一种新的FⅩⅢ基因突变导致的遗传性FⅩⅢ缺陷症

目的 对1例遗传性凝血因子ⅩⅢ(ⅩⅢ)缺陷症患者及其家系成员FⅩⅢA基因[F(13)A]进行分析,探讨其分子致病机制.方法 尿素溶解法定性检测FⅩⅢ活性,抽提外周血基因组DNA,PCR扩增FⅩⅢA基因的15个外显子及其侧翼序列,PCR产物纯化后直接基因测序,并对家系成员F(13)基因相应的突变序列进行检测.结果 先证者FⅩⅢ定性试验阳性.基因测序发现先证者F(13)A存在纯合缺失,外显子10自127067位起缺失33个核苷酸(127067del33,GI:AF418272),导致阅读框内缺失11个氨基酸(406Met-416Ala),产生了由720个氨基酸残基组成的截短型FⅩⅢA蛋白.其父母FⅩⅢ定性试验为阴性,均显示为该序列的杂合缺失突变.结论 先证者为遗传性FⅩⅢ缺陷症患者,由F(13)A外显子10缺失突变所致.该突变为国际首次报道.

干扰RNA抑制组织因子表达对阿霉素诱导人神经母细胞瘤细胞凋亡的影响

目的 研究组织因子(TF)表达对阿霉素诱导人神经母细胞瘤细胞系SK-N-MC细胞凋亡的影响.方法 以Western blotting法检测SK-N-MC细胞TF表达.分子生物学方法构建TFsiRNA-pSUPER表达载体,以脂质体介导进行基因转染.以水溶性四唑盐(WST)法检测阿霉素细胞毒性.以Western blotting法检测阿霉素诱导的caspase-3、多聚ADP核糖转移酶(PARP)的活化水平.以Hochest 33342染色,荧光显微镜下检测凋亡细胞.结果 ①SK-N-MC细胞高表达TF;②转染TF siRNA-pSUPER表达载体的SK-N-MC细胞,TF表达水平呈剂量依赖性降低;③转染TFsiRNA-pSUPER的SK-N-MC细胞及转染pSUPER质粒的对照细胞分别以不同浓度阿霉素处理24 h,前者与后者相比存活细胞数显著降低;④转染TFsiRNA-pSUPER的SK-N-MC细胞及转染pSUPER质粒的对照细胞分别以阿霉素处理4、8 h,可见前者较后者caspase-3、PARP活化增强;⑤转染TFsiRNA-pSUPER的SK-N-MC细胞与对照细胞相比,经阿霉素处理后的凋亡细胞数显著增多(P＜0.05).结论 人神经母细胞瘤SK-N-MC细胞中TF异常高表达,以siRNA特异性下调TF表达后,可增强阿霉素细胞毒性及其诱导的肿瘤细胞凋亡.肿瘤细胞中TF的异常高表达可能参与阿霉素诱导凋亡的调控.

人骨髓间充质干细胞对异体B淋巴细胞的免疫调节作用

目的 研究人骨髓间充质干细胞(MSC)体外对B淋巴细胞的免疫调节作用.方法 从人骨髓中分离培养MSC,通过观察细胞形态和流式细胞术检测细胞表面标志进行鉴定.用加速器辐射去除MSC增殖分化能力.检测加入骨髓MSC前后B淋巴细胞增殖能力变化,并对其进行凋亡分析;比较Transwell非接触培养与直接接触培养中,MSC对活化B淋巴细胞增殖的作用;观察骨髓MSC作用前后,活化B淋巴细胞分泌免疫球蛋白IgG、IgA和IgM的能力,以及B淋巴细胞表面免疫分子的表达.结果 ①MSC不能刺激B淋巴细胞增殖;MSC抑制LPS活化的B淋巴细胞增殖,其抑制作用与浓度呈依赖性.②MSC不能诱导B淋巴细胞凋亡;Transwell非直接接触培养组中MSC抑制B淋巴细胞增殖的作用较直接接触培养组的作用弱,提示MSC抑制B淋巴细胞增殖的作用包括物理性接触抑制和非接触抑制.③骨髓MSC抑制活化的B淋巴细胞分泌免疫球蛋白IgG、IgM和IgA;MSC作用下,B淋巴细胞表面HLA-DR、CD40、CD80和CD86的表达无显著改变.结论 骨髓MSC在体外可抑制B淋巴细胞增殖和分泌功能,具有一定的免疫调节能力.

