四川大学学报（医学版）杂志
Journal of Sichuan University(Medical Science Edition) 사천대학학보（의학판）
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hNET基因重组腺病毒载体构建和体外表达
目的 以复制缺陷的腺病毒为载体,用细菌内同源重组法构建含有人的去甲肾上腺素转运子(human neurotransmitter transporter,hNET)基因的腺病毒载体.方法 利用限制性内切酶Kpn I+Xba I从pCMV5质粒中切下目的 基因hNET,亚克隆至经同样酶切的腺病毒穿梭质粒pAdtrack-CMV,形成重组穿梭质粒pAdtrack-CMV-hNET,Pine I酶切线性化后,与pAdeasy-1在大肠杆菌BJ5183中进行同源重组,获得含目的 基因的重组体质粒Ad-hNET,Pac I酶切后用脂质体Lipofectamine2000转染HEK293细胞,包装成重组体腺病毒.采用PCR技术和Western Blotting对重组体腺病毒进行鉴定,利用穿梭质粒pAdTrack-CMV中带有绿色荧光蛋白报告基因检测表达,经过扩增和纯化,测定病毒滴度.结果 测序结果证明hNET序列的正确,PCR、Pac I酶切电泳和Western Blotting证实腺病毒重组质粒Ad-hNET构建成功.扩增纯化后测定重组病毒Ad-hNET的滴度为1.2×1010pfu/mL.结论 成功构建了能表达hNET基因的重组腺病毒载体,为肿瘤的靶向治疗提供前期的研究工作.
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中国汉族青年低脂高糖膳食6天后的血清高密度脂蛋白、胆固醇水平
目的 探讨低脂高糖膳食对中国汉族青年血脂及载脂蛋白的影响.方法 我室招募健康在校大学生自愿者56名((22.89±1.80)岁],于7 d平衡膳食后给予低脂高糖膳食6 d,分别在第1 d、8 d、14 d清晨收集受试者人类学指标并抽取空腹静脉血,测定血清甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、血糖(GLU)、胰岛素(Insulin)、载脂蛋白A-Ⅰ(Apo A-Ⅰ)、载脂蛋白B-100(Apo B-100)浓度.结果经过6 d低脂高糖膳食以后,健康男性青年血清HDL-C升高,而体质量(Weight)、体重指数(BMI)、TC及LDL-C降低;健康女性青年血清TC、胰岛素升高而TC及LDL-C降低.根据BMl分别将男女受试者分为高、中、低BMI 3组分析发现,尽管某些变化不具有显著性,高、中、低BMI 3组都出现TC及LDL-C降低;男性低BMI和高BMI组出现血清HDL-C及Ape A-Ⅰ显著升高,其它各组膳食前后变化差异无统计学意义.血清TG升高只在女性低BMI和中BMI组中出现.结论不同性别、BMI的健康青年低脂高糖膳食后的血脂及载脂蛋白改变不相同,但均没有发现HDL-C显著降低.
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Adiponectin真核表达质粒的构建与表达研究
目的 构建重组鼠adiponectin真核表达质粒.为进一步研究adiponectin的功能提供实验基础.方法 提取鼠脂肪组织总RNA,运用RT-PCR方法扩增鼠adiponectin cDNA完全编码区,将扩增产物连接至pCDNA3.1(+)载体,对重组质粒进行测序验证,并检测其体外表达和对小鼠乳腺癌细胞4T1的增殖抑制作用.结果 重组真核表达质粒经PCR扩增后获得-744 bp片段,并经测序证实,Western-blot检测到其体外表达.在体外的细胞学实验中,将重组质粒转染入小鼠乳腺癌细胞4T1 48 h后,与对照组相比,可以观察到明显的细胞形态学改变,细胞体积变小皱缩,4T1细胞生长明显抑制.流式细胞术检测到该组细胞中凋亡细胞所占比例明显高于对照组.结论 成功构建了鼠重组adiponectin真核表达质粒,该质粒对小鼠乳腺癌细胞4T1的增殖有明显的抑制作用.
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脑红蛋白在人体组织细胞的定位分布及意义
目的 探讨脑红蛋白(NGB)在人体组织细胞的定位分布及其意义.方法 用免疫组织化学SP法检测NGB在人体不同组织细胞的分布和定位.结果 NGB主要分布在人体中枢神经系统和周围神经系统的神经细胞内,在某些内分泌组织和生殖系统亦有分布.NGB免疫反应阳性物质主要定位于细胞质中.结论 NGB在人体神经组织、内分泌组织和生殖系统的表达提示NGB对这些组织的氧利用及功能活动有重要作用.
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人乳腺癌细胞系MCF-7中不同亚群细胞的体内外克隆和成瘤能力分析
目的 了解在人乳腺癌细胞系MCF-7中是否存在乳腺癌干细胞.方法 采用流式细胞技术对MCF-7细胞进行分选,检测MCF-7中不同亚群细胞的体外克隆形成能力和体内成瘤能力.结果 MCF-7中有部分细胞具有体外克隆形成能力和体内成瘤能力,而且和CD44+CD24+细胞相比,CD44+CD24-细胞中成瘤细胞的含量更高.结论 MCF-7中存在乳腺癌干细胞,并主要集中于CD44+CD24-细胞中,CD44+CD24+细胞也可能是乳腺癌祖细胞.
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柴芩承气汤对急性胰腺炎大鼠腺泡细胞外分泌功能的影响
目的 研究柴芩承气汤(CQCQ-D)对急性胰腺炎(AP)大鼠胰腺腺泡细胞外分泌功能和腺泡细胞内钙离子浓度([Ca2+])变化的影响.方法 SD大鼠灌喂CQCQ-D以制备柴芩承气汤含药血清(CQCQ-S);SD大鼠分为AP组和假手术组,分离胰腺腺泡细胞并与cQCQ-S共同孵育,观测腺泡细胞淀粉酶分泌水平和[Ca2+]I变化.结果 AP大鼠腺泡细胞淀粉酶分泌水平较假手术组降低(P<0.01),CQCQ-S使AP大鼠腺泡细胞淀粉酶分泌水平进一步降低(P<0.05);[Ca2+]I随AP病程延长而升高(P<0.05),CQCQ-S可抑制AP大鼠腺泡细胞内[Ca2+]t升高(P<0.05).结论 CQCQ-D对AP大鼠的胰腺腺泡细胞的外分泌功能和腺泡细胞内钙超载有抑制作用.
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bFGF和IGF-Ⅰ在生长期山羊颅骨缝牵张成骨中的时空表达及意义
目的 观察生长期山羊颅骨冠状缝受牵张力作用后碱性成纤维细胞因子(bFGF)与胰岛素样生长因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)的时空表达.方法 选用12只生长期山羊,用自制牵张器按0.4 mm/d的速率扩张颅骨冠状逢.在牵张结束后第0、2和4周分别处死4只动物,取骨缝标本作组织学和免疫组化检测.另取2只未进行缝牵张的动物作为对照.结果 bFGF与IGF-Ⅰ在牵张骨缝组织中均呈高水平表达.bFGF主要在成纤维样细胞与成骨细胞中表达,IGF-Ⅰ阳性信号主要定位于新生骨小梁边缘的成骨细胞和埋入新骨基质中的骨细胞,在骨缝扩张的0～2周这两种生长因子的表达强.结论 张应力可刺激颅骨缝细胞分泌bFGF与IGF-Ⅰ,这两种骨生长因子在骨缝牵张成骨过程中可能起着重要的调控作用.
