细胞与分子免疫学杂志
Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology 세포여분자면역학잡지
- 主管单位： 中国免疫学会；第四军医大学
- 主办单位： 陕西省免疫学会,中国免疫学会
- 影响因子： 0.81
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 1007-8738
- 国内刊号： 61-1304/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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谷胱甘肽转硫酶-血小板因子4融合蛋白表达载体的构建、鉴定与表达
目的构建谷胱甘肽转硫酶-血小板因子4(GST-PF4)融合蛋白表达载体,并研究其编码的蛋白质在大肠杆菌中的表达.方法通过RT-PCR方法,从HL-60细胞中克隆PF4cDNA,然后克隆至载体pUC19中,序列测定后把PF4基因重组入谷胱甘肽转硫酶融合基因表达载体pGEX-4T-3中,并用IPTG诱导其在大肠杆菌中表达.结果获得了PF4cDNA.序列分析表明,该序列与GenBank数据库中的序列一致.重组质粒酶切鉴定表明,PF4基因已正确插入到pGEX-4T-3中.重组融合蛋白表达载体GST-PF4经IPTG诱导表达,在SDS-PAGE后得到1条蛋白表达带,相对分子质量(Mr)约为36000.结论成功地构建融合蛋白表达载体GST-PF4,并在大肠杆菌中获得有效表达,为进一步研究打下良好的基础.
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人sCD40L基因的克隆及表达
目的克隆人sCD40L基因片段,并在原核细胞中表达.方法用RT-PCR技术,从激活的人外周血淋巴细胞总RNA中,扩增CD40L胞外区cDNA,并克隆至载体pGEM-T.测序验证后,转至载体PQE31中,并在大肠杆菌M15中进行表达,后通过亲和层析柱得到纯化蛋白.结果纯化所得的产物经Western blot证实,确为人sCD40L蛋白.结论应用基因重组法构建了人sCD40L基因片段,并在原核细胞内成功地进行了表达,为今后进一步研究CD40L与凋亡、疾病的发病机制及临床治疗奠定了基础.
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人CD81的克隆及在COS-7细胞中的表达
目的从人外周血淋巴细胞中克隆出CD81基因,构建真核表达质粒,并在COS-7细胞中进行表达.方法分离外周血淋巴细胞,提取细胞总RNA,采用RT-PCR扩增CD81基因.将CD81基因克隆至载体pcDNA3.1(+)中,进行酶切及测序鉴定.以质粒pcDNA3.1-CD81转染COS-7细胞进行瞬时表达,并用免疫细胞化学染色法和流式细胞术检测蛋白的表达.结果 RT-PCR产物已插入载体pcDNA3.1(+)构建成真核表达质粒pcDNA3.1-CD81.经双酶切和测序鉴定表明,克隆出的人CD81全长编码序列同GenBank收录的序列一致,并且真核表达质粒的构建正确.以脂质体转染COS-7细胞后,用免疫细胞化学染色法和流式细胞术检测表明,细胞可表达人CD81.结论成功地构建真核表达载体pcDNA3.1-CD81,为进一步研究HCV和CD81的相互作用,以及建立可能的HCV细胞感染模型打下了基础.
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重构型人caspase-8基因的表达及其对HeLa细胞生长的影响
目的克隆人caspase-8催化结构域基因片段,并将其改建成2种大、小亚基基因次序颠倒的重构型人caspase-8基因,转染HeLa细胞,观察重构型人caspase-8基因的表达及其对HeLa细胞生长的影响.方法用RT-PCR法,克隆人caspase-8催化结构域基因片段,经重组PCR改造,构建大、小亚基基因次序颠倒的重构型人caspase-8基因.将其克隆入绿色荧光蛋白(GFP)真核表达载体pIRES2-EGFP,转染HeLa细胞,用荧光显微镜和倒置显微镜镜观察细胞的形态和结构.结果用RT-PCR法,成功地克隆了人caspase-8催化结构域基因片段,构建了3种重构型人caspase-8基因及其真核表达载体.转染HeLa细胞后,重构型人caspase-8基因的表达可导致HeLa细胞死亡.结论重构型人caspase-8基因在HeLa细胞中的表达可以有效地引起HeLa细胞死亡.
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抗人精浆蛋白单抗κ链基因的克隆及其在HeLa细胞的表达
目的获得鼠抗人精浆蛋白单抗(mAb)κ链基因,并将其转染到HeLa细胞进行表达.方法从分泌抗人精浆蛋白mAb的杂交瘤细胞系E4B7中提取总RNA,用RT-PCR法获取κ链cDNA.将其克隆入真核表达载体pcDNA3,用脂质体转染法转染HeLa细胞,并用免疫荧光染色法检测κ链的表达.结果从分泌抗人精浆蛋白的鼠mAb杂交瘤细胞系E4B7中克隆了κ链基因.序列测定表明,Vκ属于鼠免疫球蛋白ⅩⅢ家族.以含κ链基因的真核表达载体pcDNA3-E4B7κ转染HeLa细胞后,在HeLa细胞中检测到了κ链的表达.结论获得了序列正确的κ链基因,并在HeLa细胞中成功地表达,为进一步构建和表达Fab段打下了良好基础.