大剂量化/放疗加自体造血干细胞移植治疗鼻型NK/T细胞淋巴瘤疗效和预后分析

目的 分析鼻型NK/T细胞淋巴瘤行大剂量化/放疗和自体造血干细胞移植(AHSCT)的疗效及影响预后因素.方法 1992年7月至2005年12月收治的22例经病理形态学诊断为鼻型NK/T细胞淋巴瘤患者,其中13例经免疫组化检测证实.根据Ann Arbor进行分期,并按国际预后指数(IPI)进行评分,按有无B症状进行分类.经两周法化疗或化、放疗同步进行的诱导缓解治疗达部分缓解(PR)或完全缓解(CR)后,行大剂量化/放疗和自体骨髓移植或自体外周血干细胞移植,移植后对移植前未行放疗的患者补加放疗.对IPI 3～4分的12例高危患者进行巩固化疗,其中1例行巩固性二次移植.结果 中位随访时间为64(12～168)个月.全组总生存(OS)率5年为79.3%、8年为64.1%;无病生存(DFS)率5年为36.4%、8年为27.3%.临床Ⅰ～Ⅱ期患者5年OS率为90.0%,Ⅲ～Ⅳ期者为70.0%;无B症状患者5年OS率为100.0%,有B症状者为70.7%;IPI 1～2分患者5年OS率为100.0%,3～4分者为60.0%,组间比较,差异均有统计学意义(P值分别为0.041、0.045和0.035).多因素回归分析显示,临床分期、B症状和IPI是影响鼻型NK/T细胞淋巴瘤预后的相关因素.结论 对有预后不良因素的鼻型NK/T细胞淋巴瘤经化疗或放、化疗同步进行的诱导缓解治疗达到PR或CR后,行大剂量化/放疗和AHSCT治疗可提高疗效.

Mer基因过表达对内皮细胞株HMEC-1细胞血管形成的影响及其机制探讨

目的 探讨受体酪氨酸家族成员Mer基因对体外血管形成过程的影响及其具体作用机制.方法 利用脂质体法将人全长Mer基因真核表达质粒转染到内皮细胞株HMEC-1细胞中,G418筛选转染细胞得到阳性克隆,利用PCR和Western blot分别在mRNA和蛋白水平验证转染情况.利用Transwell和Matrigel分别观察Mer基因过表达对于内皮细胞迁移能力和血管形成能力的影响.通过荧光定量PCR筛选血管内皮生长因子(VEGF)-A、VEGF-B、VEGF-C、VEGF-D以及血管内皮生长因子受体(VEGFR)-1、VEGFR-2基因的表达情况.结果 经过G418筛选后,PCR和Western blot检测结果显示Mer基因在阳性克隆细胞中有较高水平表达,分别较空质粒对照组上升3.61倍和2.12倍;高表达Mer的HMEC-1细胞迁移能力[迁移到Transwell下室壁的细胞为(21±6)/视野]较对照组[(36±11)/视野]明显下降.体外血管形成实验也表明高表达Mer基因的HMEC-1细胞血管形成能力明显下降,抑制率为76.9%;荧光定量PCR结果显示VEGF-C和VEGFR-2表达明显下降,VEGF-C表达量为对照组的44.7%,VEGF-C表达为对照组的25.6%.结论 Mer过表达可以显著抑制HEMC-1细胞的迁移能力和血管形成能力,并且可能是通过VEGF-C/VEGFR-2信号途径发挥作用.

