细胞与分子免疫学杂志
Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology 세포여분자면역학잡지
- 主管单位： 中国免疫学会；第四军医大学
- 主办单位： 陕西省免疫学会,中国免疫学会
- 影响因子： 0.81
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 1007-8738
- 国内刊号： 61-1304/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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人骨髓MSC对PHA活化T细胞周期以及表型和细胞因子分泌的影响
目的:研究人骨髓间充质干细胞(MSC)对T细胞周期和活化的影响,探讨MSC对T细胞增殖抑制的作用机制.方法:Ficoll密度梯度离心法分离纯化人骨髓MSC,体外扩增培养3代后用于实验.应用流式细胞术分析MSC对PHA作用下T细胞周期和早期表型CD25、CD69表达的影响,ELISA法检测细胞因子水平.结果:人骨髓MSC体外可使PHA刺激下的T细胞滞留于细胞周期的G0/G1期,下调活化T细胞早期表型CD25、CD69的表达,抑制IL-2、IFN-r的分泌.结论:人骨髓MSC体外可通过对T细胞周期的影响抑制其活化和增殖.
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针对HLA-G的siRNA的载体构建与表达及效应检测
目的:构建针对HLA-G的siRNA的表达载体,研究其对NK细胞杀伤效应的影响.方法:构建针对HLA-G的siRNA真核表达质粒pSuppressor-U6-neo-HLA-G,转染JEG-3滋养细胞系.采用RT-PCR、Western blot检测转染的JEG-3细胞中HLA-G的表达水平.将NK-92MI细胞(效应细胞)与滋养细胞(靶细胞)共同培养,以LDH释放法观察不同效靶比例时NK-92MI细胞对靶细胞的杀伤效应.结果:NK-92MI细胞对转染针对HLA-G的siRNA的JEG-3细胞的杀伤作用较未转染细胞明显升高(P＜0.001).结论:针对HLA-G的SiRNA增加NK细胞对滋养细胞的杀伤,HLA-G具有保护滋养细胞免受NK细胞杀伤的作用.
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猪链球菌2型05ZYH33强毒株srt同源序列及srtA原核表达抗原性的分析
目的:阐明猪链球菌(S.suis)2型人源强毒力株05ZYH33基因组中srt的数量和分布,原核表达srtA,并分析表达产物的抗原性.方法:借助生物信息学软件对05ZYH33基因组中Sortase及其相关家族蛋白进行同源性分析,克隆srtA基因,表达的重组蛋白用Western blot检测其抗原活性,制备Sortase鼠多抗血清,间接ELISA检测鼠多抗血清的滴度.结果:通过系统的搜索和分析,发现05ZYH33基因组中含有6个Sortase的同源性序列,其中SrtA及Sortase-like归属sortase家族中的A组,SrtBCD和SrtE属B组.srtA基因在原核细胞中得到高效表达,表达产物可与S.suis 2型的兔多抗血清发生特异性的反应.以重组蛋白为免疫原制备的多抗血清效价达1:6 400.结论:我国S.suis 2型强毒力株05ZYH33含有6个srt基因,与国外报道相比新发现一个sortase-like基因.srtA基因可在原核系统高效表达,重组蛋白具有良好的抗原活性,为进一步研究Sortase功能奠定了基础.
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湖北白猪CD154基因的克隆及表达
目的:克隆湖北白猪CD154基因,并在大肠杆菌及HeLa细胞中表达.方法:利用RT-PCR方法从湖北白猪外周血单核细胞中扩增出猪CD154基因的完整编码区,进一步PCR扩增获得缺失信号肽、跨膜区的截短型CD154,将其克隆至原核表达载体pQE-80L的6×His下游,获得原核表达质粒pQE-tCD154,转化大肠杆菌DH5α进行诱导表达.同时,将完整CD154基因克隆至真核表达载体pEGFP-C1的EGFP基因下游,获得融合蛋白表达质粒pEGFP-C1-CD154,转染HeLa细胞进行表达.结果:原核表达质粒pQE-tCD154,转化大肠杆菌DH5α诱导表达出相对分子量(Mr)为29 000的融合表达蛋白6×His-tCD154,Western blot分析证实表达的融合蛋白能与抗6×His的单克隆抗体(mAb)发生特异性反应.融合蛋白表达质粒pEGFP-C1-CD154,转染HeLa细胞,荧光显微镜观察到EGFP-CD154融合蛋白的表达主要定位于细胞膜.结论:成功地克隆并表达了猪CD154基因.
