bcl-2基因克隆、转染及其在PC12细胞中的表达

[目的] 研究bcl-2基因(bcl-2)在PC12细胞中的表达.[方法] 构建真核表达载体pcDNA3-bcl-2,采用脂质体介导将重组质粒导入PC12细胞,Western blot和原位免疫组化检测外源基因表达.[结果] 本实验成功构建了真核表达载体pcDNA3-bcl-2,并用脂质体介导的方法获得了稳定表达bcl-2的细胞克隆;Western blot显示有26 ku的蛋白质表达,bcl-2单克隆抗体免疫组化染色呈阳性反应.[结论] 重组质粒pcDNA3-bcl-2经转染能够在PC12细胞中有效表达,为进一步研究bcl-2对PC12细胞的生物学功能奠定了基础.

广东菲牛蛭水蛭素基因的克隆和序列测定

[目的] 研究地理因素对水蛭素基因结构变异的影响.[方法] 抽提广东菲牛蛭基因组DNA,根据已发表的水蛭素基因设计一对引物,从基因组DNA扩增出一特异性的大约700 bp片段,再回收、克隆和测序.[结果] 广东菲牛蛭水蛭素基因全长为642 bp,基因有4个外显子,被三个内含子隔开.与马尼拉菲牛蛭水蛭素基因Hm1、Hm2的同源性分别为90%与和88.6%.[结论] 地理因素会影响菲牛蛭水蛭素基因结构的变异.

阿拉瑞林对SD大鼠正位与异位子宫内膜雌孕激素受体的影响

[目的] 观察阿拉瑞林对子宫内膜异位症大鼠异位病灶的抑制作用,研究其对正位与异位子宫内膜雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)的影响.[方法] 27只采用外科诱导法建立的子宫内膜异位症大鼠随机分成模型对照组和阿拉瑞林(alarelin)治疗组,模型组在同等条件下观察4周,阿拉瑞林组以alarelin 30 μg(kg*d)-1皮下注射4周;治疗结束后,用链霉素抗生物素蛋白-过氧化物酶连接法(SP)行正位与异位内膜ER、PR测定.[结果] 阿拉瑞林组大鼠正位和异位子宫内膜生长活动受抑制,异位病灶体积较治疗前明显缩小(P<0.01),异位内膜抑制率为(68±44)%;正位子宫内膜的ER较模型对照组明显下降(P<0.05);正位子宫内膜上皮细胞的ER与异位内膜抑制率呈一定的负相关(r=-0.407,P<0.05).而对异位子宫内膜的ER、正位与异位子宫内膜PR的影响无显著性差异.[结论] 阿拉瑞林对子宫内膜异位症大鼠有显著的治疗作用,其对正位子宫内膜的抑制作用可能通过ER介导,而对异位子宫内膜的抑制作用与异位内膜局部总的ER、PR可能无直接关系;检测正位子宫内膜上皮细胞的ER水平对阿拉瑞林的疗效有一定的预测作用.

多种分离纯化大鼠胰岛细胞的实验方法比较

[目的] 采用不同的分离或消化方法,探讨如何提高大鼠胰岛细胞分离纯化后的收获量和质量.[方法] 将25只供体SD雄性大鼠依胰腺分离或消化的方法不同随机地分为5组:①A组:胆总管灌注胶原酶P;②B组:胆总管灌注Hanks液;③C组:胆总管不灌注液体;A、B、C 3组胰腺直接分次消化;④D组:胆总管不灌注,胰腺剪碎后分次消化;⑤对照组:胆总管灌注胶原酶P,胰腺直接单次消化.将分离的胰岛沉淀物用Ficoll-400纯化并培养,再把胰岛细胞移植于糖尿病裸鼠受体腹腔内.[结果] 纯化后的胰岛细胞在收获量上A和B组明显多于对照组或C组,而D组低;A、B和D 3组的纯度均高于对照组或C组;在胰岛成活率方面,A、B、C 3组均高于对照组或D组.移植于糖尿病裸鼠受体内的大鼠胰岛细胞均可逆转高血糖状态.[结论] 经胆总管灌注胶原酶后的大鼠胰腺用分次消化的方法可提高胰岛细胞的收获量、纯度和活性.

