细胞与分子免疫学杂志
Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology 세포여분자면역학잡지
- 主管单位： 中国免疫学会；第四军医大学
- 主办单位： 陕西省免疫学会,中国免疫学会
- 影响因子： 0.81
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 1007-8738
- 国内刊号： 61-1304/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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HAb18G/CD147拮抗肽对肝癌细胞表面抗原HAb18G的亲和性
目的:研究HAb18G/CD147拮抗肽对肝癌细胞上HAb18G/CD147抗原的亲和性.方法:利用流式细胞仪测定人肝癌细胞(HHCC,SMMC7721)上HAb1 8G抗原的表达.分别在HAb18G/CD147拮抗肽AP-1、AP-2和AP-6 的N端标记生物素,用流式细胞仪和激光共聚焦显微镜测定AP-1、AP-2和AP-6与HHCC或SMMC7721的结合能力.结果:HAb18G抗原在HHCC和SMMC7721细胞上均呈高表达.AP-6对HHCC的亲和力强,AP-2次之,AP-1弱.AP-6对与SMMC7721的亲和力也强,AP-1次之,AP-2未检测到.结论:HAb18G/CD147拮抗肽对肝癌细胞表面抗原HAb18G/CD147具有较高的亲和性.
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Der p2重组胞壁型E.coli-BCG穿梭表达载体的构建和鉴定
目的:构建能够携带外源蛋白屋尘螨抗原(Der p2)基因并能在胞壁表达的E.coli-BCG穿梭载体.方法:用PCR技术,从结核分支菌毒株H37Rv基因中,扩增结核分支杆菌19 kDa抗原的胞壁区及其上游调控元件(19-ss)基因,并克隆入含有Der p2基因的E.coli-BCG穿梭载体pOLYG中.用间接免疫荧光染色法,检测该载体能够携带并表达的Der p2基因在牡牛分支杆菌宿主中表达.[ HTH 结果:经测序证实,所克隆的19-ss基因序列正确.所构建的含有19-ss基因的E.coli-BCG穿梭载体(pCW)能完成在大肠杆菌和牡牛分支杆菌细胞之间的穿梭,并介导抗生素抗性基因表达.经免疫荧光检查,外源基因Der p2以脂蛋白的形式表达于分支杆菌宿主的表面.结论:成功地构建了以胞壁嵌合形式表达外源蛋白的E. coli-BCG穿梭载体.
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不同反应靶细胞中IL-6对STAT1激活的比较
目的:探讨不同反应靶细胞中白细胞介素6 (IL-6) 对信号转导子与转录激活子1 (STAT1) 的激活.方法:利用抗STAT1和抗酪氨酸磷酸化STAT1的抗体,进行免疫印迹分析.结果:IL-6可促进7TD1和TF1细胞生长,但在这两种细胞中对STAT1的酪氨酸磷酸化水平没有明显影响.M1、R2和U937细胞在IL-6诱导下生长停止并向巨噬细胞方向分化,而IL-6在这3种细胞中均可激活STAT1,且激活效应有剂量与时间依赖性.结论:STAT1的活化可能与抑制效应有关.我们的数据有助于解释为什么IL-6在不同效应靶细胞中有不同的生物学效应.
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热不稳定大肠杆菌肠毒素B亚单位免疫调节功能的实验研究
目的:探讨大肠杆菌热不稳定肠毒素B亚单位(LTB)的免疫调节功能及其可能的机制.方法:用Sephacryl S-100凝胶柱层析纯化LTB蛋白. 选用BALB/c小鼠,以鸡溶菌酶(HEL)为抗原,经鼻黏膜单独免疫,或以不同剂量的LTB为佐剂与HEL共免疫.用ELISA法检测血清和肠分泌液中HEL特异性抗体的水平.用3H-TdR掺入法,体外测定 LTB蛋白对刀豆蛋白A(ConA)及同种异体抗原介导的淋巴细胞增殖反应的影响. 结果:HEL单独免疫组血清中仅有弱的抗HEL IgG,未检测到抗HEL IgA,且其肠分泌液中亦未见HEL特异性IgA抗体.但加用LTB佐剂的3个组,其血清中抗HEL IgG、 IgA 的水平及肠分泌液中抗HEL IgA的水平均显著高于HEL单独免疫组(P<0.001).体外实验显示,LTB可明显抑制ConA及同种异体抗原介导的淋巴细胞增殖反应. 结论:我们制备的LTB蛋白对免疫系统具有双向的调节功能,既可作为有效的黏膜佐剂,辅佐外来抗原刺激机体产生黏膜免疫应答,又具免疫抑制效应,有效地抑制淋巴细胞活化.LT B免疫调节功能的发挥,可能与其作用于机体的途径有关.
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活体染料CFDA-SE在淋巴细胞增殖研究中的应用
目的:探讨活体染料CFDA-SE在淋巴细胞增殖研究中的应用价值.方法:利用CFDA-SE染色、荧光抗体标记和流式细胞术,检测淋巴细胞及其亚群在多克隆刺激剂作用下荧光强度的变化,并应用相关软件分析其增殖情况.结果:PDB+ionomycin或ConA刺激48 h后均出现淋巴细胞分裂,表现为CFSE荧光强度的系列减半.环孢菌素A(CsA)可抑制ConA促进淋巴细胞增殖的作用,CFSE荧光无减半. ConA刺激48 h后,出现CD4+ T细胞和CD8+ T细胞增殖不同步的现象,72 h后这一现象更加明显.经ModFitTM软件拟合后,得到的各项增殖指标显示,ConA对CD8+ T细胞的促增殖作用强于对CD4+ T细胞的作用.结论:CFDA-SE染色结合荧光抗体标记和流式细胞术,是分析淋巴细胞增殖的有力工具.
