中山大学学报（医学科学版）杂志
Journal of Sun Yat-sen University(Medical Sciences) 중산대학학보（의학과학판）
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高糖对人晶状体上皮细胞缝隙连接细胞间通讯的影响
[目的]研究高糖对人晶状体上皮细胞缝隙连接细胞通讯活性(GJIC)的影响.[方法]将人晶状体上皮细胞(SRA01/04)培养于正常葡萄糖浓度(5.5 mmol/L),传代时将其接种于16个35 mm的培养皿中,实验分为4组(每组4个培养皿):正常糖浓度组(培养基葡萄糖含量是5.5 mmol/L)、高糖组(培养基葡萄糖含量是30 mmol/L)、佛波酯(TPA)组(阳性对照)及二甲基亚砜(DMSO)组(阴性对照).当细胞生长至90%融合时,用划痕荧光染料示踪技术(SL/DT)检测其缝隙连接细胞间通讯活性.[结果]在高糖培养的人晶状体上皮细胞划痕荧光黄向两侧传递的细胞列数为2.23±0.33,明显少于正常糖浓度培养的人晶状体上皮细胞(3.75±0.57,P＜0.01).TPA显著抑制晶状体上皮细胞的GJIC,与正常糖浓度组比较差异具有显著性(1.65±0.26vs3.75±0.57,P＜0.01).[结论]人晶状体上皮细胞缝隙连接细胞间通讯活性在高糖中受到抑制,可能在糖尿病晶状体渗透水肿和离子代谢紊乱中发挥作用.
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胰岛素对生长期长骨成骨细胞增殖及受体后P44/42MAPK活性的影响
[目的]研究胰岛素对生长期长骨成骨细胞增殖影响及受体后作用机制.[方法]用四唑蓝比色法和蛋白质免疫印迹法观察不同浓度胰岛素对成骨细胞增殖和胞内P44/42MAPK及其磷酸化的变化.[结果]胰岛素对成骨细胞的促增殖作用具浓度和时间依赖性,10-7mol/L时促增殖作用强,96 h后细胞增殖进入平台期.用不同浓度胰岛素急性刺激成骨细胞各组的p4/42MAPK表达量差别无统计学意义(P＞0.05),但P44/42MAPK磷酸化程度随加入胰岛素浓度的增高而增强(组间P＜0.05);经胰岛素慢性处理后的各组的P44/42MAPK表达量仍差别无统计学意义(P＞0.05),但P44/42MAPK磷酸化程度却随着胰岛素浓度的升高而呈逐渐下降趋势(组间P＜0.05).[结论]胰岛素能以生长因子样的作用呈剂量依赖性的方式刺激成骨细胞生长,但高胰岛素状态以及长时间的胰岛素作用后此种增强效应消失.其受体酪氨酸蛋白激酶介导的MAPK信号途径参与了促成骨细胞的生长增殖的作用.
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小鼠体外发育与体内发育成熟卵子胞浆成熟度和细胞骨架比较
[目的]体外培养小鼠窦前卵泡得到成熟卵子,比较其与体内发育成熟卵子直径、谷胱甘肽含量、皮质颗粒分布以及纺锤体结构的差异,评估胞浆成熟度对卵子发育潜能的影响.[方法]选择出生10 d小鼠,分离窦前卵泡,培养后得到326个M Ⅱ期卵子作为体外发育组.8～10周雌鼠经孕马血清和绒毛膜促性腺激素注射得到244个M Ⅱ卵子作为体内发育组.酶法检测卵子谷胱甘肽含量,免疫荧光染色,共聚焦显微镜成像显示纺锤体形态和皮质颗粒分布.[结果]体外发育成熟卵子直径(69.6±5.7)μm,明显小于体内发育成熟卵子直径(84.2±3.0)μm;体外发育成熟卵子谷胱甘肽含量(4.3±0.7)pmol明显低于体内发育成熟卵子(6.1±1.0)pmol;50个体外发育成熟卵子中18个(36%)皮质颗粒周边分布,40个体内发育成熟卵子中36个(90%)皮质颗粒周边分布(P＜0.05);14个(28%)体外发育卵子出现无皮质颗粒区,34个(85%)体内发育成熟卵子出现无皮质颗粒区(P＜0.05);120个体外发育成熟卵子中46个(38.3%)显示正常桶状纺锤体,84个体内发育成熟卵子中80个(95.2%)显示正常桶状纺锤体(P＜0.05).[结论]体外发育成熟卵子胞浆成熟度没有达到体内发育成熟卵子水平.
