四川大学学报（医学版）杂志
Journal of Sichuan University(Medical Science Edition) 사천대학학보（의학판）
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KAI1基因对宫颈癌细胞增殖和侵袭能力的影响
目的 探讨肿瘤转移抑制基因KAI1对宫颈癌CaSki细胞体外增殖和侵袭能力的影响.方法 通过脂质体转染技术,将真核表达质粒pCMV-KAI1导入低表达的宫颈癌CaSki细胞,免疫组化及实时荧光定量RT-PCR法检测转染前后细胞内KAI1蛋白和mRNA的表达,通过四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法及Transwell侵袭力小室测定KAI1基因对细胞增殖能力及侵袭能力的影响.结果 转染目的基因的CaSki细胞中KAI1 mRNA水平及蛋白表达明显增强(P<0.05),细胞体外增殖能力明显弱于未转染组和转染空载体组(P<0.05),细胞穿膜数量明显少于未转染组和转染空载体组(P<0.05).结论 肿瘤转移抑制基因KAI1对宫颈癌细胞体外增殖及侵袭能力有一定抑制作用.
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重组高效复合干扰素增强宫颈癌CaSki细胞对CTL杀伤作用敏感性及机制的研究
目的 探讨重组高效复合干扰素与同类型复合干扰素、普通重组Ⅰ型干扰素、化疗药物诱导CaSki细胞对CTL杀伤作用敏感性的差异及机制.方法 应用重组高效复合干扰素、干复津、干扰素α-2b和顺铂以0.156 μg/mL、0.625 μg/mL、2.500 μg/mL浓度诱导CaSki细胞72 h后,用细胞毒性T细胞(CTL)作用于诱导后的CaSki细胞24 h,MTT法检测并计算细胞杀伤率;并以流式细胞仪检测CaSki细胞表面CD54、CD40分子表达强度.结果 经重组高效复合干扰素诱导后的CaSki细胞对CTL杀伤作用的敏感性高于经另两种干扰素及顺铂诱导的CaSki细胞,这种效应与CaSki细胞表面黏附分子CD54及CD40的表达强度呈正相关,表现出剂量-效应关系.结论 重组高效复合干扰素能增加CaSki细胞CD54分子及CD40分子表达强度,从而增加CaSki细胞对特异性效应细胞杀伤作用的敏感性,该作用强于同类型干扰素、普通重组Ⅰ型干扰素及化疗药物.
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正常心脏二尖瓣64层螺旋CT表现特征与心动周期时相变化的相关性
目的 探讨64层螺旋CT下正常二尖瓣在心动周期中形态和功能的动态变化特点. 方法对40名心脏正常的成人行64层螺旋CT扫描,重建心动周期10个时相,观察和分析各时相容积再现技术(VRT)二尖瓣的形态,在各时相心脏平行长轴和短轴位上测量二尖瓣环直径和面积、二尖瓣开口直径和面积、以及二尖瓣前、后瓣的开放角度. 结果二尖瓣环大直径和面积、二尖瓣口大直径和面积及大前、后瓣开放角度分别为(29.3±3.5) mm和(962.8±149.3) mm2、(36.5±7.3) mm和(647.0±162.3) mm2、(68.3±5.6)°和(55.9±5.4)°,均见于舒张晚期.二尖瓣环小直径和面积及前、后瓣开放角度见于收缩中期,分别为(9.8±1.7) mm和(76.2±27.3) mm2、(11.5±2.8)°和(9.6±2.8)°.结论 64层螺旋CT可动态显示心动周期不同时相二尖瓣的形态特征及定量测量二尖瓣的功能.
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物理学和生物学指标与急性放射性肺炎发生的相关性研究
目的 研究血清转化生长因子-β1(TGF-β1)、白介素-6(IL-6)、血栓调解蛋白(TM) 水平以及剂量体积因素与急性放射性肺炎(ARP) 发生的相关性.方法 对27例肺癌、16例食管癌、1例胸腺瘤患者按常规给予三维适形放射治疗(3DCRT)和化疗;其中 19例采用同步放化疗,25例采用序贯化放疗.放疗前和放疗30 Gy时用酶联免疫吸附法(ELISA) 检测患者血清IL-6、TGF-β1、TM水平.依照美国国立肿瘤研究所CTCAE v3.0标准,为ARP评级,评价≥2级定为ARP.并分析TGF-β1、IL-6、TM 水平、肺功能指标以及剂量体积因素与ARP 发生率的关系.剂量体积因素包括平均肺剂量(MLD)和Vx(指照射总剂量高于x Gy的肺体积占全肺总体积的百分数).结果 44例患者中有15 例发生了ARP,9例2级,6例3级. ARP发生与未发生组照射30 Gy时TGF-β1水平(pg/mL)平均值分别为:(866±270 vs 396±338,P=0.000).ARP发生率在年龄＜60和≥60岁组分别是:46.15 %(12/26)和16.67%(3/18)(P=0.042);有、无吸烟史组是:45.45%(15/33)和0%(0/11)(P=0.017);在照射30 Gy后TM降低与增高组是:45.16%(14/31)和7.69%(1/13)( P=0.041);在MLD (Gy)＜10和≥10组是:16.67%(5/25)和55%(10/19)(P=0.024);在V30＜13%和≥13%组是22.22%(6/27)和52.94%(9/17)(P=0.036).V20＜25%与≥25%之间,ARP发生率差异无统计学意义.多因素分析提示MLD(P=0.012)和放疗30 Gy时TGF-β1 水平(P=0.001)与ARP的发生有相关性.结论 TGF-β1 以及MLD是有意义的预测ARP的早期指标,第1秒用力呼气量(FEV1)实测/预测值%的大小对 ARP的严重程度有一定的预测价值.
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人端粒酶催化亚单位启动子调控自杀基因HSV-TK靶向性表达治疗肺癌的体内外实验研究
目的 研究人类单纯疱疹病毒的胸苷激酶(HSV-TK)/更昔洛韦(GCV)治疗系统在人端粒酶催化亚单位(hTERT)启动子的调控下对肺癌细胞A549的体外靶向性增殖抑制作用和对裸鼠体内A549移植瘤的治疗效果.方法 ①用已构建的hTERT启动子和SV40启动子调控的TK基因表达质粒pGL3-hTp-TK和pGL3-SV40-TK转染端粒酶阳性的人肺腺癌细胞A549及端粒酶阴性的人胚肺细胞MRC-5,RT-PCR方法检测转染细胞中TK基因的表达情况;②MTT法检测GCV对上述转染细胞体外增殖的抑制作用;并应用流式细胞仪检测GCV对上述转染细胞凋亡的影响;③将A549细胞接种于裸鼠皮下,研究pGL3-hTp-TK/GCV和pGL3-SV40-TK/GCV对移植瘤的体内生长抑制作用.结果 ①转染pGL3-SV40-TK的A549和MRC-5细胞均有TK mRNA表达,转染pGL3-hTp-TK的A549细胞也有TK mRNA表达,但MRC-5细胞无TK mRNA表达;②GCV对转染pGL3-SV40-TK的A549、MRC-5细胞和转染pGL3-hTp-TK的A549细胞的体外增殖均有明显抑制作用,对转染pGL3-hTp-TK的MRC-5细胞无明显抑制作用;转染pGL3-SV40-TK 和pGL3-hTp-TK的A549细胞经GCV处理后细胞凋亡指数(分别为21.58%和23.19%)均显著高于转染pGL3-hTp的A549细胞及空白对照, 转染pGL3-SV40-TK的MRC-5细胞凋亡指数(9.35%)显著高于对照组,而转染pGL3-hTp-TK的MRC-5细胞凋亡指数(0.88%)无明显升高;③pGL3-SV40-TK/GCV和pGL3-hTp-TK/GCV治疗系统对裸鼠A549移植瘤的生长具有明显抑制作用,抑瘤率分别为46.7%和40.5%,均显著高于各阴性对照组(分别为9.7%,14.3%,7.0%和8.0%).结论 hTERT启动子可以调控HSV-TK基因在肺癌细胞中靶向性表达,HSV-TK/GCV治疗系统在hTERT启动子调控下对肺癌细胞A549的体外增殖和裸鼠体内的移植瘤生长均有明显的抑制作用.