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小鼠NGF基因真核表达载体的构建及其在NIH3T3细胞中的表达
目的:构建小鼠β-NGF基因真核表达载体并观察其稳定转染的NIH 3T3 细胞系中NGF的表达情况. 方法:用基因重组技术,将小鼠β-NGF的成熟cDNA序列及其前导序列,克隆到真核表达载体pcDNA3.1+中,用限制性内切酶酶切鉴定重组体.利用脂质体FuGENETM6方法,转染NIH 3T3细胞.转染后72 h,用G418筛选阳性克隆并培养至20 d.对阳性克隆培养上清中NGF的表达用Western blot分析并观察该上清中NGF对PC12细胞突起生长的作用.结果:β-NGF基因在NIH 3T3细胞中获得表达.阳性克隆培养上清能促进PC12细胞突起生长. 结论:重组真核表达载体pcDNA3.1+/NGF构建成功,NGF蛋白在NIH 3T3细胞中表达,并具有良好的生物学活性,为进一步开展NGF基因治疗神经系统疾病奠定了基础.
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乙型脑炎病毒E蛋白在巴斯德毕赤酵母中的表达
目的:用巴斯德毕赤酵母系统表达乙型脑炎病毒(JEV)E蛋白 .方法:将JEV E蛋白基因亚克隆入真核表达载体pPIC9K,以电穿孔法转化酵母SMD1168.用MD平板筛选重组子、G418筛选高拷贝转化子,经甲醇诱导表达后,S DS-PAGE和免疫印迹分析表达产物. 结果:由于糖基化不同,所表达产物的相对分子质量(Mr)约为113 000和78 000,表达量约为50 mg/L. 结论:在巴斯德比赤酵母中成功地表达了JEV E蛋白,为制备JEV的诊断抗原和基因工程重组疫苗打下基础.
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内皮细胞中一种新的可溶型黏附分子sCD226的表达调变规律
目的:探讨人内皮细胞中一种新的可溶型黏附分子sCD226的表达调变规律.方法:用ELISA方法,检测不同浓度的LPS刺激人脐静脉内皮细胞后不同时间点培养上清中sCD226含量的变化; 用Greiss法检测上述细胞培养上清中NO含量的变化 ,并分析两者的线性相关性.加入抗TNF-α中和抗体和iNOS抑制剂后,观察其对LPS诱导sCD 226生成的影响.结果:①随着LPS刺激剂量的增加和刺激时间的延长,H UVEC培养上清中sCD226的含量明显增加,100 mg/L LPS刺激3 d后sCD226的含量为188.5 μg/L.②LPS刺激剂量为100 mg/L时,HUVEC培养上清中sCD226和NO的含量呈显著的正相关 .③抗TNF-α中和抗体和iNOS抑制剂可显著抑制LPS活化的HUVEC产生sCD226. 结论 :LPS可诱导HUVEC产生sCD226分子,且sCD226的生成与NO和TNF-α的产生密切相关.
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LAIR基因的克隆、原核表达及免疫反应性鉴定
目的:克隆和表达淋巴细胞相关免疫球蛋白样受体(leukocyte-associated immun oglobulin-like receptor,LAIR),鉴定抗LAIR-1 单克隆抗体(mAb)与LAIR-2分子的免疫反应性.方法:利用RT-PCR,从人外周血单个核细胞(PBMC)及白血病细胞系Jurkat和HL-60中克隆了LAIR cDNA.将LAIR-1的胞膜外区基因及LAIR-2 cDNA,克隆入GST融合蛋白表达载体pGEX- 4T-3中.以其转化E.coli BL21菌株后,在IPTG诱导下进行表达,表达产物用谷胱甘肽交联的Sepharose 4B纯化.用间接ELISA法,鉴定抗LAIR-1 mAb对表达蛋白的免疫反应性.结果:克隆并表达了LAIR-1 和LAIR-2 cDNA.同时克隆了5种新的LAIR-1异型,其中从HL-60细胞克隆的2种包含LAIR-1开放读框(ORF),从Jurkat细胞中克隆的3种为LAIR-1 cDNA片段.mAb鉴定表明LAIR-1与LAIR -2的免疫反应性不同.结论:LAIR基因的转录、转录后的加工及表达,可能与个体和疾病状态有关.LAIR-1和LAIR-2免疫反应性的不同与其构象有关.
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刺激人γδT细胞增殖的结核杆菌多肽抗原的生物学特性分析
目的:分析可刺激人γδT细胞增殖的结核杆菌多肽抗原(Mtb-Ag)的某些生物学特性.方法:以结核杆菌分泌蛋白与经透析或链霉蛋白酶处理的Mtb-Ag体外分别刺激人外周血单个核细胞(PBMC)增殖,培养10 d时,采用流式细胞仪分析细胞的表型.结果:透析后的Mtb-Ag刺激γδT细胞增殖的活性未见明显降低; 而经链霉蛋白酶处理的Mtb-Ag促进γδT细胞增殖的活性则显著下降.另外,与结核杆菌分泌蛋白相比较,Mtb-Ag刺激γδT细胞增殖的活性显著增强.结论:Mtb-Ag中可刺激人γδT细胞增殖的成分是一种相对分子质量(Mr)大于10 000、非分泌性、对蛋白水解酶敏感的多肽抗原.
