四川大学学报（医学版）杂志
Journal of Sichuan University(Medical Science Edition) 사천대학학보（의학판）
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血管紧张素Ⅱ受体阻断对成年大鼠心肌成纤维细胞ColⅠ和TIMP-1 mRNA水平的影响
目的 探讨血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)2型受体(AT2)在心肌成纤维细胞胶原代谢中的作用,以及AT2受体和AngⅡ1型受体(AT1)作用的差异.方法 差速贴壁分离及培养成年SD大鼠心肌成纤维细胞,将细胞分为4组进行药物干预:AngⅡ组、AngⅡ+ Losartan(AT1受体阻断剂)组、AngⅡ+ PD123319(AT2受体阻断剂)组、AngⅡ+Losartan+PD123319组, 应用半定量RT-PCR检测4组细胞中的Ⅰ型胶原(ColⅠ)、组织蛋白酶抑制因子1(TIMP-1)mRNA水平的表达.结果 以β-actin作为内参照,AT1受体阻断使ColⅠmRNA水平降至原水平的71.8%(P＜0.05 ),AT2受体阻断降至81.5%(P＜0.05 ),共阻断降至50.9%(P＜0.05 );AT1受体阻断使TIMP-1 mRNA水平降至原水平的88.1%(P＜0.05),AT2受体阻断降至75.4%(P＜0.05 ),共阻断后降至44.1%(P＜0.05 ).结论 在成年大鼠心肌成纤维细胞,AT2受体阻断下调ColⅠ和TIMP1 mRNA水平,说明AT2受体参与胶原的合成与降解代谢,有促进心肌纤维化的作用.
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乙肝核酸疫苗pCI/S2S接种小鼠后的免疫应答研究
目的 构建乙肝核酸疫苗pCI/S2S,研究其接种小鼠后,接种局部肌肉特异性抗原蛋白的表达以及所诱生的免疫应答反应.方法 从慢性乙肝患者的混合血清中制备HBV DNA模板,扩增出基因片段S2S,与pCI载体进行连接,得到重组质粒pCI/S2S.将其肌肉注射接种BALB/c小鼠,在不同的时间点检测血清中抗-HBs及抗-preS2;并于第12周时用细胞毒性检测试剂盒(LDH)检测体外细胞毒性T细胞(CTL)活性,同时以免疫组织化学法检测小鼠接种部位HBsAg的表达.结果 小鼠肌肉接种pCI/S2S完成后1周血清抗-HBs、抗-preS2开始阳转,阳转率于6周或8周达高峰,且能诱生特异性CTL应答.此外,免疫组织化学法能在小鼠的接种局部肌细胞中检测出目的抗原蛋白的表达.结论 乙肝核酸疫苗pCI/S2S接种小鼠后,能在小鼠体内诱生特异性的体液免疫和细胞免疫应答.
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重组肝细胞生长因子质粒的构建及其在成骨细胞中的表达
目的 构建人肝细胞生长因子(hHGF)真核表达质粒,探讨重组质粒对体外培养胎兔成骨细胞增殖分化的影响,为转基因治疗骨科疾病提供实验基础.方法 RT-PCR扩增人肝脏中hHGF全长cDNA片段,克隆入pcDNA3.1(+)真核表达载体中,用脂质体法将pcDNA3.1(+)-hHGF质粒转染成骨细胞,通过G418筛选获得阳性克隆,用免疫荧光染色检测hHGF基因在成骨细胞内的表达;MTT法和FCM检测pcDNA3.1(+)-hHGF转染后对细胞增殖和细胞周期的影响;采用RT-PCR和ELISA方法检测hHGF在成骨细胞中的表达.NPP法检测碱性磷酸酶合成情况.结果 成功构建hHGF真核表达质粒,免疫组化和RT-PCR检测显示转染成骨细胞后细胞内hHGF mRNA呈现高水平表达;MTT法和FCM检测显示重组质粒转染后能促进成骨细胞的增殖,S期细胞比例增多;ELISA法检测到hHGF在细胞中有分泌性表达.转染重组质粒的成骨细胞合成碱性磷酸酶能力显著提高.结论 成骨细胞经基因转染后可以表达hHGF,外源性hHGF基因能够刺激成骨细胞增殖、分化及成骨活性.
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异鼠李素及橙皮甙抑制HDL氧化修饰作用的研究
目的 研究异鼠李素及橙皮甙对高密度脂蛋白(HDL)氧化修饰的抑制作用.方法 按一次性密度梯度超速离心法分离人血清HDL,分别加入5.0 μmol/L异鼠李素及橙皮甙温育3 h,然后利用Cu2+介导体外氧化修饰脂蛋白的方法,观察HDL氧化修饰不同时间,其234 nm吸光度(A234)、相对电泳迁移率(REM)、硫代巴比妥酸反应物质(TBARS)及蛋白质羰基的动力学改变.结果 Cu2+介导HDL氧化修饰2、4、6、8、12及24 h后,其A234、REM、TBARS及蛋白质羰基含量均逐步增加;加入5.0 μmol/L 异鼠李素及橙皮甙的实验组,Cu2+介导HDL的氧化修饰分别延迟2～6 h和2～4 h;其A234、REM、TBARS及载脂蛋白羰基含量较对照组降低,异鼠李素实验组分别降低16.3%～46.9%、0.6%～25.2%、9.2%～28.4%及11.6%～45.2%;橙皮甙实验组降低1.5%～30.0%、1.4%～13.3%、6.6%～18.8%及14.4%～62.0%.结论 异鼠李素及橙皮甙可抑制Cu2+诱导的HDL的氧化修饰,且异鼠李素的抗氧化作用比橙皮甙强.
