四川大学学报（医学版）杂志
Journal of Sichuan University(Medical Science Edition) 사천대학학보（의학판）
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稳定表达小鼠白介素12的间充质干细胞株的筛选与鉴定
目的 筛选获得慢病毒介导的分泌表达小鼠白介素12( mIL-12)的间充质干细胞株.方法 采用PCR反应从pORF-mIL-12中扩增得到mIL-12基因的完整序列, 克隆入pENTRTM11质粒, 构建含小鼠IL-12基因的重组质粒pENTR-mIL-12,与pLenti6/V5-Dest质粒进行细胞外重组,得到pLenti6/V5-mIL-12质粒,经PCR、多酶切鉴定正确后送Invitrogen公司上海分公司测序;用293FT细胞进行病毒包装,得到具有感染性的病毒;分离小鼠间充质干细胞,用杀稻瘟素筛选Lenti-mIL-12-MSC的稳定表达株,并鉴定.结果 构建了重组质粒pENTR-mIL-12和pLenti6/V5-mIL-12,测序结果 与GenBank 收录序列一致, 未发生突变;包装得到Lenti6/V5-mIL-12病毒;筛选得到稳定表达的Lenti-mIL-12-MSC细胞株,并用RT-PCR方法 及酶联免疫吸附实验(ELISA)检测验证了mIL-12体外表达.结论 筛选得到稳定表达mIL-12的间充质干细胞株.
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红细胞增多对大鼠低氧肺动脉高压及其肺血管重构的影响
目的 探讨实验性红细胞增多对大鼠低氧性肺动脉高压及其肺血管重构的影响.方法 健康SD大鼠随机分为:常氧对照组(C)、单纯低氧组(H)、低氧+不同剂量的人重组促红细胞生成素(rEPO)组.除对照组外各低氧组大鼠共缺氧21 d,每日8 h.rEPO组每周腹部皮下注射不同剂量的rEPO (300 U/kg、600 U/kg、900 U/kg、1200 U/kg)3次.取血样测定红细胞数(RBC)、血红蛋白(Hb)、红细胞压积(Hct)、血浆EPO浓度、全血/血浆黏度;颈外静脉插管测定平均肺动脉压力(mPAP);动物处死后计算右心室/(左心室+室间隔)[RV/(LV+S)]评价右室肥厚程度;光镜观察肺小动脉管壁厚度百分比、肺非肌性小动脉肌化程度.结果 ①随着rEPO注射剂量的增加,血浆EPO浓度相应的增加,同时RBC、Hb、Hct、全血及血浆黏度亦有不同程度的增高;②高、低切变率下的全血黏度与Hct均呈正相关,mPAP与高切变率下的全血黏度呈直线相关;③随着rEPO剂量的增加,反映肺动脉高压程度的mPAP逐渐增高,但是肺血管重构及右室肥厚程度反而有所缓解.结论 外源性EPO诱导的红细胞增多通过增高全血黏度使肺血管的血流阻力增加,从而促使低氧性肺动脉高压形成,但却减轻了右室肥厚及肺血管重构程度,后者可能系机体对缺氧的一种代偿机制.尽管如此,EPO和/或红细胞增多的净结果仍然是使肺动脉高压加重.
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甲磺酸帕珠沙星注射液临床药代动力学/药效学研究
目的 通过比较300 mg和500 mg甲磺酸帕珠沙星注射液临床药代动力学/药效学(PK/PD)参数,指导临床合理应用抗菌药物.方法 对24例健康受试者分别进行300 mg与500 mg帕珠沙星单次和多次给药的药代动力学研究,采用反相高效液相色谱-紫外检测法 (RPHPLC-UV) 测定血浆中帕珠沙星浓度;采用二倍琼脂稀释法检测帕珠沙星对7种130株临床常见致病菌的低抑菌浓度 (MIC) 及5种90株菌的防突变浓度 (MPC),计算PK/PD参数. 结果 当血药浓度达稳态后,甲磺酸帕珠沙星300 mg与500 mg每12 h(Q12 h)静滴对甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(MSSA)和肺炎链球菌的AUC0-24/MIC50分别为215.36与309.60和107.68与154.80,Cmax/MIC50分别是57.52与81.28和28.76与40.64;但对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的AUC0-24/MIC均远小于40.其对铜绿假单胞菌的AUC0-24/MIC50和Cmax/MIC50均分别大于100和10;而对大肠埃希菌,肺炎克雷伯菌和鲍曼不动杆菌的AUC0-24/MIC50均远小于100,Cmax/MIC50小于或接近10.仅甲磺酸帕珠沙星500 mg Q12 h静滴对MSSA具有较强的防突变能力,300 mg和500 mg Q12 h静滴对其它致病菌均无防突变能力.结论 甲磺酸帕珠沙星300 mg和500 mg Q12 h静滴治疗急性细菌性感染疗效相当,故推荐临床用药方案为300 mg Q12 h静滴.
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ERK及STAT3在机械力刺激肺泡上皮A549细胞信号传导中的作用
目的 研究机械张应力对肺泡上皮A549细胞MAPK信号通路蛋白ERK和JAK/STAT通路蛋白STAT3丝氨酸位点磷酸化水平表达的影响.方法 利用自制四点弯曲加力装置对A549细胞进行大小为3000 μ strain的张应力刺激,收集不同时间点(30 min, 1 h, 2 h, 4 h)的细胞总蛋白,用Western blot的方法检测磷酸化STAT3和ERK蛋白水平的变化.设未予机械力刺激的A549细胞为对照组.结果 ①用3000 μstrain的张应力刺激A549细胞后,p-ERK表达从1 h开始增加,和对照组相比差异有统计学意义(P＜0.01).②用3000 μstrain的张应力刺激A549细胞后,p-STAT3(Ser)表达随时间增加,与对照组相比差异有统计学意义(P＜0.01).结论 MAPK家族中的ERK和STAT家族中的STAT3可能参与了机械力刺激肺泡上皮细胞的信号传导.
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绵竹地震灾民集中安置点健康人群脑膜炎奈瑟菌带菌率调查
目的 了解汶川大地震后绵竹灾民集中安置点流行性脑膜炎奈瑟菌(Neisseria meningitides,Nm)带菌状况,为预测疫情和制定防治措施提供依据.方法 对绵竹灾区二号桥灾民集中安置点和体育场灾民集中安置点进行单纯随机抽样,采取咽拭子样品887份,采用TaqMan-MGB探针RT-PCR技术以及试剂盒RT-PCR法进行检测.结果 887份咽拭子检出3例阳性.结论 灾区与四川省及全国其它地区往年带菌率相比流脑带菌率较低,发生流脑疫情的可能性不大,说明灾后卫生防疫等相关部实施的防御措施积极有效,但针对灾区实际环境,进一步的卫生防疫工作不可懈怠.
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FUS1和IL-12双基因真核共表达质粒的构建及对A549细胞促凋亡作用研究
目的 构建FUS1和人IL-12双基因真核共表达质粒并在肺癌A549细胞中检测基因表达及诱导细胞凋亡作用.方法 采用RT-PCR技术从人肺成纤维细胞MRC-5中逆转录扩增全长FUS1基因,通过PCR技术从pORF-hIL-12质粒中扩增含双亚基的全长IL-12基因.FUS1和IL-12分别经酶切后定向插入真核细胞双顺反子载体pVITRO2的多克隆位点中,酶切和测序鉴定双基因共表达质粒pVITRO2-FUS1-IL-12的构建.以pVITRO2-FUS1-IL-12转染肺癌A549细胞,通过RT-PCR、ELISA 和Western blot方法 检测目的 基因的表达,以Hoechst33258染色及流式细胞术验证pVITRO2-FUS1-IL-12在体外的促凋亡作用.结果 酶切和测序分析表明成功构建了双基因真核共表达质粒 pVITRO2-FUS1-IL-12,在转染后的细胞中同时检测到了FUS1和IL-12的表达,两种基因在双基因表达载体上的表达量基本不受影响.双基因共表达质粒pVITRO2-FUS1-IL-12具有明显诱导肺癌细胞凋亡的作用.结论 成功构建pVITRO2-FUS1-IL-12双基因真核共表达质粒,为肺癌的多基因联合治疗提供了又一新的思路和方法.
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放疗对lewis肺癌荷瘤小鼠MMP、VEGF、MVD的影响
目的 建立lewis肺癌荷瘤小鼠动物模型,研究局部放疗对与肿瘤生长、转移密切相关的基质金属蛋白酶(MMPs)、血管内皮生长因子(VEGF)和微血管密度(MVD)表达的影响.方法 建立负载lewis肺癌细胞的C57BL/6荷瘤小鼠动物模型,随机分为放疗组和未放疗组.当肿瘤细胞接种后14 d,肿瘤体积增至190 mm3左右时,放疗组应用医用直线加速器6MV-X射线对原发肿瘤分次照射,5 Gy/次,隔日1次,共20 Gy/4次.当放疗结束后第8 d(即接种后28 d),小鼠开始出现呼吸困难时,同时处死放疗组、未放疗组小鼠.解剖小鼠取原发瘤、癌旁正常组织.免疫组化法检测原发瘤及癌旁正常组织中基质金属蛋白酶2(MMP2)、基质金属蛋白酶9(MMP9)、原发瘤中VEGF、MVD的表达.结果 肿瘤组织中MMP2、MMP9表达高于癌旁正常组织(P＜0.05);放疗组肿瘤组织中MMP2、MMP9、VEGF、MVD较未放疗组表达增强(P＜0.05),而癌旁正常组织中MMP2、MMP9无明显变化.结论 放疗增强了lewis肺癌荷瘤小鼠肿瘤组织中MMP2、MMP9、VEGF、MVD 的表达,为临床联合运用放疗与MMP抑制剂以及其它抗血管生成治疗,提高肿瘤治疗疗效提供了实验依据.
