中山大学学报（医学科学版）杂志
Journal of Sun Yat-sen University(Medical Sciences) 중산대학학보（의학과학판）
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胚胎干细胞来源造血细胞的细胞表型和功能分析
[目的] 分析经卵黄囊(YS)、胎肝(FL)和骨髓来源(BM)的基质细胞条件培养液(SCCM)诱导产生的胚胎干细胞(ES)来源造血细胞的细胞表型与功能差异. [方法] 制备YS-SCCM、 FL-SCCM及BM-SCCM,将3种基质细胞条件培养液分别加入ESE 14.1细胞分化培养体系培养7 d,通过对分化ESE14.1细胞造血发育表面标志FLK-1、Integrin-α4(整联蛋白-α4)、Sca-1(干细胞抗原-1)、CD34的检测、体外高增殖潜能集落形成细胞(HPP-CFC)分析及体内脾集落形成单位(CFU-S)检测,评价3种基质细胞条件培养液对ESE14.1细胞体外造血发育的调控作用.[结果] 经FL-SCCM诱导的EB细胞Flk-1+、Integrinα4+ 和Sca-1+ 细胞均高于YS-SCCM和BMSC-CM诱导组,分别为3.03%、2.9%和13.74%;经BMSC-CM诱导产生的CD34+ 细胞比例高,为1.07% .经FLSC-CM或BMSC-CM诱导产生的造血细胞其HPP-CFC产率明显高于对照组,分别为7.4个/105细胞(P ＜ 0.01)和5.8个/105细胞(P ＜ 0.05);经FLSC-CM或BMSC-CM诱导产生的造血细胞其CFU-S产率亦明显高于对照组,分别为8.5个/5 × 105细胞和6.75个/5 × 105细胞(P ＜ 0.001). [结论] YS-SCCM、 FL-SCCM及BM-SCCM均可诱导ESE14.1向造血细胞分化,FL-SCCM和BM-SCCM造血定向诱导效率较高,所产生的细胞具备造血细胞的正常功能,FL-SCCM诱导产生的造血细胞原始程度高于BM-SCCM诱导产生的造血细胞.
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H2O2预处理对骨髓间质干细胞凋亡适应性保护作用的研究
[目的] 探讨低浓度H2O2预处理对高浓度H2O2引起骨髓间质干细胞凋亡的影响. [方法] 大鼠骨髓间质干细胞(BMSC)经体外培养扩增、纯化、鉴定.BMSC分别被暴露于0,50,100,200,300,400,500 μmol/L H2O2,流式细胞仪(FCM)检测不同浓度H2O2处理对BMSC细胞凋亡的影响.然后分别用20 μmol/L ,50 μmol/L,100 μmol/L H2O2预处理24 h,用FCM和Hoechst33324染色观察低浓度H2O2预处理对高浓度H2O2引起骨髓间质干细胞凋亡的影响,RT-PCR检测不同浓度H2O2预处理组BMSC Caspase-3和Bcl-2基因的表达. [结果] BMSC经体外培养扩增、流式细胞仪鉴定,符合其表面标志,FCM检测凋亡显示:H2O2呈浓度依赖性诱导BMSC凋亡,且50 μmol/L H2O2预处理可降低500 μmol/L H2O2诱导的BMSC凋亡率;Hoechst33324染色结果显示:对照组BMSC染色质分布均匀,为弥散均匀的低强度荧光;500 μmol/L H2O2组BMSC胞核呈浓染致密的固缩形态或颗粒状荧光;50 μmol/L H2O2预处理组所致的凋亡细胞数明显少于500 μmol/L H2O2处理组所引起的细胞凋亡数,100 μmol/L H2O2预处理组所致的凋亡细胞数与500 μmol/L H2O2处理组比较无明显差异.RT-PCR结果显示50 μmol/L H2O2预处理组与单独使用500 μmol/L H2O2处理组比较,其BMSC的Bcl-2表达增加和Caspase-3基因表达降低(P ＜ 0.05),100 μmol/L H2O2预处理组与单独使用500 μmol/L H2O2处理组比较,其BMSC的Bcl-2、 Caspase-3表达无明显差异(P ＞ 0.05). [结论] 低浓度H2O2预处理对BMSC凋亡具有适应性保护作用,其机制可能与H2O2预处理使BMSC Bcl-2基因表达增加和Caspase-3基因表达降低有关.
