细胞与分子免疫学杂志
Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology 세포여분자면역학잡지
- 主管单位： 中国免疫学会；第四军医大学
- 主办单位： 陕西省免疫学会,中国免疫学会
- 影响因子： 0.81
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 1007-8738
- 国内刊号： 61-1304/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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细胞外信号调节激酶1/2的阻断剂PD98059对小鼠淋巴细胞增殖的影响
目的:探讨细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)信号通路的特异性阻断剂PD98059对小鼠淋巴细胞体外增殖的影响.方法:分离小鼠淋巴结细胞,藉羧基荧光素乙酰乙酸(CFDA-SE)染色,用多克隆刺激剂刀豆A蛋白(ConA)或者佛波醇酯(PDB)加离子霉素(Ion)刺激,以流式细胞术分析PD98059对淋巴细胞增殖的影响; 利用碘化丙锭(PI)染色分析PD98059对细胞周期的影响.结果:CFDA-SE染色分析显示,当浓度为5、10、20、30、40 μmol/L时,PD98059对ConA诱导的淋巴细胞增殖具有明显的抑制作用,并呈现明显的剂量依赖关系(r=0.985,P＜0.01).选择佳浓度30 μmol/L的PD98059,观察其对不同时间淋巴细胞增殖的影响,结果发现,随着时间的延长,PD98059对淋巴细胞增殖的抑制作用明显降低(P＜0.01),但抑制率随时间的延长而明显升高.细胞周期分析进一步表明,PD98059可阻止ConA刺激的淋巴细胞进入S期和G2/M期,而亚二倍体峰变化并不明显.PD98059对PDB+Ion刺激的淋巴细胞细胞周期的影响与ConA刺激相似,不同的是S期和G2/M期的变化较ConA的作用更明显.结论:PD98059对小鼠淋巴细胞的增殖有明显地抑制作用,并可阻止其进入S期和G2/M期,提示ERK1/2信号通路的活化在淋巴细胞增殖中起重要作用.
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经鼻黏膜给予MBP68-86和87-99协同免疫预防Lewis大鼠EAE的实验研究
目的:探讨鼻黏膜给予MBP68-86和87-99协同免疫预防Lewis大鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)的作用.方法:合成3条不同的碱性髓鞘蛋白(MBP)多肽(MBP68-86、87-99和非致脑炎性肽段110-128),在用豚鼠MBP(gp-MBP)加弗氏完全佐剂免疫Lewis大鼠前的11、10、9、8和7 d,经鼻黏膜分别给予MBP多肽,观察其对EAE的保护作用.结果:致脑炎性肽段MBP68-86和87-99都有保护作用,其中MBP68-86的保护作用更强; 而MBP110-128没有保护作用.鼻黏膜给予MBP68-86+87-99的混合物,在相对低的剂量可完全阻断gp-MBP引发的EAE.淋巴细胞增殖实验和IFN-γ ELISPOT检测显示,与鼻黏膜给予大鼠MBP110-128组相比,鼻黏膜给予大鼠MBP68-86+87-99可降低T细胞对于MBP的反应性,淋巴结单核细胞中表达IFN-γ和TNF-αmRNA的细胞数减少,而两组表达TGF-β及IL-4 mRNA的淋巴细胞数都低.结论:鼻黏膜给予致脑炎性MBP多肽能够导致抗原特异性T细胞耐受,对gp-MBP引发的EAE提供不完全的保护,MBP68-86和MBP87-99具有协同作用.鼻黏膜给予多肽引发的免疫耐受与非调节机制有关.
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EB病毒gp85 N端片段的原核表达与初步鉴定
目的:构建EB病毒基因的原核表达载体,并在大肠杆菌中进行表达.分析非糖基化的EB病毒包膜糖蛋白gp85 N端截短片段的抗原性.方法:采用基因工程技术,以B95-8细胞(美洲绒猴外周血B淋巴细胞经EBV转化后的细胞系)[1]培养上清为模板,用 PCR扩增EB病毒的BXLF2基因N端片段.PCR产物经Hind Ⅲ和XhoⅠ双酶切,插入原核表达载体pGEX-5T中,构建pGEX5T-85N重组表达质粒,并在大肠杆菌BL21中诱导表达gp85N蛋白.纯化表达的蛋白用Western blot鉴定,并免疫BALB/c小鼠.结果:序列分析表明,插入片段的序列与GenBank登录的参考序列完全一致.重组表达的蛋白的相对分子质量(Mr)约为45000,同预期的大小相符.以纯化的可溶性重组蛋白免疫BALB/c小鼠,经ELISA检测获得了高效价的抗血清,且抗gp85单克隆抗体(mAb)可识别所表达的gp85N抗原.Western blot显示,该抗原可与小鼠免疫血清起特异性反应.结论:表达并纯化的EB病毒截短的gp85N重组蛋白具有良好的抗原性,为下一步分析所产生抗体的生物学特性提供了条件.