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高转移和低转移人大细胞肺癌细胞株的比较蛋白组学研究
目的 探讨比较人高转移大细胞肺癌细胞株(L9981)和人低转移大细胞肺癌细胞株(NL9980))间蛋白质表达的差异.方法 采用固相pH梯度双向凝胶电泳分离L9981细胞株和NL9980细胞株的总蛋白,用图像分析软件比较分析细胞间的差异表达蛋白质.对13个差异表达的蛋白质点通过胶内酶解,基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALD-TOF-MS/MS)和蛋白质数据库检索进行鉴定.结果 经Image Master软件分析后发现有8个蛋白质点仅在L9981中检测到有表达,8个蛋白质点仅在NL9980中检测到有表达,发现19个蛋白质点在两种肺癌细胞株中均存在,其中9个蛋白质点在L9981中表达量显著高于NL9980,10个蛋白质点在NL9980中表达量显著高于L9981 (P<0.05).通过对差异明显的蛋白质点进行质谱鉴定和蛋白质数据库查询,发现线粒体热休克蛋白和谷胱甘肽合成酶在L9981中的表达被上调,P47蛋白、免疫球蛋白重链可变区、烯醇化酶1和真核翻译起始因子3 在L9981中的表达被下调, 丙酮酸激酶仅在L9981中有表达,WD-40重复蛋白仅在NL9980中有表达.结论 人高、低转移大细胞肺癌细胞株蛋白质组的表达存在明显差异, 鉴定的差异蛋白质多与肿瘤的侵袭转移相关,这些差异蛋白质有可能为进一步发现与肺癌转移相关的分子标志物和阐明肺癌转移的分子机制提供线索.
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小鼠Rnf141多克隆抗体的制备及鉴定
目的 获得小鼠Rnf141多克隆抗体,并对其功能进行初步研究.方法 利用多聚酶链反应(PCR)扩增获得鼠Rnf141基因并且与原核表达载体pGEX-5X-3(含GST标签)进行重组,将重组质粒转入大肠杆菌BL21(DE3),经1 mmol/L IPTG在25 ℃条件下诱导,用SDS-PAGE检测,获得GST-Rnf141融合蛋白高效表达后,通过Glutathione Sephorase 4B纯化.纯化的融合蛋白免疫家兔制备多克隆抗体,通过Western blot和免疫组织化学的方法检测抗体的特异性.结果 成功构建了重组质粒pGEX-Rnf141,该质粒能在大肠杆菌BL21(DE3)中表达融合蛋白GST-Rnf141,融合蛋白表达量约占细菌总蛋白的46%,制备的多抗效价达1∶128000,它可以与GST-Rnf141重组蛋白和小鼠不同脏器组织Rnf141蛋白发生特异的抗原抗体反应,在脾脏和脑组织中Rnf141蛋白表达量较高.结论 成功制备小鼠Rnf141多克隆抗体,该抗体为研究Rnf141的表达与功能提供了有用的工具.
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非吸烟孕妇被动吸烟状况及干预效果研究
目的 了解非吸烟孕妇被动吸烟状况,对其相关知识、态度和行为进行干预,并对干预效果进行评价.方法 采用问卷形式对成都市两家妇幼保健医院128名非吸烟孕妇被动吸烟的相关知识、态度和行为进行调查,同时对她们进行为期16周的干预,并对干预效果进行评价.结果 干预后孕妇对于被动吸烟的知识、态度均有显著改善(P<0.000),对待丈夫或家人在自己面前吸烟所采取的行为也有显著改善(P<0.05).电话咨询、宣传小册子和医生咨询是孕妇易于接受的健康教育形式.结论 采取综合性的干预措施可以改变非吸烟孕妇关于被动吸烟的知识、态度和行为.
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PVL大鼠JAKs-STATs信号转导的研究
目的 探讨新生大鼠脑室周围白质软化(PVL)模型侧脑室室管膜下区和脉络丛酪氨酸蛋白激酶(JAKs)-信号转导和转录激活因子(STATs)信号转导途径的变化.方法 采用右侧颈总动脉结扎并4 h 6%氧气处理,建立2日龄SD大鼠缺氧缺血(HI)PVL模型,对照组进行假手术,不进行缺氧处理.HI后0 h、3 h、6 h、12 h、1 d、3 d、7 d处死动物,用免疫组化方法检测室管膜下区和脉络丛P-JAK2、P-STAT3表达的变化.结果 与对照组相比,实验组大鼠P-JAK2、P-STAT3明显升高,P-JAK2、P-STAT3在HI后即刻就有表达,1 d达峰,7 d仍高于对照组水平,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 HI后侧脑室室管膜下区和脉络丛JAKs-STATs途径被激活,该途径可能参与PVL的病理生理过程.
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负载银离子的羟基磷灰石/二氧化钛纳米复合材料的成骨细胞相容性研究
目的 观察添加负载银离子的羟基磷灰石/二氧化钛纳米复合材料(nAg-HA/TiO2)对成骨细胞超微结构及细胞活性的影响.方法 将成骨细胞分别在添加了不同浓度(10 μg/mL～500 μg/mL)的nHA或nAg-HA/TiO2的培养基中培养2、6、8、24、72及120 h,通过透射电镜观察、细胞计数及MTT法检测细胞超微结构、细胞增殖及线粒体活性,并计算单位细胞呼吸率.结果 与空白对照组相比,纳米材料组细胞增殖及总体线粒体活性均受到抑制(P<0.05),且纳米材料浓度越高,对细胞的抑制作用越显著.但纳米材料组细胞呼吸率即单位细胞线粒体活性较高(P<0.05).纳米材料对细胞超微结构无明显影响;同浓度nAg-HA/TiO2组与nHA组之间各项检测结果的差异无统计学意义(P>0.05).结论 nAg-HA/TiO2的成骨细胞相容性与nHA近乎相同.
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阿魏酸哌嗪对TGF-β1诱导肾成纤维细胞表型活化的影响
目的 观察阿魏酸哌嗪对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导肾成纤维细胞表型活化的影响,探讨其抗肾间质纤维化的可能机制.方法 体外培养正常大鼠肾脏成纤维细胞(NRK-49F),利用MTT观察阿魏酸哌嗪对TGF-β1诱导细胞活力的影响;免疫细胞化学法观察阿魏酸哌嗪对TGF-β1诱导细胞α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、结缔组织生长因子(CTGF)蛋白表达的影响;实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(real time RT-PCR)检测阿魏酸哌嗪对TGF-β1诱导细胞α-SMA及CTGF mRNA表达的作用,双抗体夹心ABC-ELISA法检测阿魏酸哌嗪对TGF-β1诱导细胞上清Ⅰ型胶原(Col Ⅰ)、纤维连接蛋白(FN)表达的影响.结果 TGF-β1可以显著增加大鼠肾脏成纤维细胞活力,上调细胞α-SMA、CTGF蛋白和mRNA的表达以及Col Ⅰ、FN的表达.与TGF-β1刺激组相比,阿魏酸哌嗪能部分抑制TGF-β1诱导的细胞活力增加、α-SMA、CTGF的表达和细胞外基质(ECM)的合成.结论 阿魏酸哌嗪可以在一定程度上拮抗TGF-β1诱导的肾纤维化效应.
