细胞与分子免疫学杂志
Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology 세포여분자면역학잡지
- 主管单位： 中国免疫学会；第四军医大学
- 主办单位： 陕西省免疫学会,中国免疫学会
- 影响因子： 0.81
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 1007-8738
- 国内刊号： 61-1304/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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雌激素对结肠癌细胞株COL0205错配修复基因表达的影响
目的:研究雌激素对结肠癌细胞株COL0205错配修复基因表达的影响.方法:使用半定量RT-PCR和Westernblot,比较在不同浓度雌二醇(estradiol,E2)水平和雌激素受体拮抗剂ICI182.780处理前后结肠癌细胞株COL0205错配修复基因hMLH1和hMSH2的表达差异.并用real time RT-PCR进行验证.结果:E2能上调COL0205细胞株hMLH1基因的表达,这种上调效应发生在转录水平,在E2浓度为10-12～1013 mol/L范围内呈剂量依赖关系,且可被雌激素受体拮抗剂ICI182.780抑制;但E2对COL0205细胞的hMSH2表达没有明显影响.结论:雌激素能够增强结肠癌细胞株COL0205错配修复基因hMLH1的表达,这可能是雌激素预防结肠癌作用的一种新机制.
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雷帕霉素对人外周血T淋巴细胞上BTLA表达的影响
目的:探讨雷帕霉素(rapamycin,RPM)对人外周血T淋巴细胞上B、T淋巴细胞弱化子(BTLA)表达的影响,为其在器官移植和自身免疫性疾病中的应用提供实验依据.方法:采用Ficoll密度梯度离心法分离人外周血单核细胞(PBMCs),然后利用免疫磁珠分离技术分离PBMCs中的T细胞.用刀豆蛋白A刺激、活化人外周血T细胞.用MTF比色法测定T细胞的增殖.用ELISA法测定细胞培养上清液中IL-2、IFN-γ的水平.用流式细胞术检测T细胞上BTLA的表达.结果:用不同浓度(10～1 000 mL)的RPM处理的T淋巴细胞上BTLA的表达无显著差别;而与未经RPM处理组比较差别显著(P＜0.01).ELISA检测结果显示不同浓度的RPM与未处理组相比均能显著抑制IL-2和IFN-γ的分泌(P＜0.01),并可以剂量依赖的方式显著抑制T淋巴细胞增殖(P＜0.01).结论:RPM对BTLA的表达影响较小,而对T淋巴细胞增殖和IL-2、IFN-γ的分泌有较强的抑制作用,提示RPM适宜用于器官移植排斥反应和自身免疫性疾病的治疗.
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不同血清浓度对小鼠成纤维细胞L929生长增殖和胶原蛋白分泌的影响
目的:观察不同血清浓度对小鼠L929成纤维细胞生长增殖和分泌Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原和羟脯氨酸的影响,以了解适宜成纤维细胞生长和分泌的佳血清浓度.方法:L929细胞分成6组:分别以血清浓度为0 mL/L、200 mL/L、400 mL/L、600 mL/L、800 mL/L和1 000 mL/L的培养液培养,培养2 d、4 d、6 d和8 d分别取各组细胞进行HE和吖啶橙荧光染色,了解细胞形态和生长状况变化.在2 d、4 d、6 d和8 d分别取各组上清,酶联免疫法检测Ⅰ型胶原,Ⅲ型胶原,羟脯氨酸水平.磺基罗丹明B(SRB)法检测培养2 d、4 d、6 d和8 d后各组细胞增殖情况.结果:(1)L929在血清浓度很高和很低(0%和100%)时细胞增殖率都明显下降,20%组血清浓度的增殖率高;40%～100%组,随着血清浓度增高,细胞增殖率反而下降;(2)HE和AO染色发现0%血清浓度组细胞出现凋亡情况,80%组细胞开始出现空泡化,100%血清浓度时细胞空泡化严重.20%～60%血清浓度细胞形态基本正常.(3)0%、80%和100%血清浓度在培养的8 d内Ⅰ型胶原浓度一直比较低,40%血清浓度Ⅰ型胶原浓度高.培养的第2天,各浓度组的Ⅲ胶原均有增加,后有所下降,6～8 d时又再次上升.各组血清浓度组的L929细胞在不同培养时间羟脯氨酸浓度变化不大.结论:20%～40%血清浓度适合成纤维细胞的生长,增殖和胶原分泌,血清浓度过高或过低都会引起细胞增殖率下降、细胞凋亡、空泡化和胶原的分泌减少,自体血清注射时采用合适的血清浓度可能会取得更好的效果.