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脑缺氧缺血后新生大鼠海马CA1区NMDAR的表达
目的:研究新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)后,海马CA1区N甲基 D天门冬氨酸受体(NMDAR)及NMDAR mRNA表达的变化.方法:建立HIBD模型,用免疫组化及原位杂交方法,检测正常对照(NORM)组和缺氧缺血(HI)后不同时间点 ,NMDA受体I型亚单位(NR1)表达的阳性细胞及NR1 mRNA表达的阳性细胞.结果:[ HTSS HI后2 h 时NR1、NR1 mRNA的表达稍下降,24 h开始上升,72 h达高峰,与正常对照组相比较有显著意义(P<0.05).结论:正常新生大鼠海马CA1区有NR 1及NR1 mRNA的表达,HI后NR1及NR1 mRNA的表达上调.
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睾丸肿瘤抗原MAGE-E1基因片段的克隆及其在大肠杆菌中的表达
目的:克隆及表达人胶质瘤特异性抗原MAGE-E1基因片段.方法:从人胶质瘤细胞系BT-325提取总RNA,用RT-PCR从中扩增出MAGE-E1基因片段.将MAGE-E1 基因片段插入载体pGEM-T easy中,经全自动序列分析仪测序正确后,再克隆至表达载体pGE X- 4T-2中,构建重组表达载体pGEX- 4T-2-MAGE-E1,并转化大肠杆菌进行表达.结果:用1 mmol/L异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导5 h,MAGE-E1蛋白的表达即达高峰. SDS-PAGE及凝胶密度扫描分析表明,表达出Mr约4 1 000大小的蛋白,占菌体总蛋白的35%.结论:该基因片段的高效表达为进一步制备其抗体,以及制备肿瘤疫苗奠定了基础.
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米非司酮对早孕绒毛滋养层细胞Bcl-2和caspase-3表达的影响
目的:探讨米非司酮对人早孕绒毛滋养细胞中Bcl-2和caspase-3表达的影响及其在滋养细胞凋亡中的作用.方法:将105例自愿要求终止妊娠的早孕妇女随机分成两组,即米非司酮流产组(55例)及人工流产组(50例).采用免疫组化染色方法检测早孕妇女的绒毛组织中Bcl-2和caspase-3的表达.结果:米非司酮组与人流组绒毛滋养细胞中Bcl-2的表达率分别为54.6%和88.0%; caspase-3的表达率分别为89.1%和42.0%.米非司酮组与人流组相比较绒毛滋养层细胞Bcl-2呈低表达 (P<0.01),caspase-3呈高表达(P<0.01).结论:Bcl-2和caspase-3在米非司酮诱导的早孕绒毛滋养层细胞凋亡的信号传导中起关键作用.
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多发性硬化患者血清sCD62E的检测及意义
多发性硬化(multiple sclerosis,MS)的病因及发病机制至今未明.目前认为,主要是由其T细胞介导而致中枢神经系统炎性脱髓鞘的自身免疫性疾病[1].由于可溶性E选择素(又称sCD62E)可介导白细胞(中性粒、单核细胞及CD4+记忆性T细胞)在内皮细胞表面初的滞留和滚动,以及随后迁移到炎症组织,推测其可能与T细胞介导的中枢神经损伤有关.为此,我们检测了MS患者sCD62E,以探讨其在MS发病中的作用.
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普种乙肝疫苗抗体产生率过低的原因
根据上级统一部署,对部队官兵进行普种乙肝疫苗,对246例在接种乙肝疫苗1年后进行乙型肝炎系列检查. 发现其抗-HBS阳性率与国内报道和同期对照组相比明显偏低[1] .
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p16INK4A与nm23/NDPK在早孕期和围植入期子宫组织中的表达及意义
自1829年,法国生物学家Lobstein等提出肿瘤胚胎性起源的概念以来,关于胚胎细胞与肿瘤细胞生物学行为相似性的研究越来越受到重视.在机体癌基因、生长因子与受体、基质降解酶、细胞黏附分子(CAM)、细胞外基质(ECM)、端粒酶及间隙连接细胞间通讯(GJIC)等网络的调控下,"假恶性"的囊胚滋养层细胞和恶性表型的肿瘤细胞,可启动黏附、基质降解、迁移及新生血管形成等信号级联反应,分别在植入窗口期内膜组织和周围靶组织着床,继而侵袭、增殖、分化形成新的组织[1].
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胃癌、直肠癌患者手术前后T细胞亚群的变化
T细胞亚群和NK细胞是免疫系统重要的免疫活性细胞,在抗肿瘤过程中发挥着重要作用 .我们应用APAAP桥联酶标法和MTT比色法,检测22例胃癌和26例直肠癌患者手术前、后T细胞亚群和NK细胞数量,并探讨其变化及其与疾病恢复的关系.