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华支睾吸虫乙醛脱氢酶基因的克隆、表达和序列分析
[目的]通过筛选华支睾吸虫成虫cDNA质粒文库,发现并识别新基因,将发现的新基因编码区克隆到原核表达质粒pGEX-4T-1并表达出融合蛋白.[方法]用文库通用引物对华支睾吸虫cDNA质粒文库进行PCR扩增,对产物为500 bp以上的质粒测序,结果在NCBI和ExPasy网站上进行序列分析,并应用ORFfind、ClustalW、NCBI Conserved Dom ain Search等程序对其进行开放阅读框(ORF)、进化树及结构域分析.根据载体多克隆位点及新基因ORF设计引物,PCR扩增,产物克隆到目的载体上.筛选并鉴定出阳性克隆,对鉴定过的重组体进行诱导表达,表达产物经SDS-PAGE电泳鉴定.[结果]发现CsALDH基因,完整阅读框含1467个碱基,编码489个氨基酸,理论相对分子质量Mr≈52.564×103,理论pI为5.43.序列分析表明,CsALDH基因编码的氨基酸序列与其它物种有较高的同源性,CsALDH与爪蛙属乙醛脱氢酶的同源性为59%,具有乙醛脱氢酶保守功能域.构建的重组原核表达质粒经鉴定与目标基因相符.电泳显示表达产物在Mr≈78×103处有一条特异性条带.[结论]发现华支睾吸虫磷酸甘油醛脱氢酶基因,成功构建重组原核表达质粒并表达出融合蛋白.
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CEA启动子启动双自杀基因与单自杀基因对Lovo细胞杀伤作用的比较
[目的]探讨CEA启动子(CEA promoter,Cp)启动的双自杀基因胞嘧啶脱氨酶(cytosine deaminase,CD)与胸苷激酶(thymidine kinase,TK)组织特异性对Lovo结肠癌细胞杀伤作用是否优于单一自杀基因.[方法]以带有Cp、CD与TK的重组腺病毒转染的Lovo细胞作为实验组,未转染者为对照组,5-氟胞嘧啶(5-fluorocytosine,5-Fc)组系列质量浓度:10、8、6、4、2、0μg/mL;更昔洛韦(ganciclovir,GCV)组系列质量浓度:5、4、3、2、1、0μg/mL;两药联合应用的系列质量浓度:(10+5)、(8+4)、(6+3)、(4+2)、(2+1)、0μg/mL.光镜观察细胞形态,噻唑蓝法测定细胞生长抑制率(growth inhibition rate,GIR)及半数抑制浓度(IC50).病毒转染的Lovo细胞与未转染的Lovo细胞按不同比例混合培养,给予5-Fc5μg/mL或/和GCV 10μg/mL,噻唑蓝法测定细胞GIR.[结果]对照组5-Fc与GCV对细胞的生长抑制作用极低,5-Fc组IC50为2 400 μg/mL,GCV组为3 500μg/mL.实验组随5-Fc与GCV剂量增加,对细胞的杀伤作用明显增加,5-Fc组IC50为5.75μg/mL,GCV组为3.50 μg/mL,两者同时应用相当于5-Fc1.90 μg/mL+GCV 0.95 μg/mL,细胞对5-Fc的敏感性提高417.4倍,对GCV的敏感性提高1 000倍.病毒杀伤Lovo细胞具有明显的"旁观者"效应,联合应药组的"旁观者"效应明显高于单独应用组.[结论]双自杀基因细胞毒效应以及"旁观者"效应均高于单一自杀基因.
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中国汉族人群TGFβ1基因-509C/T多态性及其IgA肾病的病例对照研究
[目的]探讨转化生长因子β1(TGFβ1)基因-509C/T多态性与中国汉族人群IgA肾病的相关关系.[方法]PCR-RFLP鉴定基因型,采用病例-对照与临床病理资料分析的方法,并行病例追踪随访.[结果]①387例IgA肾病病人的3种基因型与203例正常人对照组相比,分布频率无统计学意义,P＞0.05.②临床资料显示:年龄、性别、血压、血尿、蛋白尿、血清IgA水平等临床指标中任何基因型的分布频率无统计学意义,P＞0.05.③病理资料显示:CC基因型在肾小球中重度系膜增生病人中有较高的出现频率,而TT基因型相应明显减少,P＜0.01;CC基因型在肾小球硬化组的分布频率显著增加,P＜0.05.④进一步的病例追踪随访显示:CC基因型和C等位基因的IgA肾病病人尿蛋白好转率明显低于其它基因型,P＜0.05.[结论]中国汉族人群中,TGFβ1基因-509C/T多态性可能与较重的肾损害、肾小球硬化、尿蛋白转归相关;但和IgA肾病的遗传易感性不相关.