豚鼠过敏性休克IgE和C5复合物分布及c-kit蛋白表达

[目的] 探索过敏性休克法医学客观诊断标准.[方法] 建立豚鼠异种血清过敏性休克模型,采用LSAB免疫组化方法检测模型鼠脏器IgE,c-kit蛋白以及C5复合体的分布.[结果] 过敏性休克豚鼠肝,脾未检出IgE,肺、肾检见大量IgE,胃黏膜层c-kit蛋白阳性细胞明显增多,各脏器均未检测出C5复合物.[结论] 过敏性休克时,肺小血管壁及管周,肾小管内检见大量IgE,可作为法医检案客观诊断标准.同时提示,肺和肾是病变严重的脏器,补体C5未参与异种血清造成的过敏性休克过程.胃黏膜层c-kit蛋白阳性细胞增多可作为辅助诊断指标.

PCR技术对Wilson病基因进行定点突变的研究

[目的] 利用聚合酶链反应(PCR)技术对Wilson病(WD)基因进行体外定点突变的研究.[方法] 采用PCR定点突变技术,首先设计两对引物,将突变位点设计在引物上,通过重叠延伸法两次PCR扩增,扩增片段上含有所需要的突变位点,后将扩增片段克隆入pRc/CMV载体中.[结果] DNA测序表明在预期位点已经发生突变,WD基因第778位密码子由精氨酸(Arg)残基突变为亮氨酸残基(Leu),用PCR定点突变技术成功构建Wilson病基因突变体.[结论] PCR技术诱导定点突变准确、高效.Wilson病基因突变体的构建成功,为进一步研究该突变位点导致Wilson病的发病机制和Wilson病蛋白的结构和功能的关系奠定了基础.

阳离子脂质体介导的外源基因转染小鼠脾细胞的方法学探讨

[目的] 探讨高效阳离子脂质体介导外源基因转染体外生长的小鼠脾细胞的方法.[方法] 用新型阳离子脂质体DOSPER包裹携带lac Z报告基因的质粒pCAGGS-lacZ按3种方法转染小鼠脾细胞,①常规方法直接转染;②脾细胞经刀豆球蛋白A(Con A)活化后再按常规方法转染;③用黏附辅助脂质体法(adhesion-assisted lipofection, AAL)转染脾细胞.转染效率用X-gal染色法测定.[结果] 上述3种方法的转染效率依次为<0.010,0.057及0.199,经方差分析,3种方法转染效率的差异有显著性(P<0.01,n=3).[结论] AAL法介导外源基因转染体外生长的小鼠脾细胞的转染效率高.

线粒体基因ND1/T3394C突变与糖尿病

[目的] 调查线粒体NADH脱氢酶亚单位1(ND1)基因的T3394C位点突变与中国人糖尿病的发病情况.[方法] 随机收集338例无血缘关系的糖尿病患者及262例正常对照组,用聚合酶链反应扩增、限制性内切酶HaeⅢ消化进行突变筛查,DNA序列分析确认.[结果] 糖尿病患者中T3394C突变者共8例(2.37%),正常对照组中只有1例(0.38%,P<0.01).糖尿病突变患者中4例有糖尿病家族史,4例病人由于胰岛素分泌功能下降和/或出现并发症,需用胰岛素治疗.[结论] ND1/T3394C突变在糖尿病患者中的发生率明显高于正常对组,提示这个位点突变可能是导致线粒体糖尿病的易感基因之一.

利用体外定点诱变技术构建人突变型α-L-艾杜糖醛酸酶基因

[目的] 构建突变型α-L-艾杜糖醛酸酶基因(IDUA)cDNA,为体外表达、鉴定突变的性质提供物质基础.[方法] 以野生型pcDNA3-IDUA为基础质粒,采用双引物法体外定点诱变技术,引入突变E404X.[结果] 突变区域经PCR-SSCP和测序证实诱导突变成功.[结论] 本研究成功构建了突变型IDUA cDNA,可用于下游的体外表达;此定点突变技术具有简便、诱变效率高等优点,是体外构建突变型基因的一种有效方法.