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rhBMP-2m对化疗损伤小鼠的修复治疗作用
目的:探讨重组人骨形成蛋白-2(rhBMP-2m)对环磷酰胺(CTX)致骨髓损伤小鼠的治疗作用.方法:18只小鼠随机分为3组:即CTX注射组、BMP 治疗组和PBS对照组,每组6只小鼠.CTX组和BMP治疗组小鼠,一次性腹腔注射200 mg/kg CTX建立骨髓损伤的模型.注射CTX第2天,BMP治疗组每只小鼠腹腔注射0.5 mg的 rhBMP -2m开始治疗.观察3组小鼠外周血白细胞数的变化.分别在第5天和第8天,用流式细胞仪( FCM)检测骨髓有核细胞中DNA的含量及细胞周期的变化,同时进行粒单细胞集落形成(CFU- GM)细胞培养.结果:注射CTX后第4天,BMP治疗组和CTX注射组的外周血白细胞数均降至低点,然后逐渐回升,两组相比较无显著差异(P>0.05).注射CTX 后第5天,BMP治疗组骨髓有核细胞中,G0/G1期细胞的比例较CTX组明显提高,细胞的坏死及凋亡率明显下降(P<0.01).第8天,BMP治疗组的骨髓有核细胞数较CTX组增加明显(P<0.01).结论:BMP对CTX所致小鼠骨髓的损伤具有修复治疗作用.
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β-葡萄糖醛酸苷酶基因转染的人肾癌细胞的生物学特性观察
目的:建立高表达β-葡萄糖醛酸苷酶(以下简称βG)基因的肾癌细胞模型,并观察转染细胞的生物学特性.方法:构建真核表达载体pcDNA3.1- βG,并利用阳离子脂质体介导将其转入人肾癌细胞株GRC-1中.用mRNA打点杂交和Western blot,鉴定其转录与表达水平,并通过光镜、电镜及细胞增殖周期检测等方法,观察转染细胞的生物学特性.结果:在mRNA与蛋白水平证实,转染细胞内有βG基因的高表达.透射电镜观察,转染细胞中的溶酶体、内质网丰富,细胞微绒毛及突起增多,但转染前后肾癌细胞GRC-1的周期及生长情况无显著性差别.结论:应用脂质体介导法,将βG基因导入人肾癌GRC-1细胞后,获得生物学特性稳定βG基因高表达的肾癌细胞模型,为进一步研究奠定了基础.
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SLE 患者T细胞TCR/CD3介导[Ca2+]I反应与InsP3生成量的相关性
目的:研究SLE患者T细胞功能异常是否与TCR/CD3复合物介导的生物化学信号传导异常有关, 以及这种信号转导异常与InsP3生成量的相关性.方法:用尼龙柱分离肝素化的静脉血得到T细胞并制备其悬液, 用流式细胞术测定CD3+细胞的阳性率。将抗CD3单抗与羊抗鼠IgG相交联刺激T细胞后, 用粘附细胞仪连续观察10 min, 观察T细胞胞内游离Ca2+的变化。用流式细胞术, 检测正常人和SLE患者T细胞上CD3+表达的阳性率是否有差异。用InsP3放射受体试剂盒检测InsP3的生成量.结果:①用尼龙柱吸附除去B细胞得到T细胞悬液, 用流式细胞术检测CD3+细胞的阳性率占90%以上。②正常人和SLE患者T细胞的[Ca2+]i反应的基准值相似（P=0.105）, SLE患者T细胞的[Ca2+]i反应的高峰值、平台值明显高于正常对照（P<0.001）。③正常人和SLE患者T细胞上CD3+表达的阳性率没有差异（P=0.665）。④二者InsP3的生成量无差异（P=0.537）.结论:SLE患者T细胞TCR/CD3介导的[Ca2+]i反应存在异常, 这种异常与InsP3的生成量无关.
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人DOC-2氨基端PID结构域的克隆与原核表达
目的:克隆人DOC-2氨基端PID结构域(暂命名为nDOC-2),并在原核细胞中表达.方法:用RT-PCR从正常人卵巢组织中扩增nDOC-2基因,并克隆到载体pUC-19中.经测序证实后,用BamH I/EcoR I双酶切,亚克隆到原核表达载体pGEX- 4T-1,并转化E.coli DH5α菌株.取工程菌,用IPTG诱导表达 ,对表达产物进行SDS-PAGE鉴定.结果:①经RT-PCR、测序和酶切鉴定,成功地克隆了人nDOC-2基因.②经IPTG诱导的重组质粒pGEX- 4T-nDOC-2表达出相对分子质量(Mr)约为50 000的融合蛋白,与预期的结果相符.结论:成功克隆到人DOC-2氨基端PID结构域,并在E.coli DH5α中表达出GST-nDOC-2 融合蛋白.
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郑氏植物蛋白对乳腺癌及其癌前病变患者PBL的刺激作用及其意义
目的:研究郑氏植物蛋白(Zheng ' s plant-p rotein,ZPP)对淋巴细胞的刺激作用及其在乳腺癌早期诊断与治疗中的应用价值. 方法:采用3H-TdR掺入法测定人外周血淋巴细胞(PBL))的增殖反应.用流式细胞仪测定ZPP对T淋巴细胞CD3+、CD4+ 和CD8+抗原表达的调节作用. 结果:[ HTSS ZPP对乳腺癌及其前期病变患者PBL有较强的刺激作用(SI分别为3.00±1.45和2 .53±0.80),明显高于对正常对照组和乳管上皮轻度增生患者PBL的刺激指数(SI分别为1.06 ±0.17和1.18±0.19)(P<0.01).而PHA对各组PBL的增殖反应均有不同程度的刺激作用,但各组间无明显差异(P>0.05).经ZPP刺激后的PBL中CD3+、CD4+ 和CD8+细胞均发生增殖反应,其中CD4+ 和CD8+者更为明显.结论:ZPP可选择性刺激乳腺癌及其前期病变患者的PBL中T细胞发生增殖反应,此作用有可能用于乳腺癌的早期诊断与治疗中.
