中山大学学报（医学科学版）杂志
Journal of Sun Yat-sen University(Medical Sciences) 중산대학학보（의학과학판）
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蛋白酶体抑制剂MG132对Raji细胞凋亡、细胞周期及UBE1基因表达的影响
[目的]探讨蛋白酶体抑制剂MG132对人Burkitt's淋巴瘤Raji细胞凋亡、细胞周期及泛素活化酶(UBE1)基因表达的影响。[方法]5 μmol/L的MG132处理Raji细胞24 h，形态学观察细胞生长情况；流式细胞术Annexin V-FITC/PI双染法分析细胞凋亡、PI单染法分析细胞周期；荧光定量RT-PCR检测UBE1基因mRNA表达，Western blot检测UBE1蛋白表达。[结果]MG132处理组细胞生长缓慢，死亡及凋亡多见，细胞凋亡率(26.06±1.10)％较对照组(0.30±0.26)％上升(P＜0.05)，G2/M期细胞比率(33.2±1.2)％较对照组(12.5±1.1)％升高(P＜0.05)；MG132处理组UBE1 mRNA表达量(0.35±0.05)较对照组(1.00±0.08)下降(P＜0.05)，抑制率为65％；UBE1蛋白表达量(0.93±0.07)较对照组(1.62±0.22)下调(P＜0.05)，蛋白表达率为(58±6)％。[结论]蛋白酶体抑制剂MG132可诱导Raji细胞发生凋亡和G2/M期阻滞，同时抑制UBE1的mRNA和蛋白表达,机制仍待深入研究。
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木犀草素增强Cx32/Cx26组成的细胞缝隙连接功能
[目的]体外观察木犀草素对转染并稳定表达缝隙连接蛋白32/26(Cx32/Cx26)的Hela细胞缝隙连接通讯功能(GJIC)和Cx26蛋白表达水平的影响。[方法]用SRB法检测不同浓度木犀草素对Hela细胞的毒性；用细胞接种荧光示踪法观察不同浓度木犀草素对GJIC的影响；用western blotting研究木犀草素在影响CJIC功能浓度范围内对Cx26表达的影响。[结果]木犀草素在0～1 μmol/L浓度时对Hela细胞无毒性作用；木犀草素(0.01～1μmol/L)能浓度依赖性地增强GJIC及Cx26蛋白表达量。[结论]木犀草素增强转染并稳定表达Cx32/Cx26的Hela细胞GJIC；这种增强作用可能与其增加Cx26蛋白表达水平有关。
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异氟醚和七氟醚对新生大鼠皮质凋亡以及Akt和Bcl-xl/Bad表达的不同影响
[目的]研究相同麻醉深度的异氟醚和七氟醚对新生大鼠皮质神经细胞凋亡以及Akt和Bcl-xl/Bad蛋白表达的影响。[方法]5窝出生后7 d(P7)的新生大鼠，每窝取11只(总共55只)，每窝随机分为异氟醚组(Ⅰ组)4只，七氟醚组(S组)4只和对照组(C组)3只。各组分别吸入1.1％异氟醚或1.8％七氟醚或空气4h，在麻醉结束时每窝每组各取一只幼鼠经心脏穿刺抽血检测血气和血糖的变化(n=5)；在麻醉结束后2 h每窝每组各取1只幼鼠灌注取脑，免疫组织化学法检测顶叶皮质区(PC)Caspase-3表达(n=5)；另外，C组在麻醉处理0 h，Ⅰ组和S组分别在麻醉2 h，4 h每窝各取一只幼鼠取新鲜脑皮质，Western blot检测磷酸化Akt，以及Akt，Bcl-xl和Bad表达的变化(n=5)。组间资料的比较采用单因素方差分析。[结果]Ⅰ组Caspase-3阳性细胞数为(27.12±5.22)个/mm2，较对照组[(3.15±0.59)个/mm2]增加751.11％(P＜0.001)，比S组[(9.05±1.76)个/mm2]增加199.67％(P＜0.01)；S组Caspase-3表达与对照组比较差异无统计学意义。Ⅰ组磷酸化Akt表达在麻醉2 h较对照组降低66.31％(P＜0.01)，4 h呈回升趋势；S组在2 h和4 h与对照组无统计学差异。Ⅰ组Bad表达在麻醉2 h较对照组增加162.2％(P＜0.05)，S组Bad表达在2 h和4 h与对照组差异均无统计学意义。Ⅰ组和S组在2 h和4 hBcl-xl表达与对照组差异均无统计学意义。Ⅰ组Bcl-xl/Bad比值在麻醉2 h较对照组降低42.85％(P＜0.01)，S组在2 h和4 h与对照组无统计学差异。[结论]0.5MAC异氟醚比七氟醚诱导更多新生大鼠大脑皮质神经细胞凋亡，异氟醚抑制Akt磷酸化并降低Bad表达,下调Bcl-xl/Bad比值可能是其诱导神经细胞凋亡的机制之一；七氟醚不会影响Akt磷酸化和Bcl-xl/Bad比值。
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钙瞬变交替在房颤形成中的作用
