中山大学学报（医学科学版）杂志
Journal of Sun Yat-sen University(Medical Sciences) 중산대학학보（의학과학판）
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前列腺精子结合蛋白的二维凝胶电泳及质谱分析
[目的]应用精子膜蛋白亲和层析柱分离金黄地鼠前列腺精子结合蛋白,并用二维电泳和质谱对金黄地鼠前列腺精子膜结合蛋白进行初步分析.[方法]应用附睾精子膜亲和层析柱纯化前列腺精子结合蛋白,采用二维凝胶电泳对纯化的前列腺精子膜结合蛋白进行蛋白分离和图像分析,并结合基质辅助激光解吸附电离飞行时间质谱分析及数据库搜索从而鉴定部分蛋白质斑点;RT-PCR检测已鉴定蛋白在前列腺及未受精卵子中的mRNA的表达.[结果]附睾精子膜蛋白亲和层析柱可纯化出前列腺结合蛋白,前列腺附睾精子膜蛋白结合蛋白的二维凝胶电泳蛋白图谱.分离的蛋白质斑点为30个,质谱鉴定出2个蛋白点,一为热休克蛋白105,另一羰基还原酶(NADPH)-3.前列腺和未受精卵中均表达热休克蛋白105和羰基还原酶-3的mRNA.[结论]自前列腺分泌物中分离出精子膜结合蛋白,金黄地鼠前列腺中精子结合蛋白经双向电泳及飞行质谱分析鉴定出蛋白热休克蛋白和羰基还原酶.
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梯度密度离心法分离肝癌细胞及其转移性细胞株的建立
[目的]建立新的肝细胞癌细胞系,为肝癌实验研究提供更多纯化癌细胞.[方法]从肝细胞癌患者原发灶和门脉癌栓中获取癌组织,采用Percoll浓度梯度分离癌细胞进行培养,用微环境消化法获取癌细胞克隆并建立细胞系,对培养成功的细胞系进行生长曲线测定、染色体G带核型分析、对比基因组杂交和裸鼠接种成瘤实验.[结果]对20例肝癌组织进行癌细胞分离培养和克隆,成功建立2例细胞系H2M和H4M,这2株细胞均来自门脉癌栓,它们的染色体数目测定均为超3倍体(71～78条).CGH检测显示H2M主要的细胞遗传学改变为染色体4q、13q、16q、17p和19p缺失和1q 、3q、5p、6p、7q和8q扩增,其中有一条标记染色体含有1q和6p[t(1;6)染色体];而H4M染色体8p,9,13q,16q缺失和6p,7p,11p,11q13扩增,其中有一条标记染色体含有一长的均染区(hsr).H2M细胞接种裸鼠1个月,产生典型的人肝细胞癌,但H4M接种尚未能成瘤.[结论]Percoll浓度梯度分离癌细胞和微环境消化法取得癌细胞克隆是建立原代细胞系的有效方法.2例肝癌细胞系的建立为以后肝癌研究提供了实验材料,所测出的肝癌细胞系的细胞遗传学改变及在裸鼠接种成瘤,为肝癌细胞癌基因和抑癌基因筛选提供了研究线索和实验模型.
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蛋白酶体β5亚单位过表达对氧化环境下人晶状体上皮细胞的影响
[目的]探讨蛋白酶体β5亚单位(PSMB5)基因过表达对氧化条件下晶状体上皮细胞的影响.[方法]构建重组质粒pcDNA3.1-PSMB5并将其转染入人晶状体上皮细胞株SRA01/04中,形成稳定表达,同时设pcDNA3.1空载体为对照组.RT-PCR法及Western blot法分别检测PSMB5基因及蛋白的表达情况.H2O2分别作用PSMB5转染细胞及空载体转染细胞,MTT法检测细胞增殖能力的变化.[结果]转染后用G418筛选3周后,获得PSMB5转染及空载体转染的G418抗性的细胞克隆.转染PSMB5基因的细胞PSMB5 mRNA表达强度明显增高,而空载体转染细胞与未转染细胞无显著差异;转染PSMB5基因的细胞的PSMB5蛋白表达也显著高于空载体转染细胞.低浓度H2O2作用后,转染PSMB5基因的细胞增殖能力高于空载体转染细胞.[结论]低浓度氧化环境下蛋白酶体β5亚单位PSMB5过表达能对人晶状体上皮细胞具有保护作用.
