中山大学学报（医学科学版）杂志
Journal of Sun Yat-sen University(Medical Sciences) 중산대학학보（의학과학판）
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Aβ1-15多价DNA疫苗的构建及其对体液免疫的效果
[目的]构建Aβ1-15多价DNA疫苗,研究其诱导体液免疫的效果.[方法]基因合成和PCR技术扩增以多个甘氨酸连接的Aβ1-15二价基因片段;在N端引物延伸加上IgG κ轻链信号肽序列;GSGGSGlinker再串连两段Aβ1-15二价基因片段,克隆入pcDNA3.1表达载体,构建pcDNA3.1-s4×Aβ15真核表达质粒;质粒转染COS-7细胞,Western blot检测4×Aβ15的表达;质粒肌肉注射接种BALB/c鼠,共6次,18周加强免疫,ELISA法检测抗体效价以及抗体分型;免疫组织化学和Aβ42肽抗原的中和实验检测抗血清与转基因鼠Tg2576脑切片中老年斑的特异结合.[结果]测序证实所构建的pcDNA3.1-s4×Aβ15载体序列正确,在COS-7细胞中表达分子质量约8 ku的分泌型4×Aβ15蛋白.pcDNA3.1-s4×Aβ15疫苗于第2次加强免疫后产生Aβ抗体,随加强免疫次数增多,抗体滴度增加,在19周,抗体平均滴度为1:6 400,抗体以IgG1型为主,且可以与转基因鼠Tg2576脑切片中的老年斑免疫结合并被Aβ42肽抗原的中和.[结论]所构建的pcDNA3.1-s4×Aβ15疫苗可在小鼠体内产生高效价的Aβ抗体,为下一步免疫老年性痴呆转基因动物的研究提供条件.
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微低温超极化停跳对犬心肌细胞线粒体的保护作用
[目的]从心肌细胞线粒体改变的角度,比较超极化停跳和去极化停跳(钾停跳)的心肌保护效果.[方法]18只纯种比格犬,体质量8.5～15 kg,随机分为实验组和对照组,实验组10例,对照组8例.全麻后建立体外循环模型.阻断主动脉后从主动脉根部灌注停跳液20 mL/kg,全心缺血45 min后,恢复灌注60 min.实验组的停跳液为温血(34℃)尼可地尔(含尼可地尔400 μmol/L),对照组的停跳液为传统的4℃高钾停跳液(含钾22 mmol/L),停跳后两组心脏均局部冰敷以保持低温.心脏停跳期间若出现心电活动,则追加停跳液首量的三分之一.在主动脉阻断前、主动脉阻断40 min、主动脉开放30 min,用活检针穿刺取右室全层心肌行电子显微镜检查,每个标本随机选取6个视野照片,用图象分析系统分析计算线粒体的面积和周长,并计算得出线粒体体积密度、比表面和单位面积线粒体计数.检验水准α=0.05.[结果]两组中各有1例因主动脉阻断不全而被剔除,其它各例在实验中均无须追加停跳液.每组3个时间点之间、两组间线粒体的体积密度(volumedensity,V/V)、比表面(R8v)和单位面积线粒体计数的变化均无统计学意义(P＞0.05).[结论]在我们的实验方案下,超极化停跳和高钾停跳都能有效地保护心肌细胞线粒体,且两种方法具有相似的保护效果.
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PDX-1对成肌细胞株C2C12分化为胰岛素分泌细胞的作用
[目的]探讨PDX-1对成肌细胞株C2C12分化为胰岛素分泌细胞的作用.[方法]将C2C12细胞分别经过不同浓度的类胰高血糖素(GLP-1)诱导120 h后,瞬间转染胰腺十二指肠同源框(PDX-1)基因,用RT-PCR检测PDX-1的表达,流式细胞仪、放射免疫法检测细胞内和培养基中是否存在胰岛素.[结果]GLP-1可以直接诱导C2C12细胞表达PDX-1;PDX-1瞬时转染C2C12细胞后,胰岛素分泌细胞阳性率比值(1.19±0.10)、培养基中的胰岛素含量(2.45±1.48)×10-6U/mL均明显升高(P＜0.05);单独的40 nmol/L GLP-1诱导与瞬间转染PDX-1相比,阳性率比值及胰岛素浓度的差别均无统计学意义.[结论]GLP-1可以诱导C2C12表达PDX-1,而且PDX-1可以促进C2C12分泌胰岛素.提示GLP-1诱导C2C12分化为胰岛素分泌细胞可能与PDX-1有关.
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骨髓间充质干细胞诱导分化为心肌细胞及其内向整流钾电流特征
[目的]体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)分化为心肌细胞并探讨其内向整流钾电流(Ik1)特征.[方法]采用密度梯度离心法和贴壁培养法分离、纯化大鼠骨髓MSCs,在第3代细胞以5-氮杂胞苷进行诱导,用免疫细胞化学染色和RT-PCR方法鉴定诱导细胞,并采用全细胞膜片钳技术检测Ik1表达.[结果]诱导后细胞体积较诱导前增大,呈长梭形.14 d后细胞之间出现连接,排列方向渐趋一致.免疫细胞化学染色显示Desmin、αt-sarcomeric actin和心肌特异性cTnI呈阳性反应,RT-PCR结果表明诱导细胞有心肌β肌球蛋白重链表达.诱导细胞Ik1表达呈明显的不均一性,部分细胞Ik1与正常心室肌细胞相似,但Ik1电流密度总体上低于正常心室肌细胞.[结论]5-氮杂胞苷能在体外诱导MSCs向心肌细胞分化;诱导细胞Ik1表达不均一性提示可能有致心律失常潜能.