白纹伊蚊和致倦库蚊Wolbachia 16S rRNA序列测定与分析

[目的] PCR法扩增与测定白纹伊蚊和致倦库蚊的细胞内共生菌Wolbachia 16S rRNA序列,分析其种系发生关系及传播方式.[方法] 从单只雌蚊中提取DNA,PCR法扩增16S rRNA 序列,扩增产物进行克隆及测序.[结果] 从白纹伊蚊和致倦库蚊分别扩增出Wolbachia 16S rRNA序列,并克隆入pGEM-T载体,测序证明两序列长度分别为897 bp.[结论] 成功克隆了白纹伊蚊和致倦库蚊Wolbachia 16S rRNA序列.测序和同源性分析表明,它们之间的同源性为99.9%,提示Wolbachia在白纹伊蚊和致倦库蚊可能存在水平传播的方式.

电离辐射对大鼠类成骨细胞的影响

[目的] 探讨不同剂量电离辐射后大鼠类成骨细胞生物学性状的改变.[方法] 成骨细胞通过酶消化法从SD大鼠乳鼠颅骨中获取传代;将第2代细胞分别进行0、1、4、6、9 Gy的γ线辐射,检测成骨细胞的增殖、碱性磷酸酶活性和骨钙素分泌量.[结果] 细胞增殖、功能和分化受γ线电离辐射抑制的程度不同,1 Gy时增殖即受到抑制,骨钙素分泌量在4 Gy时才受到显著地抑制,而碱性磷酸酶活性值甚至在6 Gy下抑制作用才有意义.[结论] 电离辐射后,成骨细胞的增殖、功能和分化均受到抑制,但各指标对电离辐射的敏感性不同.

花生四烯酸和二十二碳六烯酸对海马神经细胞生长发育的影响

[目的] 观察不同浓度花生四烯酸(AA)和(或)二十二碳六烯酸(DHA)对体外培养海马神经细胞生长发育的影响.[方法] 无血清培养液中分别加入不同剂量的AA和(或)DHA,采用噻唑蓝比色试验(MTT法)反映各组海马神经细胞存活状况,神经元特异性烯醇化酶(NSE)染色鉴定神经细胞,图像分析技术测量神经细胞的胞体大小和突起长度.[结果] 培养液中分别添加AA为4～8 μmol/L、DHA为2～8 μmol/L时,神经细胞活力高于对照组;当培养液中AA和DHA总浓度为4 μmol/L、比例为2∶1或4∶1时,神经细胞的活力、胞体面积、大长径、大短径和平均突起长度均显著高于单一添加4 μmol/L AA、4 μmol/L DHA和对照组.[结论] AA、DHA均具有促进体外培养海马神经细胞生长发育的作用;与单独添加AA、DHA相比,AA和DHA共同作用的促海马神经细胞生长发育作用更好.

胰岛素启动子因子1基因P239Q突变与中国汉族人2型糖尿病易感性的关系

[目的] 了解胰岛素启动子因子1基因P239Q突变在中国汉族人中的分布情况,以探讨其在2型糖尿病的发生发展中的作用.[方法] 用PCR-RFLP对233例2型糖尿病患者及89例非糖尿病健康志愿者进行该点突变的筛查,对检出阳性者进行家系调查.[结果] 病人组中仅发现1例突变基因携带者,对照组均为阴性,家系研究显示该点突变不与糖尿病共分离.[结论] 该点突变在中国汉族人(包括2型糖尿病患者)中相当少见.该突变不与糖尿病共分离,且在非糖尿病者中亦可被检出,推测其可能作为一种修饰基因,与其它位点的突变共同作用,促进糖尿病发生.

脑立体定向损毁中央中核、杏仁核治疗癌性顽痛

[目的] 应用脑立体定向技术,对顽固癌痛进行有效治疗,并探讨癌性顽痛的发生机制.[方法] 使用安柯ASA-602型定向仪,对46例癌痛患者分别采用CT直接定位,MR成像定位及脑室造影确定大脑原点等不同方法,对颅内阴性靶点进行三维成像,确定靶点位置并用射频对其进行损毁,并与38例长期口服吗啡类止痛药物的同类患者进行对照.[结果] 46例不同晚期癌痛病人中,手术组术后疼痛控制43例,疼痛缓解3例;药物组疼痛控制3例,缓解35例(χ2=54.16,P<0.01).[结论] 立体定向丘脑中央中核、杏仁核损毁术操作简单、创伤小、易于推断靶点位置,对癌性顽痛止痛效果明显优于传统药物治疗.