[目的]观察钙瞬变交替在快速心房起搏的犬心房肌细胞中的变化情况，探讨钙瞬变交替在房颤形成中的作用。[方法]制成快速心房起搏的致房颤犬动物模型，分成快速心房起搏组与对照组。分离心房肌细胞，使用激光扫描共聚焦显微镜测定在不同频率的电场刺激下，心房肌细胞的钙瞬变及钙瞬变交替出现的阈值频率。[结果]快速心房起搏组心房肌细胞钙瞬变交替的阈值频率(min-1)明显低于对照组(86±17 vs 123±11，P＜0.01)，同时易产生亚细胞非同步性钙瞬变交替。在30 min-1的频率刺激下，快速起搏的心房肌细胞钙瞬变的达峰时间(ms)明显延长(123±1 vs 110±13，P=0.001)，但90％的恢复时间(ms)则无统计学差异(451±79 vs 466±81，P=0.514)。[结论]快速心房起搏的心房肌细胞易发生钙瞬变交替，钙瞬变交替可能参与了房颤的形成,钙瞬变交替的时间可能与LCC、RyR或其耦联异常有关。
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新型纳米微泡超声造影剂的制备及超声显像研究
[目的]制备可稳定显像的新型小粒径纳米级超声微泡造影剂，并评价其体内外超声显像效果。[方法]通过薄膜-水化、声振-通气及多级分离等多步骤方法制备纳米级脂质微泡，并针对制备过程中的主要影响因素设计了正交试验，筛选出粒径小、重复性好的实验条件。通过光学显微镜及Zeta粒径仪检测纳米微泡大小形态、粒径分布，体外及动物体内超声显像检测其增强显像效果。[结果]纳米脂质微泡呈圆形，分布均匀，无明显聚集，粒径范围238.6～340.7 nm，均值为(276.0±24.1)nm，Zata电位：(-14.0±0.6)mV。体外超声检测在超声造影状态下能持续稳定显像，进入到二维灰阶状态时，瞬间破坏完全,显像效果消失，粒径变小。体内超声显像在造影状态下纳米微泡可明显增强大鼠肝脏、肾脏回声信号。[结论]通过本研究方法成功制备了粒径小、可稳定显像的新型纳米级超声造影剂，在二维灰阶高机械指数状态下该纳米微泡造影剂可被瞬间破坏,这为进一步肿瘤组织血管外靶向显像及肿瘤局部药物释放研究奠定基础。
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PYK2介导H460肺肿瘤细胞失巢凋亡抗性的机制
[目的]研究蛋白激酶PYK2对悬浮状态下的肺癌细胞H460失巢凋亡抗性的作用和PYK2的下游通路蛋白。[方法]RNA干扰实验采用逆转录病毒载体介导的稳定表达系统降低PYK2蛋白的表达；细胞悬浮培养实验用polyHEMA培养方法：用PARP断裂带和DAPI荧光染色检测细胞凋亡情况；细胞侵袭能力用侵袭小室实验；磷酸化蛋白激酶水平用免疫印记实验检测。[结果]用RNA干扰沉默能够降低H460细胞中PYK2蛋白的表达。抑制PYK2的表达能够降低悬浮培养H460细胞增殖能力和促进细胞凋亡增加。此外，沉默PYK2的表达能使肿瘤细胞侵袭能力下降，并降低磷酸化Paxillin和Src的水平，但不能降低磷酸化JNK、AKT和ERK的水平。[结论]PYK2信号通路在H460肺癌细胞失巢凋亡抗性中起重要作用,Paxillin和Src可能是PYK2的下游通路蛋白。
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槲皮素诱导耐甲氨蝶呤骨肉瘤细胞系U2-OS/MTX300凋亡
[目的]研究槲皮素对耐甲氨蝶呤骨肉瘤细胞株U2-OS/MTX300的增殖抑制和诱导凋亡作用及相关机制。[方法]以不同浓度槲皮素及甲氨蝶呤处理U2-OS及U2-OS/MTX300。采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法及平板克隆检测细胞增殖，流式细胞仪检测细胞周期，Hochest 33258染色及流式细胞仪检测凋亡，Western blot法检测凋亡相关蛋白cleaved-PARP，Bax，Bak，Bcl-2及Bcl-XL表达。[结果]槲皮素可明显抑制耐甲氨蝶呤骨肉瘤细胞U2-OS/MTX300的增殖，72 hIC50值为(22±4)μmol/L。10、25、50 μmol/L可显著抑制U2-OS/MTX300克隆形成数量，且随剂量增加抑制作用明显增强。槲皮素与甲氨蝶呤之间不存在交叉耐药性。槲皮素能诱导U2-OS/MTX300细胞S期阻滞，并可诱导胞内产生典型凋亡小体，流式细胞仪可检测到明显凋亡。其作用机制是通过上调Bax，Bak及下调Bcl-2表达，促进cytochrome C释放及诱发PARP等重要胞内蛋白断裂来实现。[结论]槲皮素可显著抑制耐甲氨蝶呤骨肉瘤细胞系U2-OS/MTX300细胞增殖并诱导其凋亡，线粒体途径可能是其诱导凋亡的重要机制。
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雷帕霉素和顺铂对Hep-2细胞DNA切除修复交叉互补基因1表达的协同作用