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成都地区糖耐量正常者血糖水平变化的特征分析
目的 探讨成都地区糖耐量正常(NGT)者血糖水平变化特征.方法 纳入50例NGT(男、女各25例)受试者,采用动态血糖监测系统(CGMS)进行连续72 h血糖监测,分析日内平均血糖水平(MBG)、平均血糖波动幅度(MAGE)、日内血糖波动大幅度(LAGE)、餐后血糖峰值(PPG)、餐后血糖波动幅度(PPGE)、三餐PPGE的均值(MPPGE)、日间血糖平均绝对差(MODD)、血糖波动的时间百分比. 结果 受试者血糖水平呈波动性变化,夜间及3餐前是血糖较低时段,日内血糖高峰多于餐后1～2 h显现,尤以中、晚餐后为甚,且老年人群午餐后血糖波动幅度大;本组NGT者MBG (5.9±1.2) mmol/L,MAGE (1.7±0.7) mmol/L,LAGE (4.4±1.9) mmol/L,PPG (8.7±1.7) mmol/L,MPPGE (2.3±1.6) mmol/L,MODD (0.75±0.79) mmol/L;78%(39例)的受试者血糖波动＞7.8 mmol/L,10%(5例)的血糖波动＜2.8 mmol/L,血糖波动于4.1～8.8 mmol/L所占的日内时间百分比为95%(77%～100%).结论 成都地区NGT受试者存在血糖波动,CGMS有助于观察血糖波动并及时发现高血糖和无症状的低血糖.
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特应性皮炎患者外周血中HSP60、TLR4、NF-κBp65的表达
目的 研究热休克蛋白60(HSP60)、Toll样受体4(TLR4)、核因子κBp65(NF-κBp65)在特应性皮炎(AD)患者外周血中的表达水平及其与疾病发病的关系.方法 分别应用逆转录PCR法、免疫细胞化学法及酶联免疫吸附试验法检测17例AD患者外周血单个核细胞中TLR4 mRNA、NF-κBp65及血清中HSP60的水平,15例正常人作对照.结果 与正常人对照组相比,TLR4 mRNA、HSP60 及NF-κBp65在AD患者外周血中过度表达,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 HSP60、TLR4、NF-κBp65 在AD患者外周血中的表达水平均升高,其表达上调可能与AD发病有关.
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胆固醇酯转运蛋白基因TaqIB多态性对高糖低脂膳食诱导的健康青年血脂比值变化的影响
目的 探讨胆固醇酯转运蛋白基因(CETP)TaqIB位点多态性对健康青年血脂比值的影响及在高糖低脂(HC/LF)膳食诱导的血脂比值变化中的作用.方法 56名健康青年志愿者,给予7 d的平衡膳食和6 d的HC/LF膳食,平衡膳食蛋白、脂肪、碳水化合物含量分别为15%、31%、54%,HC/LF膳食分别为15%、15%、70%.于第1 d、第8 d及第14 d取空腹血,测定血脂水平,计算甘油三酯/高密度脂蛋白胆固醇(TG/HDL-C)、log(TG/HDL-C)、总胆固醇(TC)/HDL-C、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)/HDL-C值.分离基因组DNA,以聚合酶链反应-限制性酶切法分析CETP TaqIB位点多态性.分析不同基因型间血脂比值的差异. 结果 不同基因型受试者血脂比值的基础值无明显差异.平衡膳食后,男性组B2等位基因携带者TC/HDL-C值比B1B1纯合子明显降低(P＜0.05),而在女性组没发现差异.HC/LF膳食后,无论是在受试人群整体还是将男女分组分析,不同基因型之间血脂比值均无明显差异.与HC/LF膳食前相比,在受试人群整体,B1B1基因型受试者4个血脂比值均发生明显改变(P＜0.05),而B2等位基因携带者仅LDL-C/HDL-C和TC/HDL-C明显降低(P＜0.05).HC/LF膳食前后4个血脂比值的差值在各基因型之间没有明显差异.男女分组分析发现,HC/LF膳食后TG/HDL-C和log(TG/HDL-C)较膳食前升高(P＜0.05)仅在女性B1B1基因型受试者中出现;而LDL-C/HDL-C和TC/HDL-C均明显下降(P＜0.05),且不受性别和CETP TaqIB位点多态性的影响.4个血脂比值在HC/LF膳食前后的差值,仅TC/HDL-C在男性B1B1受试者与B2携带者之间存在明显差异(P＜0.05).结论 CETP TaqIB位点多态性在健康青年男性影响HC/LF膳食诱导的TC/HDL-C改变,在女性TG/HDL-C和log(TG/HDL-C)的升高中也有一定作用.
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周期性机械牵张对人支气管上皮细胞(16HBE)STAT3的影响
目的 探讨周期性机械牵张力对人支气管上皮细胞(16HBE)信号转导子与转录激活子3(STAT3)表达的作用效应.方法 利用周期性机械牵张加力装置对16HBE细胞进行不同作用力、不同作用时间刺激,采用RT-PCR检测STAT3 mRNA的表达,Western blot测定STAT3蛋白的表达及磷酸化水平变化.结果 不同机械牵张力刺激16HBE细胞30 min时,3 kPa作用力对STAT3酪氨酸705残基(Tyr705)磷酸化程度高.在3 kPa的周期性机械牵张刺激下,STAT3的酪氨酸残基的活化具有时间依赖性,在30 min时与对照相比差异有统计学意义(P＜0.05);1 h时磷酸化程度高(P＜0.01);机械牵张力不影响丝氨酸727(Ser727)残基的磷酸化、STAT3蛋白表达量以及STAT3基因转录水平.结论 STAT3通过Tyr 705磷酸化修饰参与支气管上皮细胞对周期性机械牵张刺激的应答,在支气管上皮细胞对机械信号的应答和转导中起着重要作用.
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栀子甙对血管性痴呆大鼠行为学和脑组织病理改变的影响
目的 观察栀子甙对血管性痴呆(VaD)大鼠认知功能的影响.方法 采用双侧颈总动脉结扎制备VaD大鼠模型,予VaD大鼠不同剂量栀子甙[25 mg/(kg·d)、50 mg/(kg·d)、75 mg/(kg·d)]灌胃,连续治疗4周后,进行水迷宫实验和脑组织病理检查,结果与假手术组、模型组及多奈哌齐治疗组相比较,观察栀子甙对血管性痴呆大鼠的影响.结果 模型组较假手术组大鼠逃避潜伏期延长、平台象限游程/总游程下降(P＜0.05);栀子甙高、中剂量治疗组逃避潜伏期短于模型组、平台象限游程/总游程大于模型组(P＜0.05),接近于假手术组和多奈哌齐组水平(P＞0.05),栀子甙低剂量组与模型组比较未见明显差异,但反映出其具有改善认知损害作用趋势.病理检查显示与模型组相比,栀子甙治疗组大鼠皮层及海马神经元的凋亡坏死明显减轻.结论 双侧颈总动脉结扎致慢性低灌注能显著影响大鼠的认知功能, 栀子甙对血管性痴呆大鼠模型的认知功能损害有防治作用 ,具有剂量依赖性.
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HSP70/HSP90在鼻咽癌热疗后的表达变化及对热疗疗效影响的体外研究
目的 探讨体外鼻咽癌细胞系HNE1细胞热疗后热休克蛋白70/90(HSP70/HSP90)的表达变化及抑制HSP70/ HSP90表达对鼻咽癌热疗的影响,并初步探讨其机制.方法 对体外培养的鼻咽癌细胞HNE1,恒温水浴42 ℃热处理2 h,分别于2 h、4 h、6 h、8 h、12 h、24 h后荧光定量PCR检测HSP70/HSP90的基因表达变化,采用Western blot检测蛋白表达量的变化.流式细胞术检测细胞的凋亡,观察在热疗前应用槲皮素、格尔德霉素及联合应用对HSP70/HSP90表达抑制后,对HNE1细胞凋亡的影响.结果 42 ℃热疗后鼻咽癌细胞HSP70/HSP90表达在基因及蛋白水平上均有明显升高,4 h达到高峰,8 h后开始回落,24 h接近正常.槲皮素能抑制HSP70表达,但导致HSP90表达水平升高及下降延迟.热疗前使用槲皮素及格尔德霉素处理,凋亡细胞比例明显增加,联合处理组增加更为明显(P＜0.05).结论 HSP70/ HSP90在HNE1细胞内的表达均在热疗后迅速升高,在热疗前联合抑制HSP70/HSP90的活性,可以更有效增加热疗敏感性.
