四川大学学报（医学版）杂志
Journal of Sichuan University(Medical Science Edition) 사천대학학보（의학판）
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结核分枝杆菌Rv1246c和Rv1247c假想蛋白间的相互作用
目的 观察结核分枝杆菌Rv1246c和Rv1247c假想蛋白间的相互作用.方法 采用PCR技术克隆结核分枝杆菌Rv1246c和Rv1247c假想蛋白基因, 构建酵母双杂交载体质粒pGBKT7-Rv1247c和pGADT7-Rv1246c, 经酶切分析和DNA测序证实重组质粒构建成功后, 采用醋酸锂法顺序转染酵母菌AH109,检测β半乳糖苷酶活性.结果 共转染GBKT7-Rv1247c和pGADT7-Rv1246c的酵母菌AH109可以在SD/-Ade/-His/-Leu/-Trp营养缺陷培养基上生长,β半乳糖苷酶活性实验阳性.结论 利用酵母双杂交系统证实结核分枝杆菌Rv1246c与Rv1247c假想蛋白可以相互作用.
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上皮性卵巢癌中自噬基因Beclin 1的表达及其调控相关信号传导途径的研究
目的 研究自噬基因Beclin 1及其调控相关信号传导途径磷酸肌醇-3激酶/蛋白激酶B(PI3K/PKB)与上皮性卵巢癌发生发展之间的关系.方法 用免疫组化的方法对25例正常卵巢组织、25例良性上皮性卵巢肿瘤、19例交界性上皮性卵巢肿瘤及69例上皮性卵巢癌组织进行Beclin 1、Class Ⅰ PI3K (p110α)、Class Ⅲ PI3K(hvps34)及其下游的磷酸化PKB(p-PKB)的表达水平进行检测.结果 Beclin 1、hvps34在正常卵巢组织与良性卵巢肿瘤组织中表达较高,在交界性卵巢肿瘤组织中开始下降,在上皮性卵巢癌中的表达低(P＜0.05);p110α、p-PKB在交界性卵巢肿瘤组织中开始升高,在上皮性卵巢癌中的表达高于其它3组(P＜0.05).卵巢癌Ⅰ～Ⅱ期、高中分化、淋巴结无转移的卵巢肿瘤组织中Beclin 1的表达分别高于Ⅲ～Ⅳ期、低分化、淋巴结有转移者(P＜0.05),而p110α及p-PKB的表达则分别降低(P＜0.05).结论 自噬基因Beclin 1在上皮性卵巢癌中的表达下调,对自噬起调控作用的PI3K/PKB信号通路中的成分p110α、hvps34、p-PKB存在表达异常,可能与上皮性卵巢癌的发生、发展及临床预后有关.
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肝移植受体术后外周血来源树突状细胞乙肝表面抗原提呈功能检测
目的 了解处于乙肝病毒临床清除状态的肝移植受体术后外周血来源树突状细胞提呈乙肝病毒表面抗原的能力及其影响因素.方法 选取18例术后肝移植受体为病例组,6例健康成人为对照组,以细胞因子诱导法从外周血获得树突状细胞,经乙肝病毒表面抗原处理后进行混合淋巴细胞培养,检测并比较两组树突状细胞刺激淋巴细胞增殖的能力,并进行多因素分析.结果 肝移植受体术后外周血来源的树突状细胞刺激淋巴细胞增殖的能力弱于健康对照组(cpm值4310.8±1820.3 vs 19002.5±3357.8,P＜0.001),提呈乙肝病毒表面抗原的能力弱于健康对照组(cpm值4974.9±2414.7 vs 39258.4±5554.9,P＜0.001).结论 肝移植受体术后外周血来源树突状细胞提呈乙肝表面抗原的能力低下,此种功能缺陷可能是导致受体针对乙肝病毒的主动免疫反应性低的重要原因,并且其提呈作用受术前乙肝病毒复制状态、术后时间、术后预防方案及术后外周血单个核细胞乙肝病毒含量影响.
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小鼠巨噬细胞转染Rv0901基因后活性的改变
目的 将重组结核分枝杆菌Rv0901基因的重组质粒pcDNA3.1-Rv0901转染小鼠腹腔巨噬细胞,研究结核分枝杆菌Rv0901基因在结核分枝杆菌感染巨噬细胞的过程中所起的作用.方法 制备小鼠腹腔巨噬细胞,分别将pcDNA3.1、pcDNA3.1-Rv0901质粒DNA与绿色荧光蛋白(GFP)的质粒DNA混合,以脂质体转染的方式共转染小鼠腹腔巨噬细胞.转染后72 h,分别收集细胞用流式细胞仪检测GFP的表达和细胞凋亡的发生情况,用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测质粒的转染情况.收集转染72 h后的细胞培养液上清,检测细胞NO、IFN-γ的释放水平.结果 pcDNA3.1和pcDNA3.1-Rv0901转染的巨噬细胞中均检测到了GFP的表达,转染后的巨噬细胞RT-PCR能扩增出Rv0901的目的 片段,pcDNA3.1-Rv0901转染巨噬细胞后细胞的凋亡率高于空载体对照组[(56.4±2.0)% vs (19.9±1.5)%,P＜0.05], pcDNA3.1-Rv0901转染巨噬细胞后细胞培养液上清中NO和IFN-γ的释放量高于空载体对照组[NO:(40.4±3.0) μmol/L vs (27.5±3.2) μmol/L, IFN-γ:(2.11±0.031) ng/mL vs (0.62±0.025) ng/mL,P均＜0.05].结论 pcDNA3.1-Rv0901转染小鼠巨噬细胞后使巨噬细胞的凋亡增加,NO和IFN-γ的释放量增加,提示结核分枝杆菌Rv0901基因可能导致巨噬细胞的活性增强,与结核分枝杆菌感染巨噬细胞的机理有关.
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脑干和脊髓在异氟烷抑制伤害性逃避反射中的作用
目的 探讨脑干和脊髓在吸入麻醉剂异氟烷抑制伤害性逃避反射中的作用.方法 30只成年SD大鼠随机平分为血管钳钳夹大鼠后爪组和血管钳钳夹大鼠口鼻组,分别以血管钳钳夹大鼠后爪或大鼠口鼻(即分别钳夹大鼠脊神经支配区及由脑干发出的颅神经支配区)作为伤害性刺激,测定异氟烷的低肺泡有效浓度(minimum alveolar concentration,MAC),并测定所有大鼠抑制角膜反射的MAC值,观察所得MAC值的相互关系.结果 血管钳钳夹大鼠后爪和大鼠口鼻组,异氟烷的MAC分别为1.44% ±0.09%和1.29%±0.11%(P＜0.05).MAC角膜与MAC口鼻有很好的相关性(r＝0.95,P＜0.05),而与MAC后爪相关性较弱(r=0.61,P＜0.05).结论 脑干和脊髓都是吸入全麻药的作用部位,但脊髓敏感度低于脑干.
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AIB1蛋白在妇科肿瘤中的表达
目的 观察AIB1蛋白在妇科肿瘤中的表达,初步探讨它在常见妇科肿瘤发生发展中的作用及其临床意义.方法 采用免疫组化SP法检测10例正常宫颈组织和18例宫颈癌、18例正常宫内膜组织和46例宫内膜癌、19例正常卵巢组织和74例上皮性卵巢癌中AIB1蛋白的表达情况,并比较不同临床病理特征之间AIB1蛋白表达的差异.结果 宫颈癌与正常宫颈组织中AIB1蛋白表达阳性率的差异无统计学意义,但宫颈癌淋巴结转移组中AIB1蛋白的表达高于无转移组(57.14% vs 9.09%, P=0.047).AIB1蛋白在宫内膜癌、卵巢上皮性癌中的表达均高于正常对照(分别为45.65% vs 5.56%、70.27% vs 10.53%, P=0.002和0.000).宫内膜癌低分化组AIB1的表达高于高分化组(75.00% vs 13.33%, P=0.001).卵巢癌中AIB1蛋白的阳性表达率随着肿瘤分化程度的逐渐降低(P=0.018)、临床分期的逐渐升高(P=0.006)呈不断升高的趋势.结论 AIB1蛋白的过表达可能与妇科肿瘤,尤其是卵巢癌的发生发展有关.