[目的]探讨mTOR抑制剂雷帕霉素和顺铂对喉癌Hep-2细胞协同作用的机制。[方法]Hep-2细胞在雷帕霉素单药浓度为5、20 μmol/L；顺铂单药浓度为3、12 μmol/L；联合用药浓度为雷帕霉素5 μmol/L联合顺铂3 μmol/L中分别培养，检测Hep-2细胞AKT，mTOR，S6K和ERCC1(DNA切除修复交叉互补基因1)蛋白分别在3，6，12，24，48 h的表达情况。[结果]雷帕霉素单药干预Hep-2细胞12 h后，p-mTOR、S6K及ERCC-1表达表达下调，与对照组比较显著性,AKT蛋白表达在48 h增加，与对照组比较差异有统计学意义；顺铂单药干预Hep-2细胞时，ERCC-1表达12 h后增加，与对照组比较差异有统计学意义，p-mTOR、AKT和S6K蛋白表达差异无统计学意义；联合用药时，AKT蛋白表达在48 h增加，与对照组比较差异有统计学意义，p-mTOR、S6K、在12 h后表达下降，与对照组比较差异有统计学意义，ERCC-1的表达与对照组比较没有差异有统计学意义。[结论]雷帕霉素和顺铂联合应用时，呈协同作用，这可能与雷帕霉素能诱导肿瘤细胞凋亡及影响ERCC-1的表达有关。
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干扰素-α对骨髓增殖性肿瘤JAK2V617F基因表达的影响
[目的]研究干扰素-α在治疗骨髓增殖性肿瘤(MPN)中的疗效及对JAK2V617F基因表达的影响。[方法]分析73例应用干扰素-α治疗超过6个月的MPN患者的临床资料及JAK2V617F基因表达，并与同期单用羟基脲治疗的20例MPN做对照。治疗前后采用AS-PCR方法检测JAK2V617F基因表达。[结果]干扰素-α治疗组中真性红细胞增多症、原发性血小板增多症分别有85.2％、87％达到完全或部分缓解(与对照组单用羟基脲治疗比较，P＜0.01)。随访1～6年,56例干扰素-α治疗组的真性红细胞增多症、原发性血小板增多症JAK2V617F突变基因转阴率分别为54％、41％,转阴患者100％达到临床及血液学完全缓解，而对照组无一例转阴。干扰素-α治疗过程中的副作用主要表现为流感样症状,但均能耐受。[结论]干扰素-α治疗MPN能取得很好的疗效及较好的耐受性，JAK2V617F或可作为骨髓增殖性肿瘤患者能否达到分子生物学缓解的主要标志之一。
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大鼠内侧半月板切除后髌骨的组织学变化及疼痛发生的机制
[目的]分析大鼠内侧半月板切除后髌骨的组织学改变，并探讨髌骨疼痛产生的机制。[方法]大鼠分为实验(MMx)组(n=30)，假手术(Sham)组(n=30)和对照(Contro1)组(n=30)。实验组切除右膝内侧半月板及内侧副韧带，Sham组仅暴露半月板,Control组未予手术。术前1 d及术后第1、2、4、7、14、21及28天测量各组大鼠右后肢机械刺激撤足阈值。术后第1、2和4周各组分别杀死10只大鼠，取右侧髌骨，分析其大体改变以及软骨和软骨下骨的组织病理学变化，并测量软骨下骨增生的血管。同时，应用免疫组化技术检测髌骨中血管内皮生长因子(VEGF)、神经生长因子(NGF)、P物质和肿瘤坏死因子α(TNF)的表达和分布。[结果]①术后MMx组右后肢的机械刺激疼痛阈值显著下降并维持在较低水平至实验结束，且显著低于Sham组和Control组。术后1周内Sham组右后肢痛阈下降但2周左右恢复到术前水平；实验过程中Control组痛阈无变化。②术后第1周开始MMx组髌软骨发生退变，且随时间而不断加重，Mankin's评分也逐渐增加。术后第2周MMx组软骨下骨出现重塑，第4周更加显著：软骨下骨增生的血管突破潮线侵蚀深层软骨，呈多重潮线和潮线中断，软骨下骨平均厚度显著下降。Sham组与Control组各时间点髌软骨及软骨下骨无显著退变，Mankin's评分无明显变化改变。③免疫组化显示MMx组术后髌软骨中VEDF和NGF的表达较Sham组和Control组显著增强，且随时间逐渐增强。MMx组术后髌骨中TNF-α和P物质的表达显著增强，且主要分布于增生的血管壁周围基质和软骨细胞中。Sham组和Control组上述各因子表达微弱。[结论]①内侧半月板及内侧副韧带切除后髌骨有逐渐加重的骨关节炎改变，患肢有骨关节炎疼痛反应；②软骨内上调的VEDF和NGF与软骨退变、软骨下骨重塑及血管增生相关；③软骨下骨增生的血管及其周围上调的疼痛相关分子可能导致膝关节痛阈下降。髌骨软骨下骨也应作为骨关节炎疼痛的治疗靶点。
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恒河猴IL-4与变异IL-4促进外周血单核细胞向树突状细胞转化功能的比较