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高糖诱导人肾小球系膜细胞CTGF启动子去甲基化及基因表达
目的:观察高糖刺激和甲基化抑制剂5-氮杂-2-脱氧胞苷(5-aza-dCyd)对人肾小球系膜细胞(HMCs)结缔组织生长因子(CTGF)基因启动子的甲基化水平和基因表达的影响.方法:用不同终浓度的5-aza-dCyd(0、1、2、5、10 μmol/L)刺激HMCs,于48h提取细胞基因组DNA、总RNA和蛋白质;用不同浓度的葡萄糖(5 mmol/L、30 mmol/L)刺激细胞,于0、24、48、72 h收集细胞;应用甲基化特异性PCR(MSP)检测细胞CTGF基因启动子甲基化状态,RT-PCR检测CTGFmRNA表达,Western blot检测 CTGF 蛋白表达.结果:不同浓度5-aza-dCyd处理HMCs 48 h后,0、1、2、5 μmol/L 5-azadcyd组CTGF基因启动子呈半甲基化状态,均有微量CTGFmRNA和蛋白的表达,差异无统计学意义(均P＞0.05);10 μmol/L 5-aza-dCyd组甲基化条带阴性,呈完全去甲基化状态,CTGF mRNA和蛋白表达均增加,与0 μmol/L组比较差异有统计学意义(P＜0.01).5 mmol/L葡萄糖组HMCs各时间点CTGF基因启动子均呈半甲基化状态,表达微量CTGFmRNA和蛋白质,差异无统计学意义(均P＞0.05);30 mmol/L葡萄糖组CTGF启动子在0 h呈半甲基化状态,甲基化条带较强;24 h甲基化条带减弱,48 h甲基化条带阴性,呈完全去甲基化状态,24 h、48 h、72 h CTGF mRNA和蛋白质表达均增加,与5 mmol/L组相应时间点比较差异有统计学意义(均P＜0.05).结论:高糖和甲基化抑制剂5-aza-dCyd均可诱导人肾小球系膜细胞CTGF基因启动子的去甲基化并增加CTGF的表达,提示DNA甲基化可能参与了人肾小球系膜细胞CTGF基因表达的调控.
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小鼠TERT启动子调控的CD80-SEA基因重组腺病毒载体的构建及在肝癌细胞中的表达鉴定
目的:构建小鼠端粒酶反转录酶(mTERT)启动子调控的葡萄球菌肠毒素A(SEA)和CD80基因共表达重组腺病毒载体,并观察其介导的SEA和CD80在小鼠肝癌细胞Hepal-6中的表达情况.方法:采用AdEasy腺病毒体系,亚克隆mTERT核心启动子区至穿梭质粒pShuttle2,并在其上游插入myc-Max反应元件MMRE,用来调控SEA及CD80基因的表达,构建SEA和CD80基因共表达重组腺病毒载体AdMMRE-mTERT-BIS,制备病毒并纯化,然后将病毒以感染复数为100的浓度分别感染肝癌细胞系Hepal-6和成纤维细胞系NIH3T3.采用免疫荧光染色法检测SEA和CD80在细胞膜表面的表达情况.结果:重组腺病毒载体Ad-MMRE-mTERTBIS感染的Hepal-6肝癌细胞膜上能够共表达SEA和CD80;而病毒感染的NIH3T3细胞不能表达SEA和CD80.结论:成功地构建了mTERT启动子调控的SEA和CD80基因共表达重组腺病毒载体,能够调控SEA和CD80基因在肝癌细胞中的靶向表达,为进一步研究肝癌的靶向基因治疗奠定了基础.
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CD74基因对重症肌无力患者胸腺上皮细胞IFN-γR基因表达的影响
目的:探讨CD74基因对重症肌无力患者胸腺上皮细胞(TEC)IFN-γR基因表达的影响.方法:原代培养重症肌无力患者胸腺上皮细胞,脂质体法转染pCMV-CD74,荧光定量RT-PCR法检测转染结果及TEC中IFN-γR等与自身免疫病相关基因mRNA水平的表达.结果:原代培养并传代的胸腺上皮细胞转染pCMV-CD74质粒后,CD74基因的表达显著提高.TEC高表达CD74基因,可引起HLA-A、ECFGI、IL4R、IL-32和IFN-γR基因表达显著增加.结论:CD74基因对TEC表达IFNγR基因有明显的促进作用.
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红色荧光蛋白核迁移蛋白shRNA干扰载体的构建
目的:利用红色荧光蛋白(RFP),建立一种直观、快速筛选有效RNA干扰片段的方法.方法:通过分子克隆技术将核迁移蛋白(NUDC)与RFP构建成融合基因,克隆至真核表达载体pDs中,以实现其融合表达;同时,将人U6启动子及9个NUDC的发夹结构分别克隆至上述同一真核载体中,构建成一系列针对NUDC不同干扰位点的RNA干扰载体,通过采用酶切及DNA序列鉴定,然后转染293T细胞,通过荧光显微镜观察293T细胞的荧光发光强度及荧光细胞数.结果:酶切及测序结果证实质粒为所需的序列;荧光显微镜观察结果显示,shNUDC-A的干扰效果好.结论:成功构建了含RFP的NUDC真核shRNA干扰载体.
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小鼠Foxp3基因慢病毒载体构建及其在DC2.4细胞的表达
目的:构建小鼠Foxp3基因的慢病毒载体,体外感染树突状细胞DC2.4,制备Foxp3+DC细胞,为进一步研究其免疫调节作用奠定基础.方法:将小鼠Foxp3基因克隆到慢病毒pGC-FU载体,通过PCR和测序鉴定获得连接正确的克隆.将鉴定后的重组表达质粒pGC-FU-Foxp与pHelper1.0质粒和pHelper2.0质粒共转染293T细胞,制备携带Foxp3基因的慢病毒Lentivirus-Foxp3.Lentivirus-Foxp3感染体外培养的DC细胞,流式细胞术(FCM)检测感染后的DC细胞Foxp3表达.结果:构建的慢病毒载体pGC-FU-Foxp3经PCR鉴定和测序正确,包装慢病毒Lentivirus-Foxp3滴度为2×108TU/mL.慢病毒Lentivirus-Foxp3感染DC2.4细胞后Foxp3表达明显增加.结论:成功构建了小鼠Foxp3基因的慢病毒表达载体,慢病毒Lentivirus-Foxp3能有效感染DC细胞.