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芬太尼对乳化异氟醚催眠作用的影响
目的 探讨不同剂量芬太尼对乳化异氟醚的催眠半数有效量(ED50)的影响以及芬太尼同乳化异氟醚在大鼠催眠效应的相互作用.方法 雄性健康成年SD大鼠 125 只分为 5 组,以翻正反射作为终点指标,通过尾静脉穿刺给药,采用序贯法测定芬太尼的ED50, 并根据实验结果,用序贯法分别测定合用芬太尼7.2 μg/kg(1/4 ED50)、14.3 μg/kg(1/2 ED50)、21.5 μg/kg(3/4 ED50)以及不用芬太尼时乳化异氟醚的ED50.用Dixon-Mood法计算药物的ED50,用等辐射方法和algebraic分析法分析药物的相互作用.结果 各组间大鼠体质量差异无统计学意义;芬太尼的ED50为(28.7±2.1) μg/kg,合用芬太尼7.2 μg/kg、14.3 μg/kg、21.5 μg/kg和不用芬太尼时乳化异氟醚的ED50分别为(0.525±0.032) mL/kg、(0.108±0.019) mL/kg、(0.075±0.011) mL/kg和(0.670±0.054) mL/kg;随着芬太尼剂量增加,乳化异氟醚ED50逐渐呈非线性下降;等辐射和algebraic分析显示芬太尼-乳化异氟醚能产生协同效应.结论 芬太尼能增强乳化异氟醚的作用;乳化异氟醚同芬太尼在催眠效应上产生协同效应.
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影响子痫前期围产儿结局的多因素分析
目的 探讨影响子痫前期围产儿结局的因素.方法 采用单因素和多因素Logistic回归对448例子痫前期患者的围产儿结局进行分析.结果 448例子痫前期发生围产儿不良结局者共94例(21.0%),其中围产儿死亡41例(9.2%).对孕妇的58项变量行单因素分析显示,影响围产儿结局的因素有:发病孕周、分娩孕周、自觉症状、抽搐、尿蛋白、水肿、收缩压、舒张压、白细胞计数、中性粒细胞计数、24 h尿蛋白定量、血浆白蛋白、乳酸脱氢酶(LDH)、肌酐、产检次数、血压升高孕周和水肿孕周等17项变量(P＜0.05);Logistic逐步回归筛选出的多因素依次为:分娩孕周(OR 0.583, 95%CI:0.367～0.926),自觉症状(OR 9.315,95%CI:1.500～57.833)和尿蛋白(OR 3.394,95%CI:1.226～9.397).结论 加强围产期保健,延长分娩孕周,可以减少子痫前期患者围产儿不良结局的发生.
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正常人肠道乳酸杆菌耐药性及质粒图谱分析
目的 了解正常人肠道乳酸杆菌对临床常用抗生素的耐药水平,研究质粒在乳酸杆菌中的存在频率,分析细菌质粒与耐药谱之间的关系.方法 用微量肉汤稀释法测定正常人肠道乳酸杆菌对抗生素的敏感性;分析细菌的质粒图谱,进行质粒消除实验和稳定性实验.结果 正常人肠道乳酸杆菌对万古霉素的耐受性强,其次是环丙沙星和左氟沙星;对庆大霉素、四环素、头孢呋辛和头孢唑啉表现出不同程度的耐受,对青霉素、氨苄西林、利福平、红霉素和罗红霉素较敏感.所有试验菌株均存在多重耐药情况,且有随宿主年龄增加而增加的趋势.93%的菌株含有质粒.经连续传代,4株菌的质粒丢失,致使菌株对庆大霉素和头孢菌素敏感性增加,与其消除质粒后的药敏结果一致.结论 正常人肠道乳酸杆菌具有较强的耐药性,多重耐药性较严重,且和年龄有一定相关.大多数菌株都含有质粒,其中5.8 kb大小的质粒可能与乳酸杆菌对庆大霉素和头孢菌素的耐受性相关.
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岩白菜素大鼠在体肠吸收动力学的研究
目的 研究岩白菜素在大鼠肠道内的吸收动力学特征.方法 采用大鼠在体灌流模型,应用HPLC测定回流液和血浆中岩白菜素的含量,从吸收部位、药物浓度、pH值三方面对岩白菜素的肠吸收特性进行研究.结果 岩白菜素在0.07～0.21 mg/mL范围内的吸收具有线性动力学特征;在十二指肠、空肠、回肠和结肠的吸收各不相同;在pH5.40～7.80范围内,吸收速率随pH值增大而减小.结论 岩白菜素在大鼠全肠段均有吸收,但吸收较差,其吸收呈一级动力学过程,吸收机制主要为被动扩散.
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脑源性神经营养因子对缺氧胚脑神经元保护作用的信号传递途径初探
目的 研究胚鼠脑皮质神经元遭受缺氧刺激时,脑源性神经营养因子(BDNF)发挥保护作用的信号传递途径.方法 采用免疫荧光技术结合激光扫描共聚焦显微镜观察不同缺氧时间点(3 h和5 h)实验组(分别于缺氧培养前24 h和缺氧培养即刻加入BDNF 100 ng/mL)和对照组(缺氧培养,无BDNF干预)体外培养脑皮质神经元胞内酪氨酸激酶B(TrkB)、磷酸化TrkB和丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)水平的变化并进行半定量分析.结果 与对照组相比,实验组在缺氧后不同时间点神经元胞浆内TrkB及磷酸化TrkB水平均出现上调(P＜0.05),MAPK在胞浆内和核内的表达也增加(P＜0.05),且缺氧培养前24 h加入BDNF者三种蛋白的表达强于缺氧培养即刻加入BDNF者(P＜0.05).结论 BDNF对缺氧神经元的保护作用可能通过诱导TrkB表达上调来实现,以TrkB受体酪氨酸磷酸化起始,经Ras-MAPK途径完成.
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呼吸道病毒基因或抗原在激素敏感型单纯性肾病综合征肾组织和尿液的表达
目的 探讨呼吸道病毒感染与激素敏感型单纯性肾病综合症(SRSNS)发病的关系.方法 采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、桥联酶标(APAAP)法,分别对38例SRSNS患儿(急性期28例,缓解期10例)、18例肾炎性肾病、15例继发性肾病、16例毛细支气管炎和15例正常对照儿童尿液呼吸道病毒基因、抗原进行检测.APAAP法检测2例SRSNS急性期患儿肾组织呼吸道病毒抗原表达.结果 SRSNS急性期组尿液呼吸道病毒基因、抗原检出率均高于其他各组,差异有统计学意义(P＜0.05),其中呼吸道合胞病毒检出率高.病毒检出率在是否应用激素间的差异无统计学意义.病毒基因与抗原检测结果有较好一致性.2例SRSNS急性期患儿肾组织APAAP法分别发现流感及副流感病毒,与尿液RT-PCR、APAAP结果一致.结论 呼吸道病毒可能是微小病变型肾病重要触发因素.