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利福平对鱼藤酮致分化PC12细胞氧化应激的影响
[目的] 探讨利福平对鱼藤酮诱导的分化大鼠嗜铬细胞瘤细胞株(PC12)细胞形态、活性氧(ROS)、还原型谷胱甘肽(GSH)及细胞凋亡的影响.[方法] 利用鱼藤酮诱导分化PC12细胞建立帕金森病体外细胞模型;显微镜下观察细胞形态,酶标仪检测细胞还原型谷胱甘肽,流式细胞仪检测细胞活性氧和凋亡.[结果] 鱼藤酮组细胞内还原型谷胱甘肽含量低于两对照组,而活性氧含量及凋亡率均高于两对照组;经100、200和300 μmol/L各浓度利福平预处理后,利福平预防组3组细胞内活性氧含量及凋亡率均低于鱼藤酮组,而细胞内还原型谷胱甘肽含量高于鱼藤酮组,且存在浓度依赖性.[结论] 利福平可能通过氧化应激途径减轻鱼藤酮诱导的分化PC12细胞的损伤作用,且存在浓度依赖性.
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CTLA-4Ig融合蛋白对ApoE基因缺陷小鼠动脉粥样硬化的抑制作用
[目的] 探讨CTLA-4Ig融合蛋白对高脂饮食饲养的载脂蛋白E基因缺陷小鼠(ApoE-/-)动脉粥样硬化病变的抑制作用.[方法] 25只10周龄ApoE-/-小鼠,高脂饮食饲养4周后,随机取5只验证AS病变(对照组);剩余20只随机分为4组(每组5只),继续高脂饮食饲养,分别采用CTLA-4Ig、PBS、IgG1腹腔注射,第4组不予处理;8周后取小鼠主动脉进行病理学检查,检测AS相关指标,包括斑块面积/管腔面积比、血管内膜/中膜厚度比,斑块内脂质、胶原和平滑肌细胞含量.[结果] 高脂饮食饲养4周后,出现明显AS病变.继续高脂饮食饲养8周,形成典型AS斑块,CTLA-4Ig组、PBS组、IgG1组和空白组的斑块面积/管腔面积比分别为0.27 ± 0.08、0.40 ± 0.08、0.43 ± 0.08和0.46 ± 0.10,较4周时(0.05 ± 0.01)明显增加(P ＜ 0.05),4组的血管内膜/中膜厚度比分别为2.6 ± 0.6、6.0 ± 0.9、5.7 ± 0.8和5.9 ± 0.6,高于对照组(0.5 ± 0.1,P ＜ 0.05),4组斑块内脂质含量(%)分别为26.0 ± 3.0、40.8 ± 5.7、40.6 ± 3.0和43.2 ± 5.7较4周时明显增加(7.2 ± 1.4,P ＜ 0.05 ).采用CTLA-4Ig进行干预后,其斑块面积/管腔面积比、血管内膜/中膜厚度比和斑块内脂质含量显著低于PBS、IgG1和空白处理组(P ＜ 0.05),而后3组间上述指标的差异无统计学意义(P ＞ 0.05);CTLA-4Ig组斑块内胶原含量(16.0 ± 1.1)% 高于其他3组[(8.6 ± 1.2)%、(9.2 ± 1.5)%和(9.0 ± 1.3)%,P ＜ 0.05)],其斑块内平滑肌细胞含量(11.8 ± 1.0)%明显高于其他3组[(7.8 ± 0.8)%、(7.5 ± 0.9)%和(7.3 ± 0.7)%,P ＜ 0.05)],另外3组间上述指标的差异无统计学意义(P ＞ 0.05).[结论] CTLA-4Ig融合蛋白能够阻抑高脂饮食饲养的ApoE-/- 小鼠动脉粥样硬化进程,其增加斑块内血管平滑肌细胞生成胶原作用有助增加AS斑块的稳定性.
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和厚朴酚对人白血病细胞系U937细胞增殖和凋亡的影响
[目的] 探讨和厚朴酚(HNK)对白血病细胞系U937细胞增殖和凋亡的影响.[方法] 将U937细胞和正常外周血单核细胞分别与HNK共培养,Hoechst33342荧光染色检测细胞凋亡形态,用噻唑蓝比色法(MTT)检测HNK对细胞增殖的抑制作用;流式细胞仪检测凋亡;罗丹明123检测线粒体膜电位;Caspase3/7活性检测试剂盒检测Caspase3/7活性;荧光定量PCR(FQ-PCR)检测Caspase-3、Caspase-7 mRNA水平变化.[结果] HNK对U937的体外增殖有显著抑制作用,48 h半数抑制浓度(IC50)为11.8 μg/mL,而对正常外周血单核细胞的IC50为40.3 μg/mL,Annexin V/PI双标染色显示,细胞凋亡与和厚朴酚呈浓度和时间依赖相关.HNK明显降低U937细胞线粒体膜电位,增加Caspase3/7活性及mRNA表达水平,但对正常外周血单核细胞的增殖抑制和凋亡作用不明显.[结论] HNK可能通过激活caspase-3/7抑制U937细胞增殖、诱导U937细胞凋亡.