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细胞松弛素B和解冻方法对玻璃化冷冻小鼠卵母细胞的影响
[目的]探讨细胞松弛素B和解冻程序对玻璃微细管法(GMP)玻璃化冷冻小鼠卵母细胞的影响.[方法]以小鼠MII期卵母细胞为模型,研究冷冻前细胞松弛素B预处理、不同解冻程序对小鼠卵母细胞冷冻效果的影响;随后对经GMP玻璃化冷冻的卵母细胞直接进行培养以检测冷冻是否诱发孤雌发育.[结果]与对照组相比,细胞松弛素B预处理的卵母细胞存活率、受精率、卵裂率及囊胚率没有显著差异(89.3%vs91.3%,44.0%vs40.4%,30.0%vs 27.7%,4.0%vs 6.4%;P＞0.05);采用连续浓度梯度递减解冻法的受精率明显高于间断浓度梯度递减解冻法(57.4%vs40.4%;P＜0.05),且前者的卵裂率和囊胚发育率也相对较高(40.2%vs 27.7%,14.5%vs 6.4%;P＞0.05).冷冻复苏后卵母细胞的孤雌发育率稍高于未经冷冻的卵母细胞(17.1%vs 3.2%;P＞0.05).[结论]细胞松弛素B预处理对MII期小鼠卵母细胞的GMP玻璃化冷冻保存效果没有影响;采用连续浓度梯度递减解冻法能明显提高复苏后卵母细胞的体外发育能力.
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血管紧张素Ⅱ及醛固酮阻滞剂对心肌梗死大鼠骨桥蛋白表达的影响
[目的]研究血管紧张素Ⅱ及醛固酮阻滞对心肌梗死大鼠非梗死区心肌组织骨桥蛋白(OPN)表达的影响.[方法]将心肌梗死后24 h存活大鼠随机分为3组:盐水组(15只,5 mL/d),培哚普利组(18只,2 mg/kg·d)和螺内酯组(17只,20 mg/kg).灌胃给药;另设假手术组(15只)作对照.分别于心肌梗死后6周:导管法测定左室有创血流动力学;组织学方法检测非梗死区胶原纤维沉积和心肌细胞横径;Western blot检测非梗死区心肌组织OPN表达.[结果]①假手术组大鼠心肌组织Western blot未检测到OPN表达,心肌梗死大鼠6周后非梗死区心肌组织有大量OPN表达,培哚普利及螺内酯治疗均能显著抑制该蛋白的上调,差别均有统计学意义(P均＜0.01).②与假手术组相比,所有心肌梗死大鼠均出现显著的心肌间质纤维沉积,左室重量指数增大,非梗死区心肌细胞横径增加,差别均有统计学意义(P均＜0.01).与盐水组相比,培哚普利及螺内酯组心肌间质纤维沉积减轻,左室重量指数及非梗死区心肌细胞横径降低,差别均有统计学意义(P均＜0.01).③与假手术组相比,所有心肌梗死大鼠6周后左室内收缩压(LVSP)和±dp/dtmax均显著下降,左室舒张末期压(LVEDP)显著上升,差别均有统计学意义(P均＜0.01);与盐水组相比,培哚普利与螺内酯组大鼠心功能显著改善,差别均有统计学意义(P均＜0.01).[结论]心肌梗死后大鼠非梗死区心肌组织出现大量OPN表达及显著的心室重构;血管紧张素Ⅱ及醛固酮阻滞均能显著抑制心肌梗死大鼠OPN的表达,并能改善心肌的纤维化,改善心脏功能.
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使用FLAG标签肽及慢病毒载体共同筛选小鼠foxp3基因RNA干扰的有效靶点
[目的]筛选高效的foxp3 RNA干扰的靶点用于阻断CD4+CD25+Treg细胞的免疫抑制功能.[方法]使用oligoengine软件设计foxp3基因shRNA序列,化学合成法合成4条shRNA序列,构建含foxp3的靶序列的慢病毒载体;构建出表达FLAG融合蛋白和目的基因的工具细胞293T细胞用于筛选RNA干扰的有效靶点.[结果]成功包装了4条foxp3基因靶序列相应的慢病毒颗粒;成功构建了表达融合蛋白和目的基因的293T工具细胞;在工具细胞上筛选出了2条RNAi效率分别为91.3%和95.6%的有效靶点.[结论]使用FLAG融合蛋白和慢病毒载体能够筛选出Foxp3基因的RNAi佳靶点.
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深低温反复冻融杀伤人眼脉络膜黑色素瘤OCM-1细胞的机制
[目的]研究-70℃反复冻融体外杀伤人眼脉络膜黑色素瘤细胞系OCM-1的机制.[方法]OCM-1细胞反复冻融后,用噻唑蓝比色法及克隆形成实验检测细胞的杀伤情况和细胞生长活力,免疫组织化学方法检测细胞P16表达的变化,电镜及共聚焦显微镜观察冻融后细胞凋亡和坏死的形态学改变,并测定细胞的凋亡比率,流式细胞仪检测冻融前后细胞CD40表达比率及细胞膜电位的变化.[结果]噻唑蓝比色法检测及克隆形成实验显示,冻融可以直接杀伤OCM-1细胞,且残存的细胞生长能力也明显受抑制.免疫细胞化学染色见对照组的细胞呈P16阳性,而冻融后的细胞均呈阴性,冻融后培养的细胞部分呈阳性.电镜下观察到冰晶的结构特征及细胞的坏死和凋亡等变化.激光共聚焦显微镜观察发现凋亡细胞随着冻融次数的增加而增多.流式细胞仪测定显示冻融后细胞膜电位下降,冻融前后CD40阳性细胞比率差异明显,且呈一定的量效关系.[结论]冻融不仅可以明显杀伤OCM-1瘤细胞,还能抑制残存瘤细胞生长.反复冻融能诱导大量的肿瘤细胞发生凋亡,此为杀伤肿瘤及诱导肿瘤退变的直接原因,其机制与线粒体膜电位及P16表达下调有关.冻融后瘤细胞坏死因子CD40表达增强,可能是增强机体的免疫应答,介导机体免疫杀伤瘤细胞的机理.
