细胞与分子免疫学杂志
Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology 세포여분자면역학잡지
- 主管单位： 中国免疫学会；第四军医大学
- 主办单位： 陕西省免疫学会,中国免疫学会
- 影响因子： 0.81
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 1007-8738
- 国内刊号： 61-1304/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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幽门螺杆菌感染导致大鼠胃组织IL-17含量增加并上调脾脏中Th17细胞频数
目的 观察幽门螺杆菌(Hp)感染后大鼠体内Th17细胞频数和IL-17水平的变化.方法 使用Hp细菌悬液对30只大鼠灌胃,感染后3周、6周和9周分别处死大鼠,取大鼠的胃组织进行HE染色,观察胃黏膜病理改变情况,ELISA检测胃组织中IL-17含量.应用流式细胞术和反转录PCR技术检测大鼠脾脏淋巴细胞中Th17细胞频数和IL-17 mRNA水平.结果 Hp感染后,大鼠胃黏膜组织出现显著的病理改变;Hp感染时间越长,胃组织中IL-17含量越高;与正常对照组相比,Hp感染3周、6周和9周的大鼠脾脏淋巴细胞中Th17细胞频数显著增加,IL-17 mRNA表达水平亦显著升高,且各组间比较差异具有统计学意义.结论 大鼠Hp感染不仅可导致胃黏膜损伤,胃组织IL-17含量增加,而且能够上调脾脏淋巴细胞中Th17细胞的频数和IL-17 mRNA水平.
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银杏叶提取物增强大鼠脾脏和胸腺的免疫功能
目的 研究银杏叶提取物(GBE)对大鼠脾脏和胸腺免疫功能的影响.方法 给SD大鼠灌胃给予(40、120、360) mg/(kg·d)GBE,同时设置对照组.28 d后,水合氯醛麻醉处死大鼠,测量胸腺和脾脏的质量指数;MTr法检测伴刀豆球蛋白A(ConA)诱导的大鼠脾淋巴细胞增殖转化;中性红实验测定大鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能;扫描电镜观察大鼠脾脏和胸腺的超微结构变化.结果 不同剂量的GBE均可提高胸腺和脾脏的器官质量指数,不同剂量组之间无显著性差异;不同剂量的GBE均可增强大鼠腹腔内巨噬细胞的吞噬作用及各级淋巴细胞的增殖能力,且呈现一定的剂量依赖性.电镜观察发现不同剂量的GBE处理组,大鼠脾脏和胸腺中成熟淋巴细胞数均较对照组增多.结论 银杏叶提取物可增强大鼠胸腺和脾脏的免疫功能.
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水通道蛋白9表达水平影响HepG2肝癌细胞的生物学行为及对As2O3的敏感性
目的 研究水通道蛋白9(AQP9)表达水平对三氧化二砷(As2O3)诱导HepG2肝癌细胞凋亡及对其生物学行为的影响.方法 采用MTT法筛选As2O3对肝癌细胞HepG2增殖抑制作用;将重组质粒pEGFP-N1-AQP9和pshRNA-AQP9转染肝癌细胞,反转录PCR检测AQP9 mRNA的表达,Western blot法检测AQP9蛋白表达;将As2O3加入转染后及未处理的HepG2细胞,MTT法检测细胞增殖抑制率;流式细胞术分析周期和凋亡情况;TranswellTM实验验证迁移侵袭能力的改变;酶标仪检测caspase-3活性.结果 重组质粒对AQP9有明显的过表达及抑制表达作用,转染pEGFP-N1-AQP9组肝癌细胞的增殖抑制作用明显大于单纯As2O3处理组,侵袭及迁移能力显著减弱,细胞周期停滞在G0/G1期,凋亡明显多于单纯As2O3处理组,活化的caspase-3活性高.转染pshRNA-AQP9组细胞的增殖抑制作用及caspase-3活性小于单纯As2O3处理组,侵袭迁移能力强于单纯As2O3处理组,细胞周期停滞在GO/G1期的数量及凋亡率较少.结论 调节AQP9的表达影响HepG2肝癌细胞的生物学行为并影响As2O3对HepG2肝癌细胞的敏感性.
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蛛网膜下腔出血大鼠脑基底动脉和海马组织Toll样受体3表达增强
目的 观察Toll样受体3(TLR3)在蛛网膜下腔出血(SAH)模型中的动态表达变化及意义.方法 采用枕大池注血法构建SAH模型.SD大鼠60只,随机分为:假手术组、SAH组,每组15只.SAH组再次分为1、3、7d组.假手术组除注入生理盐水外,其余操作方法同SAH组.模型成功后,于不同时间点取基底动脉和脑,通过反转录PCR检测TLR3 mRNA的表达,Western blot法和免疫组织化学技术检测TLR3蛋白表达.同时采用免疫荧光双标记技术分析其分布规律.结果 TLR3 mRNA、蛋白在假手术组中呈微弱表达;SAH组中均高表达,并且以3 d SAH组表达量高.免疫组织化学结果显示,TLR3在血管内皮与海马神经元均高表达,假手术组TLR3呈微弱表达于细胞质,而模型组TLR3在细胞核与细胞质均有强表达.免疫荧光双标记结果提示,TLR3与内皮细胞标志CD34共表达.结论 SAH后大鼠脑基底动脉和海马组织TLR3表达增强,提示TLR3在SAH发病过程中可能起着一定作用.