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上皮性卵巢癌AIB1蛋白表达水平及其与凋亡相关性的初步研究
目的 观察AIB1蛋白在上皮性卵巢癌中的表达,并探讨其与凋亡调节蛋白P53、Bcl-2表达之间的关系.方法 应用免疫组化SP法检测24例正常卵巢、24例卵巢良性肿瘤、18例卵巢交界性肿瘤及69例上皮性卵巢癌中AIB1、P53、Bcl-2蛋白的表达,同时测定卵巢癌中雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)状态,分析AIB1的表达与P53蛋白、Bcl-2蛋白、ER、PR的表达间有无相关性.结果 ①AIB1在正常卵巢、卵巢良性肿瘤、卵巢交界性肿瘤、上皮性卵巢癌中阳性表达率分别为8.33%、25.00%、38.89%、65.22%,卵巢癌中AIB1蛋白的阳性表达率高于其他卵巢组织(P<0.05).AIB1蛋白在卵巢癌中过表达的发生率为36.23%,低分化、临床晚期、淋巴结受累的病例较之中、高分化、临床早期、无淋巴结转移的病例AIB1蛋白的过表达发生率升高(P<0.05).②相关性分析显示AIB1蛋白与P53、Bcl-2蛋白表达呈正相关(r=0.342,P=0.004; r=0.311,P=0.009),与ER、PR的表达无相关性.结论 上皮性卵巢癌中,AIB1蛋白的表达率明显升高,与卵巢癌的恶性生物学行为关系密切.AIB1蛋白可能通过非激素依赖途径影响了凋亡调节蛋白如P53、Bcl-2的表达,从而参与了上皮性卵巢癌的发生发展过程.
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预测巨大儿的测量指标评价
目的 对临床使用的胎儿生长监测指标进行评价.寻找适于预测巨大儿敏感指标.方法 对我院2007年分娩的108例巨大儿及同期108例正常出生体重儿的临床资料进行统计分析,包括孕妇宫高、腹围测量值,超声测量胎儿径线(gg顶径、股骨长、头围、腹围).结果 孕妇宫高、胎儿双顶径以及双顶径与股骨长之和用于预测巨大儿时,ROC曲线下面积>0.64,且具有统计学意义(P<0.05),这三项指标的诊断指数高分别为143.5%,138.7%和149.4%.其他测量指标包括孕妇腹围、腹围与宫高之和、胎儿股骨长、腹围、头围用于预测巨大儿时,ROC曲线下面积均<0.63,且不具有统计学意义(P>0.05).结论 临床上孕妇的宫高以及B超下胎儿双顶径及双顶径与股骨长之和是预测巨大儿相对较好的指标.
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镀金对牙科含钛合金材料金属铍离子析出的影响
目的 研究镀金对牙科含钛合金材料在人工唾液中金属铍离子析出的影响.方法 将测试组分为4组:普通含钛合金烤瓷全冠组(对照组)、打磨后含钛合金烤瓷全冠组(打磨组)、喷砂镀金含钛合金烤瓷全冠组(镀金组)及喷砂镀金加时50%含钛合金烤瓷全冠组(镀金加时50%组).采用电感耦合等离子体发射光谱法(ICP-AES),测试在人工唾液中1月末、3月末、6月末时铍离子的浓度,比较不同处理因素对铍离子析出量的影响以及同一处理因素下铍离子析出速率的改变.结果 ①在不同处理方法相同时间点下,铍离子析出总量为打磨组>对照组>镀金组>镀金加时50%组,且差异有统计学意义(P<0.01).②在同一处理因素不同时间点下,铍离子的析出总量随着浸泡时间的延长而增加,呈现时间效应关系;铍离子的析出速率随着浸泡时间的延长而降低.结论 含钛合金烤瓷全冠表面镀金处理能降低铍离子的析出量,从而提高含钛合金烤瓷全冠的生物相容性.
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激光诱导恒河猴实验性脉络膜新生血管的研究
目的 通过激光诱导恒河猴眼底脉络膜血管新生,建立与人类脉络膜新生血管类似的动物模型.方法 8只成年恒河猴,采用532 nm激光围绕黄斑中心凹光凝,光凝前及光凝后20 d、34 d、48 d进行眼底彩色照相、荧光素眼底血管造影、光学相干断层扫描,光凝后49 d处死动物进行组织学和免疫荧光化学染色检查.结果 68.8%激光斑形成实验性脉络膜新生血管,荧光素眼底血管造影表现为早期强荧光斑,后期荧光素渗漏超越激光光斑边缘;光学相干断层扫描出现神经上皮下的高反射光团,局部视网膜增厚,病灶可维持长达48 d,形成的脉络膜新生血管为含有与增殖相关的CD31、CD105染色阳性内皮细胞成分的纤维血管增殖膜并伴视网膜水肿,色素颗粒内移,外核层缺失.结论 激光诱导的恒河猴脉络膜新生血管模型成模率高,模型稳定持久,是研究治疗与脉络膜新生血管相关眼底病理想的动物模型.
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Cyclin G1在正常月经周期人子宫内膜表达的周期性变化
目的 分析细胞周期素G1(Cyclin G1)在正常月经周期人子宫内膜表达的周期性变化,以初步探讨其生理意义.方法 采用免疫组化方法观察15例增殖期,11例分泌早期.15例分泌中晚期子宫内膜上皮细胞和基质细胞Cyclin G1蛋白的表达;采用地高辛标记的RNA探针进行原位杂交检测子宫内膜标本Cyclin G1 mRNA的表达.结果 ①在增殖期子宫内膜上皮细胞仅有少量Cyclin G1蛋白表达,在分泌早期上皮细胞其表达逐渐升高,尤以在分泌期的中、晚期表达量增加为明显,并定位在细胞核中.在基质细胞中,Cyclin G1蛋白仅在分泌中晚期有表达.②Cyclin G1 mRNA的阳性信号定位在细胞浆,并且CycHn G1 mRNA在子宫内膜表达的时空特点与蛋白质水平的表达具有一致性,即Cyclin G1的mRNA在分泌期子宫内膜上皮细胞表达较明显,基质细胞在分泌中晚期出现表达.结论 Cyclin G1在人子宫内膜细胞中的表达具有明显的时空特点,其在子宫内膜的表达特点与孕激素周期性分泌一致.