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人杀菌/通透性增强蛋白活性片段基因在CHO细胞中的表达
目的:获得人杀菌/通透性增强蛋白(bactericidal/permeability-increasing protein,BPI)N端活性片段蛋白,为BPI 结构和功能的研究提供有力的工具.方法:提取人外周血多形核白细胞(PMN)总RNA进行逆转录反应,经套式PCR扩增出BPI N端基因片段,将其克隆入pUC19载体中并进行酶切鉴定和序列测定,然后亚克隆入质粒pcDNA3构建真核表达载体pcDNA-BPI;重组载体通过脂质体转染CHO细胞并筛选阳性克隆,免疫荧光法鉴定重组BPI的表达和免疫学活性.结果:酶切鉴定和序列分析证实重组质粒含有包括信号肽在内的BPI活性片段编码序列,与文献报道的序列相比,有6个核苷酸差异.转染筛选的阳性CHO细胞克隆表达产物能够被抗BPI的单克隆抗体所识别.结论:BPI活性片段表达载体的构建及真核表达成功,为BPI功能的研究奠定了基础.
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全长hlrp分子在多种细胞系中的表达及其分析
目的:克隆分析全长hlrp基因,观察分析hlrp蛋白在不同细胞的表达情况并进行相对定量.方法:以LPS刺激HEK293细胞,利用RT-PCR方法,克隆得到全长hlrp分子.用生物信息学进行hlrp分子染色体定位和蛋白功能位点分析.采用免疫荧光细胞化学染色,在激光扫描共聚焦显微镜下观察hlrp蛋白在不同培养组织系HepG2、HeLa、PDC和HEK293中的表达情况.利用实时定量RT-PCR方法,量化比较hlrp基因在不同细胞系中的表达.结果:克隆得到全长为2 045 bp的hlrp分子.该分子染色体定位在Xp22.2.蛋白功能位点分析表明该分子包含2个相互重叠的亮氨酸拉链结构.运用激光扫描共聚焦显微镜可以观察到hlrp蛋白在所用细胞系中均有表达.实时定量RT-PCR结果表明,hlrp分子在HEK293细胞株和PDC细胞株中高表达,并且在PDC细胞株表达高于HEK293细胞株.在HepG2细胞株和HeLa细胞株未见表达.结论:克隆分析全长hlrp分子, 并研究该分子在不同细胞株的表达情况,为进一步研究该基因的生物学功能奠定基础.
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ONO-AE-248诱导的中性粒细胞非凋亡性程序化细胞死亡的形态学变化
目的:研究前列腺素E受体亚型3(EP3)激动剂ONO-AE-248诱导的中性粒细胞(PMN)非凋亡性程序化细胞死亡的形态学变化,探讨PMN死亡形式的多样性和复杂性.方法:运用透射电镜、荧光显微镜及激光共聚焦扫描显微镜观察PMN在自发性凋亡与ONO-AE-248刺激下亚细胞微结构的变化.结果:以5 mmol/L的ONO-AE-248刺激PMN 12 h后,电镜观察绝大多数PMN的多叶核融合为单叶核,核质疏松,核膜分层、起泡甚至破裂,核质溢出,但细胞膜较完整,细胞器无明显改变.以荧光染料DAPI标染活细胞核,ONO-AE-248刺激后,PMN表现为多叶核融合成大而模糊的球形,核染色密度较低;ONO-AE-248刺激的PMN死亡仍有细胞膜磷脂酰丝氨酸(PS)的外翻.ONO-AE-248刺激组与自发性凋亡组PMN在线粒体的形态结构、分布和细胞质内的染色性均有明显差异.结论:ONO-AE-248在体外能刺激人PMN发生非凋亡性程序化细胞死亡,这一刺激过程不影响自发性凋亡的PMN细胞膜PS的外翻,并且细胞核和线粒体的改变是其早期为显著的形态学改变,提示二者可能是ONO-AE-248刺激的靶标和早期的药物反应中心.
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幽门螺杆菌napA基因的克隆、表达及免疫反应性分析
目的:构建高效表达幽门螺杆菌(Hp)中性粒细胞激活蛋白(NAP)的原核表达系统,为Hp候选疫苗研制打下基础.方法:从Hp标准株NCTC11639 染色体DNA中扩增napA基因片段,T-A克隆后测序,与GenBank公布的其他Hp菌株的napA基因序列进行比较.目的基因片段酶切后,与表达载体连接,转化至宿主菌,构建napA基因原核表达系统pGEX-4T-1-napA-E.coli Top10.优化诱导表达条件,采用SDS-PAGE鉴定表达产物,GST亲和层析纯化收集重组NAP蛋白,Western blot法鉴定重组NAP的免疫性;采用ELASA法检测胃癌患者Hp阳性血清中抗NAP抗体效价,通过间接ELASA法从29株小鼠抗Hp全菌单克隆抗体(mAb)中筛选抗Hp-NAP mAb.结果:所克隆的napA基因全长为435 bp,在GenBank上登录(No.DQ341279),与GenBank公布的其他Hp菌株的核苷酸同源性为94%～98%,与国际测序模式株Hp26695、HpJ99同源性达97%,表达的NAP融合蛋白的相对分子质量(Mr)为44 000,1 mmol/L浓度IPTG诱导4 h表达产物量较高,表达产物可被Hp感染患者的血清及兔抗Hp全菌抗体特异性结合,胃癌患者血清中抗NAP抗体效价高于正常人群血清,29株小鼠抗Hp全菌mAb中有3株mAb能与NAP发生强免疫反应.结论:成功构建napA基因高效可溶性原核表达系统,重组NAP具有良好的免疫反应性,NAP在胃癌患者血清中高表达可能与胃癌的发病有关,NAP 是具有良好前景的抗原.