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血管黏附蛋白1在H22肿瘤荷瘤小鼠的表达与活性
血管黏附蛋白1 (vascular adhesion protein-1,VAP-1)是一个相对分子质量(Mr)为170 000～180 000的二聚体糖蛋白,是一种新的内皮黏附分子,能够参与淋巴细胞黏附[1-2].同时,VAP-1还具有氨基脲敏感性胺氧化酶(semicarbazide-sensitive amine oxidase,SSAO)活性[3],能够催化多种内源性和外源性的伯胺类化合物氧化脱胺生成相应的醛类化合物、过氧化氢和氨.研究证实,VAP-1的酶活性对白细胞黏附功能起重要作用[4-6].VAP-1在肿瘤发生发展过程中的作用仍不是很清楚,部分研究表明VAP-1能够参与机体对肿瘤组织的免疫反应,与淋巴细胞的黏附和肿瘤组织淋巴细胞的浸润密切相关[7-8].然而,也有研究发现在人皮肤黑素瘤内微血管VAP-1表达缺乏,仅在瘤外周微血管上有VAP-1表达[9],推测VAP-1在不同肿瘤进展过程中可能起不同的作用.此外,血浆可溶状态VAP-1(soluble vascular adhesion protein-1,sVAP-1)的活性或蛋白水平在肿瘤患者体内也会发生改变,结直肠癌患者血浆sVAP-1活性和蛋白水平随肿瘤进程而降低[10],胃癌患者平均sVAP-1水平明显较健康者高,且随肿瘤进展逐渐降低[11].
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亚精胺促进雌激素缺乏小鼠骨髓间充质干细胞的成骨分化并抑制其成脂分化
目的 研究亚精胺(SPD)对骨髓间充质干细胞(BMMSC)分化能力的影响.方法 雌性C57/BL6J小鼠分为假手术(Sham)组、卵巢摘除术(OVX)组.术后2月,分离、培养OVX组和Sham组C57BL/6J小鼠的BMMSC.经Western blot法检测对比2组BMMSC的碱性磷酸酶(ALP)、runt相关转录因子2(Runx2)以及过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)、脂蛋白脂解酶(LPL)的蛋白水平,茜素红染色对比2组BMMSC的矿化程度差异,油红O染色对比2组BMMSC脂滴数量差异.以SPD干预OVX组小鼠的BMMSC,Western blot法检测Runx2、ALP、PPARγ、LPL蛋白水平,反转录PCR检测Runx2、ALP、PPARγ、LPL mRNA水平;茜素红染色检测矿化结节及油红O染色检测脂滴数量.结果 OVX组小鼠来源的BMMSC成骨分化能力低于Sham组,成脂能力高于Sham组.经SPD干预后,OVX来源的BMMSC的成骨分化能力较未干预增强,成脂分化能力减弱.结论 SPD能够促进雌激素缺乏所致骨质疏松小鼠BMMSC的成骨分化并抑制其成脂分化.
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β2糖蛋白Ⅰ免疫小鼠对辅助性T细胞亚群分化的影响
目的 探讨β2糖蛋白Ⅰ(β2 GPI)免疫小鼠引起的辅助性T(Th)细胞分化和抗β2GPI抗体产生的机制.方法 将健康的BALB/c小鼠随机分为生理盐水组和β2GPI免疫组,每隔2周由尾静脉注射β2GPI或等量生理盐水,共注射2次或4次.采用间接ELISA检测小鼠血清中抗β2GPI抗体的效价;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测小鼠脾脏细胞GATA结合蛋白3(GATA3)、白细胞介素4(IL-4)、表达于T细胞的T盒(T-bet)、γ干扰素(IFN-γ)、Foxp3的mRNA水平;流式细胞术检测小鼠脾脏淋巴细胞中GATA3阳性细胞和Foxp3阳性细胞的比例.结果 2次免疫后,小鼠血清中出现高效价(1∶100 000)的抗β2GPI抗体,脾脏中Th2特异性指标GATA3、IL-4的mRNA水平和GATA3阳性细胞比例相对生理盐水组升高.4次免疫后,小鼠血清中抗β2GPI抗体效价进一步升高(＞1∶100 000),脾脏GATA3、Th1细胞特异性标志物(T-bet、IFN-γ)和调节性T细胞特异性标志Foxp3的mRNA水平下调,IL-4的mRNA水平和2次免疫后无明显差异.此外,脾脏细胞中GATA3阳性细胞的比例进一步上调且伴有Foxp3阳性细胞比例的下调.结论 β2GPI免疫小鼠引起Th细胞向Th2细胞优势分化,并伴有Th1细胞和调节性T细胞的抑制,有利于抗β2GPI抗体的产生.