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盐亭食管癌高发区饮食对大鼠氧化损伤的影响
目的 探讨盐亭食管癌高发区饮食对大鼠氧化损伤的影响.方法 将30只SD雄性大鼠按体质量随机分为3组,分别喂饲大鼠常规饲料、成都食管癌低发区饮食及盐亭食管癌高发区饮食,1月后处死动物,快速取出肝脏和食管组织称重、匀浆、低温离心后分离出上清液,用试剂盒分别测定大鼠肝脏和食管组织上清液中一氧化氮(NO)、丙二醛(MDA)的含量和超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、一氧化氮合酶(NOS)的活性.结果 成都食管癌低发区饮食组大鼠肝脏和食管组织中各个指标与大鼠常规饲料对照组相应结果相似,其差异没有统计学意义(P>0.05).盐亭食管癌高发区饮食组与成都食管癌低发区饮食组相应指标相比较,前者肝组织中NO、MDA的含量和NOS活性升高(P<0.01),CAT、GSH-Px、SOD的活性降低(P<0.01);而其食管组织中仅有MDA含量升高(P<0.05)和CAT活性降低(P<0.01),其他指标的差异则没有统计学意义(P>0.05).结论 盐亭食管癌高发区饮食具有促进大鼠肝脏氧化损伤的作用,可能具有促进大鼠食管组织氧化损伤的作用.
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神经生长因子对正常和放化疗复合损伤小鼠粒-巨噬系血发生的影响
目的 探讨神经生长因子(NGF)对小鼠粒-巨噬系血细胞发生的影响.方法 采用流式细胞术、祖细胞集落分析、血细胞计数、实时荧光定量PCR及酶联免疫吸附分析法(ELISA),检测注射NGF对正常和经60Coγ射线照射+腹腔注射环磷酰胺(放化疗复合损伤)小鼠骨髓细胞(BMC)增殖周期、粒-巨噬系祖细胞集落(CFU-GM)产率、外周白细胞总数、骨髓细胞粒-巨噬系集落刺激因子(GM-CSF)mRNA的表达及血清中GM-CSF和IL-3浓度的影响.并观察在体外培养体系中加入不同浓度的NGF时CFU-GM集落产率的变化及与GM-CSF的关系.结果 在体外CFU-GM培养中,加入重组小鼠GM-CSF (rmGM-CSF)时,NGF剂量依赖性地提高集落产率.注射NGF[7.5 μg/(kg·d)或10 μg/(kg·d)]持续7 d,正常和放化疗复合损伤小鼠外周血白细胞总数、小鼠骨髓细胞中S+G2/M期细胞比例、CFU-GM集落产率显著高于注射生理盐水的对照组;放化疗复合伤小鼠血清中的GM-CSF和IL-3也显著升高.结论 NGF可与体外培养体系中的造血刺激因子协同作用,促进正常和放化疗复合损伤小鼠CFU-GM的形成.NGF在体内可促进正常和放化复合损伤小鼠骨髓细胞进入有丝分裂,促进造血干细胞向粒-巨噬系方向分化,促进CFU-GM的形成,提高外周血白细胞数;NGF还可刺激放化疗复合损伤小鼠体内GM-CSF和IL-3的分泌,这可能是NGF促进放化疗复合损伤后粒-巨噬系造血恢复的途径之一.
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人骨形成蛋白9基因修饰的兔骨髓间充质干细胞异位成骨实验研究
目的 探讨人骨形成蛋白9(human bone morphogenetic 9, hBMP-9)基因治疗与骨组织工程技术相结合的可行性.方法 采用阳离子脂质体介导hBMP-9基因转染兔骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells, MSCs),荧光显微镜观察及流式细胞学检测,碱性磷酸酶(ALP)活性定量测定及Von Kossa's钙结节染色;MSCs与聚乳酸-羟基乙酸(polylactide-co-glycolide, PLGA)支架共培养,荧光显微镜及扫描电镜观察MSCs在PLGA上的黏附、生长情况;将转染与未转染hBMP-9基因的MSCs分别与PLGA支架复合培养,构建组织工程化骨并回植兔肌肉内,组织植入4、8周后进行HE染色观察.结果 流式细胞仪测定质粒转染率为34.15%;转染组MSCs的ALP活性较未转染组明显增高(P<0.01),Von Kossa's钙结节染色比较转染细胞形成的钙结节明显大于未转染组;荧光显微镜及扫描电镜观察见MSCs在PLGA支架上的黏附、生长良好;异位回植术后4、8周组织HE染色见肌肉内有新生骨基质分泌,成骨面积定量分析转染组与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05).结论 阳离子脂质体介导的质粒能稳定转染MSCs,BMP-9能刺激MSCs的ALP活性增强,诱导钙结节形成;BMP-9基因转染的MSCs作为一种新型的种子细胞,其与PLGA支架复合用于骨缺损的修复具有较强的可行性.
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白藜芦醇对重症急性胰腺炎大鼠肠黏膜屏障的保护作用
目的 探讨白藜芦醇对重症急性胰腺炎(SAP)大鼠肠黏膜屏障功能的保护作用. 方法 24只成年雄性SD大鼠随机分为假手术组(SO组)、重症急性胰腺炎组(SAP组)、白黎芦醇治疗组(RES组).各组大鼠均于制模后6 h采集标本.动态浊度法检测血清内毒素含量,TUNEL法检测肠黏膜上皮细胞凋亡率,RT-PCR检测凋亡调控基因Bax、Bcl-2 mRNA表达,激光共聚焦显微镜检测肠黏膜细胞线粒体膜电位变化.结果 RES组血清内毒素水平和肠黏膜细胞凋亡指数均低于SAP组(P<0.01).RES组Bax mRNA表达低于SAP组(P<0.01),Bcl-2 mRNA表达高于SAP组(P<0.01).RES组线粒体膜电位高于SAP组(P<0.01).结论 白藜芦醇可通过抑制肠黏膜上皮细胞凋亡,维持肠黏膜屏障的完整性,从而防止SAP时细菌和内毒素的移居.
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hTR-siRNA腺病毒对裸鼠人宫颈癌移植瘤的治疗作用
目的 探讨人端粒酶RNA(hTR)-siRNA腺病毒对裸鼠人宫颈癌移植瘤的治疗作用及其机制.方法 将HeLa细胞注射到裸鼠的右腋皮下建立肿瘤模型,27 d后将荷瘤裸鼠随机分为4组,采用瘤体内多点注射方式,分别向各组荷瘤鼠注射0.1 mL的DMEM、Ad-NT-siRNA(1013 pfu/L)、Ad-hTR-siRNA (1013 pfu/L)或顺铂(1.20 g/L), 以后每隔3 d注射1次, 连续15 d.观察注射腺病毒后移植瘤的体积变化、毒副作用.治疗结束后间隔7 d处死动物,剥离出肿瘤组织称重.切取瘤组织做TUNEL染色测定组织的凋亡指数.结果 将HeLa细胞移植到裸鼠皮下,成瘤率为100%.与Ad-NT-siRNA处理组相比,Ad-hTR-siRNA处理组的裸鼠移植瘤的体积和质量分别降低45.48%和34.68%,TUNEL分析显示凋亡细胞量约11.8%;但是Ad-hTR-siRNA的抗肿瘤作用不及顺铂.结论 hTR-siRNA腺病毒能够明显抑制裸鼠人宫颈癌移植瘤的生长,其抗肿瘤机制与诱导肿瘤细胞凋亡、坏死有关.
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PVA/n-HA+PA66 生物材料体内植入后机体免疫状态的初步研究
目的 探讨动物体内植入生物材料后机体免疫状态的改变.方法 将生物材料聚乙烯醇水凝胶(PVA)/纳米羟基磷灰石(n-HA)+聚酰胺66(PA66)植于大鼠皮下,分别于术后第2、4、6周行局部组织学切片观察,检测大鼠血液中CD3、CD4+、CD8+含量以及脾细胞中IL-1、IL-6、TNF-α的含量并与术前对比.结果 大鼠血液中CD3、CD4+、CD8+的含量和脾细胞中IL-1,IL-6,TNF-α的含量在第2、4、6周时与正常组对照差异无统计学意义.组织学切片显示血管和纤维组织进入复合材料网孔中,与复合材料连为一体,未产生排斥反应.结论 PVA/n-HA+PA66生物材料植入动物体内后未引起动物机体的免疫排斥反应,未干扰机体的免疫系统,是一种无毒、易被机体耐受的生物材料.