血清孕酮水平对体外受精-胚胎移植结局的影响

[目的] 探讨注射人绒毛膜促性腺激素(HCG)日血清孕酮水平对体外受精与胚胎移植(IVF-ET)结局的影响.[方法] 回顾分析2000年2月至2001年1月947个IVF-ET周期的资料.[结果] 在控制性超排卵中,按注射HCG日血清孕酮浓度不同分3组,依次为≤2.86 nmol/L(0.9 ng/mL)组、>2.86 nmol/L～≤9.54 nmol/L(3 ng/mL)组、>9.54 nmol/L组,IVF-ET的种植率分别为22.20%、19.75%、11.83%,临床妊娠率分别为45.91%、42.40%、26.53%.孕酮>9.54 nmol/L组的种植率及临床妊娠率比其它组低,经χ2检验,有统计学意义.[结论] HCG注射日血清孕酮明显升高时,IVF-ET的种植率及临床妊娠率明显下降.

小剂量环孢素合并糖皮质激素治疗多发性硬化

[目的] 探讨环孢素(Cs)治疗多发性硬化的疗效.[方法] 将59例多发性硬化患者随机分成两组:30例采用小剂量Cs(5 mg*kg-1*d-1)合并激素治疗(治疗组),29例单用激素治疗(对照组),疗程1年.治疗后每月统计扩充致残量表(EDSS)评分,治疗前后统计脑脊髓MRI的总病灶数、检查脑干诱发电位(BAEP)和视觉诱发电位(VEP). [结果] 治疗组EDSS评分逐渐下降,治疗后3个月开始显效,1年后效果更好,脑MRI病灶数减少(P<0.01),BAEP和VEP的异常明显改善,疗效优于对照组(P<0.05).治疗组病情轻～中度者疗效好.[结论] Cs治疗多发性硬化效果良好,副作用少.疗效与治疗时间长短、病情轻重有关.

金瓷全冠与天然牙切缘抗压强度的比较

[目的] 探讨和比较金瓷全冠及天然牙切缘的抗压强度,预防瓷折裂.[方法] 制作15个前牙金瓷全冠,挑选15个离体前牙,测定其折裂时的强度.[结果] 金瓷全冠切缘抗折力为1200 N(122 kg),抗压强度为600 MPa.天然牙切缘抗折力为530 N(54 kg),抗压强度为265 MPa.[结论] 金瓷全冠切缘的抗压强度大于天然牙切缘的抗压强度.瓷折裂除意外撞伤外,大多数是因为设计和制作缺陷造成的.

垂直型球帽状精密附着体在牙列缺损修复中的应用

[目的] 探讨垂直型球帽状精密附着体在牙列缺损修复中的应用.[方法] 对9例牙列缺损成年患者进行垂直型球帽状精密附着体钢托义齿修复,每件义齿设计两副垂直型球帽状精密附着体,观察附着体义齿的固位稳定性、咀嚼能力及痛点缓冲情况.[结果] 垂直型球帽状精密附着体钢托义齿固位稳定性好、能进行有效的咀嚼、压痛点少、美观、舒适.[结论] 垂直型球帽状精密附着体是一种较理想的牙列缺损修复的固位体.

狼疮肾炎与妊娠的相互影响

[目的] 探讨狼疮肾炎与妊娠的相互影响.[方法] 回顾性分析242次与狼疮肾炎有关的妊娠,研究狼疮肾炎病程和妊娠结果间的相互影响.[结果] 患狼疮肾炎的妇女妊娠成功率低,新生儿存活率仅30%,显著低于无狼疮肾炎组(90%, P<0.01),而死胎(产)的比例(39%)显著高于无狼疮肾炎组(3%, P<0.01).有49%的妊娠伴有狼疮肾炎加重.[结论] 选择适当受孕时机和积极控制狼疮肾炎活动是提高狼疮肾炎妇女妊娠成功率的关键.