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miR-9和miR-124共表达载体的构建与靶分子鉴定
目的 构建miR-9和miR-124单独表达和串联共表达的真核表达载体,并鉴定其共同靶分子.方法 将pri-miR-9和pri-miR-124的编码序列分别插入或串联后插入真核表达载体pCAG,转染HeLa细胞后,实时定量PCR鉴定成熟miRNA的表达水平.构建miR-9和miR-124分子完全互补的靶基因萤光素酶报告载体,双萤光素酶报告系统检测表达的成熟miRNA的生物学功能.利用生物信息学软件预测miR-9和miR-124的共同靶分子,将靶分子mRNA的3 '非翻译区(UTR)克隆入pGL3luciferase报告基因载体中,观察转染细胞后miRNA对报告基因表达的影响.结果 经测序及酶切鉴定证实3种miRNA表达载体构建完全正确,实时定量PCR检测表明这3种表达载体均能正确高表达成熟的miRNA.双萤光素酶报告系统检测证实3种载体表达的miRNA分子具有生物学活性.生物学软件预测发现小分子GTP结合蛋白Ras相关蛋白2a(Rap2a)是miR-9和miR-124的靶基因,成功构建了含有Rap2a 3'UTR的萤光素酶报告基因载体.双萤光素酶报告系统提示miR-9和miR-124均能抑制Rap2a的表达.结论 成功构建了miR-9和miR-124的单独表达和共表达载体,并能高表达具有生物学活性的成熟的miR-9和miR-124分子.Rap2a可能是miR-9和miR-124的一个共同靶分子.
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肺炎链球菌热休克蛋白40通过p38MAPK和JNK通路诱导小鼠巨噬细胞免疫应答
目的 探讨肺炎链球菌热休克蛋白40(HSP40)引起小鼠巨噬细胞免疫应答的机制.方法 表达、纯化重组HSP40蛋白(rHSP40),去除其中的脂多糖(LPS).rHSP40处理C57 BL/6野生小鼠骨髓来源巨噬细胞(BMDM)后,反转录PCR检测BMDM中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、IL-1β、IL-23p19、IL-12p40、IL-12p35、IL-10的mRNA水平,ELISA检测TNF-α、IL-6、IL-12p40水平;rHSP40刺激后,ELISA检测野生型、Toll样受体2(TLR2)和TLR4缺陷的BMDM中TNF-α和IL-6的表达水平;丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)抑制剂预处理BMDM后,ELISA检测其对rHSP40诱导TNF-α和IL-6水平的影响;Western blot法检测p38MAPK和c-Jun氨基末端激酶(JNK)磷酸化水平.结果 获得纯度90％以上的rHSP40;rHSP40可显著增强p38MAPK、JNK的磷酸化水平和TNF-α、IL-6的表达;p38MAPK和JNK抑制剂可显著抑制TNF-α和IL-6的表达;与野生BMDM相比较,TLR4缺陷的BMDM表达TNF-α和IL-6显著降低.结论 HSP40诱导小鼠巨噬细胞产生免疫应答受JNK及p38MAPK信号通路调控,并且此过程依赖TLR4.
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睾酮抑制氧化型低密度脂蛋白诱导的血管平滑肌细胞表型转化和增殖
目的 研究睾酮对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)表型转化和增殖的抑制作用,并探讨其可能机制.方法 培养大鼠VSMC,利用血清饥饿法进行同步化处理.将细胞分为对照组:不进行任何处理;ox-LDL组:给予50 μg/mL ox-LDL处理;睾酮组:分别加入5×10-8mol/L和5×10-7 mol/L睾酮预处理12 h,然后与50 μg/mL ox-LDL共培养;另外设置血清组,用含100 mL/L胎牛血清的培养基培养.水溶性四甲基偶氮唑盐(WST-1)法检测各组细胞增殖的变化;流式细胞术检测各组细胞周期的变化;Western blot法检测各组细胞线粒体融合素2(Mfn2)、磷酸化的细胞外信号调节激酶1/2 (p-ERK1/2)、增殖细胞核抗原(PCNA)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及骨桥蛋白(OPN)表达的变化.结果 与对照组比较,ox-LDL组细胞增殖能力增强,G0/G1期细胞比例降低,S期细胞比例增加,Mfn2表达降低,p-ERK1/2表达增加,PCNA表达增加,α-SMA表达降低,OPN表达增加.与ox-LDL组比较,不同浓度睾酮组细胞增殖受抑制,G0/G1期细胞比例增加,S期细胞比例降低,Mfn2表达增加,p-ERK1/2表达降低,PCNA表达降低,α-SMA表达增加,OPN表达降低,以上作用呈现一定的浓度依赖性.结论 睾酮可抑制ox-LDL诱导的大鼠VSMC发生表型转化及增殖,可能与其上调Mfn2抑制ERK1/2信号通路有关.
