CK13表达阳性,CK3/CK12表达阴性,在重建的结膜上皮层可检测到BrdU核阳性细胞,未见异常增殖细胞.[结论]人羊膜可作为MSCs的载体,采用人羊膜负载MSCs行兔结膜移植,MSCs能在兔结膜上皮层存活并增殖.

浅表性和浸润性膀胱癌微环境中树突状细胞的变化及意义

[目的]研究树突状细胞(Dc)在不同类型膀胱移行细胞癌及癌旁组织中的变化以及与肿瘤病理分级的关系,探讨恶性肿瘤免疫逃避的可能机制.[方法]将133例膀胱移行细胞癌病理标本按WH0标准进行病理分级,按1987年国际抗癌协会(UICC)标准进行临床分型(浅表和浸润),应用免疫组化法检测病理标本中Dc.[结果]133例标本中肿瘤Dc数目明显少于瘤旁组织(G116.85±1.1,G29.45±2.17,G32.99±1.19 vs G121.8±4.78,G221.71±4.72,G320.00±5.49,P<0.01)并随肿瘤病理分级的增加而减少,相同病理分级浅表性膀胱癌实质内Dc数目(G210.79±1.69;G34.79±0.67)明显多于浸润性膀胱癌实质内Dc数目(G27.52±1.0;G32.46±0.66),其差别具有统计学意义(P<0.01);肿瘤旁组织Dc数目在不同肿瘤病理分级、临床分型的标本中差别无统计学意义(P>0.05).[结论]Dc仅在机体有炎症或肿瘤时作为抗原递呈者出现;肿瘤内Dc数目的减少是恶性肿瘤逃避机体的免疫监视和排斥的一个可能机制;浸润性膀胱癌容易转移可能与瘤内Dc数目及活性过度下调和Dc过早凋亡有关.

用Taqman MGB探针研究中国人群TNF-α基因启动子区单核苷酸多态性

[目的]了解中国人群肿瘤坏死因子α(the tumour necrosis factor α,TNF-α)基因启动子区多态性.[方法]随机选取20名深圳地区汉族健康体检者,采用两对引物PCR扩增TNF-α基因启动子区(-1389nt～+125 nt),对PCR产物进行序列分析,寻找单核苷酸多态性位点(single nucleotide polymorphisms,SNPs).采用Taqman MGB探针建立了-857nt(C/T)位点的实时定量PCR(the real-time PCR)分型方法,并对中国汉族、壮族、布依族,水族及苗族群体共1 108份样本进行了基因分型.[结果]在启动子区(-1322nt～+67 nt),发现6个SNP位点,即-885(A/G)、-863(C/A)、-646(G/A)、-648(G/A)、-568(G/C)和-857(C/T,其中位点-646 nt(G→A)为新发现SNP.-885、-648及-568nt位点碱基虽然与Genbank不同,但测序的20个个体基因分型相同.中国人群-857nt(C/T)位点基因型频率分别为0.79(CC),0.19(CT)和0.02(TT),中国汉族、壮族、布依族,水族及苗族群体间无显著性差异.中国人群-857T等位基因频率为0.116,与文献报道的韩国人群相同,但比日本人群低.[结论]中国人群TNF-α基因启动子区单核苷酸多态性可能较保守.采用Taqman MGB探针实时定量PCR技术对SNPs进行基因分型简便、快速及准确,易于自动化,为大规模的疾病相关性研究提供了有效的工具.

自发高血压大鼠心肌肥厚与心室颤动阈值的关系

[目的]探讨自发高血压大鼠心肌肥厚与心室颤动阈值的关系.[方法]20只雄性自发高血压大鼠,随机分成10周龄组(n=10)和18周龄组(n=1O);10只10周龄雄性Wistar大鼠为对照组.分别测定3组大鼠的动脉收缩压、心脏质量指数、心室有效不应期和心室颤动阈值.[结果]①自发高血压大鼠的动脉收缩压和心脏质量指数明显高于Wistar大鼠(P<0.001),心室颤动阈值明显低于Wistar大鼠(P<0.001);②自发高血压大鼠中,18周龄自发高血压大鼠的动脉收缩压和心脏质量指数明显大于10周龄自发高血压大鼠(P<0.001),心室颤动阈值明显低于10周龄自发高血压大鼠(P<0.001);③不同周龄自发高血压大鼠和Wistar大鼠之间,心室有效不应期没有明显差异(P>0.05);④Wistar大鼠中心脏质量指数与动脉收缩压及心室颤动阈值均无明显相关关系,不同周龄自发高血压大鼠中,心脏质量指数与动脉收缩压及心室颤动阈值均呈明显相关关系:动脉收缩压和心脏质量指数与心室颤动阈值呈负相关(P<0.001);⑤心脏质量指数、动物周龄和种类是影响心室颤动阈值的主要因素(P<0.001).[结论]肥厚心肌的心室颤动阈值降低;动脉收缩压愈高,心肌肥厚程度愈明显,心室颤动阈值愈低.