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血管内皮生长因子及受体在大鼠衰老肾脏的表达
[目的]研究血管内皮生长因子(VEGF)及其受体(VEGFR)在大鼠衰老肾脏的表达及探讨它们在肾脏衰老中的作用.[方法]取3月龄、12月龄大鼠作为对照组,24月龄大鼠作为观察组各6只,提取其肾脏组织的RNA,应用逆转录聚合酶链反应技术(RT-PCR)检测肾脏组织内VEGF mRNA转录水平,以及应用免疫组化技术检测肾小球VEGF和VEGFR蛋白的表达;应用酶联免疫法检测肾组织培养液的VEGF总含量.[结果]3、12、24月龄的大鼠VEGF总的含量(g/L)分别为126.49±32.29,95.14±49.17,79.21±61.17,P=0.048.3、12、24月龄的大鼠VEGF mRNA表达量(g/L)分别是0.821±0.132,0.713±0.143,0.678±0.126,P=0.012.24月龄组VEGF mRNA和VEGF总含量较3、12月龄两组减少(P＜0.05);24月龄大鼠肾小球VEGF和VEGFR-2的表达较3、12月龄两组减弱.[结论]证实了随着增龄大鼠肾组织VEGF mRNA转录水平和VEGF含量减少,肾小球VEGF-VEGFR的表达量也随着增龄而减少.肾小球VEGF-VEGFR系统在肾脏衰老过程中起到重要的作用.
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C端序列的删除对非出血重组蛇毒纤溶酶的影响
[目的]研究C端序列对非出血重组纤溶酶(rFⅡ)特异性、活性和热敏感性的影响.[方法]通过SOEing PCR方法构建删除C端序列的突变体,突变体和rFⅡ分别在P.pastoris中诱导表达.表达和纯化的蛋白用SDS-PAGE和Westeren blot进行鉴定.之后分析其生化特性.[结果]rFⅡ及突变体通过SDS-PAGE和Westeren blot得到证实.生化分析揭示:①突变体对显色底物N-(p-Tosyl)-Gly-Pro-Lys-pNA的催化效率(Kcat/Km)是rFⅡ的1.9倍;②突变体和rFⅡ对氧化的胰岛素B链拥有共同的优先裂解位点,可是在随后的裂解中开始展现差异;③突变体显示了更高的纤(原)活性;④热处理表明突变体相较r FⅡ对温度的增加更敏感;⑤通过圆二色谱测量,突变体的螺旋比例有所增加.[结论]删除的序列参与rFⅡ的特异性、活性和热敏感性,该序列可作为下一步优化的候选序列.
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Wnt/β-catenin通路在鼻咽癌分化中的作用
[目的]探讨Wnt/β-catenin通路的枢纽分子β-catenin和β-catenin/Tcf复合体在不同分化程度鼻咽癌中的表达,进而阐明Wnt/β-catenin通路对鼻咽癌分化的作用.[方法]采用免疫组化方法检测13例鼻咽粘膜慢性炎症和74例不同分化类型的鼻咽癌组织中β-catenin的表达;转染野生型和突变型Tcf荧光素酶报告质粒,检测β-catenin/Tcf复合体在高低分化鼻咽癌细胞株中的含量.[结果]β-catenin在鼻咽癌中的异常表达主要出现在细胞浆内过表达.在角化性鳞癌、分化型非角化性癌中β-catenin胞浆内的过表达相对少,而在未分化癌中胞浆内累积明显增多.未分化癌与角化性癌、未分化癌与分化型非角化性癌相比较,β-catenin的表达有统计学差异,P值分别为0.0195和0.0003.通过检测转染后荧光素酶活性发现β-catenin/Tcf复合体在低分化鼻咽癌细胞株(CNE-2和HONE-1)中的表达是高分化鼻咽癌细胞株(CNE-1)的80～123.6倍.[结论]低分化鼻咽癌细胞比高分化鼻咽癌细胞有更高水平的胞浆内β-catenin和核内β-catenin/Tcf的表达,说明前者的Wnt/β-catenin通路比后者明显地处于更高的活化状态中,提示Wnt/β-catenin通路可能在抑制鼻咽癌细胞的分化中起重要作用.
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编码绿色荧光蛋白和βARKct的重组腺病毒的制备
[目的]制备编码绿色荧光蛋白(GFP)和Gβγ活性抑制剂βARKct的重组腺病毒载体.[方法]构建腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV-βARKct,经PmeI线性化后转化入含腺病毒骨架质粒pAdEasy-I的BJ5183菌,筛选获得重组腺病毒质粒pAdEasy-gfp-βARKct.用LipoFectamine 2000将经PacI线性化的pAdEasy-gfp-βARKct转染入人胚肾293细胞,包装并扩增出重组腺病毒颗粒rAd-gfp-βARKct.用氯化铯高速梯度离心、纯化rAd-gfp-βARKct.用rAd-GFP-βARKct干预去甲肾上腺素诱导的乳鼠心肌细胞肥大过程,观察对β肌球蛋白重链(βMHC)基因表达的影响.[结果]将pAdTrack-CMV-βARKct转入含pAdEasy-I的BJ5183菌后获得20%的阳性重组体克隆.重组腺病毒质粒在293细胞中包装并扩增出大量的腺病毒,经PCR鉴定含有βARKct编码基因.透析纯化得到重组腺病毒滴度为6.0×106 pfu/mL.rAd-GFP-βARKct表达的βARKct可抑制乳鼠心肌细胞βMHC的高表达.[结论]成功构建重组腺病毒载体,并在293细胞中包装、制备出可表达βARKct的重组腺病毒rAd-gfp-βARKct.