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胆囊旁和近结肠肝脏组织的射频消融
[目的]在活体上观察多极射频消融电极展开不同直径、消融时间与组织坏死的关系,并评价消融区域组织坏死程度,分别了解在近胆囊和结肠肝曲部位肝脏消融对胆囊和结肠的影响.[方法]家猪6只,体质量(17±2.5)kg.静脉麻醉,每肝内分为5个位点进行射频消融.其中2组将消融电极展开到3 cm,每组5个点分别行5 min和10 min消融,包括距离胆囊床(5±1)mm,行10 min射频消融;距离结肠肝曲(5±1)mm处,行10 min射频消融,并观察消融结果.另3组电极展开到5 cm,每组5个点分别行5 min、10 min和15 min组织间消融.[结果]消融电极展开到3 cm行5 min治疗组,5个点局部消融区域组织达到完全坏死;10 min×5 min消融治疗坏死范围相似.大体病理上消融相邻区域胆囊,结肠未见有坏死,镜下病理显示胆囊壁、结肠周围有慢性炎症并有纤维增生表现.消融电极展开到5 cm,5 min消融组织间有活性成分,15 min,10min均可保证消融区域完全坏死.[结论]可根据需要调整多极消融电极展开大小,在肝内接近胆囊区域、结肠肝曲部位消融安全,可发挥较好的作用.
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白蛋白对近端肾小管上皮细胞增殖与凋亡的影响
[目的]探讨白蛋白对近端肾小管上皮细胞(PTCs)增殖与凋亡的影响.[方法]用不同剂量(0.1,0.5,1,5,10,30 mg/mL)去脂牛血清白蛋白(dBSA)超载体外培养的NRK52E,dBSA 0 mg/mL作为对照.细胞增殖活性用MTS比色法检测和显微镜观察.细胞凋亡检测:荧光染料DAPI染核,DNA梯带实验,原位末端标记(TUNEL)实验和苔盼蓝染色计数.[结果]高剂量dBSA超载未完全融合NRK52E细胞144 h后细胞变得更密集.MTS比色结果发现,高剂量dBSA(5、10、30 mg/mL)超载可明显诱导NRK52E细胞增殖,增殖活性分别为(0.700±0.045)A、(1.021±0.029)A和(1.273±0.173)A,较对照细胞(0.441±0.020)A显著升高,P均＜0.05.高剂量dBSA超载的NRK52E细胞,有较多出现核碎裂和核固缩,有较强DNA梯带和原位末端标记信号.苔盼蓝染色计数发现,高剂量dBSA(5、10、30 mg/mL)超载NRK52E细胞72 h的死亡细胞数[(680 000±28 618)/mLL,(970 000±52 915)/mL和(1 132 500±88 954)/mL较对照的死亡细胞数[(312 500±28 395)/mL]显著升高,P均＜0.05;而且死亡细胞数呈剂量依赖性.[结论]白蛋白超载NRK52E细胞既可诱导细胞增殖,又可诱导细胞凋亡.
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胸腺肽类药物对体外诱导ES细胞分化为T细胞的作用
[目的]研究目前临床常用的增强细胞免疫功能的胸腺肽,胸腺5肽和胸腺素α-1在小鼠胚胎干细胞向T淋巴细胞分化过程中的作用.[方法]借助小鼠胚胎干细胞(ESC)体外自然分化形成的类胚体(EB)中含有三胚层细胞的独特细胞环境,加入多种细胞因子和胸腺多肽,体外诱导小鼠ESC向T淋巴细胞分化.利用流式细胞仪检测在三种不同胸腺多肽的诱导下,不同时间点的小鼠ESC来源的细胞表面CD3分子的表达水平.并在相应时间点通过RT-PCR检测与T淋巴细胞发育密切相关的Notch信号分子的转录水平.[结果]在加入胸腺肽和胸腺素α1诱导的实验组,均有细胞表达CD3分子,CD3+细胞的百分比随诱导时间的增加而增多;而加入胸腺五肽的实验组无CD3+细胞出现.加入胸腺素α1和胸腺肽的实验组,有Notch1及其配体delta-like-1和delta-like-4的转录;而加入胸腺五肽的实验组的细胞无Notch1及其配体转录.[结论]胸腺素α1或胸腺肽可能通过影响Notch1信号途径支持ES细胞向T细胞分化,而胸腺五肽无此作用.