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依拉普利对丙烯醛诱导的气道炎症干预作用的研究
目的 应用丙烯醛建立气道炎症模型,给予依拉普利进行干预,了解其对气道炎症的影响,并探讨核因子(NF-KB)在这一过程中的作用.方法 健康雄性SD大鼠24只,随机分为4组,每组6只.A组:空白对照组(吸人生理盐水);B组:依拉普利自身对照组(单纯依拉普利灌胃),依拉普利0.5 mg/(kg·d)灌胃;C组:模型组(丙烯醛),大鼠吸入4 mg/L丙烯醛,每次3 h,每天两次;D组:依拉普利干预组(吸入丙烯醛+依拉普利灌胃),处理同模型组,并给予依拉普利0.5 mg/(kg·d)灌胃.21 d后处死大鼠,采集标本.采用免疫组化方法检测肺组织中血管紧张素Ⅱ和气道上皮NF-κB p65的表达,并计算NF-кB p65的人核率.采用Western blot方法检测肺组织胞浆中的NF-κB.收集支气管肺泡灌洗液,检测其中的中性粒细胞数,用ELISA的方法检测TNF-α、IL-8.结果 免疫组化结果显示模型组大鼠肺组织中Ang Ⅱ、NF-κB p65的表达,NF-κB p65入核率较空白对照组明显增高,依拉普利干预组各项指标较模型组明显减少.Western blot检测发现细胞浆中NF-κB的表达量显著增高(P<0.05),依拉普利干预可以使NF-κB p65的表达有一定程度的降低(P<0.05).支气管肺泡灌流液(BALF)中中性粒细胞数以及ELISA检测的BALF中的炎性细胞因子IL-8和TNF-α模型组显著高于对照组,依拉普利干预组中均有明显降低(P值均<0.05).结论 在丙烯醛诱导的气道和肺的炎症模型中,Ang Ⅱ起了重要的作用,依拉普利可部分抑制这一炎症反应,其机制可能与它抑制了NF-κB的激活有关.
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人VIGILIN的shRNA真核表达质粒的构建及其对肝癌细胞周期影响的初探
目的 构建靶向人高密度脂蛋白结合蛋白(VIGILIN)的shRNA真核表达载体,并初步探索VIGILIN与人肝癌细胞系HepG2细胞周期是否有关联.方法 构建人VIGILIN的shRNA重组质粒,并将重组质粒pSIREN-VIG转染HepG2细胞,采用RT-PCR和Western-blot检测HepG2细胞VIGILIN mRNA和蛋白的表达,并用流式细胞术检测细胞周期是否有所改变.结果 ①HepG2细胞转染pSIREN-VIG后,VIGILIN的表达被特异、有效地抑制.转染48 h后,VIGILIN的表达从mRNA和蛋白的水平都有明显的减少;②VIGILIN表达抑制后,G2/M期细胞所占比例增加:相对于三个对照组(未转染组2.4%,脂质体转染组4.9%和转染pSIREN-GFP组6.5%),实验组(转染pSIREN-VIG组)G2/M期细胞增加到9.4%.结论 我们成功的构建了能特异、有效的抑制人VIGILIN表达的shRNA表达质粒,人VIGILIN能够影响到细胞周期的正常运行,导致G2/M期阻滞.
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不同手术治疗方法对脑出血术后心率近日节律的影响
目的 研究不同手术治疗方法对脑出血术后心率近日节律的影响.方法 回顾性分析临床100例高血压基底节区脑出血病例,其中进行标准的开颅血肿清除术(开颅组)43例和微创血肿穿刺引流术(微创组)57例.术后均连续9 d监测心率,每小时记录一次.用单一和平均群体余弦法进行每天的近日节律分析.结果 微创组患者术后的心率有明显的近日节律(P<0.001),开颅组第1～7 d心率的近日节律消失(P>0.05),第8 d恢复出现近日节律(P<0.001).微创组振幅均高于同期开颅组,两组振幅术后第4～7 d均降低,术后第8 d开始升高.结论 开颅手术治疗方法对心率近日节律的影响较微创穿刺引流手术严重.脑部手术后近日节律的恢复可能和术后脑水肿的发生、发展有密切的关系.
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牙釉基质蛋白诱导牙釉质的再矿化研究
目的 研究牙釉基质蛋白对牙釉质再矿化的影响.方法 将利于与蛋白结合的羧基基团,通过紫外光辐射接枝在牙釉质缺损表面,加入到含SD大鼠牙釉基质蛋白的磷酸盐琼脂-醋酸钙溶液体系中,应用扫描电镜观察牙釉质表面经处理后的形态学改变,进而分析牙釉基质蛋白对羟基磷灰石晶体的组成和形貌的调控作用.结果 在添加牙釉基质蛋白的凝胶体系中,牙釉质缺损表面可以见到羟基磷灰石生长晶体,晶体表现出了良好的结晶度,组成上为含有少量CO32-取代的羟基磷灰石晶体.结论 在37℃恒温水浴,添加牙釉基质蛋白的凝胶体系中,牙釉基质蛋白对羟基磷灰石晶体的成核及生长有重要模板作用,证明牙釉基质蛋白能够诱导牙釉质再矿化.
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血管活性肠肽抑制大鼠脑缺血诱导的细胞凋亡和iNOS表达
目的 探讨脑内注射血管活性肠肽(VIP)对大鼠脑缺血再灌注损伤的神经保护作用.方法 通过线栓技术闭塞大脑中动脉(MCAO)2 h诱导建立暂时性局部脑缺血模型后,大鼠侧脑室内注射VIP.采用TTC染色测定大鼠脑梗死体积;TUNEL染色评定缺血边缘区细胞凋亡;Western Blotting分析脑内iNOS蛋白含量.结果 MCAO后1 d,VIP注射大鼠脑梗死体积较对照组明显缩小,减少约28 %(P<0.05);缺血边缘区TUNEL阳性细胞数目减少(P<0.05);脑组织iNOS蛋白表达明显降低(P<0.05).结论 大鼠脑内注射VIP可以抑制脑缺血再灌注诱导的细胞凋亡,减小梗死体积,具有神经保护作用;VIP抑制细胞凋亡的作用可能与iNOS蛋白表达降低有关.
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H-FABP和FAS在乳腺浸润性导管癌中的表达及意义
目的 探讨心型脂肪酸结合蛋白(H-FABP)和脂肪酸合成酶(FAS)与乳腺浸润性导管癌发生发展的关系及作用机制.方法 用半定量逆转录聚合酶链反应、免疫组织化学和Western blot等方法检测H-FABP和FAS在81例乳腺浸润性导管癌中的表达变化.结果 H-FABP分布于浸润性导管癌的间质细胞、腺泡和导管上皮细胞,mRNA和蛋白的表达量较癌旁正常组织明显上调(P<0.05),在Ⅱ级浸润性导管癌的表达量较Ⅰ、Ⅱ级下调(P<0.05);FAS主要分布于浸润性导管癌的腺泡和导管上皮细胞,mRNA和蛋白的表达量较癌旁正常组织亦增加(P<0.05),表达量随组织学级数的变化趋势与H-FABP相同;H-FABP和FAS的表达具有明显相关性.结论 H-FABP和FAS在Ⅰ、Ⅱ级浸润性导管癌的发生发展中起重要作用.
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胸腺肽α1对慢性阻塞性肺疾病急性加重的预防作用
目的 探讨胸腺肽α1对慢性阻塞性肺疾病患者急性加重的预防作用及其机制.方法 将80例稳定期慢性阻塞性肺疾病患者随机分为治疗组和对照组,对照组给予必要的解痉和祛痰等基础治疗,治疗组在此基础上接受胸腺肽α1 1.6 mg皮下注射,隔日1次,共注射10次;二组患者均观察6个月,每2周经门诊随访1次,进行临床情况评价,并于治疗前、治疗后3个月及6个月检查患者肺功能、血清IgA、IgG、IgM、CD3、CD4和CD8水平.结果 在治疗3个月和6个月后,治疗组患者发生急性加重人数和急性加重天数均明显低于对照组(P<0.05),而治疗组患者在治疗后血CD4及CD4/CD8比值明显升高(P<0.05).结论 胸腺肽α1通过增强患者细胞免疫功能,可有效地预防慢性阻塞性肺疾病的急性加重.