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过表达C-Src激酶结合蛋白诱导Jurkat淋巴细胞表型改变和凋亡
目的 研究上调C-Src激酶结合蛋白(CBP)表达对Jurkat细胞超微结构及相关生物学功能的影响.方法 构建CBP-EGFP融合蛋白过表达病毒载体,转染建立稳定的高表达CBP-EGFP融合蛋白的Jurkat细胞株.光学显微镜下观察细胞的基础生长状态,共聚焦显微镜观察病毒转染效率及CBP蛋白在细胞上的定位,电镜观察细胞内细胞器的复杂程度.流式细胞术检测细胞的基本参数及凋亡情况,实时定量PCR(qRT-PCR)检测CBP基因及信号转导通路中C-Src激酶(CSK)、原癌基因蛋白Vav(Vav oncoprotein) mRNA水平.结果 光镜下发现转染CBP-EGFP病毒的Jurkat细胞皱缩细胞增多,大小均一性较差.共聚焦显微镜显示细胞转染效率达到100％,同时发现CBP定位于细胞膜上.电镜可见CBP组细胞内细胞器较Jurkat细胞复杂,有线粒体,并出现大量的溶酶体样结构.与阴性组相比,转染了CBP-EGFP病毒后,死亡细胞的数量大大增加,而qRT-PCR结果显示CBP组CSK表达上调,Vav则表达下调.结论 在Jurkat细胞中,CBP蛋白高表达可以使细胞的均一性下降,凋亡细胞增多.
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逆基因NANOGP8表达与人胃癌SGC-7901细胞的生物学特性相关
目的 探讨pEGFP-N1-NANOGP8真核表达载体及pshRNA-NANOGP8干扰质粒转染人胃癌SGC-7901细胞后,对细胞增殖、周期、凋亡、迁移、侵袭的影响.方法 构建pEGFP-NI-NANOGP8真核表达载体及针对人NANOGP8基因的干扰质粒pshRNA-NANOGP8,进行酶切、测序鉴定.将测序正确的质粒在脂质体的介导下转染入SGC-7901细胞,通过荧光显微镜、反转录PCR和Western blot法检测其表达情况,CCK-8法检测SGC-7901细胞增殖情况,流式细胞术分析胃癌细胞周期变化和凋亡情况,TranswellTM实验验证迁移和侵袭能力的变化.结果 成功构建出pEGEP-N1-NANOGP8及pshRNA-NANOGP8重组质粒.将重组质粒转染胃癌细胞后,能观察到GFP的表达;反转录PCR结果显示pEGEP-N1-NANOGP8转染组高表达NANOGP8 mRNA,而pshRNA-NANOGP8转染组NANOGP8 mRNA低表达.NANOGP8高表达组能促进肿瘤细胞增殖,促使细胞进入S期,迁移侵袭能力明显增强.而低表达组细胞增殖受抑制,细胞周期停留在G0/G1期,迁移、侵袭能力受抑制.结论 逆基因NANOGP8的转录表达,与胃癌的增殖、细胞周期、凋亡、迁移、侵袭有密切的关系.
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人2型大麻素受体过表达诱导宫颈癌Caski细胞凋亡
目的 构建人2型大麻素受体(hCB2R)基因真核表达载体,探讨hCB2R在细胞中的表达、定位以及hCB2R对宫颈癌Caski细胞的生长的影响及机制.方法 构建GV230-hCB2R质粒,经双酶切、测序鉴定后,转染HEK293细胞和Caski细胞,Western blot法及免疫荧光细胞化学染色联合激光扫描共聚焦显微镜技术检测CB2R表达及细胞定位;流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot法及实时荧光定量PCR检测hCB2R、Bcl-2、Bax、Bad的表达.结果 双酶切获得1128 bp的目的片段,测序结果与hCB2R基因注册序列(NM_001841.2)的同源性为99％;转染HEK293细胞后,可表达相对分子质量(Mr)40 000的hCB2R蛋白,HEK293细胞膜和细胞质中均有CB2R表达;过表达的CB2R,可上调Bax、Bad的表达,抑制Bcl-2的表达,促进宫颈癌Caski细胞凋亡.结论 上调Caski细胞hCB2R表达可增强Bax、Bad表达,抑制Bcl-2表达,诱导细胞凋亡.
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大鼠Armcx3基因真核表达载体的构建及表达
帕金森病(Parkinson's disease,PD)是一种高发于中老年的神经系统退行性疾病,临床表现为静止性震颤、肌强直、运动迟缓和姿势步态异常等[1].以往研究表明,线粒体动态变化失衡,是引起神经元细胞死亡和帕金森病发生的一个重要因素[2-4].X连锁犰狳重复蛋白3 (Armadillo repeat containing,X-linked 3,Armcx3),也称为上皮癌中X染色体缺失的Arm蛋白3(Arm protein lost in epithelial cancers on chromosome X 3,Alex3),是Alex家族成员之一[5-6].研究表明Armcx3蛋白在调节神经元线粒体的聚集和运动中发挥了重要作用[7-9].但Armcx3蛋白在PD发生、发展中的作用及机制尚不清楚.本研究利用反转录PCR技术从大鼠PC12细胞中反转录得到Armcx3基因序列,克隆入真核表达质粒pEGFP-N1,构建pEGFP-N1-Armcx3稳定转染PC12细胞株,成功表达GFP-Armcx3蛋白,为后续研究Armcx3蛋白在PD发生过程中的作用提供实验材料.