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组织工程膀胱细胞外基质生物相容性的实验研究
目的 制备兔膀胱细胞外基质材料,检测其生物相容性,探讨其作为组织工程泌尿道修复重建支架材料的可行性.方法 联合应用渗透溶液法-酶消化法-去垢剂洗涤法制备兔膀胱细胞外基质,将体外培养的兔膀胱移行上皮细胞与其复合培养,观察细胞在材料表面的黏附、生长、增殖情况;MTT法检测材料浸提液对膀胱移行上皮细胞的细胞毒性;将材料植入兔背部皮下检测其组织相容性.结果 兔膀胱细胞外基质冻干后呈白色半透明薄膜状,扫描电镜观察材料一面呈纤维网状结构,另一面呈平坦致密结构,两面均无细胞残留.膀胱移行上皮细胞能够在材料表面正常黏附、生长、增殖,细胞形态良好.MTT法检测材料细胞毒性分级为0级或1级.皮下植入实验中动物无异常反应,材料能在体内逐渐降解并引导新生组织长入.结论 本研究制备的兔膀胱细胞外基质已完全除去组织中的细胞成份,同时保留了细胞外基质的纤维网状结构,具有良好的细胞相容性和组织相容性,可以作为组织工程泌尿道修复重建的支架材料.
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肿瘤增殖型腺病毒介导的shRNA干扰结肠癌细胞HT-29 Survivin基因的时效性研究
目的 探讨携带针对人Survivin的shRNA的肿瘤增殖型腺病毒Ad-delE1b55KD-shRNA/Survivin-EGFP介导的RNA干扰对结肠癌细胞HT-29中Survivin基因的时效性.方法 用Ad-delE1b55KD-shRNA/Survivin-EGFP转染结肠癌细胞株HT-29(以携带相同shRNA的增殖缺陷型腺病毒和脂质体载体为对照),于转染后1 d、7 d、14 d、28 d分别检测其携带的外源性EGFP基因的表达及被转染HT-29细胞中Survivin mRNA和Survivin蛋白的表达.结果 在转染后第7 d,实验各组的外源性EGFP基因均有较高表达,Survivin mRNA及Survivin蛋白的表达被抑制,Ad-delE1b55KD-shRNA/Survivin-EGFP组的EGFP基因表达明显高于其他两种载体;在转染后第14 d,后二者EGFP基因表达、Survivin mRNA及Survivin蛋白表达的抑制作用显著下降,而Ad-delE1b55KD-shRNA/Survivin-EGFP组的上述作用仍然很强;转染后28 d,后二者EGFP基因表达、Survivin mRNA及Survivin蛋白表达的抑制作用基本消失,而Ad-delE1b55KD-shRNA/Survivin-EGFP组仍然保持很高的EGFP表达率和RNA干扰效率.结论 Ad-delE1b55KD-shRNA/Survivin-EGFP介导RNA干扰能长时间高效沉默结肠癌细胞HT-29中的Survivin基因.
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CREB和NMDA受体在致痫大鼠学习记忆功能改变中的变化及意义
目的 探讨核转录因子环磷腺苷反应元件结合蛋白(CREB)和兴奋性氨基酸NMDA受体亚型NR1在癫痫后学习记忆功能改变中的变化及意义.方法 制备戊四氮点燃大鼠癫痫持续状态(Status epilepticus,SE)和慢性癫痫(chronic epilepsy,CEP)模型,采用交替电刺激Y迷宫试验动态观察大鼠癫痫后学习记忆功能变化.RT-PCR方法检测大鼠海马组织CREB和NR1 mRNA的表达,免疫组化染色观察大鼠海马磷酸化的CREB蛋白水平表达变化.结果 SE大鼠致痫成功后24 h交替电刺激Y迷宫试验错误次数增多(P＜0.05),30 d恢复正常.CEP大鼠24 h和30 d错误次数均有所增加(P＜0.05).同时伴有海马组织NR1 mRNA和CREB mRNA表达的下调(P＜0.05)及磷酸化CREB蛋白水平表达量的下降(P＜0.05).结论 海马组织NMDA受体和CREB的表达变化可能参与了癫痫大鼠学习记忆功能改变的病理生理过程.
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153Sm-柠檬酸-纳米羟基磷灰石生物学性能的初步研究
目的 探索153Sm-柠檬酸(citrate)-纳米羟基磷灰石(nano-HA)的体内、体外生物学性能.方法 采用溶胶-凝胶法合成nano-HA,用电镜和X线衍射鉴定其性能.制备高纯度放射纯度核素153Sm.采用独立变数法,研究153Sm-citrate-nano-HA的佳标记条件和体外稳定性能,并进行新西兰兔显像,比较nano-HA、153Sm-citrate、153Sm-citrate-nano-HA对肝癌SMMC-7721和乳腺癌MCF-7细胞的体外抑制作用,利用MTT法测细胞生存率.结果 nano-HA为针状结晶,径向10～30 nm,轴向70～100 nm.nano-HA的体外稳定性能好,标记率均在95%以上.153Sm-citrate-nano-HA正常新西兰兔显像对比度较好,骨骼系统显示清晰,肾脏显影,血中放射性下降较快.153Sm-citrate-nano-HA、nano-HA、153Sm-citrate对肝癌SMMC-7721和乳腺癌MCF-7细胞的半抑制率浓度分别是1.89 mg/L和0.094 mg/L、3.31 mg/L和0.52 mg/L、4.32 mg/L和0.67 mg/L;153Sm-citrate-nano-HA对肿瘤生长的抑制率明显高于nano-HA和153Sm-citrate.结论 153Sm-citrate-nano-HA骨组织摄取好,对肿瘤细胞有明显抑制作用,有望成为新型的骨肿瘤和骨转移癌的治疗药物.
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布依族和水族人群XRCC1基因单核苷酸多态性研究
目的 分析布依族、水族人群DNA修复基因XRCC1 C26304T、G27466A与G28152A单核苷酸多态性(SNPs)及其等位基因频率与组合分布特征.方法 获取自然人群个体布依族192例、水族197例血白细胞基因组DNA,利用PCR扩增限制性酶切法(PCR-RFLP)检测XRCC1 C26304T、G27466A与G28152A SNPs.结果 XRCC1基因中检测到3个SNPs位点 C26304T、G27466A与G28152A,分别位于第6、9和10外显子中,各基因型分布均符合Hardy-Weinberg平衡;研究发现上述3个SNPs两两组合基因型在两个人群中C26304T和G28152A组合基因型有8种,C26304T和G27466A组合基因型有7种,G28152A和G27466A组合基因型有7种.结论 本研究揭示了布依族、水族人群XRCC1基因3位点的SNPs、基因型及其组合分布特征,为进一步研究该基因SNPs与其生理功能和疾病的关系提供基础资料.