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瘢痕性喉狭窄瘢痕组织中弹性纤维和胶原纤维分析
[目的]了解喉狭窄瘢痕组织中弹性纤维,Ⅰ型/Ⅲ型胶原纤维的含量和形态特征.[方法]喉部分切除术后瘢痕性喉狭窄13例患者的喉瘢痕组织为实验组及15例正常声带组织为对照组,分别进行苏木精-伊红染色,胶原纤维、弹性纤维复合染色,及Ⅰ、Ⅲ型胶原苦味酸一天狼猩红染色,全自动图像分析系统下观察和计算.[结果]喉狭窄瘢痕组织中,细胞外基质排列紊乱,胶原纤维增多,弹性纤维含量(0.178±0.066)较正常声带中弹性纤维含量(0.374±0.055)明显减少(P＜0.001);喉狭窄瘢痕组织Ⅰ型胶原的含量(0.382±0.199)较正常声带中Ⅰ型胶原含量(0.147±0.073)增加明显(P＜0.05);喉狭窄瘢痕组织Ⅰ型/Ⅲ型比值(3.98±0.88)较正常声带组织(1.01±0.37)大(P＜0.001).[结论]弹性纤维及Ⅰ、Ⅲ型胶原纤维形态特征和含量改变可能是导致喉部分切除术后瘢痕性喉狭窄的病理基础.
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己酮可可碱对TGF-β1诱导的腹膜间皮细胞胶原ⅠmRNA表达及细胞外信号调节激酶活性的影响
[目的]探讨己酮可可碱对转化生长因子-β1诱导的大鼠腹膜间皮细胞胶原Ⅰ mRNA表达及细胞外信号调节激酶活性的影响.[方法]用逆转录-聚合酶链反应检测腹膜间皮细胞胶原Ⅰ mRNA表达,用Western blot 检测磷酸化细胞外信号调节激酶.[结果]①0.3 mg/mL己酮可可碱与对照组相比,可下调胶原ⅠmRNA表达32%(P＜0.01),其抑制作用呈时间依赖性关系,作用16 h抑制作用达高峰(0.790vs 0.426,P＜0.001).②TGF-β1可诱导腹膜间皮细胞胶原Ⅰ mRNA表达上调(132.00vs 592.00,P＜0.001),以及磷酸化细胞外信号调节激酶表达增加(201.67vs 682.00,P＜0.001).③己酮可可碱可抑制TGF-β1诱导的腹膜间皮细胞胶原Ⅰ mRNA表达上调(0.945vs 0.594,P＜0.01),并可逆转TGF-β1诱导的磷酸化细胞外信号调节激酶表达增加(682.00vs 426.00,P＜0.001),其抑制作用呈剂量依赖关系.[结论]己酮可可碱可下调腹膜间皮细胞胶原ⅠmRNA的基础表达及TGF-β1诱导的过度表达,同时可逆转TGF-β1诱导的腹膜间皮细胞细胞外信号调节激酶活性增加.
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瘦素基因Codn25(CAA/CAG)和G-2548A变异与肥胖症易感性的关系
[目的]观察瘦素基因变异[codn25(CAA/CAG)、G-2548A]与中国人肥胖及其临床表型的关系.[方法]用PCR-RFLP方法,对271例中国南方汉族人,其中正常组66例、Ⅰ度肥胖组153例和Ⅱ度肥胖组52例,进行瘦素基因2个变异的基因型分析.[结果]①在女性Ⅱ度肥胖亚组中的Codn25 CAA/CAG基因型及CAG等位基因频率明显高于正常组(P＜0.05);②肥胖患者中腰围的变化在G-2548A不同的基因型中有明显差异(F=6.259,P=0.015),A/A纯合子组的腰围显著低于A/G、G/G基因型组;③在不同的基因型分组中,两个基因变异对临床表型的影响相互间没有协同性.[结论]①瘦素基因Codn25(CAA/CAG)基因型与女性Ⅱ度肥胖者密切相关,提示该基因变异对肥胖易感性的影响存在着肥胖度及性别的差异;②瘦素基因G-2548A的变异则与肥胖人群的腹部脂肪分布相关;③两个瘦素基因变异之间对肥胖的临床影响没有明显的协同效应.
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压力对体外培养髁突软骨细胞增殖、凋亡的影响
[目的]观察压力对体外培养SD大鼠髁突软骨细胞增殖、凋亡以及合成蛋白多糖的影响,探讨压力与软骨退变之间的相互关系.[方法]在一个大气压基础上,分别对3组体外培养髁突细胞进行加压-10kPa、10kPa,20kPa(5%CO2),以未加压组作为对照,用四唑盐法(MTT法)和流式细胞技术分别检测各组标本在加压3 h和加压24 h后细胞增殖、凋亡的情况;应用硫酸-咔唑法检测各组标本在加压3 h和加压24 h后蛋白多糖的含量.[结果]加压3 h后,各加压组与对照组相比,细胞的增殖、凋亡以及蛋白多糖含量无明显变化;加压24 h后,压力值为20kPa时可以明显拟制增殖,并诱导髁突软骨细胞发生凋亡增加,蛋白多糖含量明显减少.[结论]长时间的异常压力负荷可使髁突软骨细胞增殖减缓、凋亡增加,蛋白多糖含量减少,诱发或加重关节软骨退变.