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小鼠肿瘤/睾丸抗原Biot2的原核表达载体的构建及表达
目的:构建小鼠睾丸特异表达基因Biot2的原核表达载体,表达pQE30-Biot2融合蛋白.方法:提取小鼠睾丸组织总RNA,经RT-PCR扩增Biot2基因片段,并将其克隆入原核表达载体pQE30中,构建重组质粒pQE30-Biot2.经限制性内切酶BamH Ⅰ、Hind Ⅲ双酶切鉴定及序列测定后,转化E.coli XL-Blue,经IPTG诱导表达组氨酸融合蛋白,对表达产物进行SDS-PAGE电泳分析和Western blot检测.结果:构建pQE30-Biot2重组原核表达质粒,表达的融合蛋白经SDS-PAGE分析,在相对分子质量(Mr)约17 700处出现了1条蛋白条带,该表达蛋白具有与His-tag单克隆抗体(mAb)特异性的结合能力.结论:成功地构建了Biot2基因的原核表达载体,并表达出pQE30-Biot2重组蛋白,为下一步制备多克隆抗体和蛋白功能的深入研究奠定了实验基础.
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间接偶联法合成Aβ1-15多重抗原肽疫苗及其免疫学活性
目的:探索合成Aβ1-15多重抗原肽疫苗的方法,并对其免疫学活性进行鉴定.方法:采用间接偶联法合成8分支Aβ1-15多重抗原肽(MAP),通过高效反相液相色谱(RP-HPLC)、SDS-PAGE以及氨基酸成分分析对其进行初步鉴定.以合成的MAP Aβ1-15免疫C57BL/6小鼠,用ELESA法检测血清特异性抗Aβ抗体.结果:间接偶联法合成的MAP Aβ1-15,经RP-HPLC层析后,呈现为一宽大主峰.SDS-PAGE检测显示,共有8条蛋白带,条带梯度比较均匀,分别为1～8分支的MAP Aβ1-15,氨基酸组份及含量基本与Aβ1-15多肽的序列一致.以合成的MAP Aβ1-15疫苗免疫C57BL/6小鼠后,可产生高滴度的特异性抗Aβ抗体.结论:间接偶联法可成功地合成MAP Aβ1-15疫苗,且具有很好的免疫学活性,但合成的MAP产物难以纯化.
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CD2和CD58在宫颈癌组织中的表达及临床意义
目的:探讨CD2和CD58在宫颈癌组织中的表达差异及其与癌分化程度的关系.方法:采用微波免疫组化的方法检测CD58在32例宫颈癌中的阳性表达,用流式细胞术检测患者外周血淋巴细胞中的CD2分子表达水平,分析两者表达水平与患者癌细胞分化程度的相关性.结果:CD2在宫颈癌患者的外周血淋巴细胞表面的表达显著低于正常人,而且在低分化鳞癌患者的表达显著低于高分化鳞癌患者;CD58在癌细胞的表达显著低于正常细胞,而且在低分化鳞癌组的表达显著低于高分化鳞癌组.结论:CD2、CD58的表达与子宫颈癌的发生、发展有一定相关性,二者可作为评价预后的参考指标.