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重组人骨形成蛋白-2对细胞成骨分化的作用
目的进一步探讨rhBMP-2的促细胞成骨分化作用,以期找到合适的成骨分化标志作为rhBMP-2的定量活性测定指标.方法首先表达制备rhBMP-2,用小鼠股部肌袋包埋法进行诱骨活性实验,然后检测rhBMP-2作用后的骨髓基质细胞(MSC)、NIH3T3和C2C12等3种细胞的碱性磷酸酶(ALP)和骨钙素(OC)、细胞总蛋白合成量以及细胞增殖的变化.结果 rhBMP-2具有良好的诱导骨形成的活性,可增加3种细胞的OC含量和蛋白合成量,对MSC的ALP活性变化影响明显,且可促进MSC的增殖,抑制NIH3T3细胞的生长.结论 rhBMP-2具有促进上述细胞向成骨细胞分化的作用;在一定剂量范围内,rhBMP-2的作用与细胞骨钙素合成量的增加呈线性正相关,故定量测定OC的含量基本可反映rhBMP-2的活性.
关键词： 重组人骨形成蛋白-2 成骨分化 -
人LIGHT基因的克隆及其重组腺病毒载体的构建
目的克隆人LIGHT基因,构建其重组腺病毒载体,以研究LIGHT过表达与腺病毒感染对细胞生长的影响.方法用RT-PCR法从人外周血单个核细胞(PBMC)中克隆人的LIGHT全长基因.将LIGHTcDNA克隆到穿棱载体pAdTrack-CMV-LIGHT重组质粒中,经酶切线性化后,将重组质粒pAdTrack-CMV-LIGHT和骨架质粒pAdEasy-1,以电穿孔法共转染大肠杆菌BJ5183,获得重组腺病毒质粒.后,将线性化的重组腺病毒质粒转染293细胞包装获得重组腺病毒,用荧光显微镜、PCR及Western blot分析LIGHT基因的表达. 结果用RT-PCR法从人的PBMC中,扩增出723bp的cDNA,测序证实为人LIGHT基因.荧光显微镜、PCR及Westernblot证实,LIGHT重组腺病毒可感染293细胞,并在293细胞内进行有效的复制.结论成功地克隆了人LIGHT基因,并构建了其重组腺病毒载体,为进一步研究LIGHT基因的功能提供了条件.
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ConA对巨噬细胞活性的影响
目的探讨ConA对巨噬细胞(Mφ)活性的影响.方法以不同剂量的ConA腹腔注射处理小鼠,48h后收集腹腔Mφ做体外培养.分别以扫描及透射电镜观察Mφ的形态变化.分别以MTT比色法和胸腺细胞增殖试验检测Mφ分泌TNF-α和IL-1β的水平,并用免疫细胞化学染色法检测这两种蛋白的表达强度.结果 ConA作用后的Mφ,表现为体积增大、指状突起增加和胞浆内线粒体等细胞器增加.ConA活化的腹腔Mφ分泌TNF-α和IL-1β的水平增加,其在Mφ胞浆内的表达增强.结论 ConA具有激活Mφ增强其产生TNF-α和IL-1β的作用.
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超抗原SEB在同种异体细胞移植小鼠中诱导的免疫耐受及其特征
目的探讨超抗原葡萄球菌肠毒素B(SEB)体内诱导的免疫耐受性及其特征.方法 采用MHC不同的两种小鼠进行淋巴细胞移植.用流式细胞术和混合淋巴细胞培养技术,检测受体鼠T 细胞亚群的变化,供体鼠H-2Kd分子在受体鼠体内表达的阳性率与免疫应答性.结果 (1)注射SEB可选择性地降低CD4+T细胞和CD4+T/H-2Kb+细胞的百分率,而不影响CD8+T细胞的数量.在SEB注射的21 d,抑制作用强,其对CD4+T细胞和CD4+T/H-2Kb+细胞的抑制率分别是6.24%和23.38%.(2)在进行异源性MHC淋巴细胞移植时注射SEB,于移植细胞后21d, 受体小鼠肝脏淋巴细胞上开始表达供体小鼠H-2Kd分子,至移植后40d,表达率达到高峰7.90%.与此同时,受体鼠外周淋巴细胞对供体鼠淋巴细胞的免疫应答能力也明显降低.结论 SEB能诱导小鼠产生免疫耐受,免疫耐受的形成与受体鼠体内CD4+T细胞克隆的明显减少有关.