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抗人跨膜激活剂及钙调亲环素配体相互作用分子单克隆抗体的制备
目的:制备抗人跨膜激活剂及钙调亲环素配体相互作用分子(TACI)单克隆抗体(mAb),研究TACI分子的细胞分布.方法:应用淋巴细胞杂交技术制备鼠源性抗TACI mAb.用免疫荧光染色、流式细胞术及免疫组织化学染色法,对TACI 在外周血单个核细胞(PBMC)上的分布进行鉴定.结果:获得两株分泌抗 TACI mAb的杂交瘤细胞株.mAb的腹水效价达10-7,均为IgG1亚类,可识别T细胞表面天然的TACI分子,在PHA活化的模型中,TACI主要表达于活化的CD4+ T细胞上.结论:获得两株能特异性识别天然TACI分子的mAb,为进一步研究TACI分子的结构和功能奠定了基础.
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抗鳗弧菌独特型单克隆抗体重链可变区基因的克隆及序列测定
鳗弧菌感染是养殖及野生海水鱼的重要疾病之一,大面积发病会给养殖渔业带来巨大经济损失.目前,对鱼鳗弧菌感染的防治主要是利用抗生素及减毒、灭活疫苗.抗生素的长期使用易使鱼体产生耐药性; 减毒疫苗的安全性较难把握; 灭活疫苗的抗原性较弱且制备过程中残存的杂质还可能使鱼体出现炎症甚至死亡.针对鳗弧菌保护性表位制备的抗鳗弧菌独特型单克隆抗体(mAb)具有良好的安全性及免疫原性[1],但大量生产成本较高.为此,我们应用RT-PCR从分泌抗鳗弧菌独特型mAb的杂交瘤细胞株4A6中,扩增了该mAb的重链可变区(VH)基因片段,并进行了克隆和序列测定,旨在构建鱼用基因工程疫苗.
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抗HER2单链抗体融合凋亡蛋白对SKOV3细胞的靶向杀伤
目的:探讨分泌表达的抗HER2单链抗体与重构型人caspase-3融合蛋白对HER2抗原阳性肿瘤细胞的靶向杀伤作用. 方法:将重构型人cas pase-3基因亚克隆入pCMV-e23scFv-PEII-PEIII的相应位点,构建重组真核表达载体p CMV-e23scFv-PEII-revcasp3,并转染人T淋巴瘤细胞系Jurkat,筛选并建系.用EL ISA检测培养上清中融合蛋白的分泌表达.通过共培养实验观察含有该融合蛋白的培养上清对人卵巢癌细胞SKOV3生长的抑制作用.结果:融合蛋白基因可在Jurkat细胞中,分泌表达并杀伤SKOV3细胞. 结论:分泌表达的抗erbB2单链抗体与重构型人caspase 3融合蛋白能够靶向诱导SKOV3细胞死亡.
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抗FITC单克隆抗体的制备及初步应用
以抗原抗体反应为基础的免疫学诊断技术需要有高特异性和高敏感性.为了提高免疫检测系统的敏感性,生物素-亲和素系统已被广泛地应用于免疫诊断技术.但生物素-亲和素系统也存在着标记较为复杂,易受内源性生物素影响等不足.异硫氰酸荧光黄(FITC)是一种很稳定的荧光素,极易结合在蛋白分子上,不仅标记简单,标记物也十分稳定.FITC作为半抗原结合到蛋白质载体上具有很强的免疫原性,抗FITC单克隆抗体(mAb)与标记在的蛋白质上F ITC反应,不仅特异性高,而且亲和力也高于抗体与多肽抗原的结合.因此,FITC-抗FITC系统能有效地放大抗原抗体反应敏感性,在免疫分析中有很大应用价值[1].我们制备了抗FITC mAb并将FIFC-抗FITC mAb系统用于常规夹心ELISA检测细胞因子试剂盒中,其敏感性在原基础上可提高4倍,使之更适合临床标本的检测.
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抗IL-2单克隆抗体的应用研究
IL-2作为一种T细胞生长因子在免疫应答及其调节中起重要作用,IL-2的拮抗剂可用于同种移植排斥、T细胞性白血病以及某些自身免疫性疾病的治疗.胞内IL-2的水平是反映Th1 /Th2型细胞平衡状态的一个有用指标,血清IL-2的水平异常增高与某些疾病密切相关[ 1].我们较全面地鉴定本室制备的两株抗IL-2单克隆抗体(mAb)FMU2.1、FMU2.2,并讨论他们的应用价值.
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抗人HBsAg单链抗体基因的构建及其在COS-7细胞中的表达
目的:构建抗人HBsAg单链抗体基因,并分析其在COS-7细胞中的表达.方法:以从噬菌体抗体库中筛选的抗HBsAg的Fab抗体基因为模板,分别扩增其轻、重链可变区(VL、VH)基因,通过重组PCR方法将轻、重链可变区基因用连接肽(Gly 4Ser)3的编码序列连接,并引入前导肽编码序列,构建具有L-VH-Linker-VL结构的单链抗体基因.将所构建的单链抗体基因克隆入绿色荧光蛋白(GFP)融合表达载体pEGFP-N3,并转染COS-7细胞进行表达.结果:经测序表明,前导肽、连接肽、VL 及VH的序列正确.酶切鉴定证实,成功地构建了GFP基因融合表达载体.瞬时转染COS-7细胞后,通过荧光显微镜观察证实有ScFv融合蛋白的表达.转染细胞的培养上清浓缩后,进行 SDS-PAGE及Western blot 分析,可检出ScFv融合蛋白的分泌性表达.培养上清的间接ELISA 检测证实,所表达的单链抗体具有与HBsAg结合的特异性.结论:成功地构建了抗人HBsAg 单链抗体基因,并可在COS-7细胞中分泌性表达.