小鼠转移性乳腺癌骨髓细胞体外净化移植模型的建立

目的 建立一个小鼠转移性乳腺癌净化后骨髓移植模型,并探讨益康唑(Econazole,Ec)药物净化效果.方法 将小鼠自发性乳腺癌细胞系TSA转染新霉素抗性基因(NeoR基因)后与小鼠骨髓细胞混合,体外短期培养净化;通过移植后造血恢复,肺转移性结节和小鼠的存活进行评估.结果 接受放射治疗后经尾静脉注射TSA细胞的小鼠均可产生乳腺癌肺转移;Ec体外净化后骨髓移植小鼠造血恢复没有明显延迟,移植后4周内未见肺转移性结节;小鼠的总生存状况明显改善.结论 成功建立了TSA小鼠乳腺癌净化后骨髓移植模型,方法简单、易行、重复性好;Ec可用于转移性乳腺癌净化后骨髓移植.

多变量模型预测再生障碍性贫血免疫抑制疗法疗效的初步研究

目的 研究和评价外周血T细胞亚群、骨髓T淋巴细胞内IFN-γ表达、Th1/Th2及Tc1/Tc2值及HLA-DRB1*1501表型在再生障碍性贫血(AA)患者免疫抑制疗法(IST)疗效预测中的价值;探讨建立临床和实验室指标多变量AA患者IST疗效预测模型的可行性.方法 采用流式细胞术检测51例AA患者治疗前后外周血T细胞亚群,骨髓T细胞IFN-γ、IL-4、并分析上述指标与疗效的关系.结果 在所评价的指标中,CD8+细胞内IFN-γ的预测值高,其灵敏度和特异度分别为94.3%和62.5%,阳性和阴性预测值分别为84.6%和83.3%,细胞内IFN-γ阳性且Tc1/Tc2＜50能提高阳性预测值达92.3%.以中性粒细胞绝对计数(ANC)、骨髓T细胞内IFN-γ染色、Tc1/Tc2分层和HLA-DRB1 * 1501表型4个指标建立一个多变量模型,可用于诊断点的确定和个体患者治疗有效概率的预测.结论 骨髓CD8+T细胞内IFN-γ敏感性和特异性好,但对细胞内IFN-γ阳性的原发性AA患者预测价值受限;CD8+细胞内IFN-γ阳性且Tc1/Tc2＜50预示患者有更多的机会通过IST治疗获得缓解;提示多变量AA患者IST疗效预测模型较单一预测指标更加适合临床,具有潜在的临床应用价值.

胰岛素样生长因子-1对内皮细胞活力及组织因子的影响

目的 研究胰岛素样生长因子-1(Insulin like growth factor-1,IGF-1)对血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)细胞活力及组织因子(TF)的影响和其作用机制.方法 分别用不同浓度IGF-1预处理HUVEC细胞株HUVEC-12细胞30 min后加入Ang Ⅱ 10-6 mol/L孵育24 h,观察细胞活力及Ang Ⅱ 1型受体(AT1-R)mRNA变化的量效关系.选择一个作用明显的IGF-1浓度预处理HUVEC-12细胞30 min后加入Ang Ⅱ 10-6mol/L孵育12～48 h,观察细胞活力变化的时效关系.同时测定孵育24 h的HUVEC裂解液TF含量、一氧化氮合酶(NOS)活性及一氧化氮(NO)浓度,并于NOS抑制剂(L-NAME)预处理细胞30 min后,再加入IGF-1和Ang Ⅱ,观察孵育24 h细胞活力、TF、AT1-R mRNA、NOS及NO水平变化.结果 ①Ang Ⅱ能降低HUVEC-12细胞活力,上调AT1-R mRNA表达及增加TF含量,抑制NOS活性、减少NO生成;②IGF-1能显著抑制Ang Ⅱ诱导的细胞活力降低和AT1-R mRNA表达增加,以0.5μg/ml浓度作用明显,此浓度处理细胞12～48 h内细胞活力恢复具有时间依赖性;③IGF-1能抑制Ang Ⅱ诱导的TF增加及改善Ang Ⅱ诱导的NOS活性降低,增加NO生成;④L-NAME可明显拮抗IGF-1对血管内皮的保护作用.结论 IGF-1可明显提高Ang Ⅱ诱导的内皮细胞活力及抗血栓能力,其作用可能是通过激活NOS-NO通路从而抑制AT1-R实现的.