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鼻咽癌差异表达miRNAs筛选研究
[目的]应用miRNAs芯片筛选原代培养的鼻咽癌细胞差异表达miRNAs,并寻找差异表达miRNAs调控的靶基因,为进一步研究其在鼻咽癌发病机制中的作用打下基础.[方法]运用miRNAs芯片技术筛选原代培养的鼻咽癌细胞差异表达miRNAs,同时运用miRNAs特异的引物组对差异表达的miRNAs进行荧光定量RT PCR验证.运用靶基因预测软件并结合全基因组表达谱芯片结果预测差异表达miRNAs可能调控的靶基因,并利用western blot技术检测预测的靶基因在原代培养的鼻咽癌细胞中的表达.[结果]miRNAs芯片结果显示,鼻咽癌中miR-203、miR-503、miR-424、miR-141和miR-148a表达下调,而miR-25、miR-195和miR-15a表达上调,其差异表达均在2倍以上;荧光定量RT PCR结果与miRNAs芯片的结果较符合;其中miR-203的预测靶基因为CCNG1和SPARC,Western blot结果显示,其在原代培养的鼻咽癌细胞亦高表达.[结论]miR-203、miR-503、miR-424、miR-141、miR-148a、miR-25、miR-195、miR-15a在原代培养的鼻咽癌细胞与正常鼻咽上皮细胞中存在差异表达;CCNG1和SPARC可能是miR-203调控的靶基因,可能参与了鼻咽癌的发生发展.
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ClC-3在糖尿病大鼠主动脉平滑肌、肾脏及脑组织中的表达及其变化
[目的]在糖尿病发展的不同时期探讨容积依赖性氯通道蛋白-3(ClC-3)的表达及其变化.[方法]用链脲佐菌素(STZ)诱导大鼠糖尿病模型后,在第2、4、8、12和16周,用蛋白印记法检测主动脉、肾脏(皮质、髓质)及脑组织上ClC-3蛋白的表达.[结果]各组织上均检测到内源性ClC-3蛋白的表达,分子量在80 KDa-110KDa之间;与对照组相比,糖尿病时大鼠主动脉平滑肌及脑组织上ClC-3蛋白的表达在第8周后显著性升高(P＜0.05),肾髓质上ClC-3蛋白的表达显著性降低(P＜0.05),而肾皮质上ClC-3蛋白的表达末见显著性差异.[结论]除肾皮质外,在糖尿病第8周开始,ClC-3蛋白在主动脉平滑肌及脑组织上表达显著性增加,而肾髓质表达显著性降低.
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急性甲醇中毒大鼠模型及其眼部改变的研究
[目的]探讨急性甲醇中毒大鼠模型的制作方法及其眼部改变,为研究中毒后视功能损害及救治方法建立基础.[方法]SD大鼠32只,随机分为A(低剂量甲醇组)、B(高剂量甲醇组)、C(生理盐水对照组)、D(空气对照组)4组,每组8只.A、B组吸入N2O/O2混合气及不同剂量甲醇灌胃,C组吸入N2O/O2混合气及生理盐水灌胃,D组置于正常空气中并按B组剂量给予甲醇灌胃,观察各组大鼠一般情况、体质量及眼部改变、静脉血甲醇浓度、视网膜电图和视网膜组织学改变.[结果]染毒大鼠反应迟钝、运动失调,视盘充血水肿、视网膜点状出血,A组大鼠体质量为(187±12)g,B组为(176±13)g,较C、D对照组显著减轻(P＜0.05);A组视网膜电图a、b波振幅分别为(87+13)μV、(187±38)μV,B组a、b波振幅分别为(53±19)μV、(132±39)μV,与对照组相比明显下降(P＜O.05);视网膜在光镜下表现为各层细胞水肿、排列紊乱及空泡化;电镜下细胞凋亡,线粒体肿胀、嵴断裂;B组动物上述改变尤其明显.[结论]吸入N2O/O2混合气及甲醇灌胃可建立急性甲醇中毒的大鼠模型,出现典型的视网膜结构和功能改变.
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人类Foxm1b基因的原核表达、抗体制备及其对肝癌细胞中Foxm1b蛋白的识别
[目的]构建人类Foxm1b基因的原核表达载体,表达并纯化蛋白,制备多克隆抗体,并用此抗体检测肝癌细胞中Foxm1b基因的表达,为进一步研究Foxm1b基因的功能奠定基础.[方法]从GenBank中下载人类Foxm1b基因全长cDNA序列并用Pcgene软件分析其可能的抗原表位,设计引物,应用RT-PCR获得含抗原表位的Foxm1b基因片段,重组入原核表达载体pET-28a,在大肠杆菌BL-21(DE3)中诱导表达,应用亲和层析法获得纯度较高的原核表达蛋白并免疫大鼠制备多克隆抗体,用ELISA检测抗体滴度并用免疫细胞化学的方法检测此抗体对肝癌细胞中天然Foxm1b蛋白的识别.[结果]成功构建了Foxm1b基因重组表达载体pET-28a-Foxm1b,表达的蛋白经纯化后免疫大鼠得到了高滴度的多克隆抗体,该抗体可以识别肝癌细胞中的天然抗原.[结论]人类Foxm1b基因的原核表达载体的构建、重组蛋白的表达纯化及有诊断价值的抗体的制备为后续的研究提供了基础.