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癌基因BMI-1对中心体复制的调节作用
[目的]探讨BMI-1在中心体扩增中的作用.[方法]通过磷酸钙转染法在细胞中高表达野生型、带有Myc-tag的Myc-BMI-1质粒及两个BMI-1的RNAi序列,Western blot检测BMI-1蛋白的表达,免疫荧光观察中心体数目的变化.[结果]首先检测了抗BMI-1抗体特异识别重组和内源性BMI-1蛋白;高表达BMI-1于HeLa和MCF-7细胞中导致中心体的扩增;在Cos7和U2OS中因RNAi降低BMI-1翻译而抑制了中心体的扩增.[结论]癌基因BMI-1在中心体复制扩增的调节中起着重要的作用.
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姜黄素对MPP+诱导PC12细胞凋亡的保护作用及其与iNOS的关系
[目的]观察姜黄素(curcumin,Cur)对MPP+诱导的PC12细胞凋亡的保护作用,并且探讨其与iNOS关系.[方法]采用碘化丙啶(PI)染色流式细胞术(FCM)检测PC12细胞凋亡,间接免疫荧光FCM检测PC12细胞iNOS的表达.[结果]PC12细胞自然凋亡率为(1.5±0.1)%,0.5 mmol·L-1MPP+作用24 h后,PC12细胞凋亡率为(59.5±2.7)%;20μmol·L-1Cur和0.1 mmol·L-1特异性iNOS抑制剂氨基胍(aminoguanidine,AG)对PC12细胞作用24 h后无明显凋亡诱导作用,但分别使0.5 mmol·L-1MPP+处理组细胞凋亡率由(59.5±2.7)%下降到(15.9±5.3)%和(39.7±8.7)%(P＜0.01);PC12细胞经0.5 mmol·L-1MPP+处理24 h后,其iNOS表达率由正常对照的(13.5±1.5)%增加到(71.9±4.0)%(P＜0.01),加入20 μmol·L-1Cur同时处理24 h后,其iNOS蛋白表达率由(71.9±4.0)%下降到(40.0±3.0)%(P＜0.01).[结论]Cur可以抑制MPP+诱导的PC12细胞凋亡,其作用机制之一可能与抑制iNOS高表达有关.
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葡萄糖依赖性促胰岛素多肽受体基因敲除小鼠不同部位骨密度的动态改变
[目的]观察葡萄糖依赖性促胰岛素多肽(GIP)受体基因敲除小鼠(GIPR-/-小鼠)不同部位骨密度的动态改变.[方法]用双能X线吸收仪(DEXA)测定不同月龄(1月龄、3月龄和5月龄)的雌性GIPR-/-小鼠和野生型对照C57BL/6小鼠不同部位(全身、股骨和腰椎)的骨密度(BMD)、骨矿含量(BMC)和骨骼面积.[结果]1月龄、3月龄和5月龄GIPR-/-小鼠的全身BMD、BMC和骨骼面积以及1月龄和3月龄GIPR-/-小鼠的股骨BMD均低于对照小鼠相应值,而1月龄GIPR-/-小鼠的腰椎BMD则高于对照小鼠相应值(P均＜0.05).5月龄与3月龄相比,GIPR-/-小鼠上述部位的BMD、BMC和骨骼面积无显著变化,而在对照小鼠仍有明显增加(P均＜0.05).[结论]与对照小鼠相比,GIPR-/-小鼠的BMD、BMC和骨骼面积均有明显改变,并与部位和月龄相关,提示GIP对小鼠骨转换有一定的作用.进一步提示在营养物的获得和骨代谢之间,除甲状旁腺激素-维生素D轴外,还存在着"肠-骨轴",即肠道与营养代谢相关激素对骨代谢也有一定的调节作用.
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人胎儿喉黏膜上皮细胞的发育分化特点
[目的]研究中国人胎儿喉黏膜上皮细胞发育分化的特点.[方法]收集9～40周胎儿喉标本33例.应用连续切片HE染色、细胞角蛋白免疫组化染色、扫描电镜和透射电镜观察其黏膜上皮.[结果]9周胎喉黏膜由1～2层低柱状细胞组成,仅表层细胞表达微弱的角蛋白,13周后出现多种类型的上皮细胞,上皮全层均表达细胞角蛋白;会厌舌面、声带被覆鳞状上皮,会厌喉面、室带、喉室及声门下区被覆假复层纤毛柱状上皮,其基底细胞和中间细胞的胞浆内含有丰富的胞浆泡状系统、张力原纤维和桥粒;过渡上皮和纤毛上皮中均散在岛状鳞状上皮但出现时间不一致.[结论]人喉黏膜上皮细胞的分化发生于胎儿9～13周期间;纤毛上皮的基底细胞和中间细胞具有双向分化的潜能;过渡上皮和纤毛上皮中出现岛状鳞状上皮是生理现象,前者由复层立方上皮分化而来,后者由纤毛上皮分化而来.
