中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae 중국실험방제학잡지
- 主管单位： 国家中医药管理局
- 主办单位： 中国中医科学院中药研究所 中华中医药学会
- 影响因子： 1.62
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 1005-9903
- 国内刊号： 11-3495/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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百合知母汤总皂苷调节5-HT功能治疗抑郁症的作用机制
目的:分析百合知母汤总皂苷(SBZ)调节5-羟色胺(5-HT)功能治疗抑郁症状的作用机制,同时探讨百合知母的药对优势.方法:SD大鼠采用孤养配合慢性不可预见性温和刺激诱发抑郁模型,分为抑郁症模型组,百合总皂苷组(100 mg·kg-1),知母总皂苷组(220 mg·kg-1),SBZ组(240 mg· kg-),百忧解组(fLU,10 mg·kg-1),另设正常组,每组11只;正常组和抑郁症模型组给予等量0.5％阿拉伯树胶溶液,其他组别给予相应剂量的药物.测量各组大鼠强迫游泳不动时间,酶联免疫吸附测定(ELISA)检测血液、大脑5-HT含量;免疫荧光检测大脑皮层及海马5-HT1a阳性表达.实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测海马5-HT合成基因色氨酸羟化酶1(TPH1),突触囊泡单胺转运体(SLC18A1),突触相关蛋白-25(SNAP25) mRNA水平以及5-HT1a受体信号传导下游调节基因RGS19在血液以及下丘脑的mRNA表达.蛋白免疫印迹法(Western blot)检测5-HT转运体蛋白(SERT)在海马和下丘脑表达水平.结果:与模型组比较,SBZ明显降低抑郁大鼠强迫游泳不动时间(P＜0.05),上调血液以及大脑5-HT含量(P＜0.05),上调大脑皮层以及海马5-HT1a阳性表达(P ＜0.05,P＜0.01).SBZ上调海马TPH1,SLC18A1和SNAP25 mRNA表达,同时上调血液、下丘脑组织RGS19 mRNA表达(P ＜0.05,P＜0.01).SBZ下调海马和下丘脑SERT蛋白表达(P＜0.01).结论:SBZ激活5-HT合成基因TPH1表达,同时下调SERT表达抑制5-HT重摄取,增加中枢5-HT含量;上调5-HT1a受体及其下游RGS19基因表达调节受体功能及其信号传递;同时SBZ通过上调SLC18A1和SNAP25表达改善神经突触递质传递能力,终达到抗抑郁的效果.SBZ抗抑郁药效与百合总皂苷、知母总皂苷对比具有显著优势.
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白藜芦醇延缓心肌微血管内皮细胞衰老的作用机制
目的:探讨白藜芦醇延缓人心脏微血管内皮细胞衰老的作用,从细胞骨架角度分析其作用机制.方法:通过热休克蛋白27(HSP27) shRNA细胞系的建立,将组别为8代复制性衰老模型组(衰老组),白藜芦醇组(10 μmol·L-1),空载质粒(Mock)组,HSP27shRNA组,HSP27shRNA+白藜芦醇组(10 μmol·L-).运用β-半乳糖苷酶染色检测细胞衰老,细胞计数(cell counting kit-8,CCK-8)检测细胞增殖能力,激光免疫共聚焦显微镜观察纤维状肌动蛋白(F-actin)和球型蛋白单体(G-actin)的形态学改变,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测F-actin蛋白的表达情况.结果:与衰老组比较,白藜芦醇组β-半乳糖苷酶染色比例下降(P＜0.01),细胞增殖能力增加(P＜0.01),F-actin线条较为完整的分布于细胞边缘,G-actin圆润饱满的分布于细胞中央,蛋白表达减少(P＜0.01);热休克蛋白27 (heat shock protein 27,HSP27)沉默后,与Mock组比较,HSP27shRNA组及HSP27shRNA+白藜芦醇组β-半乳糖苷酶染色比例增加(P＜0.01),细胞增殖能力下降(P＜0.01),F-actin外周致密带边缘变得毛糙不规整,崩解消散,细胞的形状不能清晰的呈现;G-actin表现为边缘变模糊呈絮状向外延伸,而细胞中央区域染色离散,形态不规则,F/G-actin的平均光密度值下降(P＜0.01),蛋白表达减少(P＜0.01).结论:白藜芦醇能够延缓内皮衰老,促进增殖,其中HSP27下调F-actin的表达可能是白藜芦醇延缓内皮衰老的重要机制所在.
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艳山姜挥发油调控NF-κB信号抑制LPS诱导HAECs炎性损伤
目的:研究艳山姜挥发油(essential oil of Alpinia zerumber fructus,EOAZF)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导人主动脉内皮细胞(human aortic endothelial cells,HAECs)炎性损伤的保护作用.方法:体外传代培养HAECs,先用不同剂量EOAZF(0.05,0.1 mg·L-1)和阿司匹林(0.5 mmol·L-1)预处理1h,另设空白组,再与LPS(5 mg·L-1)共同作用12 h.采用噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞活性;苏木素-伊红染色进行细胞形态学观察;细胞划痕修复实验分析HAECs划痕修复能力;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测血管细胞黏附分子-1(vascular cell adhesion molecule-1,VCAM-1),半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3),Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4),核转录因子-κB抑制蛋白激酶(inhibitor of nuclear factor kappa-B kinase,IKK),磷酸化NF-κB抑制蛋白激酶(phospho-inhibitor of nuclear factor kappa-B kinase,p-IKK)蛋白的表达;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测细胞中TLR4和VCAM-1 mRNA的表达;免疫荧光法观察NF-κB p65的核转位情况.结果:与空白组比较,LPS能诱导HAECs形态学损伤,降低细胞存活率及划痕修复能力,同时上调VCAM-1,Caspase-3,TLR4,IKK及P-IKK的表达.免疫荧光实验结果分析表明LPS能够诱导NF-κB p65的核转位.与模型组比较,EOAZF预处理后,能够改善LPS诱导的HAECs形态学损伤,提高细胞存活率及划痕修复能力,抑制VCAM-1,Caspase-3,TLR4,IKK及P-IKK的表达及NF-κBp65的核转位.结论:EOAZF对LPS诱导的HAECs炎性损伤具有保护作用,其机制与调控TLR4/IKK/NF-κB-p65信号有关.