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穿心莲内酯对肺纤维化大鼠BALF中细胞因子和肺组织Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达的影响
目的:探讨穿心莲内酯灌胃对博来霉素(BLM)致肺纤维化大鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中TNF-α、TGF-β1浓度和肺组织Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达的影响.方法:取健康雄性SD大鼠90只,随机分为生理盐水(NS)组、BLM组、泼尼松(Pred)组、不同剂量穿心莲内酯组(即穿A组62.5mg/kg、穿B组125 mg/kg、穿C组250 mg/kg),各组大鼠15只,分别气管内灌注BLM(BLM组、Pred组、穿A组、穿B组、穿C组)或NS(NS组)后,每天给予NS(NS组、BLM组)、Pred(Pred组)或穿心莲内酯(穿A组、穿B组、穿C组)灌胃,各组分别于气管内灌注药物后第7、14、28天处死大鼠5只.用HE、Masson染色观察肺泡炎症和纤维化改变;实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应检测肺组织Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达;酶联免疫吸附试验测定BALF中TNF-α、TGF-β1浓度;同时监测肾功能指标血尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)及肝功能指标血丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST).结果:肝肾功能监测显示:不同剂量穿心莲内酯组、NS组、BLM组、Pred组所监测的AST、ALT、BUN、Cr比较,差异无统计学意义(P＞0.05).NS组大鼠肺组织未发现肺泡间隔水肿、炎性细胞浸润和纤维化形成.BLM组第7天时肺泡腔内可见大量炎性细胞浸润,第14天时肺泡炎仍存在,但炎症细胞明显减少,肺泡间隔内成纤维细胞明显增多,肺泡结构破坏,肺泡隔增宽,第28天时炎症较前减轻,肺纤维化程度加重,部分肺泡腔消失,形成严重纤维化.穿A组病理形态改变与BLM组相似.Pred组、穿B组、穿C组大鼠第7天有较多的炎症细胞浸润及局部聚积,第14天和第28天的纤维化病理改变均较BLM组、穿A组明显减轻.NS组各个时间点BALF中TGF-β1、TNF-α含量均明显低于同时间点BLM组、Pred组、穿A组、穿B组、穿C组BALF中的浓度(P＜0.05).BLM组3个时间点BALF中TGF-β1、TNF-α含量较Pred组、穿B、穿C组高(P＜0.05).与BLM组比较,穿A组BALF中TGF-β1、TNF-α含量无统计学意义.NS组各个时间点肺组织Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达均明显低于同时间点BLM组、Pred组、穿A组、穿B组、穿C组肺组织中的表达(P＜0.05).BLM组3个时间点Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达较Pred组、穿B组、穿C组高(P＜O.05).与BLM组比较,穿A组肺组织Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达无统计学差异.结论:穿心莲内酯灌胃可减轻BuM致肺纤维化大鼠肺泡炎和肺纤维化程度,降低肺组织Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达,降低BALF中TNF-α、TGF-β1浓度,且对肝肾无明显毒副作用.
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林可霉素对树突状细胞系DC2.4免疫功能影响的初步研究
目的:探讨林可霉素(lin)对树突状细胞(DCs)系DC2.4免疫功能的影响.方法:设立3个组:DC2.4细胞组,DC2.4细胞+LPS组及DC2.4细胞+LPS+lin组(LPS及lin均为500 ng/mL).在倒置显微镜下观察各实验组中DC2.4细胞的形态学变化.同时采用流式细胞仪分析DC2.4细胞表面标志MHC-Ⅱ类分子、CD86和CD80的表达.采用同种异体混合淋巴细胞反应(MLR)检测各实验组中DC2.4细胞刺激同种异体T淋巴细胞增殖的能力.用ELISA试剂盒检测干扰素-γ(IFN-γ)水平的变化.结果:倒置显微镜下显示,DC2.4细胞组为未成熟DCs形态,DC2.4细胞+LPS组及DC2.4细胞+LPS+lin两组均为成熟DCs的形态.流式细胞术分析证实,500 ng/mL LPS可以促进DC2.4细胞表面MHCⅡ类分子、CD86和CD80的表达,并增强其刺激T细胞增殖及IFN-γ的分泌.但500 ng/mL lin联合500 ng/mL LPS能够部分抑制DC2.4细胞免疫调节作用.结论:Lin可以部分抑制成熟DC2.4细胞的免疫调节功能.
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丹参酮Ⅱ A对LPS诱导EA.hy926细胞TLR4和TNF-α的影响
目的:观察丹参酮ⅡA对脂多糖(LPS)诱导人脐静脉内皮细胞EA.hy926炎症反应Toll样受体4(TLR4)和TNFα表达的影响,探讨丹参酮ⅡA抗动脉粥样硬化(AS)的作用机制.方法:体外培养EA.hy926细胞;RT-PCR和免疫细胞化学法检测TLR4 mRNA和蛋白的表达;RT-PCR和ELISA法检测TNF-αmRNA和蛋白的表达.结果:经LPS刺激后TLR4和TNF-α的表达与正常组比较均明显升高(P＜0.05),丹参酮ⅡA组TLR4和TNF-α的表达与刺激组相比明显受抑制(P＜0.05).结论:抑制TLR4和TNF-α的表达是丹参酮ⅡA抗AS作用的可能机制之一.