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心肺复苏大鼠脑基质金属蛋白酶9的表达和血脑屏障的变化
[目的] 探讨心肺复苏后早期大鼠脑组织基质金属蛋白酶9(MMP9)的表达和血脑屏障的变化规律.[方法] 将80只大鼠随机分为假手术组(n ＝ 40)和复苏组(n ＝ 40).假手术组仅进行麻醉和气管插管、血管穿刺,不进行窒息,复苏组用气管夹闭窒息法致使心跳骤停后进行复苏,其他与对照组相同,分别在0、3、9、24 h和48 h 5个时间点处死大鼠后,取样,测定脑组织MMP9的表达、MMP9 mRNA、脑含水量与脑组织伊文思蓝含量的变化,电镜观察脑组织的超微结构.[结果] 复苏组心肺复苏后3、9、24和48 h脑组织MMP9表达明显高于假手术组,MMP9 mRNA含量与假手术组相比差异有统计学意义,脑含水量与假手术组比较明显升高,与假手术组比较,脑组织伊文思蓝含量明显升高;超微结构发生改变. [结论] 在心肺复苏大鼠脑缺血模型中MMP9蛋白和MMP9mRNA的表达明显升高;脑组织的脑含水量和伊文思蓝含量明显升高,血脑屏障受到破坏;电镜超微结构观察证实脑组织损伤明显;这些变化在心肺复苏后24 h达高峰.
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中国南方汉族人群9个STR基因座多态性分析
[目的] 分析中国南方汉族人群9个STR基因座的遗传多态性. [方法] 用STR＿Typer＿10＿v1荧光标记试剂盒,对1 619例中国南方汉族无关个体的9个STR基因座(D11S2368,D12S391,D13S325 D18S1364,D22-GATA198B05,D6S1043,D2S1772,D7S3048,D8S1132)进行扩增,用AB公司3100遗传分析仪和GeneMapper 3.1v软件作STR分型,用PowerState V12.xls分析软件进行等位基因频率和法医学常用参数统计分析,用Arlequin 3.11v软件包作Hardy-Weinberg equilibrium平衡检验.[结果] 在中国南方汉族人群中,该9个STR基因座的遗传多态性高,杂合度(H)分布在0.818 ～ 0.879之间,随机匹配(MP)率分布在0.031 ～ 0.063之间,个体识别力(PD)在 0.937 ～ 0.970之间,非父排除率(PE)在0.632 ～ 0.753之间,多态性息含量(PIC)在0.80 ～ 0.88之间,典型父权指数(TPI)在2.74 ～ 4.13之间.统计分析证明这些群体资料均达到Hardy-Weinberg equilibrium(P ＞ 0.05).[结论] 中国南方汉族人群9个STR基因座具有较高多态性,可以用于法医学亲权鉴定和个体识别,也可以用于人类学和遗传学研究.
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彗星试验检测大鼠死后肾脏细胞DNA含量与死亡时间的关系
[目的] 探讨特定条件下,利用彗星试验测定SD大鼠死后6 ～ 48 h肾脏细胞DNA含量与死亡时间的关系.[方法] 健康成年雌性SD大鼠,按取材时间随机分为6组,每组3只.颈椎脱臼法处死动物,置于25.1 ℃(广州地区近5年10月份平均气温)培养箱中,分别于0、6、12、24、36、48、60 h取大鼠肾脏组织,制备单细胞悬液,进行彗星试验,荧光显微成像系统采集图像,采集相关参数(Comet 4.0)并进行Kruskal-Wallis检验. [结果] 死后6 ～ 48 h,SD大鼠肾脏细胞DNA碎片随死亡时间延长而增加,尾长在死后各时间点依次呈明显的增长趋势,Oliver尾矩和尾DNA随死亡时间的延长,亦有一定的增长趋势,60 h未能测出.Kruskal-Wallis检验显示:各时间点彗星尾长均数的差异有高度显著性(P＜0.01);彗星尾矩均数在死后6 h和12 h差异无统计学意义(P＞0.05),24 h和36 h彗星尾矩均数差异有显著性(P＜0.05);尾DNA均数在6 h,12 h,24 h三个时间点差异无显著性(P＞0.05),但与36 h,48 h尾DNA均数的差异均有显著性(P＜0.05).[结论] SD大鼠肾脏细胞DNA降解随死亡时间延长而增加,彗星试验技术为死亡时间推断提供了重要的实验依据.
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大肠癌组织CD137L的表达及意义
[目的] 检测大肠癌组织及癌旁组织中CD137L mRNA及蛋白的表达情况,探讨其在大肠癌发生进展中的意义. [方法] 运用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应及冰冻切片免疫组化的方法检测大肠癌组织及癌旁组织中CD137L的表达情况,并分析其表达情况与各临床因素的相关性. [结果] 54例大肠癌组织中CD137L mRNA的相对表达水平为 0.035 ± 0.013,显著高于癌旁组织的0.008 ± 0.005(P ＜ 0.05).但在不同性别、年龄、肿瘤发生部位、Dukes分期、病理分化及血清CEA水平情况下,CD137L mRNA的表达水平无显著性差异(P ＞ 0.05).随机抽取8例大肠癌肿瘤组织及3例癌旁组织,进行免疫组化检测,结果显示6例CD137L蛋白呈阳性表达,CD137L表达于肿瘤细胞表面;3例癌旁组织该分子的表达均为阴性.[结论] CD137L mRNA在大肠癌组织中高表达,CD137L分子表达于大肠癌肿瘤细胞表面,提示该分子可能在大肠癌的发生进展中发挥作用.