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成都市社区慢性阻塞性肺疾病患者卫生服务利用及其影响因素分析
目的 了解成都市社区慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者卫生服务利用情况及其影响因素.方法 随机整群抽取成都市6个社区卫生服务试点社区的所有COPD患者作为调查对象,采用逐户走访填写问卷并结合查阅病案的方法对446名患者进行调查,调查内容涉及患者的一般社会人口学特征,疾病相关内容,对待疾病的态度,卫生服务利用信息以及相关卫生费用等.结果 成都市社区COPD患者门诊利用率为53.04%,年均门诊次数为6.04±4.05.COPD患者住院就诊率为18.22%,年均住院次数为6.10±2.61,年均住院时间为(51.65±15.91) d.COPD患者对综合性医院和较大的医院的利用率为45.33%,对社区卫生服务中心利用率为18.22%.影响COPD患者门诊就诊的主要因素为年龄、患者种类、对疾病的态度、病情严重程度和医疗负担形式.影响COPD患者住院与否的主要因素有职业、患者种类、病情严重程度、医疗费用负担形式与家人态度.文化水平、收入、职业、对疾病的态度以及医疗费用负担形式则是影响COPD患者到社区卫生服务中心就诊的主要因素.结论 成都市社区COPD患者对卫生服务特别是社区卫生服务的利用较低;有较多的因素影响患者对卫生服务的利用.
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Survivin蛋白表达与卵巢恶性生殖细胞肿瘤临床病理特征的关系
目的 探讨Survivin蛋白表达与卵巢恶性生殖细胞肿瘤发生发展的关系.方法 采用免疫组化链菌素亲生物素蛋白-过氧化酶连接法(labelled streptavidin biotin method, LSAB)检测10例正常卵巢和29例卵巢恶性生殖细胞肿瘤组织石蜡标本中Survivin蛋白的表达状况.结果 正常卵巢组织中无Survivin蛋白的表达;Survivin蛋白表达定位在肿瘤细胞的胞浆和胞核中;卵巢恶性生殖细胞肿瘤中Survivin蛋白表达阳性率为58.6%,高于正常卵巢组织(P＜0.05),但Survivin蛋白表达与恶性生殖细胞肿瘤的病理类型、FIGO分期、淋巴结转移、血清AFP含量及腹水量间均无明显关联(P＞0.05).结论 Survivin蛋白表达水平增高可能与卵巢恶性生殖细胞的发生有关.
关键词： Survivin蛋白 卵巢恶性生殖细胞肿瘤 -
抑制子κBα调控激素敏感型单纯性肾病病毒基因反式激活途径中核因子κB活性的研究
目的 研究抑制子κBα基因(IκBα)表达及其对激素敏感型单纯性肾病(SRSNS)病毒基因反式激活途径核因子κB(NF-κB)活性的调控作用.方法 采用荧光定量RT-PCR、Western blot和电泳迁移率改变实验分别测定SRSNS活动期、SRSNS缓解期患儿和正常儿童外周血单个核细胞(PBMCs)中IκBα mRNA、蛋白质表达水平和NF-κB活性.同时采用RT-PCR和ELISA分别检测PBMCs呼吸道病毒基因表达和血浆病毒抗体.结果 SRSNS活动期PBMCs细胞核中NF-κB活性增加,与SRSNS缓解期和正常儿童比较,差异有统计学意义(P＜0.05).NF-κB活性与呼吸道病毒检出率呈正相关趋势(OR=27,Kappa系数=0.59,P＜0.05).SRSNS活动期PBMCs细胞浆中IκBα蛋白质低于SRSNS缓解期和正常儿童(P＜0.05).SRSNS活动期NF-κB活性与IκBα蛋白质水平呈负相关(r=-0.884, P＜0.05).SRSNS活动期IκBα mRNA水平高于正常儿童,但仍低于SRSNS缓解期(P＜0.05).结论 NF-κB介导的病毒基因反式激活过程中存在IκBα异常表达,IκBα对于NF-κB活性具有调控作用.
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信号肽重组mBD2在宫颈癌细胞中的稳定表达及活性测定
目的 探讨鼠重组beta防御素2(rmBD2)对SiHa细胞增殖的影响.方法 采用脂质体转染法将真核表达质粒pcDNA3.1(+)/rmBD2转染SiHa细胞系,G418筛选出稳定表达细胞克隆.分别采用间接免疫荧光染色、RT-PCR方法检测稳定转染细胞中rmBD2蛋白和rmBD2 mRNA表达,并采用MTT法对稳定转染细胞株进行细胞增殖能力的测定.结果 采用100 μg/mL的G418浓度筛选质粒转染的SiHa细胞20 d,得到了rmBD2稳定表达细胞株SiHa/rmBD2及转染pcDNA3.1(+)空质粒的对照细胞SiHa/K.免疫荧光染色显示SiHa/rmBD2细胞质中均有目的 蛋白的表达,转染效率为100%.提取稳定转染4、6、8、10 周SiHa/rmBD2细胞总RNA,RT-PCR反应扩增得到220 bp左右的目的 片段,而SiHa/K及SiHa细胞未见目的 蛋白表达.细胞生长曲线显示SiHa/rmBD2细胞的生长速度低于SiHa/K及SiHa细胞(P＜0.05).结论 本研究成功筛选了稳定表达rmBD2的细胞株SiHa/rmBD2,并采用间接免疫荧光染色、RT-PCR证实了rmBD2蛋白和rmBD2 mRNA的稳定表达,细胞增殖实验表明rmBD2可以明显抑制肿瘤细胞的增殖,为进一步研究rmBD2的抗肿瘤作用奠定了细胞学基础.
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Aurora A表达与人前列腺癌细胞对紫杉醇敏感性的相关性研究
目的 探讨前列腺癌细胞中Aurora A表达与细胞对紫杉醇敏感性的相关性,明确Aurora A表达是否影响紫杉醇对前列腺癌的治疗效果.方法 以激素非依赖性前列腺癌细胞Du145为研究对象,通过转染Aurora A全长基因得到稳定高表达Aurora A 的细胞系Du145-Aurora A,细胞用不同浓度紫杉醇处理,用MTT细胞增殖实验检测细胞生长抑制率,用流式细胞仪分析细胞凋亡情况,比较Aurora A表达上调后细胞生长抑制率和细胞凋亡率的变化.同时,用核酶技术使细胞Aurora A表达下调,检测Aurora A表达下调后细胞生长抑制率和细胞凋亡率的变化.结果 Aurora A表达上调使紫杉醇对细胞的生长抑制率和细胞凋亡率均降低(P＜0.01),而Aurora A表达下调使紫杉醇对细胞的生长抑制率和细胞凋亡率均增高(P＜0.01).结论 人前列腺癌细胞中Aurora A表达与细胞对紫杉醇敏感性具有相关性,抑制Aurora A可望提高紫杉醇对前列腺癌的治疗效果.
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外源性神经节苷脂对神经干细胞增殖、分化作用的初步研究
目的 探讨外源性神经节苷脂(GM1)对从胎鼠大脑分离培养的神经干细胞(NSCs)增殖及分化的作用.方法 ①利用无血清培养技术从胎鼠大脑皮层和海马分离培养原代细胞,加血清诱导其分化.②在NSCs培养基和DMEM/F12培养基中加入不同浓度的GM1,观察GM1对NSCs增殖和分化的影响.结果 ①与不含GM1的NSCs培养基相比,在NSCs培养基中加入低浓度的GM1,NSCs的生长无明显改变,随着GM1浓度的增加,NSCs克隆球体积逐渐减小,细胞逐渐死亡;②在DMEM/F12培养基中单独加GM1而不加血清,NSCs克隆球均未见继续生长,也未见分化,而是迅速的死亡.结论 在NSCs培养基中,低浓度(12.5 μg/mL)GM1对NSCs的增殖无明显影响,但较高浓度的GM1对NSCs的增殖有抑制作用;在无血清的DMEM/F12培养基中,GM1不能诱导NSCs分化.
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Aurora A表达对人前列腺癌细胞生物学行为的影响
目的 研究Aurora A表达增高对人前列腺癌细胞LNCaP生物学行为的影响,以了解其在人前列腺癌发生发展中的作用.方法 克隆Aurora A全长基因,将其转染入LNCaP细胞中表达,采用四唑盐(MTT)法细胞增殖实验检测Aurora A表达升高的阳性细胞生长情况,采用改良的Transwell侵袭小室方法检测细胞侵袭能力;同时与转染空质粒(pcDNA3.1)细胞和未转染细胞进行比较.结果 成功构建重组质粒pcDNA3.1-Full Length Aurora A.Aurora A高表达的LNCaP细胞增殖速度较空质粒转染细胞和未转染细胞快,培养3 d后LNCaP-Aurora A组细胞较pcDNA3.1质粒转染细胞及未转染的LNCaP细胞增多,差异有统计学意义(P＜0.05).在体外细胞移动实验中,LNCaP-Aurora A组细胞也较另两组细胞表现出更强的穿膜能力(P＜0.01).结论 Aurora A表达增高与人前列腺癌细胞的恶性表型具有密切相关性,Aurora A在人前列腺癌发生发展中可能发挥重要作用.