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黏液表皮样癌中TSP-1表达与肿瘤血管生成及其生物学行为的关系研究
目的 探讨黏液表皮样癌中凝血酶敏感蛋白-1(TSP-1)与肿瘤血管生成及其生物学行为之间的关系.方法 采用免疫组织化学SP法检测45例黏液表皮样癌中微血管密度(MVD)值和TSP-1的表达.结果 黏液表皮样癌中TSP-1阳性表达率为57.78%(26/45), 绝大多数表达于肿瘤细胞的胞浆中,少数表达于肿瘤细胞外基质.在45例黏液表皮样癌组织中平均MVD为(60.68±19.84)/100倍视野,具有TSP-1强表达的肿瘤组织中显示MVD值较低, TSP-1的免疫活性与MVD间呈显著负相关(rs=-0.942, P<0.001).结论 TSP-1在黏液表皮样癌中呈较高表达与黏液表皮样癌中的血管生成呈负相关,可能有抑制黏液表皮样癌中血管生长的作用.
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食管及贲门癌多层螺旋CT灌注成像的初步研究
目的 运用首次通过法多层螺旋CT(MDCT)灌注成像前瞻性评价食管及贲门癌的肿瘤血管生成.方法 纳入经病理证实且未接受抗癌治疗的44例食管及贲门癌患者进行MDCT灌注成像,另纳入21例食管正常的肺癌患者作为对照组.采用t检验比较食管癌组与对照组、鳞癌组与腺癌组、转移组与未转移组间的灌注参数有无差异. 结果食管癌组较对照组有更高的血容量(BV)、血流量(BF)、强化峰值(PEI),更短的峰值到达时间(TTP),其差异有统计学意义(P<0.05);鳞癌组与腺癌组的灌注参数差异没有统计学意义(P>0.05);而转移组较未转移组具有更短的TTP及更高的BF,其差异有统计学意义(P<0.05). 结论 MDCT灌注成像可用于评价食管及贲门癌的肿瘤血管生成;肿瘤的血管分布或血管生成与其组织学类型无关;高BF值及短TTP值可能有助于预测肿瘤转移.
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阿魏酸哌嗪对TGF-β1诱导下肾小球系膜细胞结缔组织生长因子表达及细胞外基质合成的影响
目的 探讨阿魏酸哌嗪(PF)对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导下肾小球系膜细胞结缔组织生长因子(CTGF)及细胞外基质成分表达的影响及其意义.方法 将体外培养正常大鼠肾小球系膜细胞(HBZY-1)分为正常对照组、TGF-β1刺激组、TGF-β1加50、100、200 ng/mL PF干预组.分别利用免疫细胞化学法检测各组细胞CTGF蛋白表达,实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定细胞CTGF mRNA表达量,双抗体夹心ABC-ELISA法检测细胞上清Ⅰ型胶原(Col Ⅰ)、纤维连接蛋白(FN)的含量.结果 CTGF蛋白及mRNA、细胞上清Col Ⅰ、FN表达量在TGF-β1组较正常组明显升高(P<0.05),阿魏酸哌嗪组上述指标均低于TGF-β1组(P<0.05).结论 阿魏酸哌嗪能抑制TGF-β1诱导下肾小球细胞外基质(ECM)的合成.其机制可能与下调系膜细胞上CTGF的表达量及功能活性有关.
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基于多因子降维法模型的代谢酶易感基因多态性与乳腺癌患病风险的交互作用研究
目的 运用多因子降维法(MDR)分析代谢酶易感基因多态性对乳腺癌患病风险的交互作用,并评价MDR模型的具体应用.方法 采用配对病例对照研究,共收集按年龄和绝经状态匹配的病例对照对子78对.用PCR-RFLP和多重PCR法分别检测调查对象CYP1A1 MspⅠ、GSTM1以及GSTT1易感基因类型;运用MDR法分析基因-基因交互作用模型;并构建优的乳腺癌的环境及基因的logistic模型.结果 有统计学意义的佳交互作用模型是CYP1A1 MspⅠ突变基因型与GSTT1 null基因型的联合作用(sign检验,P=0.05), 该模型的检验样本平衡准确度为0.5920,交叉效度一致性的结果为10/10.根据MDR分析结果构建的条件logistic回归模型结果显示,被动吸烟、未足月产数以及GSTT1 null基因型和CYP1A1 MspⅠ突变基因型的交互项是乳腺癌的危险因素,Ors分别为12.234(1.7459～85.7279)、 4.554(1.3250～15.6507)和9.597(1.5783～58.3599).结论 将MDR法与参数估计的分析方法相结合,是对肿瘤等慢性非传染性疾病的基因-基因或基因-环境多重病因效应估计的有益尝试.CYP1A1 MSPⅠ突变基因型及GSTT1缺失基因型可能协同干扰雌激素代谢的过程,从而增加了乳腺癌的发生风险.
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成人间活体肝移植受体术前MELD-AS评分与供肝体积大小对受体预后的影响
目的 探讨原发病严重程度与供肝体积大小对成人间活体肝移植预后的影响.方法 2002年1月至2007年1月我中心行成人间活体肝移植70例.按供肝体积大小与受体术前修正终末期肝病模型评分(MELD-AS)分组,分析受体1年生存率与并发症率.结果 受体1年生存率与并发症率分别为87.1%及34.3%.MELD-AS评分为1～13分的病人的生存率在大、小体积供肝组分别是100.0%及83.3%,其并发症率分别是14.3%和16.7%;MELD-AS评分为14～24分的病人的生存率在大、小体积供肝组分别是94.4%和75.0%,其并发症率分别是38.9%和50.0%;MELD-AS评分为25分及以上的病人的生存率在大、小体积供肝组分别是77.8%和25.0%,其并发症率分别是52.9%和50.0%.在MELD-AS评分为25分及以上组内,大、小体积供肝组间的生存率差异有统计学意义(P=0.031).结论 成人间活体肝移植受体术后生存率同时受术前MELD-AS评分和供肝体积大小的影响.大体积供肝将提高术前MELD-AS评分为25分及以上的患者的生存率.
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急性实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠视网膜神经胶质原纤维酸性蛋白的表达
目的 研究急性实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)大鼠视网膜神经胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)的表达变化及其对血-视网膜屏障(BRB)功能的影响.方法 建立大鼠急性EAE模型后8、14、21 d自股静脉注射伊凡思蓝(EB)了解BRB情况,并行视网膜免疫组织化学染色观察GFAP的表达变化. 结果在各时间点对照组大鼠视网膜内渗漏的EB含量明显低于EAE组大鼠(P<0.01);各时间点对照组大鼠视网膜仅在神经节细胞层及神经纤维层见GFAP阳性表达;EAE组在免疫后8 d视网膜神经纤维层、神经节细胞层内GFAP阳性表达增多,内丛状层出现少量表达,免疫后14 d GFAP不仅在神经纤维层及节细胞层中表达增加,内丛状层和内核层中GFAP也大量表达,甚至可见GFAP阳性染色呈丝状贯穿内外核层,免疫后21 d GFAP仍有大量阳性表达主要集中在神经纤维层、神经节细胞层、内丛状层及内核层.结论 急性EAE可导致大鼠BRB破坏,且BRB破坏可能与星形胶质细胞活化密切相关.
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心脏瓣膜置换术患者体外循环期间七氟醚静态膨肺对肺功能的影响
目的 通过给予心脏瓣膜置换术成人患者体外循环(CPB)期间使用含1.0高容许浓度(MAC)七氟醚的空/氧混合气静态膨肺,观察CPB术后肺损伤情况并评价七氟醚是否具有肺功能保护作用.方法 心脏瓣膜置换术成人患者60例,随机分成对照组(CPB期间5 cmH2O气道压静态膨肺,无七氟醚吸入)和七氟醚组(CPB期间相同气道压静态膨肺并吸入1.0 MAC七氟醚).分别于手术切皮(T0)、CPB后1 h、3 h和6 h(T1-3)行血气分析,计算肺泡-动脉氧分压差[D(A-a)O2]、呼吸指数(RI)和氧合指数(OI).结果 两组患者几个时间点间的D(A-a)O2、RI和OI比较差异均无统计学意义.与T0相比,两组患者T1、T2和T3点的D(A-a)O2、RI均明显升高,OI降低,峰值均出现于T3点(P<0.05或0.01).结论 心脏瓣膜置换术患者CPB后均发生肺功能损害,在CPB后6 h内肺功能损害的高峰期出现于CPB后3 h.心脏瓣膜置换术患者CPB期间吸入1.0 MAC七氟醚静态膨肺对CPB心脏手术后诱发的肺损伤并没有临床上的保护作用.