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基于网络药理学的葛根芩连汤治疗2型糖尿病的效应机制
目的:运用网络药理学分析方法探究葛根芩连汤(Gegen Qinliantang,GQT)治疗2型糖尿病(type 2 diabetesmellitus,T2DM)的潜在效应机制.方法:利用整合药理学平台(Computation Platform for Integrative Pharmacology“TraditionalChinese Medicine,TCMIP)收集GQD中4味中药的化学成分及T2DM的相关靶点基因,并根据二维结构相似性特征筛选药物靶标;采用整合药理学平台在线Cytoscape技术构建核心靶标网络及“中药-成分-靶标-通路”多维网络;利用平台基因功能注释(Gene Ontology,GO)和京都基因和基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)对核心靶标进行基因功能和通路的注释分析.结果:共收集葛根芩连汤234种成分,核心靶标175个;其中筛选得到的68个活性成分与蛋白激酶C-δ(PRKCD),葡萄糖激酶(GCK),细胞色素C氧化酶亚基(COX7C/COX5A/COX5B),ATP合成酶F1亚基(ATP5F1 A/ATP5F1C),胰岛素受体(INSR)等22个主要蛋白具有强相互作用,主要涉及在内分泌系统,细胞生长与死亡,FoxO转录因子(FoxO)信号通路,脂肪细胞因子信号通路,胰岛素信号通路等多条通路.结论:本研究初步揭示了葛根芩连汤治疗2型糖尿病的效应机制,其机制多与抗炎、抗氧化应激、抗胰岛β细胞损伤、改善糖脂代谢和并发症等相关.
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血根碱通过调控PI3K/Akt信号通路诱导胰腺癌细胞凋亡的机制
目的:探讨血根碱对胰腺癌细胞凋亡的影响及其信号通路调控机制.方法:不同浓度血根碱(2,4,6 μmol·L-)处理小鼠胰腺癌Panc02细胞不同时间(24,48,72 h)后,采用噻唑蓝(MTT)比色法检测血根碱对细胞生长抑制作用的影响;采用磷脂结合蛋白V/碘化丙啶(Annexin V/PI)双染色试剂盒通过流式细胞仪检测血根碱对Panc02细胞凋亡影响;采用花青染料(JC-1)探针试剂盒荧光染料分析检测线粒体膜电位的变化;采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax),总蛋白激酶B(Akt),磷酸化蛋白激酶B(p-Akt),总磷脂酰肌醇3激酶(PI3K),磷酸化磷脂酰肌醇3激酶(p-PI3K)的表达情况.结果:与空白组比较,不同浓度的血根碱作用同一时间后,随着药物浓度的增加细胞生长抑制率逐渐升高(P＜0.05),与空白组比较,同一浓度作用不同时间后,随着时间的增加细胞生长抑制率逐渐升高(P＜0.05);与空白组比较,血根碱2 μmol·L-组的细胞凋亡率无明显升高,与空白组比较,血根碱4,6μmol·L-组的细胞凋亡率均明显升高(P＜0.05);与空白组比较,血根碱2 μmol· L-1组时红绿荧光无变化,血根碱4,6 μmol·L-组红色荧光减弱,绿色荧光增强,Panc02细胞线粒体膜电位降低;与空白组比较,血根碱2μmol· L-组处理的Bax,Bcl-2,p-PI3K,p-Akt,Akt和PI3K蛋白表达均无变化,血根碱6 μmol·L-组Bax蛋白表达增高,Bcl-2及PI3 K/Akt信号通路中关键蛋白p-PI3K,p-Akt表达降低(P＜0.05).结论:血根碱通过抑制PI3 K/Akt信号通路有效地诱导小鼠胰腺癌Panc02细胞经线粒体凋亡途径发生凋亡.
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补骨脂素对A375细胞黑素合成及ER/MAPK信号通路调控机制探讨
目的:探讨补骨脂素对A375细胞黑素含量、酪氨酸酶活性的影响及作用机制.方法:以密度2×105个/孔的细胞数接种于6孔板中,将细胞分为空白组、雌二醇组、补骨脂素组、补骨脂素+雌激素受体(ER)阻断剂组(ICI182780)(浓度分别为1×10-3,1,1 μmol· L-1).采用NaOH裂解法、多巴醌氧化法检测黑素含量及酪氨酸酶活性;蛋白免疫印迹法(Westernblot)和实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)法测定ER/丝裂原激活的蛋白激酶(ER/MAPK)通路中关键蛋白激酶p38,c-Jun氨基末端激酶(JNK),细胞外信号调节激酶2(ERK2)和小眼畸形相关转录因子(MITF),多巴氧化法检测酪氨酸酶(TYR),酪氨酸酶相关蛋白-1(TRP-1),酪氨酸酶相关蛋白-2(TRP-2)的蛋白含量及相应mRNA表达.结果:与空白组比较,补骨脂素组对A375细胞中的黑素合成及TYR活性具有显著抑制作用(P＜0.01),对A375细胞中雌激素受体β(ERβ)蛋白的表达具有明显的抑制作用(P＜0.05),对p38 MAPK,ERK2,JNK的蛋白表达极显著的抑制作用(P＜0.01),对MITF,TYR,TRP-1,TRP-2的蛋白表达极显著的抑制作用(P＜0.01),对ERK2,p38 MAPK,MITF,TRP-1 mRNA表达显著被抑制(P＜0.01);与补骨脂素组比较,ICI182780能够逆转ERβ,ERK,MITF,TYR,TRP-1的蛋白表达(P＜0.01)及p38MAPK,JNK,TRP-2的蛋白表达(P＜0.05),同时能显著阻断补骨脂素对ERK2,p38MAPK,MITF,TRP-1 mRNA表达作用(P＜0.01).结论:补骨脂素通过ER/MAPK信号通路下调MITF和TYR,TRP-1,TRP-2的表达量,从而减少黑素合成.
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麻黄-苦杏仁药对减轻大鼠气道损伤的物质基础及作用机制分析
目的:探究麻黄-苦杏仁药对减轻大鼠气道损伤的物质基础,初步探讨其作用机制.方法:雄性SD大鼠适应性饲养3d,筛选合格后随机分为9组[正常组、模型组、地塞米松组、麻黄-苦杏仁药对不同配比组(N1 ～ N6组)].上午9:00开始灌胃相应药物,灌胃1h后立即用2％氯化乙酰胆碱+0.4％磷酸组胺引喘并记录引喘潜伏期,连续给药7d.末次引喘后即刻麻醉,取出主气管,一部分气管用10％甲醛固定,苏木精-伊红(HE)染色观察各组气道病理学特征,另一部分气管匀浆处理,运用酶联免疫吸附法测定表皮生长因子(EGF),诱导型一氧化氮合酶(iNOS),内皮素-1(ET-1)的质量浓度.同批6只大鼠适应性饲养后分离出空肠、回肠肠段,制备含药肠吸收液,运用超高效液相色谱-四极杆-飞行时间串联质谱法(UPLC-Q-TOF-MS/MS)分析麻黄-苦杏仁药对含药肠吸收液中主要差异性成分及其含量.采用多元线性回归分析效应指标与主要差异性成分的相关性.结果:N1 ～N6组肠吸收液的差异性成分为麻黄碱、伪麻黄碱、甲基麻黄碱和苦杏仁苷;效应指标分别为引喘潜伏期,ET-1,iNOS,EGF质量浓度以及气道病理学总评分.结论:麻黄-苦杏仁药对延长引喘潜伏期和修复气道损伤的主要物质基础为麻黄碱、伪麻黄碱、甲基麻黄碱和苦杏仁苷,其减少iNOS和ET-1含量、抑制EGF生成及维持较低水平NO/ET的主要有效成分为甲基麻黄碱,说明麻黄为主要药味,苦杏仁辅助其修复气道损伤,其中N3组治疗效果佳.