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分泌表达人IL-12基因重组卡介苗菌株的构建和筛选
目的 筛选获得分泌表达人白介素12(IL-12)的基因重组卡介苗菌株.方法 采用PCR反应从pORF-h IL-12载体中扩增得到人IL-12基因的完整序列,克隆入大肠杆菌-分枝杆菌(E.coli-BCG)穿梭载体pMV361中,构建含人IL-12基因的重组质粒rpMV-IL-12.将纯化的rpMV-IL-12电穿孔转化卡介苗(BCG),通过卡那霉素抗性筛选、基因组PCR方法进行初步鉴定,再经热休克诱导表达后,分别收集培养上清液和细菌沉淀,进行SDS-PAGE分析,筛选得到IL-12基因重组BCG(rBCG-12).结果 成功构建含人IL-12基因的大肠杆菌-分枝杆菌穿梭质粒rpMV-IL-12,测序结果与GenBank收录序列一致,未发生突变.rpMV-IL-12电穿孔转化BCG,经卡那霉素抗性筛选及基因组DNA的IL-12目的 片段PCR扩增筛选得到rBCG-12重组菌.rBCG-12热休克诱导表达后的SDS-PAGE电泳,从培养上清液中检测到相对分子质量为70×103的蛋白质条带,而细菌沉淀中未见到特异性条带.结论 分泌表达人IL-12蛋白的重组BCG菌株构建、筛选成功.
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Cyclooxygenase-2在急性胰腺炎大鼠肺微循环障碍中的作用
目的 初步探讨急性胰腺炎大鼠肺组织Cyclooxygenase-2(Cox-2)的表达及其在急性胰腺炎肺微循环障碍中的作用.方法 逆行胰胆管注射灭菌的4%牛磺胆酸钠诱导Sprague-Dawley大鼠急性出血坏死性胰腺炎(AHNP)模型.实验随机分为假手术组、AHNP组及Celecoxib预处理组,术后3、6、12和24 h处死动物,取肺组织HE染色进行肺损伤的组织学评价,Mallory氏磷钨酸苏木精染色观察血管中的纤维素性血栓,免疫组化检测Cox-2蛋白表达.结果 AHNP组肺组织Cox-2表达和病理学评分进行性增加,两者呈正相关(r=0.503,P=0.012).在AHNP早期就可发现肺组织微血栓形成,其密度和损伤评分亦呈正相关(r=0.604,P=0.004);Celecoxib预处理在各时相点均减轻了肺损伤的程度、微血栓密度和Cox-2的表达水平(P＜0.05);Celecoxib下调Cox-2表达程度与其改善肺组织病理损伤强度正相关,而与其降低微血栓形成的程度无明显相关性.结论 肺微血栓形成所致的肺微循环障碍可能是诱导肺损伤发生的早期事件,并可能是始动因素;Cox-2过表达可能具有促凝血活性而在肺微血栓形成中扮演关键角色.
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纤维支气管镜下气管镜活检联合肿瘤标记物检测对肺癌的诊断
目的 观察纤维支气管镜检查联合肿瘤标记物检测对肺癌的诊断价值.方法 对96例肺癌患者和88例肺部良性病变患者行纤维支气管镜检查和电化学发光法检测血清或胸水肿瘤标记物癌胚抗原(CEA)、糖链抗原125(CA125)及细胞角蛋白19片段(CYFRA21-1)水平.结果 肺癌患者血清CEA、CA125及CYFRA21-1水平分别为(46.34±18.28) ng/mL、(83.34±33.26) U/mL及(25.67±10.32) ng/mL,高于肺部良性病变患者血清上述肿瘤标记物水平[分别为(3.21±2.74) ng/mL、(38.75±18.43) U/mL及(1.67±1.46) ng/mL,P＜0.05];36例伴有胸腔积液的肺癌患者胸水中CEA、CA125及CYFRA21-1水平分别为(76.23±31.64) ng/mL、(319.61±102.78) U/mL及(78.42±25.39) ng/mL,高于血清中上述肿瘤标记物水平[分别为(51.42±12.26) ng/mL、(123.34±28.57) U/mL及(27.43±8.63) ng/mL,P＜0.05].96例肺癌患者中纤维支气管镜检查确诊58例,敏感度为60.4%,特异度和准确度分别为100.0%和79.4%;CEA敏感度37.5%,特异度和准确度分别为87.5%和63.6%;CA125敏感度67.7%,特异度和准确度分别为40.9%和54.9%;CYFRA21-1敏感度56.3%,特异度和准确度分别为81.8%和68.5%.纤维支气管镜联合肿瘤标记物检测后敏感度为90.6%,特异度和准确度分别为92.0%和91.3%.结论 纤维支气管镜检查联合肿瘤标记物检测,可以提高肺癌的诊断率.
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PPAR-γ配体罗格列酮对胆管癌细胞增殖抑制作用的实验研究
目的 探讨过氧化物酶体增殖物激活受体-γ(PPAR-γ)配体罗格列酮(RGZ)对胆管癌细胞增殖的影响.方法 采用不同浓度RGZ对胆管癌细胞系QBC939进行干预,计算不同浓度下QBC939细胞的增殖抑制率,用流式细胞技术检测各浓度下细胞周期变化和凋亡发生率.结果 RGZ对胆管癌细胞有明显的增殖抑制作用,以1200 mg/L浓度组为明显,高增殖抑制率达83.66%;在1200 mg/L、600 mg/L、300 mg/L、150 mg/L、75 mg/L和37.45 mg/L组经48 h和72 h培养处理后,细胞增值抑制率与对照组比较差异均有统计学意义(P＜0.001).细胞周期亦受到明显的调控,高浓度组有62.77%细胞停滞于G0/G1期.结论 PPAR-γ配体RGZ在体外对胆管癌细胞系QBC939有明显的增殖抑制作用.
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泼尼松对IL-8在COPD大鼠肺组织表达的影响
目的 研究IL-8在慢性阻塞性肺病(COPD)大鼠肺组织中的表达及泼尼松对其表达的影响.方法 Wistar大鼠24只随机分为:正常对照组(A组)、单纯熏烟组(B组)和熏烟+泼尼松组(C组),每组各8只.单纯熏香烟法建立COPD模型,C组于熏香烟前予泼尼松5 mg/kg隔日灌胃.模型建立后,行支气管肺泡灌洗,测定支气管肺泡灌洗液(BALF)中细胞数,酶联免疫吸附法(ELISA)测定BALF上清液和血清中的IL-8和TNF-α浓度,并对肺组织切片行苏木精-伊红(HE)染色观察形态学改变,采用图像分析系统定量测定肺平均内衬间隔(MLI)、平均肺泡数(MAN)和肺泡腔面积与总面积比(PAA).结果 B组MLI、PAA比A组增高,而MAN低于A组,C组与B组相比MLI、PAA降低,MAN升高,差异均有统计学意义(P＜0.01).与A组比较,B组BALF中IL-8、TNF-α、白细胞总数、中性粒细胞绝对计数和中性粒细胞百分比均增高(P＜0.05),C组较B组上述指标均下降(P＜0.05).B组血清中IL-8和TNF-α浓度亦比A组增高(P＜0.05),C组较B组下降,但IL-8的浓度差异无统计学意义.B组BALF中IL-8与中性粒细胞绝对计数、TNF-α呈正相关(r=0.735、0.987,P＜0.05);与血清中IL-8和TNF-α、血气分析的所有指标及形态学定量分析的任一指标均无相关性.血清IL-8与上述任一指标亦均无相关性.结论 BALF中的IL-8与COPD的气道炎症密切相关,IL-8与TNF-α相互作用,通过趋化激活中性粒细胞等炎性细胞共同参与COPD发病.泼尼松可能通过抑制IL-8的表达,从而减轻炎症介质和炎性细胞对气道的损害,延缓COPD的进展.