脑膜瘤端粒酶的活性在判断复发和恶变中的价值

[目的] 探讨端粒酶作为脑膜瘤标志物,在肿瘤良恶性鉴别、恶性程度评估以及预后预测等方面的意义.[方法] 利用TRAP-ELISA方法定量检测61例(份)肿瘤标本端粒酶的活性(以ΔA=A450-A690表示),结合肿瘤的分类和患者的临床资料,分析端粒酶活性作为肿瘤良恶性及判断预后的标记物的可行性.另取正常脑组织标本20例作为对照.[结果] 30例脑膜瘤中,29例脑膜瘤均未测到端粒酶活性;1例端粒酶阳性(阳性率3.3%),ΔA=0.237;全组ΔA平均值=0.049.15例恶性脑膜瘤中14例呈端粒酶阳性(93%),ΔA=1.237～2.516;1例端粒酶阴性,ΔA=0.076,全组ΔA平均值=1.630.16例复发性脑膜瘤端粒酶均阳性(100%),ΔA=1.034～1.478,平均1.255.脑膜瘤和复发性脑膜瘤、脑膜瘤和恶性脑膜瘤的端粒酶的阳性率和酶活性表达强度方面差异明显(P分别为<0.001、<0.01和<0.0005、<0.01).20例正常脑组织中未检测到端粒酶活性.[结论] 端粒酶活性的激活在恶性脑膜瘤和复发性脑膜瘤中是较常见的现象.端粒酶作为肿瘤标志物,在脑膜瘤的良恶性鉴别、恶性程度评估、预后预测等方面具有重要的意义.

前列腺癌肿瘤微环境树突状细胞与T细胞免疫的关系

[目的] 了解前列腺癌组织树突状细胞与肿瘤微环境T细胞免疫的关系.[方法] 对22例前列腺癌组织和周围正常前列腺组织用S100、CD3、CD21和CD14 mAb分别作SP免疫组化染色,光镜下对阳性细胞计数并计算细胞指数,对癌组织S100+和CD3+细胞指数行相关性分析.[结果] 前列腺癌组织和正常组织可观察到S100+ DCs和CD3+ T细胞分布,而CD21+ B细胞和CD14+单核/巨噬细胞均少见.癌组织中S100+ DCs指数和CD3+ T细胞指数均明显少于周围正常组织(P<0.05),癌组织S100+ DCs指数与CD3+ T细胞指数呈正相关(r=0.86,P<0.05).[结论] DCs是前列腺癌肿瘤微环境中的主要抗原提呈细胞,癌组织DCs数量减少可能与前列腺癌肿瘤微环境T细胞免疫功能低下有关.

前牙形态大小与正畸治疗后拥挤复发的关系

[目的] 了解前牙形态大小及接触点对正畸治疗后前牙拥挤复发的影响.[方法] 以正常牙合作对照,测量分析104例矫治前前牙拥挤、矫治后以及维持后2.4年牙模,测量其前牙不整齐指数(IRID)、尖牙间宽度及计算其下切牙牙冠近远中径/唇舌径(MD/FL)比值,观察前牙区相邻牙之间接触形式.[结果] 临床排列整齐(IRID≤1.5 mm)者,切牙MD/FL比值正常或偏小,临床排列不整齐(IRID＞3.5 mm)者,切牙MD/FL比值偏大;旋转牙矫治后邻牙间以点接触形式居多,排列整齐的正常牙合及矫治后未复发的患者上下前牙邻接区为面接触.[结论] MD/FL比值偏大,前牙间点接触是导致矫治后不稳定因素之一.

经皮激光心肌血运重建术治疗心绞痛的临床疗效观察

[目的] 观察经皮激光打孔心肌血运重建术治疗顽固性心绞痛的临床疗效.[方法] 应用经皮激光(HO:YAG laser)心内膜心肌打孔治疗27例顽固性心绞痛患者,以加拿大心绞痛标准分级和Naughton运动试验ST段下移至1 mm所需时间作为激光心肌血运重建术疗效的临床观察指标.[结果] 每例打孔5～15个,平均(8±4)个.打孔前和打孔后1月、3月、6月按加拿大心绞痛标准分级,分别为(3.5±0.5)、(2.2±0.8)、(2.0±0.6)、(2.1±0.5)级;Naughton运动试验ST段下移至1 mm所需时间则分别为(360±160) s、(406±260) s、(420±290) s、(450±312) s.[结论] 经皮激光打孔心肌血运重建术能降低患者心绞痛的严重程度,对不能常规施行经皮冠状动脉腔内成形术(PTCA)或冠状动脉旁路搭桥术(CABG)的严重冠心病心绞痛的患者,经皮激光心肌血运重建术是一种有效治疗方法.