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活化巨噬细胞培养上清液对VSMCsⅠ型胶原合成的影响
[目的]观察活化巨噬细胞培养上清液对原代培养VSMCs Ⅰ型胶原代谢的影响.[方法]体外原代培养大鼠血管平滑肌细胞并制备活化巨噬细胞培养上清液,L-3H脯氨酸掺入法和RT-PCR检测不同浓度和作用时间的巨噬细胞培养上清液对VSMCs的胶原合成和Ⅰ型胶原mRNA表达的影响.[结果]活化巨噬细胞培养上清液促进VSMCs的胶原合成,L-3H脯氨酸掺入量明显增加,呈剂量相关性,r=0.48(P＜0.05);Ⅰ型胶原mRNA表达随浓度和时间增加而上升,r值分别为0.58(P＜0.05)和0.55(P＜0.05).[结论]活化巨噬细胞分泌促进VSMCs胶原代谢,呈时间和剂量相关性,这可能是支架植入术后血管内膜过度增生的重要机制之一.
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抑制核因子-κB对糖尿病大鼠肾组织MT3-MMP mRNA表达的影响
[目的]研究抑制NF-κB活性对糖尿病大鼠肾组织膜3型基质金属蛋白酶(MT3-MMP)mRNA表达的影响.[方法]纯种雄性Wistar大鼠分为3组:A组为正常对照组(11只),B组为糖尿病大鼠未干预组(11只),C组为吡咯烷二硫基甲酸酯(PDTC,NF-κB活性抑制剂)干预组(9只).以链脲佐菌素制备糖尿病模型.大鼠饲养18周后取出肾脏,以电泳迁移率变动分析技术检测NF-κB活性,RT-PCR检测MT3-MMP mRNA表达,以透射电镜检测肾小球基底膜厚度及系膜基质密度,并收集24 h尿检测尿白蛋白排泄(UAE).[结果]NF-κB活性在B组大鼠肾组织(1.85±0.54)×106明显高于A组(0.07±0.11)×106,P＜0.01,C组(0.25±0.25)×106明显低于B组,P＜0.01.肾组织MT3-MMP mRNA表达B组大鼠(1.37±0.96)明显高于A组(0.75±0.34),P＜0.01,C组(0.75±0.36)明显低于B组(P＜0.01).与A组大鼠比较,肾小球基底膜厚度(531.6±107.6)nm vs (312.4±25.4)nm,P＜0.01)及系膜基质密度(56.41±6.78) vs (33.95±5.22),P＜0.01,均显著增高,C组肾小球基底膜厚度(315.8±21.4)nm及系膜基质密度(37.97±7.37)均显著低于B组,均P＜0.01.UAE在B组大鼠(2.18±1.98)显著高于A组(0.41±0.47),P＜0.05,以及C组(0.56±0.72),P＜0.05.[结论]糖尿病大鼠肾组织NF-κB活性及MT3-MMP mRNA表达增加,抑制NF-κB活性可使肾组织MT3-MMP mRNA表达降低.
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1～6 月龄TX小鼠铜代谢和肝损害情况研究
[目的]研究不同月龄TX小鼠的铜代谢情况、肝脏功能和病理学损害特点,为以TX鼠为模型的研究在选择不同月龄动物方面提供适合的时间点.[方法]选取1～6月的每月龄TX小鼠和同系DL小鼠雌雄各3只,分别作为病例组和对照组,测定肝、脑、肾、血清中的金属铜含量,测定血清铜蓝蛋白及谷草转氨酶等指标,肝脏标本HE染色观察组织病理学改变,电镜下观察超微结构.[结果]TX小鼠自第2月起肝、脑的干体质量铜含量较对照组明显增高(P＜0.05),肝脏增高幅度更甚,至4月龄时两组差异尤为显著,同期肾铜增高及血清铜降低与对照组相比有统计学意义(P＜0.05);血清铜蓝蛋白明显降低;转氨酶的升高以第5月时为著;病理改变光镜下主要为变性坏死,胞核空泡样变,电镜下见线粒体、溶酶体中大量电子致密物沉积,以第4月时重.[结论]理想的Wilson病模型和肝损害动物模型,症状前治疗的探索可选用1月龄的TX鼠,出现临床症状后治疗的探索应选用2月龄小鼠,病情高峰时期的实验可考虑选用4、5月龄的动物.
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FTY720在大鼠肾脏缺血再灌注损伤中的作用
[目的]研究新型免疫抑制剂FTY720对大鼠肾脏缺血再灌注损伤(IRI)的作用.[方法]制备大鼠肾脏IRI模型,从下腔静脉注入不同剂量的FTY720,观察术后第1、2、3、5、7天血清肌酐(SCr)和术后第2、7天外周血淋巴细胞数(PLC)的变化,并在术后第2天取肾脏作组织学检查观察急性肾小管坏死的情况.[结果]FTY720处理组动物术后SCr水平显著低于对照组并呈剂量依赖性;FTY720处理组术后第2天的PLC显著低于对照组;组织学检查显示FTY720处理组肾脏的缺血性损伤轻于对照组.[结论]FTY720可以减少PLC,可有效减轻大鼠肾脏IRI.