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接触苯及苯中毒工人外周血T细胞中CD3ζ基因的表达与分析
目的:了解接触苯及苯中毒工人外周血中T细胞信号传导分子CD3ζ基因表达水平.方法:利用SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR分别检测28例苯接触工人、45例苯中毒工人和30例正常人外周血单个核细胞的CD3ζ基因表达情况,以β2微球蛋白基因(β2m)作为内参,根据相对定量公式(2- △△Ct)计算苯接触、苯中毒工人与正常人CD3ζ基因表达差异倍数.结果:根据相对定量公式(2-△△Ct)分析显示:苯接触工人外周血CD3ζ基因表达存在3种情况:不表达2例(7%)、表达上升18例(64%)和表达下降8例(29%),与正常人CD3ζ基因相比表达上升和下降的倍数分别是19.68±25.24和0.67±0.32.苯中毒工人外周血CD3ζ基因表达情况:表达上升31(69%)和表达下降14例(31%),与正常人CD3ζ基因相比表达上升和下降的倍数分别是31.50±29.18和0.52±0.25.与苯接触相比,45例苯中毒工人中18例(40%)CD3ζ基因表达上升,27例(60%)CD3ζ基因表达下降,上升和下降的倍数分别是12.04±4.35和0.29±0.23.结论:首次报道接触苯及苯中毒工人中CD3ζ基因表达水平的变化,接触苯及苯中毒工人CD3ζ基因表达低下可能与细胞免疫功能缺陷有一定关系.
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人脂肪酸合成酶启动子在乳腺癌细胞中的转录活性分析
目的:分析人脂肪酸合成酶(FAS)启动子在乳腺癌细胞中的转录活性,并与cerbB2启动子、midkine启动子相比较,为其乳腺癌靶向基因治疗提供依据.方法:Western blot和间接免疫荧光法检测FAS蛋白在3种人乳腺癌细胞系SKBR3、MCF-7、MDA-MB-231以及正常成纤维细胞系NIH3T3中的表达.构建pGL3-FAS、pGL3-cerbB2和pGL3-midkine荧光素酶表达载体,并分析其在SKBR3、MCF-7、MDA-MB-231和NIH3T3细胞系中的相对转录活性.结果:FAS蛋白在3种乳腺癌细胞系中均有表达,其中在SKBR3细胞中表达量高,在MDA-MB-231细胞中表达量低,而在正常成纤维细胞系NIH3T3中不表达.FAS蛋白主要定位于细胞质.FAS启动子在3种乳腺癌细胞系中均具有较强的转录活性,转录活性明显高于强启动子SV40和肿瘤特异性启动子midkine;而在正常成纤维细胞中,转录活性很低.FAS启动子在cerbB2高表达的SKBR3细胞中转录活性高,与cerbB2启动子相当;在cerbB2表达较弱的MCF-7和MDA-MB-231细胞中的转录活性则明显高于cerbB2启动子.结论:FAS启动子在乳腺癌细胞中具有强转录活性,较cerbB2启动子作用范围更广,较midkine启动子转录活性更高,而在正常细胞中转录活性很低,具有良好的乳腺癌靶向性,可作为乳腺癌广谱基因治疗的靶向工具.
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CD4+CD25+Treg在急性淋巴细胞白血病患者外周血中的表达及其体外实验研究
目的:初步探讨CD4+CD25+调节性T细胞(CD4+CD25+ regulatory T cells,CD4+CD25+Treg)在急性淋巴细胞白血病(acute lymphocytic leukemia,ALL)患者化疗前及化疗缓解后外周血中的表达水平,并研究患者血清能否诱导外周血CD4+CD25-T细胞转化为CD4+CD25+Treg.方法:①采用流式细胞术分别检测ALL初诊组、化疗完全缓解或部分缓解组及正常对照组外周血中CD4+CD25+T细胞所占比例,然后通过荧光定量RT-PCR检测各组外周血中转录因子Foxp3 mRNA的表达水平,并逐层分析比较.②采集正常人外周血单个核细胞后,对照组用正常人血清,实验组用患者血清并分别设浓度梯度进行培养,72 h后采用流式细胞术、荧光定量RT-PCR分别检测CD4+CD25+T细胞和Foxp3 mRNA表达.结果:ALL化疗缓解组CD4+CD25+T细胞及Foxp3 mRNA表达水平均明显高于ALL初诊组和正常对照组(P＜0.05),后两者之间CD4+CD25+T细胞水平无统计学差异(P＞0.05),但ALL初诊组Foxp3 mRNA含量较正常对照组明显升高(P＜0.01),差异具有统计学意义;并且血清培养对照组CD4+CD25+T细胞水平及Foxp3 mRNA含量均明显低于实验组(P＜0.05),且其表达并不随血清浓度的增加而升高.结论:CD4+CD25+Foxp3+Treg在ALL初诊组及化疗缓解组患者外周血中比例明显升高,且初步表明患者血清中的可溶性物质可诱导外周血CD4+CD25+T细胞转化为CD4+CD25+Treg,提示CD4+CD25+Treg可能是ALL免疫抑制的一个重要原因.