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静磁场对人牙龈成纤维细胞超氧化物歧化酶活性的影响
目的 研究不同磁路设计的磁性附着体所产生静磁场对人牙龈成纤维细胞酶学的作用.方法 使用自主设计的磁场加载系统,产生不同强度的静磁场,对体外培养的人牙龈成纤维细胞进行不同时间的磁场加载.通过与对照组的比较,探讨磁场对该类细胞超氧化物歧化酶活性的影响.结果 改变加载强度(120 mT、10 mT、0 mT)或加载时间(1、3、5个加载周期),静磁场对人牙龈成纤维细胞超氧化物歧化酶活性的影响差异均无统计学意义.结论 本试验条件下,开放及闭合磁路系统磁性附着体所产生静磁场,对牙龈成纤维细胞超氧化物歧化酶活性没有影响.
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银杏内酯B对局灶性脑缺血时星形胶质细胞GFAP表达的影响
目的 观察血小板活化因子(PAF)受体拮抗剂银杏内酯B(GB)对局灶性脑缺血时星形胶质细胞胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达的影响,并探讨其作用机制.方法 建立光化学诱导树局灶性脑缺血模型,用HE染色和电镜技术观察缺血后不同时间脑组织星形胶质细胞的形态学改变;用免疫组织化学法观察脑缺血后4 h、24 h、72 h及给予GB后24 h半暗区及对侧皮层星形胶质细胞GFAP的表达,并测定其平均灰度值.结果 光镜下可见,HE染色显示树局灶性脑缺血后,随缺血时间延长,星形胶质细胞形态有不同程度改变;电镜观察显示缺血24 h时星形胶质细胞明显肿胀.免疫组织化学染色可见,半暗区星形胶质细胞GFAP表达在4 h时没有明显改变, 24 h时增加 (P＜0.01),72 h时仍维持在较高水平(P＜0.01);对侧皮层星形胶质细胞GFAP表达于72 h时开始增加(P＜0.05).缺血后6 h舌下静脉注射GB至缺血24 h时,星形胶质细胞GFAP表达少于缺血组(P＜0.05),但仍较假手术组高.结论 脑缺血后星形胶质细胞GFAP表达增强,GB可通过减少星形胶质细胞GFAP的表达而起脑保护作用.
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A23187诱导HL-60细胞分化为树突状细胞的研究
目的 探讨用钙离子载体A23187通过钙动员机制使人急性粒细胞性白血病细胞系HL-60细胞迅速分化为树突状细胞(DCs)的方法,为今后临床用DCs进行抗白血病免疫治疗打下基础.方法 将生长良好的HL-60细胞加入不同浓度A23187(45～720 ng/mL)或联用重组人γ-干扰素(rhIFN-γ,1000 U/mL)培养20～96 h,倒置显微镜和扫描电镜观察其形态学特征,流式细胞术检测其免疫表型,混合淋巴细胞反应检测其刺激T淋巴细胞增殖的能力.结果 HL-60细胞加入适量A23187(180 ng/mL)或联合rhIFN-γ(1000 U/mL)诱导20 h后,即可出现细胞表面树状突起,且树突状细胞表面特异性成熟标志抗原CD83、共刺激分子CD80、CD86表达升高;培养48 h,CD83分子表达开始降低;培养72 h,可获得DC的典型形态,CD80、CD86分子表达持续升高.同种异体混合淋巴细胞反应检测经A23187或联用rhIFN-γ诱生的DCs可明显刺激同种异体T淋巴细胞增殖.结论 钙离子载体可诱导HL-60细胞分化为高表达共刺激分子及具有刺激同种异体T淋巴细胞增殖的成熟DCs,钙动员有望成为一种快速获取DCs的有效方法.
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嗜肺军团菌主要免疫原基因真核表达质粒的构建与表达
目的 构建嗜肺军团菌主要免疫原基因的真核表达重组质粒pcDNA3.1-ip,并观察其在真核细胞中的表达.方法 以嗜肺军团菌1型DNA为模板,PCR扩增获得嗜肺军团菌ip基因,将其定向插入载体pcDNA3.1(+),构建真核表达重组质粒pcDNA3.1-ip.经限制性核酸内切酶HindⅢ和BamHⅠ酶切鉴定、PCR和核酸序列分析后,用脂质体法将重组质粒pcDNA3.1-ip转染NIH3T3细胞,采用免疫荧光法和Western blot分别鉴定pcDNA3.1-ip的瞬时和稳定表达.结果 成功构建了嗜肺军团菌ip基因的真核表达重组质粒.在细胞膜与细胞内观察到较强的绿色荧光,表明pcDNA3.1-ip成功转入NIH3T3细胞,并在NIH3T3细胞中得到了瞬时表达;用嗜肺军团菌兔血清抗体检测pcDNA3.1-ip稳定转染的NIH3T3细胞,在相对分子质量为29×103处检测到阳性杂交信号,表明pcDNA3.1-ip在细胞内可稳定表达IP蛋白.结论 本研究构建的嗜肺军团菌主要免疫原基因真核表达质粒pcDNA3.1-ip能够成功表达IP蛋白,表达的蛋白具有良好的免疫原性与免疫反应性.
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核酸序列水平定位DNA损伤的实验研究
目的 研究在核酸序列水平定位DNA损伤的方法.方法 培养TK6细胞,抽提基因组DNA,制备k-ras基因外显子2的单链探针.酶切基因组DNA构建损伤模型,应用依赖随机化末端连接物PCR(RDPCR)进行Southern blot,对产物进行测序.结果 酶切DNA的RDPCR产物在相应位置出现杂交条带,测序证实损伤位于HinfⅠ在k-ras外显子2的酶切位点.结论 将RDPCR和测序技术结合在一起,可在核酸水平上准确定位DNA损伤的碱基位置.
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自噬基因Beclin 1 shRNA表达质粒的构建及其对宫颈癌细胞HeLa生长的作用
目的 构建自噬基因Beclin 1小发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)表达质粒,探讨Beclin 1抑制后对宫颈癌HeLa细胞生长的作用.方法 根据人Beclin 1 mRNA编码序列,设计RNA干扰靶点,构建Beclin 1 shRNA表达质粒,脂质体法转染人宫颈癌HeLa细胞,通过荧光定量PCR(RT-PCR)和Western blot检测其对HeLa细胞自噬基因Beclin 1 mRNA及蛋白表达的影响.MTT法分析其对细胞增殖、流式细胞仪检测其对细胞周期和细胞凋亡的影响.结果 构建的shRNA表达载体可以使HeLa细胞中自噬基因Beclin 1的mRNA及其蛋白含量降低,转染质粒的细胞生长增殖速度加快,凋亡率降低.结论 成功构建了针对自噬基因Beclin 1的shRNA表达载体,通过转染HeLa细胞,可有效抑制细胞中Beclin 1的表达,并促进细胞生长,抑制凋亡.
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胆汁中K-ras基因突变对胰腺癌肝转移诊断价值的实验研究
目的 探讨胆汁中K-ras基因突变检测在胰腺癌肝转移早期诊断中的价值.方法 通过建立胰腺癌及胰腺癌肝转移的大鼠动物模型,收集模型大鼠的胆汁,采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析(PCR-RFLP)检测胆汁中K-ras基因12密码子点突变情况并与病理切片法相比较.结果 16例胰腺癌动物模型胆汁标本中无K-ras基因突变(0/16),19例胰腺癌肝转移动物模型胆汁标本中K-ras基因突变率为84.20%(16/19).胰腺癌肝转移胆汁K-ras基因突变检测的敏感性为84.20%,特异性为85.7%,阳性预测值为84.20%,阴性预测值为85.70%.结论 胰腺癌肝转移胆汁中K-ras基因可以发生突变,其突变率高,特异性强,可能为胰腺癌肝转移早期诊断的初步筛选提供新的方法.
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成都地区汉族群体5个STR基因座的遗传多态性研究
目的 了解中国成都地区汉族人群GATA170H04、D8S2324、D9S2146、GATA51A07和GATA178C09 5个短串联重复序列(STR)基因座的等位基因片段结构特征,获得中国成都地区汉族群体的遗传学数据,并分析其在法医学中的应用价值.方法 收集成都地区汉族无血缘关系个体的EDTA抗凝血,Chelex-100法提取DNA.采用PCR扩增、非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳、银染及测序技术分析中国成都地区汉族群体中5个基因座的遗传多态性,获得5个基因座的群体遗传学数据.结果 5个基因座在成都汉族人群中分别发现了10、7、5、7、7个等位基因,观测杂合度分别为83%、80%、64%、66%、77%,个人识别机率分别为95.4%、91.0%、84.3%、86.1%、86.8%,经统计学分析,各基因座基因型分布规律均符合Hardy-Weinberg平衡定律.结论 GATA170H04、D8S2324、D9S2146、GATA51A07和GATA178C09基因座的个人识别能力较高,可用于中国汉族人群的个人识别和亲子鉴定,并为人类群体遗传学研究提供可靠的数据.