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腺病毒载体介导的VEGF基因转染对C17.2神经干细胞凋亡的影响
[目的]探讨重组腺病毒介导血管内皮生长因子(VEGF)165基因对缺氧状态下对神经干细胞凋亡的作用.[方法]体外培养C17.2神经干细胞,建立神经干细胞缺氧模型;将携带人类VEGF基因的重组腺病毒感染C17.2神经干细胞;Western-blot法检测VEGF蛋白的表达;流式细胞术测定细胞凋亡率;Hoechst33342染色荧光显微镜观察凋亡小体.[结果]转染pAdCMV VEGF165的C17.2神经干细胞成功表达VEGF蛋白;缺氧后神经干细胞凋亡率为(19.98%±0.55%),转染pAdCMV VEGF165后的细胞凋亡率为(10.38%±0.48%,P＜0.01),而转染pAdCMV VEGF165+VEGF反义寡核脱氧核酸经干细胞凋亡率为(19.07%±0.64%),与对照组无显著差异(P＞0.05).[结论]腺病毒介导的VEGF165基因能成功表达VEGF;外源性VEGF对C17.2神经干细胞具有抗凋亡作用,能够提高C17.2神经干细胞对缺氧的耐受性,有利于神经干细胞的生存.
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基因重组蛇毒纤溶因子rFII理化特性及纤溶能力的研究
[目的]研究重组蛇毒纤溶因子的理化特性和纤溶能力.[方法]SDS-PAGE及高效液相法分析重组蛇毒纤溶因子rFII相对分子质量、纯度,等电聚焦分析其等电点;纤维平板和SDS-PAGE检测重组蛇毒纤溶因子对纤维蛋白及纤维蛋白原的水解能力.[结果]重组蛇毒纤溶因子rFII是一个相对分子质量在28 000,等电点9.0的碱性蛋白酶.它水解纤维蛋白原的Aα、Bβ、γ亚基,水解能力随时间和浓度的增加而增加.它对纤维蛋白的水解能力比相同浓度下的纤溶酶强4倍.[结论]rFII是一种高效的水解纤维蛋白原和纤维蛋白的碱性蛋白酶.
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非病毒载体介导的基因转染效率及其对人舌鳞癌细胞生长增殖的影响
[目的]观察多种非病毒载体介导增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因在舌鳞癌细胞内的表达情况,评价各载体的转染效率及其对细胞生长增殖的影响.[方法]采用pEGFP-N1评估阳离子脂质体、聚酰胺-胺型树枝状高聚物(PAMAM-D)以及SuperFect纳米微粒在舌鳞癌Tca8113细胞中的转染效率;绘制生长曲线,计算细胞的相对存活率,流式细胞仪检测细胞增殖与凋亡.[结果]第5代(G5)PAMAM-D的转染效率明显高于第2代(G2)PAMAM-D(42.1%vs 19.4%,P=0.003),与SuperFect和脂质体转染组的结果无统计学差异(42.1%vs35.9%和42.1%vs47.7%,P＞0.05).G5 PAMAM-D对细胞的生长增殖无明显影响(P＞0.05),而脂质体转染组细胞的生长增殖受到明显的抑制(P=0.001),细胞凋亡水平升高(P=0.01).[结论]G5 PAMAM-D载体安全低毒,转染效率高,是一种有良好应用前景的新型纳米载体基因转移系统.
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美托洛尔对心力衰竭大鼠心脏β3肾上腺素能受体mRNA表达水平的影响
[目的]探讨心力衰竭大鼠心脏β3肾上腺素能受体(β3受体)mRNA表达,以及β受体阻滞剂美托洛尔对其的干预效果.[方法]28只大鼠随机分为假手术组(n=10)和心力衰竭组(n=18),主动脉缩窄法建立心衰模型.3个月后心力衰竭组存活16只分为心衰对照组,美托洛尔组,每组8只.美托洛尔组以美托洛尔6 mg·kg-1·d-1口服灌注,心衰对照组灌注等量生理盐水.口服灌注3个月后检测血流动力学,心室质量指数及RT-PCR方法测定心室β3受体mRNA表达.[结果]与假手术组比较,心衰对照组大鼠心率明显增快(P＜0.05),左室收缩末压、左室内压大收缩和舒张速率的绝对值显著降低,左室舒张末压显著增高(P均＜0.01).美托洛尔组大鼠血流动力学参数明显改善(P＜0.01).与假手术组比较,心衰对照组大鼠心室质量指数明显增加,美托洛尔组大鼠较心衰对照组明显下降(P＜0.01).心衰对照组、美托洛尔组心室β3受体mRNA表达明显高于假手术组(P＜0.01),但心衰对照组、美托洛尔组之间比较无统计学意义(P＞0.05).[结论]心衰大鼠心脏β3受体mRNA表达明显增加.美托洛尔可以改善心衰大鼠的血流动力学,明显抑制心室重塑,但对心室β3ARmRNA表达无显著影响.