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硬脂胺-异硫氰基荧光素嫁接物的合成工艺研究及其应用评价
目的:探究硬脂胺-异硫氰基荧光素嫁接物的优合成工艺,并对其进行应用评价.方法:以硬脂胺和异硫氰基荧光素为原料,通过偶合反应合成得到脂质材料硬脂胺-异硫氰基荧光素嫁接物,利用薄层色谱法监测反应过程;通过核磁共振对嫁接产物进行结构确证,并以溶剂、时间、温度以及投料比为考察因素,以产率为指标,得到优合成工艺.并将合成的硬脂胺-异硫氰基荧光素嫁接物用于标记脂质纳米粒,以结扎肠循环模型考察纳米粒在小肠的吸收分布情况对其进行应用评价.结果:当反应溶剂为无水乙醇,硬脂胺和异硫氰基荧光素的反应摩尔比为2∶1,60℃搅拌反应48 h后异硫氰基荧光素与硬脂胺反应完全,产率较高,可达(72.0±3.9)％,并能较准确地评价其标记的纳米粒在肠绒毛吸收分布情况.结论:优化后合成处方工艺反应完全,得率高;方法操作简单,重复性好;合成的硬脂胺-异硫氰基荧光素嫁接物可用于直观评价纳米粒的体内外情况.
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UPLC-Q-TOF-MS分析补肾强身片中化学成分
目的:采用超高效液相色谱-四级杆-飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF-MS)对补肾强身片中的化学成分进行研究.方法:以Agilent SB-C18色谱柱(4.6 mm× 100 mm,2.7μm),流动相乙腈-0.1％甲酸水溶液,梯度洗脱,流速0.5 mL· min-1,柱温40℃,电喷雾离子源,正、负离子模式下采集数据.首先对有对照品的成分进行定性分析,对于多数没有对照品的成分,主要根据UPLC-Q-TOF-MS提供的准确相对分子质量和离子碎片信息并结合文献数据比对进行化学成分结构推测鉴定.结果:共鉴定了补肾强身片中50个化学成分,包括酚酸类19个、黄酮类25个、裂环环烯醚萜类4个、苯乙醇苷类1个、生物碱类1个,其中12个成分(原儿茶酸,红景天苷,原儿茶醛,绿原酸,金丝桃苷,异槲皮苷,特女贞苷,朝藿定C,淫羊藿苷,山柰酚,宝霍苷Ⅰ,紫云英苷)通过与对照品比对进行定性分析.结论:UPLC-Q-TOF-MS可以简便、快速地对补肾强身片中化学成分定性分析,该研究丰富了补肾强身片中化学成分的信息,为补肾强身片药效物质基础研究、质量控制及其临床用药提供了参考.
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UPLC同时测定海南粗榧中3种三尖杉生物碱类化合物
目的:海南粗榧中主要活性成分为以三尖杉碱为母核的三尖杉酯类生物碱,该研究利用超高压液相色谱(UPLC)建立一种同时测定三尖杉碱、三尖杉酯碱、高三尖杉酯碱3种化合物含量的检测方法,分析海南粗榧不同组织样品中3种生物碱的代谢分布.方法:选用Agilent 1290Ⅱ型超高压液相色谱仪,Agilent Infinitylab EC-C18色谱柱(2.1 mm×100 mm,2.7 μm),流动相甲醇-20 mmol·L-碳酸铵水溶液,梯度洗脱,洗脱流速0.8 mL·min-1,检测波长291 nm,进样量5μL,柱温30℃.结果:在上述色谱条件下,色谱图基线平稳,各目标化合物峰型漂亮,分离度好.同时,对照品线性回归结果表明3种三尖杉生物碱含量与峰面积呈良好的线性关系,方法学考察实验结果表明仪器精密度、方法重复性及回收率均符合定量测定方法要求.结论:该方法具有较好的精密度、稳定性和重复性,且该方法检测时间短,12 min可以完成海南粗榧样品中3种三尖杉酯类生物碱的定量检测,操作简单快速、结果准确可靠,可以用于海南粗榧中三尖杉碱、三尖杉酯碱和高三尖杉酯碱的检测分析和质量控制,为深入研究海南粗榧中三尖杉酯类生物碱的代谢累积和时空分布等工作奠定方法学基础,同时也为海南粗榧的药用价值评价提供理论依据.
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金荞麦叶片光合响应特征及光合参数日变化
目的:研究金荞麦叶片光合响应特征及光合参数日变化与环境因子之间的相互关系.方法:利用便携式光合测定仪测定金荞麦叶片光合参数日变化和光响应曲线.结果:金荞麦叶片净光合速率日变化、气孔导度日变化均呈双峰曲线,有明显的光合午休现象;净光合速率数值分别为19.13,16.54 μmol·m-2·s-1,谷底出现在14:00左右,净光合速率值为15.04 μmol·m-2·s-1,约为大峰值的78.62％,此时出现了较为明显的光合午休现象.净光合速率(Pn)与主要影响因子光合有效辐射(PAR),蒸腾速率(Tr),气孔导度(Gs)呈正相关,与大气CO2浓度(Ca),胞间CO2浓度(Ci)呈负相关.结论:金荞麦为气孔限制型植物,Pn存在明显的光合午休现象,光合有效辐射、蒸腾速率、气孔导度、大气温度是影响金养麦叶片Pn的主要影响因子.
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HPLC-CAD同时测定骨疏康胶囊中6种成分的含量
目的:建立HPLC-CAD同时测定骨疏康胶囊中柚皮苷,朝藿定B,朝藿定C,淫羊藿苷,5-羟甲基糠醛(5-HMF)及丹参酮ⅡA的含量,为骨疏康胶囊的质量控制提供参考.方法:采用高效液相色谱法联合电雾式检测器法(HPLC-CAD),Agilent ZORBAX Eclipse XDB C18色谱柱(4.6 mm ×250 mm,5μm),乙腈(A)m.05％甲酸水(B)为流动相,梯度洗脱(0～10 min,10％A;10～25 min,10％ ～ 25％A;25 ～ 30 min,25％～30％A;30 ～ 45 min,30％ ～60％A;45 ～50 min,60％～75％A),流速0.8 mL· min-,雾化器温度为35℃,柱温35℃,进样量10 μL,测定骨疏康胶囊中6种成分的含量.结果:柚皮苷,朝藿定B,朝藿定C,淫羊藿苷,5-羟甲基糠醛及丹参酮ⅡA的质量浓度分别在0.006 ～0.120 μg(r =0.999 7),0.041 ～0.820 μg (r=0.999 9),0.011 ～0.220 μg(r =0.999 6),0.022 ～0.440 μg(r=0.999 8),0.012～0.240 μg(r=0.999 8),0.005～0.100 μg(r =0.999 8)与峰面积呈良好的线性关系.柚皮苷,朝藿定B,朝藿定C,淫羊藿苷,5-羟甲基糠醛及丹参酮ⅡA的平均加样回收率分别为99.26％,97.99％,98.17％,99.34％,98.26％及99.25％,RSD(n =6)分别为1.7％,1.0％,1.6％,1.4％,1.9％和1.3％.结论:该方法准确、简便、重复性好、灵敏度高,可用于骨疏康胶囊中多成分的质量控制研究.