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靶向敲低核蛋白1抑制HepG2肝癌细胞的增殖及迁移
目的 观察应激相关核蛋白1(Nupr1)在不同肝癌细胞系中的表达,通过靶向敲低HepG2肝癌细胞Nupr1,观察其对肝癌细胞增殖及迁移的影响.方法 通过实时定量PCR检测BEL-7402、QSG-7703、SMMC-7721、HepG2肝癌细胞中Nupr1的表达.采用RNA干扰技术敲低HepG2细胞中Nupr1的表达,通过MTT法及集落形成实验比较细胞的增殖能力的变化,用流式细胞术进行细胞周期分析,利用TranswellTM实验观察Nupr1对细胞迁移能力的影响.结果 HepG2人肝癌细胞中Nupr1的表达显著高于其他肝癌细胞系.靶向Nupr1的2个短发夹RNA(shRNA)均能有效敲低HepG2肝癌细胞中Nupr1的表达,抑制效率分另别为72.25％和84.25％.Nupr1表达降低能够抑制细胞增殖,导致细胞周期发生G1期阻滞.Nupr1敲低显著降低细胞的迁移能力及集落形成能力.Western blot结果显示Nupr-1表达降低能够上调细胞周期负性调控因子p21和p27的表达水平.结论 靶向敲低Nupr1抑制HepG2肝癌细胞的增殖及迁移.
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Chemerin通过核因子κB介导的炎症反应诱导C2C12细胞产生胰岛素抵抗
目的 探讨趋化素(chemerin)诱导小鼠成肌细胞C2C12胰岛素抵抗的作用及其作用机制.方法 给予C2C12细胞(0、10、100) ng/mL chemerin处理24 h,并用胰岛素刺激30 min,使用荧光酶标仪检测葡萄糖摄取率,ELISA测定培养液中白细胞介素6(IL-6)、IL-8以及肿瘤坏死因子α(TNF-α)的含量.Western blot法检测C2C12细胞中核因子κB(NF-κB)的表达水平,结合NF-κB阻滞剂吡咯烷二硫代氨基甲酸(PDTC)对细胞的预处理,探讨chemerin对骨骼肌细胞胰岛素抵抗的诱导机制.结果 与对照组相比,chemerin剂量依赖性的抑制C2C12细胞的葡萄糖摄取能力,并显著提高炎性因子IL-6、IL-8和TNF-α的水平,NF-κB的表达水平明显增加.PDTC预处理明显抵消chemerin抑制的C2C12葡萄糖摄取率,同时降低chemerin诱导的IL-6、IL-8和TNF-α水平.结论 Chemerin通过NF-κB介导的炎症反应诱导C2C12细胞产生胰岛素抵抗.
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胸腺肽α1为基础三联抗肿瘤疗法降低肝癌模型大鼠发癌率和血清甲胎蛋白水平
目的 探讨以胸腺肽α1(Tα1)为基础,联合槐耳颗粒、西罗莫司的三联抗肿瘤疗法对大鼠肝癌模型血清甲胎蛋白(AFP)水平的影响.方法 90只SD大鼠以随机数字法分为Tα1组、槐耳颗粒组、西罗莫司组、三联组、诱癌组和正常对照组,每组15只.除正常对照组外,其余各组均采用化学诱癌法建立SD大鼠肝癌动物模型,自DEN开始处理后即开始用药,三联组采用0.8 mg/kg Tα1皮下注射,开始每日1次,2周后改为每周2次;0.35 g/kg槐耳颗粒灌胃,3次/日;1 mg/kg西罗莫司灌胃,1次/日.其余各单独用药组的用药剂量同三联组,诱癌组和对照组不予以药物治疗,用药持续到第20周.观察各组大鼠在不同时期的行为表现,并检测各组大鼠6、16、18、20周的血清AFP的水平.结果 经诱癌处理的各组大鼠在第16周表现出典型的肝癌症状,并从第10周开始相继死去6只,解剖出各只大鼠肝脏,肉眼观察可见肝脏表面不光滑且有结节.肝脏病理检查证实肝癌模型诱导成功.根据第20周存活大鼠的肝癌发生率,表明三联疗法的大鼠肝癌发生率显著低于其他处理组,存活率显著高于其他处理组.三联疗法显著降低大鼠体内血清AFP水平.结论 三联疗法能显著延长患癌大鼠的生存时间、降低发癌率和血清AFP水平.
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AG490抑制甲状腺髓样癌TT细胞增殖并提高其放射敏感性
目的 研究AG490对体外培养甲状腺髓样癌TT细胞增殖、凋亡及放射敏感性的影响.方法 采用(0、25、50、100) μmol/L AG490处理甲状腺髓样癌TT细胞,MTT法和流式细胞术进行细胞增殖和凋亡检测,克隆形成实验检测其放射敏感性、Western blot法检测各组细胞Janus激酶2(JAK2)、磷酸化的信号转导子与转录激活子3(p-STAT3)、Bcl-2、Bax蛋白表达.结果 与对照组相比,(25、50、100) μmol/L AG490组的抑制作用增强,呈浓度和时间依赖性;随着AG490药物浓度的增加凋亡率逐渐增加;与对照组相比,50 μmol/L组细胞存活率显著降低,放射生物学参数:射线为2Gy时的存活分数(SF2)、平均致死剂量(D0)、准阈剂量(Dq)和外推数(N)降低;D0时放射增敏比(SER D0)、Dq时放射增敏比(SERDq)则增加.Western blot结果显示JAK2、p-STAT3和Bcl-2的蛋白表达量随着药物浓度的升高而逐渐降低,Bax蛋白表达量随着药物浓度的升高而逐渐增加.结论 AG490可抑制甲状腺髓样癌TT细胞增殖、增加细胞凋亡、提高放射敏感性.