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心力衰竭大鼠脑脊液及血清瘦素改变的研究
[目的]检测心力衰竭大鼠血清、脑脊液瘦素水平及脑脊液/血清瘦素比值改变,对心衰大鼠的瘦素水平、瘦素抵抗及瘦素在血-脑脊液处的转运进行初步探讨.[方法]通过缩窄雄性Wistar大鼠腹主动脉制成心力衰竭模型.30只大鼠随机分成空白对照组、假手术对照组和心衰组.预实验应用超声心动图和血流动力学检测证实术后4个月大鼠已经出现明显心衰.术后4个月采集脑脊液、血清,ELISA法测定瘦素水平.[结果]心衰组的血清瘦素水平较假手术及空白对照组明显升高[(8.1±4.0)ng/mL vs(3.7±1.7)ng/mL,(3.1±1.4)ng/mL,P＜0.01].3组脑脊液瘦素水平无显著差异.心衰组脑脊液/血清瘦素比值较两对照组明显降低(10±7 vs 18±8,22±12,P＜0.01).两对照组血清瘦素水平及脑脊液/血清瘦素比值无显著差异.对照组脑脊液瘦素与血清瘦素呈正相关(r=-0.724,P＜0.05),心衰组两者相关性消失.[结论]心衰大鼠血清瘦素水平升高,脑脊液瘦素水平无显著改变,脑脊液/血清瘦素比值下降,脑脊液瘦素与血清瘦素相关性减弱.支持瘦素血-脑脊液饱和转运系统的存在,提示瘦素进入中枢系统的转运障碍是瘦素抵抗的一个重要原因.
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ThaPsigargin对人晶状体上皮细胞系SRA01/04增殖抑制的作用机制
[目的]研究thapsigargin(TG)对体外培养的人晶状体上皮细胞系SRA01/04增殖的影响,并探讨其分子机制.[方法]不同浓度TG处理SRA01/04细胞72 h,噻唑蓝比色法(MTT)检测细胞增殖;流式细胞仪(PI法)检测细胞周期改变;透射电镜观察细胞超微结构变化;TUNEL法检测细胞核中DNA的断裂情况;激光共焦显微镜和流式细胞仪检测Caspase3活性亚单位(17/19 ku)的表达及阳性细胞表达率.[结果]MTT法测得TG为0.325～5 μmol/L时,细胞增殖抑制率变化显著,IC50大约为0.8 μmol/L;透射电镜显示TG处理SRA01/04细胞膜皱缩,染色体浓缩、边集、核膜裂解、凋亡小体形成;流式细胞仪(PI法)及TUNEL法检测TG浓度为0,0.1,0.5,1,10 μmol/L分别处理SRA01/04细胞72 h,细胞凋亡率随浓度的增加而增加,呈浓度依赖性;TG处理后细胞Caspase3阳性表达率也呈浓度依赖性增加,TG为10 μmol/L时,几乎每个细胞浆内Caspase3都被激活.[结论]Thapsigargin可能通过激活Caspase3为诱导体外培养的人晶状体上皮细胞系SRA01/04细胞凋亡而抑制其增殖,TG为预防后发性白内障的药物研究提供了基础.
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乳腺癌病人血清HER-2/neu检测及其临床意义
[目的]本研究分析晚期乳腺癌患者血清HER-2/neu的水平与预后的关系,并探讨其临床意义.[方法]酶联免疫法(ELISA)检测94例晚期乳腺癌患者血清HER-2/neu的浓度,分析血清与组织中HER-2/neu表达的相关性,并分析其与患者预后的关系.[结果]94例晚期乳腺癌患者就诊时的血清HER-2/neu浓度为0.34～275.25 μg/L(平均浓度为23.69μg/L).血清HER-2/neu浓度的高低与化疗的有效性、疾病进展时间的长短无关.晚期乳腺癌患者的血清HER-2/neu浓度与肿瘤组织中HER-2/neu表达强阳性是一致的.[结论]血清HER-2/neu尚不能确立为独立的预后指标,需要更多的病例进行分析.
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冠心病患者妊娠相关血浆蛋白A含量与血管内皮功能关系探讨
[目的]探讨冠心病患者血循环妊娠相关血浆蛋白A(PAPP-A)水平与内皮功能的关系.[方法]64例冠心病患者,其中稳定型心绞痛组34例,急性冠脉综合征组30例,分别检测其相关内皮功能,包括肱动脉血流介导的血管舒张反应(FMD)和高敏C-反应蛋白(hs-CRP)、内皮素(ET)、一氧化氮(NO)水平,并用酶联免疫法检测血清PAPP-A.[结果]稳定型心绞痛组患者同急性冠脉综合征组相比PAPP-A[(6×10-3±5×10-3)U/L与(19×10-3±13×10-3) U/L,P＜0.05]、hs-CRP[(0.5±0.3)mg/L与(3.6±2.2)mg/L,P＜0.01]、NO[(57±4)μmol/L与(45±5)μmol/L,P＜0.05]和FMD(6.0%±0.8%与3.3%±1.2%,P＜0.05)的差异有统计学意义.逐步选择多重回归分析,按α=0.10水准,发现PAPP-A与hs-CRP和FMD存在直线关系,Lnhs-CRP的偏相关系数为0.333(95%置信区间:0.138～0.527,P＜0.01),FMD的偏相关系数为-0.623(95%CI:-1.144～-0.102,P＜0.05),其中常数项为5.570.高PAPP-A(＞11.094×10-3 U/L)患者hs-CRP明显增高[(5.3±4.2)mg/L与(1.3±0.6)mg/L,P＜0.01),FMD则降低(3.3%±2.4%与6.2%±3.6%,P＜0.05).[结论]PAPP-A可作为间接评估冠心病患者血管内皮功能的指标之一.