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禽流感病毒M2胞外区(M2e)多拷贝片段的原核表达及其免疫原性分析
目的:构建禽流感病毒M2基因胞外区(M2e)多拷贝片段的原核表达载体,并对表达、纯化的重组蛋白进行免疫原性的分析.方法:以含有全长M2基因的质粒19T-M2为模板PCR扩增获得M2e,通过PCR及同尾酶连接的技术构建一系列的M2e多拷贝中间载体,得到顺次连接的9个拷贝M2e(9c),将其克隆到原核表达载体pET-32a中,经酶切和DNA测序鉴定正确后转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导,SDS-PAGE和Western blot分析蛋白表达情况.用纯化后的融合蛋白免疫BALB/c小鼠,取动物血清作ELISA检测M2e特异性抗体IgG并取脾脏细胞作ELISpot检测细胞分泌IFN-γ的情况.结果:结果显示,重组菌能够表达出一条相对分子质量(M,)约为45 000的可溶性融合蛋白(M2e-9c),该蛋白表达量约占菌体表达量的37.2%.纯化蛋白免疫小鼠后,M2e特异性IgG滴度可达到1×104,:M2e肽段能够刺激免疫组小鼠脾细胞分泌IFN-γ且具有一定的浓度依赖性.结论:M2e多拷贝重组蛋白可以诱导小鼠产生抗M2e特异性的抗体反应和细胞免疫反应,说明该蛋白具有良好的免疫原性,为流感病毒广谱疫苗的进一步研发打下了基础.
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小鼠分泌型IL-1β真核表达载体的构建及其表达
目的:构建小鼠经典分泌途径IL-1β真核表达载体,转染至Hepa1-6细胞,并测定其分泌表达水平.方法:引物延伸获得小鼠AFP信号肽序列(sAFP),RT-PCR扩增获得小鼠IL-1β成熟蛋白基因序列(mIL-1β),SOE方法将两段序列拼接形成融合基因,与pIRES2-EGFP质粒重组构建分泌型真核表达载体pIRES2-EGFP-smIL-1β,并将其转染至Hepa1-6细胞,RT-PCR检测融合基因的表达水平,'Western blot检测细胞内mIL-1β蛋白的表达,ELISA法测定培养上清及细胞裂解液中mIL-1β水平.结果:经SOE法拼接获得的融合基因与CenBank中登录的序列一致,RT-PCR检测显示该载体能够在Hepal-6细胞中表达融合基因mRNA,细胞培养上清中mIL-1β的分泌水平明显上升,而胞质中的mIL-1β无明显变化.结论:成功地构建了经典途径分泌的mIL-1β重组表达载体,该载体可以在Hepa1-6细胞培养上清中有效分泌具有生物活性的mIL-1β.
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2型猪链球菌细胞壁蛋白SSU1664的表达、纯化及活性分析
目的:从猪链球菌05ZY中扩增SSU1664基因,在大肠杆菌中表达并评价其重组蛋白的活性.方法:根据05ZY基因组序列设计引物,PCR扩增SSU1664基因,构建表达载体,利用亲和层析对目的蛋白进行纯化,Western blot和ELISA法鉴定其免疫原性.结果:SSU1664基因能够在大肠杆菌中可溶性表达,Western blot显示其能与猪链球菌菌体免疫后的大鼠血清反应,ELISA检测显示在人感染猪链球菌患者血清中针对SSU1664蛋白的IgM含量显著性升高.结论:SSU1664蛋白具有较高的免疫原性,可作为潜在的猪链球菌疫苗候选分子和猪链球菌早期感染诊断的标志物.
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BIRC5shRNA慢病毒表达载体的构建与鉴定
目的:应用RNA干扰技术,以人BIRC5基因为靶基因,设计合成3对短发夹结构的互补DNA序列和一对阴性对照序列,构建慢病毒干扰载体并鉴定.方法:将设计合成的单链引物退火成双链oligo序列,连接入经Age Ⅰ和EcoR I 双酶切线性化的pMAGic慢病毒质粒载体中,经转化DH5a感受态细胞并筛选出阳性克隆,采用PCR扩增和DNA测序鉴定阳性克隆.结果:PCR扩增产物经凝胶电泳阳性克隆得到335 bp条带,阴性克隆得到298 bp条带,DNA测序结果证实其含设计合成序列.结论:4对BIRC5 shRNA重组慢病毒表达载体构建成功,为研究靶向BIRC5 siRNA对肿瘤细胞增殖抑制与诱导凋亡作用及基因治疗研究奠定了实验基础.
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检测支气管哮喘患者血清IFN-γ和IL-4含量的临床意义
支气管哮喘是一种变态反应性疾病,是一种由多种细胞因子参与的慢性炎症性疾病,这种慢性炎症导致气道高反应性,从而产生反复发作的喘息、胸闷、呼吸困难、咳嗽等症状,严重时可呈端坐位呼吸困难,即哮喘持续状态,可危及患者生命.它是呼吸系统疾病中一种常见病多发病,严重地影响患者的工作和生活.为了更好更快的诊断和治疗该疾病,减轻患者疾苦,我们检测了支气管哮喘患者血清中IFN-γ和IL-4含量水平,以探讨两者在该疾病发生发展中的作用及其临床意义.
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不同级别胶质瘤患者术前外周血Th1/Th2细胞因子的表达
目的:分析不同级别脑胶质瘤患者手术前外周血Th1/Th2细胞因子表达变化.方法:选择近期住院的脑胶质瘤患者63例,在治疗前采用ELISA方法进行外周血IFN-γ、IL-2、IL-4和IL-10浓度检测.结果:胶质瘤组外周血IL-4和IL-10浓度均明显高于对照组,而前者外周血IFN-γ、IL-2浓度及IFN-γ/IL-4比值则显著低于后者(P＜0.05或P＜0.01).高级别组(Ⅲ～Ⅳ级)外周血IL-4和IL-10浓度均明显高于低级别组(Ⅰ～Ⅱ级),而前者外周血IFN-γ、IL-2浓度及IFNγIL-4比值则显著低于后者(P＜0.05或P＜0.01).结论:脑胶质瘤患者可能有Th2优势表达,与恶性程度有一定关系.