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预测的SARS冠状病毒刺突蛋白S2亚基B细胞表位肽在大肠杆菌中的表达及其抗原性的鉴定
目的:研究预测的SARS冠状病毒刺突蛋白S2亚基B细胞表位肽在大肠杆菌中的表达及其模拟S2蛋白的抗原性.方法:用DNAStar软件对S2亚基序列进行分析,预测B细胞表位所在肽段.通过4轮PCR反应人工搭建预测表位cDNA序列并克隆到含有伴侣10基因的pET28a(+)载体中,构成重组载体pET28-chap10-S2epi.重组蛋白Chap10-S2epi在E.coli BL21(DE3)中表达并以SDS-PAGE和Western blot进行鉴定.用纯化的chap10-S2epi免疫家兔制备抗血清,并通过ELISA判断Chap10-S2epi的抗原性.结果:成功构建并在大肠杆菌中表达了Chap10-S2pei融合蛋白.Chap10-S2epi免疫的抗血清能识别真核细胞表达的SARS冠状病毒全长S2刺突蛋白.结论:预测的SARS冠状病毒S2刺突蛋白B细胞表位肽能够诱导家兔产生针对S2蛋白的抗体,为研制抗SARS病毒基因工程疫苗奠定了基础.
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亚毒性剂量阿霉素提高抗人DR4、DR5抗体诱导的神经胶质瘤细胞凋亡的研究
目的:探讨亚毒性剂量的阿霉素影响抗DR4、DR5单克隆抗体(mAb) FMU1.4和FMU1.5诱导3株神经胶质瘤细胞株U343 (TRAIL敏感株)、U138(TRAIL部分敏感株)及U373(TRAIL耐受株)凋亡的作用及可能的机制.方法:采用流式细胞术检测DR4、DR5的表达及神经胶质瘤细胞中DNA倍增.用MTT比色法检测mAb FMU1.4和FMU1.5对3株神经胶质瘤细胞增殖的抑制作用.用共聚焦显微镜观察3株细胞中Ca2+的浓度.以Western blot检测细胞内色素C、FLIP\的表达.结果:亚毒性剂量的阿霉素作用后,DR5、DR4在3株细胞中的表达提高; 而mAb FMU1.4、FMU1.5诱导U138和U373细胞凋亡的作用增强,细胞内细胞色素C的表达提高,FLIP的表达降低,Ca2+浓度增加.结论:亚毒性剂量的阿霉素与抗DR4、DR5 mAb联合应用后,可提高mAb诱导靶细胞凋亡的效应,其作用机制与DR4、DR5、细胞色素C、FLIP的表达及Ca2+的含量有关.
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负载甘露糖化抗原的DC诱导的特异性杀伤
目的:探讨甘露糖化肿瘤疫苗在抗肿瘤免疫中的作用.方法:纯化出目的蛋白HER-2/neu胞外配体第2结构域(RLD2),并对其进行糖基化修饰,自外周血单核细胞诱导产生CD83+的DC,利用DC表面的甘露糖受体,使DC负载甘露糖基化的目的抗原mRLD2(mL2),并致敏T淋巴细胞,观察CTL特异性杀伤SKBR-3细胞的效果.结果:较之未进行糖基化修饰的目的蛋白RLD2(L2),mL2能促进DC的成熟,并能诱导出具有更强杀伤效力的CTL.结论:本实验的结果为开展新型甘露糖化肿瘤疫苗的研制提供了理论依据.
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HLA-A*0203-BSP的表达和复性及其四聚体的鉴定
目的:优化诱导条件大批量表达生物素化酶BirA底物肽(BSP)与HLA-A*0203重链胞外域的融合蛋白(HLA-A*0203-BSP),并制备负载HLA-A*0203限制性EB病毒抗原肽EBNA3596-604的四聚体( HLA-A*0203/SVR).方法:以HLA-A*0203-BSP原核表达载体转化E.coli BL21(DE3)菌株,优化诱导条件进行大批量重组蛋白的表达.通过稀释法复性可溶性HLA-A*0203/SVR单体,然后以BirA对其进行生物素化,并以阴离子交换树脂纯化.将纯化的HLA-A*0203/SVR单体与荧光素标记的链亲和素按4:1的比例混合形成四聚体,通过对特异性CTL进行染色验证其结合活性.结果:当IPTG的浓度为0.4 mmol/L,于37℃诱导过夜后,融合蛋白的表达多.该重组蛋白相对分子质量(Mr)为34000,与HLA-A*0203-BSP的理论Mr相一致.该重组蛋白以包涵体形式存在于沉淀部分,约占菌体总蛋白的30%.负载抗原肽的可溶性HLA-A*0203/SVR单体是在同时存在HLA-A*0203-BSP、β2微球蛋白及HLA-A*0203限制性抗原肽SVR的情况下通过稀释法复性而获得.该单体生物素化并纯化后与荧光素标记的链亲和素按4: 1的比例混合后即形成四聚体.流式细胞术(FCM)分析证实,该四聚体具有与HLA-A2+供者特异性CTL结合的活性.结论:HLA-A*0203-BSP融合蛋白在优化条件下获得高效表达.以此蛋白制备的HLA-A*0203/SVR四聚体具有与HLAA2+供者特异性CTL结合的活性,为研究HLA-A*0203个体EB病毒特异性CTL的免疫应答打下了基础.