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儿童肾母细胞瘤的保肾治疗
[目的]探索儿童肾母细胞瘤(WT)保肾治疗方案和提高WT患儿长期生存率、改善生存质量的诊疗方案.[方法]根据诊治方案不同,将我院261例WT患儿分为A、B两组,通过比较A、B两组的疗效,分析外科、病理、影像、化疗、放疗等学科在提高WT疗效,改善长期生存质量中的作用以及多学科协作综合治疗对保肾治疗的作用.[结果]A组WT诊治以影像学诊断+手术治疗为主,B组WT诊治强调明确的病理分型与临床分期以及个体化的多学科综合治疗方案.A、B两组WT患儿在2年/5年生存率、保肾治疗率、手术并发症及长期生存质量等方面均存在显著差异.对B组WT患儿中的Ⅰ期各型、Ⅱ期FH型肿瘤位于患肾一极和Ⅴ期WT患儿进行保肾治疗后,肾切除率从A组的19.1%(Ⅰ～Ⅳ期)和50%(Ⅴ期)分别下降为10.5%和30%,显著增加了保留部分患肾的机会与残肾量,改善了患儿生存质量.保肾治疗不影响患儿的肿瘤复发率.[结论]术前准确的分期分型诊断与合适的化疗是保肾治疗的关键,多学科协作诊治能显著改善WT患者的疗效;对符合保肾治疗指征的儿童WT患者进行保肾治疗,能改善WT患儿生存质量.
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氟比洛芬在肝癌射频消融术麻醉中的应用
[目的]探讨肝癌射频术中应用氟比洛芬是否可以减少静脉麻醉导致的呼吸抑制的发生.[方法]选择射频治疗肝癌患者60例,随机分为K组和N组,每组各30例,其中K组术前15 min静脉注射氟比洛芬50mg,N组术前15 min静脉注射生理盐水5 mL,两组均以异丙酚复合瑞芬太尼微量泵维持麻醉.使记录术前、手术开始时、手术开始后5 min及患者术后苏醒时的平均动脉压、心率、脉搏氧饱和度及呼吸频率,监测动脉血二氧化碳分压;记录患者苏醒时间;记录出现术中体动、呼吸暂停的例数.[结果]瑞芬太尼用量K组[(0.22±0.03)mg]显著少于N组[(0.51±0.07)mg,P＜0.01].术中体动K组(2例)少于N组(7例),呼吸暂停N组(12例)显著大于K组(2例).[结论]氟比洛芬可以减少肝癌射频术中瑞芬太尼的用量,降低呼吸抑制等副作用的发生率.
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晶状体随年龄增长对眼前段轴向空间结构的影响
[目的]探讨正常人晶状体随年龄的增长对眼前段轴向空间结构的影响.[方法]采用眼前段光学相干断层扫描仪(AS-OCT)测量正常人105例(105只眼)前房深度(ACD)和晶状体厚度(LT);比较它们性别间的差异,采用直线相关与回归分析方法分析年龄与ACD、LT的相关关系.[结果]正常人ACD、LT的平均值分别为:2.97(S=0.32)mm、4.21(S=0.43)mm.女性ACD为2.87(S=0.33)mm比男性3.07(S=0.29)mm浅(P=0.001);LT性别间差异无统计学意义(P=0.250).ACD与年龄负相关(r=-0.570,P=0.000),LT与年龄正相关(r=0.806,P=0.000).ACD随年龄的增加每年变浅8 μm(P=0.000);LT随年龄每年增厚21 μm(P=0.000).晶状体随年龄向玻璃体腔方向扩张的速度存在性别差异(P=0.000),男性13 μm/year,女性7 μm/year.[结论]女性ACD比男性浅,正常人随着年龄的增加,ACD逐渐变浅,LT厚度逐渐增加.女性LT的增加使ACD更趋于变浅,而男性则较多向玻璃体腔扩张.