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SLE患者外周血中Foxp3+CD4+CD25+调节性T细胞的分析
目的:分析SLE患者外周血中Foxp3+CD4+CD25+调节性T细胞和T细胞亚群上GITR的表达,以初步阐述其在SLE患者免疫稳态调节中的作用和意义.方法:以流式细胞术检测SLE患者外周血中Foxp3+CD4+CD25+调节性T细胞和T细胞亚群上GITR的表达.结果:稳定期及活动期SLE患者外周血中Foxp3+CD4+CD25+调节性T细胞比例显著低于健康对照(P＜0.05),且活动期SLE患者Foxp3+CD4+CD25+调节性T细胞比例高于稳定期SLE患者(P＞0.05).SLE患者外周血CD3+CD4+T细胞和CD3+CD8+T细胞上GITR表达显著增加(P＜0.05);随着疾病活动性增加,CD3+CD4+T细胞上GITR表达降低(P＞0.05),CD3+CD8+T细胞上GITR表达增加(P＞0.05).结论:SLE患者外周血中Foxp3+CD4+CD25+调节性T细胞表达降低,而患者T细胞亚群上GITR表达增加,其共同作用在诱导SLE患者外周耐受障碍中具有重要意义.
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13种自身抗体检测对SLE的诊断价值及临床意义
目的:探讨13种自身抗体对系统性红斑狼疮(SLE)的诊断价值和临床意义.方法:抗核抗体(ANA)的检测采用间接免疫荧光法;抗ds-DNA抗体的检测采用快速金标渗滤法;11种可抽提核抗原(ENA)抗体的检测采用免疫印迹法.结果:(1)223例SLE患者抗核抗体谱中,ANA、ds-DNA及抗ENA抗体SS-A/Ro60、SmD1、SS-A/Ro52和U1-RNP的阳性率较高,分别为95.06%、52.91%、50.22%、27.35%、24.66%和21.08%;Jo-1和P0抗ENA抗体的阳性率较低,分别为1.79%和0.90%;正常对照组仅ANA有5%的阳性率,其余抗体均为阴性.(2)抗体阳性的患者主要集中在10～50岁之间,10岁以下和50岁以上的患者比较少,平均年龄35岁.(3)SLE患者ANA-LIA的检测大多数患者的条带在4条以内,随着条带的增多,患者的数量减少.(4)抗ds-DNA抗体与抗SmD1抗体、抗核小体抗体的阳性率有显著差异(P＜0.01),与抗SS-A/Ro60抗体的阳性率比较无显著差异(P＞0.05).抗SmD1抗体与抗核小体、抗SS-A/Ro60抗体的阳性率有显著差异(分别为P＜0.05和P＜0.01),与抗U1-RNP抗体的阳性率无显著差异(P＞0.05).(5)104例SLE患者的血清免疫球蛋白和补体水平的异常,主要体现在IgG和C3异常.结论:自身抗体的检测对SLE的诊断、治疗和疗效观察具有重要意义,多项自身抗体联合检测有利于提高SLE的免疫学诊断的阳性率.
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CD147分子通过VEGF促进类风湿关节炎滑膜组织中的血管新生
目的:观察类风湿关节炎(RA)滑膜组织中CD147表达强度与血管内皮生长因子(VEGF)表达水平间的相关性,并探讨成纤维样滑膜细胞(FLS)表面CD147的水平变化对VEGF表达的影响.方法:收集15例RA患者滑膜,以4例骨关节炎(OA)患者滑膜作对照,采用免疫组织化学SP染色方法检测滑膜组织中CD147和VEGF的表达;体外原代培养FLS细胞,分别加入CD147抗体,PI3K通路阻断剂,MAPK通路的ERK1/2、P38及JNK阻断剂等作用FLS细胞,ELISA检测细胞培养上清中VEGF的表达水平.结果:与4例OA滑膜组织CD147和VEGF表达相比,15例RA滑膜组织中均有CD147、VEGF均高表达.其中,表达CD147的细胞主要为成纤维样滑膜细胞、单核-巨噬细胞和淋巴细胞;表达VEGF的细胞主要为成纤维样滑膜细胞、微血管周围成纤维样细胞及血管平滑肌细胞.滑膜组织中CD147和VEGF的表达强度间具有统计学意义.ELISA结果显示,在使用LY294002或抗HAb18G mAb阻断CD147表达后,VEGF的表达量显著下降(P＜0.05);而MAPK阻断剂(PD98059、SP600125和SB203580)等对VEGF表达水平无统计学意义(P＞0.05).结论:CD147经PI3K-Akt信号通路在RA滑膜组织中上调VEGF促进血管新生.提示CD147在RA血管新生和血管翳形成中有重要意义.