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原发性干燥综合症患者血清IL-21水平及其临床意义
目的:通过检测原发性干燥综合症(pSS)患者血清白细胞介素-21(IL-21)的表达水平,探讨其水平变化与pSS患者其他实验室检测指标关系以及其在pSS发病中的作用.方法:选取符合2002年修订的pSS国际分类标准的40例初诊pSS患者.采用双抗体夹心ELISA方法检测该组患者及30例正常对照者血清中IL-21的水平.同时,采用免疫化学发光法检测患者的甲状腺情况包括FT3、FT4、TSH、TgAb、TPOAb.抗SSA和抗SSB抗体、ESR、血清蛋白电泳检测分别采用免疫双扩散法、魏氏法、全自凝胶法.并与患者的其他临床表现进行统计学分析.结果:pSS患者血清IL-21水平为(1051 ±335)ng/L,明显高于正常对照组水平[(466±90)ng/L,P＜0.05].特别是pSS患者中抗体阳性组、有腮腺肿痛组、皮疹组、合并甲状腺功能减退组血清IL-21水平均高于各自阴性对照组,差异具有统计学意义(P＜0.05).而且pSS患者中IL-21水平与γ-球蛋白及血沉存在明显正相关(r=0.715,P＜0.05; r=0.740,P＜0.05).结论:pSS患者血清IL-21水平明显升高,且与γ-球蛋白及血沉存在明显正相关,提示IL-21可能参与pSS的发病过程.
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胰岛素样生长因子-Ⅰ对人肾小管上皮细胞转分化及胶原合成的作用
目的:探讨胰岛素样生长因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)在人肾小管上皮细胞转分化及胶原合成中的作用.方法:将体外培养的人肾小管上皮细胞HK2分为2组: (1)对照组; (2)IGF-Ⅰ组: 培养液中加入终浓度分别为25、50、100、200 μg/L的IGF-Ⅰ.用倒置显微镜观察细胞形态变化,以RT-PCR检测HK2细胞α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、胶原Ⅰα和胶原Ⅲα mRNA表达的变化.ELISA方法检测培养上清中胶原Ⅰ的浓度.结果:IGF-Ⅰ刺激使HK2 细胞由椭圆形变为梭形.不同浓度的IGF-Ⅰ作用于HK2 细胞48 h后,α-SMA、胶原Ⅰα和胶原Ⅲα mRNA水平显著升高(P＜0.05); ELISA结果显示,100及200 μg/L IGF-Ⅰ组中HK2 细胞分泌的胶原Ⅰ显著增加(P＜0.05).结论:IGF-Ⅰ在体外能够诱导人肾小管上皮细胞转分化,并促进其胶原的合成.
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丙型肝炎病毒F蛋白的原核表达及初步应用
目的:构建丙型肝炎病毒(HCV)F基因的原核表达载体,并在大肠杆菌TG1中进行表达,用以检测丙肝患者体内抗体,并制备抗血清.方法:提取患者血清中的HCV RNA,并进行基因分型.取鉴定为HCV 1b型的病毒,用RT-PCR扩增HCV F蛋白基因的序列.将扩增产物插入pGEM-T载体中,测序正确后,用EcoR I、BamH I双酶切后,再插入表达载体 pGEX-4T-2中,转化大肠杆菌TG1,在IPTG诱导下表达GST-F蛋白.用亲和层析法纯化GST-F蛋白免疫BALB/c小鼠制备抗血清.并用纯化的GST-F蛋白进行ELISA法检测丙肝患者血清抗F蛋白抗体.结果:在细菌裂解液中检测到重组的融合蛋白,经Glutathione Sepharose 4B 亲和层析柱纯化获得较高纯度的GST-F 融合蛋白.应用Western blot方法检测证实,用纯化的GST-F蛋白免疫BALB/c小鼠得到了特异性的抗体.用纯化的GST-F蛋白进行ELISA检测120例丙肝患者血清抗F蛋白抗体,82例呈阳性.结论:通过上述方法制备的融合蛋白纯度较高,免疫小鼠获得的抗体具有良好的特异性.用纯化的目的蛋白检测丙肝患者血清抗F蛋白的抗体的阳性率为68%,与国外的报道接近,说明在HCV感染的自然病程中有F蛋白的产生,为研究HCV F蛋白及与HCV相关疾病的诊断和治疗提供了条件.