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缺血再灌注损伤致慢性移植肾肾病的发病机理及药物干预的实验研究
目的 探讨缺血再灌注损伤致慢性移植肾肾病(CAN)的机理及药物干预的防治效果和作用机制.方法 利用已建立的大鼠原位异体肾移植硬化加快模型进行原位肾移植.实验分组:A组单用环孢素A(CsA) 10 mg/(kg·d),B、C、D组分别给予小剂量[4 mg/(kg·d)]、大剂量[8 mg/(kg·d)]益生注射液或吗替麦考酚酯[MMF,20 mg/(kg·d)], 联合应用CsA[10 mg/(kg·d)],E组为空白对照.移植术后4、8及12周处死动物,观察移植肾病理变化并测定肾功能.采用免疫组化和实时荧光定量PCR检测各组TGF-β1、Smad2、Smad7蛋白和mRNA表达及其在移植肾的定位情况.结果 大剂量益生组,血浆肌酐水平升高较小剂量组低,CAN病理改变较小剂量组为轻.移植肾标本中,A、B组Smad2、TGF-β1表达上调、Smad7表达下调,尤以A组明显,A组与其它各组相比在各时间点上差异均有统计学意义(P＜0.05);移植肾肾小管上皮细胞、间质细胞及肾小球,Smad2、TGF-β1表达均呈强阳性,Smad7表达呈弱阳性;C、D组Smad2、TGF-β1表达下调,而Smad7表达上调,组间差异无统计学意义.结论 缺血再灌注损伤致CAN机理可能是通过TGF-β1过表达及上调Smad2表达,下调Smad7表达,直接或间接致移植肾实质和血管的纤维化.中药益生注射液及MMF可能通过下调TGF-β1及Smad2表达、上调Smad7表达而发挥其抗纤维化作用.
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健康人肠道大肠埃希菌耐药性与质粒图谱的研究
目的 研究深圳市健康人肠道大肠埃希菌携带的质粒与其耐药性之间的关系.方法 分离健康人肠道大肠埃希菌,K-B法测定细菌对16种抗菌素的耐药性,分析细菌的质粒图谱,对耐药菌株进行质粒分子分型.结果 健康人肠道大肠埃希菌对四环素、萘啶酸、磺胺甲基异恶唑、氨苄西林、复方新诺明和链霉素的耐药率分别为63.33%、49.33%、40.67%、38.67%、35.33%、35.33%,全部菌株对头孢美唑和氨曲南敏感.122株菌(81.33%)耐一种以上抗菌素,88株菌(58.67%)耐2种以上抗菌素,44株菌(29.33%)耐5种以上抗菌素,2株菌耐10种抗菌素.结论 深圳市健康人肠道大肠埃希菌耐药性较严重,其耐药性与所携带质粒的数量和大小并无直接联系.
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中国汉族与泰国人群IL-2基因遗传多态性的研究
目的 研究白细胞介素-2基因(IL-2)启动子区-330T/G和第一外显子+114G/T单核苷酸多态性(SNP)在中国成都地区汉族及泰国曼谷地区正常人群的分布.方法 采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法检测130例成都地区汉族人和105例曼谷地区泰国人IL-2基因-330、+114位点的多态性,并结合文献进行不同种族间的分析比较.结果 在中国成都汉族人群中IL-2基因-330位点TT、TG和GG基因型频率分别为36.9%、53.9%和9.2%,在泰国人群中分别为40.9%、39.1%和20.0%;中国成都汉族人群IL-2基因+114位点GG、GT和TT基因型频率分别为20.8%、55.8%和23.3%,泰国人群分别为50.5%、39.0%和10.5%;两位点基因型分布频率在两群体中的差异具有统计学意义(P均＜0.05).与泰国、日本、西班牙等人群相比较,成都地区汉族正常人群除IL-2基因+114位点多态性与日本人群相近外(P＞0.05),其-330、+114位点的基因型频率与其他国家人群的差异具有统计学意义(P均＜0.05).结论 IL-2基因-330、+114位点的SNP在不同种族间的分布存在明显的差异.这种差异可能是导致一些疾病在不同种族、不同地区间的发生、转归和预后不同的遗传因素之一.
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原发性血小板减少性紫癜患者血小板抗体的表达及其对血小板数量和功能的影响
目的 检测原发性血小板减少性紫癜(ITP)患者血小板抗体,并探讨其对血小板数量及功能的影响.方法 采用单克隆抗体俘获血小板抗原技术(MAIPA)检测ITP患者、非原发性血小板减少患者及健康人血小板抗体,并在健康人富血小板血浆中加入ITP患者血清,观察其对健康人血小板聚集功能的影响.结果 MAIPA法对ITP患者主要血小板自身抗体的检出率为65.4%,ITP患者中抗血小板抗体阳性者血小板数量明显低于抗体阴性者,且血小板数量与抗体水平呈负相关,其中GPⅡb/Ⅲa抗体阳性患者的血小板数量与GPⅡb/Ⅲa抗体水平呈负相关(r=-0.724);GPⅠb/Ⅸ抗体阳性患者的血小板数量与GPⅠb/Ⅸ抗体水平呈负相关(r=-0.571),26例患者中10例血清抑制了健康人血小板聚集功能,其中9例为抗血小板抗体阳性患者,仅1例为抗体阴性患者.结论 ITP患者血小板抗体不仅影响血小板数量,还对血小板功能有影响.