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体外联合应用IL-10和甲基强的松龙处理树突状细胞诱导移植的免疫耐受
目的:探讨体外联合应用白细胞介素10(IL-10)和甲基强的松龙(Medron)处理供体树突状细胞(DC)对小鼠皮肤移植术后免疫耐受的诱导效果,为抗移植术后免疫排斥反应治疗提供依据.方法:以健康成年C57BL/6小鼠为供体.BALB/c小鼠为受体,随机分为11组.除A组外,其余各组均于皮肤移植前3 d自尾静脉输入对应的供体DC.具体对应关系如下:A组为空白对照,尾静脉输入生理盐水;B组为输入未修饰的DC;C1组为10 μg/L IL-10处理组;C2组为30 μg/L IL-10处理组;D1组为10 mg/L Medron处理组;D2组为20 mg/L Medron处理组;E1～E4组分别为10 μg/L IL-10+10 mg/L Medron处理组、10 μg/L IL-10+20 mg/L Medron处理组、30 μg/L IL-10+10 mg/L Medron处理组、30 μg/L IL-10+20 mg/L Medron处理组.同时设立F组,为BALB/c对BALB/c的同种同基因皮片移植.各组行皮肤移植术,观察受体移植皮片存活情况.结果:相对于生理盐水组,E3组(30 μg/L IL-10+10 mg/L Medron处理组)的移植皮片存活时间长, 经统计学分析两种药物之间具有交互作用(P＜0.05).结论:用IL-10和修饰的供体树突状细胞对受体进行预处理,可明显延长移植皮片的存活时间.
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抗人整合素β3亚基单克隆抗体的制备及其抗肿瘤活性的研究
目的:制备抗人整合素β3亚基的单克隆抗体(mAb),研究其对肿瘤治疗的作用.方法:用RT-PCR方法扩增人β3胞膜外基因,将其克隆至原核表达载体pQE30中,获得含β3胞膜外基因的高效表达载体pQE30-β3,将其转化大肠杆菌M15,通过诱导表达及纯化,获得β3蛋白.将此蛋白免疫BALB/c小鼠,应用B淋巴细胞杂交瘤技术制备抗β3亚基mAb,Western blot鉴定mAb的特异性.通过小鼠体内抑制黑色素瘤生长实验筛选出具有抑制肿瘤生长作用的mAb.进一步用MTT法及流式细胞术观察该mAb体外抑制人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖及诱导其凋亡的作用.结果:扩增获得了β3胞膜外基因,构建了β3蛋白的原核表达载体,表达纯化了β3蛋白,成功制备了8株mAb,Western blot证明了其特异性.经过体内抑瘤实验筛选出一株具有显著抑制肿瘤生长的mAb 4F12.该mAb可抑制HUVEC细胞增殖并诱导其凋亡.结论:成功表达了β3蛋白,并制备了有活性的mAb,抗体具有抑制肿瘤生长的作用,这可能是通过抑制血管内皮细胞的增殖和诱发凋亡实现的.
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小鼠抗人BART多克隆抗体的制备和鉴定
目的:制备小鼠抗人源性BART的抗体.方法:采用原核系统表达人全长BART,经纯化后免疫小鼠制备抗BART的抗体,以Western blot、免疫组化染色法检测抗体的效价和特异性.结果:获得高效价的小鼠抗BART的抗体,该抗体能够识别大鼠脊髓组织中的BART分子.海马神经元和星形胶质细胞的免疫组化染色结果显示,BART分子在海马神经元、星形胶质细胞中广泛表达;在海马神经元中,BART与钙离子通道存在共定位现象.结论:制备出能特异性识别天然BART分子的抗体,为检测BART分子并进一步研究其功能奠定了基础.
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抗CP4-EPSPS单克隆抗体的制备和生物学特性的鉴定
目的:制备可用于胶体金快速检测试条的抗CP4-EPSPS(5-enolpyruvlshimimate-3-phosphate synthase)单克隆抗体(mAb),并鉴定其特性.方法:以重组蛋白CP4-EPSPS免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备抗CP4-EPSPS的mAb,以间接ELISA法和Western blot进行mAb特异性鉴定;同时采用间接ELISA法鉴定mAb的Ig亚类,检测mAb的效价及相对亲和力,并进行mAb结合表位分析.结果:获得2株可分泌特异性mAb的杂交瘤细胞(Ⅲ5A3,Ⅲ13A2).其抗体亚类均为IgG1;腹水效价分别为1∶106和1∶108;相对亲和力Ⅲ5A3在105以上,Ⅲ13A2在106以上.ELISA相加实验结果显示2株mAb识别相同或相近的抗原表位.结论:成功地制备出抗CP4-EPSPS的2株mAb,为建立快速特异检测转基因植物(GMO)的实验方法提供了有力的工具.