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胶原酶对大鼠脊神经背根神经节损伤的病理学研究
[目的]通过病理学方法研究胶原酶对大鼠脊神经背根神经节的损伤情况.[方法]57只健康的Sprague-Dawley雄性大鼠分为正常对照组;急性胶原酶手术组、亚急性胶原酶手术组和慢性胶原酶手术组;急性生理盐水手术组、亚急性生理盐水手术组和慢性生理盐水手术组.暴露大鼠左侧腰5背根神经节,并在各胶原酶手术组局部滴注胶原酶1 mL(300 U),各生理盐水手术组局部滴注生理盐水1 mL.分别于注药后1 h、1周、30 d处死动物并取包含背根神经节的一段神经做病理学检测.[结果]光镜下各组背根神经节的细胞数、胞膜、胞浆、胞核形态和细胞间神经纤维、血管相比较均无明显变化和差别.透射电镜下各组背根神经节的细胞数、细胞大体形态、胞膜和节内神经纤维相比较均无明显变化和差别,但胶原酶手术组背根神经节细胞胞内细胞器超微结构与正常对照组和相应生理盐水手术组比较有差别,表现为核仁部分偏向一侧、线粒体大量肿胀,部分嵴断裂和空泡形成.光镜病理和透射电镜均未见节细胞成群细胞坏死、细胞膜早期破裂和凋亡小体形成.[结论]临床应用的胶原酶化学髓核溶解术的胶原酶治疗浓度对大鼠脊神经背根神经节细胞有损伤作用.在临床工作中一定要慎重使用胶原酶的用药剂量和浓度,才能提高胶原酶应用的安全性.
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pcDNA3.1(+)/ATP7B对TX小鼠成纤维细胞铜代谢的影响
[目的]研究Wilson病野生型基因ATP7B cDNA真核表达载体pcDNA3.1(+)/ATP7B对TX小鼠成纤维细胞铜代谢的影响.[方法]构建人Wilson病野生型基因ATP7B cDNA的真核表达载体pcDNA3.1(+)/ATP7B.随机选取TX小鼠20只构建TX小鼠的成纤维细胞模型,平行分成3组,一组未加质粒,另两组分别加入等量pcDNA3.1(+)和pcDNA3.1(+)/ATP7B,观察对细胞模型铜代谢的影响.并进行免疫组化实验以观察表达是否增强.[结果]实验前未加质粒组,加入pcDNA3.1(+)组与加入pcDNA3.1(+)/ATP7B组细胞内铜含量分别为(78±20),(77±17),(75±13)ng/mg;实验后分别为(76±20),(74±13),(40±10)ng/mg.与未加质粒组和加入pcDNA3.1(+)相比,加入pcDNA3.1(+)/ATP7B组的细胞内铜含量显著下降(P皆＜0.01),其细胞内ATP7B蛋白的表达明显增强.[结论]Wilson病真核表达载体pcDNA3.1(+)/ATP7B在TX小鼠成纤维细胞水平上确有排铜作用.
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灵芝孢子油干预治疗6-羟多巴帕金森病大鼠模型的实验研究
[目的]研究灵芝孢子油对6-羟多巴(6-OHDA)帕金森病(PD)大鼠模型行为学及病理改变的影响,探讨该药对黑质多巴胺能神经元的保护作用.[方法]100只SD大鼠随机分为正常对照组20只、6-OHDA组40只、灵芝孢子油+6-OHDA组40只.通过脑部立体定向法将6-OHDA注射到SD大鼠一侧黑质致密部建立6-OHDA大鼠PD模型,灵芝孢子油+6-OHDA组在造模前3 d开始给灵芝孢子油每天500 mg/kg,连续10 d.6-OHDA组喂食生理盐水做对照.造模后每周给予阿朴吗啡观察大鼠旋转行为的变化,4周后用高效液相色谱法检测大鼠纹状体多巴胺及其代谢物含量,免疫组织化学法检测黑质致密部酪氨酸羟化酶(TH)阳性细胞数量,western blot法对TH蛋白进行半定量测定.[结果]①灵芝孢子油+6-OHDA组出现旋转行为的大鼠比例为10%,6-OHDA组为45%,两组比较有显著性差异.②纹状体多巴胺及其代谢物含量在两组间存在差异,多巴胺手术侧含量/手术对侧含量在灵芝孢子油+6-OHDA组为(60.12±7.5)%,在6-OHDA组为(38.58±7.26)%.③在黑质致密带区灵芝孢子油+6-OHDA组的TH免疫阳性细胞及TH蛋白表达量均较6-OHDA组显著增多.[结论]灵芝孢子油能明显改善6-OHDA大鼠模型行为学,增加纹状体多巴胺及其代谢物含量并提高黑质多巴胺能神经元的残存率,提示灵芝孢子油可能具有减缓PD病变进程的神经保护作用.