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缺氧缺糖损伤对未成熟大鼠少突胶质前体细胞表达Nogo-A的影响
目的 观察Nogo-A在新生大鼠少突胶质前体细胞系(OLPs)缺氧缺糖(OGD)损伤后的表达变化,探讨其在OLPs损伤后的作用.方法 采用改良振荡分离纯化法体外培养OLPs,特异性抗体A2B5、O4和O1作细胞鉴定;用含连二亚硫酸钠的无糖培养基制作OLPs OGD模型,MTT法检测各组细胞存活率;用免疫荧光法和免疫印迹法观察Nogo-A在细胞OGD后的变化.结果 Nogo-A在OLPs OGD 10 min表达较正常对照组增强,30 min继续增高,60 min高,差异有统计学意义(P＜0.05);MTT结果显示,OGD 30 min及60 min细胞存活率较对照组降低(P＜0.05).结论 OLPs在OGD后Nogo-A表达明显增强,细胞存活率降低,提示Nogo-A可能参与OGD后OLPs的再生抑制过程.
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趋化因子受体CCR2在新生鼠实验性缺氧缺血损伤脑组织中的表达
目的 观察新生鼠实验性缺氧缺血性脑损伤(HIBD)后脑组织趋化因子受体2(CCR2)mRNA与蛋白质水平的表达变化,探讨其在HIBD中的作用.方法 采用结扎7 d龄SD大鼠右侧颈总动脉并暴露于8%氧气环境2.5 h制作HIBD模型, 用TaqMan实时荧光定量逆转录聚合酶链反应和SDS-PAGE免疫印迹方法,动态定量监测大脑皮质、海马区脑组织中CCR2 mRNA与蛋白质表达水平在HIBD后不同时间点的变化, 假手术组为对照组.结果 HIBD后24 h右侧脑组织CCR2 mRNA水平高,72 h仍高于对照组(P＜0.05),7 d恢复至对照组水平(P＞0.05);CCR2蛋白表达量在HIBG后24 h高,高于对照组(P＜0.05), 3 d仍保持高水平表达(P＜0.05),7 d明显下降.结论 HIBD后CCR2 mRNA及蛋白质表达水平显著升高,其动态变化过程与脑损伤发展过程一致,提示CCR2参与了新生动物HIBD的发生.
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阿霉素肾病模型鼠肾组织木糖基转移酶和乙酰肝素酶基因的表达
目的 研究肾病模型鼠肾组织木糖基转移酶(xylosyltransferase,XT-Ⅰ)和乙酰肝素酶(heparanase,Hpa)基因表达水平并观察其与尿蛋白量的关系.方法 将大鼠随机分为正常对照组、肾病模型7 d组、14 d组、21 d组,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)对4组大鼠肾组织中XT-Ⅰ、Hpa基因表达进行半定量研究,并观察其与尿蛋白量的关系.结果 肾病模型7 d组、14 d组、21 d组与正常对照组之间比较, XT-Ⅰ表达量增加(P＜0.05), 肾组织XT-Ⅰ表达水平增高与尿蛋白的增加呈正相关关系(r=0.760, P＜0.05);肾病模型7 d组、14 d组、21 d组与正常对照组之间比较,HPa表达量增加(P＜0.05), 各组肾组织HPa表达水平增高与尿蛋白的增加呈正相关关系(r=0.757, P＜0.05).结论 Hpa在大鼠肾病模型蛋白尿的产生中起重要作用,同时, XT-Ⅰ的增加可能导致硫酸乙酰肝素(HS)的合成增加.
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多药耐药基因RNAi重组腺病毒构建
目的 构建抑制多药耐药基因(MDR1)表达的RNAi腺病毒载体,探讨基因治疗改善癫痫多重耐药现象的可行性.方法 根据大鼠MDR1基因序列,选择3个19nt的靶序列,设计并合成3对66nt含编码短发夹RNA(shRNA)序列的寡核苷酸,构建pSIREN-shuttle-MDR1重组质粒,测序分析正确后转染通过马桑内酯诱导的已表达多重耐药蛋白的大鼠星形胶质细胞,通过RT-PCR法测定多药耐药蛋白(P-gp)表达量,判断所设计的3条DNA序列对于P-gp表达的抑制作用.选择抑制效率高的1个重组质粒,将其中的MDR1 shRNA表达结构酶切后插入腺病毒载体pAdeno-X,构建的pAdeno-MDR1经Pac1酶切后与脂质体共转染HEK293细胞进行病毒包装扩增纯化,所得病毒液作酶切电泳及测序分析正确后再转染大鼠星形胶质细胞模型.RT-PCR及免疫组织化学法分别测转染前后星形胶质细胞模型的MDR1及P-gp表达量.结果 重组质粒及pAdeno-MDR1病毒经PCR、酶切、测序分析证实构建正确.病毒滴度为6×109 pfu/mL.重组腺病毒转染星形胶质细胞后MDR1及P-gp表达量减少,干扰效率接近100%.结论 成功构建针对大鼠MDR1基因的RNAi腺病毒载体,并通过体外实验证实其对大鼠MDR1基因的高效抑制作用.为进一步探索难治性癫痫的多药耐药机制和基因治疗奠定了基础.
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TNF-α基因启动子-308位点多态性与中国成都地区汉族早产的相关性研究
目的 探讨肿瘤坏死因子α基因(TNF-α)启动子-308G/A多态性与中国成都地区汉族早产的关系.方法 收集96例孕产妇(其中46例早产患者和50例正常足月分娩者)的外周静脉血,采用Chelex-100法提取DNA,PCR限制性内切酶片段长度多态性(PCR-RFLP)法检测TNF-α基因启动子-308位点基因多态性.结果 ①TNF-α基因启动子-308位点基因型TNF1/1(GG)、TNF1/2+TNF2/2(GA+AA)频率在早产组和正常对照组分别为60.9%、32.6%+6.5%和82.0%、12.0%+6.0%;等位基因TNF1(G)、TNF2(A)频率在早产组和正常对照组分别为77.2%、22.8%和88.0%、12.0%;两组基因型分布频率和等位基因出现频率比较差异均有统计学意义(P＜0.05).②携带基因型TNF1/2(GA)和TNF2/2(AA)的个体患早产的危险是携带TNF1/1(GG)基因型个体的2.929倍(95%CI 1.152～7.447),携带等位基因TNF2(A)个体早产的发生率是携带TNF1(G)个体的2.169倍(95%CI 0.999～4.709).结论 TNF-α基因启动子-308位点多态性与中国成都地区汉族早产的易感性相关,等位基因TNF2(A)可能是早产的危险因素之一.