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miR-141-3p靶向调控前列腺癌LNCaP细胞雄激素受体的表达
目的 检测LNCaP细胞内miR-141-3p对雄激素受体(AR)基因靶向调控作用,明确AR是否为miR-141-3p的靶基因.方法 将miR-141-3p mimics转染LNCaP细胞后,利用反转录PCR和Western blot法分别检测LNCaP细胞中AR的mRNA和蛋白表达.采用PCR方法扩增得到含有miR-141-3p结合位点的AR mRNA 3'非翻译区(3'UTR)片段,并插入到pmiR-report载体萤光素酶基因的3'下游区,并将所构建载体命名为pmiR-AR-3' UTR;萤光素酶报告基因检测试剂盒检测miR-141-3p对pmiR-AR-3'UTR靶向抑制效果.结果 转染miR-141-3p mimics可降低LNCaP细胞内源AR的mRNA和蛋白水平;萤光素酶活性检测结果显示:与对照组相比,miR-141-3p可明显抑制pmiR-AR-3'UTR萤光素酶活性.结论 AR是miR-141-3p的靶基因.
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IL-23通过活化DLL4/Notch1途径增强食管鳞状细胞癌细胞的迁移能力
目的 检测白细胞介素23(IL-23)对食管鳞状细胞癌(ESCC)细胞迁移能力的影响,并探讨其促进癌细胞迁移的潜在机制.方法 免疫组织化学染色法检测10例ESCC患者癌组织与癌旁组织中IL-23表达;荧光定量PCR检测不同浓度IL-23处理后,ESCC细胞TE-1中Notch1和Foxn4 mRNA的表达;用γ分泌酶抑制剂DAPT阻断Notch通路后,Western blot法检测IL-23处理前后TE-1细胞中Notch受体胞内段(NICD)、Delta样配体4(DLL4)、发状分裂相关增强子1(Hes1)和基质金属蛋白酶9(MMP-9)蛋白表达水平;通过TranswellTM实验验证IL-23对ESCC细胞迁移能力的影响.结果 与癌旁组织相比,肿瘤组织中IL-23高表达;IL-23可明显上调TE-1细胞的Notch受体及配体相关转录因子的表达;阻断Notch1通路活化可以抑制由IL-23诱导产生的迁移相关蛋白的表达;IL-23处理促进ESCC细胞的迁移.结论 IL-23通过活化DLL4/Notch1通路增强ESCC细胞的迁移能力.
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长波紫外线联合补骨脂素诱导人脾脏淋巴细胞凋亡
长波紫外线即紫外线A(ultraviolet A,UVA)联合8-甲氧基补骨脂素(8-methoxypsoralen,8-MOP)的诱导方法被应用于治疗许多疾病,如皮肤T细胞淋巴瘤、移植物抗宿主病、器官移植排斥反应和多种自身免疫性疾病[1].8-MOP是一种从植物中提取出的化合物,400～ 320 nm UVA照射后激活的8-MOP可以与细胞DNA发生共价交联,抑制DNA的合成,进而抑制淋巴细胞增殖并启动细胞凋亡[2-3].
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高分辨率融解曲线技术检测冠心病患者IL-1β和IL-1Ra基因多态性
目的 为探讨白细胞介素1β(IL-1β)和白细胞介素1受体拮抗剂(IL-1Ra)基因单核苷酸多态性(SNP)与冠心病(CHD)易感及其血清学指标的相关性,应用高分辨率融解曲线分析(HRM)技术建立IL-1β和IL-1Ra基因SNP的分子诊断方法.方法 建立IL-1B-511C ＞T、IL-1B-31C＞T、IL-1B+ 3954C＞T和IL-1RNT＞C这4个SNP位点的PCR-HRM检测方法,对260例CHD患者和274例健康对照进行比较研究,分析其与CHD易感及血清学指标的关系.结果 上述4个SNP位点未发现与CHD易感有统计学差异,性别分层后发现男性IL-1B-31C＞T位点和女性IL-1B+ 3954C＞T位点的等位基因频率,在病例组和对照组间存在差异;单倍型分析发现IL-1B-511T/IL-1B-31C/IL-1B+ 3954C/IL-1RN T (TCCT)单倍型增加CHD发病风险(OR=1.217,95％ CI:0.950～1.559,P=0.123),CTCC和TTCT单倍型降低CHD发病风险(OR=0.612,95％ CI:0.376～0.994,P=0.046;OR =0.365,95％CI:0.154～0.862,P=0.017);病例组血清学指标的相关性分析未发现其与SNP位点之间有关联性.结论 应用HRM技术建立的4个SNP位点PCR-HRM检测方法经测序验证和临床标本检测均能正确基因分型,实现了快速基因分型的均相检测.IL-1B-31C＞T、IL-1B+ 3954C＞T位点和单倍型CTCC和TTCT与中国兰州地区汉族人群CHD易感性有关.