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莪术醇对鼻咽癌细胞CEN-2增殖与凋亡的影响
目的:观察莪术醇对鼻咽癌CEN-2的增殖抑制与凋亡的影响,探讨其抗鼻咽癌的分子机制.方法:以不同浓度的莪术醇(12.5、25、50、100 mg/L)及阴性对照组处理鼻咽癌CNE-2细胞,应用MTT法检测不同浓度的莪术醇对CNE-2细胞生长增殖抑制作用;Hocheat33342荧光染色法观察凋亡细胞的发生及形态学变化,流式细胞术检测其凋亡率,Western blot法检测核转录因子-κB(NF-κB)蛋白的表达.结果:莪术醇处理组能明显抑制CNE-2的增殖(P＜0.01),流式细胞术检测药物作用48 h后,CNE-2细胞的凋亡率也随莪术醇浓度的增加而增加,100 mg/L的莪术醇处理组其凋亡率可达45.5%,与阴性组比差异极显著(P＜0.01);NF-κB的蛋白相对表达量随莪术醇剂量的增大而下降,与对照组相比有显著性意义(P＜0.01).结论:莪术醇能对体外鼻咽癌CNE-2细胞具有明显增殖抑制和诱导凋亡的作用,其分子机制可能与NF-κB的表达下调有关.
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宫颈液基细胞中转录因子Brn-3a表达对宫颈病变的早期诊断价值
目的:探讨宫颈液基细胞中转录因子Bin-3a表达及其早期诊断宫颈病变的临床价值.方法:选择我院病理科有活检或手术切除标本病理诊断的液基细胞学检查(TCT)患者192例,并均行阴道镜下活组织检查.将入选病例剩余TCT标本进行Brn-3a蛋白免疫细胞化学染色,并与组织病理学结果进行对照.结果:TCT残留标本中Brn-3a蛋白表达的阳性率随宫颈病变严重程度加重而增高,且各级细胞学诊断间比较差异具有统计学意义(P＜0.05).单纯TCT的病理诊断符合率为SCC96.8%(30/31),HSIL80.5%(33/41),LSIL76.9%(30/39),而TCT联合Brn-3a的病理诊断符合率为SCC 97.1%(30/31),HSIL78.6%(33/42),LSIL 76.9%(30/39).与单纯TCT的病理诊断符合率比较,TCT联合Brn-3a对HSIL、LSIL的病理诊断符合率明显高于单纯TCT(P＜0.05).结论:TCT联合Brn-3a检测对早期诊断宫颈病变具有一定的临床价值.
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SOX9、结缔组织生长因子促进腱骨结合处愈合的生物力学研究
目的:观察SRY相关高迁移组box基因9(SOX9)及结缔组织生长因子(CTGF)在促进腱骨结合处愈合的生物力学作用.方法:36只成年新西兰大白兔随机分为A、B、C共3组,每组12只.其中A组为SOX9组:使用SOX9注射腱骨结点处;B组为CTGF组:使用CTGF注射腱骨结点处;C组为单纯对照组.三组动物均行动物试验并分别于术后4周、8周及12周行生物力学测定,统计学分析结果.结果:术后4周、12周,A、B组的横截面积均低于C组,组间对比有统计学差异(P＜0.05).术后4周、8周、12周,A、B组的拉断负荷及极限拉应力均高于C组,组间对比有统计学差异(P＜0.05).结论:S0X9以及CTGF组能够促进腱骨结合处的早期愈合,并能够增加其生物力学强度.
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胃癌患者血浆氧化抗氧化状态及组织8-羟基鸟嘌呤糖苷酶mRNA表达水平
目的:探讨胃癌患者体内氧化及抗氧化水平的变化与胃癌的关系.方法:以胃腺癌患者(n=48)和健康人(n=30)空腹外周血为标本,采用紫外分光光度法检测氧化酶指标(MPO、XOD)、总抗氧化能力(T-AOC)以及丙二醛(MDA)的表达水平,采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定8-羟基鸟嘌呤(8-OHdG)的表达.采用荧光定量RT-PCR法测定胃腺癌组织(n=68)和正常组织(n=12)中8-羟基鸟嘌呤糖苷酶mRNA表达水平.结果:胃癌组血浆XOD、MPO表达水平分别为(10.46±7.23)U/L、(23.71±25.06)U/L,健康对照组血浆XOD、MPO表达水平分别为(5.85±2.27)、(5.16±11.35)U/L,胃癌组均高于对照组,差异具有统计学意义(P＜0.05);胃癌组T-AOC的表达水平为(5.02±3.13)U/mL,健康对照组为(19.40±7.18)U/mL,胃癌组低于对照组(P＜0.05);胃癌组血浆8-OHdG和MDA的表达水平分别为(14.76±12.41)ng/mL、(18.83±4.19)nmol/mL,健康对照组为(6.49士5.75)ng/mL、(7.11±6.20)nmol/mL,胃癌组高于对照组(P＜0.05).胃癌组织中hOGG1 mRNA相对表达值(5.34±2.37)高于对照组的表达(1.04±0.76),差异有统计学意义(Z=1.964,P＜0.05).结论:胃腺癌患者体内氧化应激水平升高以及抗氧化防御水平的降低,胃腺癌组织中hOGG1mRNA表达增强.