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国产阿卡波糖(胶囊剂)降糖疗效的多中心随机对照临床试验
目的 评价国产阿卡波糖(胶囊剂)对2 型糖尿病患者的降糖疗效和安全性.方法 以德国拜耳公司生产的阿卡波糖片剂(拜唐苹)为对照, 进行多中心随机对照临床观察.将179例2型糖尿病患者随机分为试验组(国产阿卡波糖胶囊剂,A组)89例、对照组(进口阿卡波糖片剂,拜唐苹,B组)90例.每例受试者在治疗前均有2～4周的平衡期,疗程8周.分别于受试后的4 周和8 周随访.结果 完成试验165例(A组81例,B组84 例),脱落14例(A组8例,B组6例,均因患者不合作).治疗4周时, A、B组的空腹血糖下降值分别为(1.81±2.75) mmol/L和(2.08±2.65) mmol/L,餐后血糖下降值分别为(5.43±4.34) mmol/L和(5.09±4.59) mmol/L.第8周时A、B两组的空腹血糖分别下降(2.35±2.64) mmol/L和(2.62±2.65) mmol/L,餐后血糖分别下降(5.93±4.61) mmol/L和5.98 mmol/L;HbA1c值分别下降1.07%和1.20%,下降百分率分别为11.39%和11.50%.在4周和8周时两组间血糖及HbA1c下降值和下降百分率接近,差异无统计学意义.不良反应主要为消化道症状,常见的不良反应为肠胀气、肛门排气增加,其发生率在A、B两组分别为32.53%和48.81%.结论 国产阿卡波糖(胶囊剂)的疗效与拜唐苹相近, 值得临床推广应用.
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番茄红素对乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-231增殖的影响
目的 观察番茄红素对体外培养的雌激素受体阳性(ER+)乳腺癌细胞MCF-7和雌激素受体阴性(ER-)乳腺癌细胞MDA-MB-231的存活率、细胞周期及凋亡的影响.方法 采用MTT法和H3-TdR 掺入法观察番茄红素对两种细胞增殖的影响;流式细胞仪观察同步化的细胞经番茄红素作用后细胞周期及凋亡的变化.结果 番茄红素抑制MCF-7、MDA-MB-231细胞的增殖和DNA合成,具有剂量效应关系,随着时间延长,抑制作用增强,大抑制率分别为52.6%、61.9%.流式细胞仪结果显示,番茄红素作用24 h后,MCF-7、MDA-MB-231细胞周期各相发生变化,G0/G1期细胞增多,而S期和G2/M期细胞减少,同时可诱发MDA-MB-231细胞凋亡.结论 番茄红素通过阻滞MCF-7细胞于G1期而抑制该细胞的增殖,而对MDA-MB-231细胞增殖的抑制除可通过阻滞细胞周期进程外,还与诱导凋亡有关.
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垂体降调节后延迟卵巢启动时间对体外受精-胚胎移植结局的影响
目的 探讨体外受精-胚胎移植(IVF-ET)中应用半量长效促性腺激素释放激素激动剂(GnRHa)降调节后,延迟超促排卵(COH)启动时间对实验室和临床结局等的影响.方法 将IVF中207个周期分为对照、常规和延迟组:对照组98周期于黄体中期予短效GnRHa 0.1 mg/d,月经第3 d减半,常规组63周期和延迟组46周期于黄体中期予长效GnRHa 1.87 mg;对照组和常规组于月经第3 d加用促性腺激素(Gn),延迟组于第7 d加用Gn,观察在IVF-ET中临床和实验室的结局是否有差异.结果 常规组的取消周期数多(P＜0.01).COH启动日,延迟组和对照组E2、LH水平高于常规组(P均＜0.01).HCG注射日,对照组的E2水平高;延迟组和对照组中LH水平高于常规组(P均＜0.01),刺激天数和Gn用量少于常规组(P均＜0.005),获卵数、受精率、可移植胚胎数、临床妊娠率、胚胎种植率和MⅡ期卵子高于常规组(P均＜0.05);延迟组中重度卵巢过度刺激综合征(OHSS)的发生少于常规组.结论 延迟COH启动时间可减少卵巢刺激时间、Gn用量,增加获卵数、成熟卵子数、可移植胚胎数和胚胎种植率,提高IVF的妊娠率.
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16S rDNA测序鉴定β溶血性G群链球菌
目的 对一起群聚性儿童肾小球肾炎暴发事件中分离到的26株β溶血性G群链球菌进行16S rDNA测序鉴定,探讨该方法在病原学鉴定方面的意义.方法 分别采用API20 Strep生化鉴定系统、部分和全序列测定16S rDNA鉴定26株β溶血性G群链球菌;使用Mega V3.1软件,采用Neighbour-joining 方法和boot-strap test对部分菌株的全序列进行树状图分析.结果 API20 Strep生化鉴定率低,未能鉴定出目的菌;采用16S rDNA测序,结果均为咽峡炎链球菌(S.anginosus),鉴定率大于97%.其中4株G群的全序列树状图分析显示,G群链球菌均与咽峡炎链球菌聚类在同一簇.结论 16S rDNA序列鉴定能提供详细明确的核苷酸信息,能区分G群链球菌不同的种,显示其在菌株鉴定方面的独特优势.
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脾窦岸细胞血管瘤6例报道
目的 探讨脾窦岸细胞血管瘤的临床诊断与治疗方法.方法 对6例经病理和临床证实的脾窦岸细胞血管瘤患者的临床资料进行回顾性分析.结果 全组6例患者中4例就诊前无明显临床症状,2例有左季肋区不适,3例伴有明显血小板降低,2例合并肝血管瘤,2例合并肝囊肿.彩色多普勒示脾大,脾内可见多个不规则稍强回声区,CT示脾内多个低密度区.6例患者均接受脾切除手术,术后4例(其中包括2例术前伴血小板降低者)患者血小板显著增高,经给予抗凝治疗,痊愈出院.结论 临床上对无症状脾大的患者,影像学上发现脾增大,脾内发现不均质低密度灶,应怀疑脾窦岸细胞血管瘤.脾切除术是有效的治疗方法.