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专用四肢关节磁共振在兔膝关节软骨缺损修复中的应用
[目的] 研究新西兰成年白兔膝关节软骨缺损修复后的低场强专用四肢关节磁共振诊断价值.[方法] 40只兔左膝关节随机分为两组:A组:通过手术形成软骨缺损,不植入Ⅱ型胶原;B组:缺损内填充Ⅱ型胶原,术后2、6、12、18周分别行专用关节MR扫描,扫描后取材,行组织学检查.[结果] A、B两组手术区均显示有规律的动态MR改变,结合组织学分析,A组是软骨缺损的自我修复过程,B组是填充物的成熟过程.12周时两组均可见关节软骨信号,B组软骨信号较光滑,与组织学结果相符.[结论] 专用四肢关节MR检查具有评价关节软骨修复的潜力,可望成为一种无创的软骨修复术疗效评价方法.
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优化细胞因子诱导杀伤细胞/自然杀伤细胞少因子培养体系的探索
[目的] 尝试使用IL-2、IL-7和IL-12的单因子、双因子和三因子组合进行杀伤细胞/自然杀伤细胞(CIK/NK)细胞扩增培养,探讨优化CIK/NK细胞少因子培养体系的建立.[方法] 采用Ficoll-Hypaque法分离脐血单个核细胞并分成6组,每组分别加入IL-2(80 ng/mL)、 IL-7(40 ng/mL)及IL-12(40 ng/mL)的单因子、双因子和三因子组合(IL-7组;IL-12 组;IL-7+IL-12组;IL-2 + IL-7组;IL-2 + IL-12组;IL-2 + IL-7 + IL-12组),每组6个重复孔,共培养21 d收获细胞.在细胞培养开始和第21天,实验各组取细胞悬液进行流式细胞仪检测CD3+ CD56 + CIK细胞及CD3- CD56+ NK细胞比例. [结果] 单因子培养体系的IL-12组在CIK细胞扩增比例上是各组中高的(22.96 ± 1.41)%,双因子体系的IL-2 + IL-12组的CIK细胞扩增比例也达到(18.58 ± 0.68)%;上述两组的CIK细胞扩增比例已经达到或基本达到使用传统多因子扩增方法所获得的比例.IL-12组的NK细胞扩增比例为(30.23 ± 1.18)%,IL-2 + IL-7组的NK细胞扩增比例也达(29.52 ± 0.89)%. [结论] 使用IL-12、IL-2 + IL-12或IL-2 + IL-7组合的少因子培养体系进行CIK/NK细胞的培养扩增是可行的.
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供心缺血再灌注损伤与心肌细胞凋亡
[目的] 研究供心长时间低温保存后缺血再灌注损伤导致的心肌细胞凋亡,明确抗调亡因子在心脏移植供心缺血再灌注损伤中的保护作用,为心脏保护液药物研究提供帮助. [方法] 24只实验SD大鼠分2组,建立大鼠心脏异位移植模型,在围手术期、供心保存过程中使用天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3抑制剂(Ac-DEVD-CHO)干预,使用HTK保存液低温保存供心9 h,监测模型前后,检测凋亡相关因子和病理学指标. [结果] 在异位移植开放后60 min,①实验组的心率恢复率[(71.9 ± 6.9)%]高于对照组[(59.6 ± 10.5)%;P ＜ 0.05].②实验组的心肌Caspase-3活性(0.695 ± 0.040)低于对照组(3.438 ± 0.035;P ＜ 0.01).③实验组的心肌梗死面积(5.29 ± 2.33)低于对照组(22.10 ± 3.00;P ＜ 0.01).④实验组的凋亡指数(5.09 ± 2.31)低于对照组(13.4 ± 2.5;P ＜ 0.01).⑤心肌组织HE染色:对照组的心肌组织损伤较实验组严重. [结论] ①供心长时间低温保存再灌注后细胞出现明显凋亡,心肌细胞凋亡是心脏移植供心长时间保存缺血再灌注后心功能下降的主要机制之一.②使用半胱天冬酶抑制剂能明显抑制心肌细胞凋亡,减轻供心缺血再灌注损伤,改善供心心功能,是提高供心保存时效的良好方法.③半胱天冬酶抑制剂Ac-DEVD-CHO对供心保存的时-效和量-效关系仍有待进一步探讨.