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人源抗狂犬病毒二硫键稳定抗体在大肠杆菌中的融合表达
目的:在大肠杆菌pMAL-P2x系统中表达anti-rabies MBP-ScdsFv融合蛋白,酶切获得目的蛋白ScdsFv,进行纯化、鉴定及简单活性分析.方法:利用DNA重组技术,将全长的ScdsFv蛋白基因克隆至原核表达载体pMAL-p2x中,重组质粒转化大肠杆菌E.coli ER2566,IPTG诱导表达.表达产物经Xa酶切后,经Ni柱、Amylose Resin亲和层析进行纯化,SDS-PAGE和Western blot对其进行鉴定,ELISA检测其结合活性.结果:成功地构建了重组质粒pMAL-ScdsFv,经诱导表达、蛋白酶切、亲和纯化后获得目的蛋白.ELISA检测其具有抗原特异结合活性,其热稳定性有显著提高.结论:抗狂犬病毒ScdsFv蛋白具有良好的结合活性和生物学活性稳定性,可作为候选分子用于狂犬病的防治研究.
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C-erbB-2癌基因与NSCLC的研究进展
简要叙述了C-erbB-2癌基因的特点与生物学功能.在此基础上阐述了C-erbB-2癌基因在NSCLC中的表达程度与临床分期及预后的关系,并总结了近年来基于C-erbB-2癌基因治疗非小细胞肺癌(NSCLC)的进展及取得的成就.
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调节性免疫细胞在诱导移植免疫耐受中的作用
目前,器官移植是许多重大疾病根治的惟一手段,如尿毒症、重症肝衰竭、白血病等.但是器官移植大的问题是移植排斥反应.现在,临床上防止移植排斥常用的策略是终生使用免疫抑制剂.但使用免疫抑制剂会出现许多并发症,如机会性感染、发生肿瘤、影响儿童生长发育等,还会给患者带来沉重的经济负担.
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免疫治疗阿尔茨海默氏病的药理学机制研究
阿尔茨海默氏病(Alzheimer's disease,AD)是神经退变性碍障的一种神经系统疾病.其典型的临床表现是精神症状的痴呆:记忆减退、认知缺损和行为迟缓.AD的发生基础之一是构象异常的Aβ42分子,这种病理性Aβ42分子初为单体,其结构为C端序列形成反向平行β-片层的疏水核(anti-parallel β-fibrillar core),N端序列伸展到分子的外部形成亲水的自由端.
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大鼠骨髓间充质干细胞分离培养方法的建立及其表型分析
目的:探讨体外分离培养大鼠间充质干细胞(MSC)的方法,并对其进行表型鉴定及黏附分子测定.方法:采用全骨髓直接贴壁法获得原代大鼠骨髓MSC,差速贴壁结合消化控制法纯化细胞,Ⅰ型胶原作为细胞外基质扩增MSC;镜下观察细胞生物学形态及生长状态,流式细胞仪检测第4代MSC的细胞周期,免疫细胞化学方法对其进行表型鉴定与细胞黏附分子检测.结果:原代培养的MSC呈圆形、梭形、多角形等,24 h内即可见少量细胞体壁伸展,7～8 d左右可达90%融合,纯化扩增后的MSC呈均匀一致的长梭形,24 h内细胞已基本贴壁,传代周期为5 d左右.流式细胞术检测显示,第4代MSC约有80%处于G0/G1期.免疫细胞化学显示,MSC CD34、CD45表达阴性,CD29、CD105、CD166、VLA-4、P-selectin表达阳性.结论:本实验方法能很容易地获得大量高纯度的MSC,并表达一定的黏附分子,为MSC进一步临床应用打下了良好的基础.
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cox-2 siRNA表达载体的构建及在HuH-7细胞中的表达
目的:构建COX-2 siRNA特异性表达载体,观察其对HuH-7细胞中COX-2表达及产生PGE2的影响.方法:基于人COX-2基因核苷酸序列,软件分析并选择两靶序列,设计合成发夹结构形成单位,然后将其克隆入pSIREN-Shuttle载体.重组质粒用于瞬时或稳定转染HuH-7细胞,RT-PCR、Western blot用于检测Cox-2的表达,并测定转染前后PEG2的浓度.结果:合成的COX-2 siRNA表达载体瞬时转染HuH-7细胞后在mRNA及蛋白水平明显抑制COX-2的表达,稳定转染后则完全阻抑Cox-2的表达,并能抑制PEG2的生成.结论:构建的Cox-2 siRNA表达载体具有高效的基因抑制效率,为研究COX-2基因功能及基因治疗提供良好的工具及手段.