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经角膜缘隧道切口硅油取出的临床观察
目的 探讨对部分玻璃体切除联合硅油填充眼经角膜缘隧道切口取出眼内硅油的临床应用及优缺点.方法 硅油填充眼42眼(无晶体34眼、伴白内障8眼).灌注针头自颞下方角膜缘隧道切口插入前房,行灌注;连接了负压吸引管的20G静脉穿刺套管经12点位角膜缘隧道切口插入前房,抽吸硅油.白内障眼先行晶体超声乳化吸出及后囊切开,无晶体眼后囊完整者亦先行后囊切开.伴白内障者有3眼行一期人工晶体植入,无晶体者有6眼行二期人工晶体植入.记录取硅油时间,观察术后眼部炎症反应、角膜水肿、视力、眼压等,出院后随访4～12周[平均(7.45±2.67)周].结果 42眼均一次性取净硅油,取出时间15～45 min[平均(27.67±10.41) min],术后眼压5.8～18.2 mmHg [平均(14.61±3.47) mmHg,1 mmHg=0.133 kPa],视力较术前稳定或提高,术后并发症主要为局部暂时性的轻微炎症反应:结膜充血(90.48%)、角膜轻度水肿(90.48%)、房水混浊(19.05%),均2～4 d消退;一过性低眼压有11.9%,5～7 d恢复正常;视网膜再脱离者有7.14%.结论 经角膜缘隧道切口的硅油取出术,简便省时、安全有效且并发症少,适用于无晶状体及需同时摘除白内障的硅油填充眼.
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超声诊断性别畸形的临床价值
目的 探讨超声诊断两性畸形的临床价值,以提高对两性畸形的认识及其超声诊断水平.方法 回顾性分析64例两性畸形的临床及超声资料.结果 64例中,真两性畸形为15例(23.4%),男性假两性畸形19例(29.7%),女性假两性畸形30例(46.9%).其超声诊断结果如下:真两性畸形12例(符合率80.0%),男性假两性畸形17例(符合率89.5%),女性假两性畸形24例(符合率80.0%).结论 超声可探查患者是否存在性腺、子宫、前列腺及生殖管道等组织器官,并了解其位置、形态结构等情况,为患者的性别选择提供客观的影像学依据,对两性畸形的影像学诊断有着重要的临床价值.
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胰肾联合移植治疗老年2型糖尿病合并终末期肾病
四川大学华西医院于2007年3月对一位65岁高龄的2型糖尿病患者成功施行了胰肾联合移植手术.患者为男性,患2型糖尿病史15年,合并肾功能衰竭5年,并出现糖尿病眼底病变、周围神经损害等症状.手术将供肾移植于左侧髂窝,供胰移植于右侧髂窝,胰腺外分泌引流采用经肠道、内分泌回流采用经体循环途径的术式.术后第1 d C-肽即达正常水平,第4 d血肌酐恢复正常,第11 d血尿素氮恢复正常;血糖逐渐趋于稳定,第16 d完全停用胰岛素.术后3周OGTT结果显示移植胰腺功能正常.无任何并发症.术后随访6月余,血糖稳定,完全停用胰岛素,肾功能正常,视力也有一定程度的恢复.
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阿托伐他汀钙预防大鼠肺缺血再灌注损伤的实验研究
目的 探讨阿托伐他汀钙对肺缺血再灌注损伤的保护作用及其作用机制.方法 采用在体大鼠单肺原位缺血再灌注模型.30只Wistar大鼠随机分成假手术组(SO)、缺血再灌注组(IR)、阿托伐他汀钙处理组(AT),每组10只.各组进行肺湿干重比(W/D)、肺通透性指数(LPI)、脂质过氧化合物[丙二醛(MDA)]、超氧化物歧化酶(SOD)活性、髓过氧化物酶(MPO)活性测定,并进行肺组织光镜评价.采用免疫组织化学方法检测诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)、肺表面活性物质相关蛋白A(SPA)表达的变化.结果 AT组较IR组LPI[(0.023±0.003) vs (0.030±0.004)]、MDA[(17.685±1.537) nmol/mL vs (37.364±3.166) nmol/mL]、MPO[(0.052±0.002) U/mL vs (0.080±0.004) U/mL],W/D[(4.650±0.114) vs (4.769±0.106)]降低(P＜0.05),而SOD较IR组[(34.726±0.943) U/mL vs (19.728±0.817) U/mL]升高(P＜0.01).AT组较IR组肺SPA表达[(1996.584±260.081) vs (1119.609±348.256)]、eNOS[(181.933±65.715) vs (69.228±16.759)]升高(P＜0.01),而iNOS表达较IR组[(82.294±41.150) vs (303.739±95.383)]降低(P＜0.01).结论 阿托伐他汀钙有保护肺缺血再灌注损伤的作用.其可能的机制为维持肺表面活性物质和内皮NO活性,减少自由基的产生及抗炎作用.
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重组人红细胞生成素在胸外科围术期应用的前瞻性研究
目的 观察重组人红细胞生成素(rHuEPO)在普胸外科围术期对红细胞的动员效应.方法 选择普胸手术患者80例,随机分为两组.实验组40例,从手术前4 d至术后6 d,皮下注射rHuEPO 10000 IU/次,隔日1次,共6次;同时口服补充硫酸亚铁300 mg,tid.对照组40例,仅给予铁剂,其他同实验组.术前4 d(用药前)、1 d、术后1 d、4 d、8 d测血红蛋白(Hb)、红细胞压积(Hct)、网织红细胞(Ret)和红细胞(Rbc).术前4 d(用药前)及术后第8 d测丙氨酸氨基转移酶 (ALT)、总胆红素(TB)、尿素氮(BUN).结果 实验组Hb、Hct、Ret和Rbc计数均升高,术后8 d分别为(124.12±7.27) g/L、(36.32±4.26)%、(28.14±7.24)%、(3.99±0.56)×1012/L,对照组为(117.67±10.76) g/L、(33.92±4.95)%、(23.76±10.08)%、(3.63±0.66)×1012/L,两组比较差异均有统计学意义(P＜0.05).而ALT、TB和BUN水平在用药前后则无明显变化.结论 在胸外科围术期应用rHuEPO作为辅助治疗能有效地刺激动员红细胞.