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司坦唑醇对雌激素受抑的青春期大鼠生长板软骨细胞生长和成熟的影响
[目的] 探讨司坦唑醇(ST)对离体培养的促性腺激素释放激素拟似物(GnRHa)处理后青春期大鼠生长板软骨细胞的增殖和分化的影响. [方法] 将6只经GnRHa 处理后雌鼠的原代软骨细胞分为时效组(观察ST干预时限的影响)、量效组(观察ST干预剂量的影响).时效组和量效组中,又分为ST干预时效组,对照时效组;ST干预量效组,对照量效组.通过噻唑兰比色分析法(MTT)法和免疫组化法检测软骨细胞核增殖细胞核抗原(PCNA)、胞浆中Ⅱ型胶原、Ⅹ型胶原的表达.[结果] (1)对MTT、PCNA的影响改变①时效组:ST 作用后1 天2参数已有显著升高(P ＜ 0.05),并与基值比较,第2 天时达峰(P ＜ 0.001).但第4下降至与0 天时比较无差异(P ＞ 0.05).②量效组:低浓度的ST无显著促增殖效应(P ＞ 0.05),而浓度增加至10-9 mol/L时促增殖效应显现(P ＜ 0.01),进一步加大ST 浓度至10-5 mol/L,促增殖效应又开始减弱.(2)对软骨细胞胶原Ⅱ、Ⅹ合成的影响:①时效组:ST作用3 d后胶原Ⅱ的表达明显高于对照组(P ＜ 0.05),但至第5 天却表达显降.ST 作用3 d内胶原Ⅹ分泌量与对照组比较无差异,4 d起显著递增(P ＜ 0.001).②量效组:ST各个浓度点的软骨细胞胶原Ⅱ表达较基值均明显增加(P ＜ 0.01),并以10-9 mol/L 显.10-11 mol/L ～ 10-8 mol/L 的ST不增加胶原Ⅹ表达,至10-7 mol/L 始随剂量增加而增,10-5 mol/L 时达高值(P ＜ 0.01).量、时效影响Ⅹ型胶原表达增加均迟于Ⅱ型,作用呈错峰性改变.[结论] ST以时效和量效作用方式分别对雌激素受抑的离体青春期大鼠生长板软骨细胞的增殖呈双相影响,在合适的剂量和时间时,细胞增殖效应可达好效果.
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反向斑点杂交技术检测HBV YMDD基序变异的应用和评价
[目的] 采用反向斑点杂交技术对拉米夫定治疗后的慢性乙型肝炎患者血清中HBV YMDD基序变异进行检测,并对其临床应用进行方法学评价.[方法] 提取242例慢性乙型肝炎患者血清中HBV DNA,经聚合酶链反应后进行膜条杂交并同测序比较分析检测结果的一致性,随后对该方法进行灵敏度和混合感染检测能力的评价.[结果] 242例样本检测结果有236例与测序结果相符,反向斑点杂交检测结果同测序结果的符合率达97.5%;混合型感染58例,占样品总数的24%.反向斑点杂交技术检测HBV YMDD基序变异的灵敏度达103 IU/mL,在病毒混合感染群体中能检测出约占10%的突变型病毒株.[结论] 反向斑点杂交技术检测HBV YMDD基序变异具有简单、准确、经济实用的特点,具有很好的临床应用前景.
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用荧光复合扩增体系检测5个X染色体短串联重复序列基因座的多态性
[目的] 为了研究X染色体短串联重复序列(X-STR)基因座的遗传多态性,我们检测了DXS6803、DXS981、DXS6809、DXS6789和DXS7132 5个基因座在广东汉族人群中的多态性. [方法] 利用荧光标记引物PCR技术复合扩增上述5个基因座,并用ABI PRISM 3100毛细管电泳及GeneMapper ID3.1软件进行基因分型.[结果] 在363个广东汉族无关个体(男性:181个,女性:182个)中5个基因座共检出54个等位基因.多态性信息含量为0.6935 ～ 0.8177;女性个体识别率为0.8976 ～ 0.9562.三联体非父排除率为0.7805 ～ 0.8467.[结论] 这5个基因座多态性较高,在个体识别和亲权鉴定中具有重要的应用价值.