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检测HBV和HCV重叠感染患者血清中IL-6及IFN-γ水平的意义
目的:初步探讨血清IL-6及IFN-γ的水平与HBV和HCV重叠感染的关系.方法:采用双抗体夹心ELISA法,检测HBV和HCV重叠感染患者血清IL-6及IFN-γ的水平,同时检测血清丙氨酸转氨酶(ALT)和总胆红素(TBil)的水平.结果:HBV和HCV 重叠感染患者血清IL-6的水平明显高于HBV或HCV单纯感染患者(P＜0.01).与正常对照相比较,HBV和HCV重叠感染急性期患者仅IFN-γ水平升高(P＜0.01),慢性期患者仅IL-6水平升高(P＜0.01); 而重型肝炎和肝硬化患者IL-6及IFN-γ的水平均显著升高(P＜0.01).HBV和HCV重叠感染患者血清IL-6、IFN-γ的水平与ALT、TBil的水平呈正相关(P＜0.01).结论:HBV和HCV重叠感染的发病和转归与IL-6及IFN-γ分泌的异常有极其密切的关系.
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不同剂量配比的实验性甲型肝炎戊型肝炎联合疫苗的免疫原性研究
目的:研究实验性甲型肝炎(甲肝)戊型肝炎(戊肝)联合疫苗的免疫原性,探讨两种抗原组分间的相互作用.方法:制备9种不同剂量配比的实验性甲戊肝联合疫苗,与单价疫苗对照一起免疫15组(共120只)小鼠,定时采血,以ELISA和中和试验检测抗HAV和抗HEV的抗体.结果:高剂量的HAV抗原(5×105 U/L)与不同剂量的HEV抗原(200、100、50 mg/L)配制的联合疫苗,诱导的抗HAV中和抗体的滴度可达1: 1 024,含25×104、125×103 U/L HAV抗原的联合疫苗诱导的中和抗体滴度为1: 512,不同剂量的HEV抗原对抗HAV中和抗体的产生均无明显影响.与单价戊肝疫苗相比较,联合疫苗诱导的抗HEV抗体水平均有明显升高,且随联合疫苗中HAV抗原的含量(5×105、25×104、125×103 U/L)的增加而升高,HEV抗原的剂量在一定范围内(200、100、50 mg/L)与抗HEV抗体产生无明显关系.采用基于逆转录套式PCR的中和试验表明,各联合疫苗组的免疫血清均可中和HEV.结论:实验性甲、戊肝联合疫苗内HAV抗原对HEV抗原的免疫原性具有增强作用,而HEV抗原对HAV抗原的免疫原性无明显影响.
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醛固酮对肾小球系膜细胞合成分泌纤维连接蛋白和TGF-β1表达的影响
目的:研究醛固酮(ALD)及其受体拮抗剂螺内酯(SPI)对大鼠肾小球系膜细胞合成分泌纤维连接蛋白(FN),以及对转化生长因子β1(TGF-β1 ) 基因表达的影响.方法:(1)以不同浓度的ALD (10-11、10-9、10-7mol/L) 及/或 10-7mol/L SPI刺激肾小球系膜细胞48 h后,用ELISA法测定培养上清中FN的浓度.用半定量RT-PCR法检测该细胞中FN mRNA和TGF-β1 mRNA 的表达.(2)以10-9mol/L的ALD刺激系膜细胞不同时间 (24、48、72 h)后,分别用上述方法测定培养上清中FN的浓度和细胞中FN mRNA和TGF-β1 mRNA 的表达. 结果:(1)ELISA的结果显示,ALD可促进系膜细胞合成分泌FN,且呈剂量和时间依赖性,SPI能拮抗ALD的作用.(2)半定量RT-PCR的结果显示,ALD可促进系膜细胞FN mRNA和TGF-β1 mRNA的表达,也呈剂量和时间依赖性,SPI也能拮抗ALD的作用.结论:ALD在蛋白和基因水平上均可促进大鼠肾小球系膜细胞合成分泌FN,及TGF-β1 mRNA的表达,SPI能拮抗ALD的作用,具有一定的肾脏保护作用,从而有益于延缓肾小球硬化的进展.
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对育龄妇女破伤风免疫状况的分析
新生儿破伤风(NT)是新生儿死亡的主要死因之一.1989年,世界卫生组织(WHO)就提出了消除NT的目标.1995年,我国卫生部规定将NT从丙类传染病调整为乙类传染病管理.为探讨NT发生的因素,预防房山区NT发生的可能性.