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1,25(OH)2维生素D3诱导大鼠骨髓单核细胞形成破骨细胞
目的 观察1,25二羟维生素D3[1,25(OH)2 D3]诱导成年大鼠骨髓来源的单核细胞形成多核破骨细胞的作用.方法 实验分为单核细胞诱导组和全骨髓诱导组,每组各10只大鼠.密度梯度离心法分离大鼠骨髓中的单核细胞,α-MEM培养液中加入10-8 mol/L的1,25(OH)2 D3诱导单核细胞向破骨细胞分化.利用抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色、倒置相差显微镜和扫描电镜,观察诱导不同时相TRAP阳性(TRAP+)多核细胞的形态学特征、特异性酶表达、以及骨吸收陷窝.进而计数诱导的破骨细胞数量,鉴定其功能活性,并与全骨髓诱导方法比较.结果 骨髓单核细胞诱导组在培养第7 d出现TRAP+多核细胞,第14 d TRAP+多核细胞数量达峰值,第21 d TRAP+多核细胞数量开始减少.从培养第14 d到第23 d,单核细胞诱导组TRAP+多核细胞数量多于全骨髓诱导组(P＜0.05);培养第10 d到第23 d单核细胞诱导组骨吸收陷窝数量多于全骨髓诱导组 (P＜0.05).单核细胞诱导组破骨细胞数量高峰期可持续7 d,全骨髓诱导法仅持续3 d.结论 1,25(OH)2 D3能够诱导成年大鼠骨髓来源的单核细胞形成破骨细胞;所诱导的破骨细胞的数量和峰值持续时间、以及骨吸收活性均高于全骨髓诱导方法.
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罗格列酮对高糖刺激下肾小管上皮细胞凋亡及整合素β1表达的影响
目的 观察罗格列酮(ROS)对肾小管上皮细胞凋亡及整合素β1 (integrin β1)水平的影响.方法 将体外培养的大鼠近端肾小管上皮细胞分为空白对照组、正常血糖(5 mmol/L)组、高糖(30 mmol/L)组、ROS (10 μmol/L)组、高糖(30 mmol/L)+ROS (5 μmol/L)组和高糖30 mmol/L+ ROS 10 μmol/L 6组, 采用流式细胞仪检测细胞培养后24、48、72 h的凋亡情况、Western blot及RT-PCR检测不同浓度的ROS对高糖刺激下integrin β1蛋白质和mRNA表达的影响.结果 integrin β1的蛋白质和mRNA的改变趋势相同,高糖组较对照组及正常血糖组增加(P＜0.05) ,经ROS处理后integrin β1的表达较高糖组降低,且与ROS浓度呈剂量相关.各实验组在48 h、72 h的细胞凋亡率与空白对照组相比均降低(P＜0.05);48、72 h的细胞凋亡率低于24 h(P＜0.05),但48 h与72 h间的比较差异无统计学意义.结论 ROS可明显抑制高糖刺激下肾小管上皮细胞integrin β1的表达,且有明显剂量依赖关系,而ROS对细胞凋亡的影响可能与 integrin β1的参与有关.
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N-乙酰半胱氨酸对脂多糖诱发小鼠早产的防治作用
目的 探讨N-乙酰半胱氨酸(NAC)对脂多糖(LPS)诱发小鼠早产的预防和治疗效果及作用机理.方法 将100只孕15 d C57BL/6小鼠随机分为LPS组、NS组、NAC组、治疗作用组和预防作用组,每组20只.在干预后4 h、8 h、12 h、24 h后每个时间点分别处死3只孕鼠,Western Blotting检测子宫组织NF-κB P65,RT-PCR检测IL-8 mRNA水平,试剂盒检测孕鼠血清IL-8、丙二醛(MDA)及超氧化物歧化酶(SOD)浓度,取母、胎肝脏检测谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)水平.另每组8只观察NAC对小鼠早产的治疗效果及毒副作用.结果 NAC治疗LPS诱发小鼠早产分娩潜伏期延长至(35.4±2.1) h,活产率为69.0%,NAC预防给药则延长至(44.8±2.6) h,活产率提高至84.3%,与LPS组[(15.1±1.9) h,4.3%]相比差异均有统计学意义(P＜0.001).LPS作用4 h、8 h、12 h、24 h后,NF-κB活化增强,在4 h达高峰;子宫组织IL-8 mRNA水平、血清IL-8浓度、MDA均升高,在LPS作用8 h后高;而活胎率、母胎肝脏GSH-PX以及血清SOD水平均下降,在作用8 h低.预防作用组和治疗作用组各指标变化程度均减弱,同LPS组比较差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 NAC对LPS诱发的小鼠早产防治效果明显,且预防作用大于治疗作用.
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重症急性胰腺炎术后早期肠内营养支持治疗人体肠粘膜的形态学变化
目的 研究重症急性胰腺炎(SAP)患者术后肠内营养(EN)和肠外营养(TPN)支持治疗后人体肠粘膜结构的形态学变化,并探讨其临床意义.方法 40例接受手术治疗的SAP患者随机分成EN组(20例)和TPN组(20例),在分别采用肠内外营养支持治疗后,采用全自动速率散射比浊法测定前白蛋白(PAB)和转铁蛋白(TRF)水平,比较营养支持效果;并用新的微创方法获取活体肠粘膜标本,用普通光镜和透射电镜观察肠粘膜结构的变化.结果 EN组患者PAB水平在术后7 d和14 d时高于TPN组(P＜0.05),而TRF水平在观察期内各组没有明显差别;光镜下观察,术后14 d EN组空肠绒毛高度高于TPN组(P＜0.05),电镜下,术后14 d EN组空肠上皮细胞微绒毛高度也高于TPN组(P＜0.05),同时也高于自身的营养支持前的微绒毛高度(P＜0.05).在TPN组术后14 d还观察到空肠粘膜上皮细胞内线粒体肿胀、脊变粗、粗面内质网和核仁肿胀,细胞紧密联结处出现异物沉淀等病理学改变,而EN组则无上述现象.结论 对SAP患者术后早期实施EN能够保护肠粘膜结构,其治疗效果优于单纯的TPN.
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妊娠期肝内胆汁淤积症脐血淋巴细胞凋亡的初步研究
目的 探讨脐血淋巴细胞凋亡在妊娠期肝内胆汁淤积症(intrahepatic cholestasis of pregnancy,ICP)发病中的意义.方法 采用流式细胞技术分析ICP患者和正常妊娠妇女脐血淋巴细胞的凋亡率;通过免疫细胞化学染色技术检测ICP患者和正常妊娠妇女脐血淋巴细胞上凋亡调控基因Fas、FasL、Bcl-2的蛋白表达.结果 ICP患者脐血淋巴细胞凋亡率低于正常妊娠组(P＜0.001),脐血淋巴细胞上Fas、Bcl-2表达水平两组间差异无统计学意义(P＞0.05),而FasL表达水平在ICP组高于正常妊娠组(P＜0.005).结论 ICP患者存在脐血淋巴细胞凋亡率及凋亡调控基因表达的异常,可能致移植物抗宿主反应异常而在ICP的发病中起一定作用.
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细菌内同源重组法制备腺病毒介导TK基因对肝癌细胞的杀伤作用
目的 探讨用细菌内同源重组法制备含TK自杀基因腺病毒对肝癌细胞的杀伤作用.方法 将TK基因自载体中切出,亚克隆至腺病毒穿梭质粒中,形成质粒pAdTrack-GFP-TK,将其PmeⅠ酶切线性化后与腺病毒基因组质粒pAdEasy-1共转化BJ5183菌,抽提重组体腺病毒基因组质粒DNA,PacⅠ酶切后转染293细胞包装成腺病毒颗粒,观察其对肝癌细胞的感染效率和目的 基因表达情况及肝癌细胞SMMC-7721感染含TK自杀基因腺病毒后加入丙氧鸟苷(GCV)的生存率和旁观者效应的体外观察.结果 纯化所得腺病毒滴度约为2×1012 efu/mL,当病毒感染复数(MOI)=100时,腺病毒感染SMMC-7721细胞的效率＞90%,实验证实在感染重组体腺病毒的细胞中有相应基因产物的表达,SMMC-7721/Ad-TK细胞对GCV高度敏感,半杀伤浓度(IC50)仅为0.2 μmol/L,HSV-TK/GCV系统在SMMC-7721细胞中存在明显的旁杀伤效应.结论 细菌内同源重组法制备重组腺病毒介导的HSV-TK基因能够成功地在体外整合到肝癌细胞SMMC-7721中,并能高效表达,使其对GCV高度敏感.旁观者效应极大地提高了TK基因抗肿瘤活性,使TK基因制剂实际应用于临床治疗恶性肿瘤成为可能.