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香烟烟雾对人支气管上皮细胞的氧化损伤研究
目的 探讨香烟烟雾对人支气管上皮细胞氧化损伤的影响,评价氧化损伤效应在香烟烟雾致肺癌中的作用.方法 体外培养人支气管上皮细胞(HBE),以DMSO作为吸收液采集香烟主流烟雾,MTT比色法测量香烟烟雾对HBE细胞的毒性,彗星实验和微核实验分别检测细胞DNA链断裂和细胞染色体损伤,同时使用荧光探针测定细胞内活性氧(ROS)的含量.结果 随着香烟烟雾浓度的增加,HBE细胞存活率逐渐下降;随着染毒时间的延长,香烟烟雾对HBE细胞的半数抑制浓度(IC50)逐渐降低,显示明显的剂量-效应和时间-效应关系.香烟烟雾可以诱导HBE细胞DNA链断裂,表现为细胞拖尾率增加,同时尾长、尾部DNA含量和Olive尾距均随香烟烟雾浓度增加而增大.香烟烟雾亦可诱导HBE细胞染色体损伤,当香烟烟雾浓度≥1支/L时,实验组微核率与对照组比差异均有统计学意义(P＜0.05).此外,HBE细胞ROS生成量与香烟烟雾浓度呈剂量-效应关系.结论 香烟烟雾可以直接诱导人支气管上皮细胞ROS增加,从而造成细胞毒性增加、染色体损伤和DNA链断裂,提示氧化损伤是香烟烟雾致肺癌的重要机制.
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Rac1小干扰RNA对胃肠道肿瘤细胞恶性生物学行为的影响
目的 观察Rac1小干扰RNA(Rac1 siRNA)对胃肠道肿瘤细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响.方法 Rac1 siRNA 在lipofectamineTM 2000介导下转染胃癌SGC803细胞和结直肠癌Lovo细胞, 转染48 h后,采用半定量RT-PCR和Western blot技术分别检测Rac1 mRNA及蛋白的表达;Cell Counting Kit-8检测Rac1 siRNA转染细胞的增殖变化;损伤刮擦实验和体外侵袭实验(Transwell小室)分别检测转染细胞株的迁移与侵袭能力;用流式细胞仪检测转染细胞株的凋亡.结果 成功转染Rac1 siRNA的肿瘤细胞,RT-PCR及Western blot显示Rac1 mRNA和蛋白表达在相应的肿瘤细胞中都明显下降;Rac1 siRNA对肿瘤细胞的增殖、迁移和侵袭均有显著的抑制作用并能促进肿瘤细胞的凋亡.结论 Rac1与胃肠道肿瘤细胞的恶性生物学行为密切相关.Rac1 siRNA能够部分逆转胃癌细胞SGC803和肠癌细胞Lovo的恶性生物学行为.
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两种二芳基碘鎓盐对光固化复合树脂性能的影响
目的 探讨两种二芳基碘鎓盐对光固化复合树脂聚合转化率、压缩强度和固化深度的影响.方法 以双酚-S-双(3-甲基丙烯酰氧基-2-羟丙基)醚(BisS-GMA)作为树脂基质,双甲基丙烯酸二缩三乙二醇酯(TEGDMA)作为稀释剂,SiO2作为无机填料,樟脑醌(CQ)和N,N-二甲胺基甲基丙烯酸乙酯(DMAEMA)分别与不同的二芳基碘鎓盐[二苯基碘鎓六氟磷酸盐或双(对甲苯基)碘鎓六氟磷酸盐]作为引发体系,分别测定并比较两种不同的二芳基碘鎓盐所引发聚合光固化复合树脂的聚合转化率、压缩强度和固化深度.结果 不含二芳基碘鎓盐的光固化复合树脂、含二苯基碘鎓六氟磷酸盐的光固化复合树脂和含双(对甲苯基)碘鎓六氟磷酸盐的光固化复合树脂的聚合转化率、压缩强度和固化深度分别依次提高.结论 二芳基碘鎓盐能够提高光固化复合树脂的聚合转化率等性能,且用双(对甲苯基)碘鎓六氟磷酸盐比用二苯基碘鎓六氟磷酸盐更能够进一步提高光引发体系的光敏活性和溶解度,可获得更高的聚合转化率、压缩强度和固化深度.
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CO2和5%葡萄糖溶液作为膨宫介质对子宫内膜癌细胞CD44、ICAM-1表达的影响
目的 在体外培养环境下,研究5%葡萄糖溶液和不同压力CO2作为膨宫介质,对子宫内膜癌细胞表面黏附分子CD44与细胞间黏附分子-1(ICAM-1)表达的影响.方法 选用人子宫内膜癌细胞HEC-1-B,分别放置于5%葡萄糖溶液、100% CO2气体70 mmHg灌注压、100% CO2气体100 mmHg灌注压环境下1 h,对照组无特殊处理.使用流式细胞仪分别在各组处理1 h后培养0 h、24 h、48 h、72 h检测子宫内膜癌细胞表面黏附分子CD44与ICAM-1的表达变化.结果 经5%葡萄糖溶液和不同压力CO2处理1 h后培养0 h、24 h、48 h HEC-1-B细胞的CD44与ICAM-1表达增高,在处理1 h后72 h恢复到对照组水平.CO2处理组CD44与 ICAM-1的表达量随CO2压力增高而升高,高压力作用下(100 mmHg)表达的整体水平较高,与对照组相比,差异有统计学意义(P＜0.05),而低压力作用下(70 mmHg)表达的整体水平较对照组无明显变化(P＞0.05),而低压力作用下(70 mmHg)表达的整体水平较对照组无明显变化(P＞0.05).结论 高压力(100 mmHg)CO2和5%葡萄糖溶液均能提高子宫内膜癌细胞CD44、ICAM-1的表达,可能增强癌细胞转移能力.因此,对于临床上疑似子宫内膜癌的患者进行宫腔镜操作时选择低压力CO2(70 mmHg)作为膨宫介质较为安全.
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AQP4在多形性胶质母细胞瘤中的表达及其与瘤周水肿的关系
目的 探索水通道蛋白4在脑多形性胶质母细胞瘤中的表达及其与瘤周水肿的关系.方法 采用免疫荧光细胞化学及Western blot方法检测30例脑多形性胶质母细胞瘤患者肿瘤组织和瘤周水肿组织标本中AQP4的表达,并分析比较AQP4的表达量与瘤周水肿程度的关系.结果 在胶质瘤细胞内,AQP4广泛分布于胞浆内.AQP4在多形性胶质母细胞瘤体及瘤周水肿组织中均表达高于正常对照组(P＜0.01),瘤体组和瘤周组之间差异存在统计学意义(P＜0.05),瘤周组明显高于瘤体组,且AQP4表达量与瘤周水肿程度呈正相关. 结论 AQP4在多形性胶质母细胞瘤性脑水肿中表达增高,并与瘤周水肿程度呈正相关,其可能是水肿产生的重要分子基础.多形性胶质母细胞瘤性脑水肿的发生中可能包括细胞毒性和血管源性两种机制.
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小鼠IL-4重组质粒的构建及目的蛋白的表达和纯化
目的 构建重组小鼠白细胞介素-4(rmIL-4)原核表达载体,在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,纯化目的蛋白并鉴定.方法 将优化后的小鼠IL-4 cDNA片段克隆到原核表达载体pET-32a (+)上,获得重组质粒pET32/rmIL-4,转入BL21(DE3)中经IPTG诱导表达得到包涵体.经复性处理后,依次用阴离子交换柱和分子筛纯化蛋白.对纯化得到的蛋白用Western blot检验免疫学特异性,用mIL-4生长依赖性细胞株CTLL-2增殖实验和动物实验测定其生物学活性.结果 经酶切和测序证实重组质粒pET32/rmIL-4构建成功.诱导得到的包涵体用3 mol/L盐酸胍溶液洗涤后溶于加有β-巯基乙醇的7 mol/L盐酸胍溶液中变性,在pH9.5的条件下梯度透析复性.纯化出的蛋白经Western blot鉴定,能与抗小鼠IL-4抗体特异性结合;经细胞和动物实验鉴定,rmIL-4蛋白具有生物学活性,能刺激mIL-4生长依赖性细胞株CTLL-2增殖,使小鼠体内细胞因子发生从TH1到TH2的漂移.结论 成功制备了高纯度、具有生物学活性的小鼠IL-4,为进一步研究其生物学功能提供了条件.
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结肠癌组织中PTEN蛋白表达与PI3K/AKT信号通路的关系
目的 探讨抑癌基因PTEN与结肠癌发生发展的关系及其与PI3K/AKT信号传导通路的相关性.方法 应用Western blot蛋白印迹技术和免疫组织化学方法检测 32例结肠癌及癌旁正常组织中 PTEN和p-AKT蛋白的表达.结果 PTEN蛋白在结肠癌中表达的阳性率 (31.25%)低于癌旁正常组织 (96.87%) (P＜0.01);而p-AKT蛋白在结肠癌中表达的阳性率(87.5%)高于癌旁正常组织 (15.62%) (P＜0.01);两种蛋白的表达呈负相关(r=-0.872,P＜0.01),且表达水平与肿瘤的分化程度、Duke's分期、有无淋巴结转移及远处器官转移有关(P＜0. 05).结论 PTEN蛋白表达缺失导致AKT信号传导通路持续活化可能在结肠癌的发生发展过程中起着重要作用.