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TRAIL受体在肿瘤细胞系上的表达及意义
目的检测TNF相关凋亡诱导配体(TRAIL)的受体,在来源于血液系统、肝脏、肺脏和大肠的8个肿瘤细胞系中的表达,并探讨其意义.方法采用半定量RT-PCR,对TRAIL受体的表达进行半定量检测.结果 TRAIL凋亡通路中,能够诱导凋亡反应的死亡受体DR4和DR5,在所检测的肿瘤细胞系中都有表达,其中DR5在所有肿瘤细胞系中的表达水平均显著高于DR4(P<0.05).而能够竞争性阻断TRAIL诱导的凋亡反应的诱骗受体DcR1和DcR2,在所有的肿瘤细胞中都呈低水平表达或不表达.结论 DR5可能在TRAIL诱导凋亡的通路中发挥重要的作用.TRAIL死亡受体和诱骗受体在肿瘤细胞系中的表达具有差异性,这种差异性可在一定程度上解释不同细胞对TRAIL诱导凋亡的敏感度.
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人颗粒酶B融合蛋白对转染的HeLa细胞的作用
目的观察颗粒酶B(granzyme B)融合蛋白对转染的HeLa细胞的作用. 方法用RT-PCR法获取人granzymeB全长cDNA,经重组PCR将活性型序列的5′端与一段PE转膜肽序列融合.将所获重组基因克隆入绿色荧光蛋白(GFP)共表达载体pIRES2-EGFP,转染HeLa细胞.用免疫组化染色法检测目的蛋白的表达,荧光显微镜和电镜观察转染细胞的形态和结构.结果成功地获得了野生型granzyme BcDNA及其融合蛋白基因,并构建了融合蛋白基因与GFP基因共表达的真核载体.转染HeLa细胞后,检测到目的蛋白的表达.荧光显微镜观察转染细胞有两种变化:一种表现为体积增大并常伴随多核现象;另一种出现细胞质和细胞核的固缩.电镜观察显示,多核巨细胞生长状态良好,固缩的小细胞则呈现凋亡的典型特征.结论 granzymeB融合蛋白在HeLa细胞中异位表达,可使转染细胞的形态发生变化,出现多核的大细胞和核固缩的小细胞.
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表达胃癌MG7-Ag模拟表位的减毒鼠伤寒杆菌疫苗的研制和初步鉴定
目的研制可表达胃癌MG7-Ag模拟表位的减毒鼠伤寒杆菌疫苗. 方法将NcoⅠ位点和MG7-Ag模拟表位编码序列的互补序列设计到上游引物的5′端.以含有HBcAg全序列的质粒p1.2Ⅱ为模板,通过PCR扩增,获得MG7-Ag模拟表位与HBcAg的融合基因.将目的基因插入载体pUCm-T,经酶切鉴定和序列测定证实后,再亚克隆至与减毒鼠伤寒杆菌X4550互补的质粒pYA3341中,再以此重组质粒转化减毒鼠伤寒杆菌X4550.结果序列测定证实,PCR产物为胃癌MG7-Ag模拟表位与HBcAg的融合基因片段;终得到含有目的基因片段的重组表达载体pYA3341.重组质粒在X4550中的表达产物,经Western blot表明,在相对分子质量(Mr)约在22 000处有1条可与抗MG7mAb特异性结合的多肽表位.结论成功地研制可表达胃癌MG7-Ag模拟表位减毒鼠伤寒杆菌疫苗,为进一步研究其在胃癌免疫治疗中的作用奠定了基础.
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非小细胞肺癌患者高温射频治疗前、后免疫功能的变化
目的研究非小细胞肺癌(NSCLC)患者高温射频(RFA)治疗前、后机体免疫功能的变化.方法 CT引导下经皮肺穿刺可伸展锚状电极配合RF-2000射频治疗仪高温射频消融,治疗NSCLC患者30例.采用流式细胞术及双抗体夹心法,检测治疗前、后外周血T细胞亚群(CD3+、CD4+、CD8+)、NK细胞的百分率及sIL-2R含量的变化.采用LDH释放法检测NK细胞的杀伤活性.结果治疗前NSCLC患者外周血中CD3+、CD4+细胞的百分率及CD4+/ CD8+细胞的比值降低,NK细胞的百分率和NK细胞杀伤活性亦降低,与对照组相比较差异显著(P<0.01).CD8+细胞的百分率及sIL-2R含量明显高于正常对照组(P<0.01),提示患者处于免疫抑制状态.治疗后免疫抑制减轻,CD3+、CD4+、NK细胞的百分率及CD4+/CD8+细胞的比值明显升高,NK细胞杀伤活性也升高,而CD8+细胞的百分率及sIL-2R的含量明显降低,治疗前、后相比较差别明显(P<0.01).结论锚状电极高温射频消融具有免疫激活作用,可使机体的免疫功能得到一定程度的改善.