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重组bcl-xL腺病毒对心肌细胞凋亡的影响
[目的]探讨转染人类抗凋亡基因bcl-xL能否提高心肌细胞对缺氧的耐受性,评价它对心肌细胞的抗凋亡作用.[方法]体外培养SD大鼠乳鼠心肌细胞,建立模拟心肌缺氧模型;将携带人类bcl-xL基因的重组腺病毒感染心肌细胞;免疫细胞化学染色法分析bcl-xL蛋白的表达;TUNEL法检测凋亡指数;荧光显微镜下观察心肌细胞表达绿色荧光蛋白,用Hoechst33342染色观察细胞核的形态变化.[结果]转染rAd-bcl-xL/s的心肌细胞表达bcl-xL蛋白阳性单位(PU)(17.84±3.42)明显高于正常对照组(11.02±2.56)与rAd-bcl-xL/as转染组(8.53±2.25)(P＜0.01);缺氧诱导后心肌细胞凋亡指数为(45.67±8.47)%,而转染rAd-bcl-xL/s后的细胞凋亡指数减少至(9.42±2.48)%,有显著性差异(P＜0.01),未见典型的凋亡小体.[结论]腺病毒介导的bcl-xL基因能高效转染心肌细胞,并表达目的基因;外源性bcl-xL基因对体外培养的心肌细胞具有抗凋亡作用,能够提高心肌细胞对缺氧的耐受性,促进损伤心肌的恢复.
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体外视网膜母细胞瘤细胞对不同化疗药物的敏感性分析
[目的]研究视网膜母细胞瘤(retinoblastma,RB)细胞对化疗药物的体外敏感性,以制定合理的RB临床个体化化疗方案.[方法]应用3-(4,5)-双甲基-2噻唑-(2,5)-二甲基溴化四氮唑蓝(MTT)体外药敏法,测定35例RB患儿瘤细胞对常用的阿霉素、长春新碱、鬼臼乙叉苷、卡铂、甲氨喋呤、放线菌素D和噻替哌共7种化疗药物的敏感性.[结果]RB的药敏可评价率是86.7%.同一种药物对不同的肿瘤细胞有不同的抑制率,7种药物的高抑制率是卡铂(91.8%)、噻替哌(90.7%)、放线菌素D(89.7%)、鬼臼乙叉苷(88.4%)、阿霉素(86.61%)、甲氨喋呤(58.66%)、长春新碱(54.95%);低的直接抑制率均是0.[结论]不同RB个体的瘤细胞对不同的化疗药物有不同的敏感性,体外药敏试验筛选敏感化疗药物对临床RB个体化治疗有应用价值.
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环孢素对正常人PBMCs产生IFN-γ的抑制作用
[目的]探讨在不同刺激条件下,环孢素(ciclosporine,CsA)对正常人外周血单个核细胞(PBMCs)γ-干扰素(interferon-gamma,IFN-γ)的产生,以及对细胞亚群的影响.[方法]PBMCs在抗CD3单克隆抗体(antiCD3)、抗CD3和抗CD28(anti-CD28)单克隆抗体、IL-12(Th1细胞分化因子)刺激的情况下或在混合淋巴细胞反应中,观察CsA对IFN-γ产生和Th1细胞分化的影响.同时使用流式细胞仪,在单个细胞水平上评价CsA对T淋巴细胞表面活化分子CD25及细胞内细胞因子IFN-γ和IL-2产生的影响.[结果]CsA对由不同条件诱导产生的IFN-γ,均表现为剂量依赖性抑制关系.此外,CsA抑制IL-12诱导的Th1分化.进一步研究结果表明,CsA可抑制CD4+和CD8+T细胞IFN-γ的表达.[结论]CsA剂量依赖性抑制T淋巴细胞的活化,抑制CD4+、CD8+T淋巴细胞产生IFN-γ和Th1细胞的分化,其抑制机理可能与细胞的活化有关.
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大蒜素诱导人膀胱癌细胞株BIU87细胞凋亡的研究
[目的]探讨大蒜素对人膀胱癌细胞株BIU87细胞凋亡的影响.[方法]MTT法检测大蒜素对BIU87细胞生长的影响;倒置显微镜、TUNEL法观察细胞形态变化,流式细胞仪检测细胞凋亡率和细胞周期的变化;半定量RT-PCR法检测凋亡相关基因bcl-2,bax,caspase-3 mRNA表达的变化,比色法测定caspase-3活性变化.[结果]大蒜素能明显抑制BIU87细胞的生长,与大蒜素的浓度和作用时间有关,5 mg/L大蒜素作用5 d可以杀死50%以上的细胞;可诱导BIU87细胞凋亡,细胞周期阻滞在S-和G2期;凋亡相关基因bcl-2表达减少,bax无明显变化,caspase-3表达及活性增高.[结论]诱导细胞凋亡是大蒜素发挥抗瘤效果的一种重要机制;凋亡发生可能与细胞周期阻滞、bcl-2和caspase-3基因表达及活性变化有关.