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胎儿生长受限模型大鼠子代空间学习记忆能力改变的研究
目的 探讨胎儿生长受限(FGR)对子代空间学习记忆能力的影响.方法 建造SD大鼠FGR模型,对子鼠分雌雄性别,分别于生后1月、2月及4月进行Morris水迷宫的定位航行实验及空间探索实验,检测FGR子代空间学习记忆能力的改变.结果 1月龄、2月龄及4月龄各组(FGR组雌鼠、对照组雌鼠、FGR组雄鼠、对照组雄鼠)的潜伏期均随着训练次数的增加而缩短(P<0.05).除4月龄雄鼠外,FGR其它各组平均潜伏期均比对照组长(P<0.05).除4月龄的雄鼠外,FGR其它各组在水迷宫任务中更多地采取了非有效的随机式或边缘式解决策略,而较少地使用趋向式及直线式有效策略,差异有统计学意义(P<0.05).各个年龄段雄鼠、雌鼠,FGR组站台停留时间明显少于对照组(P<0.05).结论 FGR子代大鼠的水迷宫测试成绩下降,提示孕期发生FGR对胚胎和胎儿脑的发育有所影响,并对出生后子代早期及远期空间学习记忆能力造成损害,这种损害因性别及年龄不同而有差异.
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辣椒素对大鼠心肌缺血再灌注损伤保护作用的研究
目的 研究辣椒素(capsaicin)是否对在体大鼠局部心肌缺血再灌注损伤有保护作用及其可能的机制.方法 采用结扎大鼠心脏左冠状动脉前降支45 min、再灌注120 min建立局部心肌缺血再灌注损伤模型.将40只成年健康雄性大鼠随机分为4组:对照组、辣椒素组、辣椒平组、S-3144(P物质受体拮抗剂)组,所有用药分别于缺血前10 min和5 min经右颈总动脉单次注射入左心室.连续监测心电图及左室功能变化,测定血清磷酸肌酸激酶同工酶(CKMB)浓度,Evans-blue-TTC双染色法测定心肌梗死面积.结果 组内比较,缺血再灌注期各时点左室发展压(LVDP)均比结扎前低(P<0.05);除辣椒素组外,各组内再灌注120 min时心率比再灌注前各时点均低(P<0.05).组间比较,辣椒素组再灌注120 min时心率明显高于其他3组(P<0.05),再灌注60 min、120 min时LVDP高于其他3组(P<0.05);实验终点时,辣椒素组CKMB浓度明显低于其他3组(P<0.05),心肌梗死面积小于其他3组(P<0.05);辣椒平组和S-3144组CKMB浓度、心肌梗死面积与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 辣椒素对在体大鼠心肌缺血再灌注损伤具有保护作用.且可能是通过激活辣椒素受体(TRPV1)引起P物质释放,进一步激活P物质受体起作用.
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OX40基因rs17568A/G多态性与急性冠脉综合征的关联研究
目的 研究OX40基因rs17568A/G多态性在中国汉族人群中的分布以及与急性冠脉综合征(acutecoronary syndrome,ACS)的相关性.方法 共纳入228名中国汉族ACS患者和165名年龄性别匹配的正常对照,采用聚合酶链反应-限制性片断长度多态性(PCR-RFLP)技术对OX40基因rs17568A/G多态性位点进行基因型分型,同时采用DNA测序对酶切产物进行鉴定.结果 ACS组和对照组中均检出了AA、AG和GG3种基因型,ACS组和对照组中rs17568A/G多态位点G等位基因频率分别为29.4%和26.7%,差异无统计学意义(P>0.05).同时,基因型分布频率差异亦无统计学意义(P>0.05).在ACS组中,根据冠脉病变分组,在1、2或3支血管病变患者间G等位基因和基因型频率也没有发现差异.通过不同基因型的血脂分析发现,G等位基因携带者(AG+GG型)高密度脂蛋白胆固醇(high density cholesterol,HDL-C)水平显著高于AA纯合子(P<0.05).结论 OX40基因rs17568A/G多态性位点同中国汉族ACS的发生以及冠脉病变严重度问没有关联,但是G等位基因对于血清HDL-C水平有一定影响.
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转导素β-TrCP在小鼠毛囊发育中的表达与意义
目的 观察转导素β-TrCP在出生后乳鼠须毛囊的表达情况,并探讨β-TrCP在毛囊发生中的作用.方法 分别取胚胎18 d、出生后第1 d、6 d小鼠头部标本,40 g/L多聚甲醛固定,石蜡包埋,用LsAB法观察β-TrCP在须毛囊中的表达分布情况,并进行图像分析.结果 在出生后不同发育时期的须毛囊中,β-TrCP在毛囊发育时期的毛干细胞与毛小皮细胞胞浆阳性表达;鞘小皮细胞胞浆、内根鞘Huxley层、外根鞘、间充质细胞胞浆阳性表达.内根鞘亨勒层细胞胞浆与结缔组织鞘细胞胞浆阴性表达.图像分析显示出生第6 d表达量与胚胎18 d表达量的差异有统计学意义(P<0.01).结论 β-TrCP在小鼠毛囊发育中呈现特征性表达.提示β-TrCP对于毛囊发育的分子信号通路正常传递具有重要作用.
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全反式维甲酸对大鼠腹膜透析模型腹膜TGF-β1和COL-Ⅰ表达的影响
目的 研究全反式维甲酸(ATRA)对大鼠腹膜透析模型腹膜转化生长因子-β1(TGF-β1)和胶原Ⅰ(COL-Ⅰ)表达的影响,初步探讨其对腹膜纤维化的作用机制.方法 建立大鼠腹膜透析模型,ATRA 2 mg/kg(小剂量组)、5 mg/kg(大剂量组)每日腹腔内注射进行干预.在实验第28 d取腹膜组织进行Masson染色,免疫组织化学检测TGF-β1、COL-Ⅰ在脏层腹膜的表达;RT-PCR检测TGF-β1 mRNA的表达.结果 Masson染色显示,模型组腹膜较对照组明显增厚,胶原大量沉积;ATRA治疗组腹膜病变均有不同程度减轻.免疫组化和RT-PCR结果表明,模型组腹膜组织中TGF-β1和COL-Ⅰ的表达明显高于对照组,小、大剂量ATRA组表达均显著降低,且大剂量组较小剂量组表达低.结论 ATRA可以下调TGF-β1的表达和抑制COL-Ⅰ的合成,延缓腹膜纤维化的进展.