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应用nested-PCR对西安市乙肝病毒基因型的研究
目的:研究西安市乙肝患者HBV基因型分布状况,初步建立适用于临床的HBV基因分型的方法.方法:对收集的360例乙肝患者血清样本,针对乙肝病毒基因型(A-H)前S1到S基因的保守序列设计出12条内外引物,采用nestedPCR进行2轮扩增,第2轮产物使用30 g/L琼脂糖进行电泳,根据片断大小进行基因分型.结果:分型成功348例,其中HBV B基因型87例(24.2%);C型233例(64.7%);B+C混合型2例(0.56%),未检出A、D、E、F、G、H型.结论:nested-PCR适用于临床HBV基因分型常规检测,通过该方法的检测表明西安市HBV感染者以C基因型为主,B型次之,其余基因型分布较少.
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HBV感染者肝移植后淋巴细胞亚群变化分析
目的:探讨HBV感染患者肝移植后短期淋巴细胞亚群和细胞因子的变化规律,为肝移植后免疫状态的监测提供依据.方法:用流式细胞术(FCM)和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测20例HBV感染相关的终末期肝病和肝癌患者肝移植前和移植后12 h、3 d、10 d、30 d、60 d的外周血淋巴细胞亚群和细胞因子水平,与22例健康人比较.结果:HBV感染患者肝移植前淋巴细胞各亚群绝对值显著低于健康对照,移植后12 h淋巴细胞各亚群绝对值大大降低,3 d后回升,移植后10 d起CD3、CD4、CD8及NK细胞百分比和绝对值达到稳定,60 d时其绝对值比移植前大大升高,但仍显著低于健康对照;移植后12 h时IFN-γ和IL-10水平升高数倍,3 d后显著下降,60 d时IL-10水平仍高于健康对照.结论:肝移植后10 d患者淋巴细胞亚群绝对数量升高至稳定水平,但仍低于正常;肝移植后免疫倾向于Th2极化.
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HAb18G/CD147在食管鳞状细胞癌中的表达及其临床意义
目的:探讨HAb18G基因产物表达与食管鳞状细胞癌(ESCC)临床病理特征及预后的关系.方法:应用免疫组化SP染色法分析了108例食管鳞状细胞癌标本中HAb18G基因产物表达情况和定位,并对其进行了术后3年随访.结果:HAb18G基因产物在有淋巴结癌转移和预后差的食管鳞状细胞癌病例中高表达;HAb18G的高表达与食管鳞状细胞癌的浸润转移、分化程度均相关(P＜0.05);淋巴结转移和HAb18G表达可作为食管鳞状细胞癌患者预后独立指标.结论:HAb18G在食管鳞状细胞癌中的表达与食管癌的发生发展、浸润转移和预后密切相关,可作为临床预测浸润转移和估计预后的一个重要参考指标.
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老年糖尿病周围血管病变患者外周血干细胞采集效果影响因素分析
目的:探讨影响老年糖尿病周围血管病变患者(PAD)行外周血干细胞动员采集效果的因素.方法:对91例老年PAD患者行粒细胞集落刺激因子(G-CSF)动员后,采用Cobe Spectra血细胞分离机行自体外周血干细胞(PBSC)采集.PBSC采集后取混匀后的采集物少量悬液计数单个核细胞数(MNC)、CD34+细胞数.采用多元线性回归分析,G-CSF剂量、采集前白细胞计数、体重指数(BMI)、糖化血红蛋白(HbA1c)、甘油三酯(TG)和低密度脂蛋白(LDL-C)等因素对采集物MNC和CD34+细胞数的影响.结果:BMI、TG对采集的MNC数有影响;HbA1c、LDL-C与CD34+呈负相关;动员剂的剂量、采集前白细胞计数与MNC总量和CD34+细胞数量关系不密切.结论:根据不同病情制定个体化动员方案,减少不利因素,老年PAD患者也可安全、成功地行PBSC采集.
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肝癌相关的单克隆抗体的制备及其抗原表位分析
目的:制备肝癌相关的单克隆抗体(mAb)用于肝癌的诊断.方法:用高转移肝癌细胞系HCCLM-6细胞免疫BALB/c小鼠后,取小鼠脾细胞与Sp2/0融合建立杂交瘤细胞系.通过ELISA法筛选HCCLM-6细胞蛋白的特异性mAb,用免疫组化染色法筛查对肝癌组织阳性率高的mAb,并用免疫荧光方法鉴定其在不同肿瘤细胞系中的表达,后通过筛选Uni-ZAP XR人肝细胞cDNA表达文库初步鉴定mAb识别的抗原及其表位.结果:建立了28株杂交瘤细胞株,用ELISA法和免疫组化染色法筛选出肝癌阳性率较高的mAbQGA062.通过人肝细胞cDNA表达文库筛选初步鉴定表明mAb QGA062识别的抗原是纤维连接蛋白(FN),经分析其抗原表位位于肽段YTVSLVAIKGNQESPK.结论:获得与肝癌相关的mAb QGA062,并鉴定了其识别的抗原和表位,为肝癌的诊断和FN参与肝癌转移的机制研究提供了重要的制剂.
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抗Fc受体γ链单克隆抗体的研制及生物学特性鉴定
目的:制备Fc受体γ链的单克隆抗体(mAb),并对其生物学特性进行鉴定,为研究受体γ链相关的疾病提供实验材料.方法:人工合成的蛋白多肽偶联后免疫BALB/c小鼠,用间接ELISA法筛选阳性克隆,Western blot、流式细胞术(FCM)检测鉴定抗体的特性及抗原识别位点.结果:通过细胞融合和亚克隆,共筛选出3株能稳定分泌抗体并且反应性好的杂交瘤细胞株5B6、7D3和8D4.其中7D3抗体反应性强,2.5μg/mL与体内体外的γ链都能特异性反应.结论:获得了抗Fc受体γ链特异性的mAb,为进一步研究Fc受体γ链在相关疾病发生发展过程中所发挥的作用提供了良好的研究手段.