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人纤维蛋白溶酶原kringle5(K5)抑制小鼠肝癌的血管生成和肿瘤生长
[目的]体内、体外实验观察人纤维蛋白溶酶原kringle5(K5)对肝癌血管生成和肿瘤生长的影响.[方法]大肠杆菌中表达,组氨酸结合柱亲和层析、纯化获得K5蛋白,SDS-PAGE和Western blot方法鉴定K5蛋白的表达;MTT法分析K5对牛视网膜毛细血管内皮细胞(BRCEC)和肝癌细胞株Bel-7402、HepG2增殖的影响;建立皮下种植肝癌鼠模型,瘤内注射K5,检测抑瘤率及肝癌组织微血管密度(MVD).[结果]SDS-PAGE及Western blot鉴定获得K5纯化蛋白;K5特异性地抑制BRCEC的增殖,IC50=160 nmol/L,而对肝癌细胞株Bel-7402、HepG2的增殖无抑制作用;K5显著抑制小鼠肝癌生长,治疗组肝癌组织MVD明显低于对照组.[结论]K5抑制移植性小鼠肝癌血管生成和肿瘤生长,特异性抑制血管内皮细胞的增殖可能是K5抑制肝癌血管生成的主要机制.K5具有治疗肝癌的潜在临床价值.
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甘精胰岛素对游离脂肪酸诱导的RIN-m细胞凋亡的影响
[目的]研究甘精胰岛素(insulin glargine)对游离脂肪酸诱导的β细胞凋亡是否具有保护作用.[方法]不同浓度的甘精胰岛素、普通人胰岛素以及IGF-1与0.3 mmol/L棕榈酸分别加入RIN-m细胞培养液中,24h后,采用Hoechst33342染色、流式细胞仪以及ELISA方法检测RIN-m细胞的凋亡.[结果]0.3 mmol/L棕榈酸诱导RIN-m细胞凋亡率达42.10%±4.24%,同时加入甘精胰岛素或者普通胰岛素(均为100 nmol/L)的凋亡率分别为32.00%±3.08%和35.97%±3.14%,甘精胰岛素对凋亡的抑制作用明显强于普通胰岛素,并呈剂量依赖性.[结论]甘精胰岛素对游离脂肪酸诱导的β细胞凋亡具有呈剂量依赖性的保护作用.
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镍钛机动器械Profile应用于磨牙根管治疗术一次法的临床效果分析
[目的]评价镍钛机动器械Profile在磨牙根管治疗术一次法中的作用.[方法]将90颗牙髓炎、无症状死髓牙随机分配至3组,分别为Profile镍钛根管锉机动预备与侧压充填根管治疗一次完成组,K型不锈钢根管锉手动预备与侧压充填根管治疗一次完成组,K型不锈钢根管锉手动预备,侧压充填分次完成组,评价Profile机动预备与K型不锈钢根管锉手动预备完成一次性根管治疗术后反应、远期疗效,并与传统根管治疗多次法进行比较.[结果]在磨牙根管治疗术一次法中,Profile根管预备根管充填组术后反应明显少于K-file组,3组根管治疗远期疗效无显著性差异.[结论]镍钛机动器械在磨牙根管治疗术一次法中具有省时高效的优点,并能减少术后反应.
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冠心病患者体外反搏治疗时肾素血管紧张素系统与指脉的关系
[目的]观察冠心病患者在体外反搏(ECP)治疗前后循环血液中肾素血管紧张素系统与指脉的变化,分析它们之间的关系,探讨ECP防治冠心病的机制.[方法]对20例1个月内发生心肌梗死或心绞痛的患者进行了ECP治疗,同时监测指脉波参数.分别于第1次反搏前、3个疗程结束时采血,用放免及紫外分光光度法检测血液中肾素活性、血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,ANGⅡ)质量浓度及血管紧张素转换酶(angiotensin-converting enzyme,ACE)活性.[结果]指脉波呈上升趋势,但组间无统计学意义.1个疗程后,肾素活性与ANGⅡ浓度高于反搏前;2个疗程后,ANGⅡ降至反搏前水平,ACE低于反搏前;3个疗程后,肾素活性降至反搏前水平,ANGⅡ与ACE低于反搏前.血浆ANGⅡ水平与指脉波成负相关关系.[结论]体外反搏对血流动力学的改善作用可能是其抑制肾素血管紧张素系统的机制之一.
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Thermafil热塑牙胶根管充填的临床疗效评价
[目的]对Thermafil热牙胶充填方法进行临床疗效评价.[方法]选择牙髓病或根尖周病患牙218例,随机分为2组,分别采用冷牙胶侧压法根管充填(1组)及Thermafil热塑牙胶法根管充填(2组),对其操作时间、术后疼痛、充填效果及远期疗效进行比较.[结果]操作时间:1组为162 s/根,2组为48 s/根(P＜0.01),两组差异有统计学意义.充填效果:(X-ray)显示1组适充100颗,超充2颗,欠充7颗;2组适充99颗,超充7颗,欠充3颗(P＞0.05).术后疼痛两组差异无统计学意义.远期疗效:2组明显优于1组(P＜0.05).[结论]热塑牙胶充填技术简便省时,充填效果及长期疗效均优于传统的冷牙胶侧压法,但成本较高,且容易造成超充(技术要求较高).