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不同营养支持途径对外科创伤应激后相关肠黏膜形态和屏障功能影响的实验研究
目的 探讨肠外和肠内营养对外科创伤应激大鼠肠上皮细胞紧密连接、屏障功能及微生态环境的影响.方法 SD大鼠随机分成对照组、全肠外营养组(TPN)和普通肠内营养组(EN).建立创伤应激模型,接受等氮、等能量营养支持后光镜和电镜下观察肠黏膜形态,比较肠道细菌脏器移位率、肠黏膜occludin蛋白免疫组化表达及肠道菌群数量等.结果 电镜下TPN组肠上皮损伤程度较严重,而EN组损伤程度较轻,肠上皮紧密连接、微绒毛较完整;光镜下Chiu分级,TPN组和EN组比较差异有统计学意义(P＜0.05).EN组肠道跨膜结合蛋白表达优于TPN组(P＜0.05).EN组肝、肺和肠系膜淋巴结的肠道细菌移位率低于TPN组(P＜0.05).EN组肠道内乳酸杆菌和双歧杆菌数量均高于TPN组,但差异未达到统计学意义.结论 肠内及标准肠外营养都不能完全维持创伤大鼠肠黏膜屏障不受损害及阻止肠道细菌移位,但肠内营养组肠黏膜屏障损害较轻,肠道细菌移位率低,且增加了肠上皮occludin蛋白表达,与肠外营养比较,有利于改善肠道屏障,从而减少细菌移位的可能.
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SKLB-102对ConA诱导的小鼠急性肝炎治疗研究
目的 研究5-(4-甲氧基苯亚甲基)-2-硫代-二氢嘧啶-4,6(1H,5H)-二酮(SKLB-102)对小鼠急性肝炎的治疗效果.方法 体外巨噬细胞趋化抑制实验,检测SKLB-102对巨噬细胞趋化的抑制作用;建立刀豆蛋白A(ConA)诱导的小鼠急性肝炎模型,并在造模后给予SKLB-102进行治疗干预.采用临床自动生化分析检测ALT、AST变化;ELISA检测血清中肿瘤坏死因子(TNF-α )含量;HE染色组织病理学观察,评价SKLB-102治疗效果.结果 体外巨噬细胞迁移实验显示,SKLB-102能明显抑制MCP-1 诱导的RAW264.7细胞迁移; 体内抗急性肝炎效果研究证明,SKLB-102降低ConA诱导急性肝炎模型小鼠血清AST、ALT含量,下调TNF-α表达;组织病理学显示SKLB-102明显减轻急性肝炎小鼠的肝组织损伤及炎性细胞浸润.结论 SKLB-102体外具有明显抑制巨噬细胞趋化作用,体内显示很好的抑制TNF-α产生和治疗急性肝炎效果.SKLB-102治疗急性肝炎效果可能与其抑制免疫细胞趋化和炎性细胞因子产生有关.
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脂联素改善肥胖大鼠离体主动脉内皮依赖性血管舒张功能的实验研究
目的 研究脂联素对食物诱导的肥胖大鼠内皮依赖性血管舒张功能的影响.方法 将10只SD雄性大鼠分为2组,正常对照组予普通饲料喂养;高脂饲料组予高脂饲料喂养.6周后处死动物,将3 mm长的主动脉环置于培养皿中,分别以脂联素及脂联素加内皮一氧化氮合成酶特异性抑制剂(L-NAME)孵育离体血管环,并与空白对照比较,在器官浴槽中观察离体胸主动脉环对乙酰胆碱或硝普钠的舒张反应.结果 高脂饲料喂养的大鼠内皮依赖性舒张功能明显受损,其大舒张程度仅为对照组的29%.脂联素组内皮依赖性血管舒张功能较高脂饲料组增加102%,脂联素加L-NAME组内皮依赖性血管舒张功能接近丧失.结论 脂联素对肥胖动物受损的血管内皮细胞具有确切的直接保护作用.
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代谢综合征氧化应激与血清脂联素水平的关系
目的 分析代谢综合征(MS)患者氧化应激状态与血清脂联素水平的关系.方法 依照纳入排除标准收集MS患者126例(MS组),对照组收集年龄性别匹配,血脂、血糖、血压以及肝肾功能正常的健康体检者98例.测定MS组和对照组总脂联素(Total-Ad)、高分子量脂联素(HMW-Ad)以及氧化应激指标[还原型谷胱甘肽(GSH)、氧化型谷胱甘肽(GSSG)和丙二醛(MDA)]的含量.比较对照组和MS组各项指标差异;并用多重线性回归模型分析MS组和对照组中脂联素与氧化应激指标的相关性.结果 MS组与对照组比较,Total-Ad[(3.51±0.83) μg/mL vs (4.34±0.98) μg/mL]、HMW-Ad[(1.32±0.42) μg/mL vs (2.15±0.85) μg/mL]和GSH[(1.15±0.54) μmol/L vs (1.96±0.62) μmol/L]水平降低(P均＜0.01),GSSG[(1.20±0.47) μmol/L vs (0.90±0.23) μmol/L]和MDA[(6.92±1.50) nmol/L vs (4.05±0.65) nmol/L]水平升高(P均＜0.05);在MS组脂联素与各项参数建立的多重线性回归模型中,Total-Ad和HMW-Ad与氧化应激指标中的GSH呈正相关性,偏相关系数分别为0.587和0.480(P＜0.05),与MDA呈负相关性,偏相关系数分别为-0.222和-0.389(P＜0.05).对照组的多重线性回归模型分析得出氧化应激指标与脂联素水平无相关性(P＞0.05).结论 MS患者伴随氧化应激,脂联素与GSH的相关性大于其余氧化应激指标.MS中低脂联素水平和氧化应激密切相关.
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Ⅲ型胶原、CTGF及TNF-α在胎膜早破发病机制中的作用
目的 观察Ⅲ型胶原、结缔组织因子(CTGF)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)在人胎膜组织中的表达并探讨其在胎膜早破发病机制中的作用.方法 50例胎膜早破孕妇为胎膜早破组,其中未足月胎膜早破组(pPROM组)24例,足月胎膜早破组(tPROM组)26例;与胎膜早破组孕周相对应的非胎膜早破孕妇作为对照组,早产对照组24例,足月对照组26例.应用免疫组化及图像分析法检测胎膜Ⅲ型胶原、CTGF、TNF-α表达水平, 以阳性区平均灰度值进行半定量.结果 ①Ⅲ型胶原、CTGF在pPROM组(88.81±5.25、85.45±6.91)、tPROM组(94.53±6.43、88.15±4.93)的表达水平均低于相应对照组(早产对照组:95.99±8.41、90.30±5.74,足月对照组:100.80±9.77、93.20±5.33,P＜0.05,P＜0.01);Ⅲ型胶原在pPROM组的表达亦低于tPROM组( P＜0.01).TNF-α在pPROM组(98.23±8.35)、tPROM组(107.85±8.68)的表达水平均高于相应对照组(早产对照组:83.82±6.03,足月对照组:84.50±6.14,P均＜0.01);pPROM组的表达低于tPROM组,但差异无统计学意义(P＞0.05).②Ⅲ型胶原与CTGF在pPROM组中的表达水平呈正相关性(r=0.838,P=0.001),而在tPROM组中的表达水平无相关性;Ⅲ型胶原与TNF-α在pPROM组中的表达水平呈负相关性(r=-0.689,P=0.002),在tPROM组中的表达水平亦呈负相关性(r=-0.655,P=0.001).结论 pPROM的发生不仅与CTGF引起的胶原发育异常有关,还与TNF-α介导的胎膜细胞过度凋亡相关.而影响tPROM胶原发育的主要因素不是CTGF,其可能与胎膜的退行性变及TNF-α介导的胎膜细胞过度凋亡有关.
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NGF、BDNF和NT-3在鸡胚脊髓发育中的表达变化
目的 探讨神经生长因子(NGF)、脑源性神经营养因子(BDNF)和神经营养因子3(NT-3)在鸡胚脊髓发育中的表达变化.方法 对发育第7 d(E7)和第14 d(E7)鸡胚腰段脊髓用NGF、BDNF和NT-3抗体进行免疫组化和Western blot检测.观察NGF、BDNF、NT-3在脊髓两时相的分布和含量变化.结果 脊髓发育第7 d,NGF仅在腹侧白质表达,BDNF阳性细胞主要分布于脊髓腰段腹角神经元的核周质及神经突起内,而NT-3阳性细胞则分布于腹角前外侧群神经元;脊髓发育至第14 d,不但白质NGF表达进一步增强,脊髓灰质内亦出现少量NGF阳性细胞,尤其是背角细胞可见强的NGF表达;BDNF除腹角染色外,也扩展至整个背角神经元及神经突起,并出现一些BDNF阳性胶质细胞;NT-3除分布于腹角前外侧群神经元外,中间带、背角内亦出现了一些NT-3阳性神经元.Western blot进一步证明上述3种因子的表达量均随发育进程增强,尤以BDNF为甚,其E14的表达量约为E7的2.7倍.结论 NGF、BDNF和NT-3在脊髓的表达随发育进程由腹角向背角扩展,且表达量逐渐升高.提示,NGF、BDNF和NT-3可能与促进脊髓的发育有关.