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抗Ⅳ型登革病毒NS1单克隆抗体的制备及特性鉴定
目的:研制Ⅳ型登革病毒(DENV-4)非结构蛋白1(NS1)特异性的单克隆抗体(mAbs),并鉴定其特异性.方法:在表达具有良好抗原性的重组DENV4-NS1蛋白的基础上,用重组DENV4-NS1蛋白和灭活的DENV-4免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠的脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞进行融合,用间接ELISA法筛选阳性的杂交瘤细胞,并结合免疫荧光测定法(IFA)和Western blot分析对mAb的特异性进行鉴定;通过竞争抑制试验对mAb识别的抗原位点进行分析.结果:获得15株特异性针对DENV4-NS1的mAbs,与其他3型DENV的NS1不产生交叉反应.mAb的Ig亚类测定均为IgG1.竞争抑制试验显示,15株mAb8存在2个不同识别抗原位点.结论:成功地获得特异性针对DENV4-NSI蛋白的mAbs,为进一步研究DENV4-NS1蛋白的结构与功能及研制DENV-4的临床诊断试剂奠定了基础.
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阿莫西林人工抗原的合成及其单克隆抗体的制备
目的:合成阿莫西林(AMX)完全抗原,获得稳定、高效分泌抗AMX单克隆抗体(mAb)的杂交瘤细胞株.方法:采用N-羟基琥珀酰亚胺活性酯(NHS)法制备AMX-OVA(免疫原)AMX-BSA(检测抗原),紫外光谱分析检测偶联物克分子比,以AMX-OVA免疫BALB/c小鼠,用细胞融合技术筛选分泌抗AMX mAb的杂交瘤细胞,体内诱生法制备腹水,辛酸-硫酸胺法从腹水中纯化mAb,ELISA法测定mAb亚类.结果:紫外光谱显示偶联物表现出小分子与蛋白载体叠加的特征,具有良好的免疫原性和反应原性.获得了5株可稳定分泌特异性抗AMX mAb的杂交瘤细胞株,亚类鉴定均为IgG1.mAb对AMX小检测极限(limit of detection,LOD)为0.25ng/mL,但与同属β-内酰胺类抗生素的氨苄青霉素有一定程度的交叉反应.结论:该细胞株可满足建立免疫学检测方法的需要和开发应用的要求.
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以细胞表面受体为靶点的噬菌体抗体库筛选策略进展
噬菌体抗体库技术是获得全人抗体有效的方法之一.目前发现和确认的药物靶点中,大部分是细胞表面受体.利用抗体库筛选难以提纯、性质不明或表达量极低的膜受体时,经典的筛选方法很难获得有开发价值的抗体.抗原表位研究、全细胞筛选及自动化高通量筛选技术的发展,为解决这些困难提供了可能.本文中综述了根据不同细胞表面受体特点,采用不同噬菌体抗体库筛选策略的相关进展.
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Th1、Th2型细胞因子在鸡马立克氏病中的研究进展
马立克氏病(Marek's disease,MD)是由马立克氏病病毒(Marek's disease virus,MDV)引起的一种鸡淋巴组织增生性疾病,以免疫抑制、多发性神经炎、内脏和组织中形成T淋巴瘤为特征[1].根据血清学不同,MDV可分为致瘤性的Ⅰ型MDV、非致瘤性的血清Ⅱ型以及可作为疫苗用的火鸡疱疹病毒血清Ⅲ型(HVT)[2].MDV在体内感染可分为4个时期:早期溶细胞感染期,感染后3～7 d,病毒处于生产性感染,主要感染法氏囊;潜伏期,感染病毒7～10 d,病毒复制减退,主要存在于胸腺的CD4+T淋巴细胞内;第2次溶细胞感染期,感染后14～21 d,MDV复制活化;肿瘤细胞增生期,淋巴瘤生成与否取决于宿主的遗传易感性及病毒毒力[3].所有品系鸡均可感染MDV,但存在抗性差异,与主要组织相容性复合体(MHC)所在的免疫遗传基因[1]及机体的免疫系统密切相关[4].近年来随着禽免疫学的发展,MDV感染引起的细胞免疫反应及细胞因子在免疫调节中所起的作用已成为研究MD的热点.
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二噁英的免疫毒性作用研究进展
二噁英是环境中毒性极高的持久性有机污染物的一种,免疫系统是对二噁英敏感的靶系统之一.研究表明,二噁英能够抑制体液免疫、影响细胞免疫和免疫系统的发育,以及改变机体内各种免疫分子的表达水平.而抑制AhR受体的基因表达、VE的拮抗作用等能够对二噁英的免疫毒性起到一定抑制作用.本文中总结了对二噁英免疫毒性的研究进展.
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IL-17+ γδT细胞
IL-17是一种重要的炎症介质,近研究显示,除了Th17细胞,γδT细胞也能够产生IL-17,并且比αβT细胞产生得更为迅速.与Th17细胞一样,γδT细胞产生IL-17的能力受多种因素影响,并和某些与IL-17相关的疾病有着密切联系,这对相关疾病的致病机制有了新认识,也为这些疾病的治疗提供了新思路.现就近年来对γδTT细胞产生IL-17能力的研究,以及这群细胞和疾病的关系进行简要综述.