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青钱柳老叶和嫩叶化学成分液质分析及5种成分含量的比较
目的:对青钱柳老叶和嫩叶中的化学成分进行分析和鉴定,比较老嫩叶中所含成分类别及含量差异.方法:采用UPLC-Q-TOF-MS/MS分析方法,对青钱柳老叶和嫩叶50％甲醇提取液中的化学成分进行分析和鉴定.同时,采用InterSustain-C18色谱柱(4.6 mm ×250 mm,5μm),流动相为乙腈-0.1％甲酸水溶液,流速1 mL· min-,紫外波长254 nm,柱温30℃,梯度洗脱,对青钱柳叶50％甲醇提取液进行HPLC分析,测定其中绿原酸、山柰酚、异槲皮苷、槲皮苷、槲皮素5种成分的含量.并对结果进行主成分分析.结果:从青钱柳老叶和嫩叶中共鉴别出30种化合物,其中老叶和嫩叶共有成分21种,2种成分为嫩叶仅有,7种成分为老叶仅有.青钱柳老叶和嫩叶中5种成分含量存在差异,主成分分析将15个样品聚为老叶和嫩叶两大类.结论:青钱柳老叶和嫩叶化学成分基本相同,相对来说老叶的化学成分较嫩叶丰富,成分含量较高.建立的方法能够较好鉴别青钱柳中的化学成分,区分老叶和嫩叶,为青钱柳老嫩叶的质量控制提供依据.
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湖北麦冬地下部分化学成分
目的:研究百合科山麦冬属植物湖北麦冬Liriope spicata var.prolifera地下部分的化学成分,进一步丰富该植物的化学信息并为其开发和利用提供理论指导.方法:采用60％乙醇对湖北麦冬地下部分进行提取,综合利用大孔吸附树脂,正、反向硅胶,小孔树脂(MCI)及葡聚糖凝胶等柱色谱法对提取物进行分离和纯化,并根据化合物的理化性质及谱学数据鉴定其结构.结果:从湖北麦冬地下部分共分离并鉴定了12个化合物,其中包括4个黄酮类成分(化合物1～4),4个酚类及苯甲酸类衍生物(化合物5～8),2个酰胺类生物碱(化合物9,10)及2个其他类成分(化合物11,12).分别鉴定为2',4,4'-三羟基查耳酮(1),木犀草素(2),槲皮苷(3),3,5-dihydroxy-7-methoxy-6-methyl-3-(4-hydroxybenzyl) chroman-4-one (4),2,6-二甲氧基-4-硝基苯酚(5),烯丙基焦儿茶酚(6),3,4-dihydroxyallylbenzene 4-O-[α-L-rhamnopyranosyl(1→6)]-β-D-glucopyranoside(7),丁香酸(8),E-阿魏酰酪胺(9),反式对羟基桂皮酸(10),(1S,4S,5R,6R,7S,10S)-1,4,6-trihydroxyeudesmane-6-O-β-D-glucopyranoside(11)和5-羟甲基糠醛(12).结论:其中化合物1～3,5～8及化合物10～12均为首次从山麦冬属植物中分离得到,化合物4和9为首次从该植物中分离得到.
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蜈蚣草乙酸乙酯部位化学成分分离鉴定
目的:对蜈蚣草Pteris vittata乙酸乙酯部位进行系统的化学成分研究.方法:蜈蚣草用95％乙醇回流提取3次,提取液减压浓缩成浸膏后分散于水中,然后依次用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇进行萃取,回收溶剂后得到其石油醚、乙酸乙酯和正丁醇部位萃取物.对乙酸乙酯部位萃取物综合应用硅胶柱色谱,Sephadex LH-20凝胶柱色谱,ODS柱色谱和重结晶等技术分离纯化,得到单体化合物,并结合理化性质、核磁共振谱、质谱数据和相关文献鉴定单体化合物的结构.结果:从蜈蚣草乙酸乙酯部位萃取物中共分离得到12个化合物,分别鉴定结构为芹菜素(1),木犀草素(2),木犀草素-7,3',4'-三甲醚(3),3'-甲氧基木犀草素(4),7-羟基-8-甲氧基香豆素(5),芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸(6),木犀草素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(7),柯伊利素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(8),紫云英苷(9),对羟基苯甲酸(10),β-谷甾醇(11),β-胡萝卜苷(12).结论:化合物2～5和8～ 12为首次从该植物中分离得到.该化学成分研究为蜈蚣草的临床应用及药理活性研究提供了资料参考.
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五味子不同部位黄酮和酚酸类成分的含量测定及抗氧化活性
目的:建立超高效液相色谱法测定五味子不同部位中黄酮和酚酸类成分的含量,并研究其体外的抗氧化活性.方法:运用ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱(2.1 mm×5.0 mm,1.7 μm),乙腈-0.01磷酸水梯度洗脱,柱温30℃.黄酮类成分检测波长为360 nm,流速0.35 mL·min-;酚酸类成分检测波长为280 nm,流速0.30 mL·min-1.以DPPH和ABTS法对其抗氧化活性进行比较.结果:五味子不同部位中黄酮和酚酸类成分含量差异显著,叶中黄酮类成分的含量,约为藤茎黄酮类成分含量的3.8倍,果实的49.5倍;叶中酚酸类成分的含量,约为藤茎酚酸类成分含量的4.2倍,果实的21.5倍.叶、藤茎的抗氧化活性显著高于果实,叶、藤茎的DPPH自由基清除率分别为果实的8.3倍和4.3倍;ABTS总抗氧化能力分别为果实的2.9倍和1.3倍.结论:五味子不同部位中总黄酮和酚酸成分含量和抗氧化活性具有显著正相关,表明五味子抗氧化活性可能与总黄酮和酚酸类物质的含量有关.该方法简便易行,结果准确,重复性好,可用于五味子药材中黄酮和酚酸类成分的含量测定,同为五味子不同部位的合理应用提供一定的理论依据.