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重组Persephin腺病毒对6-OHDA损伤神经干细胞的保护作用
[目的]探讨Persephin对6-羟基多巴(6-OHDA)损伤神经干细胞的保护作用.[方法]用RT-PCR法从人胚胎脑获得Persephin cDNA,构建重组Persephin腺病毒.用Western blot方法分析Persephin基因的表达,Hoechst染色和流式细胞术测定6-羟基多巴对神经干细胞凋亡的诱导作用.[结果]从人胎脑成功克隆了人Persephin cDNA,构建了其腺病毒载体.Western blot证实重组Persephin腺病毒在神经干细胞中的表达,表达的Persephin可抑制6-羟基多巴诱导的神经干细胞凋亡.[结论]Persephin对6-羟基多巴损伤神经干细胞具有保护作用.
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慢性乙肝患者停用拉米夫定后出现肝功能衰竭的危险因素
[目的]研究慢性乙型病毒性肝炎(chronic hepatitis B,慢性乙型肝炎)患者停用拉米夫定后出现肝功能衰竭的危险因素.[方法]停用拉米夫定治疗后复发的慢性乙型肝炎患者71例纳入研究,记录治疗前病程、诊断、拉米夫定疗程,用拉米夫定前、停用时和复发后的生化指标、免疫学指标、病毒学指标及YMDD变异、前C区变异,按复发后的诊断分为肝功能衰竭组和慢性乙型肝炎组进行比较.[结果]肝功能衰竭组患者中位年龄38.0岁,大于慢性乙型肝炎组31.5岁(Z=3.49,P＜0.01);年龄(Wald=10.13,P＜0.05)和拉米夫定治疗前诊断为失代偿性肝硬化(Wald=7.61,P＜0.05)都是停药反跳后出现肝功能衰竭的独立危险因素.肝功能衰竭组服拉米夫定前总胆红素异常患者20.0%(x=16.50,P＜0.01),停拉米夫定后未随访者86.7%(x2=17.57,P＜0.01),停拉米夫定时未出现Anti-HBe阳转者85.2%(x2=8.04,P＜0.01),复发时HBV DNA载量3.0×108±4.8×108(Z=4.46,P＜0.01),前C区联合YMDD变异者56.0%(x=11.69,P＜0.01),均高于慢性乙型肝炎组.[结论]拉米夫定治疗前年龄大、总胆红素异常、诊断为失代偿性肝硬化,停药时未发生Anti-HBe阳转,停药后无随访,复发时HBV DNA载量超过1×108拷贝/mL、出现前C区联合YMDD变异可能是停拉米夫定后出现肝功能衰竭的危险因素.
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18F-FDG SPECT/CT显像在鼻咽癌诊断及分期中的价值
[目的]评价18F-FDG符合线路显像同机CT图像融合在鼻咽癌诊断及分期中的价值.[方法]27例鼻咽癌病人(初发12例、放疗后病人15例)和对照组11例进行18F-FDG SPECT显像及同机CT图像融合检查.[结果]①鼻咽部恶性病灶的长径和大面积与L/B比值呈正相关,相关系数分别为0.835和0.815(P＜0.01).②27例患者中,18F-FDG符合显像诊断鼻咽部恶性病灶的敏感性、特异性、准确率分别为100%、86.4%和92.1%;其中鉴别鼻咽癌放疗后的复发或残存分别为100%(4/4)、81.8%(9/11)和86.7%(13/15).③18F-FDG显像准确地检测原发鼻咽癌转移灶,其中2例分期上调,占(2/12)16.7%;3例分期下调,占(3/12)25%.有效地评价15例鼻咽癌病人放疗后的状况,帮助再分期.④同机CT图像融合能提供较准确的定位诊断.[结论]18F-FDGSPECT显像在鼻咽癌诊断及分期中有实用价值,值得临床广泛应用.
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双胎妊娠血清AFP和β-hCG的变化
[目的]探讨双胎妊娠孕母血清甲胎蛋白(AFP)和β-人绒毛膜促性腺激素(β-hCG)的特点、随孕周变化规律和可能的影响因素,为双胎妊娠的产前筛查提供依据.[方法]回顾性分析14～40周182例双胎妊娠孕妇血清AFP值和91例β-hCG值,与同期2 173例单胎妊娠孕妇血清AFP值和2 108例β-hCG值比较,分析两组间的差别及双胎血清AFP和β-hCG与绒毛膜性质、受孕方式、胎儿性别的关系.[结果]双胎妊娠血清AFP和β-hCG与单胎妊娠的变化趋势是一致的.孕14周后,AFP随孕周的增加而升高,β-hCG则随孕周的增加而下降.双胎妊娠的血清AFP和β-hCG比相同孕周的单胎妊娠高,双胎组AFP水平与单胎组的2倍差异有显著性意义,双胎组β-hCG水平与单胎组的2倍无显著性差异.双绒毛膜双胎和单绒毛膜双胎之间、人工受孕和自然受孕双胎之间或不同胎儿性别之间的孕母血清AFP和β-hCG水平没有差别.[结论]用AFP进行双胎血清学筛查不宜根据单胎妊娠数值的2倍建立正常值.绒毛膜性质、受孕方式或胎儿性别对双胎血清AFP和β-hCG水平无影响.