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酸敏感离子通道在大鼠脑干斜方体核和旁巨细胞外侧核的表达及间歇性缺氧对其表达的影响
目的 探讨酸敏感离子通道(ASICs)的3种亚型(ASIC1b、ASIC2a和ASIC3)在大鼠脑干斜方体核(Tz)和旁巨细胞外侧核(LPGi)的表达以及在间歇性缺氧情况下三者表达的变化.方法 制备间歇性缺氧大鼠模型,12 d后抽血进行血气分析,采用常规免疫组化法(SABC法),观察正常大鼠及间歇性缺氧大鼠脑干Tz和LPGi神经元ASIC1b、ASIC2a和ASIC3的表达.结果 正常大鼠脑干Tz和LPGi等神经核团,均可见到呈胞浆阳性的ASIC1b、ASIC2a和ASIC3表达的神经元.间歇性缺氧组大鼠,ASIC1b阳性神经元数密度(个/mm3)在Tz中减小(P＜0.05),在LPGi中变化不明显(P＞0.05),灰度值在Tz和LPGi中均无明显变化(P＞0.05);ASIC2a阳性神经元数密度(个/mm3)在Tz和LPGi中改变均不明显(P＞0.05),灰度值在Tz中增加(P＜0.05),在LPGi中改变不明显(P＞0.05);ASIC3阳性神经元数密度(个/mm3)在Tz中改变不明显(P＞0.05),在LPGi中减小(P＜0.05),灰度值在Tz和LPGi中改变均不明显(P＞0.05).结论 正常大鼠脑干Tz和LPGi等呼吸相关神经核团神经元均表达ASIC1b、ASIC2a和ASIC3等ASICs;间歇性缺氧大鼠不同部位不同亚型ASICs表达的变化有所不同,提示不同部位不同亚型ASICs在呼吸调节中的作用可能有所不同.
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PTEN基因对K562细胞增殖、凋亡及对Bcl-2和Caspase家族的影响
目的 探讨肿瘤抑制基因PTEN对人慢性粒细胞白血病K562细胞系的增殖、凋亡及对凋亡相关基因Bcl-2及Caspase-3/7及-9的影响.方法 将携带有野生型PTEN及绿色荧光蛋白(GFP)的腺病毒(Ad-PTEN-GFP)及空载体腺病毒(Ad-GFP)转染人慢性粒细胞白血病K562细胞系.通过MTT检测细胞生长曲线,流式细胞仪分析转染效率、细胞凋亡率和细胞增殖指数,同时观察光镜、电镜下细胞形态,DNA ladder、荧光染色等方法检测细胞凋亡,荧光定量PCR(FQ-PCR)检测PTEN及Bcl-2 mRNA水平变化,Western Blotting检测PTEN及Bcl-2蛋白变化,应用试剂盒检测Caspase-3/7及-9蛋白活性.结果 以感染复数为200的Ad-PTEN-GFP 转染K562细胞后,大生长抑制率为37.1%,早期和中晚期凋亡率均高于转染Ad-GFP组和未转染组(P＜0.05),转染PTEN基因3 d后Bcl-2 mRNA及蛋白表达水平分别是Ad-GFP组的0.27倍和 0.58倍,Caspase-3/7及-9蛋白活性在转染PTEN基因后3 d内呈时间依赖性升高.结论 过表达PTEN基因可能通过抑制抗凋亡分子Bcl-2表达,增强Caspase-3/7及-9活性从而抑制K562细胞系增殖,促进细胞凋亡.
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低温异丙酚对脊髓缺血再灌注损伤保护作用的实验研究
目的 探讨低温异丙酚经腹主动脉灌注对兔脊髓缺血再灌注损伤的保护作用.方法 健康成年新西兰大白兔60只.随机分为6组,每组10只,分别为SN组(生理盐水组)、IPN组(10%常温脂肪乳组)、PN组(50 mg/kg常温异丙酚组)、SH组(4 ℃生理盐水组)、PH组(4 ℃ 50 mg/kg异丙酚组)、IPH组(4 ℃ 10%脂肪乳组).每组的灌注容积均为5 mL/kg,灌注速度为10 mL/(kg·h).采用左肾下腹主动脉阻断法建立脊髓缺血再灌注模型,阻断开始时即泵入灌注液,30 min后停止灌注并开放腹主动脉.记录术中兔生命体征及再灌注后6 h、24 h、48 h神经行为学评分,于再灌注后48 h取L4-6节段脊髓观察组织形态学改变;取T8节段脊髓组织作为正常对照(N组),测定L4-6脊髓组织中兴奋性氨基酸(EAA)及丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)的含量.结果 ①与对照组(SN、IPN组)比较,常温异丙酚组(PN组)和低温灌注组(SH、PH、IPH组)动物神经行为学评分均明显升高,脊髓组织中EAA含量明显降低,其中以低温异丙酚组(PH组)显著(P＜0.05),SN、IPN组间差异无统计学意义.②与正常对照组(N组)比较,各实验组(SN～IPH组)L4-6脊髓组织中EAA及MDA含量明显升高,而SOD含量明显降低(P＜0.05).③与SN、IPN、SH、IPH组比较,常温和低温异丙酚组(PN、PH组)脊髓组织中SOD含量明显升高,MDA含量降低(P＜0.05).但PN、PH两组间差异无统计学意义.结论 异丙酚及低温液体均能减轻脊髓缺血再灌注损伤,具有脊髓保护作用,其中低温异丙酚的保护作用更显著.
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罗格列酮对肺成纤维细胞TGF-β1信号转导途径的干预作用
目的 研究转化生长因子-β1(TGF-β1)对人肺成纤维细胞结缔组织生长因子(CTGF)、CTGF mRNA、核因子-κB(NF-κB)及激活子蛋白-1(AP-1)表达的影响及其罗格列酮对肺成纤维细胞TGF-β1信号转导途径的影响及可能机制.方法 以人肺成纤维细胞系(HLF-02)为研究对象,用Western blot法检测TGF-β1、姜黄素、吡咯烷二硫基甲酸盐(PDTC)、罗格列酮作用后的CTGF、NF-κB及AP-1蛋白的表达,免疫组织化学方法 检测CTGF蛋白、RT-PCR技术测CTGF mRNA的表达.结果 ①与对照组比较,1 ng/mL TGF-β1作用15 min后,CTGF表达水平即增强(P＜0.01),并随着作用时间延长而逐渐增强.CTGF mRNA的表达亦随着时间的延长逐渐增加,作用24 h表达多.②1 ng/mL TGF-β1作用30 min后,NF-κB及AP-1的表达水平增强(P＜0.01),以后表达趋于稳定,抑制剂(PDTC 100 μmol/L、姜黄素50 μmol/L)抑制这两条通路后CTGF的表达明显下降.③低(5 μmol/L)、中(10 μmol/L)、高(15 μmol/L)浓度罗格列酮预处理细胞30 min+TGF-β1作用24 h组较单纯TGF-β1处理24 h组CTGF、NF-κB及AP-1蛋白表达明显降低(P＜0.01),并且可以明显抑制1 ng/mL TGF-β1作用24 h引起的CTGF mRNA的表达(P＜0.01).结论 在体外,罗格列酮可通过NF-κB及AP-1信号转导途径启动人肺成纤维细胞过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPAR-γ)抑制TGF-β1诱导CTGF转录和表达.
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低分子海藻酸钾降压作用及药动学的实验研究
目的 研究低分子海藻酸钾对自发性高血压大鼠(SHRs)血压的影响及其在小鼠体内的药动学规律.方法 采用尾脉搏间接测压法测定SHRs收缩压,40只大鼠随机分为5组:空白溶媒对照组、氢氯噻嗪片剂组(6.25 mg/kg)、低分子海藻酸钾高剂量、中剂量和低剂量组(500、250、100 mg/kg),每天灌胃给药,连续给药28 d;每周测量血压,并观察停药后3 d、6 d的血压变化.KM种小鼠灌服3H-低分子海藻酸钾100 mg/kg (74 MBq/kg),分别于给药后2、5、10、20、30 min 以及1、2、4、6、12、24、48、72、96、120、144 h尾部取血,测定样品放射性活性,经DAS 2.0软件拟合低分子海藻酸钾口服给药在小鼠体内的药动学参数.结果 与同期溶媒对照组比较,连续给药21 d和28 d,氢氯噻嗪和低分子海藻酸钾3个剂量组的SHRs血压水平均降低(P＜0.01);停药3 d和6 d时,6.25 mg/kg氢氯噻嗪的降压作用消失(P＞0.05);在停药3 d时,低分子海藻酸钾高、中、低3个剂量组的收缩压均低于同期溶媒对照组(P＜0.05或P＜0.01);停药6 d时,250及500 mg/kg低分子海藻酸钾仍可降低SHRs血压水平(P＜0.01).低分子海藻酸钾灌胃给药后在小鼠体内药动学规律符合二室模型,吸收相半衰期为2.76 h,分布相半衰期为42.30 h,消除相半衰期为42.31 h,体内半衰期为36.28 h.结论 低分子海藻酸钾连续口服给药可剂量依赖性地降低SHRs血压,且停药6 d仍呈现持续的降压作用,这可能与低分子海藻酸钾口服给药后体内消除缓慢有关.