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番石榴叶水提取物对糖尿病小鼠小肠α-葡萄糖苷酶活性的影响
目的 研究番石榴叶水提取物对α-葡萄糖苷酶的抑制作用.方法 蒸馏水浸提、浓缩、干燥制备番石榴叶水提取物.昆明小鼠链脲佐菌素腹腔注射诱导糖尿病模型,以小鼠小肠粘膜生理盐水匀浆液作为α-葡萄糖苷酶,与双糖底物孵育,比色法测定葡萄糖产量代表α-葡萄糖苷酶的活性.比较正常小鼠和糖尿病小鼠小肠粘膜α-葡萄糖苷酶活性,以及番石榴叶水提取物对小肠粘膜α-葡萄糖苷酶活性的影响,Lineweaver-Burk作图判断水提物对α-葡萄糖苷酶抑制作用类型.结果 番石榴叶水提取物对小肠α-葡萄糖苷酶活性具有较强的抑制作用,并呈剂量效应关系;对蔗糖酶和麦芽糖酶的半数抑制浓度(IC50)分别为1.0 g/L和3.0 g/L,抑制作用类型为竞争性和非竞争性混合型.结论 番石榴叶水提取物具有抑制糖尿病小鼠小肠粘膜α-葡萄糖苷酶作用.
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靶向ST6Gal Ⅰ的siRNA与ASO联合应用对宫颈癌细胞转移能力的影响
目的 探讨人α2,6-唾液酸转移酶(ST6Gal Ⅰ)小分子干扰RNA(siRNA)及其与反义寡核苷酸(ASO)联合应用对ST6Gal Ⅰ高表达的宫颈癌HeLa细胞的粘附和侵袭力的影响.方法 设计并合成靶向ST6Gal Ⅰ的siRNA及ASO,用脂质体Lipofectamine 2000包裹后转染HeLa细胞.实验分为空白对照组、脂质体对照组、siRNA组、ASO1组(与siRNA相同靶点)、ASO2组(与siRNA不同靶点)、siRNA+ASO1组及siRNA+ASO2组,用RT-PCR测定细胞中ST6Gal Ⅰ mRNA水平,流式细胞仪检测细胞表面α2,6-唾液酸含量,分别用CytoMatrixTM细胞粘附试剂盒及细胞侵袭分析试剂盒,检测细胞对细胞外基质(ECM)的粘附与侵袭力.结果 转染后各实验组细胞的ST6Gal Ⅰ mRNA表达水平、细胞表面α2,6-唾液酸含量及细胞对ECM的粘附与侵袭力均低于空白对照组及脂质体对照组(P均＜0.05),以siRNA+ASO2组调低作用明显.其中siRNA组细胞的ST6Gal Ⅰ mRNA表达水平(0.55±0.08)、细胞表面α2,6-唾液酸含量(39.27±9.23)分别与siRNA+ASO1组(0.54±0.09、38.27±7.74)比较,差异均无统计学意义,与siRNA+ASO2组(0.33±0.09、9.10±0.40)比较,差异有统计学意义(P均＜0.05);siRNA组与siRNA+ASO1组比较,细胞对ECM的粘附与侵袭力差异均无统计学意义,而siRNA+ASO2组细胞对ECM的粘附与侵袭力较siRNA组降低(P均＜0.05).结论 化学合成的靶向ST6Gal Ⅰ的siRNA能够下调HeLa细胞中ST6Gal Ⅰ基因的表达,继而降低细胞对ECM的粘附和侵袭力,并且与不同靶点的ASO联合应用具有相加和协同效应.
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嗜肺军团菌flaA基因的克隆及原核融合表达
目的 构建嗜肺军团菌鞭毛亚单位蛋白基因(flaA)的融合表达载体,并在原核系统表达,为进一步研究鞭毛亚单位蛋白的致病作用和免疫保护性提供前提条件.方法 以嗜肺军团菌1型DNA为模板,PCR扩增获得嗜肺军团菌flaA基因,与带有硫氧还蛋白基因(Trx)的高效原核表达质粒pET32a(+)定向重组,构建重组质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3),并经限制性核酸内切酶酶切鉴定、PCR和核酸序列分析后,以IPTG诱导表达Trx-flaA融合蛋白, 用SDS-PAGE及Western blot进行鉴定.结果 限制性核酸内切酶酶切鉴定、PCR和核酸序列分析表明,扩增出了嗜肺军团菌1435 bp的flaA基因,成功构建了重组质粒pET-flaA,SDS-PAGE及Western blot分析显示重组质粒pET-flaA在大肠杆菌中得到了高效融合表达.结论 成功构建嗜肺军团菌flaA基因重组质粒,并在原核系统中得到了高效表达.
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金黄色葡萄球菌耐药表型与femA表达水平关系研究
目的 探讨不同表型金黄色葡萄球菌femA基因的表达.方法 用琼脂对倍稀释法和产β-内酰胺酶纸片法筛选出来不同表型(苯唑西林敏感、低水平耐药、高水平耐药)、非产酶金黄色葡萄球菌临床株共15株以及瑞士捐赠的实验株4株,提取RNA,进行电泳分析及实时荧光定量PCR检测femA表达,实验株BB270的femA表达量设为100%,其他菌株值与之相比.结果 所有的菌株均检测到femA的表达,femA缺失株BB308表达量为37.82%,重组株BB586表达量为240.50%,同质性耐药株COL表达量为862.61%.4株敏感株表达量介于0.00353%～29.92%,4株低耐株表达量介于0.00554%～310%,7株高耐株表达量介于13.88%～55000%,3组间femA表达水平不全相同,苯唑西林敏感组与低水平耐药组之间femA表达量的差异无统计学意义(P1=0.83),高水平耐药组与敏感组及低水平耐药组之间femA表达量的差异均有统计学意义(P2=0.006、P3=0.01)).结论 非产酶金黄色葡萄球菌femA的表达水平在甲氧西林高水平耐药组中高于低水平耐药组和敏感组,femA是耐甲氧西林金黄色葡萄球菌高水平耐药表达的必需因子.
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直肠癌低位与超低位吻合术后排便功能对比及研究
目的 比较直肠癌患者低位Dixon与超低位Dixon术后的排便功能.方法 对于纳入研究标准的541例低位直肠癌,按保肛手术方式分为低位Dixon和超低位Dixon(吻合口距离齿状线≤2 cm)2组,两组性别、年龄、肿瘤距离齿状线距离、肉眼分类、肿瘤长径、侵犯肠管环周度、组织学分化程度、浸润深度、淋巴结转移站别、Dukes分期差异均无统计学意义.术后3个月比较两组的肛门控制力、便意及排便感觉,用徐忠法的5项10分标准和二项分类Logistic Regresssion 分析性别、年龄、肿瘤部位及吻合口距离齿状线距离等影响排便功能的有关因素,根据排便功能进行生物反馈治疗及康复指导.结果 超低位Dixon组与低位Dixon组比较肛门控制力没有明显差异,排便感觉和便意与低位Dixon组比较,差异有统计学意义(P=0.01).二项分类Logistic Regresssion 分析结果显示性别、年龄段、肿瘤部位、吻合口位置及淋巴结清扫范围是影响患者术后排便功能的因素.生物反馈治疗和康复指导可以改善患者排便功能及排便反射.结论 超低位Dioxn手术后排便功能弱于低位Dixon手术.
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彩超引导下穿刺钢丝标记定位对无体征乳腺癌的诊断价值
目的 探讨彩超引导下穿刺钢丝标记定位在无临床体征的早期乳腺癌中的诊断价值.方法 对33例彩超发现有可疑病灶而无任何临床体征的患者,在彩超引导下穿刺病灶并用金属导丝标记定位,根据导丝位置切除病灶,并进行快速冰冻活检,明确诊断.结果 33例中有3例(9.1%)确诊为乳腺癌(浸润性导管癌,其中1例部分区域为导管内癌),30例(90.9%)为良性病变(18例为纤维腺瘤,5例为导管内乳头状瘤,7例为乳腺腺病伴囊肿形成或导管扩张).冰冻切片病理检查与术后石蜡病检结果一致.结论 超声引导下穿刺钢丝标记定位活检技术解决了乳腺微小病灶活检术中精确定位的难题,对无临床体征的早期乳腺癌的诊断准确、可靠、实用,并且比在X线下操作更简便.