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子宫动脉栓塞治疗子宫腺肌病的中期临床观察
[目的]探讨子宫动脉栓塞对子宫腺肌病的中期临床疗效和并发症.[方法]对17例子宫腺肌病患者进行子宫动脉栓塞治疗,在栓塞前和栓塞后每次月经后,评估所有病人的痛经和月经量的变化,并且采用经阴道彩色能量多谱勒超声对子宫及病灶进行动态监测,监测时间定于栓塞前、栓塞后当天、栓塞后第5天和每次月经后.随访5～44个月(平均21个月).[结果]栓塞前痛经和月经过多17例.痛经和月经过多缓解情况为:有效15/17(88%),无效2/17(12%).彩色多谱勒超声监测发现,栓塞前病灶血流信号丰富,栓塞后当天病灶和肌层血流信号消失,栓塞后第5天和其后每次月经后复查病灶和肌层血流信号恢复.超声检查发现子宫和病灶体积在栓塞后一月开始缩小,栓塞后3个月缩小明显,此后子宫和病灶的体积维持稳定,没有变化.栓塞后发热发生率13/17(76%),阴道出血发生率为12/17(71%).栓塞后怀孕并顺产2例.[结论]子宫动脉栓塞治疗子宫腺肌病是一种新颖、微创、安全、有效、并发症少和恢复快的治疗方法,中期疗效显著.彩色多谱勒能量超声可以有效地评价疗效和判断预后,以及有助于筛选适应症.
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重组人促红细胞生成素对慢性肾衰竭患者血清瘦素水平的影响
[目的]观察应用重组人促红细胞生成素对慢性终末期肾衰竭维持性血液透析患者血清瘦素的影响.[方法]实验组:20例慢性终末期肾衰竭维持性血液透析患者,常规透析后皮下注射重组人促红细胞生成素,3 000 U/次,2～3次/周,时间3月,口服多糖铁及叶酸辅助治疗;对照组:15例慢性终末期肾衰竭维持性血液透析患者,常规透析未接受促红细胞生成素治疗,其他治疗同实验组.治疗前后测定所有患者的血常规、体质量指数(BMI)和血清瘦素水平等.[结果]①实验组治疗后血红蛋白从(82.2±4.2)g/L上升到(94.6±4.4)g/L(P＜0.001),红细胞压积从(29.2±1.7)%上升到(34.1±1.8)%(P＜0.001),对照组治疗前后血常规差异无显著性(P＞0.05);②实验组治疗后血清瘦素水平从(11.8±4.9)ng/mL降低到(8.9±3.5)ng/mL(r=0.614,P＜0.001),对照组治疗前后血瘦素水平差异无显著性(P＞0.05);③实验组治疗前血瘦素与BMI呈正相关(P＜0.001),治疗后两者相关性消失(P＞0.05),对照组治疗前后血瘦素与BMI分别呈正相关(P＜0.001).[结论]①重组人促红细胞生成素治疗可降低血液透析病人体内的高瘦素水平;②血液透析病人血瘦素与BMI呈正相关,但重组人促红细胞生成素治疗可使两者相关性消失.
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电子束CT与选择性冠状动脉造影的节段对比分析
[目的]探讨电子束CT(EBCT)造影对冠状动脉各节段病变诊断价值的差异.[方法]同期行选择性冠状动脉造影和EBCT冠状动脉造影检查的患者38例,对照选择性冠状动脉造影的结果计算EBCT造影检测冠状动脉各节段狭窄病变的准确性.[结果]①选择性冠状动脉造影可清晰显影的332个节段中,EBCT造影可清晰显示和评价占264段(79.5%),68段(20.5%)显影不清.左主干和前降支可评价节段的比例显著高于左回旋支和右冠状动脉(P＜0.05或0.01),同一支血管中近段可评价的比例显著高于远段(P＜0.05或0.01).②EBCT造影检测节段病变总的敏感性、特异性、准确性、阳性和阴性预测值分别为81.0%、95.9%、93.6%、79.1%和96.4%;EBCT造影对诊断左主干和左前降支各节段病变的价值高于左回旋支和右冠状动脉,检测冠状动脉近段病变的价值高于远段.[结论]电子束CT冠状动脉造影对冠状动脉的评价和病变检测受解剖部位和血管大小的影响,检测左主干和左前降支各节段病变的价值高于左回旋支和右冠状动脉,对冠状动脉近段病变的诊断价值高于远段.
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妊娠相关血浆蛋白A水平与不稳定心绞痛患者冠状动脉狭窄病变形态的关系
[目的]探讨不稳定型心绞痛患者妊娠相关血浆蛋白(PAPP-A)水平与高敏C-反应蛋白(hs-CRP)及动脉粥样硬化斑块稳定性的关系.[方法]不稳定型心绞痛组患者42例,稳定型心绞痛组38例.冠状动脉造影前检测PAPP-A和hs-CRP,根据造影结果将冠状动脉病变分为复杂狭窄和光滑狭窄.[结果]稳定型心绞痛组有28例(74%)患者至少有1支血管狭窄≥70%,多于不稳定型心绞痛组的24例(57%),P＜0.05;不稳定型心绞痛组中33例(79%)有1处以上的复杂狭窄,多于稳定型心绞痛组(22例,58%,P＜0.05);PAPP-A与hs-CRP正相关(r=0.44,P＜0.001);不稳定型心绞痛组与稳定型心绞痛组相比,hs-CRP(4.40 mg/L±0.003 mg/L vs 0.48 mg/L±0.016mg/L,P＜0.001)和PAPP-A(18.40×10-3 U/L±0.002×10-3U/Lvs 7.79×10-3 U/L±0.001×10-3 U/L,P＜0.001),差异均有统计学意义;两组中有复杂狭窄者的PAPP-A和hs-CRP水平显著高于无复杂狭窄者.[结论]PAPP-A可作为评估冠状动脉斑块稳定性的血清学指标之一.