[目的]比较重组的恒河猴IL-4与变异IL-4在促进外周血单核细胞向树突状细胞转化方面功能的异同。[方法]利用葡聚糖-泛影葡胺梯度离心法分离恒河猴外周血单个核细胞，阴性筛选非CD3+细胞，随后贴壁分离外周血单核细胞并进行流式细胞技术确定筛选结果。将所分离的外周血单核细胞分为阴性对照组，IL-4+GM-CSF组和vIL-4+GM-CSF组进行体外培养,收集细胞并表面染色CD14、CD1a、CD11c和CD83进行流式细胞分析。[结果]利用三步分离的方法得到了纯度达90％的未激活的外周血单核细胞。培养后的细胞进行流式分析，结果提示与阴性对照组相比，IL-4+GM-CSF组和vIL-4+GM-CSF组细胞的CD14表达明显下降，而CD1a、CD11c和CD83表达明显上调，两实验组间无差别。[结论]与IL-4相同，vIL-4亦能促进外周血单核细胞转化为树突状细胞。
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伴门静脉癌栓的肝癌手术预后相关基因的筛选
[目的]全基因芯片技术筛选伴肉眼门静脉癌栓(PVTT)肝细胞癌患者的基因谱，并进一步分析筛选出的基因的临床预测价值。[方法]40例伴有PVTT的肝癌根据术后中位生存期分为2组：长生存期组与短生存期组,采用全基因芯片技术和交叉检验重复抽样方法筛选出具有表达差异的基因谱，并进一步采用免疫组织化学方法验证筛选出的基因的临床意义。[结果]本研究共筛选出的10个表达差异显著的基因，包括AKR1C1、TARDBP、EIF4E、MFN1、SNRNP25、LOC55908、ARPP19、RORC、PEX11B和EGFR2，对伴有PVTT的肝癌术后长生存期患者的预测准确性达95％，特异性100％，假阳性率0。其中肝癌相关基因TD26(Hepatocellular carcinoma associated-gene TD26)在长生存期组中表达明显上调(P＜0.001),免疫组化染色验证TD26蛋白在长生存期组病例中表达显著高于短生存期组(P=0.016)。[结论]本研究筛选出的10个基因有可能作为伴有PVTT的肝细胞癌患者手术预后的预测指标；TD26在伴PVTT的肝癌术后长期生存患者中表达增高。
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半定量18F-FDG符合线路显像评估淋巴瘤预后
[目的]使用18F-FDG符合线路显像检测淋巴瘤病灶高瘤/非瘤(T/N)比值及4疗程化疗前后高瘤/非瘤(T/N)比值下降百分率，研究其与患者预后的关系。[方法]回顾性分析33例淋巴瘤患者资料，高T/N比值是通过ROI技术获得，作为连续型变量进行分析，并把高T/N比值及化疗前后高T/N比值下降百分率分成低值与高值两组,进行统计分析。将33例淋巴瘤患者按国际预后指数(IPI)评分分为0～1与2～4两组，对化疗前两组间淋巴瘤病灶的高T/N比值进行统计分析。[结果]T/N比值低的分组患者预后相对较好(P=0.003)；4疗程化疗前后高T/N比值下降百分率≥77.1％的患者预后相对较好(P=0.037)。在IPI(0～1)与IPI(2～4)组间病灶高T/N差别有统计学意义(P=0.032)。[结论]本研究提示淋巴瘤病灶高T/N比值及4疗程化疗前后高T/N比值下降百分率均有一定预后价值。
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原发性宫颈小细胞癌临床病理分析
[目的]探讨宫颈小细胞癌(SCCC)的临床病理特征及预后因素。[方法]收集中山大学肿瘤防治中心1996年至2008年宫颈癌病例4 075例，25例为宫颈小细胞癌，其中临床病理资料完整者24例。回顾性分析总结患者年龄、症状、疾病FIGO分期、肿瘤大小、治疗方案及预后。应用免疫组化技术检测宫颈小细胞中CK、EMA、NSE、Syn、CgA、CD56、TTF-1和S100的表达，并分析其特征。[结果]24例病例的中位年龄为44.8岁。中位生存时间为初次确诊后19.2月。病理资料显示18例为单纯宫颈小细胞癌,6例为宫颈小细胞癌合并其他类型宫颈恶性肿瘤。此24例SCCC免疫组化显示：NSE 100.0％，Syn95.8％,CD56 66.7％,CgA 79.2％，TrF-1 37.5％，EMA 83.3％，CK 66.7％及S100 8.3％。[结论]SCCC为宫颈上皮恶性肿瘤罕见的一种类型,发病率低，恶性程度高，预后差。治疗以手术为主，辅以其他方法治疗。免疫组织化学研究显示：NSE、Syn、CD56及CgA的联合检测有提高病理诊断意义。
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Coflex棘突间植入与后路椎间融合固定治疗单节段腰椎退行性疾病的对比研究