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新型基因工程人肿瘤坏死因子-α的临床前研究
目的研究一种新型基因工程人肿瘤坏死因子-α(nrhTNF-α)的临床前药理、毒理和药代动力学特性.方法观察nrhTNF-α对动物移植性肿瘤的抑制作用、毒副作用(如急性中毒反应和死亡情况,过敏反应,以及对神经系统、呼吸系统、心血管系统、造血系统和免疫系统的影响)及药代动力学变化.结果 nrhTNF-α具有明显的抑瘤作用且呈剂量依赖性.对动物的急性中毒表现及病理变化与rhTNF-α相似,未见其他不良反应.结论 nrhTNF-α的抑瘤作用明显,毒副反应低,具有良好的临床应用前景.
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Sertoli细胞FasL 和TGF-β mRNA表达在感染时的免疫调节作用
目的研究大鼠Sertoli细胞在睾丸局部感染时的免疫调节作用.方法以解脲脲原体(UU)和致病性大肠杆菌,直接注入大鼠膀胱模拟上行性感染的途径,分别在感染后1、2 、3 wk处死大鼠,从大鼠睾丸组织中分离获得高纯度的Sertoli细胞.然后抽提总RNA, 用RT-PCR法比较正常组与UU感染组、致病性大肠杆菌感染组之间FasL mRNA和TGF-βmRNA表达的差异性.结果与正常组相比较在UU感染后,1～3 wk FasL mRNA 的表达均升高;TGF-β mRNA的表达在1、2wk时升高,3 wk时下降;而致病性大肠杆菌感染后,FasL mRNA 和TGF-β mRNA的表达在1-3 wk时均升高. 结论大鼠Sertoli细胞在抗感染免疫中,可通过FasL mRNA和TGF-βmRNA表达的变化,调节睾丸局部的免疫功能及有助于睾丸免疫豁免的维持.
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逆转录病毒载体介导IL-2基因转染人肝细胞的建立及其部分生物学性状
目的建立hIL-2基因修饰的人肝细胞株并探讨对其生物学活性的影响. 方法应用重组逆转录病毒载体pLNCIL-2,将hIL-2基因导入人肝细胞系L-02,观察其形态及克隆形成率的变化,检测细胞培养上清中hIL-2的含量,以及进行转染细胞基因组DNANeoR基因片段的PCR扩增.结果 L-02/IL-2细胞的增殖速度和克隆形成率低于L-02/Neo细胞和L-02细胞.L-02/IL-2细胞的培养液中hIL-2的含量达32000 pg/106cells*d,并可持续表达10wk以上.从L-02/IL-2细胞和L-02/Neo细胞基因组DNA中,均扩增到NeoR基因片段(790bp).结论应用重组逆转录病毒载体成功地建立了L-02/IL-2细胞株,为进一步进行肝细胞移植动物实验奠定了基础.
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风湿性关节炎患者T细胞表达CCR5和CXCR3的三色流式细胞分析
目的在单细胞水平上,研究类风湿性关节炎(RA)患者滑液及外周血中T淋巴细胞上CCR5及CXCR3的表达,并结合临床资料分析其在RA发病中的可能作用机制及临床应用.方法分离15例RA患者的滑液单个核细胞(SFMC)、外周血单个核细胞(PBMC),及15正常人PBMC(对照),以三色荧光素标记物进行流式细胞术分析T细胞上CCR5及CXCR3的表达.结果与PBMC相比较,RA患者SFMC中T细胞上CCR5及CXCR3的表达显著增高(特别是CCR5);而CXCR3的表达个体差异较大;与正常人相比较,RA患者初发或活动期未治时,PBMC中CCR5及CXCR3的表达明显增多. CCR5及CXCR3的表达率与患者的ESR及CRP相关.结论 CCR5+T细胞积聚在RA患者的病变关节内,且与RA的病情密切相关.
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抗BrdU单克隆抗体在凋亡细胞检测中的应用研究
目的探讨将自制的抗BrdU单克隆抗体(mAb)用于TUNEL法检测凋亡细胞的可能性.方法分别用TUNEL免疫荧光法和免疫组化技术,检测地塞米松诱导的凋亡胸腺细胞和射线照射的大鼠皮肤组织中的凋亡细胞.结果用TUNEL免疫荧光法和TUNEL免疫组化法法检测发现,凋亡细胞的细胞核分别呈明显的荧光或酶底物着色,而非凋亡细胞不显示荧光或无酶底物着色.结论该抗BrdUmAb用于TUNEL法,能够检测单个细胞标本或组织切片中的凋亡细胞,为国内开展凋亡细胞的检测,提供了一种新的方法.
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抗人NGF单克隆抗体的制备及初步鉴定
神经营养因子( neurotrophic factors,NTFs)是一类对中枢和外周神经系统均有营养活性的蛋白质,其主要功能是促进神经系统的发育,保护并修复受损神经元,以及促进生长和增进认知记忆过程中神经元之间的连结[1].神经生长因子(nerve growth factor,NGF)是发现早、研究多的一种NTF.制备抗NGF单克隆抗体(mAb)可为研究其在体内组织中表达及分布提供一种工具,并可为基因工程制备NGF提供检测方法.我们受澳大利亚Flinder大学周兴福教授委托,研究制备了分泌抗NGF mAb细胞株并对其进行了初步鉴定.