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腹腔镜孕前盆腔干预在预防重复异位妊娠中的作用
目的 探讨腹腔镜孕前盆腔干预(评估、必要时手术)在预防重复异位妊娠中的作用.方法 采用随机对照研究,将60例输卵管异位妊娠患者随机分为观察组与对照组,每组各30例.两组患者均进行腹腔镜下异位妊娠清除术;观察组于术后3～6月采用腹腔镜孕前盆腔干预(评估、必要时行粘连松解或和输卵管修复整形术),对照组术后仅行常规抗感染治疗.结果 孕前采用腹腔镜盆腔干预的观察组,其重复异位妊娠率为3.3%,宫内妊娠率为63.3%,与对照组(20.0%、36.7%)相比差异均有统计学意义(P＜0.05);观察组和对照组的不孕率分别为33.3%和43.3%(P＞0.05).结论 首次异位妊娠的患者再次妊娠前,予腹腔镜盆腔干预可能降低重复异位妊娠的发生率.
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POEMS综合征的临床特征及诊断
目的 研究POEMS综合征的临床特征及诊断.方法 回顾性分析并随访了四川大学华西医院近10年确诊的21例POEMS综合征患者的临床资料及预后情况.结果 21例患者临床特征的出现频率依次为:多发性周围神经病(100%)、皮肤改变(95%)、内分泌疾病(90%)、水肿渗出(90%)、脏器肿大(81%)、视乳头水肿(67%)、骨损害(67%)、贫血(48%)、慢性腹泻(33%)、血小板增多症(19%)、Castleman病(14%)、杵状变(14%)及红细胞增多症(5%).在17例中有14例找到单克隆浆细胞增生的依据:血中发现完整M-蛋白的9例;仅检测到单克隆重链者4例,其中2例通过尿液和肾脏活检找到了M-蛋白轻链;血检正常,尿中发现单克隆轻链1例.结论 POEMS综合征临床表现复杂,除传统的5个临床特征外,骨骼损害、水肿渗出和视乳头水肿同样为该病的临床诊断特征,贫血和慢性腹泻原因有待于进一步的观察研究.通过反复骨髓穿刺、多部位(骨髓、淋巴结、肾脏)组织切片免疫组化染色可能寻找到M-蛋白,但M-蛋白阴性不能排除本病诊断.
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1860例妇科腹腔镜手术并发症分析
目的 探讨妇科腹腔镜手术的并发症和相关因素.方法 回顾分析成都市妇幼保健院2003年6月至2005年12月间,1860例妇科腹腔镜手术患者的临床资料以及并发症的相关情况.包括附件手术812例,子宫次全切除术338例,筋膜内子宫切除术268例,子宫肌瘤剥除手术268例,腹腔镜辅助下阴式子宫切除术98例,全子宫切除术76例.结果 发生并发症54例(2.90%).其中附件手术发生并发症18例(2.22%),子宫次全手术并发症8例(2.37%),筋膜内子宫切除术并发症6例(2.24%),子宫肌瘤剥除术并发症12例(4.48%),腹腔镜辅助下阴式子宫全切除术并发症4例(4.08%),全子宫切除术并发症6例(7.89%).并发症种类主要为皮下出血、积气、术中出血及周围组织器官受损等.结论 加强医师手术技巧培训以及正确的术前评估有望减少腹腔镜手术并发症发生.
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23例外耳道、中耳畸形临床特点及手术治疗效果分析
目的 探讨外耳道、中耳畸形的特点、手术治疗效果及术后并发症.方法 回顾性分析2001年1月至2005年1月在我科接受手术治疗、并获随访的23例(24耳)外耳道、中耳畸形.结果 除3例单纯听骨链病变,其余病例均伴不同程度的外耳道畸形,占88%(21/24),其中外伤性外耳道畸形6例;同时有先天性耳廓畸形、外耳道闭锁及中耳畸形14例(15耳);伴有面神经畸形者占58%(14/24).术后随访6～12月听力改善20 dB以上17耳(71%).术后7耳(29%)出现1种或1种以上并发症,其中外耳道再狭窄或闭锁(5耳)多见,其次为术腔不干流脓(2耳).结论 通过耳外科手术治疗,可使外耳道、中耳畸形患者听力明显提高;及时处理术后耳道狭窄对术后听力改善具有重要意义.
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肺癌中CD105与CD34标记MVD的临床意义
目的 比较原发性肺癌中分别由CD34、CD105标记的微血管密度(MVD)与临床指标及碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)表达的关系,以寻求更特异的肿瘤微血管标记物.方法 采用免疫组化SP法检测51例肺癌标本中CD105-MVD、CD34-MVD和bFGF的表达,分析相互之间的关系及临床意义.结果 CD105-MVD小于CD34-MVD[(10.75±3.42) vs (23.03±7.07),P＜0.01],两者均与临床TNM分期(r＝0.500,0.347)、肺癌转移(r＝0.593,0.397)和bFGF的表达(r＝0.404,0.378)有关(P均＜0.01),且CD105-MVD的相关性更好.结论 CD105能更特异的标记肿瘤微血管内皮细胞,是更理想的肿瘤微血管标记物,有望成为抗血管生成治疗的靶点.
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异氟醚或丙泊酚对罗库溴铵量效关系的影响
目的 比较异氟醚和丙泊酚对罗库溴铵量效关系的影响.方法 选择拟行择期手术全麻病人48例,随机分为丙泊酚组(n=24)和异氟醚组(n=24).异氟醚组麻醉维持吸入1个肺泡气低有效浓度(MAC)的异氟醚,丙泊酚组泵入丙泊酚3～6 mg/(kg·h),利用单次剂量法测定罗库溴铵的半数有效量(ED50)和95%有效量(ED95).结果 丙泊酚组罗库溴铵ED50为152 μg/kg (95%CI 131～175 μg/kg),ED95为314 μg/kg(95%CI 286～373 μg/kg),高于异氟醚组[88 μg/kg(95%CI 72～104 μg/kg)和263 μg/kg (95%CI 228～283 μg/kg)],差异有统计学意义(P＜0.05).结论 成年人罗库溴铵的ED50、ED95值在异氟醚麻醉下比丙泊酚麻醉下明显降低,提示异氟醚能增强罗库溴铵的药效强度.
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孕妇血浆游离DNA的定量分析
目的 探讨孕妇血浆游离DNA在唐氏筛查和非创伤性产前诊断中的价值.方法 从正常女性、孕中期孕妇、唐氏高危孕妇和孕晚期孕妇的血浆中分离游离DNA,并采用实时定量荧光PCR检测3-磷酸甘油醛脱氢酶基因(GAPDH)及男性特有Y性别决定区基因(sex determining region Y, SRY).结果 未孕妇女、孕中期、唐氏高危、孕晚期孕妇GAPDH拷贝数均值分别为(6.40×103±1.94×103) copy/mL、(4.28×103±1.36×103) copy/mL、(3.08×104±1.67×104) copy/mL和(4.33×104±2.32×104) copy/mL;孕中期、唐氏高危、孕晚期孕妇SRY拷贝数均值分别为(174.02±98.56) copy/mL、(1065.01±588.72) copy/mL、(2627.58±1257.94) copy/mL.孕晚期和唐氏高危孕妇血浆游离DNA含量较孕中期孕妇增加(P＜0.001或P＜0.005).结论 孕妇血浆游离DNA的定量分析在唐氏筛查和无创伤性产前性别诊断中有重要的应用价值.
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氧化抗氧化失衡与动脉粥样硬化
目的 探讨氧化抗氧化失衡与动脉粥样硬化的关系.方法 对采用高分辨超声检测技术筛选出的79例颈总动脉斑块形成患者(A组)、52例内膜中层增厚患者(B组)和36例内膜中层厚度正常患者(C组)进行静脉血浆还原型谷胱甘肽(GSH)与氧化型谷胱甘肽(GSSG)、还原型辅酶Ⅱ(NADPH)与氧化型辅酶Ⅱ(NADP+)、氧化型低密度脂蛋白(oxLDL)和丙二醛(MDA)检测.结果 A组与B组相比,B组与C组相比,GSH、GSH/GSSG减低 (P＜0.05) ,GSSG、GSH/GSSG氧化还原电位升高(P＜0.05);A组与C组相比,NADPH、NADH/NADP+减低(P＜0.05),NADPH/NADP+氧化还原电位升高(P＜0.05);A组与B组相比,B组与C组相比,oxLDL、MDA增加(P＜0.05);GSH/GSSG氧化还原电位与oxLDL呈正相关(r=0.817,P＜0.001),随着动脉内膜增厚斑块形成,氧化还原电位逐渐升高,向氧化方向偏移.结论 动脉粥样硬化与氧化还原态失衡向氧化方向偏移相关.