[目的]探讨单节段棘突间Coflex装置植入治疗腰椎退行性疾病的临床疗效。[方法]收集2008年6月至2009年12月符合入选和剔除标准病例92例，随机并结合病人意愿分为两组，21例采用单节段棘突间Coflex植入术(Coflex组)，71例采用单节段后路椎间Cage植骨融合术(PLIF组)。统计分析两组的住院日、手术时间、失血量、组内及组间术前及未次随访的VAS腰痛评分、VAS腿痛评分、ODI功能评分、手术节段和上邻节段ROM。[结果]Coflex组平均住院日、手术时间、手术失血量少于PLIF组(P＜0.01)；末次随访两组VAS腰痛评分、VAS腿痛评分、ODI功能评分均小于术前(P＜0.01),术前、末次随访组间差异无统计学意义(P＞0.05)；末次随访Coflex组手术节段ROM与术前差异无统计学意义(P=0.70),末次随访PLIF组达到骨性融合，两组术前手术节段ROM差异无统计学意义(P=0.50)，Coflex组末次随访ROM明显大于PLIF组(P＜0.01)；末次随访Coflex组上邻节段ROM与术前差异无统计学意义(P=0.63),末次随访PLIF组ROM明显大于术前(P=0.02)，术前两组上邻节段ROM差异无统计学意义(P=0.61)，末次随访PLIF组ROM明显大于Coflex组(P=0.02)。[结论]单节段棘突间Coflex装置治疗腰椎退行性疾病存改善临床症状方面与后路椎间融合固定术无明显差异，但平均住院日、手术时间和术中失血量较少；棘突间Coflex装置能保留可控的手术节段椎间活动度，并有效减少上邻节段椎间活动度。
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呼吸道合胞病毒毛细支气管炎患儿血白细胞5-脂氧酶及其激活蛋白mRNA水平检测
[目的]观测呼吸道合胞病毒(RSV)毛细支气管炎患儿外周血白细胞5脂氧酶(5-L0)mRNA及5脂氧酶激活蛋白(FLAP)mRNA水平及其与临床严重程度关系。[方法]17例鼻咽分泌物RSV检测阳性的毛细支气管炎患儿为病例组；同期人院的非感染性外科疾病术前患儿10例为对照组，两组年龄分布及性别构成均无显著性差异。采用荧光定量PCR检测两组患儿外周血白细胞5-LO及FLAP mRNA水平，比较两组患儿血白细胞5-LO及FLAP mRNA水平的差异并分析其与临床严重程度的关系。[结果]病例组患儿外周血白细胞5-LO(0.2364±0.0332)和FLAP(0.4106±0.0575)mRNA水平均较对照组(分别为0.0018±0.0013和0.0044±0.0030)明显升高，P值均＜0.01。病例组患儿外周血白细胞5-LO和FLAP mRNA水平与临床严重程度评分均呈正相关(r分别为0.745，0.594，P值均＜0.05)。[结论]RSV毛细支气管炎患儿外周血白细胞5-LO mRNA及FLAP mRNA水平升高并与临床严重程度呈正相关。
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联合应用异烟肼对顽固性神经痛治疗效果的初步研究
[目的]评估联合应用异烟肼(INH)治疗在难治性神经病理性疼痛(NP)治疗中的价值。[方法]采用前瞻性、联合用药的自身对照研究,36例患有难治性NP的病人人组，这些病人对卡马西平和加巴喷丁联合治疗无效，给以异烟肼8mg/kg联合治疗，观察期8周，检测其疗效和副作用。治疗前后采用采用视觉模拟量表(VAS)、睡眠干扰评分和病人总体印象改变表(PGIC)进行疗效评定。[结果]经过8周治疗后，VAS评分较加用异烟肼前有明显下降(配对t检验P＜0.01)，VAS评分由治疗前的61.76下降至32.94，下降幅度达46.7％。痛觉过敏明显减少，23例病人(63.9％)PGIC改善。另外，病人的平均睡眠分数也有明显改善。[结论]联合应用异烟肼可能是一种对治疗NP潜在有效的治疗方法，尤其对难治性NP可能有效。INH的作用机制不明，其疗效仍需要在大样本的RCT研究中进一步确定。
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腹腔镜超声结合内镜超声评估胰腺癌可切除性的临床价值
[目的]探讨腹腔镜超声(LUS)结合术前内镜超声(EUS)评估胰腺癌可切除性的临床价值。[方法]对2006年3月至2009年10月临床诊断为胰腺癌的56例患者先后行EUS及LUS检查，对EUS、LUS均判断肿瘤可以切除的患者行剖腹探查手术，后证实确实可行根治性切除手术的患者，明确术前联合应用EUS、LUS评估胰腺癌可切除性的临床价值。[结果]56例患者中仅35.7％可行根治性切除手术，91.7％的不能接受切除手术的患者因EUS、LUS避免了剖腹探查;LUS判断肿瘤可切除的诊断特异性、正确性及阳性预测值分别达76.9％、90.3％及85.7％，明显高于单用EUS的63.9％、76.8％及60.6％，而EUS、LUS联合检查可进一步将诊断特异性和正确性提高到91.7％和94.4％。[结论]术前联合应用EUS、LUS可以显著提高胰腺癌可切除性评估的准确性，使单纯开腹探查手术减少到10％以下，具有重要的临床价值。