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抗人白细胞单克隆抗体的特异性及其特性鉴定
目的制备抗人白细胞单克隆抗体(mAb),并对其识别抗原及组织的特异性进行鉴定.方法采用分离的人全白细胞悬液免疫Balb/c小鼠,取脾细胞与Sp2/0细胞常规融合,用间接ELISA筛选mAb,流式细胞仪及免疫组化染色SP法鉴定其组织特异性. 结果成功地制备1株抗人白细胞 mAb,命名为SZ-105.ELISA法测定其腹水效价为1×10-5.琼脂糖双扩散鉴定为IgG1类.流式细胞仪间接免疫荧光技术及免疫组化SP法测定表明,mAbSZ-105可选择性地与外周血液的粒细胞、单核细胞和淋巴细胞呈强阳性反应,而与红细胞及血小板不出现反应.该mAb还可与正常人骨髓的白细胞前体起反应.另外,在肝、肺、脾、胸腺及淋巴结正常组织中的巨噬细胞表面,也有SZ-105抗原表达.SZ-105抗原经亲和层析纯化,再经SDS-PAGE和Western blot证实,mAb SZ-105识别的抗原是相对分子质量(Mr)为75 000左右的单链蛋白多肽. 结论获得1株具有高度免疫学活性和组织特异性的抗人白细胞mAbSZ-105,其对研究白细胞的分化、免疫功能,以及隐匿性急、慢性炎症疾病的放免显像诊断都具有一定的临床意义.
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抗人骨肉瘤单克隆抗体5D3的特异性鉴定
目的鉴定抗人骨肉瘤单克隆抗体(mAb) 5D3的特异性.方法用免疫组化染色法检测mAb 5D3与骨肉瘤细胞系、骨肉瘤组织、其它肿瘤组织及正常组织的反应性.结果免疫组化染色检测发现,mAb5D3相应抗原在部分骨源性肿瘤,特别是骨肉瘤组织及骨肉瘤细胞系呈高度表达,中度以上染色者占阳性总数的77%以上,主要分布于细胞核上.14种正常组织中未见阳性反应.结论 mAb5D3具有高度特异性,为骨肉瘤的早期诊断及免疫治疗提供了可能性.
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抗人粘膜地址素-1单克隆抗体的制备与初步鉴定
目的制备抗人MAdCAM-1单克隆抗体(mAb).方法以重组人MAdCAM-1胞外区蛋白免疫Balb/c小鼠,采用杂交瘤技术制备mAb.结果获得10株可分泌特异性mAb的杂交瘤细胞,其腹水mAb的效价为3.2×105～1.9×106,mAb的Ig亚类均为IgG1,其中,8株mAb的轻链属κ型,2株为λ型.应用于免疫组化染色法,检测表明,正常成人小肠、附睾及前列腺组织中存在MAdCAM-1阳性表达的血管内皮细胞.结论成功地研制出抗人MAdCAM-1的mAb,为进一步研究MAdCAM-1在肠道黏膜免疫中的作用提供了有用的试剂.
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一株抗人血小板第4因子单克隆抗体(SZ-95)的特异性鉴定
目的研究一株新制备的抗人血小板第4因子(PF4)单克隆抗体(mAb)SZ-95的抗原表位和对PF4结合肝素功能的影响.方法通过间接ELISA、Western blot以及肝素-PF4复合物ELISA研究SZ-95所识别的抗原决定簇和其对PF4生物学功能的影响.结果这株特异性识别人PF4的mAb不识别与PF4高度同源的β-血小板球蛋白(β-TG),以及包括PF4分子中部大部分β折叠的合成多肽(P34-58).并且,抗体结合肝素-PF4复合物的数量随复合物中的肝素量增加而减少.结论我们推测SZ-95识别的抗原表位可能位于人PF4N末端的可变区域或者C末端α螺旋.并且mAb结合肝素-PF4复合物的肝素剂量依赖性改变,说明SZ-95识别的抗原表位与肝素与PF4的结合位点有关,可能影响PF4中和肝素的功能,有助于PF4结构和功能的进一步研究.
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抗Doppel蛋白(叠朊蛋白)单克隆抗体细胞系的建立及其初步鉴定
鼠Doppel蛋白(叠朊蛋白)是一种新发现的朊蛋白样糖蛋白(PrP-like protein),糖基化前的分子质量(Mr)约为15000,在幼年动物的小脑与成年动物的睾丸和心脏有高水平的表达,其编码基因(Prnd)位于相应朊蛋白基因(Prnp)下游16 kb处(人的则在下游27kb处),与Prnp编码蛋白PrP的C端2/3序列有24%的同源性,共编码179个氨基酸[1],含2个糖基化位点,并由糖基磷脂酰肌醇(GPI)锚定于细胞膜表面[2].虽然Doppel蛋白的功能目前尚不十分清楚,但已可以肯定它与朊蛋白疾病(传染性海绵状脑病,TSE)的发生有密切关系[3].由于目前实验中采用的是兔抗Doppel蛋白多克隆抗体,使研究工作受到很大影响,为此,我们采用杂交瘤技术,制备了抗Doppel蛋白的单克隆抗体(mAb),以期为Doppel蛋白的研究工作提供更有力的研究工具.