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IL-12联合结核杆菌DNA疫苗初免-BCG加强免疫的免疫效果观察
目的 研究并比较IL-12联合结核分枝杆菌(TB)DNA(Ag85A和ESAT-6)疫苗初免-BCG加强免疫的应答效果.方法 将小鼠随机分成PBS阴性对照组和4组免疫组:BCG组、DNA(Ag85A和ESAT-6)初免-BCG异源加强组、DNA+IL-12初免-BCG异源加强组和DNA初免-BCG+IL-12异源加强组.末次免疫后4、6、8周分别测定血清总IgG水平,同时分离小鼠脾细胞,进行淋巴细胞增殖实验(流式细胞仪检测),测定脾细胞培养上清中IFN-γ分泌水平.并检测小鼠脾脏淋巴细胞表型.结果 4组免疫组体外经TB纯蛋白衍生物(TB-PPD)刺激后均检测到特异性IgG抗体产生,且抗体水平在末次免疫后4～8周逐渐增加,4组平均效价为1:80,1:120、1;160、1:160,各组抗体水平增加无明显差异(P>0.05);小鼠脾细胞体外经TB-PPD刺激后,4组免疫组均能产生特异性淋巴细胞增殖并诱生较强的IFN-γ反应,且DNA+IL-12/BCG和DNA/BCG+IL-12组特异性淋巴细胞增殖活性和IFN-γ分泌水平均明显强于BCG,DNA/BCG组(P<0.05),但DNA+IL-12/BCG和DNA/BCG+IL-12组间差异不明显;4组免疫组小鼠CD4+、CD8+T淋巴细胞较PBS组有较大升高(P<0.05),且DNA+IL--12/BCG和DNA/BCG+IL-12组CD4+、CD8+T淋巴细胞百分比大于BCG以及DNA/BCG组(P<0.05).结论 IL-12联合DNA疫苗初免-BCG加强的免疫策略较BCG免疫以及单纯的DNA疫苗初免-BCG加强免疫能在小鼠体内诱导更强的特异性细胞免疫反应,产生高水平的IFN-γ.
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乌司他丁对大鼠肾脏机械性损伤后肾脏HSP70、IL-6表达的早期影响
目的 探讨乌司他丁在大鼠肾脏机械性损伤后对肾脏组织IL-6和HSP70表达的影响及意义.方法 66只Wistar大鼠,随机分为非创伤对照组、单纯创伤组、创伤后给予乌司他丁组.采用自由落体生物撞击仪撞击大鼠脊肋角复制创伤动物模型.用组织芯片技术及免疫组织化学方法检测各组创伤后1 h、6 h、12 h、24 h、36 h肾脏组织中IL-6和HSP70蛋白的表达.结果 对照组肾脏组织中IL-6和HSP70蛋白均呈弱阳性表达.与对照组比较,单纯创伤组在创伤后1、6、12,24 h点IL-6表达增强(P<0.05),6 h点HSPT0表达增强(P<0.05).创伤后注射乌司他丁组各时相点肾组织中IL-6表达明显低于单纯创伤组(P<0.05),HSP70表达在1 h、24 h、36 h点明显高于单纯创伤组(以1 h点为显著,P<0.05).结论 乌司他丁可能通过抑制IL-6的过度表达,上调HSPT0的表达,改变两者表达的比例,在创伤早期(以1 h点为著)对大鼠肾脏起保护性作用.
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胚鼠宫内缺血缺氧脑损伤中Wnt信号通路关键分子的表达变化
目的 探讨Wnt信号通路与胚鼠宫内缺血缺氧脑损伤的关系.方法 将孕15～17 d的SD大鼠随机分为实验组和对照组.实验组钳夹双侧子宫动脉30 min建立宫内缺血缺氧模型,分别在缺血再灌注24、48、72 h后留取胚脑标本.对照组不钳夹子宫动脉,与实验组的对应时间点留取标本.采用尼氏染色和Caspase-3免疫组化检测两组神经元的凋亡情况.Western Blotting检测Wnt信号通路中关键信号分子β-catenin和GSK-36的表达变化.结果 实验组再灌注后不同时间点尼氏小体嗜染性降低,部分溶解.Caspase-3阳性细胞数较对照组升高,其中对照组为12.71±1.42(24 h)、11.45±1.50(48 h)、14.10±1.29(72 h),实验组为26.29±1.64(24 h)、32.38±1.05(48 h)、39.20±1.88(72 h),差异均具有统计学意义(P<0.05).Western Blotting显示β-catenin蛋白表达在实验组与对照组之间差异无统计学意义(P>0.05),而GSK-3β实验组的相对表达量较对照组显著增高,其中对照组为1.75±1.07(24 h)、1.34±1.03(48 h)、1.48±1.10(72 h),实验组为3.25±1.34(24 h)、2.99±1.26(48 h)、3.10±1.35(72 h),差异均具有统计学意义(P<0.05).结论 Wnt信号通路在胚鼠宫内缺血缺氧脑损伤中可能发挥重要作用.
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德氏乳杆菌保加利亚亚种β-半乳糖苷酶基因在大肠杆菌中的非融合表达
目的 在大肠杆菌中非融合表达德氏乳杆菌保加利亚亚种β-半乳糖苷酶,为构建能高效表达β-半乳糖苷酶的食品级益生菌株奠定基础.方法 选择德氏乳杆菌保加利亚亚种(1.1480和wch9901)β-半乳糖苷酶基因(lacZ)起始密码ATG上游-18 bp到ATG下游1 bp的一段包含SD位点和ATGA位点的序列为上游引物,PCR扩增lacZ,插入表达质粒pMG36e构建重组表达质粒.转化大肠杆菌,筛选阳性克隆,提取重组质粒进行酶切鉴定和测序,并测定转化菌β-半乳糖苷酶活性.结果 重组质粒酶切鉴定合格;其中插入的外源片段序列与德氏乳杆菌保加利亚亚种lacZ标准序列符合率达99%以上;携带重组质粒pMG36e-lacZ 1.1480的大肠杆菌DH5a酶活性为3.074 U/mL,酶比活性为6.939 U/mg pro;携带重组质粒pMG36e-lacZ wch9901的大肠杆菌DH5a酶活性为4.755 U/mL,酶比活性为8.537 U/mg pro.结论 成功在大肠杆菌中非融合表达了德氏乳杆菌保加利亚亚种β-半乳糖苷酶;本研究选择的SD位点和ATGA位点能在大肠杆菌中有效地引导蛋白的非融合表达.
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TCLA诱导大鼠脑胶质瘤细胞增殖抑制及凋亡的研究
目的 探讨共轭三烯酸(TCLA)对大鼠脑胶质瘤细胞体外增殖抑制、凋亡作用及其作用机制.方法 采用细胞增殖实验(MTT法)、克隆形成实验、BrdU掺入实验检测TCLA对大鼠脑胶质瘤细胞系C6的体外增殖抑制作用;Hoechst33342染色、流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期分布;RT-PCR检测调亡相关基因腺苷二磷酸核糖转移酶1(ADPRTL1)、细胞色素P4501A1(CYP1A1),过氧化物酶增殖体激活受体-γ(PPAR-γ)的表达.结果 MTT法发现,TCLA可显著抑制C6细胞株增殖(40 μmol/L,72 h,细胞存活率56.71%±0.98%),并存在量-效、时-效关系,克隆形成下降,40μmol/L的TCLA可完全抑制克隆形成;实验组BrdU标记率63.1%±1.0%,较对照组(95.6%±1.4%)明显降低(P<0.05);Hoechst33342荧光染色示,实验组凋亡率10.0%±0.3%,较对照组(1.6%±0.6%)明显升高(P<0.05);流式细胞术分析结果示,TCLA使C6细胞凋亡指数升高,G0/G1期细胞比例增加,S期细胞比例减少,与对照组的差异均有统计学意义(P<0.05);RT-PCR结果显示,实验组ADPRTL1、CYP1A1、PPAR-γ mRNA表达均较对照组增强,差异均具有统计学意义(P<0.05).结论 TCLA对大鼠脑胶质瘤细胞具有抑制增殖和诱导凋亡作用.其作用机制可能与抑制肿瘤细胞DNA合成、细胞周期阻滞、上调凋亡相关基因(ADPRTL1、CYP1A1、PPAR-γ)表达有关.