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清燥救肺汤加减治疗青海高原地区慢性支气管炎急性加重的临床分析
目的:探讨清燥救肺汤加减治疗高原地区慢性支气管炎急性加重(风燥伤肺证)患者的临床疗效及对炎症因子的影响.方法:将140例患者,以就诊先后按随机数字表法分为对照组和观察组各70例.两组患者均参照指南给予抗感染,祛痰、止咳治疗为主;口服盐酸莫西沙星片,0.4g/次,1次/d,连续服用7d;盐酸氨溴索片,30 mg/次,2次/d,连续服用14 d.对照组口服杏苏止咳颗粒,12 g/次,2次/d,温开水冲服.观察组采用清燥救肺汤加减,1剂/d.两组疗程均为连续治疗14 d.进行治疗前后咳嗽症状积分、咳嗽视觉模拟评分(VAS)和风燥伤肺证评分;记录咳嗽、咯痰、鼻干咽燥和肺部湿啰音消失时间;治疗前后行肺功能检查,记录用力肺活量(FVC),第1秒用力呼气容积(FEV1),FEV1占预计值百分比(FEV1％);检测治疗前后肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白细胞介素-8(IL-8),单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1),内皮素(ET)和丙二醛(MDA)水平.结果:观察组疾病疗效总有效率为93.65％,高于对照组的81.67％ (x2 =4.122,P＜0.05);观察组中医临床疗效总有效率为93.65％,高于对照组的80％(x2=5.061,P＜0.05);观察组患者咳嗽症状积分(日间和夜间),咳嗽VAS评分和风燥伤肺证评分均低于对照组(P＜0.01);两组患者FEV1,FEV1/FVC和FEV1％均较治疗前有所改善(P＜0.05),观察组的改善更为显著(P＜0.05);观察组咳嗽、咯痰、鼻干咽燥和肺部湿啰音消失时间均短于对照组(P＜0.05,P＜0.01);观察组血清MCP-1,IL-8,TNF-α,ET和MDA水平均低于对照组(P＜0.01).结论:在西医常规抗感染等治疗的基础上,采用清燥救肺汤加减治疗青海高原地区慢性支气管炎加重(风燥伤肺证)患者,能快速控制临床症状,缩短病程,改善肺功能,并具有抗炎、抗氧化应激功能,有较好的临床疗效.
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癌康宁合剂对晚期非小细胞肺癌化疗后患者维持治疗的临床评价
目的:评价晚期非小细胞肺癌(NSCLC)化疗后,患者以癌康宁合剂维持治疗对无进展生存期(PFS),生活质量和免疫功能的影响.方法:将115例化疗后获得稳定的NSCLC患者,随机分为对照组58例和观察组57例.对照组口服参一胶囊,2粒/次,2次/d.观察组口服癌康宁合剂,30 mL/次,3次/d.两组疗程均为每1～2周随访1次,持续给药,直至肿瘤进展.记录两组患者维持治疗周期;每4周行CT检查,评价肿瘤大小变化,并记录PFS[从入组至患者死亡或病变进展(PD)的时间];每4周进行Karnofsky功能状态评分(KPS);进行中医证候评价;检测治疗前后T淋巴细胞亚群(CD3+,CD4+,CD8+,CD4+/CD8+)和自然杀伤细胞(NK)水平;检测血管内皮生长因子(VEGF),癌胚抗原(CEA),糖抗原125(CA125),细胞角蛋白19片段21-1(CYFRA21-1)等水平.结果:对照组平均维持治疗(15.75±4.81)周,短于观察组的(20.23±5.94)周(P＜0.01);对照组PFS为(25.37±7.43)周,短于观察组的(37.41 ±9.15)周,观察组的中位PFS较对照组延长了约12周;在12和16周时,观察组实体瘤疗效,KPS疗效均优于对照组(P ＜0.05,P＜0.01);观察组除神疲乏力、气短外,其他各症状评分均低于对照组(P＜0.01);治疗后观察组CD4+,CD4+/CD8+均高于对照组,CD8+低于对照组(P＜0.05);治疗后两组患者的血清VEGF,CEA,CA125,CYFRA21-1水平均升高(P＜0.01),但观察组患者血清VEGF,CEA,CA125,CYFRA21-1水平均低于对照组(P＜0.01).结论:采用癌康宁合剂用于化疗后NSCLC患者的维持治疗,可延长无进展生存期,稳定病情,减轻临床症状,提高患者的生活质量和机体免疫功能,并可抑制血清VEGF,CEA,CA125,CYFRA21-1等肿瘤标志物的表达.
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复方芪麻胶囊对颈动脉粥样硬化斑块干预作用的机制
目的:通过观察复方芪麻胶囊治疗颈动脉粥样硬化斑块的临床效果,探求其干预作用机制及安全性.方法:将80例颈动脉粥样硬化患者随机分为对照组和观察组,各40例.两组均给予阿托伐他汀钙片口服,观察组加用复方芪麻胶囊口服,共治疗6个月.比较两组治疗前后各项指标的变化以评估疗效;检测治疗前后双侧颈动脉内膜-中层厚度(IMT)和颈动脉斑块面积;检测治疗前后甘油三酯(TG),总胆固醇(TC),高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平;检测治疗前后血清炎症因子白细胞介素-6(IL-6),肿瘤坏死因子-α(TNF-α),基质金属蛋白酶-9(MMP-9)水平;检测治疗前后血管内皮损伤指标一氧化氮(NO),内皮素-1(ET-1),6-酮前列腺素F1α(6-Reto-PGF1α)水平;以及不良反应情况.结果:治疗后,观察组的总有效率为95.00％,显著高于对照组的82.50％ (P＜0.05).与对照组比较,观察组双侧颈动脉斑块面积和IMT明显降低,治疗后的血脂水平(TC,TG,LDL-C)明显降低(P＜0.05);血管内皮功能明显改善(P＜0.05);炎症因子明显降低(P＜0.05).两组患者治疗期间均无不良反应发生.结论:经过复方芪麻胶囊干预治疗颈动脉粥样硬化,颈动脉斑块面积显著缩小,IMT明显变薄,引起或加重颈动脉粥样硬化的各项实验室指标均明显改善;推测复方芪麻胶囊可能是通过降脂、抑制炎症反应、改善血管内皮功能等机制干预颈动脉粥样硬化斑块;其安全性良好.
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滋肾健脾化瘀方对复发性流产患者凝血功能的影响
目的:观察滋肾健脾化瘀方对复发性流产脾肾两虚、血瘀阻络证患者凝血功能的影响,探求其作用机制.方法:将105例符合条件的患者随机分为A组,B组和C组,各35例.分别给予滋肾健脾化瘀方、阿司匹林片、低分子量肝素钙.观察各组患者治疗前后中医辨证“数堕胎”脾肾两虚、血瘀阻络证量表(中医证候)评分,凝血功能[部分纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI-1),活化部分凝血活酶时间(APTT),凝血酶时间(TT),纤维蛋白原(FIB),组织型纤溶酶原活化因子(t-PA),凝血酶原时间(PT),D-二聚体(D-D),组织因子(TF),纤维蛋白肽A(FPA),狼疮抗凝物质(LA),活化蛋白S(PS),活化蛋白C(PC),抗心磷脂抗体(ACA),血小板聚集功能(PAF),纤维蛋白原(Fig),纤溶酶-抗纤溶酶复合物(PAP),凝血酶原片段(F1+2),血小板α颗粒膜糖蛋白-140(GMP-140),抗凝血酶(AT),血酶-抗凝血酶复合物(TAT)];比较各组有效率和不良反应发生率.结果:A组总有效率84.4％,高于B组的58.1％和C组的60.6％ (P＜0.05).与治疗后B组比较,A组PAI-1,PAF,F1 +2降低,ACA,PS,PC,Fig,AT升高(P＜0.05).与治疗后C组比较,A组FIB,D-D,LA,ACA,PAF,F1 +2,TAT降低,TT,PC,Fig,AT升高(P＜0.05).A组总不良反应发生率3.1％,低于B组的38.7％和C组的30.3％(P＜0.05).结论:滋肾健脾化瘀方可明显改善复发性流产脾肾两虚、血瘀阻络证患者临床症状和凝血功能,不良反应发生率低.