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细胞间粘附分子-1和血管细胞间粘附分子-1的结构与功能
细胞粘附分子(cell adhesion molecule, CAM)是一类调节细胞与细胞、细胞与细胞外基质(extracellular matrix, ECM)间相互结合、起粘附作用的膜表面糖蛋白.细胞间粘附分子-1(intercellular adhesion molecular-1, ICAM-1)和血管细胞间粘附分子-1(vascular cell adhesion molecular-1, VCAM-1)均属于CAM中免疫球蛋白超家族(immunoglobulin superfamily, IGSF)中的成员,是目前研究多的粘附分子.本文拟就目前有关这两种粘附分子的结构及功能的研究进展作一综述.
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MHC-I 类抗原产生系统─免疫性多功能蛋白酶体
适应性免疫系统的标志是快速而有效地识别"自我"与"非我"成分,从而选择性地消除"非我"成分.在该系统中,表达抗原特异性受体的T细胞起着中心作用.但T细胞受体(TCR)只能识别结合到MHC(Majorhistocompatibility complex,主要组织相容性复合物)分子上的多肽片段(抗原性肽),即MHC-Ⅰ类分子将来源于胞内蛋白的肽提呈给CTL(细胞毒性T淋巴细胞),而 MHC-Ⅱ类分子则将产生于核小体的肽提呈给辅助性T细细胞.
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诱导特异性CTL为基础的EBV相关肿瘤免疫治疗策略
pstein-Barr病毒(EBV)属于γ-疱疹病毒家族,在人群中感染非常普遍,在体内以潜伏和增殖状态存在.它是传染性单核细胞增多症(IM)的病原,同时也能引起B淋巴细胞增生性疾病.EBV也是重要的肿瘤DNA病毒,目前发现其与非洲儿童Burkitt's淋巴瘤(BL)和鼻咽癌(NPC)、何杰金氏淋巴瘤(HD)、成人T细胞淋巴瘤及各种免疫抑制剂治疗病人和器官移植病人的淋巴细胞增生紊乱引起的淋巴瘤等密切相关.EBV感染在体内能激发强烈的特异性杀伤性T细胞(CTL),其能控制病毒的潜伏、增殖、维持及转化.大量研究表明,EBV相关肿瘤患者体内也存在着一定的EBV特异性CTL前体细胞,用各种方式激发这些前体细胞并扩增回输体内,能达到免疫治疗的目的.本文将以诱导特异性CTL为基础的EBV相关肿瘤免疫治疗的研究进展综述如下.
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VC、VE对家兔辐射致血液几种免疫细胞损伤的影响及剂量效应关系
目的探讨 60Co 辐射家兔造成外周血免疫系统损伤后维生素C(Vc)和维生素E(VE)对外周血中淋巴细胞、粒细胞、单核细胞的影响及剂量效应关系.方法以健康家兔随机分为11组,每组6只,分别为:阴性组、阳性组、Vc实验组和VE实验组.阴性组与阳性组分别灌胃花生油,静脉注射生理盐水,Vc通过静脉注射给药,VE为灌胃法给药.Vc的剂量组为:10 mg*kg-1,20 mg*kg-1,Vc 40 mg*kg-1,Vc 80 mg*kg-1;VE 的剂量组为:5 mg*kg-1,10 mg*kg-1,20 mg*kg-1,40 mg*kg-1,80 mg*kg-1.Vc,VE 连续给药5d.于试验第3 d阳性组及各Vc、VE给药组的家兔进行4.5 Gry的60Co照射,试验第5d家兔麻醉后剖腹取腹腔静脉血,分别测定外周血几种免疫细胞数量变化.结果未经任何保护阳性组的淋巴细胞(LYM)高于阴性组的百分数量(P<0.05),Vc和VE给药各组的LYM均低于阳性组.经辐射作用后LYM数量随Vc剂量增加呈现轻微下降趋势,单核细胞(MON)数量无明显变化,而粒细胞(GRA)数量随Vc剂量增加呈现一定的上升趋势后,又呈现下降趋势.经辐射作用后LYM数量随VE剂量增加则明显下降,MON数量无明显变化,GRA数量也随VE 剂量增加先升高后逐渐下降趋势.结论辐射可以造成外周血免疫细胞淋巴细胞、粒细胞、单核细胞的严重损伤,单独使用维生素E和维生素C,保护作用不明显,但在一定剂量范围内对淋巴细胞有保护作用.提示应用抗氧化复合链和抗氧化网络研究辐射的自由基损伤具有重要意义.