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双侧鼻唇沟肌皮瓣修复口底大面积缺损的临床研究
[目的]探讨双侧鼻唇沟轴型带蒂肌皮瓣修复口底大面积缺损后皮瓣生长变化及对供区的影响.[方法]对12例口底癌根治术后口底大面积缺损(缺损面积3.5～5.0×5.0～8.0 cm2)患者应用双侧鼻唇沟轴型带蒂肌皮瓣行Ⅰ期修复,随访12～60个月,观察皮瓣成活和生长状况,评价供区疤痕对面容的影响.[结果]12例患者修复后均Ⅰ期愈合.术后1个月,皮瓣上皮开始软化,3个月后上皮角质层部分脱落,术后1年,接近口腔粘膜;供区术后3个月内疤痕突出,影响面容,3个月后面部皮肤逐渐松弛,术后1年供区疤痕已接近双侧鼻唇沟,在年长患者更为明显.[结论]双侧鼻唇沟轴型带蒂肌皮瓣与口底缺损区邻近,皮瓣面积较大,易成活,为口底癌根治术后口底大面积缺损修复提供了一种可靠的选择,尤其适用于年长患者.
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实时荧光定量PCR检测原发性肝癌中PRL-2基因的表达
[目的]建立TaqMan实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测肝细胞再生磷酸酯酶2(PRL-2)mRNA表达水平,并应用该法检测原发性肝细胞癌中PRL-2基因的表达.[方法]构建含PRL-2基因开放阅读框架的T载体,制作标准曲线.提取手术切除12例人肝癌、门静脉癌栓(PVTT)和癌旁组织总RNA并逆转录为cDNA.应用实时荧光定量PCR法观察人肝细胞癌组织和门静脉癌栓及癌旁组织中PRL-2的表达水平.[结果]线性检测范围达5个数量级,低检测下限为1×102拷贝,高检测上限为1×106拷贝.PRL-2在所有的门脉癌栓及10例肝癌组织表达,仅在4例癌旁组织中表达.门脉癌栓PRL-2 mRNA表达水平显著高于肝癌及癌旁组织(P＜0.01),肝癌组织表达显著高于癌旁组织(P＜0.01).[结论]实时荧光定量PCR可以准确定量测定PRL-2基因的表达;PRL-2基因在门脉癌栓的更高表达提示其在肝细胞癌的发生、转移中可能起重要作用.
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他克莫司治疗狼疮性肾炎的前瞻性研究
[目的]前瞻性比较观察他克莫司(FK506)与传统疗法环磷酰胺(CTX)静脉冲击联合激素诱导治疗狼疮性肾炎(LN)的临床疗效.[方法]40例经肾活检诊断为Ⅲ、Ⅳ、V型肾功能正常的活动性LN患者,尿蛋白定量≥1.5 g/24 h,随机分为他克莫司组20例[他克莫司起始剂量为0.1 mg/(kg·d)]和传统疗法组20例(CTX 1 g/月×6月),同时口服泼尼松1 mg/(kg·d),比较两组治疗3、6个月的临床疗效.疗效评价分为完全缓解(CR),部分缓解(PR)及无效(NR).[结果]治疗3个月内他克莫司组有3例退出,传统疗法组有4例退出.诱导治疗3个月他克莫司组的总有效率(76%,CR 5/17,PR 8/17)显著高于传统疗法组(37.5%,CR 2/16,PR 4/16,P＜0.05).治疗6个月他克莫司组和传统疗法组的总有效率分别为88.2%(CR 11/17,PR 4/17)和62.5%(CR 5/16,PR 5/16).治疗3个月及6个月,他克莫司组在水肿消退、尿蛋白水平下降、血清白蛋白升高、SLEDAI减少等方面与传统疗法比较,均有显著差异(P＜0.05),而且出现副反应较传统疗法组为少.[结论]与传统疗法相比,他克莫司联合激素是一种快速有效地诱导LN缓解的治疗方法.
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难以根治性切除大肝癌经皮肝动脉化疗栓塞术后二期切除的疗效分析
[目的]探讨难以根治性切除的大肝癌经皮肝动脉化疗栓塞术(TACE)治疗后手术切除的意义及疗效.[方法]分析143例难以根治性切除的大肝癌临床病理资料,其中68例经TACE治疗后二期切除(A组),75例未行术前TACE单纯切除(B组).观察TACE前后肿瘤变化情况,比较两组患者的术后情况、癌残留率,以及两组病人的术后生存率及无瘤生存率.[结果]①A组经TACE后肿瘤有不同程度的缩小,且肿瘤坏死增多,周围子灶的检出率增加22.1%;肿瘤与周围脏器的粘连增加,而肿瘤包膜形成增多、癌残留率显著降低(P＜0.05);②A组的术中出血量和肝门阻断时间均较B组有不同程度增加,但差异无统计学意义,两组术后严重并发症比较差异无统计学意义(P＞0.05);③A组患者1、3、5年生存率和无瘤生存率为88.2%、53.0%、36.1%和65.7%、37.7%、30.4%;B组分别为68.8%、36.9%、25.1%和46.2%、24.4%、9.7%,两组差异有统计学意义(P＜0.05).[结论]术前TACE使难根治性切除大肝癌肿瘤缩小、包膜形成和癌残留减少,有效地提高大肝癌根治性切除率,延长实际生存期.