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和厚朴酚对人宫颈癌细胞增殖和凋亡的影响
目的 探讨和厚朴酚抑制人官颈癌Hela细胞增殖及诱导其凋亡的作用.方法 利用MTT检测和厚朴酚在不同浓度和时间下对Hela细胞增殖的影响;用流式细胞术、Hoechst 33258荧光染色和DNA ladder检测和厚朴酚作用下Hela细胞的凋亡.结果 MTT结果显示和厚朴酚可明显抑制Hela细胞的增殖,且抑制率存在剂量和时间依赖性;流式结果表明10μg/mL和20 μg/mL和厚朴酚作用细胞24 h后,凋亡细胞的比例分别为22.5%和62.2%,而对照组为8.7%;和厚朴酚处理过的Hela细胞,经Hoechst 33258染色后细胞、细胞核出现明显的凋亡形态学变化,在DNA琼脂糖凝胶上可见特征性的梯状条带.结论 和厚朴酚具有抑制Hela细胞增殖和诱导凋亡的作用.
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改良颌后切口经腮腺前缘入路治疗髁突骨折
目的 介绍髁突骨折切开复位内固定术一种新的手术入路.方法 17例(25侧)髁突骨折患者选择经颌后切口腮腺前缘入路进行髁突以及伴发的下颌升支骨折切开复位内固定术.术后从患者的开口度、开口型、咬<牙合>关系、面神经功能以及并发症等方面进行分析评价.结果 17例(25侧)经12～24个月随访,复查X线片骨折愈合良好,咬<牙合>关系、开口型及张口度均较术前明显改善.随访长24个月,无一例关节强直及涎瘘,术后1周主要并发症包括面神经分支损伤,经1～3个月观察均得到恢复.结论 相对于髁突骨折的传统手术切口,采用经腮腺前缘入路的方法行髁突骨折切开复位内固定术,手术时间短,术野清晰便于复位固定,切口隐蔽,利于面神经保护,术后功能和外形恢复,并发症较少.
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肺平滑肌瘤病2例报告
目的 探讨肺平滑肌瘤病的临床病理特征.方法 对2例肺平滑肌瘤病进行临床病理特点和免疫表型等检测.结果 2例患者均为中年女性,有子宫平滑肌瘤病史,病情发展缓慢,对肺功能影响小.病变为双肺多发性结节,直径为0.1～5.5 cm;病例1尚有躯干肿块,其直径为2.0～7.0 cm,边界清楚,呈膨胀性生长;肿瘤细胞分化好,无核分裂,并未见瘤栓;免疫组织化学显示肿瘤细胞具有平滑肌细胞的分化特征即肿瘤细胞呈Des、α-SMA/MSA、Vim和actin阳性表达.结论 肺平滑肌瘤病多见于女性,患者有子宫平滑肌瘤的病史,大多数患者的预后较好,临床治疗以手术切除肿块为主,也可运用激素治疗,并认为该病是多中心发生的良性原发性平滑肌瘤.
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宫颈癌放射治疗后泌尿系统并发症46例临床分析
目的 总结宫颈癌放射治疗后泌尿系统并发症的诊治与预防经验.方法 回顾性分析宫颈癌放射治疗后泌尿系统并发症病例46例,经膀胱镜、B超、CT或MRI检查排除肿瘤复发、转移,其中放射性出血性膀胱炎30例、上尿路积水13例、膀胱阴道瘘3例,分别给予保守治疗、放置双J管、经皮肾穿刺造瘘、手术修补等方法治疗.结果 经过治疗大多数患者症状得到治愈或缓解,提高了生活质量,疗效肯定.结论 宫颈癌放射治疗所产生的尿路并发症经过治疗后大多数可治愈或缓解;严格把握宫颈癌手术治疗的适应证,改进常规放疗方法,是预防放疗后并发症的重要措施.
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低分子肝素防治新生儿重度硬肿症合并DIC效果评价
目的 比较低分子肝素与肝素治疗及预防新生儿重度硬肿症合并弥漫性血管内凝血(DIC)的有效性及安全性.方法 68例重度硬肿症患儿分为两组,低分子肝素组(n=35):常规基础治疗加用低分子肝素(每次40U/kg),皮下注射,每天2次;标准肝素组(n=33):常规基础治疗加用标准肝素(每次0.5 mg/kg),皮下注射,每天2次.结果 两组硬肿消退时间的差异无统计学意义(P>0.05);但在出血停止时间、肝素使用时间、DIC指标恢复正常时间及预防出血加重等方面.低分子肝素组优于标准肝素组(P<0.05).结论 低分子肝素防治新生儿重度硬肿症合并DIC较标准肝素更安全有效.
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胰十二指肠切除术和保留十二指肠的胰头切除术治疗慢性胰腺炎的临床疗效比较
目的 针对病变主要集中于胰头的慢性胰腺炎,比较两种胰头切除手术--胰十二指肠切除术(包括传统术式和保留幽门的术式)和保留十二指肠的胰头切除术(包括不切开主胰管和切开主胰管的术式)的临床疗效.方法 采用回顾性临床对照研究,将2001年1月至2007年5月我院收治并行各类胰头切除手术的41例慢性胰腺炎患者按手术方式分为胰十二指肠切除术组(n=19)和保留十二指肠的胰头切除术组(n=22),比较两种术式的疼痛缓解率、手术并发症发生率和住院时间长短等临床指标.结果 胰十二指肠切除术组和保留十二指肠的胰头切除术组的疼痛总缓解率、疼痛完全缓解率分别为94%、84%和95%、81%(P>0.05);而两组的并发症发生率分别为21%和0%(P<0.01),术后平均住院时间分别为14 d和8.5 d(P<0.01).结论 针对胰头病变为主的慢性胰腺炎及其导致的并发症,保留十二指肠的胰头切除术与胰十二指肠切除术均具有良好的疼痛缓解率,但前者的手术创伤小、并发症少和住院时间更短,因此,保留十二指肠的胰头切除术可能更具有优势.
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国产头孢吡肟治疗急性细菌性下呼吸道感染的多中心随机对照临床研究
目的 评价国产头孢吡肟治疗急性细菌性下呼吸道感染的有效性与安全性.方法 采用多中心随机单盲对照试验,对照组为进口头孢吡肟,用法均为中度感染1 g/次,重度感染2 g/次,每日两次静滴,疗程7～10 d.结果 共入选123例,可评价疗效病例113例,试验组55例,对照组58例,试验组和对照组痊愈率分别为45.45%和31.03%,有效率分别为92.73%和81.03%;两组细菌清除率分别为95.35%和97.50%,药物不良反应发生率分别为8.06%和8.20%,两组比较差异均无统计学意义(P>0.05).结论 国产头孢吡肟注射剂治疗急性细菌性下呼吸道感染安全、有效.
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眶底壁骨折各期眶容积变化特点的研究
目的 通过对各期眶底壁骨折眶容积的测定,分析各期眶容积变化特点及其与眼球内陷的关系.方法 31例眶底壁骨折,其中早期患者(受伤时间≤2周)12例,晚期患者(受伤时间>2周)19例,进行眼球内陷的测量,并通过3DMSR软件系统,进行健患侧眶骨性容积等数据的采集分析.结果 健患侧眶容积的差异有统计学意义(P<0.05),早期患者眼球内陷程度与眶容积改变无显著相关性,而晚期患者眼球内陷程度与眶容积改变呈正相关,相关系数为0.976(P=0.023).结论 根据眶容积的测量可预测远期眼球内陷程度,指导临床治疗方案的制定,而陈旧性眶底骨折应恢复或再造眶容积以矫正眼球内陷.