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乳腺癌分子分型在新辅助化疗疗效和预后中的预测作用
[目的]探讨乳腺癌分子分型在表阿霉素联合多西紫杉醇方案(ET方案)化疗敏感性及预后方面的预测作用.[方法]对接受ET新辅助化疗方案治疗的244例乳腺癌患者进行回顾性分析.依据免疫组化雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)、人表皮生长因子受体2(HER2)表达水平将乳腺癌分为Luminal、HER-2+和Basal-like 3个分子亚型,分析3个分子亚型患者的病理疗效及远期生存的差别.[结果]244例患者中,167(68.4％)例为Luminal亚型,43(17.6％)例为HER2+亚型,34(13.9％)例为Basal-like亚型.Basal-like亚型与HER2+亚型的病理完全缓解率(pCR)分别为29.4％、25.6％，明显高于Luminal 亚型的12.0％(P=0.011).Basal-like亚型与HER2+亚型患者,特别是新辅助化疗后仍有癌残留的患者，其5年无病生存率(DFS)明显低于Luminal亚型(P＜0.05).Basal-like亚型与HER2+亚型患者,特别是新辅助化疗后仍有癌残留的患者,其5年总生存率(OS)亦明显低于Luminal亚型(P＜0.05).获得pCR的乳腺癌患者5年的DFS和0S均明显高于化疗后仍有癌残留的患者(P值分别为P＜0.001，P=0.003).[结论]乳腺癌分子分型能作为乳腺癌的病理完全缓解独立预测因子.相比于Luminal亚型,Basal-like亚型和HER2+亚型的pCR率更高,但远期生存率却较差。
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绝经后骨质疏松治疗方法的近期疗效观察与比较
[目的]回顾性观察并比较绝经后骨质疏松几种常用治疗方法的疗效。[方法]282例绝经后骨质疏松患者分为3组：A组，给予骨化三醇胶丸0.25μg和钙尔奇D3 600 mg，均每日1次；B组，在骨化三醇和钙尔奇D3的基础上给予鲑鱼降钙素50 U隔日1次至疼痛缓解，改为每周1次；C组，在骨化三醇和钙尔奇D3的基础上给予伊班膦酸钠3 mg静脉滴注,每3个月1次。随访时间1年。分别在基线和12个月后记录骨密度，SF-36量表评价的生活质量和VAS疼痛评分。[结果]A组患者在骨密度、生活质量和疼痛评分均略有好转，但与基线比较未达显著性差异；B组患者在骨密度、生活质量和疼痛评分均有较大改善，与基线比有显著性差异；C组患者在上述指标均有明显改善，与基线比有显著性差异，且临床用药方法简单，依从性强。[结论]治疗绝经后骨质疏松，需联合用药，单纯补充钙剂和活性维生素D3不能有效提高骨密度；鲑鱼降钙素止痛迅速，能在一定程度改善骨密度和生活质量；伊班膦酸钠能提高骨密度、改善生活质量，且依从性好。
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肝动脉灌注氟尿苷优化结直肠癌肝转移患者的化疗方案的探索性研究
[目的]评价mFOLFOX全身化疗的基础上联合肝动脉灌注氟尿苷(FUDR)治疗不可手术切除的结直肠癌肝转移患者的临床疗效和安全性。[方法]2006年7月至2010年5月，人组48例患者行DSA导引下的经皮肝动脉药盒植入，导管头端置于肝固有动脉，每日用FUDR 0.1～0.2 mg/kg，同时加入地塞米松2 mg，持续经药盒泵入肝动脉灌注14 d；奥沙利铂85 mg/m2，静滴2 h，第1、15天；亚叶酸钙200 mg/m2，静滴2 h，第1、15天；5-氟尿嘧啶1400 mg/m2，持续静滴22 h，第1，15天；每28天重复化疗方案。按美国癌症研究所常见毒性判定标准3.0版评价不良反应。每2个治疗周期后按实体瘤的疗效评价标准(RECIST)评价客观疗效，并按照同时性或异时性肝转移、既往化疗史，动脉灌注FUDR的剂量进行分层分析。[结果]可评价疗效的48例患者均接受大于1周期的联合化疗，中位随访13个月后，全组病例的CR 0例，PR 36例(75％)，SD 9例(18.7％)。各分层亚组的客观有效率均大于63％(63％～85％)。其中12例(25％)患者转化为可手术切除和/或接受局部射频消融治疗。病例中常见不良反应为1～2度的血小板减少，白细胞减少，恶心、呕吐和腹泻，外周感觉神经毒性；Ⅲ级不良反应发生率8.3％。治疗过程中病情未进展的45例患者生活质量得到改善(P＜0.01)。[结论]mFOLFOX全身化疗联合肝动脉灌注FUDR治疗不可手术切除的结直肠癌肝转移患者疗效确切，具有较高的客观有效率，不良反应可耐受，能保障患者的生活质量,是值得推广验证的新联合化疗方案。
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耳内切口下鼓膜成形术的经验及不同自体组织移植材料比较