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低温体外循环对学龄儿童罗库溴铵药效学的影响
目的 观察低温体外循环对学龄儿童罗库溴铵药效学的影响.方法 6～12岁先天性心脏病患儿46例,全麻诱导后,静脉给罗库溴铵600 μg/kg行气管插管.体外循环(CPB)前中后三阶段,肌颤搐反应强度(T1)=25%时,静注罗库溴铵200 μg/kg.监测CPB前中后期罗库溴铵的起效时间、无反应时间、T1=10%、T1=25%、T1=75%时的恢复时间(T110%、T125%、T175%)及恢复指数(T125%到T175%之间的时间)等指标.结果 低温CPB中罗库溴铵的起效时间、无反应时间、T110%及T125%的恢复时间分别为较CPB前延长87%、310%、217%、186%,各组数据比较差异均有统计学意义(P＜0.05); CPB后的以上指标及T175%、恢复指数仍未恢复至CPB前水平,除起效时间和恢复指数外,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 小儿低温CPB中,罗库溴铵肌松时效的延长更为明显,CPB后仍不能恢复至CPB前水平,需进行常规肌松监测.
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纳升超高效液相色谱-飞行时间质谱检测斑马鱼胚胎中小分子多肽的初步研究
目的 探讨纳升超高效液相色谱-飞行时间质谱(nano-UPLC-TOF-MS)检测斑马鱼胚胎中小分子多肽的方法.方法 收集受精后发育24 h的斑马鱼胚胎,去除外层胶膜,采用机械力破碎法去除斑马鱼早期胚胎中的卵黄,并用显微镜和聚丙烯酰胺凝胶电泳检测去除效果,然后用小分子肽提取液获得肽液样品后,用nano-UPLC-TOF-MS检测小分子肽相对分子质量.结果 经处理的胚胎卵黄几乎完全被去除,nano-UPLC-TOF-MS结果显示在22～24.5 min处有一明显的样品峰,单质量/电荷比(m/z)显示,绝大部分肽段峰位于800～1400 m/z范围内.结论 Nano-OPLC-MS是检测小分子多肽的有效方法,早期斑马鱼胚胎中存在着小分子多肽,其相对分子质量集中在800～1400范围内.
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柱前紫外衍生-高效液相色谱法测定全氟辛酸
目的 建立污水和尿液中全氟辛酸(PFOA)的柱前紫外衍生-高效液相色谱测定方法.方法 样品中的PFOA与四丁基氢氧化铵形成的离子缔合物被甲基叔丁基醚萃取后,与ω-溴苯乙酮在乙腈中衍生成具有紫外吸收的物质,高效液相色谱-紫外可见检测器检测.结果 方法检出限可达7.0 μg/L;相对标准偏差(RSD) ＜10%;样品的回收率在85.3%～116%之间.结论 本法适用于测定水样及尿液中的全氟辛酸.
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高效液相色谱法同时测定枸杞中单糖和低聚糖的含量
目的 建立同时测定枸杞中鼠李糖、果糖、葡萄糖三种单糖和蔗糖、麦芽糖两种低聚糖含量的高效液相色谱-示差折光检测方法.方法 枸杞中的单糖和低聚糖用蒸馏水提取后,经Zorbax Carbohydrate色谱柱分离,采用示差折光检测器检测.结果 本方法检测枸杞中的鼠李糖、果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖在10.0～400.0 mg/L范围内,质量浓度与色谱峰面积呈良好的线性关系,相关系数r=0.9976～0.9998.方法的精密度RSD分别为2.15%、1.49%、1.09%、3.82%、4.65%,加标回收率为92.27%～101.93%,方法的检出限(信噪比S/N=3)分别为4 mg/kg、5 mg/kg、4 mg/kg、6 mg/kg、5 mg/kg.结论 高效液相色谱-示差折光检测方法简便、快速,适用于枸杞中鼠李糖、果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖含量的测定.
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体外人颈动脉血管分叉模型的建立
目的 建立一个更加贴近实际情况的具有广泛适用性的体外颈动脉血管分叉模型.方法 利用超声多普勒技术在体测量颈动脉各部分的直径,借鉴音叉样颈动脉血管分叉模型的几何构造,对其从几何尺寸进行改良建立体外模型并利用粒子成像测速技术对模型内流场进行定量检测.结果 结果显示模型内流场特点和分布与体内具有很好的相似性.结论 我们建立的体外颈动脉血管分叉模型贴近实际,具有很好的代表性和实用性,可以为后续研究提供可靠的实验平台.
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HPLC法测定甲基苯丙胺与苯丙胺
目的 建立甲基苯丙胺(methamphetamine,MA)和苯丙胺(amphetamine,AMP)的反相高效液相色谱测定方法.方法 采用C18柱,以甲醇-磷酸盐缓冲液为流动相,流速1.0 mL/min,检测波长为215 nm,同时收集190～360 nm的紫外光谱图,并以此与保留时间作为定性依据.在定性的基础上,建立定量检测方法,并对方法进行评价研究.结果 所建方法能良好分离MA和AMP,结合判断依据能准确定性;MA在1.4～270 μg/mL浓度范围内线性关系良好,R2=1,日内标准偏差(RSD)与日间RSD均＜2.4%,检出限为0.73 μg/mL,平均加样回收率为102.5%;AMP在0.9～580 μg/mL浓度范围内线性关系良好,R2=0.9999,日内RSD与日间RSD均＜2.3%,检出限为0.52 μg/mL,平均加样回收率为101.7%.结论 此方法简便、快速、准确,适用于MA与AMP的检测.
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18岁少女子宫内膜癌1例报告
患者,女,18岁,未婚,藏族,因月经淋漓不净1月,B超发现盆腔包块5 d入院.月经史:17 岁(5～6 d)/30 d.入院查体:T、P、R、BP正常,全身浅表淋巴结未扪及肿大,心肺及其它检查未见异常, 肛诊:盆腔可扪及一4月孕大包块,边界清楚,张力大,质地较硬,无压痛,不活动.
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脐血干细胞移植治疗重型β地中海贫血1例报告
患儿,男,3岁9个月,体质量14 kg.3年前因面色苍白、脾肿大入我院,查Hb 50 g/L,HbF 75%,诊断为重型β地中海贫血,基因检查为β地贫基因纯合子(基因型为CD41-42/IVS-II654),其母为CD41-42/N 杂合子,其父为IVS-II654/N杂合子.
| 年 | 期数 |
| 2019 | 01 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2017 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2011 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2010 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2009 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2008 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2007 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2006 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2005 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2004 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2003 | 01 02 03 04 |
| 2002 | 01 02 03 04 |
| 2001 | 01 02 03 04 |
| 2000 | 01 02 03 04 |
| 1999 | 01 02 03 04 |