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胎盘早剥的超声诊断分析
目的 探讨超声诊断胎盘早剥的价值.方法 回顾性分析2003年～2007年本院57例胎盘早剥住院患者的超声表现及漏诊、误诊原因.结果 57例胎盘早剥中,产前超声诊断胎盘早剥35例,诊断符合率61.4%.漏诊19例(33.3%),误诊3例(5.3%),其中1例误诊为子宫肌瘤,1例误诊为副胎盘,1例误诊为胎盘血窦.结论 超声检查是诊断胎盘早剥重要的辅助检查手段,必要时结合临床体征进行诊断,能为临床处理提供及时、准确的信息.
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飞行员飞行前后牙髓感觉功能的变化
目的 通过测试飞行员高空飞行前后的牙髓活力阈值,比较其牙髓感觉功能的变化.方法 采用简单随机法挑选40名飞行员,用NEOSONO Ultima EZTM牙髓活力电测仪测试并记录飞行员高空飞行前后上颌中切牙和下颌第一磨牙的牙髓活力阈值,每颗牙测试三次取其平均值,并对飞行前后的测试结果进行比较.结果 飞行员飞行后牙髓活力电测试阈值降低,差异有统计学意义.结论 在高空飞行中,牙髓活力电测试阈值降低,牙髓感觉敏感性增高.
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自发性酮症倾向的初发糖尿病患者外周胰岛素敏感性和胰岛β细胞功能的研究
目的 评估酮症倾向的初发糖尿病(KPD)患者外周胰岛素敏感性和胰岛β细胞功能,为临床分型和治疗方案提供依据.方法 初次就诊的KPD患者30名,根据起病前体重指数分为肥胖组与体重正常组,检测其就诊时的血糖、糖化血红蛋白、胰高血糖索以及游离脂肪酸水平等指标,并在酮症控制后采用75 g葡萄糖耐量+胰岛素C肽释放实验和正常血糖高胰岛素钳夹试验评估这两组患者外周组织胰岛素敏感性与胰岛β细胞功能.结果 两组患者在年龄、性别和病程等方面差异无统计学意义;正糖一高胰岛素钳夹实验示两组患者均存在严重的外周胰岛素抵抗,但肥胖组患者胰岛β细胞功能受损程度轻于体重正常组.结论 与体重正常的酮症倾向糖尿病患者比较,肥胖自发性酮症糖尿病患者尚保留一定的胰岛素分泌功能,其临床特征及自然病程更符合2型糖尿病.
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EG-VEGF在正常人卵巢周期的表达变化
目的 观察内分泌腺体特异表达的血管生成因子(EG-VEGF)在人正常卵巢周期的表达变化和部位,以及EG-VEGF和VEGF在生理性卵巢血管生成中的作用.方法 2003年10月至2004年3月因非卵巢疾病在我院接受治疗的育龄期妇女共23名,根据受试者的末次月经和血清E2、P水平将其分为卵泡期(n=11)和黄体期(n=12),采用荧光定量RT-PCR测量EG-VEGF mRNA及VEGF mRNA在卵巢周期中的表达,同时采用原位杂交对其在卵巢周期的表达部位和强弱变化进行观察.结果 ①RT-PCR发现卵泡期和黄体期的EG-VEGFmRNA表达均高于VEGF mRNA,差异有统计学意义(P<0.05).②.EG-VEGF mRNA在卵泡期(9.68±12.03)和黄体期(10.33±8.79)的表达差异无统计学意义(P>0.05).③VEGF mRNA在卵泡期的表达(2.31±2.49)低于黄体期(4.25±4.14),差异有统计学意义(P<0.05).④原位杂交发现:EG-VEGF在原始卵泡和初级卵泡表达强,随卵泡发育而表达减弱.自黄体早到中期开始表达增强,于黄体晚期表达强.⑤VEGF在原始卵泡和初级卵泡表达弱,在次级卵泡开始表达增强,至黄体早期强,从黄体中期减弱,至黄体晚期没有表达.结论 正常卵巢周期中EG-VEGF mRNA和VEGF mRNA在卵泡期和黄体期的表达存在时空上的差别,说明两者在参与生理性卵巢血管生成过程的作用部位和作用机制不同.
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不同提取工艺制备的温莪术挥发油对Hela细胞的增殖抑制作用
目的 探讨不同提取方法制备的温莪术提取物对Hela细胞的体外增殖抑制作用.方法 采用水蒸气蒸馏提取法、CO2超临界萃取提取法、鲜品榨汁提取法分别制备不同浓度(25、50、75 μg/mL)的温莪术挥发油,MTT法检测其对宫颈癌Hela细胞的体外增殖抑制作用.结果 3种工艺制备的温莪术挥发油对宫颈癌Hela细胞的生长都有明显的抑制作用,抑制率高可分别达到30.69%±0.17%、32.44%±0.39%和34.75%±0.81%.其中鲜品榨汁提取物的抑制效果明显,且在50μ/mL 时,抑制效果好.结论 温莪术挥发油具有良好的抗肿瘤应用前景,鲜品榨汁提取的挥发油效果好.
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吗啡依赖对铁代谢的影响
目的 探讨吗啡依赖对铁代谢的影响,观察吗啡依赖是否可以直接导致慢性病贫血特征的铁代谢变化.方法 吗啡依赖组和正常对照组雄性SD大鼠各14只,剂量递增法皮下注射盐酸吗啡建立吗啡依赖大鼠模型.正常对照组皮下注射同体积生理盐水.检测两组大鼠红细胞数、血红蛋白、一氧化氮、血清铁、总铁结合力、转铁蛋白饱和度、铁蛋白、骨髓细胞内铁.结果 吗啡依赖组一氧化氮显著升高;血清铁、总铁结合力、骨髓细胞内铁显著降低,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01);转铁蛋白饱和度、铁蛋白、红细胞数、血红蛋白低于正常对照组,但差异均无统计学意义.结论 吗啡依赖可直接导致铁代谢损伤和出现慢性病贫血特征的铁代谢变化.
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茚三酮光度法测定室内空气中微量氨
目的 建立测定室内空气中微量氨的新型光度分析法.方法 用内装5 mL 0.01 mol/L H2SO4溶液的气泡吸收管采集空气中的氨,在抗坏血酸存在和加热(95℃)条件下,于pH5.5～6.0的乙酸-乙酸钠缓冲介质中,氨与茚三酮反应生成蓝紫色化合物,于568 nm比色定量.本法线性范围为0～8μg/10 mL,日间精密度为2.8%～6.8%,加标回收率为96.2%～102.3%,方法检测限为0.06 mg/m3.结论 本法简便、快速、干扰少,用于实际室内空气样品中氨的测定,结果满意.