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兔抗人细胞色素P450 4A11合成肽抗体的制备与鉴定
目的:制备兔抗人细胞色素P450 4A11 (CYP4A11)抗体,并对其特性进行初步鉴定.方法:利用生物信息学方法分析CYP4A11蛋白的序列,根据亲水性结构、柔韧区、抗原指数及表面概率结构等指标选择多肽序列、合成CYP4A11多肽,与载体蛋白钥孔戚血蓝素(KLH)偶联,免疫大耳白兔制备抗CYP4A11抗体.辛酸-硫酸铵法纯化抗体,对纯化的抗体进行ELISA、Western blot、免疫组化等鉴定.结果:获得抗CYP4A11合成肽的抗体.该抗体效价为1: 32000.可与CYP4A11合成肽及天然CYP4A11出现特异性反应,该抗体识别的相应抗原的相对分子质量(Mr)为53000,可识别正常肝脏的CYP4A11.结论:合成的多肽-KLH复合物具有免疫原性,可用于制备相应的抗体.制备的兔抗CYP4A11合成肽抗体可应用于ELISA、Western blot、免疫组化等实验.
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抗丝氨酸磷酸化序列特异性单克隆抗体的制备
蛋白质磷酸化是普遍重要的一种蛋白质翻译后修饰,在哺乳细胞中大约有三分之一的蛋白质经磷酸化被修饰[1].细胞在信号转导过程中,受体胞质区和信号分子的磷酸化和去磷酸化决定着众多生物学功能的调控作用,也是蛋白质组研究的一个重要方面.我们应用小鼠淋巴细胞杂交瘤技术,成功制备了多种序列特异性丝氨酸磷酸化短肽的单克隆抗体(mAb),为进一步深入研究某些信号分子转导途径提供了重要工具.
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抗人羧酸酯酶-Ⅱ单克隆抗体的制备与鉴定
目的:制备鼠抗人羧酸酯酶-Ⅱ(human carboxylesterases-Ⅱ,hCE-Ⅱ)单克隆抗体(mAb)并对其特性进行鉴定.方法:以含hCE-Ⅱ的人肝脏微粒体蛋白混合抗原免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备鼠抗hCE-Ⅱ的mAb,并用Protein-G亲和层析法纯化mAb.用间接ELISA法测定mAb的效价,以Western blot鉴定mAb的特异性、免疫组化染色法对mAb相应的抗原进行组织定位.用免疫沉淀和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry,MALDI-TOF-MS)得到相应的肽质量指纹谱(peptide mass fingerprint,PMF),再通过Mascot在人类蛋白质数据库中分析比对鉴定mAb对应的抗原.结果:获得1株可持续、稳定分泌抗hCE-Ⅱ的mAb的杂交瘤细胞系.杂交瘤细胞分泌的mAb Ig的亚类(型)为IgG1(κ),腹水mAb的效价达1×10-7.Western blot分析显示,在Mr为62000处有1条清晰的带.免疫组化染色显示,该mAb可与肝细胞的浆蛋白结合(hCE-Ⅱ存在于肝细胞浆内微粒体),而不与血管平滑肌细胞内的蛋白结合.该mAb免疫沉淀物的Mr为62000,与hCE-Ⅱ的Mr相符.对免疫沉淀的蛋白质进行质谱鉴定证实,该mAb对应的抗原为hCE-Ⅱ.结论:制备出的鼠抗hCE-Ⅱ的mAb效价高、特异性良好,为进一步研究hCE-Ⅱ的功能及其在肝癌等癌症的诊断和治疗中的作用提供了工具.
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抗迟缓爱德华菌独特型单克隆抗体重链可变区基因的克隆及序列分析
目的:克隆并分析迟缓爱德华菌抗独特型单克隆抗体(mAb) VH基因.方法:从分泌迟缓爱德华菌抗独特型mAb的杂交瘤细胞株(1E11)中提取总RNA,利用RT-PCR技术,扩增迟缓爱德华菌抗独特型抗体VH基因,并将其克隆到PBS-Tvector中进行序列分析.结果:VH基因的全长序列为339 bp,编码113个氨基酸.通过NCBI/BLAST/N和IMGT数据库(Lefrance,2001)分析表明,VH基因符合小鼠IgG V区基因的特征: 含有4个框架区(FR),3个抗原互补决定区(CDR)及两个抗体特征性的半胱氨酸.结论:成功地克隆了迟缓爱德华菌抗独特型mAb VH基因,为进一步构建迟缓爱德华菌抗独特型抗体基因工程疫苗奠定了基础.