罗格列酮对压力超负荷大鼠血流动力学及心肌肥厚的影响

[目的]探讨过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)配体罗格列酮对压力超负荷大鼠血流动力学及心肌肥厚的影响.[方法]30只SD大鼠随机分为假手术组(n=9)和压力超负荷模型组(n=21),应用腹主动脉缩窄的方法制作压力超负荷模型,将制作模型后24 h仍存活的16只大鼠随机分为压力超负荷(PO)组(n=7)和罗格列酮(PO+Ros)组(n=9).罗格列酮组给予罗格列酮3 mg/(kg·d)共8周.8周后测定血流动力学;称量心脏质量;放射免疫分析方法测量血浆肾素活性、血管紧张素Ⅱ和醛固酮.[结果]与PO组相比,PO+Ros组动脉血压降低(P<0.05);±dp/dtmax升高(P<0.05);心脏质量指数和左室质量指数降低(P<0.05);血浆肾素活性、血管紧张素Ⅱ、醛固酮和胰岛素及血糖水平无明显差异(P>0.05).[结论]PPARγ配体改善压力超负荷性心肌肥厚和左室舒缩功能,降低动脉血压,其效应与血浆肾素血管紧张素系统无明显关系.

分化型甲状腺癌的多因素预后分析

[目的]探讨影响分化型甲状腺癌(differentiated thyroid carcinoma,DTC)预后的因素.[方法]回顾性收集1985年1月1日至1997年12月31日在中山大学肿瘤防治中心治疗的分化型甲状腺癌581例,对其预后进行单因素和多因素分析.[结果]581例分化型甲状腺癌的5、10、15年生存率分别为93.6%、87.5%和80.6%.单因素分析显示影响分化型甲状腺癌预后的因素有性别、年龄、肿瘤大小、T分期、远处转移、治疗方式、复发和临床病理分期,P<0.05,病理类型、淋巴结转移对预后无显著性影响,P>0.05.Cox多因素分析表明T分期、治疗方式和临床病理分期是影响分化型甲状腺癌预后的独立因素.[结论]性别、年龄、肿瘤大小、T分期、复发、远处转移和临床病理分期是影响分化型甲状腺癌预后的主要因素,其中T分期、治疗方式和临床病理分期为独立的预后因素.

后路多轴螺钉-棒系统经侧块与椎弓根固定寰枢椎

[目的]探讨后路多轴螺钉-棒系统经侧块与椎弓根固定寰枢椎疗效.[方法]11例患者接受C1后弓和(或)侧块与C2椎弓根多轴螺钉-棒系统固定融合术.男8例,女3例.C1-2脱位7例,肿瘤2例,C1Jefferson骨折并横韧带断裂及C2齿突及椎弓骨折脱位各1例.9例有不同程度的脊髓压迫症表现.根据JOA评分平均为13.9分.所有患者术前行X线片、CT平扫与三维重建和MRI检查.[结果]10例C1采用经后弓和侧块固定,1例直接侧块固定.C2经椎弓根固定.所有螺钉位置良好,骨折与脱位复位固定满意,肿瘤切除后固定牢固,无并发症.11例获平均13个月随访,X线片显示寰枢关节无复位丢失,全部患者获得坚固融合.神经功能JOA评分改善率为79.3%.[结论]个性化选择显露和进钉方式,能保证C1与C2椎弓根螺钉植入的安全性与准确性.后路多轴螺钉-棒系统经椎弓根固定C1-2疗效满意.

多导人工耳蜗植入后电极阻抗和ECAP的变化及意义

[目的]观察人工耳蜗植入后不同时间段的电极阻抗和电诱发复合动作电位(ECAP)阈值的变化,探讨其对调试间隔的指导意义.[方法]对17例植入人工耳蜗的患儿术中及术后30 d开机时、开机使用10、20、30、40、50、60、90、150 d的电极阻抗值和ECAP阈值进行观测和分析.[结果]术中和术后30 d开机两个时间点与其它各时间点的阻抗值的差异有极显著意义;第22号电极的阻抗值与第2、4、6、8、10、12号等电极的差异有显著性意义,余电极间差异无显著性;电极2、4、6、8、10、12等的术中ECAP阈值与术后30 d开机时的ECAP阈值的差异有显著意义.[结论]人工耳蜗植入电极的阻抗在开机使用后10 d有急速的下降,开机使用30 d时达低值,但ECAP阈值的变化不明显;如果电极的阻抗和ECAP阈值在开机使用后2个月均变化不大,可以根据患者的表现适当推迟下次调试的时间.