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γδT细胞在感染性疾病中的研究进展
T细胞免疫应答在感染性疾病中发挥着抗感染和清除外来病原微生物的重要作用.根据TCR两条肽链构成的不同,可将T细胞分为αβT细胞和γδT细胞,αβT细胞在获得性免疫应答中发挥重要作用;而γδT细胞由于其分布特点和应答的非MHC限制性,在固有性免疫中发挥着独特的作用.随着研究的深入,其在获得性免疫应答中的作用也逐渐被揭示.γδT细胞是具有原始受体的第一线防御细胞和进程效应细胞,它在微生物感染免疫中的作用日益受到重视.我们就γδT细胞在细菌,病毒和寄生虫等病原体感染性疾病的研究进展做一综述.
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OFSS抑制MC3T3成骨细胞对TNF-α的反应性
目的:研究OFSS对小鼠MC3T3成骨细胞TNF-α反应性的影响,为骨力学负荷的抗炎性骨丢失作用提供实验室证据.方法:利用特制的细胞OFSS加载实验装置,在应用TNF-α+CHX诱导MC3T3细胞凋亡之前或过程中,向细胞施加OFSS(10～12 dynes/cm2,1 Hz),观察细胞形态学变化、以及应用SDS-PAGE结合Western blot方法分析凋亡标志性蛋白和IκBα信号的变化,分析OFSS对MC3T3细胞TNF-α反应性的影响.结果:2 h OFSS预处理几乎完全抑制TNF-α诱导的Caspase-3激活和Parp降解,而且Caspase-3的上游关键分子Caspase-8的激活几乎完全抑制;细胞凋亡形态学变化被抑制;TNF-α诱导的IκBα磷酸化也被显著抑制,表明OFSS可作用于IκBα信号上游.此外,在TNF-α/CHX诱导凋亡2 h后开始施加OFSS仍可有效抑制caspase-8的激活、从而抑制细胞凋亡,提示OFSS还可能直接作用于凋亡诱导通路而发挥细胞保护作用.结论:OFSS抑制MC3T3成骨细胞的TNF-α反应性,可能减轻炎症性骨丢失,其作用机制可能涉及多个环节.
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姜黄素对糖尿病大鼠脊髓背角TNF-α表达的影响
目的:探讨糖尿病大鼠模型脊髓背角TNF-α表达变化以及姜黄素对该分子表达的影响.方法:30只SD雄性大鼠随机分为对照组(Con)、糖尿病组(DM)和姜黄素治疗组(DM+Cur),每组10只;利用腹腔注射链脲佐菌素(STZ)制备大鼠糖尿病模型,DM+Cur组为糖尿病模型制备成功后给予姜黄素治疗,同时Con组和DM组给予等量的生理盐水.利用ELISA方法检测各组大鼠脊髓背角TNF-α分子的含量,利用RT-PCR方法比较各组大鼠脊髓背角TNF-α mRNA的表达.结果:成功制备Ⅰ型糖尿病(TIDM)大鼠模型,该模型具有高血糖、质量减轻、多饮、多食、多尿等特点,ELISA检测结果显示Con组、DM组和DM+Cur组大鼠脊髓背角TNF-α分子含量分别为:21±6 pg/mL、145±11 pg/mL以及80±7pg/mL,DM组TNF-α分子含量明显高于Con组(P＜0.05),给予姜黄素治疗后,DM+Cur组TNF-a显著下降,但仍高于Con组(P＜0.05).RT-PCR检测结果显示DM组大鼠脊髓背角TNF-α mRNA高于Con组,给予姜黄素治疗后,DM+Cur组TNF-α mRNA较DM组有所降低,这一趋势与ELISA结果相一致.结论:STZ诱导的TIDM大鼠脊髓背角TNF-α表达增加,中药姜黄索可以降低TIDM大鼠髓背角TNF-α的表达.
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ABO血型正反定型不符与交叉配血不合的原因及其处理方法
目的:探讨引起患者ABO血型正反定型不符与交叉配血不合的原因及其处理方法,确保输血安全.方法:应用血型血清学检测方法对ABO血型正反定型不符及交叉配血不合的血标本进行正反定型、不规则抗体筛选及特异性鉴定、吸收放散试验、唾液血型物质测定等系列检测,分析引起血型正反定型不符及交叉配血不合的原因,为患者选择同型及交叉配血相合的血液进行输注.结果:在输血前的血型血清学检测中发现ABO血型正反定型不符及交叉配血不合的血标本468例,其中自身冷抗体132例(28.2%),血型不规则抗体96例(20.5%),血型抗原性减弱68例(14.5%),血型抗体效价减弱60例(12.8%),自身抗体阳性54例(11.5%),血浆蛋白异常18例(3.8%),实验方法学原因16例(3.4%),ABO血型不合的干细胞移植13例(2.8%),肝素影响9例(1.9%),血标本污染2例(0.4%).结论:ABO血型正反定型不符及交叉配血不合的原因大多数是由自身抗体,不规则抗体,血型抗原抗体减弱及血浆蛋白异常等引起的.因此对ABO血型正反定型不符及交叉配血不合的血标本,应采用多种血型血清学检测方法进行互相验证,以保证血型鉴定及交叉配血无误,确保临床输血安全.
| 年 | 期数 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2017 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2011 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2010 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2009 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2008 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2007 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2006 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2005 | 01 02 03 04 05 06 z1 |
| 2004 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2003 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2002 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2001 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2000 | 01 02 03 04 05 06 |
| 1999 | 01 02 |
| 1995 | 01 02 03 |
| 1994 | 01 02 |
| 1993 | 01 02 03 04 |
| 1992 | 01 02 03 04 |
| 1991 | 01 02 03 04 |
| 1990 | 01 02 |
| 1989 | 01 02 03 04 |