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中药黄芪对肥胖大鼠内皮血管舒张功能的影响
目的 研究黄芪对肥胖大鼠内皮依赖性与非内皮依赖性血管舒张功能的影响,为代谢综合征患者早期药物干预治疗提供确切的实验依据.方法 15只SD雄性大鼠分为3组.对照组予普通饲料喂养,肥胖组予高脂饲料喂养,黄芪干预组高脂饲料喂养的同时饮用黄芪液.6周后处死动物,处死前空腹12 h,处死后采集心脏血液,检测血浆生化指标,观察各组动物体质量变化,计算体脂比,取出主动脉置于器官浴槽中,观察离体主动脉环对乙酰胆碱或硝普钠的舒张反应. 结果 肥胖组动物脂代谢紊乱,血浆甘油三酯、总胆固醇及游离脂肪酸浓度明显升高,平均体质量较对照组增加23%,腹腔平均脂肪质量较对照组增加1.4倍,体脂比显著高于对照组.黄芪干预组动物平均体质量与肥胖组基本一致,腹腔平均脂肪质量较肥胖组减少32%,体脂比介于对照组与肥胖组之间,血浆甘油三酯水平明显下降,游离脂肪酸水平有所下降,但差异无统计学意义.肥胖大鼠内皮血管舒张功能明显受损,其大舒张程度仅为对照组的46%.黄芪干预组动物内皮依赖性血管舒张功能较肥胖组改善.结论 黄芪对肥胖动物受损的血管内皮细胞功能具有确切的保护作用.
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新锌指蛋白基因Zfp637真核表达质粒的构建及对乳腺癌EMT6细胞的作用
目的 构建锌指蛋白 Zfp637真核表达质粒及稳定转染过表达细胞,并观察 Zfp637基因对肿瘤细胞生长增殖的影响.方法 以正常小鼠脾脏组织cDNA作为模板扩增 Zfp637 DNA,定向插入到pEGFP-C3真核表达质粒中,酶切片段分析和测序鉴定以确定成功构建pEGFP- Zfp637重组质粒,通过脂质体介导pEGFP-Zfp637重组质粒转染小鼠乳腺癌株EMT6细胞,并且通过G418筛选出稳定转染细胞( Zfp637-EMT6).荧光显微镜下对Zfp637进行亚细胞定位;RT-PCR检测Zfp637-EMT6细胞中Zfp637基因表达;同时观察细胞生长状况,MTT法测定Zfp637-EMT6细胞的增殖活性.结果 重组质粒经鉴定证实具有Zfp637全长cDNA序列,所建立的Zfp637-EMT6细胞能稳定过表达 Zfp637基因,并且其细胞生长增殖显著增加.结论 成功构建pEGFP-Zfp637真核表达质粒,显示了 Zfp637能促进肿瘤细胞增殖,为进一步研究Zfp637基因的功能奠定了基础,并将为恶性肿瘤的基因治疗提供新靶点.
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汶川大地震后灾区儿童青少年心理健康状况调查
目的 探讨5.12汶川大地震灾区11～16岁儿童青少年的心理健康状况及其影响因素,为创伤后心理危机干预提供依据.方法 在地震发生后1个月,使用长处与困难问卷(SDQ)学生版,调查了540名来自于灾区的儿童青少年[平均年龄(13.82±0.98)岁,男女比例1.06∶1]的心理健康状况及其影响因素.结果 ①灾区儿童青少年SDQ总困难分平均为13.41±5.71,74.6%的儿童青少年报告自身存在主观困难;②暴露水平较高的儿童青少年其情绪因子得分较高(z=-2.323,P=0.020);③女性的情绪因子得分高于男性(z=-4.985,P=0.000);④困难对儿童青少年学习方面造成的影响随年龄增加(χ2=9.106,P=0.011);⑤SDQ总困难分受震后儿童青少年被转移至安全地点的间隔时间的影响,时间越长,该分值出现异常的危险性越大(OR=1.233,P=0.003).结论 震后灾区儿童青少年的心理健康状况受到暴露水平、性别、年龄以及震后被转移至安全地点的时间的影响,心理干预应综合考虑相关因素.
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IGFBP-2、-3在卵巢上皮性癌患者血液和卵巢肿瘤组织中的表达及临床意义
目的 探讨胰岛素样生长因子(IGF)结合蛋白2,3 (IGFBP-2,-3)在卵巢上皮性癌(简称卵巢癌)患者血液和卵巢肿瘤组织中的表达,及其与卵巢癌临床病理学特征的关系.方法 采用Western ligand blot和Western blot检测卵巢肿瘤患者及正常对照者(卵巢良性肿瘤10例,交界性肿瘤6例,卵巢癌10例,正常对照者10例)血清中IGFBP-2、IGFBP-3及IGF-Ⅱ含量;免疫组织化学染色检测正常卵巢组织(4例)和卵巢肿瘤组织中(卵巢良性肿瘤8例,卵巢交界性肿瘤8例,卵巢癌23例,包括中度和高度分化者15例,低度分化者8例)IGFBP-2,-3的表达.结果 卵巢癌患者血清大片段以及成熟IGF-Ⅱ均明显降低, IGFBP-2水平明显升高,而IGFBP-3含量明显降低甚至消失,与相应正常对照组、良性或交界性组相比差异均有统计学意义(P＜0.001或P＜0.01).免疫组织化学染色结果 显示卵巢癌IGFBP-2的表达明显升高 (P＜0.0001或 P＜0.005),且随着卵巢癌组织分化程度的降低,IGFBP-2的表达呈增强趋势;而IGFBP-3的表达随着卵巢癌细胞分化程度的降低,明显降低或呈阴性表达(P＜0.05).结论 卵巢癌患者血循环中IGFBP-3降解以及IGFBP-2明显升高的状况有可能导致IGF-Ⅱ生物学功能改变,并与卵巢癌的临床病理学特征有明显的相关性.
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焦虑症和抑郁症患者事件相关电位P300的对照研究
目的 了解焦虑症、抑郁症及共病患者事件相关电位的变化特点,探讨其不同的认知特点,以协助临床诊断、鉴别诊断.方法 使用日本Nihon Kohden脑诱发电位仪,记录34例焦虑症患者[Hamilton焦虑量表(HAMA)＞14分,抑郁量表(HAMD)＜17分],33例抑郁症患者(HAMD＞17分,HAMA＜14分),54例焦虑抑郁共病组[(HAMA＞14分,HAMD＞17分)],37例正常对照的Cz导联的事件相关电位差异.结果 与正常对照组比较,焦虑症组P3a、P3b潜伏期延长,N2-P3b波幅降低;抑郁症组N2-P3b波幅降低;共病组N2、P3a潜伏期延长,N2-P3b波幅降低,差异均具有统计学意义(P＜0.05).病例组间比较,焦虑症组和共病组P3a、P3b潜伏期长于抑郁症组,差异具有统计学意义 (P＜0.05);共病组N2潜伏期长于焦虑症组和抑郁症组,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 焦虑症、抑郁症和共病组的事件相关电位P300具有各自变异特点,事件相关电位客观上反映了两种疾病的认知功能差异,为了解焦虑症、抑郁症及共病的认知特点、诊断及鉴别诊断提供了神经电生理学依据.
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换用或加用阿德福韦酯治疗拉米夫定耐药乙型肝炎患者疗效观察
目的 观察换用和加用阿德福韦酯治疗拉米夫定耐药乙型肝炎患者疗效.方法 拉米夫定耐药患者125例分为换用阿德福韦酯治疗组(A)和加用阿德福韦酯治疗组(B).检测治疗0、12、24、36、48周时HBV DNA定量、血清HBeAg/抗HBe.统计治疗后各观察点HBV DNA ＜103 copes/mL患者人数、病毒学突破和反弹人数;观察治疗达48周患者HBeAg/抗HBe血清学转化率.结果 治疗达48周A、B组HBV DNA ＜103 copes/mL患者比例分别为61%、79%,组间差异无统计学意义;HBeAg/抗HBe血清学转化率分别为23.5%、14.3%,组间差异无统计学意义.病毒学突破率A组31.6%、B组10%,A组病毒学突破率高于B组(P=0.019).结论 换用或加用阿德福韦酯治疗拉米夫定耐药患者半数以上有效.加药组病毒学突破率低于换药组.
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鼻内镜下带蒂中鼻甲修复眶内壁损伤
目的 探讨眶内壁损伤修复的方法和经验.方法 对10例眶内壁骨折的患者,在鼻内镜下用带蒂中鼻甲修复眶内壁.结果 本组10例患者,术后随访半年,复视消失,复查CT显示眶内壁复原.结论 鼻内镜下用带蒂中鼻甲修复眶内壁骨折具有良好的效果、微创、视野清晰等优点.