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缺血性坏死股骨头血流的定量测定
[目的]定量研究股骨头缺血性坏死病人的股骨头血流量.[方法]应用氢廓清技术,定量测定11例成人股骨头缺血性坏死病人股骨头前外侧部血流量.[结果]11例病人股骨头前外侧部血流量平均为(0.067 8±0.0167)mL/(min·cm-3).[结论]氢廓清技术可用于股骨头坏死的临床研究,所获得的缺血性坏死股骨头前外侧部血流的定量资料,具有一定的理论意义与参考价值.
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华人遗传性混合息肉病综合征BMPR1A基因种系突变检测
[目的]探讨遗传性混合息肉病综合征华人家系中BMPR1A基因是否存在种系突变.[方法]34个家系成员外周血提取基因组DNA,利用聚合酶链式反应分别扩增BMPR1A基因全部外显子,进行DNA测序与突变分析,对突变外显子PCR扩增产物作变性聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定.[结果]家系12和2所有发病成员BMPR1A基因2号外显子位于codon23处缺失11个碱基(AAAGTCAGAAA),同时2号外显子PCR扩增产物变性聚丙烯酰胺凝胶电泳也发现异常迁移条带,而家系中正常成员的检测未发现这一突变.[结论]两华人HMPS家系中BMPR1A基因缺失突变与疾病共遗传,该基因极可能是HMPS华人家系的致病基因.
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冠心病合并2型糖尿病患者的临床及冠状动脉造影特点
[目的]探讨冠心病合并2型糖尿病患者的临床特征和冠状动脉造影特点.[方法]选择经冠状动脉造影证实的冠心病患者共215例,分为冠心病合并2型糖尿病组(74例,64.7岁±8.2岁)和冠心病非糖尿病组(141例,66.2岁±69.2岁),对比分析两组患者的临床和冠状动脉造影资料.[结果]与冠心病非糖尿病患者比较,冠心病合并2型糖尿病患者更常发生急性心肌梗死、无痛性心肌缺血以及严重心律失常(P＜0.01,P＜0.05),血中甘油三酯、载脂蛋白B、血尿酸增高(P＜0.01,P＜0.05),左室舒张末期内径增大(P＜0.01),左室射血分数降低(P＜0.001).冠心病合并2型糖尿病患者较多发生3支血管病变(P＜0.01),冠状动脉病变多为严重狭窄、完全闭塞以及弥漫性病变(P＜0.001).[结论]冠心病合并2型糖尿病患者临床表现较严重,常有左心功能异常,冠状动脉病变复杂且严重,累及范围广,预后不良.
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2型糖尿病患者肺弥散功能检测分析
[目的]检测2型糖尿病患者的肺通气和弥散功能,探讨肺是否为糖尿病慢性病变的靶器官.[方法]检测107名2型糖尿病患者行肺通气及弥散功能,与61名健康者相比较.糖尿病患者行糖化血红蛋白(HbA1c)、尿白蛋白排泄率(AER)检测、眼底检查以及神经传导速度检查,以评价血糖控制水平以及糖尿病微血管病变状况.具有糖尿病视网膜病变、糖尿病肾病、糖尿病周围神经病变者各记1分,总分以微血管病变积分表示.[结果]2型糖尿病组肺通气功能与正常对照组相比,差异无统计学意义.2型糖尿病组一氧化碳弥散量(DLCO)及单位肺泡容积的一氧化碳弥散量(DLCO/VA)较对照组明显降低(P＜0.05).DLCO、DLCO/VA与微血管病变积分呈负相关(r分别为-0.291、-0.324,P＜0.01).DLCO/VA与年龄、病程呈负相关(r分别为-0.269、-0.236,P＜0.05).糖尿病病程≥10年者与＜5年者相比,DLCO/VA明显下降.2型糖尿病患者微血管病变积分为≥2者与微血管病变积分＜2者相比,DLCO/VA明显下降.[结论]2型糖尿病患者肺弥散功能受损,肺脏可能也是糖尿病慢性病变的靶器官之一.
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TGF-β1壳聚糖缓释微球的制备和体外检测
[目的]通过制备新型的转化生长因子-β1(TGF-β1)缓释系统,并对其载药、体外释药及降解特性进行检测,评估应用生物可降解壳聚糖微球作为TGF-β1控制释放载体的可行性.[方法]应用三聚磷酸钠(TPP)作为交联剂,以乳化交联法制备具有控制释放功能的负载TGF-β1的壳聚糖微球;以牛血清白蛋白(BSA)作为模板蛋白,应用相同的方法制备负载BSA的微球.应用扫描电镜、微镜粒度分、药物包封率测定、体外药物释放动力学检测等方法分析微球的特性.[结果]制备的微球球形良好,球体表面光滑,具有较高的TGF-β1包封效率90.1%).持续7 d的药物释放试验表明,BSA与TGF-β1两种蛋白均可以从微球中缓慢释放,其中TGF-β1的释放率低于BSA的释放率.溶菌酶溶液降解作用下,4周的体外降解过程中,可见微球质量持续下降并伴有明显的微球形貌改变.[结论]应用乳化交联法可制备负载TGF-β1的壳聚糖缓释微球.这种新型药物控制释放系统在细胞因子的控制释放及软骨组织工程中有潜在的应用价值.