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系统性硬化症患者皮损中Ⅰ、Ⅲ、Ⅴ型胶原的表达及其作用探讨
目的 探讨Ⅰ、Ⅲ、Ⅴ型胶原(Col Ⅰ、Ⅲ、Ⅴ)在系统性硬化症(SSc)患者皮损中的表达、分布及其在发病机制中的作用.方法 采用免疫组化SP法检测36例SSc患者(轻度纤维化9例,中度14例,重度13例)皮损中Ⅰ、Ⅲ、Ⅴ型胶原α1链[α1(Ⅰ)、α1(Ⅲ)、α1(Ⅴ)]的表达(以平均光密度值为半定量检测指标),并以6例正常皮肤作为对照.结果 3种胶原在SSc皮损真皮呈弥漫性分布,在网状层可见深染的α1(Ⅰ)和α1(Ⅲ)团块或条带,α1(Ⅴ)分布则较均匀,在小血管和皮肤附属器周围较多;从对照到SSc轻度、中度、重度纤维化组,α1(Ⅰ)、α1(Ⅲ)和α1(Ⅴ)含量在真皮、小血管和附属器及其周围组织均呈逐渐升高趋势(P均<0.05);在SSc皮损真皮、小血管和附属器及其周围组织中,α1(Ⅴ)在早期即明显升高(80.07±1.80 vs 73.56±2.48,94.23±1.53 vs 85.73±1.70,94.06±1.64 vs 84.65±1.65,P均<0.01),持续整个纤维化过程且增幅较大,α1(Ⅰ)和α1(Ⅲ)升高则较迟,在中、后期显著升高.结论 α1(Ⅴ)先于α1(Ⅰ)、α1(Ⅲ)在SSc早期即开始大量沉积,并持续整个纤维化过程;其含量改变始于真皮小血管和附属器及其周围组织,可能参与SSc血管炎的发生.
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葡萄糖和馒头餐负荷对肥胖和非肥胖的2型糖尿病患者PYY、ghrelin的影响
目的 研究糖负荷和馒头负荷对肥胖和非肥胖的2型糖尿病者血清PYY、ghrelin的影响及二者与胰岛素、血糖的关系.方法 肥胖的2型糖尿病者10例,非肥胖者11例,血糖控制稳定后连续2 d分别进行葡萄糖负荷和馒头餐负荷试验,测定血葡萄糖、胰岛素、PYY和ghrelin水平.结果 ①口服葡萄糖耐量试验中,肥胖和非肥胖组PYY水平均在餐后30 min达到高峰,空腹血清PYY水平分别为(50.79±23.55) pg/mL、(82.15±37.35) pg/mL (P=0.035),空腹ghrelin水平分别为(54.42±24.41) pg/mL、(153.13±111.38) pg/mL (P=0.015),肥胖和非肥胖者的PYY、ghrelin浓度在其他时间点无明显差异.馒头餐耐量试验中,肥胖和非肥胖组PYY水平均在餐后60 min达到高峰,空腹PYY水平分别为(38.51±24.96) pg/mL、(81.35±48.77) pg/mL (P=0.022),空腹ghrelin水平分别为(62.90±25.41) pg/mL,(210.29±93.36) pg/mL (P=0.000),两组在餐后30 min、60 min和120 min的ghrelin浓度无差异.②在所有受试组中空腹PYY、ghrelin水平与腰围、体重指数成负相关,而与腰臀比无相关性.③空腹PYY与胰岛素、血糖没有相关性.空腹ghrelin与胰岛素成负相关(r=-0.591, P=0.005).PYY、ghrelin曲线下面积与胰岛素、血糖曲线下面积均无相关性.④ghrelin浓度与QUICKI正相关,PYY与QUICKI无相关关系.结论 能量摄入相似的情况下,2型糖尿病患者PYY、ghrelin对葡萄糖和馒头餐的反应不同.空腹PYY、ghrelin水平与腰围、体重指数成负相关,而与腰臀比无相关性.空腹ghrelin与空腹胰岛素负相关、与胰岛素敏感指数正相关.
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不同剂量琥珀胆碱对七氟醚诱导气管插管条件和自主呼吸恢复时间的影响
目的 比较七氟醚吸入诱导时给予不同剂量琥珀胆碱后的气管插管条件和自主呼吸恢复时间.方法 采用前瞻性随机双盲试验.择期全麻手术患者90例,ASAⅠ～Ⅱ级,按琥珀胆碱剂量随机分为3组,每组30例.七氟醚吸入诱导后静脉注射琥珀胆碱0.3、0.6、1.0 mg/kg插管,观察气管插管条件和自主呼吸恢复时间.结果 各组患者均顺利完成插管.静脉注射0.3、0.6和1.0 mg/kg琥珀胆碱后分别有16.7%、56.7%、60.0%患者插管条件达到优秀,0.6和1.0 mg/kg组间差异无统计学意义且均显著优于0.3 mg/kg组;3组自主呼吸恢复时间分别为(128±44) s、(154±39) s、(235±60) s,1.0 mg/kg组显著高于另两组,0.3 mg/kg组和0.6 mg/kg组差异无统计学意义.结论 七氟醚诱导时0.6 mg/kg琥珀胆碱可提供满意气管插管条件且自主呼吸恢复迅速.
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8例胎盘绒毛膜血管瘤临床分析
胎盘绒毛膜血管瘤是发生于胎盘的原发性良性肿瘤,对母亲尤其是胎儿可产生不良影响.本研究对我院2004年10月至2007年4月收治的8例病例进行分析、总结,现报道如下.1 临床资料
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以假性性早熟、溢乳为主要临床表现的原发性糖皮质激素抵抗综合征
报告1例以假性性早熟、溢乳为主要临床表现的原发性糖皮质激素抵抗综合征(PGRS)患者.患儿,男,7岁,因发现乳房长大、身高增长快13+月,体毛增多7+月,声音变粗3+月入院.查体:身高135 cm,体质量31 kg,语音低沉,全身皮肤色素沉着,发际低,体毛增多,双侧乳房发育,乳晕色深,溢乳,阴茎色素沉着,成人型,长约6 cm,阴毛Tanner 3级,睾丸约1 cm×2 cm,质软.无阳性家族史.否认外源性激素服用史.实验室及辅助检查:血清转氨酶升高但肝炎标志物均为阴性;多次血清皮质醇升高但生理波动存在,血浆ACTH正常或轻度升高,血清E2、P、T、LH、FSH、脱氢表雄酮水平正常,硫酸脱氢表雄酮及血清泌乳素水平升高,尿游离皮质醇正常,尿双氢睾酮水平升高.GnRH兴奋试验示无反应;胰岛素低血糖刺激试验反应正常,地塞米松(DEX)抑制试验示血清皮质醇及血浆ACTH均能被0.5 mg DEX抑制.骨龄13岁,肾上腺及垂体MRI未见异常,乳腺B超示双侧乳腺增生.因此PGRS临床诊断明确.给予DEX 0.75～1.0 mg/d口服,2月后溢乳症状未缓解,故加用溴隐亭1.25～3.75 mg/d治疗.随访24月,皮肤色素沉着明显减轻,外生殖器及乳房无进一步发育,溢乳症状消失,声音低沉有所缓解,骨龄增长速度减慢,但多毛症状无明显缓解,未发现长期服用糖皮质激素的副作用.