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TIM-3在人非小细胞肺癌CD4+肿瘤浸润淋巴细胞的表达增强提示预后不良
目的 研究负性共刺激分子T细胞免疫球蛋白和黏蛋白分子3 (TIM-3)在人非小细胞肺癌(NSCLC)肿瘤浸润淋巴细胞的表达及临床意义.方法 采用免疫荧光标记结合流式细胞术检测56例NSCLC患者肿瘤组织和癌旁组织浸润淋巴细胞表面TIM-3的表达并分析其表达与患者预后的关系.结果 TIM-3在肿瘤浸润CD4+T细胞和CD8+T细胞的表达率分别为(28.64 ±10.46)％和(30.77士15.58)％,高于癌旁组织的(13.32±6.95)％和(12.98±8.19)％;TIM-3与程序性死亡蛋白1(PD-1)在肿瘤浸润淋巴细胞呈现共表达;TIM-3在肿瘤浸润CD4+T淋巴细胞的表达与NSCLC患者的生存预后有关.结论 TIM-3的表达在肿瘤免疫中起到负性调节作用,对患者的生存预后有不良影响.
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NK细胞和NKT细胞在慢性乙型肝炎中的表型和功能特征
目的 检测慢性乙型肝炎(CHB)患者外周血自然杀伤(NK)细胞、自然杀伤T(NKT)细胞的比例、NKG2D/NKG2A水平和γy干扰素(IFN-γ)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的水平.方法 采集并分离CHB患者外周血单个核细胞(PBMC),流式细胞术检测NK、NKT细胞占PBMC的比例,NKG2D、NKG2A水平,经佛波酯(PMA)、布雷菲德菌素A(BFA)、离子霉素(ionomycin)处理后,流式细包术检测IFN-γ、TNF-α的水平,分析各指标与乙肝病毒载量和血清丙氨酸氨基转移酶的关系,采用独立样本t检验与Pearson相关性分析.结果 与正常对照者相比,CHB患者外周血NK细胞和NKT细胞比例明显降低;NKG2A阳性的NK细胞和NKT细胞明显升高;经PMA、BFA、ionomycin刺激后,IFN-γ阳性的NK细胞和NKT细胞明显降低.结论 CHB患者NK、NKT细胞存在不同程度的减少、受体表达失调和细胞因子分泌功能下降等功能紊乱.
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牛磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶单克隆抗体的制备
目的 制备牛磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEPCK)单克隆抗体(mAb),并对其特异性进行初步鉴定.方法 构建含PEPCK基因的重组质粒,将其转化大肠杆菌,并进行诱导表达,对表达产物PEPCK重组蛋白进行纯化,以PEPCK重组蛋白为抗原,免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合获得杂交瘤细胞,用间接ELISA筛选阳性克隆,获得稳定分泌抗牛PEPCK mAb的细胞株,并用Western blot法,免疫组织化学染色和免疫沉淀鉴定其特异性.结果 成功获得稳定分泌抗牛PEPCK mAb的杂交瘤细胞株.Western blot法、免疫组织化学和免疫沉淀结果表明,该抗体能与牛PEPCK蛋白特异性结合.结论 成功获得抗牛PEPCKmAb.
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利用大型天然噬菌体抗体库筛选抗死亡受体5人源抗体
目的 从大容量天然噬菌体抗体库中筛选抗人死亡受体5(DR5)单链抗体(scFv)并对其抗原结合活性进行鉴定.方法 以前期真核表达纯化的DR5-Fc蛋白包被筛选管,从自主构建的大容量天然噬菌体抗体库中,通过4轮筛选过程获得噬菌体抗体,采用免疫细胞化学染色、ELISA鉴定其抗原结合活性;DNA指纹图谱分析和序列测定确定其抗体类型.结果 经过4轮筛选,获得26株与DR5特异性结合的阳性克隆,DNA指纹分析有4种不同的可变区片段;经过基因测序,分析可变区基因的亚群,并将其制备成可溶性的抗体,进一步用免疫细胞化学技术证实所获得的抗体可特异性结合SW480细胞的DR5蛋白.结论 利用噬菌体抗体库技术成功获得了特异性抗DR5的人源性scFv.
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HIV-1辅助蛋白负性调节因子下调细胞膜表面分子的研究进展
人类免疫缺陷病毒1(HIV-1)感染机体之后,其辅助蛋白负性调节因子(Nef)可以通过其功能不同的结构域,以不同的机制,对靶细胞表面的多种细胞膜分子进行调节,同时增强病毒的感染力和抑制抗体类别转换.这些机制使得HIV-1侵染的靶细胞避免超感染,保证HIV-1在宿主细胞合适而稳定的环境中进行增殖、完成生命周期,从而实现HIV-1在人体内的长期潜伏和免疫逃逸.本文综述了Nef的结构域以及其下调多种靶细胞膜表面分子CD4、MHC-Ⅰ、CC趋化因子受体5(CCR5)、CXC趋化因子受体4 (CXCR4)等的机制,以期加深对Nef蛋白功能的理解,为HIV-1的防治提供新的理论线索.