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双抗体夹心ELISA定量检测内毒素的方法学研究
目的建立检测细菌内毒素(endotoxin, ET)的双抗体夹心ELISA法.方法用自制的抗LPS-mAb C3A2和H3D3,分别作为包被和酶标记mAb,建立双抗体夹心ELISA法,并进行了实验条件的选择.然后用优化后的双抗夹心法对检测LPS的敏感性、特异性、重复性和回收率进行鉴定试验,并与鲎试验定量仪器比浊法和鲎试验定性法进行比较.结果双抗体夹心法检测LPS的敏感性为50 ng/L,特异性与准确性均高于仪器比浊法和鲎试验定性法,回收率是86.7%～97.4%,CV值为0.62%～4.8%.结论建立的双抗夹心法,检测LPS的敏感性、准确性和特异性均较良好,为临床诊治内毒素血症提供了一种简便快速准确特异的实验工具.
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慢性乙型肝炎患者血清HBV DNA水平与重组IFNα-1b疗效的关系
为提高α干扰素的抗病毒疗效,我们于1997年1月～2001年3月,应用重组干扰素α1b(rIFNα1b,深圳科兴生物公司生产)治疗慢性乙型病毒性肝炎125例,并随访1年,探讨了血清HBV DNA水平与rIFNα-1b疗效的关系.
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9.1C3对CD2和CD3诱导的杀伤作用的影响及其机制探讨
目的探讨9.1C3分子对CD2和CD3诱导的PBMC杀伤作用的影响及其作用机制.方法以活化PBMC为效应细胞,采用重导向杀伤实验(redirected cytotoxicity assay,RCA),观察9.1C3对CD2、CD3介导效应细胞杀伤P815细胞作用的影响.以Jurkat细胞为模型,用相应的抗体刺激细胞,通过荧光分光光度计,测定9.1C3对CD2、CD3诱导i升高的影响.结果 9.1C3 mAb能显著抑制CD2 mAb介导活化PBMC对P815细胞的杀伤作用,但对CD3 mAb介导杀伤的抑制作用较弱.以Jurkat细胞为模型,发现CD2 mAb经羊抗鼠Ig(goat anti mouse Ig, GAM Ig)交联后能诱导i的升高,当同时加入9.1C3 mAb时,i的升高受到抑制;CD3 mAb在没有GAM Ig交联时即能引起i的升高,而9.1C3 mAb对CD3 mAb诱导i的升高有赖于GAM Ig的交联.结论 9.1C3分子对CD2和CD3介导的杀伤的抑制程度不同.抑制杀伤细胞脱颗粒依赖的i升高可能是9.1C3分子抑制活化型受体CD2介导细胞毒作用的作用机制之一.
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用于筛选人IL-6受体拮抗剂生物学活性的M1细胞模型的建立
目的建立用于筛选人IL-6受体拮抗剂的M1细胞模型,并在该细胞模型上筛选具有人IL-6受体拮抗活性的化合物.方法用反转录PCR,检测M1细胞系上IL-6Rα/gp130 mRNA的表达情况,然后应用MTT比色法检测在体外液体培养中,M1细胞对rhIL-6的反应性和多种小分子化合物对rhIL-6的拮抗活性. 结果 M1细胞有高丰度的IL-6Rα/gp130 mRNA表达;并对rhIL-6具有较为灵敏的反应性;经对113个化合物的筛选,发现两个化合物能部分地拮抗人IL-6受体的生物学活性. 结论以M1细胞作为筛选人IL-6受体拮抗剂的细胞模型,筛选出具有一定人IL-6受体拮抗活性的两个化合物.
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大鼠急性肺损伤时外周血和肺灌洗液中几种炎症介质浓度的动态变化
体外研究表明,肿瘤坏死因子(TNF)[1-2]、白细胞介素1β(IL-1β)[3]、白细胞介素6(IL-6)[4]、粒细胞-巨嗜细胞集落刺激因子(GM-CSF)[5]、粒细胞集落刺激因子(G-CSF)[6]等炎性细胞因子,可延迟中性粒细胞(PMN)凋亡.本实验着重研究肺灌洗液和循环血中TNF、IL-1β和IL-6含量的变化,以及内源性抗炎因子-可溶性肿瘤坏死因子受体Ⅰ、Ⅱ(sTNFRⅠ、Ⅱ)的动态变化及规律,以探索上述细胞因子浓度的变化与PMN凋亡、过度炎症反应、继发性肺组织损伤之间的内在关系.