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表证模型研究概况与展望
针对目前中医证候模型研究的整体不足和进展缓慢,立足本课题组对表证方证的几十年研究经验基础上,结合现代科学技术新进展,综合梳理表证模型相关研究,拟在新型表证模型的建立方面寻找新的切入点.通过检索知网、Pubmed等数据库查阅有关表证模型(或上呼吸道感染)的相关文献,按照造模方法进行了较为详细的阐述、分析和总结,展现进展、不足和可能突破口;近年来表证模型在造模方法、方剂反证、方剂研究、生化表征等方面均取得了长足发展,但也存在与临床联系不紧密、方证对应不理想、成模指标不一致、表证评定标准模糊等诸多不足;提出表证病理模型研究应突破原有的思想羁绊,大胆借鉴现代生命科学进展,努力建立多层次的、更加精细的表证病理模型体系.紧密结合临床加强模型研究,充分吸纳生命科学以及其他学科进展,建立多层次更精细的表证病理模型研究系统是目前亟待解决的核心命题,这关乎表证理论、解表方药及其临床实践的深入研究,也是面对日益严重的疫情下人民健康的迫切需求,同时也可为其他证候模型的研究提供借鉴和参考.
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绿原酸抗肿瘤作用及机制研究进展
绿原酸是植物经光合作用合成的一种苯丙素类似物,在多种中药材中的含量高,是其主要的药理活性成分,其药理作用广泛,在食品、医药和化工等领域均有应用,其分子结构中含有酯键、不饱和双键等多种不稳定结构,容易被氧化、见光、受热都容易使其活性丧失,在酸性环境中比较稳定.有抗癌、降血脂、抗氧化、降血糖、抗紫外光与辐射、抗菌、免疫调节等作用,随着科技的进步、研究的深入,其抗肿瘤活性逐渐被重视.绿原酸具有抗肿瘤作用,其对肺癌、肝癌、乳腺癌、鼻咽癌、结肠癌、宫颈癌、胃癌、口腔癌、白血病、视网膜母细胞瘤、黑色素瘤、皮肤癌等发病率较高的肿瘤均表现出较好的防治效果.绿原酸的抗肿瘤作用机制可能与其阻滞细胞生长周期、抑制肿瘤细胞增殖、诱导肿瘤细胞凋亡、抑制肿瘤血管生成、抑制转移、抑制端粒酶活性、调节免疫、逆转肿瘤细胞多药耐药等作用有关.本文以“绿原酸”“抗肿瘤”“Chlorogenic acid”“antitumor”等为关键词,组合搜索1999年1月至2018年1月PubMed,维普,中国知网,万方等数据库中相关的文献,共搜索到110余篇相关文献,其中真正有效的文献51篇,本课题组对其有效文献中涉及的抗肿瘤作用及机制进行综述,希望能为绿原酸的抗肿瘤活性深入研究提供参考.
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中西医防治肾纤维化的研究进展
肾纤维化的病变程度与肾功能恶化及慢性肾脏病的预后密切相关.肾纤维化几乎是各种肾脏疾病进展至终末期肾衰竭的主要病理生理改变.其形成是由于肾脏受到创伤、感染、免疫反应等刺激,固有细胞受损.西医治疗方法有百令胶囊、黄葵胶囊、他汀类药物、血管紧张素转化酶抑制剂(ACEI)和血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂(ARB)、基因治疗、细胞因子及靶向药物治疗等.中医学认为肾纤维化是一个正气耗损,邪毒滞盛,长期正邪相争,邪盛正虚的过程.本虚标实,本虚指气虚,标实为血瘀.中医学治疗肾纤维化,主要以活血化瘀、清热解毒、补益脾肾为主,从多环节、多方位、多靶点干预用药.早期脾肾气虚、气阴耗伤,以党参、地黄、枸杞子、山药补气养阴,补脾益肾;中、晚期肾脏病患者,瘀血邪毒阻滞经络,活血化瘀以白芍、当归、桃仁、牛膝为主,清热解毒用赤芍、牡丹皮、土茯苓、地黄,同时加用补脾益肾之品,如女贞子、墨旱莲、党参、黄芪.文章从现代医学和中医学讨论肾纤维化的机制,及实验研究报道的改善肾纤维化,延缓肾衰竭的中西医药物,为临床上治疗肾纤维化提供了充分的理论依据.
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姜黄素-羟丙基-β-环糊精包合物的制备及其体外抗肿瘤活性评价
目的:优选姜黄素-羟丙基-β-环糊精(CUR-HP-β-CD)包合物的制备工艺,并对其体外抗肿瘤活性进行评价.方法:采用乙醇-水共溶剂孵育-冻干法制备CUR-HP-β-CD包合物;以包合率为评价指标,运用正交试验优化CUR-HP-β-CD包合物的制备工艺;采用紫外分光光度法和荧光分光光度法验证包合物的形成;利用噻唑蓝(MTT)法检测CUR和CUR-HP-β-CD包合物对不同肿瘤细胞(人子宫颈癌细胞株HeLa细胞和人肝癌细胞株HepG2细胞)处理不同时间(24 h和48 h)后细胞活性的影响.结果:CUR-HP-β-CD包合物的佳制备工艺为CUR与HP-β-CD的摩尔比1∶3,溶剂比(无水乙醇-水)1∶9,包合温度40℃,包合时间12h;CUR包合率42.2％,其冻干品经鉴别已形成包合物.MTT试验结果表明随着药物浓度的增加,CUR和CUR-HP-β-CD包合物能明显降低HeLa细胞和HepG2细胞的活性,且二者的半抑制浓度接近,说明CUR-HP-β-CD包合物对肿瘤细胞的增殖具有很好的抑制作用.结论:优选的包合物制备工艺简单可行、重复性好,制备的CUR-HP-β-CD包合物很好地保留了CUR的生物活性.