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医院和社区获得肺炎克雷伯菌败血症临床特点比较
目的 比较医院获得肺炎克雷伯菌败血症(HA-KP-BSI)和社区获得肺炎克雷伯菌败血症(CA-KP-BSI)的临床特点.方法 对四川大学华西医院2002年10月至2008年10月诊断为肺炎克雷伯菌败血症的71例病例进行回顾性分析. 结果 HA-KP-BSI组36例,CA-KP-BSI组35例.HA-KP-BSI常见的基础疾病是恶性肿瘤14例(38.9%),肺部感染12例(33.3%),重症胰腺炎6例(16.7%).CA-KP-BSI组是糖尿病19例(54.3%),肝脓肿16例(45.7%),肺部感染11例(31.4%).医院感染者更易发生多器官功能衰竭.所有菌株对氨苄西林均耐药,而对亚胺培南敏感率98.6%,HA-KP-BSI菌株对第三、四代头孢菌素敏感率低于50%,近两年的敏感率甚至低于40%,CA-KP-BSI菌株敏感率却高于90%.HA-KP-BSI组产ESBLs 19株(52.8%,19/36),CA-KP-BSI组产ESBLs 2株(5.7%,2/35), HA-KP-BSI组死亡率44.4%,CA-KP-BSI组仅为2.9%.结论 两组患者基础疾病不同,HA-KP-BAI组常见基础疾病是恶性肿瘤,CA-KP-BSI组是糖尿病和肝脓肿.HA-KP-BSI组更易发生多器官功能衰竭.HA-KP-BSI组菌较CA-KP-BSI组更加耐药,死亡率更高,应重视肺炎克雷伯菌败血症的防治,重视抗菌药物合理应用.
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剖宫产全麻诱导使用瑞芬太尼对新生儿的影响
目的 通过对产妇和新生儿瑞芬太尼血药浓度的检测及对新生儿的观察,研究剖宫产全麻时瑞芬太尼对新生儿的影响.方法 选择ASAⅠ～Ⅱ级、足月妊娠行剖宫产的产妇90例,分成3组:硬膜外麻醉组(EA组)、单纯异丙酚全麻组(P组: 异丙酚2 mg/kg)、瑞芬太尼-异丙酚全麻组(RP组: 瑞芬太尼1.5 μg/kg+异丙酚1.5 mg/kg),每组30例.记录3组母体的血流动力学的变化,新生儿的Apgar评分、脐动脉血气,并检测RP组产妇和新生儿瑞芬太尼血药浓度等指标.结果 RP组新生儿出生即刻、5 min、10 min的Apgar评分分别是9.03±0.73、9.69±0.48、10.00±0.00,与其他两组相比差异无统计学意义(P＞0.05).瑞芬太尼静脉注射1～2 min母体桡动脉及胎儿娩出时胎儿脐静、动脉瑞芬太尼血药浓度分别是(2.22±0.86)、(1.01±0.22)、(0.66±0.33) ng/mL,脐动脉(UA)与脐静脉(UV)瑞芬太尼血药浓度的比值(UA/UV)为0.68±0.23.其他观察指标的组间差异无统计学意义(P＞0.05).结论 瑞芬太尼能快速透过胎盘屏障,采用1.5 μg/kg的瑞芬太尼来进行麻醉诱导,对新生儿无明显影响,可以安全用于产科全麻.
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经皮肾镜碎石术治疗复杂性肾结石的疗效观察
目的 探讨经皮肾镜碎石术治疗复杂性肾结石的临床疗效.方法 回顾性分析了2006年8月至2008年3月华西医院采用经皮肾镜碎石术治疗复杂性肾结石113例的临床资料.其中完全性鹿角型结石36例,部分性鹿角型结石77例,结石大小1.5 cm×1.5 cm×1.5 cm～8 cm×7 cm×6 cm,平均结石大小4 cm×3 cm×3 cm.结果 113例患者中97例行一期手术,14例行二期手术,2例穿刺不成功改为肾切开取石术;一期手术清石率73.8%,二期手术清石率82.6%;处理结石时间15～200 min,平均67 min.术后出现高热9例,感染性休克1例,肾动脉瘤出血1例.结论 经皮肾镜碎石术处理复杂性肾结石,具有疗效高、安全可靠、术后并发症发生率低、术后恢复快、结石清除率高的优点,成为目前治疗复杂性肾结石的一线治疗方法 .围手术期充分评估病情并积极纠正全身状况、控制泌尿系感染有利于减少及控制术中术后并发症的发生.
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瑞芬太尼用于SICU患者术后镇痛适剂量的研究
目的 评价持续静脉输注6种不同剂量的瑞芬太尼用于外科重症监护病房(SICU)患者术后镇痛的安全性和有效性.方法 本研究纳入60例SICU患者,随机分为6组(R0.02、R0.03、R0.04、R0.05、R0.06、R0.07),分别以0.02、0.03、0.04、0.05、0.06、0.07 μg/(kg·min)持续静脉输注瑞芬太尼30 min.观察各组患者在给药前、给药后10 min、20 min和30 min的循环参数和呼吸参数,判定给药前、给药后30 min的视觉模拟评分(VAS)即(镇痛评分)和Ramsay镇静评分,记录给药期间发生的呼吸抑制等不良反应.结果 与给药前比较,给药30 min后各组VAS镇痛评分降低(P＜0.05);与R0.02和R0.03组相比,R0.05和R0.06组VAS镇痛评分下降幅度(ΔVAS评分)较大(P＜0.05).与给药前比较,给药30 min后各组Ramsay镇静评分均升高(P＜0.05); R0.02～R0.06组间Ramsay镇静评分升高幅度(ΔRamsay评分)无明显差异.术后镇痛期间有3组发生呼吸抑制(RR＜8次/min)和低氧血症(SPO2＜90%),其中R0.06和R0.07组各有2例,R0.04组有1例.另外,R0.02组有1例发生室性早搏,R0.05组有1例出现呕吐.结论 瑞芬太尼0.05 μg/(kg·min)用于SICU患者的术后镇痛时,VAS镇痛评分和Ramsay镇静评分均较低,亦无呼吸抑制发生,是较适宜的剂量.
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膝关节半月板桶柄状撕裂低场强MRI影像分析
目的 总结分析半月板桶柄状撕裂在低场强MRI中的表现,评价低场强肢体专用MRI诊断膝关节半月板桶柄状撕裂的应用价值.方法 回顾性分析24例经关节镜证实为膝关节半月板桶柄状撕裂患者的低场强MRI图像,总结其典型MRI征象:双后交叉韧带征(双PCL征) 、半月板翻转征、空领结征、碎块内移征和外周残半月板征.结果 24例患者中,出现双后交叉韧带征有15例(62.5%),半月板翻转征14例(58.3%),空领结征18例(75.0%),碎块内移征20例(83.3%),外周残半月板征19例(79.2%),2例表现为内侧半月板后角3度损伤,1例外侧半月板前、后角1度损伤.结论 低场强MRI能有效显示桶柄样撕裂征象,其中碎块内移征和外周残半月板征诊断膝关节半月板桶柄状撕裂的价值较高.
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腹腔镜和开腹结直肠癌根治术疗效的对比研究
目的 比较腹腔镜结直肠癌根治术与同期开腹手术的临床疗效.方法 回顾性收集2003年 2月至 2008年 2月行结直肠癌切除的104例患者的临床资料,根据其手术方式分为接受腹腔镜手术组(n=52)和开腹手术组(n=52), 对比两组的手术安全性、术后恢复情况、肿瘤根治性、医疗费用和随访结果 .结果 两组均无术中、术后严重并发症和手术死亡病例,腹腔镜组 5例中转为开腹手术;术中失血量、术日输血人次、肠鸣音恢复时间、止痛药物用量、下床活动时间、并发症发生率和住院天数腹腔镜组少于开腹组(P＜0.05);手术切除标本边缘无癌细胞残留、清扫淋巴结总数和1、3、5年生存率两组比较差异均无统计学意义(P＞0.05);腹腔镜组手术时间、住院总费用高于开腹组(P＜0.05).结论 腹腔镜结直肠癌切除术微创、安全、有效、具有可行性,费用高是其缺点.
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新趋化因子VCC-1小干扰RNA真核表达载体的构建及鉴定
目的 构建对VCC-1基因有特异性抑制作用的小干扰RNA(siRNA)表达载体.方法 根据VCC-1 mRNA序列,按照siRNA设计原则设计4条特异性的寡核苷酸序列及阴性对照,分别克隆到pGPU6/GFP/Neo载体中.酶切鉴定和测序验证阳性克隆.用脂质体转染SMMC7721细胞,以RT-PCR分析其对VCC-1 mRNA表达的影响.结果 经酶切、测序鉴定均证实重组质粒构建成功.pGPU6/GFP/Neo-siRNA、B、C、D载体均能抑制SMMC7721细胞VCC-1基因mRNA的表达,其中重组质粒C抑制作用强.结论 成功构建了靶向人VCC-1的小干扰RNA表达载体,为进一步研究VCC-1的功能奠定了基础.