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Raji 细胞系特异性Fab噬菌体抗体库的构建及筛选
目的:构建针对B细胞淋巴瘤Raji细胞系噬菌体抗体库并从中筛选出特异性的抗体.方法:以Raji细胞免疫BALB/c小鼠,RT-PCR法从脾淋巴细胞中扩增抗体轻链к和重链Fd基因.经Sac I/Xba I和Xho I/Spe I双酶切,依次克隆入噬菌体载体pComb3H-SS中,并电转化大肠杆菌XL1-Blue,以辅助噬菌体VCSM13进行超感染,构建B细胞淋巴瘤Raji细胞系特异性Fab噬菌体抗体库.以Raji细胞为抗原进行筛选,获得抗Raji细胞的抗体,通过ELISA法进行抗原结合活性的测定,并对所得阳性克隆进行基因测序分析.结果:构建了容量为2.18×107的抗人B细胞淋巴瘤Raji细胞系的Fab噬菌体抗体库,并筛选获得了与Raji细胞系特异性识别结合的8株阳性克隆.对其中两个阳性克隆进行基因序列分析,结果显示其重链可变区、轻链可变区分别与免疫球蛋白基因库中已注册的鼠源性免疫球蛋白重链可变区和轻链可变区序列具有高度同源性.结论:成功地构建Fab噬菌体抗体库并筛选出针对Raji细胞系膜抗原的抗体,为进一步研究B细胞淋巴瘤的免疫治疗提供了实验基础.
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两步串联层析法纯化鼠抗人CD28单克隆抗体2F5
目的:建立从小鼠腹水中纯化鼠抗人CD28单克隆抗体(mAb)2F5的两步串联层析法.方法:将含mAb 2F5的腹水经离心、过滤及缓冲溶液变换预处理后,先经固相化金属螯合亲和层析法(immobilized metal affinity chromatography,IMAC)纯化,去除大部分杂蛋白,再经凝胶过滤层析法(gel filtration,GF)精细纯化,并探讨了上样的流速和洗脱液的种类对mAb 2F5纯度的影响.纯化的mAb 2F5的生物学活性用3H-TdR掺入法进行分析.结果:以两步串联层析法纯化的鼠抗人CD28 mAb 2F5的纯度大于90%,总回收率达70%.纯化的mAb 2F5在体外对PBTC具有明显的促增殖作用; 而且其促增殖作用的活性优于Protein G亲和层析法(affinity chromatography,AC)纯化所获得mAb.结论:建立的两步串联层析纯化方法操作简便,所得mAb的纯度高、生物学活性好.
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BPI N端优势抗原表位的模拟合成及其抗血清的制备
目的:通过生物信息学模拟合成杀菌/渗透增强蛋白氨基端(BPI N端)优势抗原表位肽,免疫动物获得相应抗血清.方法:利用生物信息学分析BPI N端(1 -199)氨基酸序列的抗原性、亲水性、可塑性、表面可及性和二级结构等理化特性,据此设计合成TA/IK两条多肽,将其与钥孔戚血蓝素(KLH)偶联后,免疫家兔获得相应抗血清; 采用间接ELISA法鉴定多肽的抗原性、测定血清抗体效价,Western blot鉴定抗血清特异性.结果:人工合成BPI N端TA/IK两个B细胞表位肽; ELISA检测证实: TA/IK抗原肽能与商品化兔抗人BPI55多克隆抗体结合; 所获TA/IK抗血清效价分别为1: 51 200和1: 25 600; Western blot证实: TA/IK抗血清能与BPI55标准品特异性结合.结论:模拟合成的TA/IK抗原肽确为BPI N端优势抗原表位,相应抗血清可用于BPI N端功能性片段的检测鉴定.
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抗温和气单胞菌单克隆抗体的制备及初步鉴定
目的:制备抗温和气单胞菌(Aeromonas sobria,As)单克隆抗体(mAb)并进行鉴定.方法:以灭活的温和气单胞菌免疫BALB/c小鼠,采用常规杂交瘤技术制备抗温和气单胞菌mAb.用间接ELISA法对mAb的特性进行初步鉴定.结果:获得6株能稳定分泌抗温和气单胞菌mAb的杂交瘤细胞株,分别命名为1A8、2A8、2F11、3C6、3D11、4G2.经测定杂交瘤细胞培养上清及其诱生的腹水mAb效价分别为1×10-2～1×10-3、1×10-5～1×10-6.6株杂交瘤细胞系所分泌的mAb亚类是: 2A8、2F11为IgG1,1A8、3D11为IgG2a,3C6为IgG2b,4G2为IgG3.其中mAb 3C6经交叉反应试验证明,与弧菌属其他几种细菌均不起反应,特异性强.结论:成功地制备了抗温和气单胞菌mAb的杂交瘤细胞株,为该病的免疫学诊断及防治提供了基础.
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类风湿性关节炎基因治疗的病毒载体与基因转移方法的研究进展
类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis, RA),是一种病因尚不清楚的慢性全身免疫性炎症疾病,其发病机制也不完全明了.常规的药物治疗及外科手术治疗等均不十分理想,尚缺乏有效的治疗手段.近研究表明,基因治疗显示出了较好的前景.