[目的]介绍在耳内切口下取耳甲部位对应的乳突骨膜用于鼓膜成形术的方法经验并与其它3种常用自体组织移植材料进行对比。[方法]总例数为184耳，包括单纯耳内切口168耳，耳内切口附加耳后切口16耳(均为颞骨筋膜修补)；移植自体材料分成4组并对比：乳突骨膜(99耳)、软骨膜(21耳)、软骨-软骨膜复合片(48耳)、颞肌筋膜(16耳)。对比项目包括手术用时、局麻手术率、鼓膜Ⅰ期愈合率和愈合质量；以及单纯鼓膜成彤术中各组病例的听力学结果(分为优良、成功、有效和无效4级)、新鼓膜愈合时间等并进行统计分析。[结果]四组中愈合率分别为92.9％、85.7％、87.5％、97.9％。其它观察指标也相近。在对单纯Ⅰ型成形术的对比中，各组病例在上述4个听力分级中的分布没有统计学差异(P=0.777)；骨膜组手术用时显著低于其它各组(P=0.000)；愈合时间则各组间没有统计学差异(P=0.294)，但以软骨复合片组愈合时间长。[结论]耳内切口下用乳突骨膜用于鼓室成形术有一定的优点，如手术时间短，省略了耳后附加切口。不同材料在听力学预后等方面没有明显的差异，可以做为鼓膜成形术的一种选择。
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不含佛波酯和霍乱毒素条件下体外培养小儿正常表皮黑素细胞的实验研究
[目的]研究探索不含佛波酯、霍乱毒素条件下小儿正常表皮黑素细胞培养与扩增技术，鉴定黑素细胞合成黑素与产生表面抗原的功能，为开展小儿白癜风以及先天性表皮色素减退等疾病的细胞移植治疗提供可靠的实验依据。[方法]获取15例正常儿童的皮肤组织，分离提取黑素细胞，应用M2培养基并添加bFGF进行黑素细胞培养与增殖,采用DOPA染色法、黑素细胞表面抗原(MART-1)荧光特异性抗体结合实验鉴定体外培养黑素细胞的细胞纯度、合成黑素与表达细胞表面抗原的生物学功能。[结果]15例健康儿童自体黑素细胞培养成功率为100％，未见成纤维细胞、角质形成细胞污染，增殖培养3～5代后的细胞数量即可达到移植要求数量级(8～10)万/cm2，并可连续传平均20代。黑素细胞DOPA染色阳性，浓度均匀，纯度高，并可与特异性MART-1抗体相结合。[结论]应用M2培养基在不添加佛波酯、霍乱毒素条件下进行的黑素细胞增殖培养，获得的黑素细胞生长状态、细胞数量比较理想，黑素细胞具有合成黑素的能力，能成功表达黑素细胞表面抗原。
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介入放射治疗患者所受辐射剂量的单中心调查与分析
[目的]初步调查介入放射治疗的患者术中所受X射线辐射的剂量并探讨降低辐射的方法。[方法]采用DSA机配置的穿透电离室型剂量监测系统(AEP)，实时读取记录947名患者在1651例次介入放射操作中的透视时间、摄影帧数、面积-剂量乘积(DAP)和入射表面剂量(ESD)，运用秩和检验、关联性分析及线性回归分析等统计学方法分析以上数据，比较分析各种不同类型患者、介入操作辐射数据的差异性及相互关系。[结果]患者的透视时间、摄影帧数、DAP、ESD的均值分别为(13.5±12.1)min、(230±180)帧、(194±192)Gy·cm2，(0.60±0.17)Gy，年龄大于50岁的患者、同一部位的所有栓塞操作均有较高的ESD(或DAP)，相关性分析则只有ESD与DAP之间的相关性较好，呈线性正相关(r=0.978,P＜0.01)。[结论]患者的辐射剂量因介入放射操作的类型、患者的年龄及操作者的熟练程度的不同存在着显著差别,使用总ESD比单独摄影帧数和透视时间预测总DAP更加精准。
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HPLC-MS/MS测定血浆中甜菜碱和游离胆碱及其稳定性研究
[目的]建立高效液相色谱串联质谱法(HPLC-MS/MS)测定血浆甜菜碱和游离胆碱水平，并研究血浆中两种物质的稳定性。[方法]以d9-氯化胆碱、d9-甜菜碱为内标，血浆经乙腈除蛋白后，采用SiO2柱(2.1 mm×100mm，5μm)乙腈-甲酸铵缓冲液(15 mmol/L，pH=3.5)等度洗脱，经电喷雾电离，选择多反应监测模式(MRM)同时测定血浆中甜菜碱和游离胆碱。[结果]血浆中甜菜碱和游离胆碱得到良好分离，低定量限均为0.62 μmol/L，线性范围均为0.62～400 μmol/L。对游离胆碱的测定，日内相对标准差(RSD)为5.10％～5.85％，日间RSD为4.54％～13.26％，回收率94.15％～103.70％;对甜菜碱的测定，日内RSD为3.60％～7.30％，日间RSD为2.70％～8.10％，回收率90.03％～103.88％。稳定性研究中，游离胆碱和甜菜碱浓度随保存时间及温度增加，游离胆碱在血浆分离48 h内变化小于15％，甜菜碱超过3 h后变化即大于15％。3个反复冻融循环内游离胆碱浓度稳定；甜菜碱变化明显，第一个冻融循环后即增加至原始浓度3倍。[结论]高效液相色谱串联质谱法同时检测血浆中甜菜碱和游离胆碱是一种快速、准确且灵敏的方法。血浆保存时应注意保存温度、时间及反复冻融对血浆中甜菜碱和游离胆碱浓度的影响。