一例伴有染色体t(16;17)(q24;q12)的难治性急性髓系白血病

新近我院遇见1例伴有染色体t(16;17)(q24;q12)的急性髓系白血病(AML)患者,经大剂量化疗和异基因半相合干细胞移植治疗均无效,现将其临床和细胞遗传学特征报道如下.

白细胞介素6诱导人凝血因子Ⅷ基因的体外表达

血友病A是一种单基因遗传病,基因治疗有可能根治本病,因此,近二十年来国内外在血友病A基因治疗的研究方面做了大量工作,取得了一定进展,但总的效果并不理想,焦点是凝血因子Ⅷ(FⅧ)的表达量低,表达持续时间短[1].

黏性血小板综合征与脑血栓性疾病的关系

血栓形成是一种常见而复杂的病理现象,涉及血管、血流和血液成分等多个方面.血小板在血栓形成特别是动脉血栓形成中具有关键的作用.近年来国际上陆续报道了一些与基因相关的先天性血小板聚集性增高,譬如血小板膜基因多态性以及黏性血小板综合征(Sticky platelet syndrome,SPS)等.在国内对血小板膜基因多态性与血栓形成关系已有一些报道,但对SPS尚未见报道.为此我们探讨了SPS与脑血栓的关系.

脑梗死患者蛋白质Z与部分炎性因子的变化及相互关系

蛋白质Z(protein Z,PZ)是近年来发现的一种新的抗凝血因子,为PZ依赖性蛋白酶抑制剂抑制凝血因子Ⅹa(FⅩa)的辅因子,在新近的文献报道中,表明PZ缺乏与急性缺血性脑卒中(acute ischemic stoke,AIS)和急性冠脉综合征(acute coronary syndromes,ACS)的危险性明显增加相关.

血液病患者机采血小板输注疗效及血小板抗体分析

临床上有些患者在输注大剂量血小板后,出现血小板输注无效(Post-transfusion refractoriness,PTR)现象,其部分原因与患者体内产生血小板抗体有关.我们分析了我院血液病患者输注新鲜机采血小板的疗效及其血小板抗体产生情况,结果如下.

原发性血小板增多症研究的进展

原发性血小板增多症(essential thrombocythemia,ET)是骨髓增殖性疾病(MPD)的一种,人们认识该病已有70年的历史.按欧美5国对ET的流行病学调查,发病率为0.59/10万～2.53/10万,近20年来发病率增加了3.2倍,这与血细胞自动计数仪普遍应用,较易发现无症状的患者有关,但也可能反映了实际发病数的增多[1].近年来,对MPD(包括ET)发病的分子机制的研究取得了重大突破,临床上有了大量的总结资料,新的有效药物不断问世,使我们对ET本质的认识进一步深入,临床诊断与治疗水平有了新的提高.

加强遗传性出血性疾病的研究提高我国人口健康素质

出血性疾病在临床上常见,约占血液科门诊患者的1/4～1/3.引起出血的主要原因为血小板量或质的异常和凝血障碍,血管异常、纤溶亢进以及循环中抗凝物质增多等因素也可导致出血.这些出血性疾病可分为遗传性与获得性两类.由于遗传性出血性疾病的特殊性与复杂性,诊断需要一定的专业知识与较高的实验室条件.遗传性出血性疾病在国际上一直是医学研究的热点.

酶联免疫法测定vWF瑞斯托霉素辅因子

血管性血友病(von Willebrand disease,vWD)是一种常见的遗传性出血性疾病,是由于血浆中血管性血友病因子(vWF)质或量的异常所致.vWF在高剪切力情况下,通过其A1区和A3区分别与血小板膜糖蛋白(GP)Ⅰh/Ⅸ/Ⅴ复合物和血管内皮下胶原结合,介导血小板黏附过程.

2008年第一届羊城中国白血病论坛第一轮通知

第二代血小板生长因子研究进展

上世纪50年代人们就发现了体内存在刺激血小板生成的体液因子--血小板生成素(thrombopoietin,TPO),1994年国际上多家实验室同时成功克隆或纯化出TPO,亦称c-Mpl配体.进入临床试验的第1代血小板生长因子主要有重组人血小板生成素(rhTPO)和聚乙二醇化重组人巨核细胞生长发育因子(PEG-rHu MGDF).