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黄芪甲甙对香烟烟雾暴露大鼠肺组织Nrf2表达的影响
目的 探讨熏烟对大鼠肺组织Nrf2表达的影响以及黄芪甲甙(AS-IV)干预对Nrf2表达的调控作用.方法 将30只雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组(Ctrl),高剂量黄芪对照组(AH),熏烟模型组(CS),熏烟+低剂量黄芪组(CS+AL),熏烟+中剂量黄芪组(CS+AM),熏烟+高剂量黄芪组(CS+AH),每组5只大鼠.除Ctrl组和AH组外,其它各组大鼠接受染毒柜被动吸烟4周,建立熏烟模型.CS+AL组、CS+AM组和CS+AH组在熏烟前分别给予1.2 mg/(kg·d)、2.4 mg/(kg·d)、3.6 mg/(kg·d)黄芪甲甙灌胃.AH组给予3.6 mg/(kg·d)黄芪甲甙灌胃.造模结束后留取肺组织,采用HE染色观察肺部形态学改变,免疫组化、RT-PCR、Western blot方法检测Nrf2的表达.结果 吸烟诱导大鼠气道上皮Nrf2阳性表达升高,同时吸烟上调大鼠肺组织Nrf2基因和蛋白水平的表达.黄芪甲甙能剂量依赖性降低Nrf2在熏烟大鼠气道上皮和肺组织的表达.结论 吸烟可以引起大鼠肺组织Nrf2表达升高,黄芪甲甙可以下调吸烟诱导的Nrf2 的高表达.
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呼吸回路中过滤器对小儿呼气末二氧化碳分压及气道压力的影响
目的 观察不同年龄组小儿气管插管全麻下,循环紧闭式呼吸回路中过滤器使用前后及其不同位置安放对呼气末二氧化碳分压(PET CO2)及气道压力(Pmax)的影响.方法 纳入120例小儿患者,按年龄分为Ⅰ组(6月～),Ⅱ组(1岁～),Ⅲ组(3岁～),Ⅳ组(7～14岁),每组各30例.所有患儿行气管插管后,行机控定容呼吸,呼吸回路中先不使用过滤器(记为A位置),设定潮气量(VT)10 mL/kg,调节呼吸频率(RR),使PET CO2稳定为40 mmHg(1 mmHg=0.1333 kPa)持续10 min,将此时的PET CO2和Pmax定为基础值.随后将过滤器先后连接于螺纹管进气端与麻醉机之间(B位置)、螺纹管排气端与麻醉机之间(C位置)和螺纹管"Y"形接头处(D位置),分别在平衡10 min后记录各个位置的PET CO2、Pmax.连接过滤器位置的先后顺序根据随机表决定.结果 4组患儿D位置的PET CO2高于A、B、C位置(P＜0.05);A、B、C位置之间PET CO2的差异均无统计学意义.Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组D位置PET CO2分别为(56.40±4.21) mmHg、(50.30±4.06) mmHg、(46.37±2.48) mmHg、(42.70±1.29) mmHg,以小婴儿组(Ⅰ组)高(P＜0.001),A、B、C位置PETCO2的组间差异无统计学意义.4组患儿D位置的Pmax均高于A、B、C位置(P＜0.001);Ⅰ、Ⅱ组患儿C位置的Pmax高于A、B位置(P＜0.01),而Ⅲ、Ⅳ组A、B、C位置间Pmax差异均无统计学意义.结论 小儿气管插管全麻下,呼吸回路中过滤器连接于螺纹管"Y"形接头处可引起PET CO2、Pmax明显升高,尤以＜1岁的小婴儿明显;连接于螺纹管进气端与麻醉机之间或排气端与麻醉机之间,对PET CO2影响不大,可引起Pmax的升高.
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自制抗菌型加成型硅橡胶口腔印模材料的体外细胞毒性研究
目的 通过体外细胞毒性试验评价自制抗菌型加成型硅橡胶口腔印模材料的细胞毒性作用.方法 通过添加Conval Pag40型无机载银抗菌剂与TiT-10纳米TiO2抗菌剂获得抗菌型加成型硅橡胶,以无抗菌剂的同种加成型硅橡胶为对照,将3种加成型硅橡胶制备成直径5 mm、厚度为5 mm的圆柱体,选用小鼠成纤维细胞株L929,通过琼脂覆盖法检测两种自制抗菌型加成型硅橡胶口腔印模材料的体外细胞毒性.结果 按照中华人民共和国医药行业标准YY/T0127.9-2001,两种加成型硅橡胶口腔印模材料细胞毒性分级均为0级.结论 两种抗菌型加成型硅橡胶口腔印模材料具有良好的体外细胞生物相容性.
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蒿甲醚-蔗糖铁脂质纳米粒的制备及表征
目的 研制蒿甲醚-蔗糖铁脂质纳米粒且表征其理化性质.方法 以大豆卵磷脂和大豆油为载体,采用薄膜分散-高压乳匀法制备蒿甲醚-蔗糖铁脂质纳米粒.用高效液相色谱法测定包封率和载药量,用电子显微镜观察形态,用激光粒度仪测定粒径.结果 制得的脂质纳米粒呈类球状,粒径较均匀,平均粒径为(161±17.4) nm,包封率为(85.1±0.83)%,载药量为(5.3±0.2)%.体外释放实验表明,脂质纳米粒具有良好的缓释特征.结论 该制备工艺简单可行,制得的纳米粒分散均匀,包封率较高.
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不同分离及培养方法对大鼠骨髓间充质干细胞生长增殖和生物学特性的影响
目的 探讨获得大量、高纯度、高活性骨髓间充质干细胞(BMSCs)的有效途径.方法 用密度梯度离心法和贴壁法分离纯化BMSCs,在无血清、含小牛或胎牛血清以及不同体积分数的胎牛血清的培养基中培养,传代扩增,观察各组细胞形态、生长特性,测定生长曲线,免疫细胞化学染色鉴定表面抗原,电镜观察细胞显微结构.结果 密度梯度离心法可获得较纯的原代细胞,但细胞增殖缓慢,容易老化;贴壁法分离的细胞生长增殖迅速,经传代换液,第4代细胞基本纯化;小牛和胎牛血清均能促进BMSCs生长增殖,但在体积分数为0.12的胎牛血清中集落形成率高(46.50%);细胞表达CD44、CD90,而CD14、CD45阴性;电镜下BMSCs符合干细胞的一般特性.结论 经多次换液、严格控制传代消化时间(2～3 min)和酶浓度(2.5 g/L),采用贴壁纯化法在含体积分数为0.12的胎牛血清L-DMEM培养液中培养可获得大量、高纯度、高活性的BMSCs.
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LC-MS/MS法测定人血浆中洛伐他汀及其活性代谢物的含量
目的 建立高效液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)测定人血浆中洛伐他汀及其活性代谢物洛伐他汀酸的浓度.方法 样品用乙酸乙酯∶二氯甲烷(体积比为1∶1)提取浓集后进样,色谱柱为Phenomenex Gemini C18(50×3 mm, 3 μm),流动相为乙腈-水(85∶15).质谱采用ESI离子源MRM模式检测,以辛伐他汀为内标,按内标法定量. 洛伐他汀、洛伐他汀酸和内标的检测离子对分别为质荷比(m/z)427.4→325.4、445.4→343.4和436.4→325.4.结果 洛伐他汀在0.031～64 μg/L范围内线性关系良好(r=0.9987),低定量限为0.031 μg/L,方法 回收率在96%～102%之间,日内、日间精密度相对标准偏差(RSD)分别小于5.3%及9.3%.结论 本文建立的方法 准确、灵敏,可用于洛伐他汀血药浓度测定及药代动力学研究.
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生物素化抗AIB1单克隆抗体的制备及应用研究
目的 用生物素N-羟基丁二酰亚胺酯(BNHS)对纯化抗AIB1单克隆抗体1A2E1进行标记,并应用标记后单克隆抗体对靶细胞中AIB1蛋白进行检测.方法 用BNHS与纯化抗体1A2E1交联,制备Biotin-1A2E1,用竞争抑制ELISA法及免疫细胞化学法检测Biotin-1A2E1的生物学活性.结果 所制备的生物素化抗体活性高,效价为1∶3200,用于检测乳腺癌细胞中AIB1蛋白敏感性好. 结论 成功制备生物素化抗体Biotin-1A2E1,并可初步应用于靶细胞AIB1蛋白的检测,为肿瘤辅助诊断中AIB1蛋白的检测提供有力手段.
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肾移植术后肺癌伴抗利尿激素分泌不当综合征1例报告
患者,女,39岁.因肾移植术后2+年,反复腹泻2+月,精神障碍2 d入院.患者2+年前因慢性肾功能不全行同种异体肾移植.
关键词： 肾移植 抗利尿激素分泌不当综合征
| 年 | 期数 |
| 2019 | 01 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2017 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2011 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2010 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2009 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2008 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2007 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2006 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2005 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2004 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2003 | 01 02 03 04 |
| 2002 | 01 02 03 04 |
| 2001 | 01 02 03 04 |
| 2000 | 01 02 03 04 |
| 1999 | 01 02 03 04 |