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广州市儿童致咽炎β溶血性链球菌的流行情况及其emm基因分型
[目的]了解近期广州市儿童致咽炎β溶血性链球菌(BHS)的流行情况及其emm基因分型。[方法]对我院儿科门急诊1 190例急性咽扁桃体炎的患儿进行咽拭子培养。鉴定为BHS者包括A、B、C和G组溶血性链球菌(group A、B、C、G streptococcal,GAS、GBS、GCS和GGS)进行细菌组DNA的提取；通过PCR扩增emm基因并测序；其结果与NCBI和CDCHome中已知的基因序列进行同源性比对大于95％则认为是同型菌株，藉此确定其分型。[结果]在1 190例符合条件的患儿咽拭子标本中[男：678例，(6.96±2.73)岁；女：512例，(6.70±2.60)岁]，鉴定为BHS的共有46例(3.87％)。其中GAS、GBS、GCS和GGS分别有4例、20例、2例和20例，分别占BHS约8.7％、43.5％、4.3％和43.5％；而GAS、GBS、GCS和GGS的阳性率分别约为0.37％、1.68％、0.17％和1.68％。男患儿BHS的阳性率约为5.01％，女患儿约为2.34％，两组比较(x2=26.431，P＜0.001)有统计学意义。除了GBS外，其他BHS(GAS、GC/GS)均有emm基因表达(1 000～1 500 bp)。经测序共有15型emm，其中4株GAS分别表达emm 1和emm 12(7.69％)。[结论]致咽炎GAS阳性率低于0.5％，而GBS、GGS阳性率接近2％。但GBS无emm表达，GAS表达emm 1和emm 12，而GCS、GGS无明确的emm优势型。
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广州市社区人群非心源性胸痛的流行病学调查
[目的]了解广州市社区人群中非心源性胸痛(NCCP)的患病情况，探讨相关危险因素。[方法]2009年9月，采用多阶段抽样方法在广州市农林街社区进行入户面访式问卷调查，内容包含Rose心绞痛问卷和中国反流性疾病问卷等。采用x2检验或Fisher确切概率法比较率的差异，多变量logistic回归分析探讨NCCP相关危险因素。[结果]实际调查1707人(男814人，女893人)，应答率100％。平均年龄51(S=18)岁。过去1年中出现胸痛者共92人(5.4％，95％CI4.3％～6.5％)，61人(3.6％，95％CI 2.7％～4.5％)出现NCCP，NCCP患病率女性高于男性，分别为4.8％和2.2％(x2=8.379，P=0.004)。NCCP人群中8.2％出现烧心和(或)反酸症状，47.5％有高血压病史。多变量logistic回归分析显示，在控制了年龄和性别的影响后，NCCP的危险因素有：烧心和(或)反酸(OR=3.8，95％CI 1.1～12.9，P=0.034)，服用NSAID(OR=10.5，95％CI 5.1～21.7，P＜0.001)，高血压(OR=2.7，95％CI 1.4～5.2，P=0.003)。[结论]广州市农林街社区人群中NCCP常见。烧心和(或)反酸，服用NSAID和高血压是NCCP可能的危险因素。
| 年 | 期数 |
| 2019 | 01 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2017 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2011 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2010 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2009 | 01 02 03 04 05 06 z1 z2 |
| 2008 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2007 | 01 02 03 04 05 06 z1 |
| 2006 | 01 02 03 04 05 06 z1 z2 |
| 2005 | 01 02 03 04 05 06 z1 |
| 2004 | 01 02 03 04 05 06 z1 |
| 2003 | 01 02 03 04 05 06 z1 |
| 2002 | 01 02 03 04 05 06 z1 |
| 2001 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2000 | 01 02 03 04 05 06 Z1 |
| 1999 | 01 02 03 04 |