那格列奈对2型糖尿病患者空腹游离脂肪酸的影响

[目的]探讨那格列奈对初诊2型糖尿病患者空腹游离脂肪酸的影响.[方法]42例从未进行降糖及降脂药物治疗的初诊2型糖尿病患者,随机分为那格列奈组及瑞格列奈组各21例,测定空腹游离脂肪酸(FFA)及空腹血糖(FPG)、标准餐后2 h血糖(2hPG)、血脂谱,次日行静脉葡萄糖胰岛素释放试验(IVG-IRT)后,分组给予那格列奈60～90 mg或瑞格列奈0.5～1.0 mg,双盲治疗12周后,重复前述检查.[结果]37例完成试验,那格列奈组(18例)空腹FFA从(0.47±0.18)mmol/L下降到(0.36±0.16)mmol/L,平均下降(0.11±0.21)mmol/L(P<0.05),瑞格列奈组(19例)空腹FFA无显著变化,那格列奈组比瑞格列奈组空腹FFA降低有明显差异.两组患者血脂谱无明显变化,治疗后FPG、2hPG、HbA1c及胰岛素抵抗指数较治疗前均有明显下降(P<0.05),胰岛B细胞功能指数(HOMA-B)、IVG-IRT 10 min内急性胰岛素反应(AIR)均有明显增加(P<0.05),组间比较无明显差异(P>0.05).[结论]那格列奈有降低空腹游离脂肪酸的倾向,其机制可能独立于改善胰岛功能之外.

肌萎缩侧索硬化症SOD1基因突变特点

[目的]探讨中国南方人群肌萎缩侧索硬化症铜锌超氧化物岐化酶(Cu/Zn superoxide dismutase;SOD1)基因突变的特点.[方法]采用SOD1基因的5对引物对4个家系的15例家族性肌萎缩侧索硬化症(FALS)患者、56例散发性肌萎缩侧索硬化症(SALS)患者和46例正常对照DNA进行PCR扩增,重复三次应用单链构象多态性方法分析各外显子的多态性.[结果]SOD1基因的5个外显子未发现异常泳动.[结论]中国南方人群肌萎缩侧索硬化症患者可能不存在SOD1基因第1～5号外显子突变或突变率极低,可能存在其他位点的基因突变.

丙型肝炎病毒包膜蛋白E2的原核表达及鉴定

[目的]构建丙型肝炎病毒(HCV)包膜蛋白E2基因的重组原核表达质粒,并获得E2蛋白的高效表达.[方法]通过RT-PCR法从HCV RNA阳性的血清标本中扩增出HCV E2区基因595 bp,PCR产物分别经BamH I和HindⅢ双酶切后连接到经同样酶切的原核表达载体PET22b(+)上,转化大肠杆菌DH5α菌株,获得阳性重组质粒PETB,阳性质粒转化BL21(DE3),IPTG诱导表达,表达产物经SDS-PAGE和Western blot鉴定.[结果]成功地克隆了HCV E2区基因,构建了其原核表达质粒,并在BL21(DE3)菌中表达HCV E2重组蛋白,Western blot显示表达蛋白具有抗原性.[结论]HCV E2重组蛋白的表达和鉴定为进一步了解HCV糖蛋白E2的功能及其与CD81二者的相互关系打下基础.

托槽对上切牙菌斑中变形链球菌影响的定量研究

[目的]对粘结托槽前后菌斑中变形链球菌数量的差异进行定量研究.[方法]采用自身对照法.每个患者分两阶段取样:粘结托槽前和粘结托槽后4周:取样牙位包括上4个切牙.设计针对变链菌的特异性引物和MGB探针,应用实时荧光定量PCR技术测定每毫克菌斑样本中变链菌的数量.[结果]同一患者粘托槽前后变链菌数值分别为5.31×106/mg和6.35×106/mg,其差别有统计学意义(P=0.0025).[结论]患者粘结托槽后,菌斑中变链菌密度的明显升高,可能是正畸治疗中白垩斑发生率较高的原因之一.

恶性实体瘤患者外周血细胞因子诱导的杀伤细胞增殖与杀瘤活性

[目的]探讨恶性实体瘤患者外周血来源的细胞因子诱导的杀伤细胞的增殖能力、免疫表型及杀瘤活性.[方法]用rhIFN-γ,rhIL-2,Anti-CD3mAb与恶性实体瘤患者外周血单个核细胞共孵育.分别在培养第4、7、10、13天进行细胞计数,通过流式细胞术检测细胞免疫表型及MTT法检测对K562细胞的杀伤活性.[结果]恶性实体瘤患者外周血单个核细胞与rhIFN-γ,rhIL-2,Anti-CD3mAb孵育4、7、10、13 d,细胞数分别增加(2.5±1.6)、(11.9±3.5)、(22.3±7.8)和(29.5±6.1)倍.CD3+、CD4+、CD8+和CD3+CD16+CD56+细胞在培养第13天分别从(62.8±7.6)%、(31.5±5.8)%、(44.9±8.2)%和(1.3±1.1)%增加到(89.3±9.5)%、(50.1±7.2)%、(57±9.0)%和(37.0±12.7)%.对K562细胞的杀伤效应在第4、7、13天分别为(23.6±8.5)%、(56.4±7.2)%和(80.1±4.5)%.[结论]rhIFN-γ,rhIL-2和Anti-CD3mAb诱导恶性实体瘤患者外周血单个核细胞活化为以CD3+CD16+CD56+为主的细胞因子诱导的杀伤细胞,细胞增殖力强,并对K562细胞有强大的杀伤活性.