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丝裂原活化蛋白激酶家族在Swedish 突变的淀粉样前体蛋白转基因鼠脑缺血中的作用
[目的] 探讨丝裂原活化蛋白激酶家族(MAPK)在Swedish 突变的淀粉样前体蛋白(APP/SWE)转基因鼠脑缺血中的作用.[方法] APP/SWE 转基因鼠与非转基因鼠各12 只应用光化学法诱导脑梗塞形成,缺血7 d后其中6只以尼氏染色对缺血半暗带区存活神经元进行定量分析,6只以Western blot方法检测p38MAPK和JNK的活性. [结果] 缺血7 d后,非转基因鼠组缺血半球海马区缺血半暗带存活神经元数目与非缺血半球镜像部位神经元数目的比值(78.3 ± 1.3)%与APP/SWE转基因鼠组(70.5 ± 1.4)%有统计学差异(P ＜ 0.05);APP/SWE转基因鼠组缺血半球p38MAPK和JNK活性与非缺血半球有统计学差异(P ＜ 0.05),而非转基因鼠组缺血半球p38MAPK和JNK活性与非缺血半球差异无统计学意义(P ＞ 0.05).[结论] APP/SWE转基因鼠组缺血后脑损伤显著重于非转基因鼠组,可能的机制与丝裂原活化蛋白激酶过度激活促进脑缺血后细胞凋亡过程有关.
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正常人眼前段组织与房角开放度数的关系
[目的] 分析正常人房角开放度数(AA)与眼前段结构的关系. [方法] 收集211例(211只眼)正常人,采用眼前段光学相干断层扫描仪(AS-OCT)扫描其前房和晶状体,并测量前房深度(ACD)、前房横径(ACHD)、解剖前房深度(AACD)、睫状体带长度(CBL)、虹膜厚度(IT)、晶状体厚度(LT)、晶状体位置(LP)以及晶状体前极的位置(LAAP).采用直线相关分析这8个参数与AA的关系. [结果] AA的均值为(40 ± 17)°,男性(44 ± 18)°,女性(37 ± 16)°,比较差异有统计学意义(t ＝ 2.893,P ＝ 0.004).AA与ACD(r ＝ 0.721,P ＝ 0.000)、LT(r ＝ -0.545,P ＝ 0.000)、CBL(r ＝ 0.615,P ＝ 0.000)、LAAP(r ＝ -0.717,P ＝ 0.000)、LP(r ＝ 0.557,P ＝ 0.000)和ACHD(r ＝ 0.175,P ＝ 0.011)相关,与AACD(r ＝ 0.130,P ＝ 0.059)、IT(r ＝ 0.129,P ＝ 0.061)无相关性. [结论] 女性的房角比男性窄;在眼前段组织中,决定正常人房角宽窄的关键的因素为晶状体、睫状体和虹膜根部的附着位置.
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骨肉瘤组织中MICA基因mRNA和蛋白的表达
[目的] 检测骨肉瘤组织中MHC I类链相关蛋白A(MHC class I chain-related A,MICA)基因mRNA和蛋白的表达情况,为探讨骨肉瘤的肿瘤免疫机制提供信息. [方法] 应用RT-PCR方法检测MICA mRNA在11例新鲜骨肉瘤组织和5个骨肉瘤细胞株中的表达情况;分别应用免疫组织化学方法、Western blot和流式细胞术检测66例石蜡包埋骨肉瘤组织、6例石蜡包埋正常人骨组织、9例新鲜骨肉瘤组织和5个骨肉瘤细胞株中MICA蛋白的表达情况. [结果] 骨肉瘤组织中MICA mRNA表达率为81.8%(9/11),5个骨肉瘤细胞株均表达MICA mRNA;MICA蛋白在骨肉瘤组织和正常骨组织的表达率分别为51.6%(34/66)和0%(0/6);骨肉瘤细胞株Saos-2、MG63和HOS阳性表达膜表面MICA蛋白,而细胞株U2OS和OS732只有少量细胞呈阳性表达.[结论] MICA mRNA和蛋白广泛表达于骨肉瘤组织和细胞株.
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实时荧光定量 PCR检测野生型p53介导蛋白磷酸酶mRNA在非小细胞肺癌中的表达
[目的] 荧光染料Ⅰ(SYBR GreenⅠ)是一种较为常用的非探针类定量PCR的方法,其结果具有一定特异性.本研究的目的是建立检测野生型p53介导蛋白磷酸酶(Wip1)mRNA的SYBR GreenⅠ实时定量PCR的方法,了解肺癌组织及其远癌正常肺组织中Wip1的表达水平,研究肺癌组织中Wip1的表达水平与各种临床病理特征之间的关系. [方法] 利用相对定量的方法检测44例肺癌及相应远癌正常肺组织中Wip1 mRNA相对于β-actin mRNA的表达量,进行相对定量分析. [结果] 44例非小细胞肺癌(NSCLC)及相应远癌正常肺组织均有Wip1 mRNA的表达,其中17例非小细胞肺癌中Wip1 mRNA高表达,占38.6%,两者表达差异有统计学意义 (Ratio ＝ 2.1644 ± 1.394,P ＜ 0.05);分化程度低的肺癌组织中Wip1 mRNA表达量显著高于分化程度高者(F ＝ 5.08,P ＝ 0.013). [结论] SYBR GreenⅠ实时定量PCR方法可以成功地检测Wip1基因的表达量.初步检测结果显示Wip1可能是一种肺癌发生发展过程中的致癌因素.