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人THANK基因真核表达载体的构建及其在人胚肾细胞中的表达
THANK(TNF homologue that activates apoptosis, NF-κB and JNK)[1]是1999年发现的肿瘤坏死因子超家族中的第13个成员,TNFSF13B,又称为BAFF[2,3](B cell activating factor belonging to the TNF family)、TALL-1[4]( TNF- and APOL-related leukocyte expressed ligand 1)和Blys[5]( B lymphocytestimulator).THANK具有TNF的全部活性,能抑制多种肿瘤细胞的生长,引起细胞凋亡;用其蛋白作用于人白血病U937 细胞能激活NF-κB及JNK的表达[1];且可共刺激B细胞的生长,如转入THANK基因的小鼠,可显著增加其体内成熟B细胞、脾脏和淋巴结中CD4+和CD8+效应T细胞的数量,并诱导免疫球蛋白分泌[3,6].近的研究发现,THANK通过其两个受体-TACI ( transmembrane activator 和 CAML- interactor)与BCMA( B cell maturation antigen)对体液免疫起重要的调节作用[7 11] ,而其对细胞免疫的调节还在深入的研究中.为探讨THANK的功能,我们在THANK基因克隆的基础上,构建了THANK基因真核表达载体,建立了稳定表达THANK蛋白的细胞株,并检测了表达蛋白的活性.
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乳腺癌患者NO、TNF-α水平的检测及临床意义
NO是由机体内多种细胞产生的一种多功能介质,作为内皮源性舒张因子及神经递质参与免疫防御、炎症和免疫介导的组织损伤.NO也是一种重要的生物信使,在抗肿瘤免疫及促肿瘤生长转移等方面具有双重作用[1].TNF-α主要由单核-巨噬细胞和内皮细胞产生,具有多种生物学活性.我们对47例乳腺癌患者血中NO和TNF-α的水平进行了检测及分析,旨在探讨其水平变化的特点及临床意义.
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人骨形态发生蛋白- 4cDNA的克隆和序列测定
骨形态发生蛋白(bone morphogenetic protein,BMP)是由Urist[1]在1965年对脱钙骨基质的成骨研究中发现的.他们将脱钙骨基质移植于动物的皮下和肌肉内,可诱导软骨化骨,随后从骨中分离出了一种小分子的糖蛋白,这种糖蛋白可诱导异位宿主区间充质细胞向成骨和成软骨细胞的方向分化.BMP在组织中含量甚微,每1 000 g皮质骨仅含1～2μg[2],因而利用基因工程生产重组BMP成为必须.赵明[4]、崔有宏[5]和刘礼初[6]均在大肠杆菌中表达有活性的BMP,但多为人BMP-2成熟肽的不同长短的片段,尚未见有克隆BMP-4基因的报道,所以,本实验研究利用RT-PCR技术,从成熟人的胎盘组织中扩增出长0.34kb编码人胎盘BMP-4短肽的基因序列,为进一步在大肠杆菌中表达打下了基础.
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人白细胞介素18 cDNA的克隆和在大肠杆菌中的表达
血管生长素angiogenin, ANG)是一种能有效促进新生血管形成的刺激因子[1],在新生血管的形成过程中发挥着重要的作用.而新生血管的形成又是体内实体瘤生长和转移必不可少的重要环节.已有大量研究表明,ANG与肿瘤的快速生长和转移具有密切的关系[2].因此,通过检测体内ANG 的水平变化,有望对相关肿瘤的发生和发展提供有效的实验依据.
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肿瘤患者血清血管生长素水平变化的初步研究
血管生长素angiogenin, ANG)是一种能有效促进新生血管形成的刺激因子[1],在新生血管的形成过程中发挥着重要的作用.而新生血管的形成又是体内实体瘤生长和转移必不可少的重要环节.已有大量研究表明,ANG与肿瘤的快速生长和转移具有密切的关系[2].因此,通过检测体内ANG 的水平变化,有望对相关肿瘤的发生和发展提供有效的实验依据.
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SLE及RA患者的红细胞免疫功能
红细胞表面具有1型补体受体(CR1)、Ⅲ型补体受体CR3、CD58、CD59、IL-8受体和SOD酶等.人类红细胞膜上的CR1为糖肽,其主要配体是C3b、C4b、iC3b和iC4b.C3b受体具有免疫粘附功能.人体清除循环免疫复合物(CIC)的功能主要是红细胞,其清除作用较具有免疫和防御机能的白细胞高500～1000倍.因此,红细胞免疫粘附(RCIA)功能的变化与疾病的关系日益受到重视.我们采用酵母菌花环试验,测定了27例SLE和31例RA患者外周血RBC-C3bR花环率及RBC-ICR花环率,以探讨SLE和RA患者RCIA功能变化的意义.
| 年 | 期数 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2017 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2011 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2010 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2009 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2008 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2007 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2006 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2005 | 01 02 03 04 05 06 z1 |
| 2004 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2003 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2002 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2001 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2000 | 01 02 03 04 05 06 |
| 1999 | 01 02 |
| 1995 | 01 02 03 |
| 1994 | 01 02 |
| 1993 | 01 02 03 04 |
| 1992 | 01 02 03 04 |
| 1991 | 01 02 03 04 |
| 1990 | 01 02 |
| 1989 | 01 02 03 04 |