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患侧甲状腺腺叶切除的临床研究
目的 探讨甲状腺单发良性肿瘤行患侧腺叶切除术后甲状腺功能、对侧腺叶大小及血流量的变化.方法 回顾性分析我院于2004年1月至2005年3月因单发良性肿瘤行甲状腺患侧叶切除术患者112例,术后1月、6月、12月、18月及24月检测甲状腺功能、对侧腺叶体积与血流量,并分别与术前资料进行分析,结合文献对甲状腺良性肿瘤行患侧叶切除的安全性进行临床评估.结果 甲状腺患侧叶切除术后,对侧叶无包块复发,甲状腺功能基本正常(甲低发生率1.7%,均呈一过性,且无需替代治疗),对侧腺体体积较术前曾有轻度增大但差异无统计学意义(P>0.05);甲状腺上动脉血供明显增加(P<0.05).结论 甲状腺侧叶切除术后,对侧腺体可代偿甲状腺功能且体积无明显长大,其原因可能与腺体血供增加有关.
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419例肝组织活检的结果分析与临床意义
目的 探讨肝穿刺活检对肝脏疾病病因诊断的意义.方法 对我科419例肝炎、肝功异常及肝硬化的住院患者采用细针穿刺法进行肝活检,分析肝功损害的病因及其病理情况. 结果①419例中,穿刺成功418例,成功率为99.8%.术后并发症有穿刺部位疼痛23例(5.5%)及出血3例(0.72%).②经病理学确诊病因194例,其中病毒性肝炎175例(90.2%),以乙肝为主(87.1%),丙肝仅6例;非病毒性肝损害分别是脂肪肝14例、自身免疫性肝病4例及肝脓肿1例.③乙肝患者肝组织病原学与血清病原学的诊断符合率是63.1%,其炎症活动度以G1(43.2%)和G2(28.6%)为主,而纤维化分期则以S1 (48.4%)为主.丙肝患者肝组织病原学与血清病原学的符合率是33.3%(6/18),其病变程度以G1(57.9%)和S1(57.9%)为主.结论 本组肝穿病理活检以乙型肝炎占首位,且病理改变较轻.细针穿刺肝活检安全可行,可为临床诊断提供重要线索.但临床与病理诊断仍存在差异,并且有部分肝功异常及肝硬化患者经肝穿病理检查后仍原因不明.
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神经鞘瘤的超声表现特征及其诊断价值
目的 分析神经鞘瘤的超声表现,总结其超声声像图特征以提高超声诊断水平.方法 回顾性分析50例经手术病理证实并有完整超声图文资料的神经鞘瘤的分布、超声二维声像图特征及彩色多普勒血流成像特点.结果 50例神经鞘瘤均为单发,大径1.30～12.00 cm,平均大径(4.57±2.42) cm,良性94%(47/50),恶性6%(3/50);主要分布在颈部38%(19/50)、腹膜后26%(13/50) 及四肢24%(12/50),余12%(6/50)散在分布于甲状腺、乳腺、肝、胃等器官;72%(36/50)肿瘤出现在神经干、大血管旁.88%(44/50)肿瘤有清晰包膜,3例恶性者边界欠清楚,形态欠规则.96%(48/50)肿瘤内实质部份以弱回声为主,92%(46/50)内部回声不均匀,26%(13/50)伴大小不等的极低回声区或液性暗区;50%(25/50)肿瘤内彩色多普勒显示有彩色血流信号,测量其中11例肿瘤内血流频谱皆呈高阻型.结论 形态规则、有包膜、实质呈不均匀弱回声、易囊性变、彩色血流信号常见、高阻型动脉血流频谱、位于神经干及大血管旁为神经鞘瘤相对特征性的超声表现,具有一定的诊断价值.
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通脉注射液对抗心肌缺血的实验研究
目的 研究通脉注射液(简称通脉液)主治缺血性心脑血管疾病的药理学基础.方法 建立麻醉犬结扎左冠状动脉前降支(LAD)所致的心肌缺血模型、垂体后叶素引起的大鼠急性心肌缺血模型、豚鼠离体心脏灌流心肌缺血模型、心肌细胞体外培养的缺氧缺糖模型,了解通脉液抗心肌缺血的作用.结果 通脉液在麻醉犬结扎LAD所致的心肌缺血模型上能显著缩小心肌梗塞范围,缓解缺血心肌心外膜心电图ST段的抬高,对心肌的耗氧指数无明显影响;能显著拮抗垂体后叶素所致离体豚鼠心脏冠脉流量的减少;也能显著对抗由垂体后叶素引起的大鼠急性心肌缺血所致的心电图ST段的改变,呈浓度效应关系;对体外心肌细胞培养在缺氧缺糖条件下所致的损伤有明显保护作用.结论 通脉液具有良好的抗心肌缺血的作用.
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西安地区耐亚胺培南铜绿假单胞菌中金属β-内酰胺酶的检测
目的 检测西安地区耐亚胺培南铜绿假单胞菌(Imipenem-resistant Pseudomonas aeruginosa,IRPA)中金属β-内酰胺酶的基因型,分析产酶株的耐药特性.方法 收集西安地区6所三级甲等医院分离到的非重复性IRPA,采用IPM-EDTA纸片增敏法筛选产金属β-内酰胺酶的IRPA,PCR法检测产酶阳性株的基因型,并对其耐药性进行分析.结果 IPM-EDTA纸片增敏法检出产金属β-内酰胺酶IRPA 21株,检出率18.58%,其中包括6株产VIM型金属酶菌株,6菌株对几乎所有β-内酰胺类抗生素均耐药.结论 西安地区可能存在产VIM型金属酶的IRPA,但多数IRPA对亚胺培南耐药的机制可能为多种机制共同作用的结果;产金属酶的IRPA为多重耐药菌,具有极大的危险性.
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脑膜炎奈瑟菌外膜蛋白NspA基因重组的构建和表达
目的 构建脑膜炎奈瑟菌外膜蛋白NspA基因重组子,实现其在大肠杆菌的高效表达.方法 提取脑膜炎奈瑟菌标准株基因组DNA,PCR扩增NspA基因,插入表达质粒载体pET-30c中,构建pET-NspA重组子,转化大肠杆菌BL21 (DE3),异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG) 诱导重组蛋白表达,SDS-PAGE和Western blot检测表达蛋白,镍琼脂糖凝胶纯化NspA 融合蛋白.结果 获得了脑膜炎奈瑟菌NspA基因的表达重组子,得到NspA诱导表达蛋白并进行了初步纯化.结论 成功构建了脑膜炎奈瑟菌NspA基因的表达重组子,实现了该基因在大肠杆菌中的高效表达,为研究该蛋白的免疫学性能、制备抗体和研制预防脑膜炎的疫苗奠定了基础.
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肝脏单个转移瘤大分割图像引导放疗中6MV-和15MV-X线放疗计划的剂量学比较
目的 比较6MV-和15MV-X线肝脏单个转移瘤大分割放疗的剂量学差异.方法 应用非常规野公式计算出6MV-和15MV-X线计划的各项放射物理参数,通过剂量-体积直方图比较10例患者的6MV-和15MV-X线放疗计划中的放射物理参数. 结果两计划中放射靶区(PTV和GTV)的剂量指数(Dmean、Dmax、Dmin、D95、D5)以及剂量均匀性/非均匀性指数(HI/IHI)之间的差异没有统计学意义.正常肝脏所受照射剂量(V5、V10、V20、V30、V50)以及Dmean在二者间差异也无统计学意义.结论 就肝脏转移瘤的大分割放射治疗而言,实际应用的6MV-和15MV-X线在靶区覆盖、剂量均匀性和正常肝脏所受剂量上没有明显差异,均能满足临床工作的需要.