入住疗养院者骨质疏松患病及防治状况研究

[目的] 探讨美国圣路易斯州入住疗养院者骨质疏松的患病及防治状况.[方法] 用定量超声骨密度测定仪测量217例入住疗养院者(年龄42～102岁,平均83.3岁)右侧跟骨的骨密度,结合病史及病历记录情况,对入住疗养院者骨质疏松防治状况进行分析.[结果] 入住疗养院者的骨密度低于同年龄段的社区居民,骨质疏松的患病率较高(58.5%) ,只有18.4%的疗养院入住者跟骨骨密度在青年成人骨密度均值1个标准差内.未诊断的骨质疏松占83.5%,未治疗骨质疏松占63.0%,只有37.0%的骨质疏松患者服用钙剂及/或维生素D治疗,用雌激素替代或用阿伦二膦酸盐积极治疗的仅有3.1%.[结论] 疗养院入住者骨密度低、骨质疏松患病率高,但防治状况差.

深静脉血栓形成患者血浆部分抗凝物质的检测及其临床意义

[目的] 研究深静脉血栓形成(DVT)患者血浆蛋白C(PC)、蛋白S(PS)活性水平、活化蛋白C抵抗(APCR)和狼疮样抗凝物(LA)阳性率,进一步探讨它们与静脉血栓形成间的关系.[方法] 用凝固法在Sysmex CA 1500、CA 6000全自动血凝仪上检测38例DVT患者和40名正常对照的血浆PC、PS活性、活化蛋白C反应性和LA.[结果] 治疗前DVT组PC、PS活性分别为(70±23)%、(76±25)%,与对照组相比差异均有极显著性意义(P＜0.01),治疗后DVT组PC、PS活性分别为(96±15)%、(98±20)%,与对照组相比差异均无显著性意义 (P＞0.05).DVT组APCR阳性率为21%,明显高于对照组2.5%(P＜0.05),DVT组LA阳性率为2.6%,与对照组相比差异无显著性意义(P＞0.05).[结论] DVT患者血浆PC、PS活性呈消耗性降低,经治疗可逐渐恢复正常.LA与DVT患者血栓形成无关,APCR是DVT患者血栓形成的高危因素.

孕期吸烟与先天性唇腭裂关系的Meta分析

[目的] 探讨孕期吸烟与先天性唇腭裂发生的关系.[方法] 采用Meta分析法对收集到的国内外有关先天性唇腭裂与孕期吸烟关系的研究进行综合的定性和定量研究.[结果] 先天性唇腭裂与孕期吸烟存在相关关系,先天性唇腭裂(CLP)、唇裂伴或不伴腭裂(CL±P)以及腭裂(CP)与孕期吸烟关系的合并优势比(ORc值)分别为1.369,1.387,1.269.[结论] 该研究结果显示孕期吸烟可增加先天性唇腭裂发生的危险性.

抗菌药物治疗活动期慢性溃疡性结肠炎的Meta分析

[目的] 评价抗菌药物辅助治疗活动期中、重度慢性溃疡性结肠炎的疗效.[方法] 对有关抗菌药物辅助治疗活动期中、重度慢性溃疡性结肠炎的前瞻性临床试验进行Meta分析.[结果] 抗菌药物辅助治疗的有效率比安慰剂高9%～28%,平均高18%,效率差异有显著性(P<0.0001).[结论] 抗菌药物辅助治疗活动期中、重度慢性溃疡性结肠炎有临床应用价值.

让心脏暂停跳动26 min切除肝癌

第二届全国生存质量学术会议纪要

鸡蛋壳粉植入兔下颌骨缺损的初步研究

骨缺损修复材料的研究已经有不少了[1～3],但是廉价且实用的并不多.为寻找一种廉价实用且效果好的骨缺损修复替代材料,满足临床应用需要,我们选择鸡蛋壳粉植入新西兰白兔下颌骨缺损区进行初步研究.