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抗Ig融合蛋白Fc段单克隆抗体的制备、鉴定与应用研究
目的:制备并鉴定抗Ig融合蛋白Fc段的单克隆抗体(mAb),建立用于检测Ig融合蛋白的夹心ELISA法和纯化Fc融合蛋白的亲和层析法.方法:以hBCMA-Ig融合蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠,通过细胞融合制备抗Fc段mAb,用ELISA等方法鉴定mAb的Ig亚类、表位以及种属特异性,建立用于检测Ig融合蛋白的夹心ELISA法; Wester n blot检测mAb对变性Ig融合蛋白的反应性.将mAb与Sepharose4B交联,制备亲和层析柱,对LAIR1-Ig融合蛋白进行纯化.结果:获得7株稳定分泌抗Fc段mAb的杂交瘤(FMUFc1～FMUFc7).利用FMUFc4作为包被mAb,FMUFc5作为酶标记mAb,成功地建立了检测Ig融合蛋白的ELISA法,敏感度达到2 μg/L; 在7株mAb中,FMUFc6可用于Ig融合蛋白的Western blot检测.用FMUFc6 mAb制备的亲和层析柱,可有效地纯化LAIR1-Ig融合蛋白. 结论:成功地制备了抗Ig融合蛋白Fc段的mAb,建立了可用于Ig融合蛋白检测和纯化的方法,为Ig融合蛋白的应用提供了有力手段.
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有机膦半抗原诱导的抗神经性毒剂单克隆抗体的制备及鉴定
目的:制备新化合物1-羟基-1-对胺基苯基甲磷酸单频哪基醇酯(P4) 的单克隆抗体(mAb).方法:以P4为半抗原,与血蓝蛋白(LPH)化学偶联制备人工抗原(P4-LPH),并以其免疫BALB/c小鼠,制备抗P4的mAb.用竞争抑制酶免疫分析法,测定mAb对梭曼等7种配体的结合活性,结果以mAb与P4-BSA的结合被抑制50%时的配体浓度(IC50),表示mAb的交叉反应性.结果:建立了9株对P4-BS A阳性反应的mAb,它们分属3种Ig亚类; 6株(2B2、3A10、3D5、4F1、6C9和6H4)为IgG1,1 株(3B9)为IgG2b,2株(1B3和6H5)为IgM.9株mAb中,8株具有与半抗原P4的结合的特异性.4株(1B3、2B2、3D5和4F1)具有梭曼结合活性,其IC50值分别为10-3、1 0-3、10-5和10-6 mol/L; 1株(4F1)具有与对氧磷结合的特异性,其I C50值为10-5 mol/L .4株腹水的mAb鼠滴度高,分别达10-6(1B3和2B2 )和10-8(3D5和4F1).结论:用新的半抗原P4成功地制得抗梭曼和抗对氧磷的mAb,可用于梭曼抗体酶、梭曼的免疫抗毒和免疫检测研究.
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抗人脑髓鞘碱性蛋白单克隆抗体的制备及初步鉴定
人脑髓鞘碱性蛋白(human brain myelin basic proten,MBP)是组成中枢神经系统 (CNS)神经纤维的重要蛋白质,由CNS少突细胞合成,占髓鞘蛋白质总量的30%,在神经纤维的绝缘和快速传递过程中起重要作用[1].MBP能诱发实验性变应性脑脊髓炎(EA E),并作为人脱髓鞘疾病多发性硬化(MS)的动物模型,其在MS发病机制中的作用也倍受关注[2].我室曾报道抗人脑MBP多克隆抗体的制备[3],为研究人MBP分子各特异性表位的结构和功能,本室研制了抗MBP单克隆抗体(mAb).
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克糖养心冲剂对小鼠免疫功能增强作用的实验研究
克糖养心冲剂(KTYX)由怀山药、南瓜、西洋参、熊胆粉、灵芝及枸杞子等组成,主要治疗糖尿病.
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检测抗人疱疹病毒6型IgG的间接免疫荧光试验的建立及其应用
目的:建立检测血清中人疱疹病毒6型(HHV-6)IgG的间接免疫荧光试验(IFA).方法:用HHV-6国内分离株感染人脐带血单个核细胞制备抗原片,建立检测HHV-6 IgG的IFA方法,并用于育龄期妇女血清流行病学调查.结果:[ HTSS 建立的IFA具有特异性.对116份育龄期妇女血清标本检测表明,HHV-6 IgG的阳性率为72.4%,几何平均滴度(GMT)为1∶ 61; 在孕妇和正常未孕妇女之间,以及不同孕期的孕妇之间,HHV-6 IgG的阳性率和GMT均无差异(P>0.05).[ HTH 结论:建立了具有特异性的IFA法,可用于对育龄妇女HHV-6感染率的流行病学调查.