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PPARγ、PTEN、P27kipl在子宫内膜癌中的表达及其相关性研究
目的 探讨PPARγ、PTEN、P27kipl三种蛋白在子宫内膜癌中的表达、意义及三者之间的相关性.方法 采用免疫组化SP法检测60例子宫内膜癌、35例增生性子宫内膜及15例不典型增生子宫内膜的石蜡标本切片中PPARγ、PTEN、P27kipl蛋白的表达.结果 ①子宫内膜癌组织与增生性、正常子宫内膜组织比较PPARγ阳性表达率升高(P＜0.01),PTEN、P27kipl阳性表达率则降低(P＜0.01).②在子宫内膜癌中,PPARγ的表达率在不同组织学分级、FIGO分期间的差异有统计学意义(P＜0.05),在肌层浸润深度、有无淋巴结转移及组织学类型间的差异无统计学意义(P＞0.05);PTEN、P27kipl的表达率在组织学分级、FIGO分期、肌层浸润程度间的差异均有统计学意义(P＜0.01),而在有无淋巴结转移及组织学类型间差异无统计学意义(P＞0.05).③在子宫内膜癌中,PPARγ与PTEN、PPARγ与P27kipl之间无明显相关性;PTEN与P27kipl表达呈正相关(r=0.636, P＜0.01).结论 PPARγ、PTEN、P27kipl与子宫内膜癌的发生和发展有一定关系,它们的表达与常用的预测预后的临床特征有关,因而对它们的检测对肿瘤早期诊断、预后评估有一定价值.
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胆囊癌患者外周血与局部组织细胞免疫状态的变化及意义
目的 探讨胆囊癌及癌旁组织中局部细胞免疫功能与肿瘤的发生发展及病理改变之间的关系.方法 应用流式细胞术分别对38例胆囊癌患者癌瘤局部、癌旁组织及外周血的CD4+、CD8+、NK细胞的含量及T淋巴细胞亚群进行检测.结果 CD4+、CD8+及NK细胞计数在胆囊癌组织中含量高,高于癌旁组织、胆囊癌患者外周血及结石性胆囊炎胆囊组织(P＜0.05),但癌组织的CD4+/CD8+比值低于癌旁组织及胆囊炎组织(P＜0.05);结石性胆囊炎胆囊组织及外周血中CD4+、CD8+、NK细胞计数和CD4+/CD8+比值与胆囊癌旁组织比较差异无统计学意义(P＞0.05),但外周血中上述指标均高于胆囊癌患者外周血(P＜0.05).结论 胆囊癌及癌旁组织粘膜固有层内存在着NK细胞及T淋巴细胞亚群的比例失调和异常分布,胆囊癌组织内虽然有CD4+、CD8+、NK细胞的较高表达,但免疫功能呈低下和抑制状态.
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弱氦-氖激光血管内照射对缺血再灌注大鼠脑组织血管内皮生长因子表达的影响
目的 探讨弱氦-氖激光血管内照射对大鼠脑缺血再灌注后血管内皮生长因子表达的影响.方法 采用线栓法制作大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型,选取Zea-Longa法评分为1～3分的雄性SD大鼠40只, 随机分成实验组和对照组,每组各20只.再灌注后2 h实验组予以弱氦-氖激光血管内照射,照射时间20 min,隔日1次,3次为1疗程;对照组同样予以静脉穿刺,但无激光输出.第6 d疗程结束后,行为评分后处死大鼠,脑组织包埋、切片,HE染色,测定脑梗死体积比,采用免疫组化SP法检测血管内皮生长因子表达变化.结果 治疗后实验组行为评分低于对照组[(1.40±1.05) vs (2.70±1.08), P=0.000];实验组脑梗死体积比低于对照组[(7.67±1.73)% vs (11.36±1.68)%,P=0.000];实验组梗死周边血管内皮生长因子表达较对照组增加[IOD值(8.18±1.29) vs (18.62±1.55),P=0.000].结论 弱氦-氖激光血管内照射能明显上调脑缺血再灌注周边区血管内皮生长因子的表达,减轻大鼠大脑中动脉缺血再灌注脑损伤和神经功能缺损.这可能是弱氦-氖激光血管内照射疗法改善急性缺血性脑卒中预后的作用机制之一.
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MG-63骨肉瘤原位模型的建立
目的 建立裸鼠股骨骨肉瘤原位模型.方法 体内连续传代筛选MG-63细胞系获得高成瘤率的细胞,MG-63细胞悬液或MG-63细胞皮下成瘤瘤组织块接种于裸鼠股骨下端.观察MG-63细胞在股骨骨肉瘤原位模型的成瘤特性,并比较两种成瘤方法的成瘤率,常规影像学检查以及肿瘤组织病理检查.结果 两周内可见局部肿瘤形成.术后4周X线片可见股骨下段溶骨及成骨改变、肿瘤样骨形成.光镜下可见典型的骨肉瘤病理特征,成骨作用明显.细胞悬液法成瘤率70%,组织块法成瘤率100%,两种方法成瘤率的差异有统计学意义(P＜0.05).结论 成功建立了裸鼠股骨下段原位肿瘤移植模型,为骨肉瘤的研究提供了更接近人体内环境的研究基础.
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中压液相层析法纯化人VLDL主要载脂蛋白
目的 建立中压液相层析分离法纯化人VLDL主要载脂蛋白(apo) E、CⅠ、CⅡ和CⅢ的方法.方法 以低温乙醇法制备人血浆白蛋白后的残余组分FⅡ+Ⅳ为原料,经一次性密度梯度超离心得到VLDL.脱脂后的VLDL(apoVLDL)经中压Sephacryl S-200柱层析得到apoE和apoCs粗品.apoE经肝素琼脂糖CL-6B亲和层析进一步纯化,apoCs经DEAE-Sephacel离子交换层析进行分离.结果 apoE经肝素琼脂糖CL-6B亲和层析进一步纯化,可得纯度为93.8%的纯品;apoCs经离子交换层析分离得到纯度为92%以上的apoCⅡ、apoCⅢ.所纯化各载脂蛋白apo E、CⅠ、CⅡ及CⅢ经免疫单扩和SDS-PAGE鉴定为免疫纯及电泳纯.结论 成功建立了一种可大量、快速、高分辨分离提纯载脂蛋白apo E、CⅠ、CⅡ及CⅢ的方法.
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定制型股骨近段假体的骨水泥三维有限元模型研究
目的 建立股骨近段大段骨缺损及定制型股骨近段假体的三维有限元模型,分析不同柄长的股骨近段假体柄植入髓内后对股骨-骨水泥的应力分布的影响.方法 通过CT扫描数据建立股骨近段130 mm骨缺损不同髓内柄长度(140 mm、120 mm、100 mm、80 mm、60 mm)的定制型假体的三维有限元模型.模拟下肢单足行走进行负荷加载,分析股骨-骨水泥的应力分布.结果 骨水泥应力由近端向远端逐渐增加,在假体柄末端附近达到大值.当髓内柄长度为140 mm时,骨水泥层内、外侧大应力值分别为2.5 MPa和5.5 MPa,均小于骨水泥自身强度,可以有效避免因高应力而导致骨水泥的碎裂.结论 股骨近段假体髓内柄要有足够长度,以减少骨水泥所受应力,防止因骨水泥碎裂而出现假体松动.对于股骨近段130 mm的骨质缺损,采用髓内柄长为140 mm骨水泥型股骨近段人工假体重建能够有效减少骨水泥层压力,从而避免因骨水泥发生疲劳碎裂而导致假体松动的危险.
| 年 | 期数 |
| 2019 | 01 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2017 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2011 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2010 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2009 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2008 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2007 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2006 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2005 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2004 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2003 | 01 02 03 04 |
| 2002 | 01 02 03 04 |
| 2001 | 01 02 03 04 |
| 2000 | 01 02 03 04 |
| 1999 | 01 02 03 04 |