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巨噬细胞免疫球蛋白超家族受体的研究进展
巨噬细胞在免疫系统中的主要作用是摄取、处理并提呈抗原给辅助性T淋巴细胞/迟发型超敏反应T淋巴细胞(TH/TD)、B细胞,提供活化第1信号;分泌白细胞介素-1(IL-1)等第2信号分子,导致以TH细胞活化及以抗体依赖的细胞介导的细胞毒作用(ADCC)的方式使外源性物质破坏.
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白细胞介素-1基因多态性与疾病
白细胞介素-1(IL-1)是一组主要起免疫调节作用的激素样肽类物质,即炎症前期细胞因子,包括IL-1α、IL-1β、IL-1受体拮抗物,即IL-1r和IL-18,四者同属IL-1家族[1].基于氨基酸序列的保守性以及基因结构和三维结构的一致性,IL-1家族中又增加了6个新成员.所有这些新的基因都定位于2号染色体上的IL-1B和 IL-1RN位点之间,提示每个新的IL-1家族成员均来自共同的祖先基因.
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胎盘免疫调节因子对CIK细胞活性的影响
目的:探讨胎盘免疫调节因子(placental factor,PF)对细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine-induced killer cells,CIK)的增殖及CIK细胞杀伤活性的影响.方法:抽取健康人新鲜血液,诱导CIK细胞产生后,设加入不同浓度的PF-CIK组和不加PF的空白CIK组,观察CIK细胞的增殖率和细胞毒活性的变化.结果:与不加PF的空白CIK细胞相比较,加不同浓度的PF组CIK细胞的增殖率和杀伤率均有统计学差异(P＜0.01).结论:PF可上调节CIK细胞的生长及杀伤活性,为CIK细胞的过继性免疫治疗提供了一种新的方法.
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TNF结合肽和TNFR封闭肽对TNF-α体外介导的生物学抑制效应的实验研究
目的:检测TNF-α结合肽(TBP)和TNFR封闭肽(TRBP)的生物学特性及功能.方法:以GFP-TNF融合蛋白竞争结合实验,检测TBP和TRBP的特异性.用非变性PAGE检测TBP和TRBP的互补结合性.用细胞毒抑制实验,观察TBP和TRBP对TNF-α杀伤 U937细胞的抑制作用.用硝基蓝四氮唑(NBT)还原能力和RT-PCR技术,检测TBP和TRBP对TNF-α诱导的人外周血单核细胞的呼吸爆发和对促炎症因子IL-1β和IL-8 mRNA水平的抑制作用.结果:TBP和TRBP能抑制GFP-TNF融合蛋白与细胞膜上TNFR的结合.非变性PAGE证明,TBP与TRBP之间的结合,为非配体和受体的结合; TBP和TRBP对TNF-α的细胞毒效应均有抑制作用,且随着剂量的增加而增强,二者联用(即pep.38+X4)效果更好.TBP和TRBP联用,能有效地抑制TNF-α和IFN-γ诱导的单核细胞呼吸爆发的强度,抑制TNF-α诱导的IL-1β和IL-8 mRNA的转录.结论:TBP和TRBP具有结合TNF-α和TNFR的特异性,但二者的结合为非配体和受体的相互结合.TBP和TRBP对TNF-α介导的各种生物学效应均具有抑制作用,二者联用效果更显著.
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L-ficolin保护小鼠抵御伤寒杆菌感染作用的研究
目的:探讨L-fcolin在小鼠体内抵御鼠伤寒杆菌(Salmonella typhiurium)感染的作用.方法:以构建的pcDNA3-L-ficolin、pcDNA3及生理盐水分别作为实验组、阴性对照组及空白对照组,用活体基因导入仪分别肌肉内注射于感染鼠伤寒杆菌C5的BALB/c小鼠,观察小鼠的生存时间,检测肝脾中的活菌数、肝脾脏器重量指数(WI)以及脾脏中IFN-γ和IL-4的水平.结果:于注射后第7天,检测3组小鼠的各项指标.实验组小鼠的半数死亡时间明显长于两个对照组.实验组肝、脾组织中的活菌数,分别为(5.12±0.21)log CFU/(mL·g)及(3.29±0.83)log CFU/(mL·g); 阴性对照组分别为(7.49±1.27)log CFU/(mL·g)及(6.46±0.56)log CFU/(mL·g); 空白对照组分别为(7.52±1.12)log CFU/(mL·g)及(6.44±0.27)log CFU/(mL·g); 实验组明显低于两个对照组(P＜0.05).实验组小鼠的脾WI为0.376±0.16,明显低于阴性对照组(为0.84±0.12)及空白对照组(为1.01±0.05,P＜0.05).实验组脾组织匀浆中IFN-γ的水平为(1287.87±194.96)ng/L,明显高于阴性对照组[为(464.19±68.72)ng/L],空白对照组[为(361.17±201.27)ng/L],(P＜0.05); 但3组小鼠脾脏组织匀浆中Th2型细胞因子IL-4的水平没有区别.结论:pcDNA3-L-ficolin对小鼠抵御伤寒杆菌的感染有一定的保护作用,其作用机制可能是通过提高TH1型细胞因子IFN-γ的水平而抑制细菌的生长.