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胎儿宫内心脏介入手术动物模型的建立
目的 通过动物实验模拟人类胎儿富内心脏介入手术过程,对介入手术方法学及相关同题进行研究,以推动人类胎儿严重心血管畸形介入手术临床实践.方法 以8只中后期双胎妊娠黑山羊为研究对象,在超声引导下经皮/子宫穿刺胎羊左心室,并在主动脉瓣水平模拟人类主动脉瓣球囊扩张术,从而建立胎儿宫内心脏介入手术动物模型,从动物准备、术中胎羊体位、穿刺部位选择、介入技术要领、超声使用、胎羊保温、胎盘脐带保护等方面进行探讨总结.结果 因胎羊术中死亡或术后被处死,术后处死2只孕羊,另6只孕羊术后存活,继续怀孕直至自然分娩,早产、足月产各3胎,无伤口感染、绒毛膜羊膜炎等发生,孕期及产后母羊情况良好.16只胎羊中8只胎羊施行了宫内心脏介入手术;术中死亡/处死4只胎羊,体质量(1.77±0.14)kg,红细胞压积29%～33%,早产存活5只,体质量(2.15±0.23)kg,红细胞压积27%～35%,足月产6只,体质量(2.41±0.19)kg,红细胞压积37%～41%,施行/未施行介入手术的胎羊/新生羊之间无明显差异.病理解剖发现施行手术的8例胎羊/新生羊胸壁穿刺点均位于左侧心前区,心脏进针部位在左室心前区近心尖部位6例,近流出道1例,近室间隔1例;4只少量心包积液(1～2.5 mL),1只心包积液5 mL,3只未发现心包积液;除1只胎羊有室间隔穿刺伤外,其余胎羊心内膜、瓣膜、腱索、乳头肌及主动脉内膜均未发现损伤;未发现肺、肝等胸腹腔脏器穿刺损伤;均未发现心包、胸腔感染迹象.结论 胎儿心脏介入手术动物模型成功建立.其经验值得人类胎儿心脏介入手术关注和借鉴.
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人成纤维细胞稳定转染的方法比较
目的 采用3种不同的方法将质粒pEGFP-N1,转染人成纤维细胞,从中寻找佳的稳定转染的方法.方法 分别采用阳离子聚合物转染、阳离子脂质体转染和电转染方法,将能表达G418抗性蛋白和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的质粒pEGFP-N1转染人成纤维细胞.24 h后,荧光显微镜下观察EGFP表达,流式细胞术测定瞬时转染率;通过G418筛选得到稳定转染的细胞.结果 电转染有高的瞬时转染效率(56.8%),稳定转染得到的阳性克隆多,且从细胞筛选到扩增至得到阳性大克隆所用的时间也少(约20 d);用阳离子聚合物瞬时转染率低(1.7%),稳定筛选同样可以得到阳性大克隆,但是数量很少且从细胞筛选到扩增至阳性大克隆所用的时间也多(约30 d);阳离子脂质体转染效果居中,瞬时转染率为39.9%,从细胞筛选到扩增至得到阳性大克隆所用的时间约25 d.结论 用电转染法将质粒pEGFP-N1转染人成纤维细胞是佳的转染方法.
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1,3-二氢-1,3-二酮-2-氢-异吲哚衍生物的合成研究
目的 设计并合成沙利度胺的衍生物.方法 氨基酸苄酯氨解N-邻苯二甲酰基-L-谷氨酸酐,所得产物经氢化脱苄后再与氨气成铵盐即得1,3-二氢-1,3-二酮-2H-异吲哚衍生物.结果 成功地合成了4个未见文献报道的沙利度胺衍生物.并进行了结构表征.结论 利用本方法可以在温和的条件下获得较高产率的目标产物.
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埃索美拉唑锌固体分散体的制备及其体外溶出特性
目的 通过制备成固体分散体的方法提高埃索美拉唑锌的溶出度.方法 以聚乙烯吡咯烷酮K30(PVP K30)和聚乙二醇6000(PEG 6000)为载体,采用溶剂法将埃索美拉唑锌制备成固体分散体,然后将所得固体分散体装填于肠溶胶囊,并考察其在人工肠液中的溶出特性;利用差示扫描量热分析(DSC)鉴别埃索美拉唑锌在固体分散体中的存在状态.结果 随着载体比例增加,固体分散体体外溶出度先增大后减小;以PEG 6000为载体制备的固体分散体溶出度优于以PVP K30制备的固体分散体;DSC分析表明,埃索美拉唑锌在以PEG 6000为载体制备的固体分散体中以非晶型存在.结论 固体分散体提高了埃索美拉唑锌的体外溶出速度.
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抗RalB单克隆抗体的制备及初步应用
目的 制备抗Ras相关蛋白RalB的单克隆抗体(McAb),探讨RalB蛋白在哺乳动物真核细胞中的表达,为进一步研究RalB功能奠定基础.方法 以纯化的原核表达RalB蛋白免疫的BALB/c小鼠脾细胞与Sp2/0融合,通过间接ELISA的筛选和有限稀释克隆化,获得稳定分泌抗RalB蛋白的McAb的杂交瘤细胞株.通过免疫组织化学方法和Western-blot方法分别对RalB在组织中的表达及特异性进行鉴定.结果 获得2株能高效分泌特异性McAb的抗RalB的杂交瘤细胞系F001,F002,其免疫球蛋白亚类均为IgG1.免疫组织化学实验结果表明RalB定位于肝癌细胞的细胞膜,Western-blot显示RalB在不同的肝癌细胞及正常肝细胞中均有表达.结论 成功获得抗RalB的特异性的单克隆抗体,为进一步研究RalB与肿瘤的相关功能研究创造了条件.
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几种经典牙列拥挤度预测法对中国人群适用性的比较
目的 找出适合中国人群的牙列拥挤度预测法.方法 使用精确度为0.01 mm的标准化电子游标卡尺对符合纳入标准的140副牙颌模型进行测量,对实测值和五种预测法的预测值进行统计分析比较,五种预测法分别为"华西Moyers法"、"Tanaka-Johnston法"、"Bachmann法"、"Gross and Hasund法"、"Trankmann法".结果 所有预测法均存在低估倾向,其低估比例以华西Moyers法低,Trankmann法高;实测值与预测值之差小于1 mm的以华西Moyers法所占比例大,Trankmann法所占比例小.结论 华西Moyers法准确度高,适用于中国人群,Trankmann法准确度低,对中国人群不合适.
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分子信标荧光定量PCR快速检测结核分枝杆菌方法的初步研究
目的 建立分子信标荧光定量PCR快速检测结核杆菌方法,为临床结核病的诊断提供特异性强、灵敏度高、可标准化、自动化的检测方法.方法 根据GenBank数据库公布的结核分枝杆菌IS6110基因的保守序列,设计引物与分子信标探针,建立结核分枝杆菌荧光定量PCR检测方法;以10种细菌作对照分析该方法的特异性与灵敏度;应用已建立的方法检测结核分枝杆菌,评价其应用价值.结果 所建立的分子信标荧光定量PCR检测10种细菌,只有结核分枝杆菌有荧光信号,与其他细菌无交叉反应,4拷贝/PCR反应体系的结核分枝杆菌都能有效检出.对100株结核分枝杆菌的检测结果为阳性,单一检测时间仅需2 h.结论 分子信标荧光定量PCR检测方法快速、灵敏度高、特异性强,可用于快速诊断结核病,为结核病的诊断与治疗提供新的检测手段.
| 年 | 期数 |
| 2019 | 01 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2017 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2011 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2010 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2009 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2008 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2007 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2006 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2005 | 01 02 03 04 05 06 |
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| 2001 | 01 02 03 04 |
| 2000 | 01 02 03 04 |
| 1999 | 01 02 03 04 |