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氨溴索对低氧性肺动脉高压大鼠肺内硝基酪氨酸表达的影响
目的 观察低氧性肺动脉高压大鼠肺组织中硝基酪氨酸(NT)表达的变化,探讨抗氧化剂氨溴索对低氧性肺动脉高压的作用及机制.方法 将21只雄性Wistar大鼠随机分为对照组、低氧组和氨溴索预防组.以常压低氧3周制备肺动脉高压模型,测量各组大鼠平均肺动脉压(mPAP)和右心肥厚指数(RVHI);对大鼠肺组织切片采用HE染色,经图像分析技术测定肺小动脉管壁厚度占血管外径的百分比(WT%)和管壁面积占血管总面积的百分比(WA%);采用免疫组化法观察3组大鼠肺小动脉管壁NT表达的变化.结果 ①低氧组mPAP(22.84±1.79) mmHg(1 mmHg=0.1333 kPa)和RVHI(29.78±1.07)%与对照组mPAP(16.67±0.97) mmHg和RVHI(24.22±0.48)%相比,差异有统计学意义(P<0.01);预防组mPAP(17.90±1.28) mmHg和RVHI(26.38±0.14)%与低氧组相比,差异也有统计学意义(P<0.01).②低氧组WT%(24.96±3.70)%和WA%(73.31±6.51)%与对照组WT%(14.19±2.61)%和WA%(46.67±7.42)%相比,差异有统计学意义(P<0.01);预防组WT%(15.05±2.00)%和WA%(49.21±9.89)%与低氧组相比,差异也有统计学意义(P<0.01).③ 低氧组大鼠近端肺小动脉管壁的NT染色强度(1.52±0.07)与对照组(1.00±0.00)相比,差异具有统计学意义(P<0.01);预防组大鼠近端肺小动脉管壁NT染色强度(1.32±0.04)与低氧组比较,差异也有统计学意义(P<0.01).3组大鼠远端肺小动脉管壁NT染色强度无明显变化(P>0.05).结论 氨溴索具有预防低氧性肺动脉高压的作用,其作用机制与其抑制氧化反应有关.
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高效阴离子色谱法分离测定蜂蜜和保健食品多糖水解产物中的单糖组成
目的 建立分离测定8种单糖成分的高效阴离子色谱法. 方法在AminoTM PAC PA-10 (2×250 mm)离子色谱分离柱上,用10.0 mmol/L NaOH溶液作为流动相,在Au工作电极和pH参比电极的脉冲安培检测器上,分离测定八种单糖. 结果各种单糖在0.1～5.0 μg/mL浓度范围内线性良好,方法检出限2～26 μg/L,标准溶液测定的保留时间和峰面积相对标准偏差分别为0.34%～7.42%和0.02%～2.16%.用本法测定了蜂蜜和保健食品多糖水解产物中的单糖组分,取得较为满意的结果,平均加标回收率为81.4%～122.0%. 结论该方法无需衍生,具有较高的灵敏度和精密度,适合于蜂蜜和保健食品多糖水解产物中单糖的测定.
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人精浆小分子抗菌肽的分离鉴定
目的 从人精浆中分离小分子抗菌肽,探讨精浆的抗菌机制.方法 收集正常人精液,室温液化后10 000 r/min离心10 min去除精子得到精浆.采用琼脂糖弥散法检测抗菌活性,采用对大肠杆菌(ATCC25922)的抗菌活性作为检测指标,通过阳离子交换柱SP-Sepharose分离,将有抗菌活性的洗脱产物冻干后用去离子水溶解,经过AKTA Superdex 75柱分离,收集小分子部分,应用反相高效液相色谱技术分离纯化多肽(RP-HPLC分离),检测各峰抗菌活性,基质辅助激光解吸质谱法检测相对分子质量,并鉴定其抗菌活性.结果 从人精浆中初步分离出多个相对分子质量小于10×103的肽混合物, 其中部分与精液凝固蛋白Ⅰ片段相对分子质量大小一致,命名为HSLAMs(Human semen low-molecular-mass antibacterial mixtures),具有抗大肠杆菌的活性.结论 HSLAMs可能是人精浆天然免疫机制中重要的效应分子,精液凝固蛋白Ⅰ可能是其来源之一.
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阳离子脂质体包裹bFGF作为免疫佐剂的制备工艺研究
目的 考察阳离子脂质体包裹碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的制备工艺以及在小鼠体内的免疫效应.方法 通过优化如脂质配方、药脂比、挤压次数、冻融次数以及孵化温度等各个工艺参数在保持bFGF高活性的前提下来提高bFGF的包封率.分别用bFGF阳离子脂质体、bFGF弗氏佐剂以及PBS分3组免疫4周龄Balb/c小鼠,连续免疫4次,ELISA测定各组小鼠血清的抗体滴度.结果 优化得到脂质体配方为二油酰磷脂酰乙醇胺(DOPE)∶1,2-二油酰-3-三甲铵基丙烷(DOTAP)=2∶1;药脂比为7.5%;液氮速冻,4 ℃孵化60 min,反复冻融6次;过膜挤压10次.通过工艺的改进,bFGF在脂质体中的包封率得到显著提高,达到50%.免疫实验中通过与弗氏佐剂免疫效果比较,阳离子脂质体作为佐剂产生的bFGF的抗体滴度为1∶3200,免疫效果比较令人满意.结论 免疫实验中发现阳离子脂质体作为免疫佐剂,具有很好的佐剂效应.
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腹膜后巨大子宫颈上皮样平滑肌瘤变性1例报告
患者,女,45岁,G4P1+3.因"尿频3月,发现盆腔包块1月"入院.3个月前开始出现尿频、尿不尽,无尿急、尿痛、腹痛、阴道异常流血、流液等症状.在院外予以"中药"治疗后症状无明显改善.
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肺腺癌细胞A549 hnRNP B1基因RNA干扰的体外研究
目的 体外研究特异的小干扰RNA(siRNA)对肺腺癌细胞A549 hnRNP B1 基因表达及生长的抑制作用. 方法设计和构建由H1启动子驱动产生的特异的hnRNP B1 siRNA 表达质粒,转染至A549细胞,荧光定量PCR法及Western blot检测hnRNP B1基因的表达,MTT法检测该表达质粒转染后对A549细胞生长的影响.结果 针对hnRNP B1 基因构建的重组质粒具有明显的干扰效果,受特异hnRNP B1 siRNA 干扰的A549细胞hnRNP B1 mRNA及蛋白表达下调,细胞生长受到抑制.结论 应用RNA干扰技术可阻止hnRNP B1基因的表达,有望成为肿瘤基因治疗新的研究方向.
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联合检测血清肿瘤标志物在肺癌诊断中的价值
目的 探讨血清多种肿瘤标志物联合检测在肺癌诊断中的价值.方法 采用放射免疫法、化学发光法、酶联免疫吸附法和生化发光法对340例肺癌患者以及120例肺部良性病变患者进行癌胚抗原(CEA)、糖类癌抗原125(CA125)、糖类癌抗原199(CA199)、细胞角蛋白片段19(CYFRA21-1)和神经原特异性烯醇化酶(NSE)水平的检测,并计算上述指标在肺癌诊断中的敏感度、特异度和准确度.结果 单项检测各种肿瘤标志物诊断肺癌的敏感度和准确度以CYFRA21-1高(60.0%和70.3%),特异度以CA199高(99.4%).联合检测较单项检测敏感度明显增高,两项检测以CA125和CA199特异度高(94.5%),敏感度和准确度以CYFRA21-1和NSE联合高(82.9%和83.4%).3项检测以CEA、CA125和CA199特异度高(86.7%),敏感度和准确度以CEA、NSE和CYFRA21-1联合高(89.1%和85.1%),CEA、CA125、CA199、CYFRA21-1和NSE 5项联合效果佳,其敏感度高达93.8%,特异度71.5%,准确度86.5%.结论 多项血清肿瘤指标联合检测较单项检测明显增高诊断肺癌的敏感度和准确度.