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不同刺激剂和培养环境对CD4+、CD8+T细胞内细胞因子表达的影响
目的:探讨不同的刺激剂和不同的培养条件对CD4+和CD8+ T细胞内细胞因子表达的影响.方法:分离正常人的外周血单个核细胞(PBMC),分别加入3种不同的刺激剂(PHA,抗CD3和抗CD28 mAb,PMA和离子霉素),置于4种不同的培养环境下(室温,37℃水浴,37℃培养箱,37℃ 50 mL/L CO2培养箱)培养4.5 ～5 h.收集细胞,以荧光素-mAb标记后,用流式细胞术分析CD4+、CD8+ T细胞内IL-2、IFN-γ和TNF-α的表达.结果:CD4+和CD8+ T细胞内细胞因子的表达,随着刺激剂的不同而有所差别,且在上述4种培养环境中,PMA的刺激效果强,抗CD3 mAb次之,PHA的刺激效应弱.以上述3种刺激剂刺激后,不同培养条件对T细胞内细胞因子的表达有一定的影响.室温培养时几乎检测不到细胞因子的表达,而在37℃水浴、37℃培养箱和37℃ 50 mL/L CO2培养箱中培养时,表达细胞因子的CD4+和CD8+ T细胞的百分率差异无统计学意义(P＞0.05).结论:不同刺激剂体外刺激T细胞表达细胞因子的效应不同,依次为PMA和离子霉素＞抗CD3和抗CD28 mAb＞PHA.体外刺激培养的T细胞活化过程中,温度是重要的条件,CO2无明显影响.
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结核杆菌H37Ra免疫小鼠后脾淋巴细胞的杀伤活性及免疫机制的研究
目的:探讨结核杆菌H37Ra免疫小鼠后,产生特异性的脾淋巴细胞杀伤活性及其免疫机制.方法:(1)分别以结核杆菌H37Ra、BCG和PBS免疫小鼠后第30天及第60天,分离各组小鼠脾淋巴细胞作为效应细胞,以表达Ag85B分泌蛋白的Sp2/0细胞为靶细胞,用MTT比色法检测免疫小鼠脾淋巴细胞的杀伤率; (2)在免疫后第60天,小鼠脾淋巴细胞经PPD刺激后,以RT-PCR法检测穿孔素mRNA及颗粒酶B mRNA的表达.结果:(1)结核杆菌H37Ra组脾淋巴细胞的杀伤率明显高于PBS对照组(P＜0.05),略高于BCG组; (2)H37Ra组和BCG组穿孔素、颗粒酶mRNA的表达量均显著高于PBS组(P＜0.05),H37Ra组穿孔素mRNA的表达量显著高于BCG组(P＜0.05),但颗粒酶B mRNA的表达量两组无差异.结论:结核杆菌H37Ra免疫小鼠后,能增强脾淋巴细胞的杀伤活性,其机制可能与增加穿孔素、颗粒酶B的表达有关.
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中药免疫调节剂对小鼠细胞免疫功能的影响
目的:探讨中药免疫调节剂对正常小鼠及环磷酰胺(Cy)所致免疫抑制小鼠细胞免疫功能的影响.方法:以Cy诱导建立免疫抑制小鼠模型,给正常小鼠和免疫抑制小鼠饮服中药及生理盐水,采用MTT法检测淋巴细胞的增殖反应情况.结果:试验各组小鼠脾细胞在48 h培养时间内淋巴细胞转化率与各组含药血清加入到正常小鼠脾细胞反应体系中,在相同培养时间内的淋巴细胞转化率呈高度正相关.表现为: 在机体正常条件下,两个中药组与正常组之间差异无统计学意义(P＞0.05),但均高于Cy组(P＜0.05); 在免疫抑制条件下,两个中药组明显高于正常对照组和Cy组(P＜0.05),且中药免疫调节剂组优于玉屏风组(P＜0.05); 另外,50 mL/L浓度的含药血清优于100 mL/L浓度的含药血清(P＜0.05).结论:该中药免疫调节剂能显著促进免疫抑制小鼠淋巴细胞的转化,而对正常小鼠作用不明显.
| 年 | 期数 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2017 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2011 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2010 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2009 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2008 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2007 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2006 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2005 | 01 02 03 04 05 06 z1 |
| 2004 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2003 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2002 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2001 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2000 | 01 02 03 04 05 06 |
| 1999 | 01 02 |
| 1995 | 01 02 03 |
| 1994 | 01 02 |
| 1993 | 01 02 03 04 |
| 1992 | 01 02 03 04 |
| 1991 | 01 02 03 04 |
| 1990 | 01 02 |
| 1989 | 01 02 03 04 |