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高IgM综合征分子及临床特征研究进展
高免疫球蛋白M(HIGM)综合征是一类由抗体类别转换障碍导致的先天性免疫缺陷病,其主要免疫学特征为血清IgM水平升高或正常,IgA、IgE、IgG大多降低或缺如.HIGM综合征患者常表现为中性粒细胞减少、反复细菌感染、恶性肿瘤和自身免疫性疾病等.根据发病机制的不同,可将HIGM综合征分为6类,另有尚未归入分类的由DNA修复异常和减数分裂后分离增强蛋白2(PMS2)缺陷导致的HIGM综合征.本文总结了HIGM综合征的分子及临床特征方面的研究进展.
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流感假病毒技术应用的研究进展
假病毒技术作为一种安全有效的研究手段,在很多病毒的研究,尤其是高致病性病毒如H5N1禽流感病毒的研究中发挥了重要的作用.流感假病毒技术是目前的研究热点,具有生物安全性高、操作简便、稳定性强等优点,被广泛应用于中和抗体检测、流感病毒分子生物学研究、药物研发等领域.现就国内外流感假病毒技术应用方面的研究进展进行综述.
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色氨酸2,3-双加氧酶2的生物学特性及其在免疫调节与肿瘤治疗中的作用
色氨酸经犬尿酸代谢途径分解为一系列具有生物活性的物质,其限速步骤为吲哚环的裂解,三种酶可以参与此反应:色氨酸2,3-双加氧酶(TDO)、吲哚胺2,3-双加氧酶1(IDO1)、IDO2.IDO2是与经典免疫负调控因子IDO1相似的一种蛋白,其基因与IDO1呈头尾串联形式位于同一染色体内,虽然它能分解色氨酸,其酶解效率却明显低于IDO1,并且它的生物学功能还不是非常明了,它不但存在于机体的免疫系统如树突状细胞中,而且存在于多种肿瘤细胞中,与机体免疫及肿瘤密切相关.本文综述了IDO2的基本情况及其与免疫、肿瘤的关系.
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HLA-G调控自然杀伤细胞免疫功能的研究进展
人白细胞抗原G(HLA-G)属于非经典的HLA Ⅰ类分子,正常情况下主要表达于母胎界面绒毛外滋养层细胞.一些肿瘤细胞系、肿瘤组织、感染的组织细胞及正常组织细胞也可检测到HLA-G的表达.自然杀伤(NK)细胞是重要的固有免疫细胞,在免疫应答与免疫调节过程中发挥重要作用.HLA-G参与免疫调控引发了越来越多的关注,其功能由初的“母胎耐受”逐渐扩展到肿瘤免疫逃逸、器官移植耐受等多个方面,本文重点回顾了HLA-G参与调控NK细胞免疫功能的各种机制:通过与受体相互作用抑制NK细胞的杀伤作用、调节NK细胞表面受体及细胞因子的表达、通过胞啃作用(trogocytosis)广泛引发免疫抑制、引发NK细胞凋亡.
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白藜芦醇治疗实验性自身免疫性脑脊髓炎的作用及其机制研究进展
多发性硬化(MS)是一种中枢神经系统脱髓鞘疾病,由于其病因和发病机制未完全明确,目前尚无有效根治方法.白藜芦醇(RE)是葡萄皮坚果中富含的一种多酚类化合物,具有抗真菌、抗癌、抗氧化、抗炎、心血管保护及神经保护等多重生物学功能.RE在治疗自身免疫性疾病中取得了显著疗效,但关于其在MS治疗中的效果目前尚无定论.考虑到RE在免疫调节、神经保护和血管舒张三方面的作用,本文对RE在治疗实验性自身免疫性脑脊髓炎中的作用及机制的相关研究进行综述,并对影响其实验治疗效果的关键因素进行了总结.
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动脉粥样硬化与巨噬细胞源性泡沫细胞的相关研究进展
动脉粥样硬化(AS)是一种由基因、行为、环境等多因素引起的病理症状,可造成血管闭塞,从而引发心肌梗塞、猝死等严重的急性冠状动脉性疾病.巨噬细胞是机体防御系统的重要细胞成分之一,具有内吞脂质、释放免疫介质等能力,与AS的发生发展关系密切.抑制巨噬细胞源性泡沫细胞中脂质聚积、减轻炎症反应可能对AS相关疾病的预防、治疗具有重大意义.本文综述了巨噬细胞及其吞噬氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)转化为泡沫细胞,以及药物对泡沫细胞形成过程的干预,说明巨噬细胞源性泡沫细胞是治疗AS相关疾病的关键.
| 年 | 期数 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2017 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2011 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2010 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2009 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2008 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2007 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2006 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2005 | 01 02 03 04 05 06 z1 |
| 2004 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2003 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2002 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2001 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2000 | 01 02 03 04 05 06 |
| 1999 | 01 02 |
| 1995 | 01 02 03 |
| 1994 | 01 02 |
| 1993 | 01 02 03 04 |
| 1992 | 01 02 03 04 |
| 1991 | 01 02 03 04 |
| 1990 | 01 02 |
| 1989 | 01 02 03 04 |