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不同浓度的次级淋巴组织趋化因子对外周血单个核细胞生物学功能的影响
目的:探讨人次级淋巴组织趋化因子(SLC)浓度梯度对外周血单个核细胞(PBMC)生物学功能的影响.方法:根据SLC浓度,实验分为6组,通过趋化实验检测PBMC的趋化,并通过流式细胞术检测PBMC凋亡及增殖能力,ELISA检测PBMC培养上清中IL-10和IFN-γ的表达.结果:一定浓度范围内,SLC可增强PBMC的迁移、抗凋亡、增殖及IFN-γ表达能力.降低IL-10的表达水平,证明上述作用具有浓度依赖性.结论:SLC可通过促进PBMC迁移,增强其增殖,诱导Th1类细胞分化,提高了机体的免疫应答.
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细胞亲环素A促单核细胞THP-1钙离子的运动及细胞黏附能力
目的:观察细胞亲环素A (CypA)对单核细胞THP-1细胞胞内钙离子运动及细胞与细胞外基质黏附能力的影响.方法:乙酸肉豆蔻佛波酯(PMA)诱导分化THP-1细胞,通过激光共聚焦及结晶紫染色法检测CypA刺激THP-1细胞后细胞内游离钙离子浓度的变化及细胞与细胞外基质黏附能力的变化,同时使用CsA、CD147分子拮抗剂AP-9作用细胞,观察CD147分子是否参与了CypA这一调节作用.结果:CypA显著促进分化前及分化后的THP-1细胞胞内游离钙离子的运动,同时增强了细胞与细胞外基质的黏附能力(P＜0.05),CsA、CD147分子拮抗剂AP-9则可以阻断CypA对细胞钙离子及黏附能力的调节作用.结论:CypA通过CD147分子促进细胞钙离子的运动及细胞黏附能力,提示在类风湿关节炎(RA)中CypA可以增强单核/巨噬细胞与滑膜及软骨面的结合及侵袭能力,促进了关节炎的发生发展.
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毒胡萝卜素诱导成年小鼠心肌细胞凋亡的实验研究
众所周知,心肌细胞的凋亡参与各种心血管疾病发生及发展的过程,而且,机体内有多种参与细胞凋亡的信号传导途径[1],其中由肌浆网(sarcoplasmic reticulum,SR)应激引起的信号传导径路的激活越来越引起重视[2].
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脂肪基质干细胞的分离培养及其作为软骨种子细胞的研究
目的:研究人体脂肪基质干细胞(ADSC)分离培养的方法,探讨其在体外向成软骨细胞诱导分化的能力.方法:取临床吸脂所得脂肪组织,胶原酶消化分离后, 接种于培养基中进行原代培养,传至一代时换软骨诱导培养液进行成软骨诱导分化,定期通过阿尔辛蓝染色、天狼猩红染色及免疫组化等方法进行证实.结果:ADSC在体外成软骨诱导后,可向软骨细胞分化,经诱导的细胞可分泌软骨细胞特异性的Ⅱ型胶原以及硫酸蛋白多糖.结论:在适当诱导条件下,ADSCs有向软骨细胞分化的潜能,为软骨组织工程种子细胞来源的研究提供了新方法.
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Notch4在溃疡性结肠炎中的表达与分析
目的:研究Notch4在溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)中的表达、分布及意义.方法:收集50例UC患者病变部结肠组织及32例结肠癌患者术后大体标本两端的正常黏膜组织.用免疫组化方法检测Notch4在50例UC及32例对照结肠黏膜组织中的表达情况.结果:Notch4在UC患者结肠组织及对照的正常结肠组织中均有表达,两者之间的差异无统计学意义(P＞0.05).Notch4的表达与UC患者的性别、年龄及UC病变程度无统计学意义(P＞0.05).结论:Notch4在UC患者结肠黏膜组织与正常结肠黏膜组织中的表达相似, 差异无统计学意义.
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可溶型LAIR-1分子在冠心病患者血清中的ELISA检测
白细胞相关免疫球蛋白样受体1(leukocyte-associated immunoglobulin-like receptor-1,LAIR-1)为Ⅰ型跨膜糖蛋白,属免疫球蛋白超家族(IgSF)成员,1983年首先发现9.1C3/LAIR-1参与杀伤细胞的功能[1],1997年基因克隆成功[2].
| 年 | 期数 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2017 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2011 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2010 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2009 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2008 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2007 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2006 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2005 | 01 02 03 04 05 06 z1 |
| 2004 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2003 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2002 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2001 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2000 | 01 02 03 04 05 06 |
| 1999 | 01 02 |
| 1995 | 01 02 03 |
| 1994 | 01 02 |
| 1993 | 01 02 03 04 |
| 1992 | 01 02 03 04 |
| 1991 | 01 02 03 04 |
| 1990 | 01 02 |
| 1989 | 01 02 03 04 |