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基于1H-NMR代谢组学技术分析逍遥丸干预非酒精性脂肪肝肝郁脾虚证大鼠的作用机制
目的:研究逍遥丸对非酒精性脂肪肝(NAFLD)肝郁脾虚证大鼠尿液中内源性代谢产物的影响,探讨逍遥丸对该病证的作用机制.方法:将SD大鼠随机分为3组,即空白组、模型组、逍遥丸组(3.24 g·kg-1·d-1),采用高糖高脂饲料结合饥饱失常、慢性束缚应激刺激、夹尾法,共10周复制NAFLD模型,逍遥丸组给予逍遥丸治疗4周.采用酶联免疫吸附法检测模型大鼠血清丙氨酸氨基转移酶、肝组织总胆固醇、甘油三酯、脑组织5-羟色胺和去甲肾上腺素的含量,运用苏木精-伊红染色观察肝组织形态学的变化.采用代谢组学技术对模型大鼠尿液进行核磁数据采集,结合多元统计分析探讨逍遥丸的治疗作用机制.结果:逍遥丸组能使NAFLD肝郁脾虚证大鼠尿液中乙酸,肌酐,甘氨酸,异亮氨酸,α-酮戊二酸,乳酸,亮氨酸,琥珀酸,牛磺酸,二甲胺,α-D-葡萄糖,甘油共12个标志物发生不同程度的回调;主要涉及能量代谢、糖代谢和胰岛素抵抗等代谢途径的调节.结论:逍遥丸可能通过调节脂质代谢、糖代谢和氨基酸代谢紊乱等来发挥治疗NAFLD的作用.
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辛芍组方中5个指标成分在大鼠体内的组织分布情况
目的:研究大鼠灌胃辛芍组方后其5个指标成分在体内的组织分布情况.方法:建立同时测定大鼠组织中灯盏甲素、灯盏乙素、灯盏乙素苷元、芍药苷、芍药内酯苷的UPLC-MS/MS,将辛芍组方灌胃给予SD大鼠(剂量25 g·kg-1),分别于给药后20,90 min和12,24 h取其主要脏器和组织,采用UPLC-MS/MS测定各个时间点下5个指标成分在脏器和组织中的分布情况.结果:大鼠灌胃辛芍组方后,5个指标成分可广泛分布于大鼠各组织器官中.对于灯盏甲素,其质量浓度20 min时在肺和心中达到峰值,分别为48.2,59.8 μg·L-;90 min时在脑和小肠中达到峰值,分别为138.7,292.7 μg·L-1;12 h时在肾和肌肉中达到峰值,为517.3,56.5 μg·L-1;24 h时在肝脏中达到峰值,为352.9 μg·L-1.对于灯盏乙素,其质量浓度20 min时在心中达到峰值,为38.3 μg·L-1;90 min时在肺、脑、小肠和肾中达到峰值,分别为30.6,220.0,1 644.2,859.9 μg·L-1;12 h时在肌肉中达到峰值,为86.9 μg·L-1;24 h时在肝脏中达到峰值,为344.8 μg·L-.对于灯盏乙素苷元,其质量浓度90 min时在脑、小肠和肌肉中达到峰值,分别为875.4,52 468.0,5 114.7 μg·L-1;12 h时在肺、心和肾中达到峰值,分别为609.7,1 718.6,1 736.5μg·L-1;24 h时在肝脏中达到峰值,为1 366.5 μg·L-1.对于芍药苷,其质量浓度20 min时在肺、肝、肾和肌肉中达到峰值,分别为10 634.1,13 889.0,16 672.0,7 750.4μg·L-1;在90 min时,在心、小肠和脑中达到峰值,分别为6 851.1,870 563.9,7 474.0μg·L-.对于芍药内酯苷,其质量浓度20 min时在肝和肾中达到峰值,分别为15 249.7,56 817.0μg·L-1,在90 min时,在肺、心、脑、小肠和肌肉中达到峰值,分别为4 211.5,4 425.3,4 631.3,631 871.5,5 673.6 μg·L-1.结论:大鼠灌胃辛芍组方后,5个指标成分可迅速、广泛地分布在各组织器官中,但5个指标成分在各组织脏器中的达峰时间和分布存在一定差异,在肾脏和小肠中的分布高,其次为肝和肌肉,同时在脑组织中也有分布,并且随着给药时间的延长,灯盏甲素、灯盏乙素和灯盏乙素苷元可能在大鼠的肝脏中会发生蓄积.
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痛经动物模型制备规范(草案)
痛经为常见妇科疾病,一般在女子经期或行经前后出现的具有周期性的小腹疼痛,有时会痛引腰骶,严重者可出现剧痛难忍,并伴有恶心呕吐、头昏厥逆等.现痛经动物模型为病理模型,且以西医指标为主.基于对痛经中西医临床病证特点的分析及对其现有动物模型的大量实验研究,形成了如下痛经动物模型制备规范(草案).
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雌性不孕症动物模型制备规范(草案)
目前,不孕不育已成为常见多发病,30％以上的育龄夫妇需要借助医疗手段获得受孕.不孕症动物模型是开展相关研究的基础,目前不育症动物模型主要是以西医诊断标准为主、兼顾中医证型特点的病因模型.基于对不孕症中西医临床病证特点的分析及对其现有动物模型的大量实验研究,形成了如下雌性不孕症动物模型制备规范(草案).
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子宫发育不良动物模型制备规范(草案)
子宫发育不良是妇科常见疾病,多因发育过程相关激素低下导致,主要表现为经迟、月经稀少、痛经、甚至发展为闭经,婚后常表现为不孕等.现子宫发育不良模型为病理性模型,以西医指标为主.在基于对子宫发育不良中西医临床病证特点分析及大量动物实验研究基础上,形成了子宫发育不良模型制备规范(草案).
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慢性前列腺炎动物模型制备规范(草案)
慢性前列腺炎是中老年男性的常见多发病证,现慢性前列腺炎动物模型主要是病理模型,且以西医的诊断指标为主,兼顾中医证型特点.在基于对慢性前列腺炎中西医临床病证特点分析的基础上,经大量动物实验验证,形成了慢性前列腺炎动物模型规范(草案).
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干眼动物模型制备规范(草案)
干眼是临床为常见的一种眼科疾病,其主要表现为眼部干涩、流泪、异物感以及视物模糊、视力疲劳等.目前干眼发病机制尚不明确,现有干眼动物模型主要是病理模型,且以西医指标为主.基于对干眼中西医临床病证特点的分析及对其现有动物模型的大量实验研究,形成了如下干眼动物模型制备规范(草案),为该模型的相关研究提供参考.
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前列腺增生动物模型制备规范(草案)
近年来,前列腺增生发病率呈现不断上升的趋势,且越来越年轻化.现有前列腺增生模型多为病理性,且以西医指标为主.在基于前列腺增生模型中西医临床病证特点分析及大量实验研究的基础上,形成了如下前列腺增生动物模型制备规范(草案).