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外周血B细胞在PWM活化下CD43表达的变化
据报道用抗CD43的单克隆抗体证实不同分化阶段的B细胞可分为CD43+ B细胞或CD43 -B细胞两群.因此有人推断CD43+ B细胞如同CD5+ B细胞一样代表一个独立的B细胞系. 本实验表明B细胞在美州商陆(PWM)刺激下于培养第2天CD43表达明显增加,这一结果表明,CD43属于在B细胞激活、分化时表达增加的膜分子.
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肾脏疾病患者血清中ANCA的荧光模式及其意义
目的:进一步探讨肾脏疾病患者血清中抗中性粒细胞细胞质抗体(ANCA )的荧光模式及其意义.方法:应用间接免疫荧光(IIF)和ELISA方法检测了251例肾脏疾病患者血清中ANCA及其靶抗原.结果:在251例肾脏疾病患者中,ANCA阳性51例占20.3%,其中10例为cANCA阳性(10/251); 30例为pANCA 阳性(30/251); 11例为aANCA阳性(11/251).结论:同时用IIF法和EL ISA法检测ANCA,可以提高ANCA检出的阳性率; 不同ANCA荧光模式与疾病的种类病情及预后密切相关; 提高对不典型ANCA和pANCA伴ANA荧光模式的鉴别,有助于临床对血管炎和其它自身免疫性疾病的诊断.
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红细胞CR1在急性颅脑损伤患者表达及免疫功能的探讨
人类红细胞膜上1型补体受体(CR1)属于糖肽,其配体有C3b、C4b、ic3b、ic4b.CR1 的主要免疫功能是清除循环免疫复合物(CIC)及病原体; 将抗原提呈给淋巴细胞,增强T淋巴依赖性反应; 增强免疫调控作用及效应细胞样作用[1].因此,研究红细胞CR1分子的表达及其免疫粘附(RCIA)功能的变化与疾病的关系具有重要意义.我们采用ELISA法和酵母菌花环试验,测定了37例急性颅脑损伤患者外周血红细胞CR1分子的表达、RBC-C3bR 形成率及RBC-ICR形成率,旨在了解患者的红细胞免疫功能及意义.
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检测可溶型CD226双mAb夹心ELISA的建立及初步应用
目的:建立一种检测可溶型CD226(sCD226)的双mAb夹心ELISA,并用于临床标本的检测.方法:确定包被mAb LeoA1和HRP-mAb FMU3的佳工作浓度及佳稀释液后,建立双mAb夹心ELISA,并对方法的特异性、敏感性和稳定性进行鉴定.再以建立的方法检测临床标本.结果:包被mAb LeoA1的佳工作浓度为2.5 mg/L,HRP-mAb FMU3的佳工作浓度1∶ 400,标准品及HRP-mAb的佳稀释液分别为1 g/L BSA-1 mL/L Tween20-PBS和30 g/L PEG-PBS.建立的双mAb夹心ELISA,其特异性(与人IgG无交叉反应,阻断实验中阻断效应呈剂量依赖性)、敏感性(检出下限为110 ng/L标准品CD226/Fc融合蛋白)及稳定性(CV<10.2%)均较良好.对部分临床标本的检测中,发现6例类风湿关节炎(RA)患者血清sCD226的水平升高,与正常人血清sCD22 6水平相比差异显著(P<0.01).结论:建立一种特异性高、重复性好、较敏感的检测sCD226的双mAb夹心ELISA,初步证明可用于临床标本的检测.
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MAP30苦瓜抗HIV蛋白对细胞内HBeAg表达抑制作用的定量分析
目的:研究Mr为30 000的苦瓜抗HIV蛋白(MAP30) 对2.2.15细胞内HBV 基因表达的抑制作用.方法:将HBV DNA转染的人肝癌细胞株2.2.15,在M AP30存在的情况下培养后,进行间接免疫荧光染色,用共聚焦技术定量分析细胞内HBeAg 的表达.结果:与对照组相比较,MAP30培养的细胞内HBeAg荧光量明显减少.结论:MAP30对2.2.15细胞内HBeAg的表达有明显的抑制作用.
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检测可溶型TRAIL的ELISA的建立和初步应用
目的:建立检测可溶型TRAIL的ELISA,并评价其临床应用价值.方法:采用本室制备的鼠抗TRAIL的单抗(mAb)FMU1.1作为包被抗体,兔的抗T RAIL高效价多抗为夹心抗体,建立检测sTRAIL的ELISA,并测定了9例肾综合征出血热(HFRS )患者和40例银屑病患者血清sTRAIL的水平.结果:建立了由单抗和多抗组成的检测人sTRAIL的夹心ELISA,灵敏度为0.08 μg/L.9例肾综合征出血热(HFRS )患者中有3例急性期患者血清sTRAIL水平升高,40例银屑病患者中8例升高.结论:成功地建立了一种可用于检测血清sTRAIL的双夹心ELISA,为判定某些相关疾病患者的病情、疗效及预后提供有用的工具.
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新生大鼠海马神经元原代培养方法的研究
目的:研究和比较3种不同培养神经元的方法,提供一种纯化效率和存活率均较高的培养技术.方法:取新生SD大鼠的海马区,应用一般培养法、加阿糖胞苷法、加阿糖胞苷和神经生长因子法培养神经元,观察神经元的形态. 用倒置显微镜观察和MTT比色分析检测神经元的存活率. 用ABC免疫组化染色法,比较3种不同培养方法在不同培养时间所获得神经元的纯度.结果:加阿糖胞苷和神经生长因子培养组神经元生长良好,纯度和存活率均较高.结论:加阿糖胞苷和神经生长因子培养神经元的方法具有简便可行,易于生长的优点,可作为神经元体外培养的良好模型.