用全染色体涂抹探针进行卵母细胞第一极体荧光原位杂交

[目的]建立用全染色体涂抹探针(WCP)对卵子第一极体进行荧光原位杂交(FISH)检测染色体的方法.[方法]收集单精子卵胞浆内注射(ICSI)中不成熟卵母细胞经体外培养成熟和常规试管婴儿(IVF)中未能成功受精的成熟卵母细胞,活检第一极体,固定后行13、14号染色体的全染色体涂抹探针荧光原位杂交.活检后,一部分卵母细胞固定行FISH以分析卵子自身的13、14号染色体,其余行ICSI受精,观察受精和卵裂情况.[结果]共获得成熟母细胞93个,成功活检85个,成功固定78个,共29个第一极体处于分裂中期,均有FISH结果.卵母细胞体外培养成熟后立即取极体进行固定,90.5%(19/21)的极体处于分裂中期,而取卵后30～48 h和72 h后活检的第一极体处于分裂中期的比例分别为27.3%(6/22)和11.4%(4/35),3组相比有统计学差异(P<0.01).11个卵母细胞同时获得了极体和相对应卵细胞的FISH结果,其中10个极体和相对应的卵细胞分别有1条13,14号染色体,剩余1个卵母细胞的极体有2条14号染色体和1条13号染色体,相对应的卵细胞仅有1条13号染色体,二者互补.活检后行ICSI受精的卵母细胞受精率为78.6%(11/14),优质胚胎率45.5%(5/11).[结论]全染色体涂抹探针对卵子第一极体进行遗传分析可以有效、准确地推测相对应卵母细胞的染色体构成,从而应用于女性染色体易位患者的植入前遗传诊断.

无血清培养基中成釉细胞瘤细胞的生长特性

[目的]研究成釉细胞瘤细胞在无血清培养基中的生长特性,建立成釉细胞瘤细胞的无血清培养法.[方法]用Defined Keratinocyte-SFM(DK-SFM)无血清培养基和DMEM培养成釉细胞瘤细胞,观察细胞的生长特性、细胞形态和传代次数,流式细胞仪(FCM)测定S期细胞比率(SPF)和增殖指数(PI).[结果]在DK-SFM培养基中,细胞传代6次,平均生长92 d;细胞形态清晰,仅见少许散在的成纤维细胞生长;SPF值为12.3%～14.5%,PI值为11.6%～15.3%.在DMEM中,细胞传代3次,平均生长61 d;细胞境界不清,并可见较多的成纤维细胞;SPF值为7.9%～9.2%,PI值为8.3%～9.6%.[结论]成釉细胞瘤细胞在DK-SFM无血清培养基中存活时间长,DK-SFM较DMEM更适合体外培养成釉细胞瘤细胞.

中山大学医学部走过辉煌的2005年

弓形虫核酸(DNA)免疫系列研究

本系列研究筛选了弓形虫(Toxoplasma)速殖子表膜主要抗原(SAG1或P30)及分泌排泄抗原棒状体蛋白基因(ROP1),并将二者拼接构建复合基因(SAG1/ROP1),对其进行扩增、克隆、表达,制备真核表达质粒,接种小鼠,研究其免疫保护效应,为弓形虫核酸疫苗的研制提供有积极意义的科学根据.

原位心脏移植(7例报告)

[目的]总结7例心脏移植经验,探讨心脏移植的近远期疗效.[方法]1998年10月至2005年4月施行7例原位心脏移植,7例均为心肌病,其中5例为扩张型,2例为限制型,手术方法采用标准法4例、双腔静脉法3例,供心平均冷缺血时间为(167.4±22.1)min,术后定期行心内膜活检,使用四联免疫抑制剂.[结果]第1例存活5 d,死于低心排及主动脉内球囊反搏(IABP)的并发症,第4例存活18月,死于中-重度的急、慢性并存的排斥反应,余5例至今存活,至今存活时间分别为6年9个月、5年6个月、1年7个月、10个月、3个月.[结论]心脏移植是治疗终末期心脏病的有效手段,处理好术后并发症,密切监测和处理排斥反应,能取得良好的近远期疗效,长期生存病例需特别注意慢性排斥反应的发生.