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瘦素和VEGF的阳性细胞在卵巢子宫内膜异位症中的病理学研究
[目的]探讨瘦素和血管内皮生长因子(VEGF)在子宫内膜异位症(EMs)发病机制中的作用.[方法]应用免疫组织化学法检测瘦素和血管内皮生长因子在28例卵巢子宫内膜异位囊肿患者的异位内膜、在位子宫内膜及20例正常子宫内膜中的表达特点.[结果]①腺上皮细胞中:瘦素和VEGF在异位内膜和在位内膜中的表达均高于正常子宫内膜(P＜0.05),并且异位内膜中的表达高于在位内膜(P＜0.01);②间质细胞中:瘦素在异位内膜中的表达高于在位内膜、正常子宫内膜(P＜0.01),VEGF在异位内膜、在位内膜及正常子宫内膜中的表达差异无统计学意义(P＞0.05);异位内膜、在位内膜中的瘦素与VEGF均呈正相关表达(P＜0.01).[结论]瘦素和血管内皮生长因子在卵巢子宫内膜异位症的发病机制中发挥作用,两者在异位内膜和在位内膜中的血管生成过程中密切相关.
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慢性乙肝患者拉米夫定耐药后出现肝功能衰竭的危险因素
[目的]探讨慢性乙型肝炎患者拉米夫定耐药后出现肝功能衰竭的危险因素.[方法]拉米夫定耐药后导致病情加重的慢性乙型肝炎患者56例纳入研究,记录拉米夫定治疗前病程、诊断、拉米夫定疗程,检测并记录临床耐药时的肝功能、乙肝两对半、HBV DNA定量、YMDD变异及前C区变异.按病情加重后的诊断分为肝功能衰竭组和慢性乙型肝炎组进行比较.[结果]肝功能衰竭组患者年龄(45±13)岁,大于慢性乙型肝炎组(37+13)岁(P＜0.05);肝功能衰竭组临床耐药时HBV DNA载量高于慢性乙型肝炎组[(2.8×108±4.9×108)拷贝/mLvs(3.1×106±2.9×106)拷贝/mL;P＜0.05];肝功能衰竭组出现HBeAg/ Anti-HBe血清学转换(54.6%)高于慢性乙型肝炎组(18.4%,P＜0.05).年龄和拉米夫定治疗前诊断为肝硬化都是耐药后出现肝功能衰竭的独立危险因素.[结论]拉米夫定治疗前年龄大、诊断为肝硬化,临床耐药时病毒载量高,耐药后出现HBeAg/ Anti-HBe血清学转换可能是拉米夫定治疗耐药后出现肝功能衰竭的危险因素.有肝硬化基础患者一旦发生耐药变异,应及时使用能治疗耐药变异的阿德福韦或恩替卡韦.
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不同温度无水乙醇消融兔VX2移植性肝癌的实验研究
[目的]探讨不同温度无水乙醇瘤内注射对兔VX2移植性肝癌消融治疗效果.[材料与方法]32只新西兰大白兔肝内植入瘤块.随机分为25℃、50℃、60℃、70℃4组,各8只,在CT导向下经皮穿刺向瘤内注入不同温度的无水乙醇各1 mL,CT扫描测定碘油范围,一周后取肿瘤行病理学检查,观察相同剂量不同温度无水乙醇对肿瘤组织所致凝固坏死的范围.[结果]肿瘤坏死面积随温度增加而扩大,50℃组与常温组差异无统计学意义,60℃和70℃组与常温组差异有统计学意义,60℃组和70℃组差异有统计学意义(P均＜0.0).[结论]加热至60℃以上的无水乙醇对兔VX2移植性肝癌的消融效果较常温好,是一种不增加无水乙醇用量又能达到扩大消融范围的肝癌局部消融方法.
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Prader-Willi综合征分子分型诊断方法的初步研究
[目的]探讨Prader-Willi综合征(PWS)的短串联重复序列(STR)连锁分析诊断方法,为遗传咨询提供相关信息.[方法]对一例临床疑似病例经甲基化特异性PCR(MS-PCR)确诊为PWS后,应用15号染色体特定区域的STR进行家系连锁分析,探讨其在PWS分子缺陷类型诊断方面的可行性.[结果]STR连锁分析结果显示该患者为父源缺失型PWS.[结论] STR连锁分析是一种可准确诊断PWS并明确其分子缺陷类型的好方法;国人相关区域的STR位点及其多态信息等有待进一步研究,以完善并终建立该方法.
| 年 | 期数 |
| 2019 | 01 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2017 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2011 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2010 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2009 | 01 02 03 04 05 06 z1 z2 |
| 2008 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2007 | 01 02 03 04 05 06 z1 |
| 2006 | 01 02 03 04 05 06 z1 z2 |
| 2005 | 01 02 03 04 05 06 z1 |
| 2004 | 01 02 03 04 05 06 z1 |
| 2003 | 01 02 03 04 05 06 z1 |
| 2002 | 01 02 03 04 05 06 z1 |
| 2001 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2000 | 01 02 03 04 05 06 Z1 |
| 1999 | 01 02 03 04 |