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SLE、RA患者血清sICAM-1和PTM水平的变化及其临床意义
系统性红斑狼疮(SLE)和类风湿性关节炎(RA)是多系统受累的自身免疫性疾病(aut oimmune diseases,AID),其免疫特征是,T细胞活化增加,B细胞多克隆活化并产生多种自身抗体,但其发病机制尚不清楚.可溶性细胞间黏附分子-1(soluble intercellular ad hesion molecules-1,sICAM-1),是表达于内皮细胞和其他抗原递呈细胞上的ICAM-1脱落于血液中的可溶性形式,属于免疫球蛋白超家族中的成员,为一种表面跨膜蛋白抗原.内皮细胞表面细胞黏附分子的异常表达是内皮细胞损伤的早期变化[1].
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多发性肌炎/皮肌炎患者外周血T细胞亚群的检测
一般认为,多发性肌炎(PM)/皮肌炎(DM)是一组自身免疫性疾病. 关于其外周血淋巴细胞亚群的研究早有报道,但尚无统一结论,有些甚至相互矛盾[1,2].为进一步证实,PM/DM外周血T细胞亚群是否存在异常,我们应用双色荧光抗体标记、流式细胞术( FACS)进行了检测.
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检测Ⅳ型胶原蛋白双mAb夹心ELISA的建立
慢性肝病通常发展为肝纤维化,常规实验室检查对早期肝纤维化的诊断敏感性差,且特异性不强.因此,建立一种可定量分析肝纤维化的方法尤为重要.血清Ⅳ型胶原蛋白(COL Ⅳ)的水平与肝纤维化的程度密切相关,并可作为肝纤维化早期诊断指标之一[1,2] .因此,我们采用两株抗COL Ⅳ的单克隆抗体(mAb),建立了一种特异性强、灵敏度高、操作简便,适于临床检测血清COL Ⅳ水平的双mAb夹心ELISA法.
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真核表达骨形成蛋白的条件优化
重组人骨形成蛋白-7(rhBMP-7)在体内和体外都显示了高效的骨诱导活性[1]. 可刺激成骨细胞、类成骨细胞及已分化的人骨细胞,促进其增殖和胶原合成以及细胞中碱性磷酸酶增加.在长期培养基中可使胶外基质钙化性的诱导原始成骨祖细胞的定向分化.本组实验主要探索体外培养条件下骨形成蛋白-7(BMP-7)在真核细胞(CHO)中的表达,通过逐渐增加氨甲蝶呤(MTX)的浓度筛选克隆,得到高表达的单克隆细胞株.
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人肝癌组织中p53与HSP70相互作用的初步研究
目的:探讨人肝癌中热休克蛋白70(HSP70)与p53的相互作用. 方法:用免疫组织化学染色法,从12例肝癌组织中筛选HSP70与p53均呈阳性表达的标本,并以免疫共沉淀法提取之. 然后用SDS-PAGE及Western blot分析双阳性标本中两种蛋白的存在形式. 结果:用免疫组织化学法检测到12例肝癌组织中有3例为双阳性,用抗HSP70 mAb免疫共沉淀的样品,可检测到p53蛋白.用抗p53 mAb免疫共沉淀的样品也可检测到HSP70蛋白. 结论:人肝癌中p53与HSP70以复合物的形式而存在,此可为肝癌的发病机制及免疫治疗的研究提供新的思路.
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G-CSF对外周血树突状细胞亚群比例的影响
目的:了解G-CSF对小鼠外周血树突状细胞(DC)亚群比例的影响.方法:以不同剂量(0、5.0、10.0或15.0 μg)的G-CSF,分别皮下注射于BALB/c 小鼠,连续6 d,每天1次.第6天分离外周血DC,用流式细胞仪检测DC1(CD11c+ CD8a -)和DC2(CD11c+ CD8a+)的比例并计算其绝对值.结果:经不同剂量的G-CSF刺激后,外周血DC1的绝对值无显著变化,而DC2的绝对值增加5倍(9.6×1 06/L vs 55.1×106/L,P<0.01),DC1/DC2比值降低(4.2 vs 0.7,P<0.01).结论:G-CSF在体内可提高外周血DC2的绝对数,对DC1的数无明显影响,从而使DC1/DC2的比例倒置.
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重组抗体在蛋白质组学研究中的应用
人类基因组计划(HGP)的实施将导致对人类基因结构和功能的理解, 即破译人类基因组意味着绘就一张生命之图, 它将为疾病的诊断、新药的研制和新疗法的探索带来革命性的进步, 因此被认为是当代生命科学的一项伟大的科学工程.20世纪末, 人类基因组计划的研究重点是测定人类基因组的全部序列, 目前已接近完成.知道了基因图谱下一步做什么?人们认为: 知道了基因图谱, 还需要经过下面几步, 人类对生命的认识才能有根本性的变革.
| 年 | 期数 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2017 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2011 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2010 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2009 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2008 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2007 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2006 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2005 | 01 02 03 04 05 06 z1 |
| 2004 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2003 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2002 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2001 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2000 | 01 02 03 04 05 06 |
| 1999 | 01 02 |
| 1995 | 01 02 03 |
| 1994 | 01 02 |
| 1993 | 01 02 03 04 |
| 1992 | 01 02 03 04 |
| 1991 | 01 02 03 04 |
| 1990 | 01 02 |
| 1989 | 01 02 03 04 |