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人类表皮生长因子、p53、雌激素受体及孕激素受体在不同临床期别乳腺浸润性导管癌组织中的表达
[目的] 探讨不同临床期别乳腺浸润性导管癌组织中人类表皮生长因子(HER-2)、p53、雌激素受体(ER)及孕激素受体(PR)的表达及其相关性. [方法] 利用免疫组化技术检测138例乳腺浸润性导管癌组织中各指标的表达,采用新的记分标准,结果数字化和半定量化,以秩检验方法进行分析.[结果] 高临床期别乳腺浸润性导管癌组织中HER2表达显著升高,而PR表达则显著降低,ER和p53的表达无明显变化.[结论] HER-2和PR能更好地反映乳腺癌的临床期别并可能与乳腺癌的预后相关.
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变应性鼻炎吸入性变应原特异性IgE检测分析
[目的] 为了了解广州地区变应性鼻炎主要吸入性变应原. [方法] 采用德国敏筛(Allergyscreen)变应原检测系统,检测我院变应性鼻炎患者常见吸入性特异性IgE和总IgE含量,并将患者分成未成年组(≤18 岁)和成年组( ＞ 18岁),回顾性分析我院不同年龄变应性鼻炎患者常见吸入性变应原特异性IgE阳性率及其分布差异. [结果] 625例变应性鼻炎患者中吸入性变应原特异性IgE阳性率依次为尘螨84.32%、蟑螂19.04%、柏树15.20%、动物毛皮屑组合13.12%、树木花粉组合7.20%、矮豚草5.12%,葎草1.76%、蒿草1.76%、霉菌组合1.44%;总IgE阳性者413例(66.1%)明显低于特异性IgE阳性率;两组中常见的变应原相似;未成年组屋尘螨的阳性率及敏感程度明显高于成年组(P ＜ 0.01). [结论] ①我院变应性鼻炎患者主要的吸入性变应原是屋尘螨、蟑螂、柏树、动物毛皮屑,可为广州地区参考;②未成年人对尘螨过敏的比例及敏感程度均高于成年人.
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中国早发2型糖尿病家系MODY 1-5基因测定
[目的] 通过对早发2型糖尿病家系先证者进行直接测序,寻找中国人群中可能存在的青少年的成人发病型糖尿病(MODY) 1-5基因突变.[方法] 对19个早发2型糖尿病家系的先证者进行MODY 1-5基因扩增和DNA直接测序.[结果] 19个先证者未发现MODY基因突变,但发现MODY 1-5基因分别存在6、5、15、1、1种多态性.[结论] MODY相关基因突变具有种族异质性,MODY 1-5基因突变不是该19个早发糖尿病家系的致病因素.
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浸润性乳腺癌近似分子亚型的临床意义
[目的] 探讨浸润性乳腺癌近似分子亚型的临床意义. [方法] 回顾性分析浸润性乳腺癌患者,依据免疫组化雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)、HER2水平将其近似划分为Luminal A (ER+ 和/或 PR+,HER2-)、Luminal B (ER+ 和/或 PR+,HER2+)、HER2+(EP-,PR-,HER2+)和Basal-like(EP-,PR-,HER2-) 4个分子亚型,各362、107、86和148例,对比分析该4型患者的分布比例、发病年龄、绝经状态、病理组织学类型、病理分级、肿瘤大小、淋巴结状态等临床特征及首次复发时间和部位的特点.[结果] 所有703例患者中,Luminal A型比例高,占51.5%;Luminal B和HER2+型所占比例少.整体人群发病年轻,90.8%的患者在59岁以下.其中40岁以下患者Luminal A型多.不同分子亚型病理分级构成差异显著,Luminal A型中,组织学1级患者比例高,并且T1期肿瘤比例明显高于其他各亚型,HER2+型则以T4期肿瘤多.各亚型间淋巴结分布无明显差异,仅在Luminal B和HER2+型出现N3高比例分布趋势.复发转移患者中,Luminal A型首次复发时间长,HER2+型短,且HER2+和Basal-like型肺转移率高.与国外报道不同,本研究未显示出各亚型中局部复发与远处转移的分布差异. [结论] 蛋白标记近似分子分型简单明了,切实可行.国人乳腺癌具有蛋白标记近似的不同分子亚型,与国外大体相似,Luminal A型临床特征相对较好,HER2+型与Basal-like型具有较高的肺转移率.但仍有不同之处,尤其是Luminal A型年龄分布呈现年轻化.