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hnRNP B1对人肺癌A549细胞DNA-PK活性及细胞周期、凋亡的影响
目的 探讨核内不均一核糖核蛋白B1(heterogeneous nuclear ribonucleprotein B1, hnRNP B1)对肺癌细胞抑癌基因DNA依赖蛋白激酶(DNA-dependent protein kinase,DNA-PK)的活性、细胞周期和凋亡的影响.方法 根据干扰hnRNP B1基因序列的两段不同靶序列构建2个hnRNP B1的siRNA 抑制表达质粒A、D,转染人肺癌A549细胞.实验分组为重组质粒A、D转染的A549细胞、空质粒转染的A549细胞、未转染的A549细胞、预先用DNA-PK抑制剂NU7026(10 μmol/L)作用1 h的重组质粒A、D转染的A549细胞. Western blot检测各组细胞hnRNP B1表达.采用DNA-PK检测试剂盒检测DNA-PKcs 激酶活性.以流式细胞仪检测细胞周期及凋亡.结果 hnRNP B1 siRNA抑制肺癌细胞hnRNP B1表达;转染hnRNP B1 siRNA细胞的DNA-PK活性、凋亡率较未转染组明显增高(P均<0.05);G1期细胞明显增多(P<0.05),S期细胞减少(P<0.05).预先用NU7026处理的转染hnRNP B1 siRNA细胞组与未处理的转染组比较,其G1期细胞明显降低(P<0.05), S期细胞明显增多(P<0.05),凋亡率明显降低(P<0.05); DNA-PK酶活性和细胞凋亡率成明显的正相关(相关系数r=0.817,P<0.01). 结论 hnRNP B1可以使DNA-PK酶活性降低,从而影响细胞基因组的稳定及参与调控肺癌细胞周期与凋亡.
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hnRNP K 在肺腺癌中表达及其作用的研究
目的 研究核内不均一核糖核蛋白K(hnRNP K) 在肺腺癌组织中的表达及其对肺腺癌细胞生长及凋亡的影响.方法 采用SP免疫组织化学方法对经手术切除病理确诊为肺腺癌的70例肺癌组织标本进行hnRNP K蛋白表达的检测,根据不同肿瘤的直径,计算阳性表达率;构建hnRNP K siRNA表达载体,采用Lipofectamine 2000瞬时转染A549细胞24 h后,RT-PCR、Western blot检测A549细胞hnRNP K mRNA及其蛋白表达量;以流式细胞仪检测重组质粒hnRNP K siRNA及siRNAn转染A549细胞后细胞周期及凋亡的变化.结果 肺腺癌组织中肿瘤直径≤3 cm、3～5 cm、≥5 cm的hnRNP K的阳性表达率分别为38.5%、95.2%、91.7%;hnRNP K siRNA转染24 h后的A549细胞hnRNPK mRNA及蛋白表达明显被抑制(P<0.01);hnRNP K siRNA能显著抑制A549的生长及细胞周期的分布,G0/G1的细胞数从37.21%增加到85.60%,S和G2/M的细胞数分别从47.71%、13.00%减少到13.50%和0.32%,差异均有统计学意义(P<0.01).hnRNP K siRNA能促进A549的凋亡,其凋亡率达到4.79%(P<0.01).结论 hnRNP K能促进肺腺癌细胞的生长;hnRNP K siRNA可抑制肺腺癌细胞的生长,促进其凋亡.
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hnRNP B1 siRNA对肺腺癌细胞A549 p53表达的影响
目的 探讨核内不均一核糖核蛋白(hnRNP)B1调节肺腺癌细胞A549抑癌基因p53表达的作用.方法 采用前期研究已构建并通过体外实验证实具有较好干扰效果的两对hnRNP B1特异性的小干扰RNA(siRNA)真核细胞表达载体(重组质粒A和D)转染的人肺腺癌细胞株A549作为实验组,对照组为转染空质粒的A549细胞和未转染任何质粒的A549细胞.各组细胞均用10 μmol/L顺铂作用24 h收集细胞.实时荧光定量RT-PCR检测p53 mRNA的表达,Western blot检测P53及磷酸化P53蛋白表达的变化.结果 各组细胞p53 mRNA和蛋白表达量无明显差异,说明hnRNP B1特异性siRNA对A549细胞p53基因mRNA和蛋白表达无影响.转染hnRNP B1 siRNA细胞磷酸化P53蛋白表达率分别为0.87±0.06、0.75±0.06,与空质粒转染组(0.30±0.08) 和未转染组(0.21±0.04)相比明显增高(P<0.01).结论 hnRNP B1 siRNA可上调肺腺癌细胞A549 P53活性,参与肺癌的发生发展.
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非小细胞肺癌组织中hnRNP B1和CD44的联合表达及其与预后的关系
目的 研究核内不均一核糖核蛋白B1(hnRNP B1)和CD44在非小细胞肺癌组织中的联合表达及其与预后的关系.方法 应用免疫组织化学的方法检测88例非小细胞肺癌组织中hnRNP B1和CD44表达,分析hnRNP B1和CD44的联合表达与肺癌预后的关系.结果 非小细胞肺癌组织中hnRNP B1和CD44的高表达率分别为68.18%和52.27%.hnRNP B1高表达且CD44低表达组,平均生存时间高[(59.607±4.092)月];hnRNP B1低表达且CD44高表达组,平均生存时间低[(21.357±3.545)月],差异具有统计学意义(P<0.05).结论 hnRNP B1与CD44联合检测对判断非小细胞肺癌的预后有一定临床意义.
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hnRNP B1 siRNA对肺癌组织hnRNP B1表达干扰效果的体内研究
目的 在体内实验中观察所构建的核内不均一核糖核蛋白B1(hnRNP B1)特异性的siRNA真核细胞表达载体对肺癌组织hnRNP B1表达的干扰作用.方法 选取转染本课题组已构建并经体外实验证实有较好干扰效果的两对hnRNP B1特异性的siRNA真核细胞表达载体(重组质粒A和B)的人肺腺癌细胞株A549,将其接种于BALB/C nu/nu裸鼠右前腋下,构建肺癌动物模型.分别应用RT-PCR和免疫组织化学的方法检测接种40、60 d时肿瘤组织中的hnRNP B1 mRNA和蛋白质表达水平.结果 hnRNP B1特异性的siRNA真核细胞表达载体在体内表达40 d时均能较稳定而明显地抑制肿瘤组织中hnRNP B1 mRNA的表达,免疫组织化学从蛋白表达方面也予以证实,而且重组质粒A和B两组间的表达的差异无统计学意义.但是随着时间的延长(接种60 d时),siRNA的干扰效果会逐渐减弱,与未转染A549细胞比较无明显差异.结论 hnRNP B1特异性的siRNA在体内可以稳定的表达,并且能特异、高效地抑制肺腺癌细胞A549 hnRNP B1基因的表达,有望成为肺癌基因治疗的合理策略之一.
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多参数流式细胞术分析肺癌幼稚细胞免疫表型CD133、CD34、CD44的表达
目的 研究CD133、CD34、CD44在肺癌组织中的表达及其不同表达组合所构成的细胞亚群.方法 收集术前病理确诊的肺癌新鲜组织40例,外周正常肺组织10例,制备成单细胞悬液,选用CD133、CD34、CD44、CD117、CD43、CD45、LIN(CD2,CD3,CD31,CD64)单克隆抗体荧光染色,采用流式细胞仪分析上述表面抗原在肺癌组织及正常肺组织细胞中的分布,通过流式双参数图分析CD133、CD34、CD44双抗原组合表达形成的细胞亚群.结果 肺癌实质细胞中(LIN系列及CD45阴性),CD133、CD34、CD44表达弱阳性,CD117、CD43阴性;非参数秩和检验示,CD133、CD34、CD44在肺癌及正常肺组织幼稚细胞中表达水平差异无统计学意义;在肺鳞癌与肺腺癌细胞中,CD44+、CD133-CD34-、CD133+CD44+、CD133+CD44-、CD133+CD34+、CD133-CD34+及CD133-CD44+的表达量不同(P<0.05),其余表型的差异均无统计学意义.聚类分析显示,肺癌幼稚细胞可主要归类为4种亚型.结论 CD133、CD34、CD44可能是肺癌幼稚细胞标记,有利于更好研究肺癌细胞发育和演变的过程.
| 年 | 期数 |
| 2019 | 01 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 06 |
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| 2016 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2011 | 01 02 03 04 05 06 |
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| 2009 | 01 02 03 04 05 06 |
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| 2007 | 01 02 03 04 05 06 |
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| 2005 | 01 02 03 04 05 06 |
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| 2003 | 01 02 03 04 |
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| 2001 | 01 02 03 04 |
| 2000 | 01 02 03 04 |
| 1999 | 01 02 03 04 |