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玻璃化冷冻法保存人类胚胎干细胞
[目的]探讨玻璃化冷冻方法保存人类胚胎干细胞的效率.[方法]冷冻保存人类胚胎干细胞,按冷冻方法的不同分为玻璃化冷冻组和慢速冷冻组,比较两组解冻后人类胚胎干细胞的细胞复苏率、克隆生长与分化情况,并比较分析解冻后的与未经冷冻的胚胎干细胞的生长、分化情况,鉴定解冻后人类胚胎干细胞的全能性.[结果]玻璃化冷冻组与慢速冷冻组解冻后的细胞复苏率分别为81.9%和22.8%(P＜0.001).慢速冷冻组解冻后克隆生长较玻璃化冷冻组缓慢且更易分化.两组未分化的胚胎干细胞继续培养的生长与分化情况一致.玻璃化冷冻组解冻后第6代人类胚胎干细胞染色体核型正常,SSEA-4、SSEA-3阳性,表达OCT-4基因.人类胚胎干细胞来源的畸胎瘤包含了来源于3个胚层的组织细胞.[结论]玻璃化冷冻是保存人类胚胎干细胞的有效方法,解冻后的干细胞在继续培养过程中仍可保持其正常核型和全能性.
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诱导正常血管内皮细胞具备肿瘤血管特性的研究
[目的]探讨用肿瘤细胞培养上清液诱导的人脐静脉血管内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)是否具备肿瘤血管内皮细胞的特性,旨在寻找一种简便的方法,解决肿瘤血管内皮细胞不易获得的难题.[方法]HUVEC用含不同浓度人肝癌细胞株HepG2培养上清的条件培养液培养,3-(4,5-二甲基噻唑)-5-(3-羧甲酯基)-2-(4-磺苯基)-2氢-四唑盐法(MTS)检测其增殖率,免疫细胞化学法结合图像定量分析测量血管内皮细胞生长因子受体2(VEGFR2)的变化,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测肿瘤内皮标记物1和8(TEM1、TEM8)的mRNA表达.[结果]含体积分数10%、20%、40%HepG2培养上清的条件培养液培养,HUVEC增殖率分别为71%、89%、109%.HUVEC用含体积分数50%HepG2培养上清液的条件培养液培养后,VEGFR2平均光密度值明显高于对照组(P＜0.05),且TEM1及TEM8呈阳性表达,而对照组不表达.[结论]HepG2上清液促进HUVEC增殖,增殖后的HUVEC具备肿瘤血管内皮细胞的特性.
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甲状腺相关眼病患者眼眶前脂肪细胞的培养及分化
[目的]研究甲状腺相关眼病患者(TAO)眼眶组织中是否存在前脂肪细胞,在一定条件下能否分化为成熟脂肪细胞,探讨脂肪细胞在TAO发病中的作用.[方法]选用TAO患者眼眶中的脂肪颗粒,共8例(8只眼),采用组织块培养法培养细胞,观察细胞形态;细胞免疫组织化学方法检测前脂肪细胞因子-1的表达,初步验证前脂肪细胞的存在;诱导细胞向成熟脂肪细胞分化,油红O染色观察细胞形态及细胞内脂滴形成情况;RT-PCR检测分化过程中转录因子过氧化物酶体增殖体激活受体γ(PPARγ)表达的改变.[结果]原代培养细胞为梭形,增殖旺盛;免疫组化显示前脂肪细胞因子-1表达阳性;细胞可分化为成熟脂肪细胞,并伴有PPARγ基因表达的增强.[结论]TAO患者眼眶组织中存在着功能活跃的前脂肪细胞;进一步验证了脂肪细胞数量的增加在TAO发病中的重要作用.
| 年 | 期数 |
| 2019 | 01 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2017 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2011 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2010 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2009 | 01 02 03 04 05 06 z1 z2 |
| 2008 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2007 | 01 02 03 04 05 06 z1 |
| 2006 | 01 02 03 04 05 06 z1 z2 |
| 2005 | 01 02 03 04 05 06 z1 |
| 2004 | 01 02 03 04 05 06 z1 |
| 2003 | 01 02 03 04 05 06 z1 |
| 2002 | 01 02 03 04 05 06 z1 |
| 2001 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2000 | 01 02 03 04 05 06 Z1 |
| 1999 | 01 02 03 04 |