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不同体外受精周期所获生殖泡期卵母细胞体外成熟后结果比较
[目的] 研究对比体外受精-单精子卵胞浆内注射(IVF-ICSI)周期所获生殖泡期(GV)不成熟卵母细胞以及体外成熟(IVM)周期所获GV期卵母细胞体外培养成熟后的胚胎发育情况.[方法] 163个IVF-ICSI周期中所获987个成熟卵为Ⅰ组,所获GV期卵进行体外培养后成熟的132个卵为Ⅱ组,另有37个IVM周期中所获GV期卵体外培养后成熟的235个卵为Ⅲ组.对3组均进行ICSI,并对其受精率、卵裂率及胚胎发育进行比较.[结果] Ⅰ组的受精率、卵裂率以及优质胚胎率均显著高于Ⅱ组及Ⅲ组(分别为84.9%,98.1%和61.6%;72.0%,90.5%和22.1%;75.3%,94.4%和25.1%).Ⅰ组的胚胎卵裂球数目及胚胎形态评分均显著优于Ⅱ组及Ⅲ组(P ＜ 0.05);Ⅱ组与Ⅲ组相比差异无统计学意义. [结论] 体内成熟卵形成的胚胎形态好于生殖泡期卵体外培养成熟者,IVF-ICSI周期的生殖泡期不成熟卵形成的胚胎形态学上与IVM周期的类似.
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SNP基因芯片结合多重置换扩增技术检测单细胞非整倍体的研究
[目的] 建立并优化利用微阵列-比较基因组杂交技术检测单细胞非整倍体的实验方案. [方法] 纤维母细胞系GM02732(47,XY,+18)和GM00343[46,XY,4(del) (qter ＞ p14)]被用于实验.阳性对照组为上述细胞系的基因组DNA(gDNA)(A组与B组,n ＝ 6);实验组为单细胞模板的多重置换扩增(MDA)产物(C组与D组,n ＝ 10);阴性对照组为空白对照的MDA产物(E组,n ＝ 6).以上样本与10 k 2.0基因分型芯片杂交并进行染色体拷贝数分析,比较利用非扩增的正常gDNA和同法扩增的DNA(MDA-DNA)作为分析参照对C组和D组的结果准确度的影响.[结果] A→E组的芯片杂交信号判读率分别为98.7%、97.2%、86.7%、85.9%与3.2%.利用单细胞MDA-DNA作为参照时,C组与D组杂交信号的变异程度明显小于使用gDNA作为参照时(P ＜ 0.05).利用CNAT分析软件,发现以gDNA作为参照时,C组与D组部分染色体优势扩增明显,而使用MDA-DNA作为参照时则未观察到类似现象. [结论] 结合MDA和基因芯片平台对单细胞进行非整倍体检测时应使用同法扩增的DNA作为分析参照.
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Wells 量表和修正的Geneva评分对肺栓塞的预测价值
[目的] 为减少肺栓塞误漏诊,探讨并应用受试者工作特征曲线(ROC)比较修正的Geneva和Wells评分系统对肺栓塞的预测价值.[方法] 收集1998-2008年10月中山大学附属第三医院可疑肺栓塞65例,其中临床确诊肺栓塞44例,记录、归纳整理、统计分析,应用ROC曲线比较Geneva和Wells评分对肺栓塞的预测价值.[结果] Wells评分＜ 2分肺栓塞可能性33.3%(8/24),2 ～ 6分87.2%(34/39),6分以上100%(2/2),评分增加肺栓塞可能性增大(P ＝ 0.000);Geneva评分:0 ～ 3分肺栓塞可能性22.2%(4/18);4 ～ 10分 82.1%(32/39);≥11分100%(8/8).肺栓塞可能性与Geneva评分高低有关(P ＝ 0.000).Wells评分预测肺栓塞的ROC曲线下面积(AUC)0.785 ± 0.060(P ＝ 0.000),佳分界值2分,以≥2分预测肺栓塞,其敏感性81.8%,特异性76.2%;Geneva评分ROC的AUC为0.900 ± 0.038(P ＝ 0.000),佳分界值6.5分,以≥6.5分预测的敏感性为72.7%,特异性100%;两条曲线所对应AUC的差异有统计学意义(P ＜ 0.05).[结论] Wells评分和Geneva评分对肺栓塞的预测均具有较好的临床价值;Geneva评分的敏感性和特异性总体上优于Wells评分.
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男性幼儿分泌型乳腺癌1例报告
男性乳腺癌发病率较低,国内男性乳癌约占全部乳腺癌患者的1%.而男性分泌型乳腺癌患者更为少见.
| 年 | 期数 |
| 2019 | 01 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2017 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2011 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2010 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2009 | 01 02 03 04 05 06 z1 z2 |
| 2008 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2007 | 01 02 03 04 05 06 z1 |
| 2006 | 01 02 03 04 05 06 z1 z2 |
| 2005 | 01 02 03 04 05 06 z1 |
| 2004 | 01 02 03 04 05 06 z1 |
| 2003 | 01 02 03 04 05 06 z1 |
| 2002 | 01 02 03 04 05 06 z1 |
| 2001 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2000 | 01 02 03 04 05 06 Z1 |
| 1999 | 01 02 03 04 |