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广东成年女性开唇露齿患者面部软组织测量研究
[目的]研究广东成年女性开唇露齿患者头侧位颌面部的美学缺陷.[方法]选择61例广东籍成年女性开唇露齿患者作为研究对象,按该畸形的主要类别--安氏Ⅰ类和Ⅱ类分为两组,分别测量其头侧位片的软组织测量项目,再与正常广东人的测量值进行比较,分析出开唇露齿患者的美学缺陷;再比较该两组患者间有无差异.[结果]面凸角(°):安氏Ⅰ类165.5±5.1,与正常值比较差异无显著性,安氏Ⅱ类161.8±5.4,小于正常值.上下唇角(°):安氏Ⅰ类100.4±11.2,安氏Ⅱ类97.2±12.5;上唇凸距(mm):安氏Ⅰ类9.9±2.1,安氏Ⅱ类10.3±1.6;上面高/下面高:安氏Ⅰ类Ⅱ类均为1.0±0.1,与正常值比较差异有显著性.[结论]广东女性开唇露齿患者,面中部并不前突;但有游离唇厚度的增加,唇前突,下面高相对上面高加大;安氏Ⅱ类患者仍有明显的下颌相对后缩,下唇、软组织颏部随下颌后缩等容貌特征和美学特征.
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鼻颅底的CT影像学特征
[目的]通过对与鼻颅底相关的CT影像学特征的研究,阐述它们在内镜下鼻颅底手术中的意义.[方法]对80例鼻窦冠状CT和50例轴位CT进行与颅底相关的结构测量.观测内容有:①筛板、筛顶的宽度;②筛板和筛顶的位置关系;③后组筛窦、蝶窦与视神经管的毗邻关系;④蝶窦的气化类型;⑤蝶窦分隔;⑥蝶骨嵴至视神经管眶口的垂直距离.[结果]①筛板和筛顶的宽度前、中、后部略有不同.筛板和筛顶的位置关系可分为:高台型占43.75%,倾斜型43.75%,不规则型占8.75%,双侧不平衡型3.75%.高台型中筛板、筛顶间的高度差以4～7 mm者为多,占65%.②后组筛窦、蝶窦与视神经管毗邻关系中以蝶窦优势型为多占59%,筛窦优势型11%,筛蝶均势型30%.③蝶窦气化类型:全鞍型57.5%,半鞍型21.25%,蝶枕型和鞍前壁各10%,甲介型1.25%.④蝶窦分隔,正中者仅7.5%,其余形态各异.⑤蝶骨嵴至双侧视神经管眶口水平的垂直距离比较,统计学无显著性差异,P＞0.05.[结论]①和以往分类略有不同,筛板和筛顶的连接关系,应分为:倾斜型、高台型、不规则型和双侧不平衡型.②后组筛窦、蝶窦和视神经管的毗邻关系分为筛窦优势型,筛蝶均势型,蝶窦优势型.③蝶窦气化分型:以全鞍型为多,半鞍型次之.蝶骨嵴可以作为判断蝶鞍中线的标志.
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前列腺素E1治疗重型病毒性肝炎的Meta分析
[目的]综合评价前列腺素E1治疗重型病毒性肝炎的疗效.[方法]收集有关前列腺素E1治疗重型病毒性肝炎的随机或半随机病例对照研究,根据纳入和排除标准纳入文献并进行质量评价,资料进行Meta分析,并对结果作敏感性分析和偏倚分析.[结果]纳入20篇文献均属于低质量文献.Meta分析结果提示前列腺素E1能降低重型病毒性肝炎的病死率[比值比(odd ratio,OR)=0.27,95%CI(0.22,0.34)],但仅对早期重型肝炎有效[OR=0.24,95%CI(0.09,0.59)],对晚期重型肝炎病死率的影响无统计学意义[OR=0.63,95%CI(0.26,1.53)],且前列腺素E1治疗对感染发生率的影响无统计学意义[OR=0.95,95%CI(0.56,1.62)].这些结果通过敏感性分析未出现结果逆转,偏倚分析提示结果的偏倚较小;前列腺素E1对肝性脑病、消化道出血、肝肾综合征发生率的影响不能明确.[结论]尽管Meta分析提示前列腺素E1能降低重型病毒性肝炎的病死率和不影响感染发生率,但由于文献的质量较低,影响了结果的准确性,因此,其疗效仍有待高质量的随机对照试验来评价.
| 年 | 期数 |
| 2019 | 01 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2017 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2011 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2010 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2009 | 01 02 03 04 05 06 z1 z2 |
| 2008 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2007 | 01 02 03 04 05 06 z1 |
| 2006 | 01 02 03 04 05 06 z1 z2 |
| 2005 | 01 02 03 04 05 06 z1 |
| 2004 | 01 02 03 04 05 06 z1 |
| 2003 | 01 02 03 04 05 06 z1 |
| 2002 | 01 02 03 04 05 06 z1 |
| 2001 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2000 | 01 02 03 04 05 06 Z1 |
| 1999 | 01 02 03 04 |