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Survivin与胃癌的中西医研究进展
癌症是全世界致命的疾病之一,胃癌则是当前恶性肿瘤中常见的消化系统肿瘤之一,其发病率和死亡率居高不下.胃癌死亡患者多为进展期,失去根治性手术治疗机会,非手术治疗方法预后亦不佳.对胃癌进行基础性研究,有望发现治疗胃癌的有效方法,延长患者的生存时间.生存素(Survivin)是迄今为止发现的强的凋亡抑制基因,属于凋亡抑制蛋白(inhibitor of apoptosis protein,IAP)家族的成员,在正常胃黏膜中Survivin表达呈缺失状态,胃癌细胞系呈过表达状态.Survivin基因有着独特的分子结构及生物学功能,主要是通过抑制细胞凋亡,调控细胞周期和参与血管形成的中间过程发挥着重要的作用.大量的实验研究表明Survivin基因与胃癌之间存在关系,提示其可能作为一种新的胃癌诊断的潜在标志物,成为检测胃癌的指标,中药在诱导胃癌细胞凋亡过程中对该基因存在一定的调控作用,必将给肿瘤患者带来新的希望,为肿瘤的治疗开辟新的道路.通过阅读国内、外文献,回顾分析Survivin的生物学特性及其在胃癌基因治疗与临床应用中的研究现状.总结Survivin在胃癌发病机制中的作用及诊疗中的中西医研究进展.
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华蟾素通过调控基质金属蛋白酶抑制人胃腺癌细胞MGC-803侵袭与迁移
目的:探讨华蟾素对人胃腺癌MGC-803细胞的侵袭与迁移的影响及其分子机制.方法:噻唑蓝(MTT)比色法检测华蟾素(10,20,40,80,160,320 mg·L-)对人胃腺癌MGC-803细胞增殖的抑制影响;transwell小室法检测华蟾素对MGC-803细胞侵袭与迁移能力的影响;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测经华蟾素作用后的MGC-803细胞中基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinases-2,MMP-2),基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinases-9,MMP-9)和基质金属蛋白酶抑制因子-1(tissue inhibitors of metalloproteinases-1,TIMP-1),基质金属蛋白酶抑制因子-2(tissue inhibitors of metalloproteinases-2,TIMP-2)的蛋白表达水平;实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测经华蟾素处理后的MGC-803细胞中MMP-2,MMP-9,TIMP-1,TIMP-2的mRNA表达情况.结果:①MTT比色法结果显示,与空白组比较,华蟾素(10,20,40,80,160,320 mg·L-)对胃腺癌MGC-803细胞的增殖具有显著抑制作用(P＜0.01),并且华蟾素对MGC-803细胞的抑制作用呈浓度和时间依赖.②transwell实验结果显示,与空白组比较,华蟾素(10,20,40 mg· L-1)对胃腺癌MGC-803细胞的侵袭与迁移能力具有不同程度的抑制作用(P＜0.05)③Real-time PCR和Western blot实验结果显示,与空白组比较,华蟾素(10,20,40 mg· L-1)能够下调MMP-2,MMP-9蛋白和mRNA的表达,上调TIMP-1,TIMP-2蛋白和mRNA的表达.结论:华蟾素能明显抑制胃腺癌MGC-803细胞的侵袭与迁移,其机制可能与上调TIMP-1,TIMP-2的转录水平,进而下调MMP-2,MMP-9蛋白水平有关.
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金龙胶囊对胃癌细胞MGC-803和BGC-823侵袭转移能力的影响
目的:探讨金龙胶囊对人胃癌MGC-803,BGC-823细胞侵袭和迁移能力的影响并对其具体机制进行探讨.方法:体外培养胃癌MGC-803,BGC-823细胞,分为金龙胶囊组(0.1,0.2,0.4,0.8 g·L-1),空白组和5-氟尿嘧啶(5-FU)组,采用噻唑蓝(MTT)比色法分别检测金龙胶囊对MGC-803,BGC-823细胞增殖的抑制作用,计算半数抑制率(IC50);采用细胞侵袭(transwell)小室法和划痕实验检测金龙胶囊处理MGC-803和BGC-823细胞24 h后,细胞侵袭和迁移能力发生改变;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测金龙胶囊处理MGC-803,BGC-823细胞24 h后E-钙黏素(E-cadherin),基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白表达情况.结果:金龙胶囊能明显抑制MGC-803,BGC-823细胞的增殖,呈一定的浓度及时间依赖性;与空白组比较,金龙胶囊能明细减少MGC-803,BGC-823细胞的穿膜细胞数目,可明显影响2种胃癌细胞的侵袭与迁移能力,并呈明显浓度依赖性(P＜0.05);金龙胶囊组的划痕距离较空白组明显降低,影响MGC-803,BGC-823细胞迁移,并呈浓度依赖性(P＜0.05);与空白组比较,金龙胶囊组能够提高MGC-803和BGC-823细胞中E-cadherin蛋白表达,降低MMP-2,MMP-9蛋白表达水平,且呈一定的量效关系(P＜0.05).结论:金龙胶囊能够抑制人胃癌MGC-803,BGC-823细胞的侵袭和迁移能力,其作用机制可能与上调E-cadherin表达,抑制MMP-2,MMP-9表达水平有关.本研究证实了金龙胶囊对胃癌MGC-803,BGC-823细胞抗侵袭转移的部分机制.
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南蛇藤提取物通过Cofilin1抑制胃癌BGC-823细胞转移的机制
目的:探讨南蛇藤乙酸乙酯提取物(Celastrus orbiculatus extract,COE)抑制胃癌侵袭转移的作用及其机制.为胃癌的中医药预防与治疗寻求新的靶点,为开发有效的抗胃癌中药奠定理论和实验基础.方法:利用前期蛋白质二维电泳技术,在胃癌中筛选出COE作用于胃癌的差异大的靶点蛋白.然后利用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测COE(20,40,80 mg·L-1)干预后细胞中丝切蛋白1(Cofilin 1,CFL1)水平的表达情况.后利用分子克隆技术,将胃癌细胞株BGC-823中的CFL1表达抑制,然后联合COE进行干预,检测COE是否能影响胃癌细胞的侵袭转移.结果:在前期实验基础上经过细胞水平的验证,CFL1能够在胃癌细胞中稳定高表达;Western blot结果显示,COE能抑制胃癌细胞中CFL1的表达,经不同质量浓度COE(20,40,80 mg·L-1)处理24 h的BGC-823细胞,其CFL1的水平受到了不同程度的抑制.随着COE的浓度递增,CFL1的表达逐渐减弱.与空白组比较,COE40,80 mg·L-1组CFL1表达显著减少(P＜0.01);利用小干扰RNA(siRNA)技术干扰胃癌BGC-823细胞株后,CFL1表达受到明显抑制,与空白组比较,siRNA-CFL1慢病毒转染组BGC-823细胞中CFL1受到显著抑制(P＜0.01);细胞侵袭实验(transwell)显示COE能显著减少胃癌BGC-823细胞敲低表达后细胞的透膜细胞数(P＜0.01).结论:COE能明显抑制胃癌BGC-823细胞的转移,其机制可能与抑制CFL1的过度表达有关.
| 年 | 期数 |
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